Диагностика редких вариантов острых лейкозов методом

реклама
Диагностика редких вариантов
острых лейкозов методом
проточной цитометрии
Научный центр педиатрии и
детской хирургии, г. Алматы
• Согласно мировой статистике, 3,3-4,7 детей
из 100 тысяч заболевают лейкемией в
возрасте до 15 лет. Около 40-46 % случаев
приходится на детей 2-6 лет.
• В Казахстане ежегодно заболевают 130
детей.
• Хромосомные изменения обнаруживают
приблизительно у 60-70 % больных.
• неблагоприятные факторы внешней
среды: ионизирующее излучение, действие
электромагнитного поля, химических
веществ, бензола, медикаментов, в состав
которых входят алкилирующие соединения.
• вирусы (HTLV-I - Т-клеточный
лйкоз/лимфома взрослых; вирус ЭпштейнаБарр – лимфома Беркитта, Лимфома
Ходжкина)
! Особенно чувствительны к воздействию
электромагнитного излучения дети
школьного возраста, организм которых еще
не сформировался: даже всего несколько
часов в неделю, проведенных около
компьютера, опасны для их здоровья. В
1997 году в США опубликованы данные по
увеличению количества заболеваний детей
лейкозом, которые более 2 часов в день
играли на компьютере и в видео игры.
лейкозы
острые
хронические
В
Т
ХЛЛ
редкие
миелобласт лимфобласт
ные
ные
ХМЛ
• Основной клинической симптоматикой ОЛ
служат процессы гиперплазии опухолевой
ткани (бластная трансформация костного
мозга, увеличение лимфатических узлов,
органов, появление опухолевых
инфильтратов и т.д,) и признаки
подавления нормального кроветворения.
Клиническая симптоматика развернутой стадии
ОЛ складывается из 5 основных синдромов:
• 1. гиперпластического
• 2. геморрагического
• 3. анемического
• 4. интоксикационного
• 5. инфекционных осложнений
• Л.- опухолевые клональные заболевания
кроветворной системы с первичным
поражением костного мозга. Мишенью
опухолевой трансформации являются
стволовые кроветворные клетки и
коммитированные клеткипредшественники. Субстрат опухоли
представлен бластами.
FAB-классификация, 1976
• Лф: L1, L2, L3
• Миело: М0, М1,
М2, М3,М4,
М5,М6, М7
Иммунофенотипирование
• CD – кластер дифференцировки
• Антитела (мембранные гликопротеины,
карбогидраты, гликолипиды)
• Проточная цитометрия является
современной технологией быстрого
оптического измерения параметров клетки,
ее органелл и происходящих в ней
процессов.
Образцы для проточной цитометрии
•
•
•
•
•
•
•
кровь
костный мозг
ликвор
суставная жидкость
плевральная жидкость
асцитическая жидкость
клетки тканей (например, опухолей)
Проточные цитофлюориметры
• Концепция соответствия фенотипа
злокачественной клетки фенотипу
нормального клеточного аналога на
каждом уровне дифференцировки.
В большинстве случаев ОЛ бласты имеют
иммунофенотип, сравнимый с
нормальными гемопоэтическими клетками
аналогичных стадий дифференцировки.
Иммунологическая идентификация
включает:
• Определение линейной принадлежности
злокачественных клеток
• Анализ клеточного созревания, т.е. уровня
дифференцировки, степени гетерогенности
популяции злокачественных клеток
• Аберрантности, т.е. отличия от нормальных аналогов
• Клональности
• Определение количества гемопоэтических клеток
• Контроль и мониторинг эффективности терапии
• Выявление минимальной остаточной болезни
• Лейкемические клетки можно
отличить от их нормальных
аналогов по ряду критериев. К
основным типам аберрантности
фенотипа л.клеток относятся:
• Коэкспрессия антигенов нескольких
линий
• Асинхронная экспрессия антигена
• Избыточная экспрессия антигенов
• Отсутствие экспрессии или низкий
уровень экспрессии антигена
• Фенотипический профиль,
практически не встречающийся в
норме
Структура иммунологических вариантов острых
лейкозов НЦПиДХ
1,6%
24,6%
73,8%
ОЛЛ
ОМЛ
бифенотипы
Частота выявления
различных фенотипических вариантов ОЛ
1,91%
1,6%
4,8%
4,0%
В1
В2
12,7%
В3
Т
6,4%
М0
9,5%
5,6%
54,0%
М1-2
М3
М4
Иммунологическая диагностика бифенотипического
лейкоза
• 1995, 2009
• Балльная оценка экспрессии маркеров проводится для
того, чтобы отличить БОЛ от ОЛ с коэкспрессией маркеров
«чужих» линий, если в популяции бластов не менее 20%
клеток одновременно несут м. и л. маркеры. Диагноз БФЛ
устанавливатся, если маркеры и м. и л. линии набирают
более 2 баллов. Учитывается также СИФ.
Иммунологическая диагностика бифенотипического
лейкоза
Баллы
Маркеры В ряда Маркеры Т ряда Маркеры
миелоряда
2
CD79a
cyIgM
cyCD22
CD3cy/mem
TCRαβ
TCRγδ
MPO
1
CD19
CD10
CD20
CD2
CD5
CD8
CD13
CD33
0,5
TdT
CD24
TdT
CD7
CD1a
CD14
CD15
CD64
CD117
За последние 5 лет в НЦПиДХ
было выявлено 6
бифенотипических лейкозов,
причем 3 из них имели фенотип
Т-линейной и миелоидной
направлений
дифференцировки, и 3 случая
В-линейной и миелоидной
направлений
дифференцировки.
Суммарный иммунофенотип
Т+миело:
CD7+mCD3+CD2+CD117+CD13+CD15+HLADR+CD34+MPO+
В+миело:
CD19+CD22+CD79а+CD13+CD33+CD117+CD
15+HLA-DR+CD34+MPO+TdT+
R1
100
101
100
101
102
CD4 5 PerCP
103
104
100
101
102
CD7 FITC
103
104
100
101
102
CD2 FITC
103
104
R1
102
CD4 5 PerCP
103
104
100
101
100
102
CD2 2 FITC
101
103
102
CD2 2 FITC
104
103
100
104
101
102
CD1 0 FITC
103
104
Мегакариоцитарный лейкоз (М7)
• С 2010 по 2014гг - 12 больных: 6 – м, 6 – д,
с-м Дауна - 3
• CD42a+CD42b+CD41+CD33+HLA-DR-CD34MPO• CD33+CD41a+CD42a+CD42b+CD61+HLA-DRCD34-MPO-,
• Коэкспрессия CD4, CD7, CD56
Мегакариоцитарный лейкоз (М7)
07 .12.10-Muhtarzhano va -pk.444
07 .12.10-Muhtarzhano va -pk.456
R1
100
101
102
CD45 Pe rCP
103
104
100
07 .12.10-Muhtarzhano va -pk.449
100
101
102
CD20 FITC
103
101
102
103
CD42a FITC
104
07 .12.10-Muhtarzhano va -pk.458
104
100
101
102
CD37 FITC
103
104
Эритробластный лейкоз (М6)
26.02.1 0-Ata kul aev.33 4
26 .02.10-Ataku laev.3 34
R1
0
100
200
400
600
800
26 .02.10-Ataku
laev.3
FSC-Heigh
t 44
101
102
CD38 FITC
103
100 0
104
100
101
102
CD45 Pe rCP
103
104
Плазмобластный лейкоз
16 .02.10-Sol tanb aev.24 5
15 .02.10-Sol tanb aev.21 6
R1
100
101
102
CD45 Pe rCP
103
104
100
101
102
CD38 FITC
103
104
16 .02.10-Sol tanb aev.24 6
15 .02.10-Sol tanb aev.22 2
100
100
101
102
CD7 FITC
103
104
101
102
CD38 FITC
103
104
Спасибо за внимание!
Скачать