Вакцины нового поколения: Клиническое исследование

ВАКЦИНЫ НОВОГО ПОКОЛЕНИЯ: КЛИНИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ
ПАНДЕМИЧЕСКОЙ H5N1 DELNS1 ГРИППОЗНОЙ ВАКЦИНЫ
Шурыгина А-П.С., Стукова М.А., Ерофеева М.К., Охапкина Е.А., Максакова В.Л.,
Поздеев В.К., Романовская-Романько Е.А., , Войцеховская Е.М., Вакин В.С, Васильева
А.А., Кривицкая В.З., Романова Ю.Р., Егоров А.Ю., Киселев О.И.
ФГБУ «Научно-исследовательский институт гриппа» Минздравсоцразвития России, г.
Санкт-Петербург.
Введение. НИИ гриппа совместно с компанией АВИР Грин Хилс Биотехнолоджи (GHB)
(Австрия, Вена) разрабатывает новый подход к созданию интраназальных гриппозных
вакцин на основе дефектных по репликации вирусов гриппа с удаленным геном NS1
(delNS1). Делеция гена NS1 приводит к неспособности вируса реплицироваться в
интерферон-компетентных клетках и организмах (Egorov et al., 1998; Garcia-Sastre et al.,
1998). При интраназальном введении вакцинный вирус способен инфицировать
эпителиальные клетки, но не производит инфекционное потомство, и вследствие этого не
распространяется из носоглотки привитых. В то же время, несмотря на отсутствие
репликации, delNS1 вакцинные вирусы являются достаточно иммуногенными из-за
повышенной продукции цитокинов в месте аппликации вакцины (назальный эпителий).
Местное высвобождение цитокинов, таких как интерфероны первого типа и ИЛ-1,
стимулирует мукозальный иммунитет, опосредованный секреторными антителами класса
IgA, цитотоксический иммунитет, а также системный В - и Т- клеточный иммунный ответ.
Вследствие этого, вакцина NS1 иммуногенна и способна обеспечить перекрестную
защиту даже без использования адъювантов. Безопасность и эффективность delNS1
вакцинных вирусов была продемонстрирована на различных животных моделях, в том
числе приматах (Ferko et al., 2004; Romanova et al., 2009).
Цель исследования. Основной задачей 1 фазы данного исследования являлась оценка
безопасности и переносимости двух доз delNS1 вакцинного препарата, полученного с
помощью
методов
обратной
генетики
на
основе
вирусного
штамма
A/Вьетнам/1203/04(H5N1) - вакцинный реассортант с модификацией в сайте расщепления
гемагглютинина и удаленным NS1 геном. Также в задачи исследования входила оценка
местного и системного иммунных ответов и фармакокинетики (вирусовыделения) данного
препарата при двукратном аэрозольном интраназальном введении.
Материалы и методы. Согласно протоколу исследования (фаза 1, двойное слепое,
плацебо-контролируемое исследование) 36 здоровых добровольцев мужского и женского
пола, в возрасте от 18 до 50 лет с титрами специфических антител к вирусам гриппа A
H5N1 и H1N1 <1:10 были рандомизированы в соотношении 2:1 в группы, получивших
вакцину (два уровня дозы: 6.8 lg и 7.5 lg ТИД50/доза) или плацебо.
Оценка безопасности и переносимости вакцинного препарата производилась путем
тщательного мониторинга состояния здоровья добровольцев в ходе исследования
(регистрация
нежелательных
явлений,
физикальное
обследование,
оторинолариногологическое
обследование,
лабораторные
показатели).
Оценка
иммуногенности проводилась на 29-й день (перед второй вакцинацией) и на 57-й день
(окончание исследования) по следующим критериям: местный иммунный ответ - оценка
местного специфического иммунного ответа к вирусу гриппа А(H5N1) (IgA) в образцах
носовых секретов методом иммуноферментного анализа (ИФА); системный иммунный
ответ оценивался по выработке гемагглютинин-ингибирующих антител в образцах
сыворотки крови в реакции торможения гемагглютинации (РТГА) и выявлению
сывороточных вирус специфических IgG методом ИФА. Определение ЦТЛ иммунного
ответа проводилось у МНС класс I А02 аллель позитивных добровольцев путем измерения
активности Гранзима-В
(Granzyme
B)
продуцирующих
Т-клеток методом
иммуноферментного
бляшкообразования
(ELISPOT).
Фармакокинетика
(вирусовыделение) оценивалась путем титрования образцов носовых смывов на культуре
клеток Vero (определение ТИД50/мл) на 2-й, 3-й и 4-й день исследования.
Результаты. Отмечена хорошая переносимость вакцинного препарата при двукратном
интраназальном введении. Важным аспектом безопасности живых гриппозных вакцин
является их потенциальная способность к репликации и последующему вирусовыделению
и трансмиссии. В данном исследовании вирусовыделения ни в одной контрольной точке
после вакцинации отмечено не было, что подтверждает дефектный по репликации
фенотип вакцины и ее безопасность. У всех привитых добровольцев было отмечено
формирование местного и системного иммунного ответов (Таблица 1).
Таблица 1. Уровень сероконверсий (%) после однократной (день 29-й) и двукратной
вакцинации (день 57-й) пандемической H5N1 delNS гриппозной вакцины.
Доза
вакцинного
препарата
(кол-во
лиц)
РТГА
29-й
день
57-й
день
Секреторные
IgA
(ИФА)
Сывороточные
IgG
(ИФА)
29-й
день
29-й
день
57-й
день
57-й
день
6,8 lg
ТИД50/мл
41,7*
91,7*
0,0
45,5*
0,0
60,0*
(n=12)
7,5 lg
ТИД50/мл
75,0*
91,7*
18,2
45,5*
20,0
50,0*
(n=12)
Плацебо
0,0
0,0
0,0
0,0
0,0
0,0
(n=12)
* p<0,05 при сравнении с группой плацебо (точный критерий Фишера).
Иммунный ответ,
зарегистрированный
хотя бы в одном
исследовании
29-й
57-й
день
день
66,7*
100,0*
91,7*
100,0*
0,0
0,0
После двух иммунизаций в группе низкого уровня дозы вакцины (6.8 lg ТИД50/доза) был
выявлен 8-кратный прирост СГТ в РТГА, а в группе вакцинированных высокой дозой (7.5
lg ТИД50/доза) был отмечен 9.5 кратный прирост; уровень сероконверсий составил 92% в
обеих группах. Уровень сероконверсий секреторных IgA был выше при двукратной
вакцинации (46% для каждого уровня дозы), чем после однократной вакцинации (0% при
введении низкой дозы, 18% при введении высокой дозы). Кроме того, у трех из пяти
добровольцев, получивших высокую дозу вакцины, через 4 недели после вакцинации
наблюдалось ≥ 3- кратное повышение Гранзим В-секретирующих Т-клеток/ 1х106 ПМЯЛ
(полиморфнояденые лимфоциты) по сравнению с базовым уровнем. Повышение
количества Гранзим В-секретирующих Т-клеток сохранялось и после второй вакцинации.
Заключение. Данные, полученные в ходе клинического исследования I фазы,
свидетельствуют о безопасности и хорошей переносимоси пандемической H5N1 delNS1
вакцины. Исследуемый препарат, несмотря на свой высоко аттенуированный фенотип
(delNS1), подтвержденный отсутствием вирусовыделения вакцинного штамма, обладает
высоким уровнем иммуногенной активности, формируя как местный, так и системный,
иммунные ответы, уже после однократного интраназального введения.