МУТАЦИИ DE NOVO ПРИ ЭПИЛЕПТИЧЕСКИХ ЭНЦЕФАЛОПАТИЯХ БАЛАКИРЕВА АНАСТАСИЯ ГР 402 25 ФЕВРАЛЯ 2014 ЭПИЛЕПТИЧЕСКИЕ ЭНЦЕФАЛОПАТИИ (ЭЭ) Гетерогенная группа нескольких эпилептических болезней, характеризующихся чередой ранних припадков Связаны с когнитивными и поведенческими изменениями на фоне эпилептической активности 2 ИЗУЧАЕМЫЕ ЭЭ • Инфантильные спазмы • Синдром Леннокса-Гасто – (синдром Веста) – редкое трудномзлечимая форма эпилептическое заболевание; детской эпилепсии, происходит связано с возрастом: происходит на 2-6 годах жизни, на 5 месяце жизни (3-12) ассоциирована с поведенческими изменениями и отставанием в развитии 3 МЕТОДЫ Пациенты – часть группы проекта Epilepsy Phenome/ Genome Project (EPGP) Секвенирование экзома (Illumina) пациента и родителей (тройка): • ДНК из первичных клеток (224 тройки) • ДНК из линий лимфобластоидных клеток (LCL) (40 троек) 4 МЕТОДЫ Выравнивание образцов Отбор кандидатов: De novo мутации в экзонах или в альтернативных экзонах при сплайсинге – присутствовал у больного ребенка и отсутствовал у обоих родителей (+ отсутствовал в 436 контролях и 6500 Exome Variant Server (EVS)) 5 МЕТОДЫ Подтверждение кандидатов de novo мутаций секвенированием по Сэнгеру (отобрано 329 мутаций из 439) Гены: SCN1A n=7; STXBP1 n=5; GABRB3 n=4; CDKL5 n=3; SCN8A n=2; SCN2A n=2; ALG13 n=2; DNM1 n=2; HDAC4 n=2 P(ALG13) = 7.77 * 10e-12 P(GABRB3) = 4.11 * 10e-10 6 ВЕРОЯТНОСТЬ НАБЛЮДАЕМЫХ DE NOVO МУТАЦИЙ В ГЕНАХ С ОЦЕНЕННЫМИ MUTATION RATES 7 ОТЛИЧАЕТСЯ ЛИ РАСПРЕДЕЛЕНИЕ МУТАЦИЙ DE NOVO У БОЛЬНЫХ ПО СРАВНЕНИЮ С КОНТРОЛЕМ? Оценка при помощи параметров: η – доля экзонов, связанные с ЭЭ γ – относительный риск Отбор «связанные с ЭЭ» & «терпеливость к мутациям»: ~4000 генов => 25 процентиль => 90 генов ML(η) = 0.021 γ = 81 => сильно отличается от нулевого распределения (Pv = 2.9*10e-3) 8 ОТОБРАННЫЕ ГЕНЫ – ИЗ 6 ГРУПП МОНОГЕННЫХ БОЛЕЗНЕЙ - ? 9 ВЗАИМОСВЯЗЬ ГЕНОВ, НЕСУЩИХ МУТАЦИИ DE NOVO - ? 10 ПАЦИЕНТЫ С РАЗНЫМИ СИНДРОМАМИ ФЕНОТИПИЧЕСКИ ГЕТЕРОГЕННЫ SCN8A, STXBP1,DNM1, GABRB3 – мутации в них найдены у пациентов инфантильных спазмом и синдрома Леннокса-Гасто одновременно, если произошел переход Если нет – только 1 из 4 гена присутствовал у пациентов с синдромом Леннокса-Гасто У многих найдены мутации в mTOR – мутации приводят к мегаленцефалии 11 ВЫВОДЫ • Идентифицированы новые de novo мутации как минимум в 2 ЭЭ генах • Эти гены интолерантны к данным мутациям • Найдены мишены для возможного лечения больных ЭЭ 12