Загрузил Ivan Pavluychen

Белки

реклама
Кубанский государственный
медицинский университет
«Введение
в клиническую
биохимию, изучение
белкового обмена»
Клиническая биохимия
- это клинико-диагностическая
наука, в задачи которой входят
разработка и использование
стандартных методов
диагностики и контроля за
течением заболевания с позиции
фундаментальной биохимии.
Основные причины
заболеваний
Применение биохимических исследований в клинике:
установление
причины
определение
мониторинг
рационального
развития и
лечения
течения
заболевания
оценка эффективности лечения,
прогноза заболевания
заболевания
разработка скрининг-тестов для
ранней диагностики
Место клинико- биохимических исследований в
диагностическом процессе
Порядок проведения биохимических
исследований
Способы выражения
биохимических результатов


Результаты тестов выражаются в молярных
единицах. Моль любого вещества содержит 6 •
1023 молекул. Молярное выражение концентрации
характеризует, сколько молекул анализируемого
вещества находится в образце. Молярные
единицы могут быть переведены в массовые
единицы: один моль — это молекулярная масса
вещества в граммах.
Результаты биохимических исследований
обычно представляются как концентрации
веществ — число молей в одном литре (моль/л)
Другие параметры выражения
биохимических показателей

Результаты энзиматических исследований
обычно выражаются не в молях, а в единицах
ферментативной активности.

Большие молекулы (белки) измеряются в
граммах или миллиграммах.

Газы крови выражаются в килопаскалях (кПа).
Способы выражения биохимических
результатов (молярные единицы)
Понятие о нормальных значениях и гауссовском распределении в
клинической биохимии
Референтные уровни — это пределы значений биохимических показателей,
определенные на большой популяции здоровых людей. Исследуемые
показатели у 95% населения находятся в пределах М±2сигма (М — среднее
значение, сигма — среднеквадратичное отклонение), и только у 5%
здорового населения значение показателей может выходить за эти
референтные пределы.
Перекрытие результатов биохимических
определений у здоровых и больных
Пациенты с ненормальными результатами, не обнаруживающие
признаков заболевания, считаются ложнопозитивными. Больные, у
которых определяются «нормальные» значения показателей —
ложнонегативными.
Белки
Обмен белков
ОСНОВНАЯ И НЕОБХОДИМАЯ СОСТАВНАЯ
ЧАСТЬ ВСЕХ ЖИВЫХ ОРГАНИЗМОВ
44% МАССЫ ТЕЛА
НЕ ДЕПОНИРУЮТСЯ
В ОРГАНИЗМЕ
БЕЛКИ
ПРИ ДЕФИЦИТЕ
ПОСТУПЛЕНИЯ
С ПИЩЕЙ МЕТАБОЛИЗИРУЮТСЯ
ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ
БЕЛКИ
ЕЖЕДНЕВНОЕ
РЕКОМЕНДУЕМОЕ
ПОТРЕБЛЕНИЕ
БЕЛКА — 1-1,5 Г/КГ
По образному выражению
одного из основоположников
молекулярной биологии Ф.
Крика, белки важны прежде
всего потому, что они могут
выполнять самые
разнообразные функции,
причем с необыкновенной
легкостью и изяществом.
Подсчитано, что в природе
встречается примерно 1010–1012
различных белков,
обеспечивающих существование
около 106 видов живых
организмов различной сложности
организации начиная от вирусов и
кончая человеком.
Из этого огромного
количества природных белков
известны точное строение и
структура ничтожно малой части.
Каждый организм
характеризуется белковым
полиморфизмом - уникальным
набором белков.
В клетке Е.coli содержится
около 3000 различных белков,
а в организме человека
насчитывается более 100000
разнообразных белков.
Поступление белков в организм
Белки делятся на полноценные и неполноценные .
■ Белковая ценность продуктов зависит от количества и
качества Б.
- Аминокислоты большинства животных Б – почти
полностью высвобождаются в процессе пищеварения
(кроме белков опорных тканей).
- При растительной диете – всасывание аминокислот
ограничено за счет содержания в растительной пище:
волокон и ингибиторов пищеварительных ферментов
(разрушаются при tº обработке).
- По содержанию незаменимых аминокислот наиболее
ценные продукты : Б цельных яиц и Б грудного молока.
МЕТАБОЛИЗМ БЕЛКОВ (переваривание)

В пищевых продуктах свободных аминокислот очень мало.
Аминокислоты поступают в организм в составе белков и
становятся доступными всасыванию только после
переваривания белков.
Судьбы пищевых белков в организме:
Этапы переваривания
пищевого белка
 Ферменты гидролизующие белки
называются протеиназы.
 Переваривание белков начинается в
желудке под действием соляной кислоты и
пепсина.
 Продолжается в начальном отделе тонкой
кишки в щелочной среде под действием
ферментов поджелудочной железы
(трипсина, химотрипсина, карбоксипептидаз
и др.).
 Протеиназы или пептидазы делятся на
экзо- и эндопептидазы.
Протеиназы ЖКТ
Эндопептидазы






Пепсин;
Реннин;
Гастриксин;
Трипсин;
Химотрипсин;
Эластаза.
Экзопептидазы




Карбоксипептидазы
А и В;
Аминопептидазы;
Дипептидазы;
Трипептидазы.
Пищеварение в желудке
Главные клетки слизистой желудка секретируют •пепсиноген
(предшеств. протеолитического фермента пепсина).
Пепсиноген (под воздействием кислой среды)→ превр. в
пепсин.
•Пепсин гидролизует в нативных или денатурированных Б
внутренние пептидные связи.

Из-за непродолжительного пребывания пищи в желудке Б
гидролизуются пепсином до смеси полипептидов. (При низкой
кислотности переваривание Б может быть очень
незначительным).

Оптимум рН для пепсина ≈ 1.0-1,5
2-й протеолитический фермент желуд. сока – •гастриксин
(близок к пепсину по структуре и функции).
Секреция соляной кислоты в желудке
Активация пепсиногена
Компоненты желудочного сока в норме и при
патологии
Переваривание Б в
кишечнике
Пищеварение Б продолжается в тонком
кишечнике.
В кишечник поступает панкреатический сок
(со слабощелочной реакцией).
В нем находятся неактивные
предщественники протеаз:
•трипсиноген,
•химотрипсиноген,
•прокарбоксипептидазы А и Б,
•проэластаза.
Ферменты кишечника
В слизистой кишечника вырабатывется •энтеропептидаза.
Далее: трипсиноген +энтеропептидаза→ в •трипсин.

Трипсин →быстро активирует остальные неактивные
предшественники протеаз и гидролизует пептидные связи.

Энтеропептидаза также является предшественником
•киназогена.

Ферменты, гидролизующие пептиды, имеются также и в
слизистой кишечника ( могут секретироваться в просвет, но
функционируют преимущественно внутриклеточно).

Гидролиз небольших пептидов происходит после их
поступления в клетки (ферменты лейцинаминопептидаза,
дипептидаза).

В результате действия ферментов поджелудочной железы и
тонкого кишечника происходит расщепление Б до
аминокислот
Схема действия эндопептидаз
Схема действия экзопептидаз
Судьба белков в организме
80-90% белков всасывается в тонком
кишечнике;
10% достигает толстого кишечника и
расщепляется под действием
бактерий;
небольшое количество белка
выделяется с калом.
Всасывание свободных аминокислот из
кишечника происходит достаточно быстро
(максим. содержание их в крови наблюдается ч/з
30-50мин).
Всасывание происходит главным образом в
тонком кишечнике.
Этот процесс сопровождается потреблением
энергии.
■ Основной механизм транспорта аминокислот –
γ-глутамильный цикл
( в нем участвует 6 ферментов и трипептид
глутатион. Ключевой фермент процесса – γглутамилтрансфераза).
Механизм всасывания аминокислот в
кишечнике
ОСОБЕННОСТИ ВСАСЫВАНИЯ БЕЛКОВ У
НОВОРОЖДЕННЫХ
•Высокая проницаемость слизистой кишечника и •низкая
концентрация протеолитических ферментов →позволяет
всасываться некоторому кол-ву нативных Б, что обуславливает
сенсибилизацию организма (кроме того в молозиве содержится
ингибитор трипсина).
Всасываемые аминокислоты попадают в печень ч/з
портальный кровоток → затем в общий кровоток и уже ч/з 5мин
до 85-100% аминокислот оказываются в тканях.
Наиболее интенсивно аминокислоты поглощаются печенью и
почками.
Ткань мозга – поглощает избирательно:
быстро – метионин, гистидин, глицин, аргинин, глуталин,
тирозин;
более медленно – лейцин, лизин, пролин.

Источник белка для человека это пищевые продукты :
Количество белка в некоторых
пищевых продуктах
Потребность в белках,жирах и углеводах
Белки- протеины



высокомолекулярные органические
азотсодержащие соединения
обладающие :
строго упорядоченной конфигурацией
общими физико-химическими
свойствами
наделенные в живых организмах
специфической биологической ролью
Структура белков
Структурная единица-аминокислота (всего в составе белков 20 незаменимых и
заменимых аминокислот)
■ Последовательность аминокислотных остатков в полипептидной цепи –
первичная структура.
■ Расположение полипептидной цепи в пространстве – вторичная структура.
Меняется в зависимости от набора аминокислот и их последовательности в цепи.
Различают 2 основных варианта вторичной структуры: α-спирали и βконфигурацию.
 Третичная структура – более высокий порядок организации молекулы белка в
пространстве, 2 группы белков, различающихся по форме: глобулярные и
фибриллярные. Определяет биологические свойства белков пространственное
строение, что называют нативной конформацией.
 Четвертичная структура –характерна для белков из 2-х и более полипептидных
цепей образуются путем объединения одинаковых или неодинаковых молекул
(субъединиц),для таких белков-нативная конформация.
Классифицируют белки по химическому составу
(2 основные группы)
Сложные(протеиды)
Простые
(протеины)
-состоят только из
аминокислот:
-Альбумины
-глобулины,
-фибриноген
-колаген
-креатин и др
-содержат белковую часть и
небелковые компанеты
(простетические группы ) в качестве
которых могут присутствовать:
-органические и неорганические
вещества:
-Нуклеотиды
-Липиды
-Углеводы
-Металлы
-Витамины
Протеиды соответственно
называются: нуклеопротеиды,
липопротеиды,гликопротеиды,
металлопретеиды и.т.д
Физико-химические свойства белков








значительная молекулярная масса – от 5 до 1000кДа и >.
высокая вязкость, способность набухания в растворах,
неспособность дифундировать через полупроницаемые
мембраны
оптическая и электрофоретическая активность
способность создавать высокое онкотическое давление, не
влияя на осмотическое давление
для белков характерна амфотерность – зависит от наличия
кислых и основных групп в боковых цепях и от их
распределения.
заряд белковой молекулы(+) или (-) зависит от преобладания
кислых либо основных аминокислот в его составе и от рН
среды.
Значение рН при котором (+) и (-) заряды
уравновешиваются – называют изоэлектрической
точкой.
На этой особенности белков основывается их
буферное свойство
Растворимость белков


Растворимость – зависит от:
- рН раствора, природы растворителя,
концентрации электролита, структуры и
формы данного белка.
Хорошо растворимы глобулярные белки,
значительно хуже – фибриллярные
На свойства белков и их функции влияют
внешние условия и прежде всего tº. При t50-60º- большинство белков подвергаются
денатурации и изменяют свои физикохимические свойства и/или теряют свои
функции.
БИОЛОГИЧЕСКАЯ РОЛЬ БЕЛКОВ
Биологические функции белков и их роль в процессах
жизнедеятельности связано, прежде всего, с их
способностью к специфическим взаимодействиям
Функции:
1.Каталитическая или ферментативная
(химические превращения в организме протекают при участии
катализаторов или ферментов (по природе белки);
2.Транспортная-характерна для белков крови и состоит в переносе
отдельных веществ или группировок в организме
а) пассивный перенос :альбумин переносит: билирубин, некоторые
гормоны, витамины, лекарственные соединения
б) перенос сочетается с депонированием некоторых соединений:
трансферрин плазмы крови переносит Fe и запасает его при
избытке;
в) активный транспорт - мембранные белки переносят соединения
из зон с низкой концентрацией в зону с высокой с потреблением
энергии
БИОЛОГИЧЕСКАЯ РОЛЬ БЕЛКОВ
3. Структурная - прежде всего фибриллярными Б →входят в
состав соединительных тканей и обеспечивают их прочность и
эластичность (это кератин шерсти, волос, коллагены сухожилий,
кожи, хрящей, стенок сосудов и т.д.)
4. Гормональная (регуляторная) –
Через гормоны пептидной или белковой природы (они влияют на
продукцию и активность белков ферментов, тем самым влияют
на обмен)
5. Защитная – осуществляется антителами, интерферонами и
фибриногеном и.т.д.
6. Энергетическая функция – обеспечивается за счет части
аминокислот высвобождающихся при расщеплении белка в
тканях. В процессе окислительно-восстановительного распада
аминокислоты: высвобождается энергия и синтезируется
энергоноситель (АТФ).
7. Рецепторная
БЕЛКИ ПЛАЗМЫ КРОВИ
>200 видов белков, составляют 7%
объема плазмы
синтезируются в основном в
печени и макрофагах, в эндотелии
сосудов, в стенке кишечника, лимфоцитах,
почках, эндокринных железах.
 Разрушаются в печени, почках, мышцах
и др. органах в процессе ферментативного и
неферментативного распада или катаболизма.

Что понимают под «белками плазмы»?
 Содержатся в плазме.
 синтезируются в печени или РЭС,
 выполняют основные функции в пределах сосудистой системы
 в N в кровь секретируются, а не попадают при повреждении
тканей
 находятся в плазме в большей концентрации, чем в других
биологических жидкостях.
Строение и состав белков
плазмы крови




белки плазмы крови – по составу - простые
(альбумины) и сложные (глобулины); по
форме глобулярные и фибриллярные
(фибриноген).
Среди сложных, можно выделить:
липопротеины (ЛПОНП, ЛППП, ЛПНП, ЛПВП,
ХМ);
гликопротеины (почти все белки плазмы),
металлопротеины (трансферин,
церрулоплазмин, лактоферин, ферретин),
фосфопротеины (некоторые ферменты,
растворимые рецепторы);
Роль в диагностике
Клинико-биохимический анализ
обычно начинается с
определения содержания
общего белка в плазме
(сыворотке) крови.
Это обусловлено важной
физиологической ролью,
которую играют белки плазмы в
организме.
В плазме крови белки выполняют
следующие функции
1.
2.
3.
4.
Создают онкотическое давление. Оно
необходимо для удержания воды в
кровяном русле.
Участвуют в свертывании крови.
Образуют буферную систему
(белковый буфер).
Транспортируют в крови
гидрофобные вещества (липиды,
металлы 2 и более валентности).
В плазме крови белки выполняют
следующие функции
5. Участвуют в иммунных процессах.
6. Образуют резерв аминокислот,
который используется, например,
при белковом голодании.
7. Катализируют химические реакции
(белки-ферменты).
8. Определяют вязкость крови, влияют
на гемодинамику.
9. Участвуют в реакциях воспаления.
Белки плазмы крови :
альбумины
 глобулины
 фибриноген
простые протеины,
различаются между собой по
Мм, физико-химическим
свойствам и биологической
роли.
Суммарное количество белков
плазмы - общий белок (ОБ)
 У взрослого здорового
человека
 ОБ составляет 64-83 г\л
 Альбумины- 35-55 г\л,
 глобулинов 20-30 г\л
 фибриноген 2-4 г\л
В сыворотке крови ОБ ниже на 2-4
г\л из-за отсутствия
фибриногена.

Белок общий. Нормальная
концентрация в сыворотке
крови:
Новорожденные
47-72 г/л,
дети до 1 года
- 61-75 г/л,
1 -4 года
- 52-78 г/л,
5-7 лет
- 58-76 г/л,
8-15 лет
- 64-83 г/л.
взрослые
47-72 г/л,
Содержание общего белка в сыворотке (плазме) крови можно
характеризовать понятиями «нормо-», «гипер-» и «гипопротеинемия»,
Причиной гипо- и гиперпротеинемии может быть не только
нарушение равновесия между поступлением, биосинтезом белка, его
катаболизмом и удалением, но и изменение объема
внутрисосудистого пространства за счет жидкой (водной) части
крови. Патогенез этих изменений различен.
ТИПОВЫЕ НАРУШЕНИЯ СОДЕРЖАНИЯ БЕЛКОВ В ПЛАЗМЕ КРОВИ
ГИПОПРОТЕИНЕМИИ
ГИПЕРПРОТЕИНЕМИИ
ПАРАПРОТЕИНЕМИИ
ГИПОСИНТЕТИЧЕСКИЕ
ГИПЕРСИНТЕТИЧЕСКИЕ
ГИПЕРСИНТЕТИЧЕСКИЕ
ГЕМОКОНЦЕНТРАЦИОННЫЕ
Гипопротеинемия-
обнаруживается при большинстве заболеваний внутренних органов, носит приобретенный
характер, возникает, из-за снижения содержания альбумина, причины:
/. Недостаточное поступление белка с пищей
следствие недоедания, сужения пищевода (из-за ожога, опухоли), нарушения целостности и функции ЖКТ, при
продолжительных воспалительных процессах в стенке кишечника и др.состояниях, сопровождающихся ухудшением
переваривания и всасывания белков.
2. Подавление синтетической функции печени
при паренхиматозных гепатитах, циррозах печени, интоксикациях, злокачественных новообразованиях,
тиреотоксикозе, действиее некоторых химических веществ. В результате изменения процесса синтеза протеинов у
больных перитонитом происходит прогрессирующее снижение общего белка в сосудистом русле в течение очень
короткого времени. То же наблюдается у больных по мере распространения опухолевого процесса.
3. Повышенный распад белка в организме
при возмещении энергетических затрат с дефицитом пластических ресурсов ( при термических ожогах и ожоговой
болезни, злокачественных новообразованиях, гипертермии нарушении эндокринного баланса и т.д.)Усиленный распад
белка вместе с его повышенными потерями постоянно сопровождает развитие кишечной непроходимости.
4. Потеря белка организмом: с кровью при острых и хронических кровотечениях, с мочой при нефротическом ею
(нефрозе, амилоидозе почек).
5. Перемещение в другие ткани
образовании обширных отеков.. переход в третье пространство — при формировании экссудатов, выпотов в
серозные полости, в просвет кишечника (при завороте кишок, перитоните), на ожоговую поверхность.
6. Особенности физиологического состояния организма.
( у женщин в последние месяцы беременности и в период лактации)
Абсолютная гиперпротеинемия —
 вызывается усилением биосинтеза глобулинов в клеточных
элементах системы фагоцитов при длительно текущих
хронических воспалительных процессах, в том числе при
хронических полиартритах.
Относительная гиперпротеинемия:
у больных с острыми заболеваниями и критическими
состояниями - признак обезвоживания организма и по этой
причине носит относительный характер.
(потеря жидкости при тяжелых ожогах, генерализованном
перитоните, неукротимой рвоте, профузных поносах, холере,
несахарном диабете, хроническом нефрите в стадии полиурии,
усиленном потоотделении и респираторном ацидозе приводит
к относительной гиперпротеинемии).
Наблюдаемое при перитоните повышение концентрации общего
белка плазмы из-за выраженной гиповолемии дает ложное
представление об увеличении его содержания в сосудистом
русле, скрывая характерный для этой патологии дефицит
белка.
Дефектопротеинемии

Дефектопротеинемии - наследственно
обусловленные нарушения в синтезе белков крови
(анальбуминемия, агаммаглобулинемия,
врожденное отсутствие или недостаточное
содержание в плазме крови церулоплазмина
(болезнь Вильсона); первичная идиопатическая
(эссенциальная) гипопротеинемия сопровождается
анемией, отеками, поносами.

Гипопротеинемия почти всегда связана с
гипоальбуминемией, тогда как гиперпротеинемия —
с гиперглобулинемией.

Кроме общего содержания белков в плазме крови
также определяют содержание отдельных групп
белков или даже индивидуальных белков
Парапротеинемия
При пролиферации клона плазматических
клеток увеличивается синтез иммуноглобулина,
представленного одним классом, подклассом и
изоти пом, в состав которого входят тяжелые и
легкие белковые цепи одного типа.
При электрофоретическом разделении белков
сыворотки крови этот иммуноглобулин мигрирует
в виде компактной полосы, которая определяется
на фоне других белковых фракций. Такой
иммуноглобулин называют моноклональным
иммуноглобулином или парапротеином (ПП).
Термин "пара- протеин" был впервые
использован Apitz в 1940 г. для обозначения
моноклональных белков в крови, моче и тканях,
которые производятся миеломными клетками.
Белковые фракции
Белки на фракции разделяют с помощью электрофореза.
Электрофорез – это метод, при котором вещества с
различным зарядом и массой, разделяются в
постоянном электрическом поле. При электрофорезе
на бумаге белки плазмы крови дают 5 фракций:
 альбумины
 α1-глобулины
 α2-глобулины
 β-глобулины
 γ-глобулины
Методы выявления
диспротеинемии
При электрофорезе на агаровом геле получается
7-8 фракций, на крахмальном геле – 16-17
фракций. Больше всего фракций – более 30,
дает иммуноэлектрофорез.
 Целесообразность разделения белков на
фракции связана с тем, что белковые фракции
плазмы крови отличаются между собой
преобладанием в них белков, с определенными
функциями, местом синтеза или разрушения.
 Нарушение соотношения белковых фракций
плазмы крови называется диспротеинемия.
Выявление диспротеинемии имеет
диагностическое значение.
Электрофореграмма белков
сыворотки крови (10 пациентов)
Денситограмма белков
сыворотки крови
альбумин
ы
глобулины α1
глобулины α2
глобулины β
глобулины γ
I. Альбумины
Альбумин. Простой белок Мм 69кДа, обладает высокой гидрофобностью. У
альбумина наблюдается полиморфизм.
Синтезируется в печени (12 г/сут), утилизируется почками, энтероцитами и др.
тканями. Т½=20 дней.
В плазме альбуминов 40-50г/л, они составляют 60% всех белков плазмы крови.
Функции: поддержание онкотического давления (вклад 80%), транспорт
свободных жирных кислот, билирубина, жёлчных кислот, стероидных и
тиреоидных гормонов, ХС, лекарств, неорганических ионов (Cu2+, Ca2+,
Zn2+), является источником аминокислот.
Транстиретин (преальбумин). Тетрамер. В плазме 0,25г/л.
Белок острой фазы (5 группа). Транспортирует тиреоидные гормоны и
ретинолсвязывающий белок. Снижается при голодании.
Диспротеинемия альбуминовой фракции реализуется преимущественно за счет
гипоальбуминемии.

Причиной гипоальбуминемии является снижение синтеза альбуминов при
печеночной недостаточности (цирроз), при повышении проницаемости
капилляров, при активации катаболизма вследствие ожогов, сепсисе,
опухолях, при потере альбуминов с мочой (нефротический синдром), при
голодании.

Гипоальбуминемия вызывает отек тканей, снижение почечного кровотока,
активацию РААС, задержку воды в организме и усиление отека тканей.
Резкий отток жидкости в ткани приводит к снижению АД и может вызвать
шок.
Глобулины. Они включают липопротеины и гликопротеины.
II. α1-Глобулины
α1-Антитрипсин - гликопротеин, синтезируемый печенью. В плазме 2,5г/л. Белок острой фазы (2 группа).
Важный ингибитор протеаз, в том числе эластаз нейтрофилов, которые разрушают эластин альвеол
лёгких и печени. α1-Антитрипсин также ингибирует коллагеназу кожи, химотрипсин, протеазы грибков и
лейкоцитов.
При дефиците α1-антитрипсина могут возникнуть эмфизема лёгких и гепатит, приводящий к циррозу печени.
Кислый α1- гликопротеин, синтезируется печенью. В плазме 1 г/л. Белок острой фазы (2 группа).
Транспортирует прогестерон и сопутствующие гормоны.
ЛПВП синтезируются в печени. В плазме 0,35 г/л. Транспортируют излишки ХС из тканей в печень,
обеспечивают обмен других ЛП.
Протромбин - гликопротеид, содержащий около 12% углеводов; белковая часть молекулы представлена
одной полипептидной цепью; молекулярная масса около 70000Да. В плазме 0,1 г/л. Протромбин предшественник фермента тромбина, стимулирующего формирование тромба. Биосинтез протекает в
печени и регулируется витамином К, образуемым кишечной флорой. При его недостатке витамина К
уровень протромбина в крови падает, что может приводить к кровоточивости (ранняя детская геморрагия,
обтурационная желтуха, некоторые болезни печени).
Транскортин - гликопротеин, синтезируемый в печени, масса 55700Да, Т½=5 суток. Переносит кортизол,
кортикостерон, прогестерон, 17-альфа-гидроксипрогестерон и, в меньшей степени, тестостерон. В плазме
0,03 г/л. Концентрация в крови чувствительна к экзогенным эстрогенам и зависит от их дозы.
Тироксинсвязывающий глобулин (TBG) - синтезируется в печени. Молекулярная масса 57 кДа. В плазме
0,02 г/л. Т½=5 суток. Он является главным транспортером тироидных гормонов в крови (транспортирует
75% тироксина и 85% трийодтиронина).

Диспротеинемия за счет α1-глобулиной фракции реализуется преимущественно за счет: 1).
снижения синтеза α1-антитрипсина. 2). Потере белков этой фракции с мочой при нефротическом
синдроме. 3). повышения белков острой фазы в период воспаления.
III. α2-Глобулины
α2-Макроглобулин (725 кДа), синтезируется в печени. Белок острой
фазы (4 группа). В плазме 2,6 г/л. Главный ингибитор множество
классов протеиназ плазмы, регулирует свертывание крови,
фибринолиз, кининогенез, иммунные реакции.
Уровень α2-макроглобулина в плазме уменьшается в острой фазе
панкреатита и карциномы простаты, увеличивается - в результате
гормонального эффекта (эстрогены).
Гаптоглобин – гликопротеид, синтезируется в печени. В плазме 1
г/л. Белок острой фазы (2 группа). Связывает гемоглобин с
образованием комплекса, обладающего пероксидазной
активностью, препятствует потери железа из организма.
Гаптоглобин эффективно ингибирует катепсины С, В и L, может
участвовать в утилизации некоторых патогенных бактерий.
Витамин Д связывающий белок (БСВ) (масса 70кДа). В плазме 0,4
г/л. Обеспечивает транспорта витамина А в плазме и
предотвращает его экскрецию с мочой.
III. α2-Глобулины
Церулоплазмин - главный медьсодержащий белок плазмы (содержит 95%
меди в плазмы) с массой 150кДа, синтезируется в печени. В плазме 0,35
г/л. Т½=6 суток. Церулоплазмин обладает выраженной оксидазной
активностью; ограничивает освобождение железа, активирует окисление
аскорбиновой кислоты, норадреналина, серотонина и сульфгидрильных
соединений, инактивирует активные формы кислорода, предотвращая
ПОЛ.
Церулоплазмин - белок острой фазы (3 группа). Он повышается у больных с
инфекционными заболеваниями, циррозом печени, гепатитами, инфарктом
миокарда, системными заболеваниями, лимфогранулематозом, при
злокачественных новообразованиях различной локализации (рак легкого,
молочной железы, шейки матки, желудочно-кишечного тракта).

Болезнь Вильсона – Коновалова. Недостаточность церулоплазмина возникает
при нарушении его синтеза в печени. При дефиците церулоплазмина Cu2+
уходит из крови, выводятся с мочой или накапливается в тканях (например, в
ЦНС, роговице).
Антитромбин III. В плазме 0,3 г/л. Ингибитор плазменных протеаз.
Ретинолсвязывающий белок синтезируется в печени. В плазме 0,04 г/л.
Связывает ретинол, обеспечивает его транспорт и предотвращает распад.
Функционирует в комплексе с транстиретином. Ретинол связывающий
белок фиксирует излишки витамина А, что предотвращает
мембранолитическое действие высоких доз витамина.

Диспротеинемия за счет α2-глобулиной фракции может возникать при
воспалении, т.к. в этой фракции содержатся белки острой фазы.
IV. β-Глобулины





ЛПОНП - образуются в печени. Транспорт ТГ, ХС.
ЛППП - образуются в крови из ЛПОНП. Транспорт ТГ, ХС.
ЛПНП – образуются в крови из ЛППП. В плазме 3,5 г/л.
Транспортируют излишки ХС из периферических органов в печень.
Трансферрин – гликопротеин, синтезируется печенью. В плазме 3 г/л.
Т½=8 суток. Главный транспортер железа в плазме, 1 молекула
трансферрина связывает 2 Fe3+, а 1г трансферрина соответственно
около 1,25 мг железа. При снижении концентрации железа синтез
трансферрина возрастает. Белок острой фазы (5 группа). Снижается
при печеночной недостаточности.
Фибриноген гликопротеин, синтезируется в печени. Мм 340кДа. В
плазме 3 г/л. Т½=100часов. Фактор I свёртывания крови, способен под
действием тромбина превращаться в фибрин. Является источником
фибринопептидов, обладающих противовоспалительной активностью.
Белок острой фазы (2 группа).
Содержание фибриногена увеличивается при воспалительных
процессах и некрозе тканей. Снижается при ДВС синдроме, печеночной
недостаточности. Фибриноген основной белок плазмы, влияющий на
величину СОЭ (с повышением концентрации фибриногена скорость
оседания эритроцитов увеличивается).
V. γ-Глобулины
Синтезируются функционально активными В-лимфоцитами
(плазмоцитами).
 γ-Глобулины гликопротеины, состоят 2 тяжелых (440 АК) и 2
легких (220 АК) полипептидных цепей различной
конфигурации, которые соединяются между собой
дисульфидными мостиками.
 Антитела гетерогенны, отдельные составные части
полипептидов кодируются разными генами, с различной
способностью к мутированию.
Все γ-глобулины разделены на 5 классов G,A,M,D,E.
В каждом классе выделяют несколько подклассов.
 Диспротеинемия за счет γ-глобулиной фракции может
возникать при 1). Иммунодефицитом состоянии; 2).
Инфекционных процессах. 3). Нефротическом синдроме.

СРБ
β2-МИКРОГЛОБУЛИН
α2-МИКРОГЛОБУЛИН
БЕЛКИ
α1-АНТИТРИПСИН
ОСТРОЙ
ЦЕРУЛОПЛАЗМИН
ГАПТОГЛОБИН
ФАЗЫ
КОМПОНЕНТ
КОМПЛЕМЕНТА С3, С4
α1-КИСЛЫЙ ГЛИКОПРОТЕИН
Ig A, G, M
Синтез белков острой фазы
воспаления и цитокинов печенью.
Белки острой фазы воспаления (БОФ)


К БОФ относят до 30 белков плазмы крови, участвующих в
реакции воспалительного ответа организма на повреждение.
синтезируются в печени, их концентрация существенно
изменяется и зависит от стадии, течения заболевания и
массивности повреждения.
Синтез белков острой фазы воспаления в печени стимулируют:
1) ИЛ-6,
2) ИЛ-1 и сходные с ним по действию (ИЛ-1 а, ИЛ-1Р, факторы
некроза опухолей ФНО-ОС и ФНО-Р);
3) Глюкокортикоиды;
4) Факторы роста (инсулин, факторы роста гепатоцитов,
фибробластов, тромбоцитов).
Белки острой фазы воспаления (БОФ)
Выделяют 5 групп белков острой фазы
1. К «главным» белкам острой фазы у человека относят С-реактивный белок (СРВ)
и амилоидный А белок сыворотки крови. Уровень этих белков возрастает при
повреждении очень быстро (в первые 6-8 часов) и значительно (в 20-100 раз, в
отдельных случаях - в 1000 раз).
2. Белки, концентрация которых при воспалении может увеличиваться в 2-5 раз в
течение 24 часов. Это кислый α1-гликопротеид, α1-антитрипсин, фибриноген,
гаптоглобин.
3. Белки, концентрация которых при воспалении или не изменяется или
повышается незначительно (на 20-60% от исходного). Это церулоплазмин, С3компонент комплемента.
4. Белки, участвующие в острой фазе воспаления, концентрация которых, как
правило, остается в пределах нормы. Это α1-макроглобулин, гемопексин,
амилоидный Р белок сыворотки крови, иммуноглобулины.
5. Белки, концентрация которых при воспалении может снижаться на 30-60%. Это
альбумин, трансферрин, ЛПВП, преальбумин. Уменьшение концентрации
отдельных белков в острой фазе воспаления может быть обусловлено
снижением синтеза, увеличением потребления, либо изменением их
распределения в организме.

БОФ обладают антипротеазной активностью: α1-антитрипсин,
антихимотрипсин, α2-макроглобулин.

Их важная функция состоит в ингибировании активности эластазоподобных и
химотрипсиноподобных протеиназ, поступающих из гранулоцитов в
воспалительные экссудаты и вызывающих вторичное повреждение тканей.
Снижение уровней ингибиторов протеиназ при септическом шоке или остром
панкреатите является плохим прогностическим признаком.
ФУНКЦИЯ БЕЛКОВ ОСТРОЙ ФАЗЫ
• ОГРАНИЧЕНИЕ ПОВРЕЖДЕННОЙ ТКАНИ
• НЕЙТРАЛИЗАЦИЯ И УСТРАНЕНИЕ ВОСПАЛИТЕЛЬНОГО
АГЕНТА
• ЗАПУСК МЕХАНИЗМОВ АДАПТАЦИИ (РЕМОНТА) ДЛЯ
ВОССТАНОВЛЕНИЯ НОРМАЛЬНЫХ ФУНКЦИЙ ОРГАНИЗМА
• Общие свойства БОФ
•
Антипротеолитическая активность
•
Активация комплемента;
•
Усиление опсонизации;
•
Удаление свободных радикалов кислорода
•
Бактериостатическое действие.
С-реактивный белок

С-реактивный белок синтезируется преимущественно в гепатоцитах, его
синтез инициируется антигенами, иммунными комплексами, бактериями,
грибами, при травме (через 4-6 ч после повреждения). Может
синтезироваться эндотелиоцитами артерий. В плазме <0,01 г/л. Белок
острой фазы (1 группа).
Способен связывать микроорганизмы, токсины, частицы поврежденных
тканей, препятствуя тем самым их распространению. Эти комплексы
активируют комплемент по классическому пути, стимулируя процессы
фагоцитоза и элиминации вредных продуктов. С-реактивный белок может
взаимодействовать с Т-л, фагоцитами и тромбоцитами, регулируя их
функции в условиях воспаления. Обладает антигепариновой активностью,
при повышении концентрации ингибирует агрегацию тромбоцитов.

СРБ - это маркер скорости прогрессирования атеросклероза. Определяют
для диагностики миокардитов, воспалительных заболеваний клапанов
сердца, воспалительные заболевания различных органов.
Диспротеинемия за счет β-глобулиной фракции может возникать при
1) некоторых дислипопротеинемиях; 2) воспалении, т.к. в этой
фракции содержатся белки острой фазы; 3) При нарушении
свертывающей системы крови.
Выявление парапротеинов с
помощью электрофореза и
иммунофиксации


Для клинического исследования ПП целесообразно
использовать электрофорез в агарозном геле или
капиллярный электрофорез. В зависимости от условий
электрофореза и состава буфера может формироваться 5
или 6 фракций белков. В последнем случае бета-фракция
разделяется на бета-1 и бета-2 (минорную) фракции. В
каждой фракции в норме присутствует определенный
набор белков, поэтому результат электрофореза белков
сыворотки дает комплексное представление об изменении
синтеза и катаболизма многих белков организма.
Для выявления ПП методы электрофореза и
иммунофиксации должны использоваться совместно.
Электрофорез с денситометрической оценкой белковых
фракций позволяет предположить наличие ПП, а
иммунофик- сация - подтвердить его наличие в той или
иной фракции.
МЕТОДЫ ЛАБОРАТОРНОЙ
ДИАГНОСТИКИ
СПЕКТРОФОТОМЕТРИЯ;
ТУРБИДИМЕТРИЯ;
НЕФЕЛОМЕТРИЯ;
ЭЛЕКТОРОФОРЕЗ БЕЛКОВ;
ИММУНОФИКСАЦИЯ БЕЛКОВ;
ХРОМАТОГРАФИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ.
Нефелометрия как метод
определения
Нефелометр BN
ProSpec, Dade Behring
Разработка 2000 г.
 Высокая точность получаемых результатов
 Точное определение низких концентраций белков
 «Золотой стандарт» определения концентрации
специфических белков
Спектр тестов автоматического нефелометра
1микроглобулин
2-Микроглобулин 2Макроглобулин
Альбумин
Общий белок
Фибронектин
Цистатин С
Легкие цепи ‘λ’
Легкие цепи ‘κ’
Своб. легкие цепи
ASLO, RF, CRP
sen
Церулоплазмин
1-Гликопротеин
1-Антитрипсин
ADNase, SAA
Гаптоглобин
Ретинол св. белок
Преальбумин
Трансферрин
Миоглобин
APO A-I
APO-B
APO-E
LP(a)
APO A-II
IgG, IgE
IgA, IgM
IgG1, IgG2
IgG3, IgG4
ЦИК
С3с, С4
С1-ингибитор
Плазминоген
Фибриноген
Антитромбин-III
Гемопексин
Раств. трансф.
рец.
Трансферрин,
CDT
Ферритин
Гомоцистеин
Особенности преаналитической
фазы
Взятие крови должно осуществляться
максимально атравматично
(исключить повреждение тканевых
клеток );
Белки не стабильны в цельной крови,
поэтому необходимо быстрое отделение
сыворотки или плазмы от клеток;
Хранение рекомендовано при низких
температурах.
Особенности преаналитической фазы
Наложение манжеты при взятие крови на 6-10мин.
вызывает увеличение концентрации белков на
20%.
Воздействие физических и химических факторов
вызывает денатурацию белков.
Многократные оттаивания и замораживания не
допустимы.
Особенности преаналитической фазы
После оттаивания сыворотку необходимо
тщательно перемешать, если образовалась
мутность, необходимо исключить анализ.
В стерильных хорошо закрытых
пробирках пробы хранятся в течении
недели при t-2-8 гр.
Ранние маркеры ренальной патологии - Цистатин С
1.Белок семейства цистатинов (13 Кда) –
ингибиторов цистеиновых протеаз
2.Синтезируется всеми ядросодержащими
клетками с постоянной скоростью
3.Свободно фильтруется в клубочках
4.Не секретируется канальцами
5.Выделяется только через почки
6.Реабсорбируется и расщепляется в
клетках почечных канальцев
Имеет 100% клиренс - (полностью
фильтруется в почках),
Уровень в плазме и в моче не зависит от
мышечной массы, возраста, пола,
этнической принадлежности
:
Современные методы ранней диагностики
хронической и острой почечной недостаточности
Цистатин С-клиническое значение
Поскольку цистатин С синтезируется с постоянной скоростью, для мужчин,
женщин и детей с разной массой тела в норме его уровень в плазме постоянен и
одинаков :
Плазма или сыворотка: 0,57 – 1,79 мг/л
Моча: 0,03 – 0, 29 мг/л
При ренальной патологии уровень цистатина С
возрастает:
в плазме – до 5 раз, в моче – до 200 раз!
Цистатин С - высокочувствительный и специфичный маркер
скорости клубочковой фильтрации
Его повышение сопровождает :
- хронические заболевания почек (ХЗП)
- сахарный диабет
- сердечную недостаточность
- инфаркт миокарда
- ишемический инсульт
Уровень Цистатина С может повышаться – при очень больших дозах
стероидов, гипертиреозе.
Понижается - при гипотиреозе.
Цистатин С
 Маркер функции почек белковой природы;
 Уровень в крови не зависит от;
воспалительных изменений;
 Уровень в крови обратно-пропорционален
скорости клубочковой фильтрации;
 Содержание не зависит от пола, возраста,
размера мышечной массы;
 Его повышение предшествует повышению
креатинина.
Neutrophil gelatinase-asscociated lipocalin (NGAL)
Белок, 25 кД, он же: липокалин-2, липокалин нейтрофилов человека,
сидерокалин, (HNL - Human neutrophil lipocalin, lipocalin-2, siderocalin)
- связан с желатиназой нейтрофилов и с железом
Участвует в защите
от бактериальных инфекций,
за счет связывания с микробными
сидерофорами
«NGAL - белок острой фазы»
• Опыты на животных показали:
NGAL один из самых ранних белков,
индуцируемых в почках
при ишемическом
или нефротоксическом стрессе
•
• Многочисленные исследования:
u-NGAL - ранний маркер ОПП
разных этиологий
Honore, et al. Intensive Care Med 2007
Devarajan, Expert Opin Med Diag 2008
Waikar, et al. Clin J Am Soc Nephrol 2008
Структура NGAL,
•
связанного с Fe(III),
•
Fishbach et al. Nat Chem Biol 2008
Где и когда синтезируется NGAL
В зависимости от различных патологических
состояний NGAL экспрессируется и
секретируется большим количеством различных
клеток, находящихся в состоянии стресса:
иммунными клетками, гепатоцитами,
адипоцитами, клетками предстательной железы,
клетками почечных канальцев, а так же
клетками эпителия респираторного и
пищеварительного тракта
Основные функции NGAL
NGAL «нормализует» поврежденные ткани за счет:
- участия в процессе апоптоза;
- повышения выживаемости поврежденных клеточных структур;
- восстановления поврежденного эпителия;
- стимулирования дифференцировки и структурной
реорганизации ренальных эпителиальных клеток.
При патологиях может стимулировать:
- злокачественный рост;
- ремоделирование атеросклеротических бляшек;
- ремоделирование миоцитов при ишемических повреждениях
миокарда.
u-NGAL при ОПП
Cинтезируется de novo:
в тонких восходящих окончаниях
петли Генле и в собирательных
трубках, поступает в мочу (u-NGAL
– urine) и, как бактериостатик,
«спасает» от инфекций мочевой
тракт
NGAL в плазме и в моче
Хотя NGAL плазмы свободно фильтруется клубочками, он в
большой степени реабсорбируется в проксимальных канальцах
за счет эндоцитоза.
Инъекция животным радиоактивно меченного
NGAL приводит к его накоплению в
проксимальных канальцах, но не к его
появлению в моче.
Основная причина экскреции NGAL в мочу повреждение проксимальных ренальных
канальцев, что предотвращает реабсорбцию
NGAL, а также значительное повышение синтеза
NGAL de novo .
При ОПП происходит быстрое и массовое
повышение синтеза NGAL в восходящем
колене петли Генле и в собирательных
трубках.
В результате синтеза белка NGAL в дистальном
нефроне и его секреции в мочу именно такой,
«ренальный» NGAL, и составляет наибольшую
фракцию NGAL в моче
•
NGAL
NGAL – ранний маркер:
- хронических заболеваний почек,
- диабетической нефропатии,
- волчаночного нефрита,
- ОПП, связанного с множественными травмами,
- нефротоксичности фармпрепаратов,,
- инфекций мочевого тракта,
- тяжести ОПП при сепсисе,
- дисфункции почек у пациентов в отделениях
интенсивной терапии,
- ренальных повреждений трансплантированной
почки,,
- ренальной дисфункции при трансплантации печени,
- ишемических ренальных повреждений при операциях,
связанных с АИК
Цистатин С и NGAL
Цистатин С – в сыворотке –
высокочувствительный ранний маркер
- замедления скорости клубочковой
фильтрации, прогрессирования ХПН,
сердечно сосудистых осложнений
и летальности, связанных с ХПН.
NGAL – в моче – высокочувствительный
ранний маркер ОПН («ренальный
тропонин»).
ГОМОЦИСТЕИН — «ЗЛАЯ» АМИНОКИСЛОТА
Серосодержащая, образуется в
метаболическом цикле метионина
Обладает выраженным токсическим
действием на клетку
В кровотоке быстро окисляется с образованием
радикалов, содержащих активный кислород
Стимулирует пролиферацию гладкомышечных
клеток - формирование тромбоваскулярной патологии
Гомоцистеин
-Независимый фактор риска CCЗ
-Увеличение риска тромбообразования
-Отражает риск развития и быстрого
прогрессирования раннего атеросклероза
-Повышение риска развития болезни Альцгеймера
-Повышение риска развития спонтанных абортов,
преэклампсии, эклампсии
-Врожденная гомоцистинурия – задержка
умственного развития, патология скелета, ранний
атеросклероз.
Атерогенное действие избыточного
гомоцистеина
1. ГЦ повреждает стенку артерии,
что ведет к накоплению в месте повреждения
жировых субстанций;
2. Циркулирующие иммунные клетки
(моноциты) связываются с местами повреждений
и вызывают воспалительный процесс;
3. Артериальные клетки пролиферируют,
«пытаясь» залечить повреждение,
что ведет к образованию бляшек
на стенках артерий.
Повышенный гомоцистеин
индуцирует атерогенез
ГИПЕРГОМОЦИСТЕИНЕМИЯ
 активности
антитромбина III
и эндогенного
гепарина
 агрегации и
адгезии
тромбоцитов

активности
тромбина
 синтеза
тромбомодули
на
 активности
протеина С
протеина S
 активности
факторов V и ХII
 связывания
аннексина II с
рецепторами
клеток
эндотелия
Усиление тромбообразования
Причины гипергомоцистеинемии
1. Дефицит витаминов
В6,
В12
фолиевой кислоты
2. Некоторые патологии:
- хроническая
почечная недостаточность,
- гипофункция
щитовидной железы,
- В12 - дефицитная анемия,
- онкологические
заболевания,
3. Генетические дефекты,
повреждающие ферменты
метаболизма гомоцистеина.
Уровень в плазме крови
15 - 30 мкмоль/л
30 – 100 мкмоль/л
> 100 мкмоль/л
Степень ГГЦ
Умеренная
Средняя
Тяжелая
Диагностическое значение
высокого гомоцистеина
 Предиктор ИБС и ее осложнений
 Независимый фактор риска
развития атеросклероза,
 ИМ
 инсульта
 Увеличивает риск
развития тромбоза глубоких вен
 Индикатор риска общей смертности
 Вызывает осложнения при беременности и
-
родах невынашивание беременности,
хроническая фетоплацентарная недостаточность,
внутриутробная гипоксия плода)
 Фактор риска развития сенильного остеопороза
МАРКЕРЫ АТЕРОСКЛЕРОЗА
1. СРБ – высокочувствительный/
островоспалительный
2. Апо В /Апо А
(Мелкие плотные частицы Х-ЛПНП)
3. ЛП(a)
4. Гомоцистеин
5. СЖК
6. Свободный (неэтери фицированный холестерин)
7. Гликозилированный гемоглобин
(при МС и СД)

БЕЛКИ-МАРКЕРЫ ПОВРЕЖДЕНИЯ
КАРДИОМИОЦИТОВ
Миоглобин
Транспортный белок кислорода в скелетных мышцах, миокарде
Уровень в крови повышается при некрозе клеток поперечно-полосатой
мускулатуры (миокард, скелетные мышцы)
Один из самых ранних маркеров ИМ
Самый чувствительный маркер для контроля реперфузии и реинфаркта
Совместное определение миоглобина и КФК помогает диагностировать
мелкоочаговый ИМ
Повышается при «краш»-синдроме, обширных травмах мышц
•рекомендуется использовать миоглобин при
диагностике нестабильной стенокардии и острого
инфаркта миокарда без подъема сегмента ST в
течение первых 4-8 часов после начала приступа
для исключения некроза сердечной мышцы.
•При диагностике острого коронарного синдрома
полезно использовать одновременное определение
миоглобина, КФК-МВ и тропонина
Кардиоспецифический тропонин Т (кТрТ)
специфичный показателем поражения миокардиоцитов
 Комплекс тропонина входит в состав сократительной
системы мышечной клетки.
образован тремя белками:
 тропонином Т, (м.м. 3700)
 тропонином I (м.м. 26 500), который может ингибировать
АТФазную активность
 тропонином С (м.м. 18 000), обладающим значительным
сродством к Са2 +.

Около 93 % тропонина Т содержится в сократительном
аппарате миоцитов; эта фракция может быть
предшественником для синтеза тропонинового комплекса и 7
% — в цитозоле.
 Тропонин Т из сердечной мышцы по аминокислотному
составу и иммунным свойствам отличается от тропонина Т
других мышц.

Кардиоспецифический тропонин Т (кТрТ)
В крови здоровых людей уровень кТрТ не превышает 0,2-0,5
мкг/л
содержание, превышающее нормальные величины,
свидетельствует о поражении сердечной мышцы
Развитие острого ИМ сопровождается обширным разрушением
кардиомицитов и значительным выбросом в кровь кТрТ, уровень
которого может повышаться в 20-400 раз.
 Количество кТрТ в крови увеличивается пропорционально
обширности и глубине ИМ и обнаруживается уже через 3-4 ч
после начала болевого приступа.
 Максимальный уровень кТрТ определяется на 3-4 сут, в течение
недели содержание его остается высоким, а затем постепенно
снижается, оставаясь повышенным до 10-18 дня.
 Специфичность определения кТрТ в крови при остром ИМ
достигает 90-100% и превосходит специфичность для КК, ЛДГ,
миоглобина, приближаясь к таковой для лёгких и тяжелых цепей
миозина, фракции КК-МВ.

Показания к определению тропонина Т
• острый инфаркт миокарда.
Тропонин Т — ранний маркер острого ИМ, особенно когда есть
причины к неспецифическому повышению КК и КК-МВ;
• подострый ИМ.
Тропонин Т — идеальный поздний маркер для диагностики
подострого ИМ у пациентов, которые только что поступили в
клинику в поздней фазе инфаркта, с нехарактерными
симптомами и уже нормализованными показателями КК и
КК-МВ;
• диагностика микроинфаркта и исключение некроза миокарда у
пациентов с нестабильной стенокардией;
• мониторинг результатов тромболитической терапии.
Определение соотношения концентрации тропонина Т в
сыворотке через 14 ч и 32 ч после появления болей;
• неинвазивное определение величины инфаркта;
• «немой» инфаркт миокарда перед хирургическим
вмешательством. Инфаркт миокарда вокруг операционной
раны при операции на сердце.
Тропонин I в сыворотке
Содержание тропонина I в сыворотке в норме 0—0,5 нг/мл.
— структурный белок тропонинового комплекса мышц с мол. массой 26 500
Да.
Тропонин I, как и тропонин Т, в сердечной и скелетных мышцах значительно
отличаются по своей аминокислотной последовательности. Это позволило
создать диагностические наборы для кардиальных изоформ указанных
тропонинов.
 Тропонин I и тропонин Т являются компонентами сократительного аппарата
и поэтому структурно связанными белками кардиомиоцитов, тогда как
растворенные в цитозоле белки (миоглобин) относительно быстро
вымываются из зоны некроза, деструкция сократительного аппарата
кардиомиоцитов более продолжительна по времени, поэтому увеличение
уровня тропонинов определяется до 8—10 дней после начала ИМ.
 Тропонин I является высокоспецифичным маркером ИМ.
Повышение уровня Т I в крови отмечается через 4—6 ч после острого
приступа (у 50 % больных),
 достигает максимума на 2-й день и приходит к норме между 6-ми и 8-ми
сутками.
Средние значения тропонина I в крови на 2-й день ИМ составляют 80—100
нг/мл.
Роль тропонина в
дифдиагностике ИМ

дифференциальный диагноз между ИМ и не инфарктом
возможен при концентрации тропонина I около 2,5 нг/мл

Его уровень повышается у больных с нестабильной
стенокардией при развитии микронекрозов. При стабильной
стенокардии повышения содержания тропонина I не
отмечается.
Значения концентрации тропонина I в сыворотке около 2,0 нг/мл
должны рассматриваться как показатель клинического прогноза
у больных со стенокардией.
Концентрации выше 2,0 нг/мл имеют высокое
прогностическое значение в отношении развития ИМ и
смерти, что позволяет оценивать степень риска у
пациентов со стенокардией.


Строение, функции и динамика изменений уровня
тропонннов Т и I у больных ИМ
Тропонин Т
Тропонин 1
Существует в 3 изоформах:
в медленных скелетных мышцах,
в быстрых скелетных мышцах
в миокарде
Разница по аминокислотному составу
между изоформами миокарда и скелетных
мышц- до 40 %
Ингибитор АТФ-азной активности
актомиозина
Не экспрессируется в скелетных мышцах ни
на одной из стадий онтогенеза
Увеличение концентрации при ИМ
отмечается через 4—10 ч, достигает
максимума на 2-е сутки, нормализуется на
7-е сутки
Существует в различных изоформах:
в медленных скелетных мышцах
в быстрых скелетных мышцах
в миокарде.
Разница по аминокислотному составу между
изоформами миокарда и скелетных мышц —
6—11 %
Связывает тропониновый комплекс с
тропомиозином
Экспрессируется в скелетных мышцах плода,
при регенерации скелетных мышц, у
пациентов с дерматомиозитом
Увеличение концентрации при ИМ отмечается
через 4—10 ч, достигает максимума на 3—5-е
сутки, нормализуется на 10—14-е сутки
Адгезивные белки



Фибронектин - гликопротеин, состоит из двух
одинаковых полипептидных цепей, соединенных –SS- мостиками, содержит в каждой цепи 7 доменов- центры
связывания различных веществ (коллагена,
протеогликанов, некоторые углеводы, гепарин,
ферменты)
Функции фибронектина – адгезия и распространение
эпителиальных и мезинхимальных клеток, стимуляция
пролиферации и миграции эмбриональных и опухолевых
клеток, обеспечивает дифференцировку клеток
цитоскелета, участвует в воспалительных и
репаративных процессах.
Препятствует развитию метастазов в опухолевых тканях
Ламинин



Неколлагеновый гликопротеин базальных
мембран состоит из 3 полипептидных цепей
– А, В1 и В2, которые имеют доменное
строение.
Функции ламинина – взаимодействие со
всеми структурами базальных мембран, с
клетками.
Обеспечивает связывание клеток и
модулирует клеточное поведение, влияет
на рост, морфологию, дифференцировку и
подвижность клеток
Нидоген




Нидоген - сульфгидрильный гликопротеин
базальных мембран, имеет 1
полипептидную цепь с 3 доменами.
Функции нидогена образует с ламинином
плотный и коллагеном неплотный 3-й
комплекс;
взаимодействует со всеми структурами
базальных мембран различных клеток;
обеспечивает связывание клеток и
модулирует клеточное поведение, влияет
на рост, морфологию, дифференцировку и
подвижность клеток.
Остеонктин, тенасцин и тромбоспондин



Остеонктин – состоит из 4-х доменов, содержащих
ионы Са 2+, много цистеина. Ингибирует некоторые
фазы клеточного роста эндотелия.
Тенасцин – гликопротеин, состоит из 2-х
субъединиц соединенных дисульфидной связью.
Взаимодействует с большим количеством
лигандов межклеточного матрикса. Синтезируется
в различных тканях эмбриона. Активно
синтезируется в заживающих ранах.
Тромбоспондин – взаимодействует с коллагеном,
фибронектином, ламинином, протеогликанами,
ионами Са 2+. Антиадгезивный белок в эндотелии
и фибробластах
Прион - PrP 33-35








Прион - это продукт человеческого гена PrP расположенного в 20
хромосоме. Этот ген состоит из двух экзонов разделенных одним
интроном.
Экзон 1 и Экзон 2 транскрибируются независимо и две РНК
сшиваются в одну мРНК. Эта мРНК содержит ORF (open reading
fraim) или белок кодирующий район который транслируется в PrP
белок. PrP белок является предшественником прионового белка и
назван PrP 33-35.
Белок PrP подвергается нескольким пост-трансляционным
событиям, приводящим к прионовому белку PrP 27-30:
Гликозилирование по двум сайтам
Формирование дисульфидной связи между цистеиновыми
остатками
Удаление N-концевого сигнального пептида
Удаление С-концевого гидрофобного сегмента
Присоединение фофсфатидилинозитол гликолипида к С-концу
Удаление N-концевых 57 аминокислот
Прионы - PrP 27-30







Прионы - это инфекционные агенты состоящие только из
одного сиалогликопротеина PrP 27-30. Они не содержат
нуклеиновой кислоты. PrP 27-30 имеет массу 27-30 кДа и
содержит 145 аминокислот, гликозилированных по 181 и
197 аминокислотам или около них. С-конец содержит
фосфатидилинозитол - гликолипид, содержащий
этаноламин, фосфат, миоинозитол и стеариновую кислоту.
Белок выделяется при многих заболеваниях человека и
животных повреждающих нервную систему:
Болезнь Альцгеймера
Болезнь Кройцфельда-Жакоба
Синдром Дауна
Фатальная семейная бессоница
Синдром Герштмана-Штрауслера
Болезнь Куру
Физиологическая роль
приона



В нормальных здоровых клетках образуется
только PrP 33-35.
В поврежденных клетках из PrP 33-35 образуется
PrP 27-30 белок, который запускает реакции
образования больших количеств PrP 27-30.
Помимо посттрансляционных модификаций,
белок PrP 27-30 отличается от белка PrP 33-35
одним аминокислотным остатком. Остаток 178 в
PrP 27-30 содержит аспарагин вместо аспартата в
случае PrP 33-35. Это отличие приводит к
конформационным изменениям, при которых
белок PrP 27-30 меняет структуру а-спирали на bслой.
Патофизиологическая роль
приона

конформационным изменениям, при
которых белок PrP 27-30 меняет структуру
а-спирали на b-слой приводит:

Белок PrP 27-30 становится способным превращать
а-спирали белка PrP 33-35 в b-слои и таким образом
белок PrP 27-30 "размножается".
Именно это уникальное свойство, поколебало
основную догму молекулярной биологии, по которой
информация передается от ДНК к белку и позволило
говорить о передаче информации от белка к белку.
Белки с b-слоями образуют амилоидные фибриллы
(бляшки). Амилоидные бляшки повреждают
таламические нейроны запуская в них апоптоз.


Роль прионов в повреждении
ЦНС





Прионовые белки накапливаются в клетках ЦНС
в течении развития заболевания, вызывая
следующие повреждения:
Увеличение количества астроцитов.
Истощение дендритов.
Формирование в коре мозжечка многочисленных
вакуолей (губчатая энцефалопатия).
Амилоидозис - образование амилоидных бляшек
в коре мозжечка, таламусе, спинном и головном
мозге, в просветах кровеносных сосудов мозга.
Эти бляшки состоят из зернистой стекловидой
массы покрытой радиально расположенными
амилоидными фибриллами
Иммунная система и прионы
Примечательно, что для патологии связанные с
прионами не характерны симптомы воспаления и
жара!!! Это говорит о том, что иммуная система не
распознает прионовые белки.
Симптомы характерные для прионовых заболеваний:
 Длительный инкубационный период (несколько лет).
 Потеря мышечной координации, приводящей к
проблемам с хождением, и другими сложными
движениями.
 Слабоумие, связанное с потерей памяти.
 Бессонница.

Скачать