МОДЕЛИРОВАНИЕ ПАПИЛЛОМАВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИИ IN VITRO И ИЗУЧЕНИЕ СПЕЦИФИЧЕСКОГО ДЕЙСТВИЯ ЛЕКАРСТВЕННОГО ПРЕПАРАТА ПРОТЕФЛАЗИД® НА РЕПРОДУКЦИЮ ВИРУСА ПАПИЛЛОМЫ ЧЕЛОВЕКА[1] В настоящее время общепризнанным считается, что вирусы папилломы человека (ВПЧ) не имеют экспериментальных моделей in vitro и in vivo. Однако существующие исследования свидетельствуют о том, что культивирование кусочков кондилом, содержащих ВПЧ 11 типа, на поверхности фибробластов, а также заражение методом трансфекции керахоцитов ДНК из клеток, инфицированных вирусом папилломы 16, приводило к включению вирусной ДНК в геном клетки и экспрессии ВПЧ. Для подтверждения этих результатов нами были продолжены исследования по культивированию вирусов папилломы методом трансфекции. В результате проведенных исследований получена экспериментальная модель культивирования вируса папилломы человека. Продуцирующая ВПЧ-культура клеток получена методом трансфекции ДНК, выделенных из инфицированных клеток больных, суспензионных культур клеток МТ-4 (суспензионная культура лимфобластоидных клеток человека) и перевиваемых клеток ВНК (клетки почки хомяка). Тестирование ВПЧ осуществляли методом ПЦР, по цитопатическому действию вируса и цитологической характеристике клеток митотический индекс и аномальные митозы. Было показано, что изоляты ВПЧ тестировались праймерами к ВПЧ 16 (1 образец), праймерами к 31, 35, 39, 59, 18, 33, 45, 52, 58, 67 генотипам (4 образец). Отличительной чертой цитопатического действия культивируемых ВПЧ является разный характер воздействия на клетки. Высокие дозы вирусов вызывали дегенерацию клеток, а низкие приводили к образованию фокусов трансформации. Изучение цитологической характеристики инфицированных ВПЧ клеток ВНК позволило установить, что одной из главных характеристик инфицированных клеток является их способность к пролиферации и высокий уровень аномальных митозов. Предпосылкой для изучения специфического влияния препарата Протефлазид®на ВПЧ стало изучение результатов механизмов действия биологически активного вещества экстракта Протефлазид. Показано, что биологически активное вещество экстракта Протефлазид является активным индуктором α-интерферона, который стимулирует экспрессию генов PRK и РНКазы L, значительно (на 20%) превышающую уровень экспрессии этих генов высокоактивным индуктором интерферона polyI: polyC. Биологически активное вещество экстракта Протефлазид эффективно ингибирует синтез РНК в модельной системе транскрипции бактериофага Т7 и синтеза ДНК в условиях ПЦР (Tag-полимераза). Методами компьютерной биологии 1 очерчен вероятный механизм угнетения синтеза РНК - образование стабильного комплекса: лиганд с участком энзима - сайтом связывания субстрата. Биологически активное вещество экстракта Протефлазид в высоких дозах (150 мкамоль/л) тормозит рост клеток, индуцируя в них апоптоз, при этом процесс апоптоза связан с активизацией каспазы-9 [2]. Полученные данные свидетельствуют о том, что лекарственный препарат Протефлазид® способен поражать в инфицированных клетках мишени – РНК и ДНК-полимеразы. Для определения влияния препарата Протефлазид® на репродукцию ВПЧ использовали разные схемы обработки препаратом: одновременное введение препарата и вируса, введение препарата через 1 час после заражения вирусом, трехкратное введение препаратов через 1 сутки после инфицирования ВПЧ. Обработка препаратом Протефлазид® в течение короткого срока культивирования (4-5 суток) не приводила, по данным определения ДНК ВПЧ в ПЦР, к ингибиции репродукции культивируемого ВПЧ. Длительное культивирование вируса с препаратами в клетках ВНК (до 15 суток) приводило к угнетению репродукции ВПЧ на 2 Ig ID50. Цитологическими исследованиями установлено, что под действием препарата Протефлазид® уровень аномальных митозов инфицированных ВПЧ клеток был такой же, как и у интактных клеток. Результатом воздействия препарата Протефлазид® являлось существенное уменьшение митотической активности и уровня аномальных форм митозов инфицированных ВПЧ клеток. Эти результаты свидетельствуют об угнетении пролиферативного и деструктивного действия ВПЧ на клетки, чтобы предполагать о клинической эффективности специфического действия препарата Протефлазид® на онкогенные папилломовирусы человека. Литература 1. ОТЧЕТ «Доклиническое изучение препарата Протефлазид® на модели папилломавирусов». Государственное учреждение «Институт эпидемиологии и инфекционных болезней им. Л.В. Громашевского Академии медицинских наук Украины» Руководитель НИР - зав. лабораторией экспериментальной химиотерапии вирусных инфекций ГУ «ИЭИБ АМНУ» доктор мед. наук С.Л. Рыбалко Киев- 2010 2. ОТЧЕТ о научно-исследовательской работе «ИЗУЧЕНИЕ МЕХАНИЗМОВ ДЕЙСТВИЯ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ ЛЕЧЕБНОЙ СУБСТАНЦИИ ПРОТЕФЛАЗИДА». 2 Академия медицинских наук Украины Государственное учреждение «Институт эпидемиологии и инфекционных болезней им. Л.В. Громашевского» 03680, г. Киев, ул. Амосова, 5 Научный руководитель работы - д-р мед. наук. С.Л. Рыбалко Киев -2010 3