Buffered Charcoal Yeast Extract Agar Base

Buffered Charcoal Yeast Extract Agar Base / Modified
Buffered Charcoal Agar Base
Основа селективного агара для легионелл / Основа
селективного агара для легионелл модифицированная
M813/M892
Эта среда после внесения соответствующих добавок используется для выделения и
культивирования видов Legionella.
Состав**:
Ингредиенты
M813
грамм/литр
M892
грамм/литр
–
10,00
2,00
10,00
1,00
17,00
10,00
–
2,00
10,00
1,00
17,00
Протеозопептон
Дрожжевой экстракт
Уголь активированный
Буфер ACES
Калия -кетоглютарат
Агар-агар
Конечное значение рН (при 25ºС) 6,9 ± 0,2
** Состав выверен и доведен до соответствия необходимым параметрам
Приготовление:
Размешать 20,0 г порошка в 500 мл дистиллированной воды. Подогреть до кипения для
полного растворения частиц. Стерилизовать автоклавированием при 1,1 атм (121ºС) в
течение 15 мин. Остудить до 50ºС, асептично добавить растворенные в стерильной воде
специальные добавки для легионелл (FD041 и FD040). Тщательно перемешать и при
постоянном помешивании разлить в стерильные чашки Петри, следя за тем, чтобы
частицы угля распределялись равномерно. При необходимости повысить селективность в
расплавленную среду можно внести также селективные добавки для легионелл (FD017,
FD037, FD038).
Принцип и оценка результата:
Первоначально Feeley и соавт. (1) разработали агар FD, который затем был
модифицирован Edelstein (2) для селективного культивирования и оптимизации роста
легионелл, нуждающихся в специальных средах. Легионеллы не растут на кровяном агаре
с бараньей кровью и не утилизируют (окислением или ферментацией) углеводы на
общепринятых средах. В качестве основного источника энергии они используют
аминокислоты, а один вид имеет абсолютную потребность в L-цистеине. Эта
аминокислота, как и пирофосфат железа, способствуют росту легионелл. В качестве
детоксиканта среда содержит активированный уголь. Дрожжевой экстракт является
богатым источником витаминов, азота и углерода. Буфер ACES обеспечивает
поддержание оптимальных значений рН. Цистеин, пирофосфат железа и кетоглютарат
стимулируют рост легионелл. Для подавления роста сопутствующих микроорганизмов и
придания селективных свойств среде в нее можно вносить антибиотики. Обычно для этой
цели применяют следующие добавки: Legionella Selective Supplement II (CCVC),
содержащую цефалотин, колистин, ванкомицин и циклогексимид (3) или Legionella
Selective Supplement IV (MWY), содержащую глицин, полимиксин В, анизомицин,
ванкомицин, бромтимоловый синий и бромкрезоловый пурпурный (4).
Следует отметить, что работа с культурами легионелл должна проводиться в защитных
масках, перчатках, с использованием ламинарного бокса и другими предосторожностями.
Контроль качества:
Внешний вид порошка:
Гомогенный сыпучий черный порошок.
Плотность готовой среды:
Образуется среда, соответствующая по плотности 1,5%-ному агаровому гелю.
Цвет и прозрачность готовой среды:
Готовая среда имеет серо-черную окраску, опалесцирует, если в чашках Петри
формируется гель.
Кислотность среды:
При 25ºС водные растворы М813 или М892 (4,0% вес/об) имеют рН 6,9 ± 0,2.
Культуральные свойства:
Ростовые характеристики референс-штаммов через 3-4 дня при 35ºС в атмосфере 90%ной влажности.
Штаммы микроорганизмов (АТСС)
Рост*
Цвет колоний
Legionella pneumophila (33153)
Обильный
Бело- или голубовато-серые
Legionella dumoffii (33343)
Обильный
Слегка голубовато-серые
Escherichia coli (25922)
Слабый или отсутствует
–
–
Staphylococcus epidermidis (12228) Слабый или отсутствует
Примечание: * в присутствии селективной добавки с антибиотиками
Ссылки:
Условия и сроки хранения:
Порошок хранить при температуре ниже +25ºС. Использовать до даты, указанной на
этикетке. Готовую среду хранить при температуре +2…8ºС.