Конфокальная микроскопия эндогенных флуоресцентных белков

Конфокальная микроскопия
эндогенных флуоресцентных
белков коралловых полипов
Наталия Петри
Эволюционное и спектральное
разнообразие GFP-подобных белков
Схематичное
эволюционное древо
основных типов
многоклеточных
животных с указанием
групп, имеющих GFPподобные белки
(выделены зеленым).
Цветные кружки
обозначают
соответствующее
спектральное
разнообразие GFPподобных белков,
найденных в данной
группе животных.
Ген флуоресцентного
белка
Zoanthus sp.
(класс Anthozoa, подкласс
Hexacorallia, отряд
Zoanthidea)
Clavularia viridis
(класс Anthozoa, подкласс
Octocorallia, отряд
Alcyonacea)
Discosoma sp.
(класс Anthozoa, подкласс
Hexacorallia, отряд
Corallimorpharia)
Anemonia majano
(класс Anthozoa, подкласс
Hexacorallia, отряд Actiniaria)
Конфокальная микроскопия
Zoanthus sp.
зооксантеллы
энтодерма
эктодерма
3 мкм
Конфокальная микроскопия
Anemonia majano
зооксантеллы
энтодерма
эктодерма
Конфокальная микроскопия
Discosoma sp.
эктодерма
10 мкм
Конфокальная микроскопия
Clavularia viridis
зооксантеллы
энтодерма
Спектры эмиссии
флуоресцентных белков
486
519
590
Измерение подвижности белков
методом локального
обесцвечивания флуоресценции
Неподвижность голубого белка в
коралле Clavularia
Отсутствие подвижности
флуоресцентного белка в составе
гранул в Zoanthus sp.
Графики восстановления флуоресценции
в режиме xyt в клетках кораллов
Zoanthus, Anemonia majano и Discosoma
Графики восстановления флуоресценции
в режиме xt в клетках коралла и в клетках
человека
Клетки человека
t1/2=13 мс
Клетки коралла
t1/2=23 мс
Выводы
• Зеленый флуоресцентный белок в клетках
Zoanthus sp. в составе гранул обладает
практически нулевой подвижностью.
• Флуоресцентные белки с равномерным
распределением в цитоплазме в клетках
Anemonia majano, Zoanthus sp. и Discosoma
sp. являются высокоподвижными белками,
обладающими практически одинаковой
подвижностью.
• Везикулы с голубым флуоресцентным белком
в клетках Clavularia viridis изолированы друг
от друга и не обмениваются белком.
• В системе гетерологической экспрессии в
клетках млекопитающих зеленый
флуоресцентный белок из Zoanthus sp.
обладает повышенной подвижностью по
сравнению с клетками коралловых полипов.
Благодарности
Я благодарю моего научного
руководителя Константина
Анатольевича Лукьянова, Сергея
Менделевича Глаголева за
предоставленную возможность
прохождения научной практики и
Наталью Поварову за предоставленную
культуру клеток.
Фотоконверсия голубого белка из
Clavularia