Методическое пособие Антибиотики

Государственное автономное образовательное учреждение
среднего профессионального образования
ЭНГЕЛЬССКИЙ МЕДИЦИНСКИЙ КОЛЛЕДЖ
КОМПЛЕКСНОЕ МЕТОДИЧЕСКОЕ ОБЕСПЕЧЕНИЕ
ХИМИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЕ
ПРЕПАРАТЫ.
АНТИБИОТИКИ
Специальность: 060604 «Лабораторная диагностика»
Дисциплина: «Теория и практика лабораторных
микробиологических исследований»
Рассмотрено
На заседании ЦМК
«Лабораторная диагностика»
Протокол №_____
от «___» _________2013 г.
Председатель ЦМК
________Корягина С.А.
Составлена преподавателем
дисциплины: «Теория и практика
лабораторных микробиологических
исследований»
Корягиной С.А.
Энгельс 2013 г.
Пояснительная записка
Антибиотики (от anti — против, bios — жизнь) — вещества природного
происхождения, обладающие выраженной биологической активностью против
микроорганизмов, могут быть получены из микробов, растений, животных тканей и
методом химического синтеза. Антибиотиками называются продукты метаболизма
любых организмов, способных избирательно подавлять жизнедеятельность
микроорганизмов и убивать их. Антибиотики могут оказывать бактериостатическое
действие, т.е. задерживать, приостанавливать размножение бактерий, бактерицидное
— вызывать гибель микробной клетки и бактериолитическое — растворять
бактерии. Характер действия зависит как от антибиотика, так и от его концентрации.
Антибиотикотерапия — один из разделов химиотерапии, так как с того момента,
когда антибиотик получают в виде определенного, часто химически чистого,
вещества, его следует рассматривать как химиотерапевтический препарат.
Открытие в 1928 г. А. Флемингом пенициллина, выделяемого зеленой плесенью,
губительно действующего на многие микробы, является началом эры
антибиотикотерапии. После открытия пенициллина стали появляться сообщения о
выделении новых антибиотиков. Некоторые из них в Дальнейшем стали широко
применяться, другие не получили практического использования.
Применяющиеся в настоящее время антибиотики классифицируют по источникам
их выделения, способам получения, спектру и молекулярному механизму действия,
химической структуре и клиническому использованию.
2
Методы изучения микробного антагонизма и определения чувствительности
патогенных бактерий к антибиотикам
Явления антагонизма в мире микробов распространены очень широко.
Антагонистические взаимоотношения проявляются в невозможности совместного
существования некоторых микробных видов вследствие того, что одни из них
препятствуют размножению других, задерживая или вызывая их гибель. Так,
например, установлено, что представители нормальной микрофлоры человеческого
тела проявляют антагонизм в отношении многих патогенных и гнилостных
бактерий.
Изучение явлений микробного антагонизма привело к открытию специфических
антибактериальных веществ, продуцируемых бактериями и грибами в окружающую
среду. Они получили название антибиотиков.
В настоящее время существует много антибиотиков, выделенных из бактерий,
грибов и актиномицетов. Однако практическое применение в качестве лечебных
препаратов нашли немногие из них.
Каждый антибиотик действует на определенные чувствительные к нему виды
бактерий.
Рациональная антибиотикотерапия инфекционных заболеваний основывается на
результатах бактериологической диагностики заболевания с выделением и
идентификацией возбудителя. При этом очень важно располагать сведениями о
чувствительности возбудителя болезни к антибактериальному препарату,
избранному для лечения.
В клинической практике чувствительными к антибиотикам считаются те
микроорганизмы, на которые испытуемый антибиотик в концентрации,
достигаемый в очаге инфекций оказывает бактериологическое или бактерицидное
действие. При лабораторном испытании мерой чувствительности микроорганизмов
к антибиотикам является минимальная концентрация препарата, подавляющая рост
возбудителя заболевания при стандартных условиях постановки опыта.
Деление микроорганизмов на устойчивые и чувствительные осуществляется на
основании соотношения минимальной, ингибирующей рост микроорганизмов,
концентрации препарата (определенной в лабораторных условиях) и концентрации
этого же препарата, создаваемой в очаге инфекции при введении терапевтических
доз. При соотношении:
МИК (минимальная ингибирующая концентрация антибиотиков)
К (концентрация препарата в очаге инфекции)
Можно говорить о чувствительности возбудителя к исследуемому антибиотику.
По степени чувствительности к антибиотикам патогенные микроорганизмы
подразделяют на 4 группы:
Чувствительные – обычные терапевтические дозы антибиотиков оказываются
достаточными для достижения лечебного эффекта при общих заболеваниях;
Среднечувствительные – лечебный эффект препарата при общих заболеваниях
достигается только в результате назначения повышенных доз антибиотиков;
Умеренно устойчивые – лечебный эффект достигается только при локализации
инфекционного очага в месте, где происходит концентрация антибиотика, или если
антибиотик может быть введен непосредственно в очаг инфекции;
Устойчивые – лечебный эффект при назначении антибиотика отсутствует.
3
Определение чувствительности возбудителя имеет особенно большое значение при
выборе бактериальных препаратов или для лечения больных с хроническими,
затяжными, вялыми формами инфекции, которые сопровождаются угнетением
иммунологической реактивности микроорганизма.
Изучение чувствительности возбудителя к антибиотикам играет не менее важную
роль в тех случаях, когда для лечения больных используются препараты, в
отношении которых легко формируются устойчивые формы микроорганизмов
(стрептомицин, тетрациклин, рифампицин).
Культуры микробов для исследования на чувствительность следует выделять из
организма больных до начала лечения, так как под воздействием назначаемых
антибактериальных препаратов рост возбудителей заболевания может быть
полностью угнетен.
Материал для посева рекомендуется брать из очага инфекции непосредственно, а в
тех случаях, когда это не выполнимо, из соответствующего отделяемого (моча при
пиелонефрите, мокрота при воспалительных процессах в легких и т.д.).
При обнаружении в патологическом материале нескольких видов условно
патогенных микроорганизмов необходимо установить, какое из них является
ведущим в происхождении текущего инфекционного процесса. В решении этого
вопроса большое вспомогательное значение имеют методы количественного учета
микроорганизмов, так как преобладание в патологическом материале какого-либо
вида микробов свидетельствует, как правило, о причастности его к этиологии
патологического процесса.
Если выяснение истинного возбудителя болезни не удается или патологически
процесс вызван микробной ассоциацией, чувствительность к антибиотикам
необходимо исследовать у всех видов микроорганизмов (входящих в состав
ассоциации), выделенных в чистой культуре.
Чувствительность микробов к антибиотикам определяется диско-диффузионным
методом с применением стандартных бумажных дисков или методом разведения в
жидких и плотных питательных средах.
4
Содержание
стр
1. Ожидаемый результат………………………………………………………
2. Схема интегративных связей…………………………………………….
3. Графологическая структура темы……………………………………….
4. Методическая разработка для преподавателя……………….
4.1. Технологическая карта лекционного занятия………………………..
4.2. Текст лекции……………………………………………………………..
5. Методическая разработка для преподавателя к практическому занятию по теме:
«Определение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам дискодиффузионным методом»………………………………………………………
5.1. Оснащение занятия…………………………………………………………..
5.2. Вопросы для определения исходного уровня знаний студентов…………
5.3. Технологическая карта практического занятия…………………………
6. Методическая разработка для студентов к практическому занятию по теме:
«Определение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам дискодиффузионным методом»………………………………………………………
6.1. Оснащение занятия……………………………………………………….
6.2. Перечень практических навыков………………………………………
6.3. Учебная карта работы студента на занятии…………………………..
7. Методическая разработка для преподавателя к практическому занятию по теме:
«Определение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам методом
серийных разведений……………………………………………………..
7.1. Оснащение занятия…………………………………………………………..
7.2. Вопросы для определения исходного уровня знаний студентов…………
7.3. Технологическая карта практического занятия…………………………
7.4. Технологическая карта практического занятия…………………………
8. Методическая разработка для студентов к практическому занятию по теме:
«Определение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам методом
серийных разведений»……………………………………………………………………
8.1. Оснащение занятия…………………………………………………………..
8.2. Перечень практических навыков………………………………………
8.3. Учебная карта работы студента на занятии…………………………..
9. Заключение……………………………………………………………….
10. Список используемых источников……………………………………
11. Тестовый контроль…………….…………………………………………..
12. Графический диктант………………………………………………………….
13. Карточки с заданием…………………………………………………………….
14. Кроссворд по теме: «Химиотерапевтические препараты. Антибиотики»…………
15. Эталоны ответов……………………………………………………………..
5
1. Ожидаемый результат.
Студент должен знать:
1. Значение антибиотикочувствительности и антибиоткоустойчивости бактерий в
микробиологической диагностике.
2. Определение чувствительность микроорганизмов к антибиотикам методом
серийных разведений.
3. Механизм возникновения устойчивости бактерий к антибиотикам.
Студент должен уметь:
1. Определять чувствительность микроорганизмов к антибиотикам дискодиффузионным методом.
2. Определять чувствительность микроорганизмов к антибиотикам метом серийных
разведений.
3. Проводить учет результатов чувствительности микроорганизмов к антибиотикам
диско-диффузионным методом.
4. Уметь определять минимальную ингибирующую концентрацию антибиотиков
(МИК).
Учебные цели:
1. Закрепить теоретические знания по классификации антибиотиков и их
биологическому действию.
2. Научить учащихся определять чувствительность микроорганизмов к
антибиотикам методами дисков и серийным разведением.
3. Уметь правильно рассчитать рабочую дозу антибиотика при определении
минимальной ингибирующей концентрации антибиотика (МИК).
Воспитательные цели:
1. Довести до сознания учащихся важность добросовестного отношения к работе.
2. Соблюдение дез. режима при работе с живой культурой.
3. Довести до каждого учащегося понимание важности определения
чувствительности микроорганизмов к антибиотикам, определения МИК, так как на
основании выданного ответа делается правильный выбор терапевтической дозы
антибиотика, чтобы наступил терапевтический эффект.
Мотивация: Определение чувствительности к антибиотикам необходимо в
следующих случаях:
а) следует помнить, что антибиотики обладают избирательным действием в
отношении определенных групп микроорганизмов. Для каждого антибиотика
характерен спектр действия;
б) некоторые микроорганизмы могут быть резистентными, поэтому все культуры,
выделенные от больных, проверяются на чувствительность к антибиотикам;
в) учитывая чувствительность и МИК, антибиотики вводят в организм в
терапевтической концентрации необходимой для подавления роста и размножения
микроорганизмов;
г) при культивировании некоторых микроорганизмов необходимо использовать
питательные среды с добавлением антибиотиков в определенной концентрации для
подавления сопутствующей флоры;
д) при определении концентрации антибиотика в биологических жидкостях при
лечении, для поддержания этой концентрации в течении всего курса лечения до
ликвидации инфекционного процесса.
6
2. Схема интегративных связей.
ИСТОКИ
ВЫХОД
Техника лабораторных
работ
Фармакология
Частная микробиология
Общая микробиология
Генетика и генная
инженерия
7
3. Графологические структуры.
«ХИМИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЕ ПРЕПАРАТЫ. АНТИБИОТИКИ»
История открытия
соли тяжелых
металлов
антибиоз
сульфаниламидные препараты
антибиотики
Действие антибиотиков
бактериостатическое
бактерицидное
бактериолитическое
Классификация антибиотиков
по
источникам
выделения
по
способам
получения
по спектру и
молекулярному
действию
по
химической
структуре
клиническому
использованию
Критерии терапевтического эффекта
выбор
антибиотика и
спектр
действия
терапевтическая
концентрация
комбинация
антибиотиков с
вакцинами и
сыворотками
определение
чувствительности к
антибиотикам
Осложнения
аллергические реакции
влияние на плод
дисбактериозы
органотропные
реакции
кандидозы
нарушение
формирования
иммунитета
реакция обострения
Устойчивость микроорганизмов к антибиотикам
формирование
ферментов
селекция резизстентных
микроорганизмов
8
возникновение
атипичных форм. Трудность
идентификации
4. Методическая разработка для преподавателя
4.1. Технологическая карта лекционного занятия
Название: ПМ.04. Проведение лабораторных микробиологических исследований
Раздел МДК.04.01. Теория и практика лабораторных микробиологических
исследований
Специальность, группа: 060604 «Лабораторная диагностика»
Тема лекции: Учение о химиотерапии. Антибиотики.
Учебные цели лекции:
знать: историю открытия химиотерапевтических препаратов, антибиотиков,
группы химиотерапевтических средств, классификацию антибиотиков, механизм
действия антибиотиков, осложнения.
ОК:
ОК 2. Организовывать собственную деятельность, выбирать типовые методы и
способы выполнения профессиональных задач, оценивать их эффективность и
качество.
ОК 3. Принимать решения в стандартных и нестандартных ситуациях и нести за них
ответственность.
ОК 4. Осуществлять поиск и использование информации, необходимой для
эффективного выполнения профессиональных задач, профессионального и
личностного развития.
ОК 5. Использовать информационно-коммуникационные технологии в
профессиональной деятельности.
Тип лекции: информационная, проблемная, эвристическая, бинарная
(нужное подчеркнуть)
Уровень освоения: I уровень освоения– ознакомительным.
Материальное – техническое обеспечение: изобразительные: плакаты, схемы,
рисунки м/м система.
Учебно-методическое оснащение: рабочая программа, технологическая карта
лекционного занятия, конспект лекции.
Этапы и хронология лекции (90 минут):
Этапы занятия
1.Организационный
момент
Время,
Содержание занятия
мин.
Приветствие,
проверка
присутствующих,
3
2. Формулировка темы,
ее мотивация
5
3. Изложение основных
вопросов лекции
75
внешнего вида студентов, проверка готовности
студентов к лекции, заполнение журнала.
Рассказывает об истории открытия
химиотерапевтических препаратов,
антибиотиков, подчёркивается их использования
при лечении инфекционных заболеваний, а так же
определение чувствительности микроорганизмов
к антибиотикам.
1. История открытия антибиотиков.
2. Различные спектры действия антибиотиков.
3. Классификация антибиотиков.
4. Способы получения антибиотиков.
5. Осложнения после антибиотикотерапии.
6. Устойчивость микроорганизмов к
9
4. Подведение итогов
лекции
4
5. Задание на дом
3
антибиотикам.
7. Методы определения чувствительности к
антибиотикам.
Необходимо обратить внимание, что при выборе
антибиотиков обязательно определяют
чувствительность к антибиотикам. Учитывается
концентрация средства.
Ф.К. Черкес «Микробиология» стр.131-145.
Список использованной литературы и Интернет-ресурсов в подготовке к
занятию:
1. МедУнивер - медицинский информационный портал для интересующихся. Общая
микробиология. meduniver.com
2. Медицинское видео. Книги по медицине. Медицинский фото атлас.
Общая микробиология. meduniver.com
3. Черкес Ф.Г., Богоявленская Л.Б., Бельская Н.А. Микробиология / Под ред. Черкес
Ф.К. – М.: Медицина, 2009. – 512 с., ил.
4. «Медицинская микробиология в графах». Минск «Высшая школа» 1986.
5. Качамасова З.Н., Ефремова С.А., Набоков Ю.С. «Микробиология» -М., Медицина
1984.
6 Сланго Нейчев «Клиническая микробиология» София 1977.
10
4.2. Текст лекции
Тема: Учение о химиотерапии. Антибиотики.
Под химиотерапией понимают лечение лиц, страдающих инфекционными
болезнями, с помощью химических веществ, действующих избирательно на
возбудителя в организме человека, при отсутствии вредного сияния на клетки и
органы больного. Специфически действующие на патогенные микроорганизмы
лекарственные вещества, были найдены случайно задолго до бактериологической
эры. Так, хинную кору как лечебное средство против малярии использовали
индейцы Перу, ртуть, как антисифилитическое средство - арабы, корень ипекакуаны
как препарат против амебной дизентерии - древние жители Бразилии.
Первые химиотерапевтические препараты были синтезированы Эрлихом в 1909
г. Это были соединения мышьяка - сальварсан, новарсенол, их использовали при
лечении сифилиса, возвратного тифа, сибирской язвы. Затем получили применение
соединения висмута, ртути, сурьмы для лечения инфекции, вызываемых
спирохетами и простейшими. Новым этапом в развитии химиотерапии является
синтез сульфаниламидных препаратов.
Химиотерапевтические препараты по своей структуре подобны витаминам,
обязательным для роста микробов. На этом и основывается их
химиотерапевтическое действие. Необходимо, чтобы микробная клетка могла
усваивать вместо нужного ей витамина похожее на него вещество, которое способно
нарушать синтез в клетке нормального фермента.
Химиотерапевтические препараты действуют на ферменты клетки по разному.
1. Если действует препарат на фермент, без которого клетка, не может
сосуществовать, то наблюдается бактериоцидный эффект.
2. Если фермент в результате действия препарата угнетает развитие клетки, то
наблюдается бактериостатический эффект, то есть бактериостатическое действие.
Химиотерапевтические препараты применяются для лечения (химиотерапия),
профилактики инфекционных болезней (химиопрофилактика), или оздоровления
микробоносителей (химиосанация).
По способу и источнику получения химиотерапевтические препараты
подразделяются на природные и синтетические (полусинтетические), органические
и неорганические.
Висмут, сурьма, ртуть (соли тяжелых металлов) вызывают денатурацию белков.
Соединена мышьяка (новарсенол, осарсол, марсенол) - действуют на ферменты
клеток. Красители акридинового ряда - подавляют патогенные кокки, нарушают
репликацию ДНК. Изонизиды (фтивазид, изониазит, сульфоны) - угнетают
туберкулезную палочку, ингибируя синтез НК.
Сульфаниламиды (стрептоцид, этазол, фталазол) – блокируют синтез фолиевой
кислоты, ингибируя патогенные кокки и энтеробактерии.
Изучение химиотерапевтических препаратов способствовало тому, что за
короткий срок в практику были внедрены новые химиопрепараты биологического
происхождения – антибиотики.
Антибиотики (анти – против; биос – жизнь) – вещества природного
происхождения, обладающие выраженной биологической активностью против
микроорганизмов.
11
Они могут быть получены из микробов, растений, животных тканей, а также
методом химического синтеза.
Антибиотики называются продукты метаболизма любых организмов,
способных избирательно подавлять жизнедеятельность микроорганизмов и убивать
их.
Антибиотики могут оказывать:
1. Бактериостатическое действие, то есть задерживать, приостанавливать
размножение бактерий;
2. Бактерицидное действие – вызывать гибель микробной клетки;
3. Бактериолитическое действие – растворять (лизировать) бактерии.
Характер действия зависит – как от концентрации антибиотика, так и от его
самого (природы).
В 1928 году А.Флеминг открыл пенициллин, из зеленой плесени, что явилось
началом эры антибиотикотерапии. Но в чистом виде пенициллин бал получен З.В,
Ермольевой из другого вида плесени и применение его в годы Великой
Отечественной войны сыграло большую роль.
Многие микроорганизмы способны вырабатывать антибиотики, что является
одним из важнейшим проявлений микробного антогонизма. Микробы обладающие
антогонистическими свойствами широко распространенны в природе: в воде, почве,
нормальной флоре человека и животных (особенно среди грибов).
Первый антибиотик микробного происхождения получил Эммерих из
синегнойной палочки – пиоцианазу – подавляет развитие возбудителей раневых
инфекций сибирской язвы, дифтерии.
КЛАССИФИКАЦИЯ АНТИБИОТИКОВ
1. По источникам их выделения.
2. По способам получения.
3. По спектру и молекулярному механизму действия.
4. По химической структуре.
5. По клиническому использованию.
1. По источникам выделения можно разделить на следующие группы:
а) антибиотики, выделенные из грибов (пенициллин);
б) антибиотики, полученные из актиномицетов.
Антибиотики актиномицетного происхождения:
1. Аминогликозиды – неомицин, канамицин, гентамицин, стрептомицин.
2. Макролизы – эритромицин, олеондомицин, линпомицин.
3. Тетрациклины – тетрациклин, окситетрацин. хлортетрацин.
4. Полиены – нистатин, леворин, амфотерин, трихомицин.
5. Рифампицины.
6. Противоопухолевые – актиномицины, рибомицин, оливомицин, брунеомицин,
олеомицин, дауномицин.
12
В 1943 году американский ученый А. Ваксман открыл стрептомицин, что дало
начало новой эпохи в борьбе с туберкулезом. Из актиномицет получены такие
препараты как биомицин, канамицин, нистатин и ряд других.
в) антибиотики, выделенные из бактерий.
Практическое значение имеют грамицидин.
г) антибиотики, выделенные из тканей животных.
Лизоцим – обнаруживается в слезной жидкости, слюне. Он оказывает
бактериолитическое действие на грам (+) бактерии и применяется для лечения
язвенного процесса роговицы глаза, коньюктивиты, гайморитом, гнойных
процессов, отморожений, ожогов.
Экмолин – получен из тканей рыб и применяется в сочетании с другими
антибиотиками, усиливая эффект.
Интерферон – образуется в клетках организма (в лаборатории в культуре ткани) под
действием вирусов и является фактором естественной защиты клетки от
размножения вируса.
Интерферон обладает широким спектром, практически действует на все вирусы. Но
ему присуща видовая специфичность. Интерферон, полученный на клетках
культуры ткани человека, способен оказывать действие только в организме
человека. Интерферон, выделенный из лейкоцитов человека – это интерферон 2.
Достижение генной инженерии – это получение человеческого интерферона с
помощью бактерий E coli. Под действием интерферона происходит нарушение
вирусной РНК, что ведет к отсутствию синтеза вирусных белков.
д) антибиотики, полученные из растений – фитоциты.
они были открыты в 1928 году Т.П. Токиным. Фитоциты защищают клетки растений
от размножения фитопатогенных бактерий, но и активируют жизненные функции
растений, по химической природе это летучие эфирные масла.
2. Способы получения
Различают 3 способа получения антибиотиков:
1. Биологический.
2. Полусинтетический.
3. Синтетический (синтез химических соединений).
1. Биологический – выращивание продуцетов (грибов, бактерий) в жидкой
оптимальной среде, в которую поступают продукты метаболизма, обладающие
антибиотическими свойствами. Антибиотики затем выделяют из жидкости,
используя ионообменные процессы, экстракции или растворители (химические
методы).
2. Полусинтетический способ (полусинтетические антибиотики).
Их готовят комбинированным способом, то есть методом биологического синтеза
получают основное ядро молекулы неактивного антитбиотика, а методом
химического синтеза частично изменяют химическую структуру. За счет этого
расширяется спектр антимикробного действия. К ним относятся производные
пенициллина (бензилпенициллнин, ампициллин, метилпенициллин).
Цефалоспорина. тетрациклины, рифампилин.
3. Синтетический способ (синтетические антибиотики).
Основа метода. Метод химического синтеза, так был получен левомицетин. успехи
химии привели к созданию антибиотиков, обладающих пролонгированным
13
(продленным) сроком действия. К ним относятся новобицилин
экмоновациллин.
По спектру действия
По спектру действия все антибиотики принято классифицировать на:
1. Антибактериальные.
2. Антигрибковые (противогрибковые).
3. Противоопухолевые.
4. Противовирусные.
1,3,5,
Антибактериальные – угнетают развитие бактерий. Существуют антибиотики:
1. Узкого спектра действия, угнетают рост только грам (+) или грам (-) бактерий.
Пример: бензилпенициллин действует на грам (+), полимиксин на грам (-).
2. Широкого спектра действия. которые угнетают как грам (+), так и грам (-) флору.
Сюда относится группа производных пенициллина – цефалоспорины молекулярный механизм действия – клеточная стенка.
Тетрациклины и его производные – механизм действия – нарушают синтез белков
клетки на уровне рибосом.
Аминогликозиды (в молекуле содержатся аминосахора) – стрептомицин,
канамицин, гентамицин, мономицин – механизм действия – подавляют синтез
белков в клетке, нарушают генетический код грам (+), грам (-) бактерий. Группа
антибиотиков широкого спектра действия действует на грам (+), грам (-),
микобактерии, простейшие.
50 антибиотиков этой группы действуют на условно-патогенные микроорганизмы –
внутрибольничные инфекции).
Все эти антибиотики обладаю следующими свойствами:
1. Бактерицидный тип действия.
2. Высокая токсичность в отношении грам (+) микробов.
3. Быстрое наступление бактериального эффекта.
4. Хорошая переносимость макроорганизма даже на длительное применение.
Противогрибковые антибиотики – нистатин, леворин, амфотерицин В,
гризеофульвин оказывает угнетающие действие на рост микроорганизмов
микроскопических грибов, нарушая целостность цитоплазматической мембраны.
Применяются для лечения грибковых заболеваний.
Противоопухолевые антибиотики – рибомицин, оливомицин, брунеомицин оказывают угнетающие действие на синтез нуклеиновых кислот в бактериальных и
животных клетках.
Противовирусные химиопрепараты – блокируют репликацию вирусов.
Метизазон – при лечении оспы.
В лечебной практике применяются противовирусные препараты, (амантадина
гидрохлорид), ингибирующие проникновение вируса гр. А или вызывают
коагуляцию белков.
Для того, чтобы антибиотики давали терапевтический эффект необходимо
соблюдать следующие определенные правила:
1. Правильный выбор антибиотиков со с знанием спектра действия.
14
2. Введение в организм антибиотика в терапевтической концентрации, то есть в
дозах, необходимых для подавления роста и размножения микроба – возбудителя.
3. Определение антибиотикограммы возбудителя, то есть чувствительности к
применяемому препарату.
4. Правильный выбор способа введения антибиотика.
5. Создание активной концентрации антибиотика в организме и поддерживание этой
концентрации в течении всего курса лечения до ликвидации инфекционного
процесса.
6. Правильное сочетание антибиотиков при комбинированном их применении.
7. Комбинация антибиотиков с сывороточными и вакцинными препаратами.
При неправильном применении антибиотика могут возникнуть осложнения как со
стороны макроорганизма, так и нежелательные изменения микроорганизма.
ОСЛОЖНЕНИЯ
1. Аллергические реакции развиваются в виде крапивницы, покраснения и отека в
месте введения, дерматитов, иногда возникает шок, может наступить смерть. Для
предупреждения ставят внутрикожные пробы.
2. Дисбактериозы.
3. Кандиозы.
Наблюдается в результате применения антибиотиков широкого спектра действия,
которые подавляют рост не только патогенных, но и представителей нормальной
микрофлоры.
Наблюдаются в результате применения антибиотиков широкого спектра действия,
которые подавляют рост не только патогенных, но и представителей нормальной
микрофлоры. Дисбактериоз возникает при нарушение нормальной микрофлоры
организма. Могут нарушаться антогонистические отношения и условно-патогенные
микроорганизмы могут активизироваться. Это в первую очередь различные грибы дрожжевые и плесневые. Заболевания вызванные грибами (p Candida), называются
кандидозами, они могут быть как поверхностными так и глубокими с поражением
органов и тканей (висцеральные).
Протей и стафилококк могут вызвать заболевания желудочно-кишечного тракта.
Поэтому антибиотики вводят вместе с веществами, подавляющими рост грибов фунгицитами,
например,
нистатином.
Иногда
используют
препараты,
приготовленные из симбиотической микрофлоры кишечника бифидумбактерин,
колибактерин, бификол.
4. Прямые токсические ( органотропные реакции ).
Антибиотики тетрациклинового ряда могут вызвать нарушения почек, печени,
оказывают раздражающее действие на кишечник, угнетают ряд пищеварительных
ферментов.
Противоопухолевые нарушают кроветворение.
5. Влияние антибиотиков на развитие плода.
Дефекты развития плода могут быть обусловлены повреждением организма матери
или действием антибиотиков на сперматозоид, плаценту, а также прямое действие
антибиотиков на плод. Это присуще группе тетрациклинового ряда.
6. Реакции обострения.
15
Развитие общей интоксикации за счет выделения токсинов из микроорганизмов,
которые погибают в организме.
7. Нарушение формирования полноценного иммунитета.
Могут возникать рецидивы. При некоторых заболеваниях вводят антибиотики в
сочетании с вакцинами.
УСТОЙЧИВОСТЬ МИКРООРГАНИЗМОВ А К АНТИБИОТИКАМ
При лечение многие микроорганизмы становятся резистентными, то есть
устойчивые в отношении определенных антибиотиков. Это свойство может
передаваться по наследству. Резистентность объясняется появлением у некоторых
бактерий ферментов, повышающих ее. У стафилококка продуцируется
пеницилиназа, а у кишечной палочки, протея этот фермент постоянен и это
объясняет естественную резистентность этих бактерий к пенициллину. У гонококка
бетто-лактатаза.
При не контролируемом применении антибиотиков в организме создаются условия,
которые способствуют селекции резисцентных форм бактерий и это способствует к
распространению вяло текущих, хронических процессов. Под действием
антибиотиков возможно изменение различных свойств микроорганизмов:
морфология клеток, форма колоний, физиология микроорганизмов (изменение
биохимических свойств). Снижается вирулентность - возникают атипичные формы,
что затрудняет, а иногда делает невозможным идентификацию. Это приводит к
ошибочной диагностике, а следовательно лечение больного неправильным.
Микробы могут образовывать - формы, а они мало чувствительны к антибиотикам.
Определение
активности
антибиотика
в
основном
производится
микробиологическими методами с использованием чувствительных тест микробов.
За международную единицу активности антибиотика (ЕД) принимают
специфическую активность, содержащуюся в 1 мкг чистого препарата.
Для пенициллина МЕ активности = 0,6 мкг.
Для лекарственно-резистентных микроорганизмов характерна персистенция способность микробов переживать в глубине тканей, находясь в состоянии
анабиоза. На такие персистирующие микроорганизмы антибиотики не действуют.
16
КЛАССИФИКАЦИЯ АНТИБИОТИКОВ ПО СПЕКТРУ ДЕЙСТВИЯ
Антибиотики антибактериальные
1.Бетто-лактамиды:
бензилпенициллин,
полусинтетические пенициллины,
цефалоспорины
2. Макролиды (эритромицин,
линкомицин и другие).
3. Аминогликозиды (стрептомицин,
канамицин, мономицин, тобрамицин,
гентамицин и другие).
4. Тетрациклины (хлортетрациклин,
окситерациклин, метациклин и другие).
5.Тетрациклины (хлортетрациклин, окситерациклин, метациклин и другие).
6.Полипептиды (полимиксины В, Е и др.)
Противогрибковые антибиотики:
1. Нистатин
2. Леворин
3. Авфтерицин В
4. Гризеофульвин
Противоопухолевые антибиотики:
1. Актиномицины
2. Антрациклины (рубомицин)
3. Группа ауреловой кислоты
(олиюмицин)
4. Брунеомицин
5. Группа порфиринов
6. Другие группы
Объект химиотерапевтического
действия
Грамположительные бактерии.
Грамположительные и
грамотрицательные бактерии
Грамположительные бактерии.
Грамположительные и
грамотрицательные бактерии.
То же.
Грамотрицательные бактерии.
17
КЛАССИФИКАЦИЯ АНТИБИОТИКОВ ПО МОЛЕКУЛЯРНОМУ
МЕХАНИЗМУ ДЕЙСТВИЯ
Группа антибиотиков
Механизм действия
Нарушают синтез пептидогликана,
который является одним из основных
I группа (бетто-лактамиды и другие)
компонентом клеточной стенки
бактерий.
Нарушают синтез белка бактериальной
II группа (макролиты, тетрациклины и
клетки на уровне рибосом, действуют на
другие)
различных этапах этого процесса.
Подавляют синтез белков в микробной
клетке действием на 30 S III группа (аминогликозиды:
рибосомальную субъединицу и
стрептомицин, мономицин и другие)
нарушают считывание генетического
кода в процессе трансляции.
нарушают целостность
цитоплазматической мембраны в клетках
грибов. в результате мембрана теряет
IV группа - противогрибковые (нистатин,
свойства барьера между содержимом
леворин и другие)
клетки и внешней средой,
обеспечивающего избирательную
проницаемость.
V группа (рифампицин,
Угнетают синтез нуклеиновых кислот в
противоопухолевые антибиотики)
бактериальных и животных клетках.
МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ К АНТИБИОТИКАМ
Методы определения чувствительности бактерий к антибиотикам делятся на 2
группы:
- диффузионные и методы разведения
- определение чувствительности бактерий к антибиотикам
- диффузионные методы с использованием дисков с антибиотиками с помощью Етестов
- методы разведения
- разведение в жидкой питательной среде (бульоне)
- разведение в агаре
При определении чувствительности диско-диффузионным методом на поверхность
агара в чашке Петри наносят бактериальную суспензию определенной плотности
(обычно эквивалентную стандарту мутности 0,5 по МсFагlаnd) и затем помещают
диски, содержащие определенное количество антибиотика. Диффузия антибиотика в
агар приводит к формированию зоны подавления роста микроорганизмов вокруг
дисков. После инкубации чашек в термостате при температуре 35о-37оС в течение
18
24 часов учитывают результат путем измерения диаметра зоны вокруг диска в
миллиметрах.
Определение чувствительности микроорганизма с помощью Е-теста
проводится аналогично тестированию диско-диффузионным методом. Отличие
состоит в том, что вместо диска с антибиотиком используют полоску Е-теста,
содержащую градиент концентраций антибиотика от максимальной к минимальной.
В месте пересечения эллипсовидной зоны подавления роста с полоской Е-теста
получают значение минимальной подавляющей концентрации (МПК).
Несомненным достоинством диффузионных методов является простота
тестирования и доступность выполнения в любой бактериологической лаборатории.
Однако с учетом высокой стоимости Е-тестов для рутинной работы обычно
используют диско-диффузионный метод.
Методы разведения основаны на использовании двойных последовательных
разведений концентраций антибиотика от максимальной к минимальной (например
от 128 мкг/мл, 64 мкг/мл, и т.д. до 0,5 мкг/мл, 0,25 мкг/мл и 0,125 мкг/мл). При этом
антибиотик в различных концентрациях вносят в жидкую питательную среду
(бульон) или в агар. Затем бактериальную суспензию определенной плотности,
соответствующую стандарту мутности 0,5 по McFarland, помещают в бульон с
антибиотиком или на поверхность агара в чашке. После инкубации в течение ночи
при температуре 35о-37оС проводят учет полученных результатов. Наличие роста
микроорганизма в бульоне (помутнение бульона) или на поверхности агара
свидетельствует о том, что данная концентрация антибиотика недостаточна, чтобы
подавить его жизнеспособность. По мере увеличения концентрации антибиотика
рост микроорганизма ухудшается. Первую наименьшую концентрацию антибиотика
(из серии последовательных разведений), где визуально не определяется
бактериальный рост принято считать минимальной подавляющей концентрацией
(МПК). Измеряется МПК в мг/л или мкг/мл. Минимальная подавляющая
концентрация (МПК) – наименьшая концентрация антибиотика (мг/л или мкг/мл),
которая т УПГО полностью подавляет видимый рост бактерий
Интерпретация результатов определения чувствительности на основании
получаемых количественных данных (диаметра зоны подавления роста антибиотика
или значения МПК) микроорганизмы подразделяют на чувствительные, умеренно
резистентные и резистентные. Для разграничения этих трех категорий
чувствительности (или резистентности) между собой используют так называемые
пограничные концентрации (breakpoint) антибиотика (или пограничные значения
диаметра зоны подавления роста микроорганизма).
19
20
ХИМИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЕ ПРЕПАРАТЫ
История открытия
Прямое косвенное
действие
ГРУППЫ
Побочное действие
СВОЙСТВА
Тропизм
Соли
металлов
Алколоиды
Сульфаниламид
ы
Изониазиды
Сульфоны
Открытие
антибиоза
Эффект
действия
Цель
использования
Микробное
21
Антибиотики
Происхождение
Животное
Механизм
действия на
микроорганиз
мы
Растительное
5. Методическая разработка для преподавателя к практическому занятию
По теме: «Определение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам
диско-диффузионным методом».
В клинической практике чувствительности к антибиотикам считают те
микроорганизмы, на которые антибиотики оказывают бактериостатическое или
бактерицидное действие.
При лабораторном исследовании критерием чувствительности микроорганизмов к
антибиотикам является минимальная концентрация антибиотика, ингибирующая
(задерживающая) рост возбудителя заболевания при стандартных условиях
постановки опыта.
Для определения лекарственной чувствительности оптимальным является
использование чистой культуры возбудителя.
Выделять культуры микробов из организма для исследования на чувствительность
следует до начала лечения антибиотиками, так как под их воздействием рост
возбудителя заболевания может быть полностью угнетен.
Следует помнить: что антибиотики обладают избирательным действием в
отношении определенных групп микроорганизмов, для каждого антибиотика
характерен спектр действия. Некоторые микроорганизмы могут быть
резистентными, поэтому все культуры, полученные от больных, проверяют на
чувствительность к антибиотикам.
Учитывая чувствительность к антибиотикам их вводят в терапевтической
концентрации для подавления роста и размножения микроорганизмов, эту
концентрацию поддерживают в течении всего курса лечения.
В лабораторной практике чаще всего используется определение чувствительности к
антибиотикам диско-диффузионным методом, который всегда доступен для
бактериологической лаборатории, хотя этот метод является качественным.
22
5.1. Оснащение занятия
№
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
Наименование
Чашки Петри питательной со средой
АГВ
Диски с антибиотиками
Пинцеты
Спиртовки
Бактериологические петли
Спички
Карандаши по стеклу
Культура E.coli на МПА
Культура E.coli на МПБ
Пипетки стерильные
Пробирки стерильные
Груши резиновые
Физиологический раствор
Дезинфицирующие средства 3% р-р
хлорамина
Чистая ветошь
Кюветы
Ёмкости с 3% хлорамином для сброса
отработанного материала, пипеток
Термостат
Таблицы
3% р-р хлорамина для ветоши
Необходимое
количество
Имеется
32
32
5 фл. x 8 р.м.
8
8
5 фл. x 8 р.м.
8
8
8
8
8
8
16
16
8
100 мл
на каждом рабочем
месте
общий стол
4
8
8
8
8
16
16
8
100 мл
на каждом рабочем
месте
общий стол
4
16
16
1
2
на общем столе
1
2
на общем столе
5.2. Вопросы для определения исходного уровня знаний студентов
1. Что такое антибиотики?
2. История открытия применения химиотерапевтических препаратов?
3. Какое явление лежит в основе действия антибиотиков?
4. Какое действие оказывают антибиотики на микроорганизмы?
5. Источники получения микроорганизмов?
6. На каких принципах основана классификация антибиотиков?
7. Каков механизм действия антибиотиков на микроорганизмы?
8. Как Вы понимаете «спектр действия»?
9. Классификация антибиотиков по спектру действия и их характеристика?
10.Как измеряют биологическую активность антибиотиков?
11.Как получают антибиотики в промышленности?
12.Почему некоторые микроорганизмы устойчивы к антибиотикам?
13.Какие используются культуры для постановки чувствительности к антибиотикам?
14.Какие существуют методы определения чувствительности к антибиотикам?
15.Какая используется питательная среда для определения чувствительности
микроорганизмов к антибиотикам методом стандартных бумажных дисков?
23
5.3. Технологическая карта практического занятия
ПМ.04. Проведение лабораторных микробиологических исследований.
МДК.04.01. Теория и практика лабораторных микробиологических исследований.
Специальность, группа: 060604 – Лабораторная диагностика.
Тема занятия: Определение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам
диско-диффузионным методом.
Цели занятия:
Образовательная:
1. Закрепить теоретические знания по классификации антибиотиков и их
биологическому действию.
2. Научить учащихся постановке определения чувствительности микроорганизмов к
антибиотикам диско-диффузионным методом.
Развивающая:
1. Самостоятельное приготовление рабочего места для проведения лабораторных
микробиологических исследований;
2. Регистрация результатов микробиологических исследований;
3. Утилизация отработанного материала, дезинфекция и стерилизация
использованной лабораторной посуды, инструментария, средств защиты.
4. Научить выделять в теме основополагающие моменты, а именно, что результатом
всей работы по выделению возбудителя является получение чистой культуры и
определение чувствительности к антибиотикам.
Воспитательная:
1. Организовывать собственную деятельность, выбирать типовые методы и способы
выполнения профессиональных задач, оценивать их эффективность и качество;
2. Использовать информационно-коммуникабельные технологии в
профессиональной деятельности; работать в коллективе и команде;
3. Довести до сознания студентов необходимость добросовестного отношения к
работе, точность в проведении посевов и в наложении дисков, так как ошибки могут
исказить результат постановки опыта.
Студент должен:
Иметь практический опыт:
Уметь:
- вести учетно-отчетную документацию;
- осуществлять подготовку реактивов, лабораторного оборудования и аппаратуры
для исследования.
Знать:
- организацию делопроизводства;
- значение антибиотикочувствительности и антибиотикоустойчивости бактерий в
микробиологической диагностике;
- механизм возникновения устойчивости бактерий к антибиотикам.
Формируемые компетенции:
ПК:
ПК 4.1. Готовить рабочее место для проведения лабораторных микробиологических
исследований.
24
ПК 4.2. Проводить лабораторные микробиологические и иммунологические
исследования биологических материалов, проб объектов внешней среды и пищевых
продуктов; участвовать в контроле качества.
ПК 4.3. Регистрировать результаты проведенных исследований.
ПК 4.4. Проводить утилизацию отработанного материала, дезинфекцию и
стерилизацию использованной лабораторной посуды, инструментария, средств
защиты.
ОК:
ОК 2. Организовывать собственную деятельность, выбирать типовые методы и
способы выполнения профессиональных задач, оценивать их эффективность и
качество.
ОК 4. Осуществлять поиск и использование информации, необходимой для
эффективного выполнения профессиональных задач, профессионального и
личностного развития.
ОК 5. Использовать информационно-коммуникационные технологии в
профессиональной деятельности.
ОК 8. Самостоятельно определять задачи профессионального и личностного
развития, заниматься самообразованием, осознанно планировать повышение
квалификации.
ОК 9. Ориентироваться в условиях смены технологий в профессиональной
деятельности.
ОК 13. Организовывать рабочее место с соблюдением требований охраны труда,
производственной санитарии, инфекционной и противопожарной безопасности.
Уровень освоения: репродуктивный (выполнение деятельности по образцу,
инструкции или под руководством).
Междисциплинарные связи:
Истоки: ТЛР, химия, биология
Выход: инфекционные заболевания.
Материально-техническое оснащение: диски пропитанные антибиотиками,
культура, физ. р-р, стандарт мутности, среда АГВ, бактериальные петли, спиртовки,
пипетки, груши, дез. средство.
Учебно-методическое оснащение: рабочая программа, технологическая карта
комбинированного занятия, дидактический и контролирующий материал.
Этапы и хронология занятия (180 мин):
25
Этапы занятия
Время,
мин.
1. Организационный момент
3
2. Формулировка темы, ее
мотивация
7
3. Определение целей
занятия
5
4. Контроль исходного
уровня знаний
35
5. Работа над изучаемым
материалом темы
20
Содержание занятия
Приветствие, проверка присутствующих, внешний вид
студентов, проверка готовности студентов к занятию,
заполнение журнала.
Тема записывается на доске, студенты в дневниках.
Особенность опыта заключается в том, что используется
одна культура и несколько разных антибиотиков.
Разбираются основные цели занятия на уровне знаний,
умений. Доводится до студентов план занятия, который
записывается учащимися в дневник.
При определении чувствительности микроорганизмов к
антибиотикам необходимо помнить что:
а) Для постановки чувствительности к антибиотикам
следует использовать чистую культуру;
б) Антибиотики обладают избирательным действием в
отношении определённых групп микроорганизмов, для
каждого антибиотика характерен спектр действия;
в) Некоторые микроорганизмы могут быть
резистентными, поэтому все культуры полученные от
больных проверяют на чувствительность к антибиотикам;
г) Учитывая чувствительность к антибиотикам их вводят в
терапевтической концентрации для подавления роста и
размножения микроорганизмов, эту концентрацию
поддерживают в течении всего курса лечения, до
ликвидации инфекционного процесса.
Фронтальный опрос:
1. Что такое антибиотики?
2. История открытия применения химиотерапевтических
препаратов.
3. Какое явление лежит в основе действия антибиотиков?
4. Какое действие оказывают антибиотики на
микроорганизмы?
5. Источники получения антибиотиков.
6. Классификация антибиотиков
7. Как измеряют биологическую активность
антибиотиков?
8. Почему некоторые микроорганизмы устойчивы к
антибиотикам?
9. Какие используются культуры для постановки
чувствительности?
10. Какие существуют методы определения
чувствительности к антибиотикам?
11. Как подготовить бактериальную взвесь?
12. Как провести посев «газоном»?
13. Методика нанесение стандартных дисков.
14. Возможные осложнения при антибиотикотерапии.
1. Методы определения чувствительности
микроорганизмов к антибиотикам.
2. Подготовка бактериальной взвеси по стандарту
мутности.
3. Посев газоном бактериальной петлей, пипеткой.
26
6.Отработка практических
манипуляций
7.Самостоятельная работа
студентов
73
8. Закрепление изучаемого
материала
25
9. Итоговый контроль по
теме
10. Подведение итогов
занятия. Комментарий
оценок.
11. Задание на дом
5
7
5
4. Какие среды используют для постановки опыта?
5. Диски пропитанные антибиотиками, демонстрация,
способ нанесение на среду.
6. На примере объяснить учет результатов.
Подбор питательной среды, подготовка микробной взвеси
по стандарту мутности, посев культуры «газоном» петлей
и пипеткой, нанесение стандартных дисков на посевы,
учет и оформление результатов исследования, соблюдение
асептики и дезинфекционного режима.
Этапы выполнения работы:
Посев «газоном» пипеткой.
1. Внести в пробирку с культурой физ. р-р 5 мл. и вращать
в ладонях.
2. Пипеткой взять 1 мл. и внести (газоном) в чашку Петри,
растереть шпателем.
3. Пинцетом нанести диски.
4. Термостатирование 37 С, 24 часа.
Посев «газоном» бактериальной петлей.
1. Обожженной бактериальной петлей взять культуру и
нанести методом «штриха» на поверхность питательной
среды АГВ.
2. Пинцетом нанести диски.
3. Термостатирование 37 С, 24 часа,
4. Соблюдение дез.режима.
1. Оформление дневников.
2. Отчет о проделанной работе
Заполнение таблиц, схем, составление графиков, решение
ситуационных задач.
Оцениваются ответы.
Проверка дневников.
Ф.К. Черкес стр 131-141, 141-145
Список использованной литературы и Интернет-ресурсов:
Медицинская микробиология и иммунология в Интернете.
www.medicum.nnov.ru/nmj/2003/1/38.php
1. Черкес Ф.Г., Богоявленская Л.Б., Бельская Н.А. Микробиология / Под ред. Черкес
Ф.К. – М.: Медицина, 2009. – 512 с., ил.
2. «Медицинская микробиология в графах». Минск «Высшая школа» 1986.
3. Качамасова З.Н., Ефремова С.А., Набоков Ю.С. «Микробиология» -М., Медицина
1984.
27
6. Методическая разработка для студентов к практическому занятию
По теме: «Определение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам
диско-диффузионным методом»
Пояснительная записка
1 .Антибактериальную активность антибиотиков выражают в единицах действия (
ЕД ). Для большинства антибиотиков 1 ЕД соответствует 1мкг химически чистого
препарата. Исключение составляет пенициллин (1 ЕД=0.6мкг), нистатин (1 ЕД=0.1
мкг), для которых сохранены единицы действия, установленные на эталонных тест микробах до получения химически чистых препаратов этих антибиотиков.
2.В современный период широкого и интенсивного применения антибиотиков резко
возросла
циркуляция
микроорганизмов
с
приобретенной
антибиотикорезистентностью.
Циркуляция
антибиотикорезистентных
микроорганизмов в современный период столь широка , что только точное
определение чувствительности к антибиотикам каждого конкретного возбудителя
инфекции может обеспечить правильный выбор препарата для химиотерапии.
3.Чувствительность микроорганизмов к антибиотикам и другим химиопрепаратам
Определяют двумя группами методов: диско-диффузионным (методом диффузии в
агар с применением бумажных дисков с антибиотиками) и методом разведений
антибиотика в плотной или жидкой питательной среде.
4.Исследованию на чувствительность к антибиотикам должен подвергаться
возбудитель инфекции в чистой культуре.
5.Материал должен быть получен до начала антибактериальной терапии или после
введения антибактериального препарата через такой срок, который необходим для
элиминации из организма.
6.Материал для посева следует брать непосредственно из очага посева инфекции
соблюдением правил асептики (стерильными инструментами в стерильную посуду).
7.В смешанной культуре определять чувствительность к антибиотикам не следует,
так как можно получить ложные результаты вследствие микробного антагонизма и
разной скорости роста микроорганизмов.
8.Исследование чувствительности микроорганизмов к антибиотикам и
химиотерапевтическим препаратам проводят стандартными унифицированными
методами, регламентированными официальными инструкциями.
9.Критерием чувствительности микроба является концентрация антибиотика
(химиопрепарата) в организме человека ( в очаге инфекции ) в ЕД/мл или мкг/мл,
достигаемая при терапевтических дозировках препарата. С этим критерием
сравнивают минимальную ингибирующую рост микроорганизма концентрацию
антибиотика ( МИК в ЕД/мл или мкг/мл), определяемую при выращивании микроба
на питательной среде с антибиотиками. Если МИК; антибиотика для
микроорганизма меньше или равна концентрации этого антибиотика в организме
человека, то этот микроорганизм чувствителен к антибиотику; при
противоположном соотношении микроорганизм устойчив к антибиотику.
28
10.Для исследования необходимо использовать стандартные питательные среды:
АГВ, № 1, №2.
11.Стандартные диски с антибиотиками промышленного производства
используются только до истечения срока их годности. После вскрытия флакон с
дисками можно хранить в течении недели в рефрижераторе при 100 С.
12.Для опыта используют 18-20-часовой бульонной культуры или стомиллионный
суспензии из агаровой культуры - посев « газоном».
13.Диски с антибиотиками накладывают пинцетом на равном расстоянии друг от
друга и на 2 см от края чашки Петри (на 1 чашку не более 6 дисков ).
14.С помощью линейки измеряют диаметры зон задержки роста вокруг дисков,
включая диаметр дисков, с точностью до 1 мм.
15.Для контроля точности и воспроизводимости результатов, а также качества
питательных сред, дисков и методики проводят испытание чувствительности к
антибиотикам эталонных штампов.
Исследование остается достоверным, если диаметры зон задержки роста эталонных
штампов соответствуют таблице.
Используется литература:
«Медицинская микробиология» Учебное пособие под редакцией профессора А.М.
Королдаса, Санкт-Петербург, 1999 г.
Общее время – 180 мин.
Цели:
Образовательная:
1. Закрепить теоретические знания по классификации антибиотиков и их
биологическому действию.
2. Научить учащихся постановке определения чувствительности микроорганизмов к
антибиотикам диско-диффузионным методом.
Развивающая:
1. Самостоятельное приготовление рабочего места для проведения лабораторных
микробиологических исследований;
2. Регистрация результатов микробиологических исследований;
3. Утилизация отработанного материала, дезинфекция и стерилизация
использованной лабораторной посуды, инструментария, средств защиты;
4. Научить выделять в теме основополагающие моменты, а именно, что результатом
всей работы по выделению возбудителя является получение чистой культуры и
определение чувствительности к антибиотикам.
Воспитательная:
1. Организовывать собственную деятельность, выбирать типовые методы и способы
выполнения профессиональных задач, оценивать их эффективность и качество;
2. Использовать информационно-коммуникабельные технологии в
профессиональной деятельности; работать в коллективе и команде;
3. Довести до сознания студентов необходимость добросовестного отношения к
работе, точность в проведении посевов и в наложении дисков, так как ошибки могут
исказить результат постановки опыта.
29
Студент должен:
Иметь практический опыт:
Уметь:
- вести учетно-отчетную документацию;
- осуществлять подготовку реактивов, лабораторного оборудования и аппаратуры
для исследования.
Знать:
- организацию делопроизводства;
- значение антибиотикочувствительности и антибиотикоустойчивости бактерий в
микробиологической диагностике;
- механизм возникновения устойчивости бактерий к антибиотикам.
Формируемые компетенции:
ПК:
ПК 4.1. Готовить рабочее место для проведения лабораторных микробиологических
исследований.
ПК 4.2. Проводить лабораторные микробиологические и иммунологические
исследования биологических материалов, проб объектов внешней среды и пищевых
продуктов; участвовать в контроле качества.
ПК 4.3. Регистрировать результаты проведенных исследований.
ПК 4.4. Проводить утилизацию отработанного материала, дезинфекцию и
стерилизацию использованной лабораторной посуды, инструментария, средств
защиты.
ОК:
ОК 2. Организовывать собственную деятельность, выбирать типовые методы и
способы выполнения профессиональных задач, оценивать их эффективность и
качество.
ОК 4. Осуществлять поиск и использование информации, необходимой для
эффективного выполнения профессиональных задач, профессионального и
личностного развития.
ОК 5. Использовать информационно-коммуникационные технологии в
профессиональной деятельности.
ОК 8. Самостоятельно определять задачи профессионального и личностного
развития, заниматься самообразованием, осознанно планировать повышение
квалификации.
ОК 9. Ориентироваться в условиях смены технологий в профессиональной
деятельности.
ОК 13. Организовывать рабочее место с соблюдением требований охраны труда,
производственной санитарии, инфекционной и противопожарной безопасности.
30
6.1. Оснащение занятия
№
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
19
20
Необходимое
количество
Имеется
32
32
5 фл. x 8 р.м.
8
8
5 фл. x 8 р.м.
8
8
8
8
8
8
16
16
8
100 мл
на каждом рабочем
месте
общий стол
4
8
8
8
8
16
16
8
100 мл
на каждом рабочем
месте
общий стол
4
16
16
1
2
на общем столе
1
2
на общем столе
Наименование
Чашки Петри питательной со средой
АГВ
Диски с антибиотиками
Пинцеты
Спиртовки
Бактериологические петли
Спички
Карандаши по стеклу
Культура E.coli на МПА
Культура E.coli на МПБ
Пипетки стерильные
Пробирки стерильные
Груши резиновые
Физиологический раствор
Дезинфицирующие средства 3% р-р
хлорамина
Чистая ветошь
Кюветы
Ёмкости с 3% хлорамином для сброса
отработанного материала, пипеток
Термостат
Таблицы
3% р-р хлорамина для ветоши
6.2. Перечень практических навыков
№
1.
2.
3.
Наименование манипуляций
Подготовка микробной взвеси по
стандарту мутности.
1. Посев бактериальной взвеси
«газоном» пипеткой в чашку Петри с
АГВ.
2. Посев бактериальной петлей
культуры в чашку Петри с АГВ.
4.
Нанесение стандартных бумажных дисков
на предварительно сделанные посевы.
5.
Соблюдение асептики, дез. режима.
31
В начале занятия
В конце занятия
представление
умение
умение
навыки
умение
навыки
представление
умение
умение
навыки
6.3. Учебная карта работы студента на занятии
№
Этапы
Деятельность
студентов
Подготовка к практическому
занятию (форма, дневники,
учебники. лекции).
1.
Организационный
момент.
2.
Вступительное слово
преподавателя.
Слушают, акцентируют внимание
на важности темы.
Контроль готовности
по теме.
Промежуточный
инструктаж.
Отвечают на поставленные
вопросы.
3.
4.
Самостоятельная
работа студентов.
5.
Промежуточный
контроль.
6.
Самостоятельная
работа студентов.
7.
Промежуточный
контроль.
8.
9.
10.
Контроль конечного
уровня знаний.
Подведение итогов.
Контроль
3 мин.
Для каких целей
определяют
чувствительность
м/о к АБ.
7 мин.
Фронтальный опрос.
20 мин.
Какая культура
используется для
постановки
чувствительности
м/о к антибиотикам.
1. Подготавливают питательные
1. Какая
среды, лабораторную посуду,
используется
получают культуру, маркируют.
питательная среда?
2. Готовят взвесь бактерий по
2. Как приготовить
стандарту мутности № 1.
взвесь бактерий?
3. Проводят посевы взвеси бактерий 3. Как провести
«газоном» на питательную среду
посев «газоном»
АГВ.
пипеткой, петлей.
4. Проводят посев культуры петлей
на чашку Петри с АГВ к № 2.
Под контролем преподавателя
проводят:
1. Четкую маркировку.
2. Соблюдают точность
приготовления микробной взвеси.
3. Правильно проводят посевы.
4. Во время манипуляции
соблюдают асептику, дез.режим.
5. Наблюдают за демонстративным
нанесением дисков преподавателем.
1. Нанесение стандартных
1. Какие условия
бумажных дисков на чашки Петри
соблюдаются при
на предварительно проведенные
наложении дисков?
посевы (среда АГВ №1 и № 2).
2. Какой %
2. Ставят посевы в термостат.
концентрации
3. Обрабатывают рабочие места,
используют
руки.
хлорамин для
4. Заполняют дневники.
обработки столов,
5. Знакомятся с таблицами
рук?
(инструкция результатов).
Во время выполнения практической Какие могут быть
части слушают преподавателя о
последствия от
соблюдении правильного нанесения неправильного
дисков, так как это имеет большое
нанесения дисков?
значение при выдаче результатов.
Студенты отвечают на тесты,
Проверка тестов,
карточки.
карточек.
Участвуют в обсуждении
проведения манипуляций, работают
Знакомятся с различными
антибиотиками и бумажными
стандартными дисками.
32
Время
10 мин.
100
мин.
250
мин.
65 мин.
10 мин.
5 мин.
11.
Домашние задание.
над ошибками тестового контроля,
карточек.
Домашние задание стр. 139-144
«Микробиология» Ф.К. Черкес.
Запись в дневниках.
3 мин.
Инструкция по применению дисков для определения чувствительности к
антибиотикам
Назначение и краткая характеристика
Диски предназначаются для определения чувствительности к антибиотикам
микроорганизмов, выделяемых от больных.
Диски вырабатываются из фильтровального картона ГОСТ 6722-65. Картон
смачивают растворами антибиотиков определенной концентрации, сушат и
перфорируют. Диаметр дисков 6 мм.
Содержание антибиотика в диске, указываемое на этикетке соответствуем
рекомендациям ВОЗ.
Диски с не стойкими к влаге антибиотиками выпускаются во флаконах с
силикагелем-индикатором.
Силикагель-индикатор
является
хорошим
влагоуловителем и показателем влажности во флаконе.
При увлажнении силикагель меняет свою окраску от синий до розовый.
Методика определения чувствительности
Для определения чувствительности должна быть использована одна из указанных
ниже сред.
1. Среда из триптического перевара мяса (перевара Хоттингера) с содержанием 120140 мг. % аминного азота и 1-2% агара. pH среды 7,2-7,4.
2. Казеиново-дрожжевая среда с таким же содержанием аминного азота и агара и
значением pH.
3. Мясопептонная среда с таким же содержанием агара и значением рН.
Добавление 5% крови или ее сыворотки отрицательного влияния на результат
анализа не оказывает.
Расплавленную среду разливают по 20 мл. в стерильные чашки Петри,
расположенные на горизонтальной поверхности.
Пользоваться следует чашками диаметром 100 мм.
Поверхность застывшей среды засеивают чистыми или смешенными культурами
микроорганизмов, выделенных от больных, или непосредственно испытуемым
материалом (гноем, мокротой, мочой и т.п.). Наиболее четкие результаты получают
при использовании чистых культур. Наименее четкие – при использовании
непосредственно испытуемого материала.
При использовании культур среду засеивают 1 мл. 18-24 часов, а в экстренных
случаях 4-5 часов бульонной культуры или 1 мл. одномиллиардной взвеси (по
бактериальному стандарту), приготовленной из смыва агаровой культуры.
При использовании для посева непосредственно испытуемого материала последний
должен быть предварительно тщательно перемешен, а случае посева жидкости
(моча, экссудаты и пр.) рекомендуется ее отцентрифугировать, и использовать
осадок. Материал наносят с помощью ватного тампона или петли.
При посеве непосредственно испытуемого материала анализ должен быть повторен
с суточными культурами, выделенными из этого материала.
33
Бульонную культуру или смыв агаровой культуры покачиванием чашки равномерно
распределяют по всей поверхности среды, избыток жидкости отсасывают или
сливают.
Материал, нанесенный с помощью тампона или петли, равномерно растирают на
поверхности среды этим же тампоном или шпателем.
Для получения достоверных результатов необходимо, чтобы бактериальный газон
был равномерным.
Чашки подсушивают 30-40 минут при комнатной температуре, после чего на
поверхность засеянной среды накладывают диски. Диски из флаконов следует брать
стерильным пинцетом. При раскладе дисков необходимо обращать внимание на то,
чтобы на поверхности среды не было положено двух слепленных между собой
дисков. Диски раскладывают на равном расстоянии друг от друга и на расстоянии 2 см. от края чашек. При такой раскладке дисков каждая чашка может служить для
испытания нескольких антибиотиков.
Чашки с дисками выдерживают еще 30-40 минут при комнатной температуре, а за
тем 16-18 часов при 36-38°С.
Для избежания размывания зон конденсационной водой чашки следует ставить в
термостат в перевернутом виде.
В случае сомнительных результатов испытание необходимо повторить.
Оценка результатов
Оценка результатов проводится по диаметру зон задержки роста вокруг диска,
включая и диаметр самого диска.
Зоны замеряют с помощью линейки или измерителя и миллиметровой бумаги.
Отсутствие зон задержки роста микробов вокруг диска указывает на то, что
испытуемая культура не чувствительна к данной концентрации антибиотиков.
Зона диаметром до 10 мм. указывает на малую чувствительность испытуемой
культуры к данной концентрации антибиотиков.
Чем зона задержки роста испытуемой культуры больше, тем выше его
чувствительность к данной концентрации антибиотика.
Хранение
Диски следует хранить в сухом, темном месте при температуре не выше 20°С.
После вскрытия флаконов дисками можно пользоваться не менее месяца.
Диски из флаконов, где силикагель окрашен в коричневый или розовый цвет,
использованию не подлежат.
34
Научно-исследовательский центр фармакотерапии (НИТДФ) при НИИ
антибиотиков. Санкт-Петербург
Набор дисков для определения чувствительности энтерококков к
противомикробным препаратам
1. Данный набор дисков пригоден для определения чувствительности всех видов
энтерококка.
2. Набор включает диски с 10 противомикробными препаратами, которые являются
наиболее значимыми для лечения вызванных энтерококками инфекций (т.е.
препаратами первого ряда или препаратами резерва). Чувствительность к другим
антибиотикам и химиотерапевтическим средствам целесообразно определять при
наличии специальных показаний.
Основными антибиотиками для терапии анаэробных инфекций являются
бензилпенициллин или ампициллин, чувствительность энтерококков к которым, как
правило, совпадает, а также ванкомицин.
Антибиотики аминогликозиды (стрептомицин, амикацин, гентамицин) используют
только в сочетании с основными антибиотиками. Поэтому при оценке
чувствительности к ним энтерококков сам факт наличия вокруг диска зоны
подавления роста любого диаметра свидетельствует о целесообразности сочетания
одного из трех основных антибиотиков с антибиотиком аминогликозидом.
Чувствительность энтерококков к ципрофлоксацину, офлоксацину, тетрациклину
целесообразно определять при энтерококковом поражении мочевыводящих путей, а
рифампицина - желчевыводящих путей.
З.С использованием дисков чувствительность энтерококков к противомикробным
препаратам должна определяться на среде АГВ. Может быть также использована
среда Мюллер-Хинтона. При отсутствии этих сред в порядке исключения возможно
определение чувствительности культур на мясо-пептонном агаре, однако, в случае
промежуточных значений величин зон подавления роста, полученных на МПА,
возрастает опасность ошибочных результатов. В подобной ситуации более точные
данные дает определение чувствительности методом серийных разведений.
В плотные питательные среды допустимо добавление дефибринированной крови.
4.Специальные среды (селективные, дифференциально-диагностические) для
определения чувствительности энтерококков с применением дисков не пригодны.
5. Интерпретация значений диаметров зон задержки роста при определении
чувствительности энтерококков к антимикробным препаратам.
6.Зоны подавления роста вокруг диска с ванкомицином необходимо просматривать
в проходящем свете: при наличии внутри зоны мелких колоний или роста в виде
чуть заметной пленки культура признается устойчивой к ванкомицину.
(см. на обороте).
7. Чувствительность энтерококков к основным антибиотикам (бензилпенициллину и
ампициллину) не исключает необходимости использования их в больших дозах и в
сочетании с аминогликозидами при всех выраженных энтерококковых инфекциях.
Целесообразность сочетанной терапии с аминогликозидами при аналогичных
показаниях распространяется также на ванкомицин. Обращать внимание лечащих
врачей.
35
Противомикробные препараты в
диске
1. Бензилпенициллин *
2. Ампициллин *
3. Ванкомицин *
4.Ципрофлоксацин
З.Офлоксацин
6. Тетрациклин
7.Рифампицин
Диаметр зон (мм) для культур
Устойчивых
Промежуточных Чувствительных
≤14
≥15
≤16
≥17
≤14
15-16
≥17
≤15
16-20
≥21
≤12
13-15
≥16
≤15
16-19
≥20
≤9
10-12
≥13
* Стандарт NCCLS, США (для энтерококков); используется в практике НИИ
антибиотиков (г.Санкт-Петербург)
Научно-исследовательский центр фармакотерапии (НИЦФ) при НИИ антибиотиков
г.Санкт-Петсрбург
Набор дисков для определения чувствительности стафилококков к
противомикробным препаратам
1. Данный набор дисков пригоден для определения чувствительности всех видов
стафилококка (включая золотистый и эпидермальный).
2. Набор включает диски с 15 противомикробными препаратами, которые являются
наиболее значимыми для лечения стафилококковых, инфекций,(т.е препаратами
первого ряда или препаратами резерва). Чувствительность к другим антибиотикам и
химиотерапевтнческим средствам целесообразно определять, только при наличии
специальных показаний.
3."Метициллинрезистентность" стафилококков с помощью дисков данного набора
не выявляется.
4.С использованием дисков чувствительность стафилококков к протиаомикробным
препаратам должна определяться на среде АГВ. Может быть также использована
среда Мюллср-Хинтона. При отсутствии этих сред в порядке исключения
допустимо определение чувствительности стафилококков на мясо-пептонном агаре,
однако, в случае: промежуточных значений величин зон подавления роста,
полученных на МПА, возрастает опасность ошибочных результатов. В подобной
ситуации более точные данные даст определение чувствительности методом
серийных разведений.
5.Специальные среды (селективные, дифференциально-диагностические) для
определения чувствительности стафилококков с применением дисков не пригодны.
6. Интерпретация значений диаметров зон задержки роста при определении
чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам.
Противомикробные препараты в
диске
1. Бензилпенициллин
2. Оксациллин
3. Цефалотин
4. Цефазолин
5. Цефотаксим
Диаметр зон (мм) для культур
Устойчивых
Промежуточных Чувствительных
≤20
21-28
≥29
≤19
20-23
≥24
≤12
13-17
≥18
≤14
15-17
≥18
≤14
15-20
≥21
36
6. Цефалексин
7. Цефуроксим
8. Канамицин
9. Гентамицин
10. Эритромицин
11. Линкомицин
12. Клиндамицин
13. Рифампицин
14. Ципрофлоксацин
15. Ванкомицин
≤11
≤14
≤14
≤13
≤14
≤19
≤14
≤9
≤15
≤9
12-16
15-17
15-18
15-18
20-23
15-20
10-12
16-20
10-11
≥17
≥18
≥19
≥14
≥19
≥24
≥21
≥13
≥21
≥12
Определение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам дискодиффузионным методом.
Стандартные диски представляют собой кружки диаметром 5 мм., приготовление из
определённых сортов фильтровальной бумаги и пропитанные антибиотиками такой
концентрации, которая обуславливает одинаковый диаметр зон задержки роста (2832 мм.) чувствительных тест-микробов. Для удобства работы диски с различными
антибиотиками окрашивают в контрастные цвета (желтый, зеленый, голубой,
сиреневый и др.). Метод диффузии в агар для определения чувствительности
микробов к антибиотикам вследствие простоты и доступности выполнения в
настоящее время используется всеми практическими лабораториями. Соблюдение
стандартных условий при постановке опытов способствует получению более точных
результатов, обеспечивая тем самым возможность их сопоставления.
ТЕХНИКА ПОСТАНОВКИ ОПЫТА.
Стерильные чашки Петри диаметром 100 мм. устанавливают на строго
горизонтальную поверхность, наливают в них 2% мясо-пептонный агар (рН 7,2-7,4)
в количестве 20 мл. для создания оптимальной толщины слоя, равной 4-5 мм. Для
тех видов микробов, которые не растут на мясо-пептонном агаре, как, например,
стрептококки, пневмококки и др., применяют 5% кровяной или сывороточный агар.
Перед посевом чашки со средой подсушивают в термостате для лучшей диффузии
засеянного материала на питательную среду.
Для засева чашек используют чаще всего 18-20 часовые (при интенсивном росте 4-5
часовые, при замедленном росте 2-3 суточные) бульонные и агаровые культуры
микробов. Из агаровых культур готовят микробную взвесь, содержащую 1 млрд.
микробных тел в 1 мл.
На поверхность подсушенной среды наносят исследуемую культуру микробов в
объеме 1 мл. Посредством покачивания чашки, культуру равномерно распределяют
по поверхности среды с последующим отсасыванием избытка жидкости пипеткой.
Засеянные чашки 30-40 мин подсушивают при комнатной температуре, затем на
поверхность засеянной и подсушенной среды с помощью стерильного
остроконечного пинцета кладут диски, пропитанные разными антибиотиками.
Каждый диск слегка прижимают браншами пинцета, чтобы он плотно прилегал к
поверхности агара. Диски должны находиться на равном расстоянии друг от друга.
Термостатирование 37°С, 24 часа.
37
пипетка
шпатель
Учет результатов
38
Зоны задержки роста бактерий при исследовании антибиотикочувствительности дискодиффузным методом.
Противомикробные
препараты в диске
Бензилпенициллин
Оксациллин 10 мкг
Цефалотин
Цефазолин
Цефотаксим
Цефалексин
Цефуроксим
Канамицин
Гентамицин
Эритромицин
Линкомицин
Клиндамицин
Рифампицин
Ципрофлоксацин
Ванокмицин
Диаметр зон (мм) для культур Стафилококки ср. устойчивые
Устойчивых
≤20
≤15
≤14
≤14
≤14
≤14
≤14
≤14
≤13
≤14
≤19
≤14
≤12
≤15
≤11
Промежуточных
21-28
16-19
15-18
15-17
15-20
15-18
15-17
15-18
15-20
20-23
15-20
13-15
16-20
-
Чувствительных
≥29
≥20
≥19
≥13
≥21
≥19
≥18
≥19
≥14
≥21
≥24
≥21
≥16
≥21
≥12
Допустимые пределы диаметра зон задержки роста эталонных штаммов при контроле
воспроизводимости и точности результатов диско-диффузного метода. (А.М. Королюк с соавт.,
1999).
Антибиотики
Бензилленициллин
Ампициллин
Карбенициллин
(25мг)
Карбенициллин
(100мг)
Метициллин
Оксациллин
Цефалотин
Стрептомицин
Канамицин
Гентамицин
Тетрациклин
Эритромицин
Олеандомицин
Линкомицин
Левомицетин
Диаметр задержки роста, мм.
Для сред №1 и №2, мм.
Для сред АГВ, мм.
S.
E.coli
P.
S.
E.coli
P.
aureus
ATCC
aerogenosa
aureus
ATCC
aerogenosa
ATCC
25922
ATCC
ATCC
25922
ATCC
25923
27853
25923
27853
29-38
24-35
13-20
30-36
14-20
32-36
14-20
-
21-26
20-24
35-42
23-42
18-24
27-32
24-37
17-25
20-27
20-28
20-29
23-31
20-29
24-32
21-27
15-22
14-22
18-24
20-27
19-26
-
16-24
-
22-30
24-34
30-40
20-25
20-27
22-32
22-31
22-31
22-29
24-32
24-32
15-20
14-19
13-17
21-30
17-26
8-15
-
16-26
-
39
Рифампицин
Полемиксин
Ристомицин
14-18
12-17
-
-
40
26-34
12-16
7-11
16-20
-
15-20
-
7. Методическая разработка для преподавателя к практическому занятию
По теме: «Определение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам
методом серийных разведений»
Метод является точным количественным методом, его применяют в научной работе
и в особо важных случаях в лабораториях больниц и профилактических
учреждениях.
7.1. Оснащение занятия
№
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.
14.
15.
16.
Наименование
Антибиотик - бензилпенициллиновая Na соль с
1.000000ЕД
Физиологический раствор
МПБ
Пипетки стерильные
Пастеровские пипетки
Культура на МПА
Чашки Петри с МПА
Стерильные скальпеля
МПА (темп. 450С)
бактериальные петли
Культура E.coli на МПА
Спиртовки
Карандаши по стеклу
Груши резиновые
Кюветы
Емкости с 3 % р-р хлорамина для сброса
отработанного материала, пипеток
17.
Дезинфицирующие средства 3 % хлорамин
18.
19.
20.
21.
22.
23.
Чистая ветошь
3 % р-р хлорамина для ветоши
Термостат
Микротаблицы
Таблицы
Пробирки стерильные
41
Необходимое
количество
Имеется
4х2=8
4х2=8
500 мл
500 мл
32
16
4х2
4х2
500 мл
500 мл
32
16
4х2
4х2
8 пр.
8
8
8
8
8
4
8 пр.
8
8
8
8
8
4
8
8
на каждом рабочем
месте
на общем столе
на общем столе
1
8
2
120
на каждом
рабочем месте
на общем столе
на общем столе
1
8
2
120
7.2. Вопросы для определения исходного уровня знаний студентов
1. Как поставить чувствительность к антибиотикам методом стандартных бумажных
дисков?
2. Как проводится учёт чувствительности микроорганизмов к антибиотикам
методом дисков?
3. Определяют ли чувствительность к антибиотикам в нативном препарате
(материале)?
4. Почему метод дисков называется качественным методом?
5. Какие свойства могут изменяться у микроорганизмов под действием
антибиотиков?
6. Какие условия следует соблюдать при применении антибиотиков?
7. Какие осложнения возникают при антибиотикотерапии?
8. Для каких целей используется метод серийных разведений?
9. Что такое МИК (минимальная ингибирующая концентрация) антибиотика?
10. Как проводится учёт результатов?
11.Для каких целей используется метод дорожки по Флемингу?
12. Как проводят учёт результата?
13. Как приготовить микробную взвесь?
42
7.3. Технологическая карта практического занятия
ПМ.04. Проведение лабораторных микробиологических исследований.
МДК.04.01. Теория и практика лабораторных микробиологических исследований.
Специальность, группа: 060604 – Лабораторная диагностика.
Тема занятия: Определение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам
методом серийных разведений.
Цели занятия:
Образовательная:
1. Закрепить теоретические знания и метод постановки чувствительности
микроорганизмов к антибиотикам диско-диффузионным методом;
2. Механизм устойчивости микроорганизмов к антибиотикам, подготовка рабочей
взвеси, подготовка разведений;
3. Алгоритм постановки чувствительности микроорганизмов к антибиотикам
методом серийных разведений.
Развивающая:
1. Самостоятельное приготовление рабочего места для проведения лабораторных
микробиологических исследований;
2. Регистрация результатов микробиологических исследований;
3. Утилизация отработанного материала, дезинфекция и стерилизация
использованной лабораторной посуды, инструментария, средств защиты;
4. Показать, что определение МИК антибиотиков имеет большое значение при
лечении больных.
Воспитательная:
1. Организовывать собственную деятельность, выбирать типовые методы и способы
выполнения профессиональных задач, оценивать их эффективность и качество;
2. Использовать информационно-коммуникабельные технологии в
профессиональной деятельности; работать в коллективе и команде;
3. Четко выполнять все манипуляции, так как от правильности действий зависит
результат.
4. Соблюдать условия асептики и дез.режима при работе с культурами, при
разведении антибиотика.
Студент должен:
Иметь практический опыт:
Уметь:
- вести учетно-отчетную документацию;
- осуществлять подготовку реактивов, лабораторного оборудования и аппаратуры
для исследования;
- проводить утилизацию отработанного материала, дезинфекцию и стерилизацию,
используемой в лаборатории посуды, инструментария, средств защиты рабочего
места и аппаратуры;
- работать на современном лабораторном оборудовании;
- поставить метод дорожки по Флемингу для определения спектра действия
антибиотики.
Знать:
43
- организацию делопроизводства;
- значение антибиотикочувствительности и антибиотикоустойчивости бактерий в
микробиологической диагностике;
- механизм возникновения устойчивости бактерий к антибиотикам.
Формируемые компетенции:
ПК:
ПК 4.1. Готовить рабочее место для проведения лабораторных микробиологических
исследований.
ПК 4.2. Проводить лабораторные микробиологические и иммунологические
исследования биологических материалов, проб объектов внешней среды и пищевых
продуктов; участвовать в контроле качества.
ПК 4.3. Регистрировать результаты проведенных исследований.
ПК 4.4. Проводить утилизацию отработанного материала, дезинфекцию и
стерилизацию использованной лабораторной посуды, инструментария, средств
защиты.
ОК:
ОК 2. Организовывать собственную деятельность, выбирать типовые методы и
способы выполнения профессиональных задач, оценивать их эффективность и
качество.
ОК 4. Осуществлять поиск и использование информации, необходимой для
эффективного выполнения профессиональных задач, профессионального и
личностного развития.
ОК 5. Использовать информационно-коммуникационные технологии в
профессиональной деятельности.
ОК 8. Самостоятельно определять задачи профессионального и личностного
развития, заниматься самообразованием, осознанно планировать повышение
квалификации.
ОК 9. Ориентироваться в условиях смены технологий в профессиональной
деятельности.
ОК 13. Организовывать рабочее место с соблюдением требований охраны труда,
производственной санитарии, инфекционной и противопожарной безопасности.
Уровень освоения: репродуктивный (выполнение деятельности по образцу,
инструкции или под руководством)
Междисциплинарные связи:
Истоки: ТЛР, химия, биология
Выход: инфекционные заболевания
Материально-техническое оснащение: культура, физ. р-р, стандарт мутности №10
12 стерильных пробирок, пипетки, груши, бактериологические петли, спиртовки,
антибиотик бензилпеницилин, МПБ.
Учебно-методическое оснащение: рабочая программа, технологическая карта
комбинированного занятия, дидактический и контролирующий материал.
Этапы и хронология занятия (180 мин):
Этапы занятия
Время,
мин.
Содержание занятия
44
1. Организационный момент
3
Приветствие, проверка присутствующих, внешний вид
студентов, проверка готовности студентов к занятию,
заполнение журнала.
2. Формулировка темы, ее
мотивация
7
3. Определение целей
занятия
5
Тема записывается на доске, студенты в дневниках.
Определение МИК имеет большое значение при изучении
антибиотиков, снижается в значительной мере
последствия антибиотикотерапии.
Разбираются основные цели занятия на уровне знаний,
умений. Доводится до студентов план занятия, который
записывается учащимися в дневник.
4. Контроль исходного
уровня знаний
35
5. Работа над изучаемым
материалом темы
20
6.Отработка практических
манипуляций
Фронтальный опрос:
1. Как поставить чувствительность микроорганизмов к
антибиотикам диско-диффузионным методом?
2. Как проводится учёт чувствительности
микроорганизмов к антибиотикам диско-диффузионным
методом?
3. Определяют ли чувствительность к антибиотикам в
нативном препарате (материале)?
4. Почему диско-диффузионный метод называется
качественным методом?
5. Какие свойства могут изменяться у микроорганизмов
под действием антибиотиков?
6. Какие условия следует соблюдать при применении
антибиотиков?
7. Какие осложнения возникают при антибиотикотерапии?
8. Для каких целей используется метод серийных
разведений?
9. Что такое МИК (минимальная ингибирующая
концентрация) антибиотика?
10. Как проводится учёт результатов?
11. Как проводят учёт результата?
12. Как приготовить микробную взвесь?
1. Перед выполнением практической части идет
объяснение получения рабочей дозы АБ 100 Ед, решение
задачи,
2. Разбор схемы постановки чувствительности
микроорганизмов к АБ, методом серийных разведений.
3. Производится учет и выдача результатов.
Подготовка основного рабочего разведения антибиотика
100 ЕД, подготовка взвеси бактерий по стандарту
мутности, разведение антибиотика по схеме (серийно),
внесение взвеси бактерий, соблюдение асептики,
дез.режима.
45
7.Самостоятельная работа
студентов
73
Этапы выполнения работы:
1. Решение задачи для получения рабочей дозы
антибиотика.
2. Подготовка взвеси культуры: внести в пробирку с
культурой физ. р-р 5 мл. и вращать в ладонях.
3. Пронумеровать пробирки, произвести разведение по
схеме.
4. Термостатирование 37 С, 24 часа.
5. Соблюдение дез.режима.
8. Закрепление изучаемого
материала
25
1. Оформление дневников.
2. Отчет о проделанной работе
9. Итоговый контроль по
теме
10. Подведение итогов
занятия. Комментарий
оценок.
11. Задание на дом
5
Заполнение таблиц, схем, составление графиков, решение
ситуационных задач, тестирование.
Оцениваются ответы.
Проверка дневников.
7
5
Ф.К. Черкес стр 131-145
Список использованной литературы и Интернет-ресурсов:
Медицинская микробиология и иммунология в Интернете.
www.medicum.nnov.ru/nmj/2003/1/38.php
1. Черкес Ф.Г., Богоявленская Л.Б., Бельская Н.А. Микробиология / Под ред. Черкес
Ф.К. – М.: Медицина, 2009. – 512 с., ил.
2. «Медицинская микробиология в графах». Минск «Высшая школа» 1986.
7.4. Технологическая карта практического занятия
ПМ.04. Проведение лабораторных микробиологических исследований.
МДК.01. Теория и практика лабораторных микробиологических исследований.
Специальность, группа: 060604 – Лабораторная диагностика.
Тема занятия: Определение спектра действия антибиотиков дорожки по Флемингу.
Цели занятия:
Образовательная:
1. Закрепить теоретические знания и алгоритм постановки определения
чувствительности микроорганизмов методом серийных разведений;
2. Обобщить и систематизировать знания о подготовки питательной среды для
опыта, подготовка антибиотика, а так же спектр действия антибиотика;
3. Методом Флеминга определяется спектр действия антибиотика.
Развивающая:
1. Самостоятельное приготовление рабочего места для проведения лабораторных
микробиологических исследований;
2. Регистрация результатов микробиологических исследований;
3. Утилизация отработанного материала, дезинфекция и стерилизация
использованной лабораторной посуды, инструментария, средств защиты;
46
5. На методе Флеминга показать, что разные культуры имеют определенный спектр
действия в отношении одного антибиотика.
Воспитательная:
1. Организовывать собственную деятельность, выбирать типовые методы и способы
выполнения профессиональных задач, оценивать их эффективность и качество;
2. Использовать информационно-коммуникабельные технологии в
профессиональной деятельности; работать в коллективе и команде;
3. Четко выполнять все манипуляции, так как от правильности действий зависит
результат;
4. Соблюдать условия асептики и дез.режима при работе с культурами, при
разведении антибиотика.
Студент должен:
Иметь практический опыт:
Уметь:
- вести учетно-отчетную документацию;
- проводить утилизацию отработанного материала, дезинфекцию и стерилизацию,
используемой в лаборатории посуды, инструментария, средств защиты рабочего
места и аппаратуры;
- работать на современном лабораторном оборудовании.
Знать:
- организацию делопроизводства;
Формируемые компетенции:
ПК:
ПК 4.1. Готовить рабочее место для проведения лабораторных микробиологических
исследований.
ПК 4.2. Проводить лабораторные микробиологические и иммунологические
исследования биологических материалов, проб объектов внешней среды и пищевых
продуктов; участвовать в контроле качества.
ПК 4.3. Регистрировать результаты проведенных исследований.
ПК 4.4. Проводить утилизацию отработанного материала, дезинфекцию и
стерилизацию использованной лабораторной посуды, инструментария, средств
защиты.
ОК:
ОК 2. Организовывать собственную деятельность, выбирать типовые методы и
способы выполнения профессиональных задач, оценивать их эффективность и
качество.
ОК 4. Осуществлять поиск и использование информации, необходимой для
эффективного выполнения профессиональных задач, профессионального и
личностного развития.
ОК 5. Использовать информационно-коммуникационные технологии в
профессиональной деятельности.
ОК 8. Самостоятельно определять задачи профессионального и личностного
развития, заниматься самообразованием, осознанно планировать повышение
квалификации.
47
ОК 9. Ориентироваться в условиях смены технологий в профессиональной
деятельности.
ОК 13. Организовывать рабочее место с соблюдением требований охраны труда,
производственной санитарии, инфекционной и противопожарной безопасности.
Уровень освоения: репродуктивный (выполнение деятельности по образцу,
инструкции или под руководством)
Междисциплинарные связи:
Истоки: ТЛР, химия, биология
Выход: инфекционные заболевания
Материально-техническое
оснащение:
культуры
микроорганизмов,
бактериальные петли, пипетки, груши, спиртовки, МПА, расплавленное МПА+ АБ,
скальпель, тпинцет.
Учебно-методическое оснащение: рабочая программа, технологическая карта
комбинированного занятия, дидактический и контролирующий материал.
Этапы и хронология занятия (180 мин):
48
Этапы занятия
Время,
мин.
1. Организационный момент
3
Содержание занятия
Приветствие, проверка присутствующих, внешний
вид студентов, проверка готовности студентов к
занятию, заполнение журнала.
2. Формулировка темы, ее
мотивация
7
3. Определение целей
занятия
5
4. Контроль исходного
уровня знаний
35
Краткий опрос:
1. Цель постановки опыта.
2. Подготовка чашек Петри со средой МПА дл опыта.
3. Для каких целей используется метод дорожки по
Флемингу.
5. Работа над изучаемым
материалом темы
20
1. Объяснение и зарисовка постановки метода
дорожки по Флемингу для определения спектра
действия антибиотика.
2. Демонстрация опыта.
3. Выполнение тестов.
Подготовка чашек Петри с МПА для опыта по
Флемингу, внесение подготовленного антибиотика в
МПА (температура 42-450С) в чашки Петри,
подготовленные для опыта, посев культуры №1 и №
2 в подготовленные чашки Петри с МПА,
Этапы выполнения работы:
1. Подготовка чашек Петри с МПА для постановки
метода Флеминга (получение дорожки).
2. Подготовка антибиотика в агаре (t=42 С).
3. Внесение подготовленного антибиотика в дорожку
чашки Петри с МПА, посев различных культур с
двух сторон дорожки.
4. Термостатирование 37 С, 24 часа.
1. Оформление дневников.
2. Отчет о проделанной работе
6.Отработка практических
манипуляций
7.Самостоятельная работа
студентов
73
8. Закрепление изучаемого
материала
25
9. Итоговый контроль по
теме
10. Подведение итогов
занятия. Комментарий
оценок.
11. Задание на дом
5
7
5
Тема записывается на доске, студенты в дневниках.
Особенность опыта заключается в том, что
используется один антибиотик и несколько разных
культур.
Разбираются основные цели занятия на уровне
знаний, умений. Доводится до студентов план
занятия, который записывается учащимися в
дневник.
Заполнение таблиц, схем, составление графиков,
решение ситуационных задач.
Оцениваются ответы.
Проверка дневников.
Ф.К. Черкес стр 94-145
Список использованной литературы и Интернет-ресурсов:
Медицинская микробиология и иммунология в Интернете.
www.medicum.nnov.ru/nmj/2003/1/38.php
1. Черкес Ф.Г., Богоявленская Л.Б., Бельская Н.А. Микробиология / Под ред. Черкес
Ф.К. – М.: Медицина, 2009. – 512 с., ил.
49
2. «Медицинская микробиология в графах». Минск «Высшая школа» 1986.
3. Качамасова З.Н., Ефремова С.А., Набоков Ю.С. «Микробиология» -М., Медицина
1984.
50
8. Методическая разработка для студентов к практическому занятию
По теме: «Определение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам
методом серийных разведений»
Пояснительная записка
1. Определение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам необходимо
проводить и студент должен помнить:
а) Для постановки чувствительности к антибиотикам следует использовать чистую
культуру;
б) метод серийных разведений является наиболее точным, количественным
методом;
в) активность антибиотиков выражают в ЕД/мл или мкг/мл;
г) метод Флеминга применяют для определения спектра действия антибиотиков
Объясняется взаимосвязь между граммами и ЕД, то есть 1 мкг активного вещества
соответствует 1 ЕД.
Для постановки чувствительности микроорганизмов к антибиотикам методом
серийных разведений производится расчет рабочей дозы антибиотика до 100 ЕД,
помня следующие сочетания:
1 ЕД – 1 мкг
1000 ЕД – 1 мг
100000 ЕД – 1 г
Во флаконе с бензилпенициллином натриевой солью содержание активного
вещества 1000000 ЕД/мл. Расчет основного разведения антибиотика до 100 ЕД/мл.
Во флакон с антибиотиком добавляется 10 мл воды (100000 ЕД/мл).
В 1 пробирку вносится 1 мл из флакона и 9 мл воды (10000 ЕД/мл).
Во 2 пробирку вносится 1 мл из полученного разведения и 9 мл воды (1000 ЕД/мл).
В 3 пробирку вносится 1 мл из полученного разведения и 9 мл МПБ (100 ЕД/мл).
Это и будет исходное рабочее разведение.
Общее время – 180 мин.
Цели:
Образовательная:
1. Закрепить теоретические знания и метод постановки чувствительности
микроорганизмов к антибиотикам диско-диффузионным методом;
2. Механизм устойчивости микроорганизмов к антибиотикам, подготовка рабочей
взвеси, подготовка разведений;
3. Алгоритм постановки чувствительности микроорганизмов к антибиотикам
методом серийных разведений;
4. Методом Флеминга определяется спектр действия антибиотика.
Развивающая:
1. Самостоятельное приготовление рабочего места для проведения лабораторных
микробиологических исследований;
2. Регистрация результатов микробиологических исследований;
51
3. Утилизация отработанного материала, дезинфекция и стерилизация
использованной лабораторной посуды, инструментария, средств защиты;
4. Показать, что определение МИК антибиотиков имеет большое значение при
лечении больных;
5. На методе Флеминга показать, что разные культуры имеют определенный спектр
действия в отношении одного антибиотика.
Воспитательная:
1. Организовывать собственную деятельность, выбирать типовые методы и способы
выполнения профессиональных задач, оценивать их эффективность и качество;
2. Использовать информационно-коммуникабельные технологии в
профессиональной деятельности; работать в коллективе и команде;
3. Четко выполнять все манипуляции, так как от правильности действий зависит
результат;
4. Соблюдать условия асептики и дез.режима при работе с культурами, при
разведении антибиотика.
Студент должен:
Иметь практический опыт:
Уметь:
- вести учетно-отчетную документацию;
- осуществлять подготовку реактивов, лабораторного оборудования и аппаратуры
для исследования;
- проводить утилизацию отработанного материала, дезинфекцию и стерилизацию,
используемой в лаборатории посуды, инструментария, средств защиты рабочего
места и аппаратуры;
- работать на современном лабораторном оборудовании;
- поставить метод дорожки по Флемингу для определения спектра действия
антибиотики.
Знать:
- организацию делопроизводства;
- значение антибиотикочувствительности и антибиотикоустойчивости бактерий в
микробиологической диагностике;
- механизм возникновения устойчивости бактерий к антибиотикам.
Формируемые компетенции:
ПК:
ПК 4.1. Готовить рабочее место для проведения лабораторных микробиологических
исследований.
ПК 4.2. Проводить лабораторные микробиологические и иммунологические
исследования биологических материалов, проб объектов внешней среды и пищевых
продуктов; участвовать в контроле качества.
ПК 4.3. Регистрировать результаты проведенных исследований.
ПК 4.4. Проводить утилизацию отработанного материала, дезинфекцию и
стерилизацию использованной лабораторной посуды, инструментария, средств
защиты.
ОК:
52
ОК 2. Организовывать собственную деятельность, выбирать типовые методы и
способы выполнения профессиональных задач, оценивать их эффективность и
качество.
ОК 4. Осуществлять поиск и использование информации, необходимой для
эффективного выполнения профессиональных задач, профессионального и
личностного развития.
ОК 5. Использовать информационно-коммуникационные технологии в
профессиональной деятельности.
ОК 8. Самостоятельно определять задачи профессионального и личностного
развития, заниматься самообразованием, осознанно планировать повышение
квалификации.
ОК 9. Ориентироваться в условиях смены технологий в профессиональной
деятельности.
ОК 13. Организовывать рабочее место с соблюдением требований охраны труда,
производственной санитарии, инфекционной и противопожарной безопасности.
8.1. Оснащение занятия
№
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.
14.
15.
16.
17.
18.
19.
20.
21.
22.
23.
Наименование
Антибиотик - бензилпенициллиновая Na соль с
1.000000ЕД
Физиологический раствор
МПБ
Пипетки стерильные
Пастеровские пипетки
Культура на МПА
Чашки Петри с МПА
Стерильные скальпеля
МПА (темп. 450С)
бактериальные петли
Культура E.coli на МПА
Спиртовки
Карандаши по стеклу
Груши резиновые
Кюветы
Емкости с 3 % р-р хлорамина для сброса
отработанного материала, пипеток
Дезинфицирующие средства 3 % хлорамин
Чистая ветошь
3 % р-р хлорамина для ветоши
Термостат
Микротаблицы
Таблицы
Пробирки стерильные
53
Необходимое
количество
Имеется
4х2=8
4х2=8
500 мл
500 мл
32
16
4х2
4х2
500 мл
500 мл
32
16
4х2
4х2
8 пр.
8
8
8
8
8
4
8 пр.
8
8
8
8
8
4
8
8
на каждом рабочем
месте
на общем столе
на общем столе
1
8
2
120
на каждом
рабочем месте
на общем столе
на общем столе
1
8
2
120
8.2. Перечень практических навыков
№
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
Наименование манипуляций
Подготовка основного рабочего
разведения антибиотика 100 ЕД.
Подготовка взвеси бактерий по стандарту
мутности.
Разведение антибиотика по схеме
(серийно).
Внесение взвеси бактерий.
Подготовка чашек Петри с МПА для
опыта по Флемингу.
Внесение подготовленного антибиотика в
МПА (температура 42-450С) в чашки
Петри, подготовленные для опыта.
Посев культуры №1 и № 2 в
подготовленные чашки Петри с МПА.
В начале занятия
В конце занятия
представление
умение
умение
навыки
умение
навыки
умение
навыки
представление
умение
представление
умение
представление
умение
Соблюдение асептики, дез.режима.
8.3. Учебная карта работы студента на занятии
№
1.
Этапы
Организационный
момент.
Вступительное слово
преподавателя.
2.
3.
Контроль готовности
по теме.
Промежуточный
инструктаж.
4.
Самостоятельная
работа студентов.
5.
Деятельность
студентов
Подготовка к практическому
занятию (форма, дневники,
учебники, лекции).
Слушают, акцентируют внимание
на важности темы.
Отвечают на поставленные
вопросы.
1. Знакомятся с соотношением 1
мг и 1 ЕД.
2. Вместе с преподавателем
решают задачи на расчётное
получение рабочего (основного)
дозы антибиотика - 100 ЕД.
3. Разбирают постановку
чувствительности
микроорганизмов к антибиотикам
методом серийных разведений по
микросхеме.
1. Решение задач на получение
рабочей дозы антибиотика - 100
ЕД.
2. Подготовка взвеси культуры
микроорганизмов.
3.Получение основной (рабочей)
дозы антибиотика.
4. Алгоритм постановки опыта для
определения чувствительности
микроорганизмов к антибиотикам
54
Контроль
Время
3 мин.
Для каких целей
определяют
чувствительность
микроорганизмов к
антибиотикам.
7 мин.
Фронтальный опрос.
20
мин.
1. Как переносится
раствор из пробирки в
пробирку?
2. Соблюдаются ли
правила асептики при
работе с пипетками.
1.Как приготовить взвесь
микроорганизмов?
2. Для каких целей
используется
определение МИК.
20
мин.
95
мин.
Промежуточный
инструктаж.
6.
Самостоятельная
работа студентов.
7.
8.
Контроль конечного
уровня знаний
Подведение итогов
9.
10.
Домашние задание
методом серийных разведений
(разводится антибиотик от 100ЕД
до (1 опыт на 2-х)
5. Термостатирование 37 С, 24
часа.
1. В процессе работы слушают
преподавателя, который
акцентирует внимание на
соблюдение правил асептики и
дез. режима при работе с
культурой, на технику переноса
ингредиентов из пробирки в
пробирку.
2. Демонстративный просмотр
постановки дорожки по Флемингу.
1.Учёт чувствительности
микроорганизмов к антибиотикам
диско-диффузионным методом.
2. Подготовка чашек Петри с МПА
для постановки опыта по
Флемингу (получение дорожки).
3. Подготовка антибиотика в агаре
МПА (температура 45 градусов).
4. внесение подготовленного
антибиотика в дорожки чашек
Петри с МПА.
5. Посев культуры №1 и №2
перпендикулярно дорожке.
6. Термостатирование 37 С, 24
часа.
7. Обработка рабочего места 3% рр хлорамина, мытьё рук 0,5% р-р
хлорамина.
8. В дневник заносится схема
постановки опыта
чувствительности
микроорганизмов к антибиотикам
методом серийных разведений.
Выполнение тестов, графических
диктантов, решение кроссвордов,
задач.
Слушают подведение итогов с
итогов с комментированием
оценок.
Домашнее задание Ф.К. Черкес
стр 131-145
55
1. Какие условия следует
соблюдать при работе с
живой культурой?
2. Почему используется
МПА при температуре
45 градусов?
15мин.
Как проводится учёт
результатов?
80
мин.
20
мин.
7 мин.
3 мин.
Определение чувствительности бактерий к антибиотикам методом серийных
разведений в жидкой питательной среде
Ингредиенты,
(мл)
Бульон
(МПБ)
Антибиотик в
исходном
разведении
Исходное
разведение
антибиотика
100 ЕД
Культура
1
2
3
4
Опыт
5
6
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
1
50
25
12,5
6,25 3,125 1,562 0,781 0,390 0,195 0,097
0,1
0,1
0,1
0,1
0,1
0,1
7
8
9
10
0,1
0,1
0,1
0,1
Контроль
КК КА
1
-
1
0,1
-
Инкубация t=37°С, 18-24 часа
Результат
Учет результатов «Определение чувствительности бактерий к антибиотикам
методом серийных разведений»
Учет результатов «Определение спектра действия антибиотиков дорожки по
Флемингу»
Преподаватель проверяет правильность выбора исходного разведения. Если
возникли затруднения, учащиеся вызываются к доске и проводится решение. Для
постановки чувствительности к антибиотикам методом серийных разведений на
каждое рабочее место дается раздаточный материал – «Схема постановки
чувствительности к антибиотикам методом серийных разведении».
Руководствуясь схемой и имея культуру и рассчитанное исходное разведение
учащиеся ставят опыт (схема переносится в дневник). Во время постановки
преподаватель обращает внимание на соблюдение стерильности при работе с
56
культурой, при переносе материала из пробирки в пробирку, технику переноса,
соблюдение дез.режима.
После проведения практической части учащиеся ставят посевы в термостат,
проводят дезобработку рабочего места, обрабатывают руки.
Для проверки усвоения знаний проводится тестовый контроль.
В конце занятия подводится итог:
9. Заключение:
1. Определение чувствительности к антибиотикам методом дисков и лучше всего
методом серийных разведений, когда определяется МИК антибиотика позволяет
врачу сделать:
- правильный выбор антибиотика;
- вводить в организм в терапевтической концентрации:
а) обычной терапевтической дозой;
б) максимальной терапевтической дозой;
в) вводится антибиотик непосредственно в очаг;
г) или же выбор другого антибиотика, если выделенный штамм подавляется данной
концентрацией и нужную концентрацию нельзя создать данным антибиотиком.
2. Выявление МИК и введение антибиотика в организм в терапевтической дозе и
поддерживание этой дозы (концентрации) в течении всего курса лечения до
ликвидации инфекционного процесса обеспечивает терапевтический эффект.
3. Избежание осложнений при неправильном применении антибиотиков.
Подводится итог фронтального опроса, тестовых контролей и дополнительных
заданий.
Обозначения:
МИК - антибиотика это критерий чувствительности микроорганизма к
антибиотикам, которая ингибирует (задерживает) рост возбудителя заболевания при
стандартных условиях постановки опыта.
57
10. Список используемых источников
1. К.Д. Пяткин «Микробиология»
2. Ф. К. Черкес «Микробиология»
3. З.Н. Кочемасов «Микробиология»
Ф. К. Черкес «Руководство к практическим занятием по микробиологическим
исследованиям»
ТЕСТОВЫЙ КОНТРОЛЬ ПО ТЕМЕ:
"ХИМИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЕ ПРЕПАРАТЫ И АНТИБИОТИКИ"
ВАРИАНТ 1
1. Кто из ученых синтезировал первые химиотерапевтические препараты?
а) Пастер;
б) Эрлих;
в) Ермольева;
г) Флеминг;
д) Ваксман;
е) Токин.
2. Какие из антибиотиков были получены из грибов:
а) левомицетин;
б) стрептомицин;
в) пеницциллин;
г) интерферон;
д) лизоцим;
е) ампициллин; ё) кмолин;
ж) нистатин;
з) аллилсат; и)оксациллин.
3. Назовите какой антибиотик нарушает синтез клеточной стенрси бактерий:
а) стрептомицин;
б) тетрациклин;
в) полимиксин;
г) левомицетин;
д) канамицин;
е) пенициллин;
ё) рубомицин;
ж) нистатин;
з) цевалоспорин.
4. Какой из перечисленных методов используется для определения МИК
антибиотика?
а) метод стандартных дисков;
б) метод серийных разведений;
58
5. Назовите антибиотики широкого спектра действия:
а) стрептомицин;
б) пенициллин;
в) оксациллин;
г) мапициллин;
д) тетрациклин;
е) левомицетин;
ё) хлортетрациклин;
ж) метациклин;
з) цефалоспорин;
и) окситетрациклин.
6. Какие антибиотики применяют при дисбактериозе:
а) метациклин;
б) нистатин;
в) фунгициды;
г) леворин.
7. Какая группа антибиотиков угнетает синтез НК в клетках?
а) антибактериальные;
б) противогрибковые;
в) противоопухолевые.
8. В каких случаях возникают рецидивы? Или, что способствует возникновению
рецидива?
а) развитие аллергии;
б) дисбактериоз;
в) нарушение иммунитета;
д) кандидоз;
е) токсические реакции;
ё) тератогенное действие антибиотика.
59
ВАРИАНТ 2
1. Назовите ученого, которому принадлежит открытие пенициллина:
а) Мечникову;
б) Пастеру;
в) Флемингу;
г) Токину;
д) Чейну;
е) Ермольевой.
2. Назовите антибиотики, полученные из антиномиитов:
а) пенициллин;
б) интерферон;
в) нистатин;
г) рифампициллин;
д) экмолин;
е) олеандомицин; ё) стрептомицин;
ж) эритромицин;
з) грамицидин;
и) линкомицин;
к) полимиксин.
3. Назовите антибиотики пролонгированного действия:
а) полимиксин;
б) тетрациклин;
в) бензилпенициллин;
г) бициллин;
д) леворин;
е) леюмицетин.
4. Назовите антибиотики противогрибковые:
а) левомицетин;
б) нистатин;
в) стрептомицин;
г) интерферон;
д) бициллин;
е) леворин;
ё) полимиксин;
ж) гризеофульвин
5. Назовите антибиотики, нарушающие целостность цитоплазматической
мембраны грибов:
а) рифамицин;
б) тетрациклин;
в) стрептомицин;
г) нистатин;
д) мономицин;
60
е) леюрин;
ж) пенициллин;
з) грезиофульвин.
6. Назовите осложнение, возникающее после применения антибиотиков широкого
спектра действия:
а) гиповитаминоз;
б) кандидоз;
в) аллергии;
г) дисбактериоз;
д) нарушение иммунитета.
7. Назовите тип действия антибиотиков, обладающих бактериоцидными
действием:
а) антигрибковые;
б) противовирусные;
в) антибактериальные.
8. Какой из перечисленных методов относится к качественному методу
определения чувствительности к антибиотикам?
а) метод серийных разведений;
б) метод стандартных дисков;
ВАРИАНТ 3
1. Назовите ученого, которому принадлежит открытие антибиотиков, полученных
из растений:
а) Пастер;
б) Мечников;
в) Ермольева;
г) Токин;
д) Чейн;
е) Флеминг.
2. Назовити антибиотики, полученные из тканей животных и человека:
а) пенициллин;
б) интерферон;
в) стрептомицин;
г) полимиксин;
д) лизоцим;
е) левомицетин;
ё) экмолин;
ж) канамицин;
з) фитонциды;
и) нистатин;
к) аллипсат.
61
3. Назовите антибиотики, действующие на Грам- и Грам+ флору:
а) пенициллин;
б) стрептомицин;
в) цефалоспорин;
г) гентамицин;
д) канамицин;
е) метациклин; ё) мономицин;
ж) бензилпенициллин.
4. Назовите антибиотики, продуцируемые бактериями:
а) стрептомицин;
б) полимиксин;
в) пенициллин;
г) грамицидин;
д) экмолин;
е) интерферон;
ё) канамицин.
5. Какие препараты предупреждают развитие дисбактериоза?
а) экмолин;
б) бификол;
в) интерферон;
г) колибактерин;
д) лизоцим;
е) нистатин.
6. Какие осложнения возникают при применении антибиотиков тетрациклинового
ряда?
а) аллергии;
б) анафилактический шок;
в) органотропные реакции;
г) кандидозы;
д) дисбактериозы;
е) гиповитаминозы; ё) обострение.
7. Какие антибиотики нарушают генетический код?
а) тетрациклин;
б) пенициллин;
в) нистатин;
г) мономицин;
д) леворин;
е) стрептомицин;
ё) гентамицин.
8. Назовите какие свойства относятся к изменению состава микробной клетки под
действием антибиотиков:
а) снижение вирулентности;
б) изменения количества НКкислот;
в) замедление скорости роста;
62
г) изменение антигенных свойств;
д) нарушение биохимических свойств;
е) понижение количества белка.
63
ВАРИАНТ 4
1. Назовите имя ученого, которому принадлежит открытие лизоцима:
а) Токин;
б) Ермольева;
в) Флеминг;
г) Пащенков;
д) Линдеман.
2. Назовите антибиотики, полученные синтетическим путем:
а) интерферон;
б) пенициллин;
в) левомицетин;
г) тетрациклин;
д) ампициллин;
е) метациклин;
ё) нистатин;
ж) бензилпенициллин;
з) стрептомицин;
и) оксациллин;
к) мономицин.
3. Назовите противогрибковые антибиотики:
а) метациклин;
б) нистатин;
в) цефалоспорин;
г) леворин;
д) тетрациклин;
е) гризеофульвин;
ё) гентамицин;
ж) амфотерицин.
4. Назовите антибиотик, действующий на Грам- флору:
а) пенициллин;
б) стрептомицин;
в) экмолин;
г) нистатин;
д) полимиксин;
е) тетрациклин;
ё) мономицин;
5. Назовите, какие свойства относятся вызывающие возникновение атипичных
культур под действием антибиотиков:
а) замедление скорости роста;
б) изменение количесява НК кислот;
в) снижение вирулентности;
г) снижение сбраживания углеводов;
д) изменение антигенных свойств;
е) понижение количества белка;
6. Какие антибиотики предупреждают развитие кандидоза:
а) лизоцим;
64
б) нистатин;
в) интерферон;
г) экмолин;
д) леворин.
7. Какое действие оказывают противовирусные препараты на клетку:
а) угаетают развитие;
б) ингибируют ДОК;
в) угаетают рост.
8. Какие антибиотики оказывают вредное влияние на организм плода? /прямое/
а) экмолин;
б) пенициллин;
в) интерферон;
г) тетрациклин;
д) мономицин;
е) хлортетрациклин;
ё) метациклин.
65
ВАРИАНТ 5
1. Назовите имя ученого, которому принадлежит открытие экмолина:
а) Токин;
б) Флеминг;
в) Ермольева;
г) Линдеман;
д) Мечников.
2. Назовите антибиотики, полученные полусинтетическим путем:
а) ампициллин;
б) левомицетин;
в) интерферон;
г) нистатин;
д) метациклин;
е) метициллин;
ё) пенициллин;
ж) оксациллин;
з) тетрациклин;
и) бициллин.
3. Назовите препараты, полученные из симбиотической микрофлоры кишечника:
а) экмолин;
б) интерферон;
в) бификол;
г) лизоцим;
д) колибактерин;
е) нистатин;
ё) бифидумбактерин.
4. Назовите антибиотики, оказывающие токсическое действие:
а) Стрептомицин;
б) пенициллин;
в) мономицин;
г) неомицин;
д) тетрациклин;
е) окситетрациклин.
5. В каких случаях возникают рецидивы?
а) аллергические реакции;
б) органотропные реакции;
в) прямое действие на плод;
г) дисбактериозы;
д) кандидозы;
е) нарушение иммунитета;
ё) реакция обострения.
66
6. Какие препараты вызывают целостность цитоплазматической мембраны?
а) рифампицин;
б) нистатин;
в) стрептомицин;
г) леворин;
д) грезиофульвин;
е) мономицин.
7. Назовите антибиотики, продуцируемые бактериями:
а) экмолин;
б) канамицин;
в) пенициллин;
г) нистатин;
д) интерферон;
е) полимиксин;
ё) грамицидин.
8. В какой группе антибиотиков содержатся аминосахара?
а) тетрациклины;
б) полипептиды;
в) аминогликозиды;
г) макролиды.
ВАРИАНТ 6
1.Кому из ученых принадлежит открытие практического использования
антибиотиков?
а) Мечникову;
б) Ермольевой;
в) Пастеру;
г) Флемингу;
д) Коху;
е) Чейну;
2.Какие антибиотики получены из тканей человека:
а) тетрациклин;
б) пенициллин;
в) экмолин;
г) нистатин;
д) интерферон;
е) лизоцим;
ё) леюрин;
ж) ампенициллин;
з) канамицин;
и) мономицин.
3.Какие антибиотики могут вызвать поражение печени?
67
а) мономицин;
б) тетрациклин;
в) канамицин;
г) метациклин;
д) пенициллин;
е) хлортетрациклин;
ё) эритромицин;
ж) окситетрациклин;
з) олиотетрин;
и) метациклин;
к) ампенициллин.
4.С какими факторами связана резистентность микроорганизмов к
антибиотикам?
а) выработкой коагулазы;
б) Сол-фактором;
в) выработкой пенициллиназы;
г) Р - фактором;
д) Ф - фактором;
е) В - лактамазой.
5.Какой антибиотик обладает широким антивирусным спектром и видовой
специфичностью?
а) лизоцим;
б) экмолин;
в) пенициллин;
г) аллилсат;
д) мономицин;
е) интерферон;
ё) нистатин.
6.Какой из антибиотиков замедляет рост Грам+ и Грам- бактерий?
а) ампициллин;
б) рифампициллин;
в) пенициллин;
г) метициллин;
д) тетрациклин;
е) мономицин.
7.Какие антибиотики вызывают аллергии?
а) тетрациклин;
б) пенициллин;
в) мономицин;
г) стрептомицин;
д) ампенициллин;
е) эритромицин.
8.Какие антибиотики угнетают синтез НК кислот?
68
а) противогрибковые;
б) противовирусные;
в) антибактериальные;
г) аминогликозиды;
д) противоопухоливые.
12. Графический диктант
ВАРИАНТ 1
Правильно ли даны определения и понятия?
(изобразить графически: правильные ответы - в виде дуги над прямой,
неправильные - под прямой)
1. При лечении инфекционных болезней не используют явление антогонизма
бактерий.
2. Действие антибиотика зависит от природы и концентрации антибиотика.
3. Бактериоцидное действие антибиотика вызывает гибель микроорганизмов.
4. Кандидомикоз - это заболевание, сопровождающееся нарушением нормальной
микрофлоры организма.
5. Активность антибиотика выражается в ЕД и мкг.
6. Антибиотики широкого спектра действия в организме действуют длительное
время.
7. Аллергия - это состояние повышенной чувствительности организма на действие
лечебного препарата.
8. Антибиотики - это конечный продукт метаболизма микроорганизмов.
9. Фитонциды - это антибиотики, продуцируемые тканями животных.
10. Активность антибиотиков выражают в МИК.
ВАРИАНТ 2
Правильно ли даны определения и понятия?
(изобразить графически правильные ответы в виде дуги над прямой,
неправильные - под прямой)
1. Противовирусные антибиотики угнетают синтез нуклеиновых кислот.
2. Противоопухолевые антибиотики угнетают синтез нуклеиновых кислот.
3. Химиопрепараты действуют на клетки возбудителя и не действуют на клетки и
ткани человека.
4. Анафилактический шок - это осложнение после применения антибиотиков.
5. Нистатин предупреждает развитие дисбактериоза.
6. Активность фага выражается в МИК.
7. Критерий чувствительности микроорганизмов к антибиотикам выражается титром:
8. Характер действия антибиотиков на микробную клетку зависит от концентрации.
2
6
69
7
1
3
4
5
8
9
10
9. Кандидоз - это грибковое поражение кожи, слизистых оболочек, внутренних
органов.
10. Дисбактериоз - это грибковое поражение кожи, слизистых оболочек, внутренних
органов.
ВАРИАНТ 3
Правильно ли даны определения и понятия?
/изобразить графически: правильные ответы в виде дуги над прямой,
неправильные - под прямой/.
1. При лечении инфекционных болезней используют явление антогонизма бактерий.
2. Характер действия антибиотика на микробную клетку зависит от концентрации.
3. Бактериостатическое действие антибиотика вызывает гибель микроорганизмов.
4. Кандидомикоз - это заболевание сопровождающееся нарушением нормальной
микрофлоры организма.
5. Активность антибиотиков выражается в ЕД и мкг.
6. Критерий чувствительности микроорганизмов к антибиотикам выражается титром.
1
2
3
5
6
4
8
7
9
10
7. Антибиотики пролангированного действия обладают длительным лечебныМ
действием.
8. Бактериоцидное действие антибиотиков вызывает гибель микроорганизма.
9. Химиопрепараты действуют на микроорганизмы и не действуют на клетки и ткани
человека.
10. Рифимпицин - антибиотик резерва.
70
13. Карточки с заданием
КАРТОЧКА № 1
1. Какие осложнения вызывают антибиотики при неправильном применении
и дать понятия этих осложнений.
КАРТОЧКА №2
1. Дать понятия следующим явлениям:
а) бактерицидное действие антибиотиков;
б) бактериостатическое действие антибиотиков;
в) бактериолитическое действие антибиотиков.
КАРТОЧКА № 3
1. Дать понятия:
а) антибиотики широкого спектра действия;
б) антибиотики пролангированного действия;
в) антибиотики антимикробного действия.
КАРТОЧКА № 4
1. Перечислить правила применения антибиотиков, чтобы наступил
терапевтический эффект.
71
КЛАССИФИКАЦИЯ АНТИБИОТИКОВ
ВАРИАНТ 1
Найти соответствие определений терминам.
1. По источнику выделения;
2. По спектру действия;
3. По способам получения;
4. По механизму действия.
(синтетические, антимикробные, полусинтетические, из животных и растений,
антигрибковые,
из
грибов,
актиномицет,
противоопухолевые,
противовирусные)
ВАРИАНТ 2
1. По источнику выделения;
2. По спектру действия;
3. По способам получения;
4. По механизму действия.
(синтетические, противовирусные, противоопухолевые, полусинтетические,
антигрибковые, антимикробные, из грибов, актиномицет, из тканей животных и
растений)
ВАРИАНТ 3
1. По источникам выделения;
2. По спектру действия;
3. По механизму действия;
4. По способу получения.
(синтетические, антимикробные, полусинтетические, из тканей животных и
растений, из грибов, актиномицет, противоопухолевые, противовирусные,
антигрибковые)
ВАРИАНТ 4
1. По механизму действия;
2. По способам получения;
3. По спектру действия;
4. По источникам выделения.
(из тканей животных и растений, синтетические, противоопухолевые,
антимикробные,
из
грибов,
актиномицет,
полусинтетические,
противовирусные, антигрибковые).
72
ВАРИАНТ 5
1. По источникам выделения;
2. По механизму действия;
3. По способам получения;
2. По спектру действия.
(из
грибов,
актиномицет,
антимикробные,
противоопухолевые,
синтетические, из тканей животных и растений, полусинтетические,
противовирусные, антигрибковые).
ВАРИАНТ 6
1. По спектру действия;
2. По источникам наделения;
3. По механизму действия;
4. По способам получения.
(из грибов, актиномицет, антигрибковые, синтетические, противоопухолевые,
полусинтетические, антимикробные, из тканей животных и растений,
противовирусные).
ВАРИАНТ 7
1. По способам получения;
2. По механизму действия;
3. По источникам выделения;
4. По спектру действия.
(антимикробные, противоопухолевые, противовирусные, полусинтетические, из
грибов, актиномицет, антигрибковые, из тканей животных и растении,
синтетические).
ВАРИАНТ 8
1. По источникам выделения;
2. По спектру действия;
3. По способам получения;
4. По механизму действия.
(синтетические,
противовирусные,
антигрибковые,
антимикробные,
полусинтетические, из тканей животных и растений, из грибов, актиномицет,
противоопухолевые).
73
14. Кроссворд по теме «ХИМИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИЕ ПРЕПАРАТЫ.
АНТИБИОТИКИ».
19
18
16
21
14
15
17
1
20
5
А
Н
Т
И
Б
И
О
Т
И
К
И
13
3
6
9
2
11
10
8
4
По горизонтали:
2. Кем были открыты химиотерапевтические препараты.
4. Антибиотик, полученный из грибов.
8. Какой антибиотик используется при лечении оспы.
10. Устойчивость к антибиотикам.
13. Кем были открыты фитонцида.
15. Антибиотик, полученный из микрофлоры кишечника.
17. Полусинтетический пенициллин.
20. Кто открыл пенициллин.
По вертикали:
1. Лечение лиц страдающих инфекционными болезнями.
3. Антибиотики называют продуктами какого процесса.
4. Кто изучал роль гнилостных бактерий на сибире-язвенную палочку.
5. Какое действие вызывает гибель бактерии.
6. Антибиотик актиномицетного происхождения.
7. Антибиотик, получаемый из хрящей акулы.
9. Антибиотик, противогрибкового происхождения.
11. Нарушение микрофлоры организма.
12. Противоопухолевые антибиотики.
14. Антибиотик, образующийся в организме под действием вируса.
16. Антибиотик, антиномецетного происхождения.
18. Состояние повышенной чувствительности к антибиотикам.
19. Какой синтез лежит в основе полусинтетического способа получения антибиотика.
21. Антибиотик, полученный из тканей рыб.
74
ЭТАЛОНЫ ОТВЕТОВ
КРОССВОРД
По горизонтали:
2. Эрлихом.
4. Пенициллин.
8. Метидазон.
10. резистентность.
13. Токин.
15. бифиол.
17. Метициллин.
20. Флеминг.
По вертикали:
1. Химиотерапия.
3. Метоболизм.
4. Пастер.
5. Бактерицидное.
6. Макролиды.
7. Нятрекс.
9. Нистотин.
11. Дисбактермоз.
12. Рубомицин.
14. Интерферон.
16. Полиены.
18. Аллергия.
19. Биологический
21. Экмолин.
ГРАФИЧЕСКИЙ ДИКТАНТ
ВАРИАНТ № 1
2
3
1
5
7
4
8
6
10
9
ВАРИАНТ № 2
2
3
4
1
8
5
ВАРИАНТ № 3
1
2
4
6
5
7
7
3
6
75
9
10
8
9
10
ЭТАЛОНЫ ОТВЕТОВ
КАРТОЧКА № 1
ОСЛОЖНЕНИЯ
1. Аллергические реакции
2. Кандидозы
3. Дисбактериозы
4. Прямое токсическое действие на органы, ткань
5. Действие на развитие плода
6. Гиповитаминоз
7. На иммунную систему
8. Обострение
7. Комбинации антибиотиков с вакцинами и сыворотками
КАРТОЧКА № 2
а) Гибель микроорганизма
б) Угнетают рост и размножение микроорганизма
в) Вызывают лизис
КАРТОЧКА № З
а) Антибиотики действуют на ГРам (+) и Грам (−) флору
б) Антибиотики обладают длительным сроком действия
в) Антибиотики действуют на микроорганизмы
КАРТОЧКА № 4
1.
2.
3.
4.
5.
6.
Правильный выбор антибиотика со знанием спектра действия.
Введение антибиотика в терапевтической концентрации.
Определение чувствительности возбудителей к антибиотикам.
Способ введения антибиотика.
Создание активной концентрации антибиотика во время курса лечения.
Правильное сочетание антибиотика.
76
ЭТАЛОНЫ ОТВЕТОВ
ТЕСТОВЫЙ КОНТРОЛЬ
ВАРИАНТ № 1
1. в
2. в,е,и
3. е,з
4. б
5. д,ж,з,и
6. б
7. в
8. г
ВАРИАНТ № 4
1. г
2. в
3. б,д,е,ж
4. д
5. в,г,д
6. б
7. б
8. г,е
ВАРИАНТ № 2
1. в
2. е,ж,и
3. г
4. б,е,ж
5. д,е,з
6. а,б,з
7. в
8. б
ВАРИАНТ № 5
1. в
2. а,е,ж
3. в,д,е
4. д,е
5. е
6. б,г,д
7. е
8. в
ВАРИАНТ № 3
1. г
2. б,е
3. б,а,ж
4. б,г
5. б,г,д
6. в
7. а
8. а,в,д
ВАРИАНТ № 6
1. б
2. д,е
3. б,е,ж
4. в
5. е
6. д
7. б,г
8. д
Таблица - КЛАССИФИКАЦИЯ АНТИБИОТИКОВ
Вариант № 1
Вариант № 2
Вариант № 3
Вариант № 4
1 . - 4,6
2. - 2,5
3. - 1,3
4. - 7,8
Вариант № 5
1. - 7,8
2. - 5,6
3. - 1,4
4. - 2,3
Вариант № 6
1. - 4.5
2. - 2.8
3. - 6,7
4. - 1.3
Вариант № 7
1. - 3,7
2. - 2,6
3. - 4,8
4. - 1,5
Вариант № 8
1. - 1,5
2. - 3,7
3. - 4,6
4. - 2,8
1. - 2,6
2. - 1,7
3. - 4,8
4. - 3,8
1. - 4,8
2. - 2,3
3. - 5,7
4. - 1,6
1. - 6,7
2. - 3,4
3. - 1,5
4. - 2,8
77
ПРАВИЛА РАБОТЫ
В МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЙ ЛАБОРАТОРИИ
1. Работа в микробиологической лаборатории производится с заразным
материалом, что требует особой тщательности и соблюдения правил
личной и общественной безопасности при её выполнении.
2. Б помещении лаборатории необходимо особенно строго соблюдать
чистоту и порядок. На рабочем столе не должно быть никаких
посторонних предметов. Запрещается курение, прием пиши» излишние
разговоры и суета.
3. Работы производятся обязательно в халатах, косынках или шапочках.
4. Каждый студент имеет в лаборатории постоянное рабочее место и
микроскоп для работы.
5. Материал для работы принимает дежурный по группе у лаборанта и
раздается студентам в присутствии преподавателя.
6. В конце занятия студенты сдают весь материал дежурному, который в
свою очередь сдает его преподавателю или лаборанту.
7. До начала занятия следует записать в тетрадь программу к
подготовиться к её выполнению. В процессе работы производятся
записи и зарисовки.
8. Все приметы, которые были использовании при работе с живыми
микробами (петли, пипетки, предметные стекла и др.), должны быть
обеззаражены либо прожиганием на пламени (петли), либо погружением
в дезинфицирующий раствор.
9. В конце занятия студент должен:
1) привести в порядок свое рабочее место,
2) сдать дежурному весь материал, микроскоп,
3) вымыть руки дез. раствором и мылом,
4) представить альбом с зарисовками и протоколами для подписи
преподавателю.
78