ID E 4000 ВЭБ ранний антиген IgG Набор реагентов для ИФА

ID E 4000 ВЭБ ранний антиген IgG
Набор реагентов для ИФА для определения ВЭБ ранний антиген IgG антител в сыворотке
человека.
Только для in vitro диагностики.
Хранение и стабильность:
Все реагенты необходимо хранить при 2 – 8˚С. Не используйте компоненты набора по истечении
срока годности, указанного на этикетке. Не смешивайте компоненты из наборов разных серий в
одном исследовании.
Состав набора:
Концентрат
промывочного
буфера
Субстрат
Раствор для
разведения
1 х 100 мл
Концентрат; разведите содержимое
флакона до конечного объёма 1000 мл;
Хранение: до 6 мес. при 2-8˚С
1 х 12 мл
1 х 100 мл
STOP-SOLN
Стоп-раствор
1 х 15 мл
ID E-4031
EEG
Микропланшет
1 х 96
лунок
ID E-4040
CONJUGATE
Конъюгат
1 х 12 мл
ID E-4001
CONTROL -
1 х 2 мл
ID E-4002
ID E-4005
CONTROL ±
CONTROL +
Отрицательный
контроль
Cut-off контроль
Положительный
контроль
Готов к использованию; содержит ТМБ
Готов к использованию; содержит
белковый раствор с 0,09% азида натрия в
качестве консерванта
Готов к использованию, содержит 0,25 М
серной кислоты
12 стрипов, по 8 лунок, разборный, с
иммобилизованным ранним антигеном
ВЭБ
Готов к использованию. Моноклональные
антитела к IgG человека меченные
пероксидазой, в растворе фосфатного
буфера с 0.02% Proclin
Готов к использованию
1 х 2 мл
1 х 2 мл
Готов к использованию
Готов к использованию
ID E-0030
WASHCONC 10×
ID E-0055
ID E-0060
SUBSTRATE
ID E-0080
DILUENT
НЕОБХОДИМОЕ ОБОРУДОВАНИЕ И МАТЕРИАЛЫ, НЕ ВХОДЯЩИЕ В СОСТАВ НАБОРА
- ИФА анализатор, измеряющий ОП на длине волны 450 нм.
- Дистиллированная или деионизированная вода
- Откалиброванные прецизионные микропипетки на 10 мкл, 100 мкл и 1 мл
- Полуавтоматические пипетки на 100 мкл
- Вошер
- Абсорбирующий материал
- Водяная баня с контролируемой температурой (37˚С) или аналогичное устройство (инкубатор)
Хранение и стабильность образцов:
Для анализа должна использоваться сыворотка. При венепункции должны быть соблюдены
обычные меры предосторожности. Образцы могут храниться при температуре 2-8 ° С в течение 2
дней. При более длительном периоде хранения – при - 20° С. Не используйте гемолизированные
или липемические образцы. Избегайте повторных циклов замораживания/оттаивания образцов.
ПОДГОТОВКА К АНАЛИЗУ
Глубокое понимание этого раздела необходимое для успешного использования продукта.
Надежные результаты будут получены только при точном следовании инструкции.
- Перед использованием приведите все реагенты и образцы до комнатной температуры (~ 25 ° C)
и тщательно аккуратно перемешайте.
- Не смешивайте компоненты из разных наборов и партий в одном исследовании
- Не используйте компоненты с истекшим сроком годности, указанного на этикетке
- Неполное промывание отрицательно сказывается на точности результата анализа
- Для минимизации потенциальных ошибок анализа в связи с изменением времени инкубации
субстрата, следует позаботиться, чтобы стоп-раствор в лунки добавлялся в той же
последовательности и с той скоростью, что и раствор ТМБ.
- Избегайте бактериального загрязнения реагентов, промывочного буфера и раствора для
разведения. Избегайте загрязнения раствора ТМВ. Используйте чистые одноразовые наконечники
пипетки для каждого реагента. Избегайте пипетки с металлическими частями.
- Контейнеры и полуавтоматические наконечники для пипеток, используемые для конъюгата и
ТМБ могут быть повторно использованы при условии, что они тщательно промыты
деионизированной / дистиллированной водой и высушены до и после каждого использования.
- Ферменты, используемые в качестве метки, инактивируются кислородом и очень чувствительны
к микробной контаминации, азиду натрия, хлорноватистой кислоте и ароматическим
хлоруглеводородам, которые часто встречаются в лабораторном оборудовании и воде.
- Используйте воду высокого качества.
- Избегайте воздействия на реагенты избыточного тепла или солнечного света во время хранения
и инкубации.
Подготовка реагентов
Промывочный раствор
Развести 100 мл промывочного концентрата дистиллированной водой до конечного объема 1000
мл.
Хранение: до 6 месяцев при 2-8 ° C.
Микротитровальные стрипы
Извлечь из упаковки стрипы, которые будут использоваться, и поместить неиспользованные в
фольгированный пакет с силикагелем, удалить воздух и запечатать.
Процедура анализа
Прогреть все образцы и реагенты до комнатной температуры (20-25 °С). Образцы сыворотки и
калибраторы исследуют в дублях.
1. Разбавьте образцы сыворотки 1:101 (10 мкл сыворотки в 1 мл раствора для разведения)
2. Добавьте 100 мкл каждого разведенного образца сыворотки и готового к использованию
калибратора в соответствующие лунки. Оставьте одну лунку пустой, будет добавляться
100 мкл ТМБ субстрата на этапе инкубации субстрата.
3. Инкубируйте в течение 45 минут при 37 °С
Удалите жидкость и промойте каждую лунку четыре (4) раза в течение 30 секунд
промывочным раствором при помощи автоматического микропланшетного вошера или
вручную с помощью дозатора. Переверните планшет и прижмите к абсорбирующей
бумаге до сухого пятна. Рекомендуется использование автоматического
микропланшетного вошера. Если микропланшетный вошер недоступен, то (а) полностью
удалите жидкость из каждой лунки, (б) добавьте 300 мкл промывочного раствора в
каждую лунку, и (в) повторить этапы (а) и (б) в четыре раза.
4. Добавьте по 100 мкл конъюгата в каждую лунку.
5. Инкубируйте в течение 45 минут при 37 °С.
Удалите жидкость и промойте каждую лунку четыре (4) раза в течение 30 секунд
промывочным раствором при помощи автоматического микропланшетного вошера или
вручную с помощью дозатора. Переверните планшет и прижмите к абсорбирующей
бумаге до сухого пятна.
6. Добавить 100 мкл субстрата в каждую лунку с использованием дозатора
7. Инкубировать 15 минут при комнатной температуре (20-25 ° С). Избегайте воздействия
прямых солнечных лучей.
8. Добавить 100 мкл Стоп-раствора в каждую лунку с использованием дозатора.
9. Определить оптическую плотность раствора в лунках в течение 30 минут при 450 нм.
Если доступно, то определите также ОП при 600 или 620 нм.
Расчет результатов:
Определите среднюю ОП для каждого контроля и неизвестных.
Качественный результат.
Если ОП образца выше, чем Cut-Off, то анализ на наличии специфического IgG положительный.
Рассчитайте соотношение между средним значением ОП образца и Cut-Off.
Образец считают:
Положительным: если коэффициент > 1,1.
Сомнительным: если + / - 10% Cut-Off.
Отрицательным: если коэффициент < 0,9.
Если результат сомнительный, то повторите анализ. Если он остается сомнительным, то
необходимо исследовать новые образцы сыворотки.
Количественный результат:
Результат может быть выражен в Единицах:
ПО пациента (среднее) х 10 = Единицы.
ОП Cut off (среднее значение)
Пример: 1.376 x 10 = 36 Ед.
0.38
Ограничения:
- Сыворотки , полученные при ранней стадии инфекции, когда присутствуют только IgM антитела,
могут быть отрицательными.
- Оценивайте результат анализа в сочетании с другими доступными клиническими и
диагностическими данными
- Повторное замораживание и оттаивание реагентов и образцов.
- Не используйте макроскопически гемолизированные, желтушные или липемические образцы.
- Не используйте инактивированную теплом сыворотку.
- Ограничение у пациентов с иммунодефицитами и новорожденных
Контроль качества:
Вычтите значение пустой лунки из всех остальных определенных значений. Значение ОП контроля
Cut-Off должно быть не менее 0,2. Значение ОП Положительного контроля должно быть не менее
чем в 1,5 раза больше, чем Cut-Off контроля.