Проведение поведенческих экспериментов в условиях SPF вивария Заведующий виварноэксперименальным комплексом НИИ Митоинженерии МГУ, к.б.н. Ловать М.Л. Исследование поведения животных • Доклиника: специфическая активность скрининг • Фундаментальные исследования: Этология Нейробиология Фармакология Специфика постановки поведенческих опытов •Плотный контакт с животными •Большая продолжительность работ •Большое количество животных •Громоздкое оборудование, непосредственно контактирующее с животными •Риск инфицирования исследователя и животного •Физическая, психическая нагрузка Решающее значение следования принципам GLP: •Необходимость поддерживать одинаковые условия в течение всего эксперимента (требования к помещению) •Жесткие временные рамки опыта (протокол) •Высокая субъективность измерений (СОПы) •Невозможность повторения опыта (отклонения) •Сложность интерпретации поведения (комиссия по биоэтике) Проблемы в содержании животных Проблемы микроклимата: • Колебания температуры, влажности • Плохая вентиляция • Неравномерное освещение • Отсутствие нормального суточного ритма у животных ID 001 Customer ID 11. RAT ASSESSMENT PLUS ELISA SEND ELISA PVM ELISA SDAV/RCV ELISA KRV ELISA H-1 ELISA GD-7 ELISA RE0-3 ELISA MPUL ELISA LCMV - 002 12. 003 13. - - - + - + - ELISA MAD 1+2 - - - ELISA HANT ELISA CARB ELISA CPIL ELISA ECUN ELISA NS-1 ELISA NS-1 IFA SDAV/RCV - - + - - - + IFA SDAV/RCV ++ IFA KRV IFA KRV IFA MPUL IFA MPUL IFA CPIL IFA CPIL ++ + Проблемы ухода за животными: • отсутствие воды, • некачественный корм и нестандартная вода, • пылящая подстилка, • запах аммиака • нерегулярное посещение животных • заболевания животных (диарея, клещ, гепатит мышей и крыс и т.п.) ++ IFA RPV IFA RPV +++ Искажение результатов научных исследований Что для нас означают стандарты GLP: (Good Laboratory Practice -надлежащая лабораторная практика) • Система норм, правил и указаний, для получения достоверного и воспроизводимого результата лабораторных исследований. • Животное = биологическая модель для получения таких результатов • Главная задача GLP - обеспечить возможность полного прослеживания и восстановления всего хода исследования по бумагам. Оптимально работать на животных SPF категории * SPF (Specific Pathogen Free) – категория животных с контролируемой микрофлорой Конвенциональные животные – здоровые животные, содержащиеся по стандартам GLP, у которых микрофлора не мониторируется (а не с помойки) ПОДДЕРЖАНИЕ SPF-СТАТУСА ВОЗМОЖНО ПРИ ИСПОЛЬЗОВАНИИ: •Гнотоизолятора •Системы индивидуально вентилируемых камер (IVC) •Вивария барьерного типа Требования к блоку исследования поведения: 1. Достаточно большое пространство для проведения эксперимента 2. Защита от заражения в процессе тестирования, транспортировки, манипуляций 3. Сведение различий в условиях содержания и опыта к минимуму (минимальность адаптации животных) 4. Возможность проведения нескольких тестов одновременно (в том числе в хронических экспериментах) 5. Возможность работы нескольких экспериментаторов одновременно Еженедельная дезинфекция оборудования, помещений Мы: виварно-экспериментальный комплекс НИИ Митоинженерии МГУ - барьерного типа Три технологически разделенных блока, общей площадью 610 кв.м. 1.Административнобытовой комплекс 2.Технологический сектор 3.SPF-зона В виварии контролируются условия содержания животных : избыточное давление в SPF зоне- 7-15 Па воздухообмен – 10-12 объемов/час температура – 22+2С влажность - 30-70% световой день - 12 часов Резервирование, мониторинг всех процессов: системаGLP-SCADA (параметры микроклимата, перемещения, доступ) вода воздух эл-во материалы люди Особенности оснащения помещений для поведенческих экспериментов • Зонирование лаборатории SPF • Соседство с технологической зоной (СО2 наркоз, компьютер, установки) • Возможность дезинфекции помещений и крупного оборудования (УФ, Н2О2) Контроль качества дезинфекции: Экспресс АТФ- тест Микробиологический мониторинг Heath monitoring сентинел ! Большие затраты ! Разборный модуль для исследования поведения - Оснащенность «под ключ» -Быстрая сборка в любом помещении -Простота монтажа -Легкость обслуживания -Стандартность условий - Взаимозаменяемость установок (например,хирургияповедение-эмбриология) -Относительно невысокая цена ООО «НПК Открытая Наука» ! Для поддержания SPFстатуса должна комплектоваться системой обеспечения и дезинфекции «SPF –капсула» площадью 18 м2 (пример) 6 5 фильтр 7 приток Сопутствующее 1.- поведенческие установки оснащение: 2. стол операторов 1. Мойка большая 3. зона передержки и манипуляции с животными (ламинар) 2. Стиральная машина 4. Склад «чистый» 3. Стерилизатор 5. Стол, мойка и стеллажи для «грязных» предметов и манипуляций 4. Склады 6. Банкетка (переобувание) и вешалка (внутренняя одежда) 5. Архивы 7. Душ 6. офис Требования к оборудованию • • • • Компактное, разборное (складное) Не содержит хрупких, мелких, пористых деталей, полостей (легко моется), Не боится стерилизации (едких рров или температуры), Соответствует стандартным методикам эксперимента Спасибо за внимание!