Методические рекомендации к оформлению протоколов занятий. Тема 4. Общая характеристика энтеробактерий. Возбудители эшерихиозов. Семейство Enterobaсteriaceae (энтеробактерии). Многочисленное семейство патогенных и условно-патогенных бактерий. Включает грамотрицательные факультативно-анаэробные бактерии. Общая характеристика. Бактерии обладают большой гетерогенностью. Морфология и физиология. Энтеробактерии – Гр- палочки 1-5 х 0,4-0,8 мкм, с закругленными концами, располагающиеся беспорядочно. Одни из них подвижны за счет жгутиков (перетрихи), другие неподвижны. Могут иметь капсулу. Спор не образуют. Нетребовательны к питательным средам. Растут на простых питательных средах На МПА образуют колонии: средней величины, круглые, гладкие, выпуклые, блестящие, бесцветные. На МПБ дают равномерное помутнение. Обладают широким спектром биохимической активности. По ферментативным свойствам подразделяются внутри семейства на роды и виды. Тесты для идентификации: 1. Расщепление лактозы 2. Продукты сбраживания глюкозы 3. Расщепление мочевины 4. Восстановление нитратов 5. Способность образовывать индол, сероводород Антигенная структура: имеют -О, -Н, -К, -Vi антигены О-АГ – ЛПС КС, термостабилен, Н-АГ – есть у подвижных видов, флагелин, К-АГ – гетерополисахарид. • Патогенность связана со структурами клетки: Ворсинки, белки мембраны, белки-адгезины (адгезивные свойства) • Капсула, поверхностные белки, ферменты (антифагоцитарные факторы) • Эндотоксин, экзотоксин (токсигенность) Питательные среды для энтеробактерий. Среда Эндо (дифференциально-диагностическая среда) содержит МПА, лактозу, фуксин, обесцвеченный сульфитом натрия. Энтеробактерии, сбраживающие лактозу, в процессе брожения выделяют кислоту, которая восстанавливает фуксин и даёт цветную реакцию. В результате чего колонии окрашиваются в малиново-красный цвет с металлическим блеском или без него. Колонии бактерий, не сбраживающих лактозу, имеют белый или слабо-розовый цвет (цвет питательной среды). Среда Ресселя Среду используют для дифференциации грамотрицательных бактерий кишечнойгруппы по их способности ферментировать глюкозу и лактозу с образованием газа или без него. При росте микроорганизмов ферментирующих лактозу происходит смещение pH среды в кислую сторону и наблюдается пожелтение скошенной части агара. Рост микроорганизмов, не ферментирующих лактозу сопровождается изменением цвета столбика. В диагностике инфекций, вызванных представителями семейства Enterobaсteriaceae, бактериоскопический метод не применяется из-за сходства морфологических и тинкториальных свойств патогенных и условно-патогенных энтеробактерий. Используют бактериологический, серологический, молекулярно-генетический (ПЦР) методы. Микробиологическая диагностика эшерихиозов Возбудитель эшерихиозов – Escherichia coli Могут быть условно-патогенные E.coli – представители нормальной микрофлоры; вызывают оппортунистические инфекции (сепсис, перитонит, цистит и т.д.) Патогенные E.coli- диареегенные; энтерогеморрагические кишечные палочки (ЭГКП) возбудители энтерогеморрагического эшерихиоза с гемолитико-уремическим синдромом); энтероинвазивные (ЭИКП), вызывающие заболевания, сходные с дизентерией; энтеротоксигенные (ЭТКП), вызывающие холероподобный эшерихиоз или диарею путешественников; ЭПКП (энтеропатогенные) - возбудители детских колиэнтеритов и других кишечных инфекций, а также уропатогенные эшерихии, поражающие мочевыводящие пути. Патогенные E.coli отличаются антигенными свойствами Серовары наиболее часто встречающихся патогенных эшерихий Энтеротоксигенные Энтеропатогенные Энтероинвазивные Энтерогеморрагические О6, О8, О15, О20, О25, О18, О44, О55, О28, О29, О124, О157, О126, О111 О27, О63, О78, О80, О111, О112, О114, О136, О143, О144, О85, О115, О128, О139, О119, О125-128, О152, О164, О167 О148, О153, О159, О142 О168 Бактериологический метод является основным методом диагностики эшерихиозов. 1. Выделяют эшерихии на средах Эндо или Левина. 2. Идентификация выделенной культуры. - Изучают характер колоний (гладкие, выпуклые, с ровными краями колонии, окрашенные в красный цвет в результате разложения лактозы, с характерным металлическим блеском); - Принадлежность выделенных микроорганизмов к патогенным эшерихиям устанавливают по антигенной структуре с помощью РА со смесью специфических эшерихиозных ОК- сывороток (изучают микроорганизмы из 10 лактозоположительных колоний); реакцию агглютинации на стекле с комплексной О-коли сывороткой (О-111, О-55, О-26) - При положительном результате РА оставшуюся часть колонии пересевают уколом в столбик и штрихом на поверхность скошенной части среды Ресселя с целью накопления чистой культуры; - Серотипирование выделенной культуры с типовыми О-коли сыворотками определение О- серогруппы, (с типовыми О-коли сыворотками О-III, 0-55, О-26) Ставится ОРА с ОК сывороткой (или диагностическим иммуноглобулином) с живой культурой и развернутая РА с гретой культурой с целью определения специфического О-антигена и принадлежности к патогенным E.coli. - Пересев в среды «пестрого» ряда для изучения биохимических свойств, посев для определения фаголизабильности, фаговара, колициногеновара. 3. Ускоренной идентификации возбудителя в исследуемом материале применяют прямой или непрямая РИФ. 4. Серологический метод является вспомогательным, направленным на обнаружение антител и их динамики в процессе инфекции (исследование парных сывороток) с помощью РА, РНГА, ИФА. Биопрепараты для диагностики эшерихиозов: типовые агглютинирующие 0-коли сыворотки 0-111,0-55, 0-26 и др. содержат известные антитела для определения антигенных свойств микроорганизмов в реакции агглютинации (определение серотипа).
