Карфентанил, флупиртин, специфика потребления наркотических, психотропных веществ и лекарственных средств в подростковой среде в Псковской области Врач-лаборант химико-токсикологической лаборатории ГБУЗ «Наркологический диспансер Псковской области» Никитина Наталья Михайловна каннабиноиды фенилалкиламины опиаты (героин, меторфан) и опиоиды (метадон) Вещества фентанилового ряда (карфентанил, 3-метилфентанил) Лекарственные вещества для немедицинского применения каннабимиметики Опыт внедрения методик обнаружения новых наркотических и психотропных веществ в биологических жидкостях и образцах волос методами ГХ-МС в Псковской области Химико-токсикологическая лаборатория Псковской области Опыт внедрения методик обнаружения новых наркотических и психотропных веществ в биологических жидкостях и образцах волос методами ГХ-МС в Псковской области В рамках исполнения межведомственного Приказа по Псковской области Государственным управлением образования Псковской области РФ, Псковским областным центром психолого-педагогической реабилитации и коррекции «Призма» и Наркологическим диспансером Псковской области было организовано тестирование подростков в возрасте 15-17 лет на наличие в биологических объектах ПАВ и их метаболитов с целью выявления немедицинского потребления наркотических и психотропных веществ. В ноябре 2011г. было проведено пробное тестирование, где обкатывались два варианта проведения процедуры отбора проб биологического материала и проведены его исследования. 2 варианта пробоотбора: с выездом в учебное заведение и в стенах наркологического диспансера. В 2012-2013 гг. тестирование уже приобрело массовый характер. Тестирование подростков Псковской области на содержание наркотических веществ и их метаболитов Тестирование проводилось в 2011-2013 гг.: • общеобразовательные школы г. Пскова и области • вечерние школы • профтехучилища • высшие учебные заведения По результатам первого года тестирования наиболее удобным был выбран вариант проведения процедуры тестирования с выездом бригады в учебные заведения. Тестирование подростков Псковской области на содержание наркотических веществ и их метаболитов Вся процедура непосредственно тестирования организована в соответствии с Приказом МЗ и СР РФ №40 от 2006г. и включает в себя следующие операции: 1) пробоотбор, 2) исследования мочи на предмет фальсификации, 3) предварительные исследования с использованием групповых методов анализа на наркотические и лекарственные вещества (ИХА), 4) подтверждающие исследования методом газовой хроматографии с масс-селективным детектированием – при получении положительных результатов. Тестирование подростков Псковской области на содержание наркотических веществ и их метаболитов ПРАВИЛА ПРИЕМА МОЧИ НА ИССЛЕДОВАНИЕ (согласно приказу МЗ РФ № 40) 1. Анализ собирается непосредственно в стенах диспансера в чистый сухой пластмассовый желательно градуированный сосуд с широким горлом объемом 50 – 100 мл (не менее половины стакана). 2. Отбор проводится под наблюдением сопровождающего лица или персонала для предупреждения фальсификации пробы. 3. В течение первых 5 минут проводится предварительное исследование мочи по следующим показателям: Температура (33оС – 37оС) рН (4 – 8 ед. рН) Относительная плотность (1,008 – 1,025) Отсутствие белка, глюкозы, аскорбиновой кислоты Общий осмотр мочи на присутствие посторонних примесей, мути, обильной неопадающей пены и др. Запах Тестирование подростков Псковской области на содержание наркотических веществ и их метаболитов В процессе работы были выявлены следующие варианты фальсификаций: 1) Подмена мочи. 2) Разбавление образца мочи. 3) Концентрирование мочи 4) Употребление продуктов, содержащих аскорбиновую кислоту 5) Добавление инородных веществ в образец мочи. При проведении тестов на фальсификацию мочи необходимо учитывать возрастные физиологические особенности молодого организма. Так, при не полностью сформировавшейся функции клеточных мембран у подростков возможно обнаружение белка в моче после физических нагрузок. Тестирование подростков Псковской области на содержание наркотических веществ и их метаболитов Сравнительный анализ результатов тестирования подростков Псковской области Проведение скрининговых исследований методом иммунохроматографии (ИХА) Преимущества: Недостатки: • Простота метода (нет необходимости в дополнительных реагентах и приборах, все необходимые иммунореагенты для анализа нанесены заранее на мембрану). • Определение может быть проведено неподготовленным персоналом в нелабораторных условиях. • Быстрота метода. • Визуальная детекция результатов для качественного или полуколичественного анализа • неселективность метода (групповые реакции) • чувствительность к изменениям биохимических показателей мочи (несрабатывание тест-полосок, получение ложноотрицательных результатов) • кросс-реактивность (получение ложноположительных результатов) • ограниченное количество аналитов, на которые разработаны наборы Необходимость разработки скрининговых методов анализа на основе экспертных подтверждающих физико-химических методов вызвана многообразием химических соединений, которые при определенных обстоятельствах могут стать источником одурманивания и отравлений. Круг этих веществ постоянно расширяется по мере синтеза новых соединений. Комбинированный метод – хромато-масс-спектрометрия – рассматривается как два раздельных метода, дающего возможность использовать его не только в качестве скринингового, но и экспертного подтверждающего . С помощью хроматографии происходит разделение смеси на отдельные компоненты. С помощью масс-спектрометрии проводят обнаружение и количественное определение разделенных веществ смеси. Тестирование подростков Псковской области на содержание наркотических веществ и их метаболитов Случай 1. Синтетические каннабимиметики Cилильное производное метаболита синтетического каннабимиметика РВ22F на хроматограмме, снятой в режиме полного сканирования, идентифицированное по характеристическим ионам. Время удерживания метаболита – 14.26 мин и его масс-спектр Случаи, подтверждающие необходимость пересмотра существующего алгоритма проведения тестирования Случай 2. Баклофен Хроматограмма, снятая в режиме полного сканирования, и производное баклофена на ней, идентифицированное по характеристическим ионам. Время удерживания баклофена – 10.4 мин и его масс-спектр Случаи, подтверждающие необходимость пересмотра существующего алгоритма проведения тестирования Случай 3. Дицикломин (триган-Д) Хроматограмма мочи, снятая в режиме полного сканирования, после употребления таблеток «Триган Д». Время удерживания парацетамола – 10.2, дицикломина – 12.16. Масс-спектр дицикломина Случаи, подтверждающие необходимость пересмотра существующего алгоритма проведения тестирования Случай 4. Прегабалин + флупиртин Хроматограмма мочи, снятая в режиме полного сканирования, после употребления таблеток. Время удерживания прегабалина – 7.17, флупиртина – 16.93. Масс-спектры флупиртина и прегабалина Случаи, подтверждающие необходимость пересмотра существующего алгоритма проведения тестирования Случай 5. Карфентанил Хроматограмма исследуемой пробы (SCAN) по экстрагированным ионам, соответствующим карфентанилу. Вещества идентифицированы по временам удерживания и по масс-спектрам. Пик с временем удерживания 20.019 мин соответствует карфентанилу Случаи, подтверждающие необходимость пересмотра существующего алгоритма проведения тестирования Методика пробоподготовки и инструментального ГХ-МС анализа Аппаратура ГХ-МС. Agilent 7820/5975 с колонкой НР-5MS. Условия анализа: газ-носитель гелий, скорость потока через колонку 2 мл/мин. Программа: 500С(0.5мин) 990С /мин 1000С (1мин) 150С/мин 280 0С Объем вводимой пробы - 1,0 мл ЖЖЭ 3-4г хлорида натрия, карбонатного буфера и смесь растворителей (гептан:изопропанол:дихлорметан) , либо (изооктан:этилацетат), вносили в стеклянный флакон на 10 мл. 30 мкл внутреннего стандарта (дифениламин в ацетонитриле) и 3 мл исследуемой мочи, либо ее же после щелочного гидролиза. Экстрагировали в течение 10-15 мин. Центрифугировали в течение 5 минут при 4 000 об/мин. Органическую фазу отделяли, упаривали. К сухому остатку добавляли 500 мкл этилацетата, либо дериватизировали, и анализировали ТФЭ Кондиционирование колонки 3 мл метанола 3 мл фосфатного буфера (рН = 6,0) 5 мл отцентрифугированного образца мочи или волос после гидролиза Промывка колонки 3 мл ацетата натрия (рН = 4,5) 1,5 мл метанола Элюирование аналита 3 мл смеси дихлорметан / изопропанол / аммиак (78/20/2) Выпаривали пробу. К сухому остатку добавляли 500 мкл этилацетата, либо дериватизировали и анализировали. Сравнение биобъектов Двойная экстракция волос для ГХ-МС анализа Проба волос или ногтей 50 мкл Отмывка от внешних загрязнений Взвешивание и измельчение + 1,5 мл метанола в ультразвуковой бане Экспозиция 6-7 часов Экстракт переносится в виалу, упаривается при 40оС, реэкстрагируется в 100 мкл этилацетата Осадок + 2 мл 2,5н раствора NaOH при 40оС в течение 12 часов ТФЭ Экстракт переносится в виалу, упаривается при 40оС, реэкстрагируется в 100 мкл этилацетата 1 мкл экстракта закалываем в хроматограф Опыт внедрения методик обнаружения новых наркотических и психотропных веществ в биологических жидкостях и образцах волос методами ГХ-МС в Псковской области СПАСИБО ЗА ВНИМАНИЕ !