Изменение биохимических маркеров соединительной ткани

Кириленко В.П., Воскресенский С.Л.
ИЗМЕНЕНИЕ БИОХИМИЧЕСКИХ МАРКЕРОВ
СОЕДИНИТЕЛЬНОЙ ТКАНИ ШЕЙКИ МАТКИ ВО ВРЕМЯ
БЕРЕМЕННОСТИ В ЦЕРВИКАЛЬНОЙ СЛИЗИ ПРИ
НОРМЕ И УГРОЗЕ ЕЕ ПРЕРЫВАНИЯ
Государственное учреждение образования «Белорусская медицинская академия
последипломного образования», кафедра акушерства и гинекологии БелМАПО, г. Минск,
Республика Беларусь
УЗ «Родильный дом Минской области», г. Минск
Резюме. В статье изложены результаты изменения содержания
гликозаминогликанов,
белково-углеводных
комплексов,
активности
лизосомальных ферментов в цервикальной слизи у небеременных,
беременных женщин с физиологическим течением гестации в первом,
втором, третьем триместре, накануне родов и в родах. Те же показатели были
определены у беременных с угрозой прерывания беременности. Установлено,
что
с
наступлением
беременности
происходила
значительная
интенсификация метаболических процессов в соединительной ткани шейки
матки. Накануне родов активность исследуемых компонентов значительно
возрастала, по сравнению с предшествовавшим неделям гестации. При
угрозе прерывания беременности биохимические маркеры соединительной
ткани шейки матки достоверно различались с теми же показателями, у
которых беременность протекала физиологично.
Ключевые слова: шейка матки, беременность, угроза прерывания
беременности, гликозаминогликаны,
гексозы, кислые катепсины,
гликозидаза, гиалуронидаза, цервикальная слизь,
Введение
Во время беременности шейка матки подвергается изменениям в
размере и консистенции. Она становится эластичнее, короче, увеличивает
диаметр цервикального канала. Отмеченные изменения на протяжении
беременности происходят постепенно и при повторных исследованиях,
выполненных на протяжении нескольких дней и даже недель, могут быть, и
не замечены. Пальпаторная характеристика состояния шейки матки:
эластичность, размеры, раскрытие является важнейшим предсказателем
прерывания беременности (аборта, преждевременных родов, родов в срок).
1
В то же время оценка биофизических свойств шейки матки слишком
зависима от опыта исследователя и слишком груба для реального прогноза
наступления прерывания беременности. По существу она может дать
следующие варианты прогноза. Первый. Состояние шейки таково, что
организм готов к прерыванию беременности, и она может прерваться в
любой момент. Второй. Состояние шейки таково, что беременность не
должна прерваться. Третий. Шейка матки такова, что имеется состояние
угрозы прерывания беременности, но выкидыш или роды могут наступить
или не наступить.
Метод пальпаторный оценки ситуации в определенной степени
пригоден для динамического контроля, но его точность явно недостаточна
для реального прогноза. Точность прогноза можно повысить путем
объективизации характера изменений шейки, которые происходят накануне
родов. Одним из вариантов решения этой задачи является контроль
преобразований тех составляющих шейки матки, которые отвечают за ее
прочность.
Прочность шейки матки во многом определяется основным веществом.
Гликозаминогликаны, ферменты, а также белково-углеводные комплексы,
входящие в состав основного вещества
могут быть показателями
интенсификации метаболических процессов в цервикальной ткани,
наступающие при прерывании беременности. Оно изменяет свои свойства
накануне родов и выкидышей, благодаря чему происходит размягчение
шейки. Поэтому увеличение концентрации компонентов основного вещества
или повышение активности ферментов, участвующих в их метаболизме,
будут свидетельствовать об интенсификации обмена в шейке матки и будут
объективным показателем скорого прерывания беременности. С другой
стороны, обратный характер изменений при угрозе прерывания
беременности может указывать на устранение патологического состояния
или на успешность проводимого лечения[1].
Цель
исследования
–
установить
изменение
содержания
гликозаминогликанов и их фракций, белково-углеводных комплексов,
активность лизосомальных ферментов в цервикальной слизи у небеременных
женщин, во время физиологической беременности, накануне родов и при
угрозе ее прерывания.
Материалы и методы
Объект исследования - небеременные пациентки, женщины с
физиологическим течением беременности, накануне родов и с угрозой ее
прерывания.
2
Исследовали содержание общих гликозаминогликанов (ГАГ), их
фракций:
хондроитинсульфата
C;
хондроитинсульфатов
A+B;
кератансульфата, гепарансульфата, гепарина, общих, гексоз и гексоз
гликозаминогликанов и гликопротеинов, активность кислых катепсинов, β-Dгликозидазы, гиалуронидазы в цервикальной слизи, которое было
выполнено у 103 пациенток.
Содержание гликозаминогликанов в цервикальной слизи определяли
методом Greiling H [8], основанном на взаимодействии ГАГ с резохином, при
котором образуются преципитаты, вызывающие потерю прозрачности
раствора. Степень помутнения пробы оценивали нефелометрически.
Оптическую плотность измеряли на спектрофотометре «Солар» PV -2151 CC
при длине волны 400 нм, синий светофильтр, в кювете с длиной оптического
слоя 1 см. Перед исследованием каждую пробу слизи взвешивали для
последующей стандартизации полученных результатов. Затем разводили
физиологическим раствором (1:4), растирали до однородной консистенции,
термостатировали при Т - 37°С в течение 60 минут. Общие
гликозаминогликаны разделяли на фракции с помощью 1 М раствора NaCl,
используя их свойство к диссоциации в солевом растворе. Первой фракцией
при этом был - хондроитинсульфат C, второй - хондроитинсульфаты A+B,
третьей - кератансульфат, гепарансульфат, гепарин [4].
Гиалуронидазную активность исследовали методом Шараева П.Н. и
соавт. [5]. В основе метода лежит определение продуктов взаимодействия
субстрата с карбазольным реактивом, которое проявляется фиолетоворозовым окрашиванием. Его оценивали с помощью спектрофотометра
«Солар» PV -2151 CC при длине волны 530 нм и зеленом светофильтре. По
разности оптических плотностей опытной и контрольной проб, с
использованием калибровочной кривой, находили количество продуктов
гидролиза гиалуроновой кислоты.
Кислые катепсины определяли методом Anson в модификации
Покровского А.А., Арчакова А.И. [6]. Методика основана на особенностях
взаимодействия этих ферментов с гемоглобином крупного рогатого скота,
выделенного из крови с использованием специальных технологий. Кислые
катепсины расщепляют гемоглобин до кислоторастворимых пептидных
фрагментов, количество которых определяют с помощью спектрофотометра
СС – 46 при длине волны 280 нм.
Активность -d-глюкозидазы определяли по методике Anson, в
модификации Юсиповой Н.А. [7]. Метод основан на определении количества
O – или n – нитрофенола, ферментативно освобожденного из субстратов β-dгликозидазой при определенных условиях. За единицу активности фермента
3
принимали такую, которая в стандартных условиях опыта в течение часа
приводила к появлению 1 мкг n-или о-нитрофенола. Результат оценивали на
спектрофотометре СС – 46 при длине волны 400 нм.
Метод определения гексоз, входящих в состав гликозаминогликанов (ГГАГ) и гликопротеинов (Г-ГП), разработан И.В. Неверовым и Н.И.
Титоренко.
Он
основан
на
взаимодействии
Г-ГАГ
с
цетилперидинийхлоридом, а Г-ГП - с орциновым реактивом. Количественная
оценка производилась с помощью колориметрии на спектрофотометре
«Солар» PV -2151 CC с зеленым светофильтром при длине 540 нм, в кювете с
длиной оптического слоя 1 см. В качестве контроля использовали пробы,
содержавшие 1 мл раствора едкого натра и 8,5 мл орцинового реактива [3].
Статистическая обработка результатов исследования осуществлялась
пакетом прикладных программ Statistica 6.0. Проверка гипотез о равенстве
двух средних производилась с помощью критерия Стьюдента (t), с
использованием непараметрического критерия Хи – квадрат (χ²). Различия
между данными считались достоверными при p<0,05 [2].
Результаты исследования
Содержание общих гликозаминогликанов и их фракций в
цервикальной слизи у женщин во время беременности без проявления
угрозы прерывания. Содержание общих гликозаминогликанов и их
фракций в цервикальной слизи определено у 62 пациенток. I фракция
отражала концентрацию хондроитинсульфата C, II - хондроитинсульфатов
A+B, III - кератансульфата, гепарансульфата, гепарина. Уровень общих
гликозаминогликанов у небеременных был 1,9±0,09 мкг ГАГ/мг (таблица 1).
Таблица 1 — Содержание ГАГ в цервикальной слизи во время беременности,
мкг ГАГ/мг слизи, (Мm)
Категории
n
Общие ГАГ
І фракция
ІІ фракция
ІІІ фракция
обследованных
Небеременные
10
1,9±0,09○○
1,0±0,11○○
0,5±0,03○○
0,4±0,01○○
Беременные
7 – 13 нед. 10
6,7±0,21○*
2,3±0,09○*
2,5±0,10○*
1,9±0,11○*
14 – 27 нед. 16
4,0±0,05*
1,4±0,03*
1,4±0,01*
1,2±0,01*
28 – 37 нед. 16
10,1±0,13*
3,0±0,1*
4,1±0,09*
3,0±0,07*
**
**
**
38 – 40 нед. 10
14,8±0,16
4,5±0,14
5,6±0,06
4,7±0,06**
Примечание — различия между ○○ и ○, а также ** и * достоверны, р<0,05.
С наступлением беременности он увеличился в три раза. После некоторого
снижения во втором триместре он вновь стал возрастать и к сроку родов (38 –
4
40 недель) достиг максимума 14,8±0,16 мкг ГАГ/мг слизи, что в 7 раз
превысило их уровень у небеременных.
Содержание в цервикальной слизи хондроитинсульфата С (І- фракция
ГАГ), хондроитинсульфата А+В
(ІІ-фракции), кератансульфата,
гепарансульфата и гепарина – (ІІІ-фракция) на протяжении беременности
изменялись аналогично. Различия с общими ГАГ носили лишь
количественные выражения, а сама динамика была одинаковой – резкое
повышение с началом беременности, снижение во втором триместре с
последующим ростом в третьем, пиком их концентрации накануне
завершения беременности (таблица 1).
Содержание общих ГАГ и их фракций в цервикальной слизи при
клинических
проявлениях
угрозы
прерывания
беременности.
Содержание общих ГАГ и их фракций в цервикальной слизи у беременных с
угрозой прерывания беременности определено у 36 пациенток. Исследование
выполнено в сроки гестации 7 – 13, 14 – 27, 28 – 37 недель. На протяжении
беременности, осложненной угрозой прерывания, содержание общих ГАГ
прогрессивно возрастало (таблица 2).
Таблица 2 — Содержание общих ГАГ и их фракций в цервикальной слизи у
беременных с угрозой прерывания беременности, мкг ГАГ/мг слизи, (Мm)
Срок беременности,
n
Общие ГАГ
І фракция
ІІ фракция
нед.
7 – 13
13
3,9±0,09*
1,9±0,04*
1,2±0,08*
14 – 27
13
7,0±0,16*
2,8±0,07*
2,7±0,09*
28 – 37
10 17,6±0,5**
3,5±0,35**
7,0±0,44**
Примечание — различия между ** и * достоверны, р<0,05.
ІІІ фракция
0,8±0,04*
1,5±0,13*
7,0±0,37**
Во втором триместре их концентрация была почти в 2 раза выше, чем в
первом триместре, а в третьем триместре почти в 2,5 раза больше чем во
втором. Уровень фракций ГАГ на протяжении беременности менялась
аналогичным образом, т.е. во втором триместре существенно превышал
таковой, в первом, а в третьем – во втором (таблица 2).
Содержание общих гексоз, гексоз гликозаминогликанов, гексоз
гликопротеинов в цервикальной слизи у женщин во время беременности
без проявления угрозы прерывания.
Содержание общих гексоз, гексоз гликозаминогликанов (гексозы ГАГ) и
гексоз гликопротеинов (гексозы ГП) в цервикальной слизи определено у 62
женщин.
5
Таблица 3 — Содержание гексоз в цервикальной слизи во время
беременности, мкг ГАГ/мг слизи, (Мm)
Категории
n
Общие гексозы
Гексозы ГАГ
Гексозы ГП
обследованных
Небеременные
10
45,0±2,20○○
25,2±1,51○○
19,8±2,07○○
Беременные
7 – 13 нед.
10
6,4±0,14○*
1,8±0,13○*
4,6±0,15○*
14 – 27 нед.
16
11,7±0,31*
1,8±0,06*
9,9±0,34*
28 – 37 нед.
16
10,7±0,30*
0,9±0,09*
9,8±0,33*
38 – 40 нед.
10
28,0±0,62**
2,2±0,09**
25,8±0,56**
Примечание — различия между ○○ и ○, а также ** и * достоверны, р<0,05.
Содержание общих гексоз в цервикальной слизи у небеременных было
45,0±2,20 мкг ГАГ/мг слизи. В первом триместре физиологической
беременности оно, по сравнению с небеременными женщинами, существенно
(р<0,05) снижалось, но в дальнейшем к сроку родов увеличивалось и
достигало своего максимума 28,0±0,62 мкг ГАГ/мг слизи. Однако их уровень
все равно был существенно ниже, чем у небеременных. Изменение
содержания гексоз ГАГ и гексоз ГП подчинялись тем же закономерностям,
что и общих гексоз. С наступлением беременности их концентрация резко
падала, но ко времени ее окончания вновь увеличивалась. Различия в
динамике содержания гексоз ГАГ и гексоз ГП относились не к
направленности их изменений, а к количественным отношениям. Так,
например, численные значения изменения уровня гексоз ГП с наступлением
беременности менялись меньше, чем у гексоз ГАГ, но предродовой пик был,
более значим у первых. Течение беременности сопровождалось снижением
уровня гексоз ГАГ в ІІІ триместре, а гексоз ГП сохранением прежних
значений. Предродовой пик гексоз ГАГ хоть и был, но его численные
значения были достоверно (р<0,05) меньше чем таковые, у небеременных. В
то же время содержание гексоз ГП накануне родов превышало (р<0,05) их
уровень у небеременных (таблица 3).
Содержание общих гексоз, гексоз гликозаминогликанов, гексоз
гликопротеинов в цервикальной слизи при клинических проявлениях
угрозы прерывания беременности. Содержание общих гексоз, гексоз
гликозаминогликанов, гексоз гликопротеинов в цервикальной слизи было
исследовано у 41 пациентки.
6
Таблица 4 — Содержание гексоз в цервикальной слизи у беременных с
угрозой прерывания беременности, мкг ГАГ/мг слизи, (Мm)
Срок беременности,
n
Общие гексозы
Гексозы ГАГ
нед.
7 – 13
13
30,2±0,30*
15,0±0,18*
14 – 27
13
26,0±0,43*
6,6±0,16
**
28 – 37
15
14,2±0,05
8,9±0,17**
Примечание — различия между ** и *достоверны, р<0,05.
Гексозы ГП
15,2±0,43*
19,4±0,56*
5,2±0,20**
На протяжении беременности содержание общих гексоз при угрозе
прерывания снижалось (р<0,05). В 7 – 13 недель оно было 30,2±0,30 мкг
ГАГ/мг слизи, а в третьем триместре – 14,2±0,05 мкг ГАГ/мг (таблица 4).
Концентрация гексоз ГАГ и гексоз ГП к третьему триместру также
достоверно уменьшалась. Однако ее динамика имела свои особенности. Так,
конечное снижение уровня гексоз ГП происходило после его повышения во
втором триместре, а гексоз ГАГ - после снижения (таблица 4).
Активность кислых катепсинов, β-d-гликозидазы, гиалуронидазы в
цервикальной слизи во время беременности без проявления угрозы
прерывания. Активность кислых катепсинов в цервикальной слизи у
небеременных была 0,01±0,001 нмоль/мг слизи•ч. С наступлением
беременности она резко увеличилась в (10 раз), во ІІ и ІІІ триместре
снижалась, но оставалась более высокой, чем до беременности (р<0,05). К
сроку родов отмечался всплеск активности. В этот период она превышала
таковую почти в 40 раз, по сравнению с небеременными и в 4 раза по
отношению к первым неделям гестации. Изменение активности β-dгликозидазы и гиалуронидазы в цервикальной слизи у небеременных и
беременных женщин носило аналогичный характер (таблица 5).
Таблица 5 — Активность ферментов в цервикальной слизи во время
беременности, нмоль/мг слизи•ч, (Мm)
Категории
обследованных
Небеременные
Беременные
7 – 13 нед.
14 – 27 нед.
28 – 37 нед.
38 – 40 нед.
n
Кислые катепсины
β-D-гликозидаза
Гиалуронидаза
10
0,01±0,001○○
0,06±0,002○○
1,1±0,05○○
10
16
16
10
0,10±0,003○*
0,05±0,001*
0,06±0,001*
0,39±0,006**
0,14±0,004○*
0,14±0,002*
0,16±0,003*
0,53±0,011**
4,1±0,18○*
1,4±0,04*
1,6±0,06*
6,6±0,21**
7
Примечание — различия между ○○ и ○, а также ** и * достоверны, р<0,05.
С наступлением беременности активность ферментов увеличивалась
(р<0,05) для первых в 20 раз, а для вторых - в 4 раза. Течение беременности
сопровождалось либо стабильным уровнем показателей, либо их
незначительным снижением, но накануне родов отмечался резкий всплеск
активности ферментов (р<0,05).
Активность кислых катепсинов, β-d-гликозидазы, гиалуронидазы в
цервикальной слизи при клинических проявлениях угрозы прерывания
беременности. Изменение активности ферментов в цервикальной слизи было
исследовано у 41 женщины с угрозой прерывания беременности.
Таблица 6 — Активность ферментов в цервикальной слизи у беременных с
угрозой прерывания беременности, нмоль/мг слизи•ч, (Мm)
Срок беременности,
n
Кислые катепсины
β-d-гликозидаза
нед.
7 – 13
13
0,09±0,002*
0,28±0,005*
14 – 27
13
0,11±0,001
0,14±0,001
**
28 – 37
15
0,12±0,001
0,17±0,002**
Примечание — различия между ** и * достоверны, р<0,05.
Гиалуронидаза
4,7±0,20*
1,6±0,07
2,1±0,07**
Активность кислых катепсинов на протяжении беременности,
осложненной угрозой прерывания, постепенно возрастала и к ее окончанию
достоверно превышала таковую в I триместре (таблица 6).
Уровень активности β-d-гликозидазы и гиалуронидазы в цервикальной
слизи на протяжении беременности снижались (р<0,05). При этом минимум
их активности приходился на второй триместр беременности.
Исходя из данных полученных в ходе исследования, в качестве
диагностических критериев нарушения вынашивания беременности нами
рассмотрены показатели уровня гликозаминогликанов, гексоз белковоуглеводных комплексов и активности лизосомальных ферментов.
За границы нормы нами взяты величины, соответствовавшие М±2σ, а за
границу патологии, показатели, выходящие за границы - М±3σ.
Полученные в данной работе данные по норме и патологии сведены в
таблицу (таблица 7).
8
Таблица 7 — Содержание общих гликозаминогликанов (мкг ГАГ/мг слизи),
гексоз БУК (мкг ГАГ/мг слизи), лизосомальных ферментов (нмоль/мг
слизи•ч) в цервикальной слизи при беременности, протекающей с и без
угрозы прерывания, (M-2σ – M+2σ, < 3σ; >3σ)
Показатели
Общие ГАГ
І фракция
ІІ фракция
ІІІ фракция
Общие гексозы
Гексозы ГАГ
Гексозы ГП
Кислые катепсины
β-d-гликозидаза
Гиалуронидаза
норма
угроза
норма
угроза
норма
угроза
норма
угроза
норма
угроза
норма
угроза
норма
угроза
норма
угроза
норма
угроза
норма
угроза
Срок беременности, недели
7 – 13
14 – 27
28 – 37
5,4 - 8,0
3,6 - 4,4
9,0 – 11,2
<4,1;>9,3
<3,2;>4,8
<7,9;>12,3
1,7 – 2,9
1,2 – 1,6
2,2 – 3,8
<1,1;>3,5
<1,0;>1,8
<1,4;>4,6
1,9 – 3.1
1,3 – 1,5
3,4 – 4,8
<1,3;>3,7
<1,2;>1,6
<2,7;>5,5
1,2 – 2,6
1,1 – 1,3
2,4 – 3,6
<0,5;>3,3
<1,0;>1,4
<1,8;>4,2
5,3 – 7,5
9,4 – 14,0
8,6 – 12,8
<4,2;>8,6
<7,1;>16,3
<6,5;>14,9
1,0 – 2,6
1,3 – 2,3
0,2 – 1,6
<0,2;>2,6
<0,8;>2,8
<0,2;>1,6
4,7 – 5,5
7,2 – 12,6
7,2 – 12,4
<4,8;>6,4
<4,5;>15,3
<4,6;>15,0
0 – 0,2
0 – 0,1
0,04 – 0,08
>0,3
>0,15
<0,02;>0,1
0,12–0,16
0,12–0,16
0,14–0,18
<0,12;>0,18
<0,1;>0.18
<0,12;>0,18
3,0 – 5,2
1,1 – 1,7
1,1 – 2,1
<1,9;>6,3
<0,8;>2,0
<0,6;>2,6
Небеременные
1,3 – 2,5
0,3 – 1,7
0,3 – 0,7
0,3 – 0,5
31 – 59
16 – 35
6,8 – 32,8
0,004 – 0,006
0,05 – 0,07
0,8 – 1,4
Таким образом, на основании полученных данных можно сделать
следующие выводы.
1. Гликозаминогликаны, гексозы и ферменты их метаболизма - кислые
катепсины, β-d-гликозидаза, гиалуронидаза в цервикальной слизи отражают
состояние соединительнотканного остова шейки матки.
2. Данные, полученные при исследовании цервикальной слизи при
наличии клинических проявлений угрозы прерывания беременности и без
нее, указывали на существование различий между этими состояниями.
3. Метаболическая активность в цервикальной ткани изменяется с
наступлением беременности и постепенно возрастает к сроку доношенной
беременности.
4. При сопоставлении численных значений каждого из исследованных
параметров в цервикальной слизи у женщин с и без угрозы прерывания
беременности (в соответствующие сроки) выявлялись статистически
значимые различия (р<0,05).
5. Возможна лабораторная диагностика угрозы невынашивания
беременности и нарушений процесса инициации родов.
9
V.P. Kirilenko, S.L. Voskresensky
The change of biochemical markers of connective tissue of uterus neck
during pregnancy in cervical mucus normally and with abortion threat.
State Higher Educational Establishment “Belarusian Medical Academy of
Post-Graduate Education”, obstetrics and gynecology department, Minsk, Belarus
Minsk Regional Maternity Hospital
Summary. In the article there are the results of changes of glycosaminoglycans and protein-carbohydrate complexes, lysosomal enzymes activity in cervical
mucus in non-pregnant, pregnant women with physiological gestational period in
the first, second, third trimesters, on the eve of delivery and during delivery. The
same indices were defined in pregnant women with abortion threat. The significant
intensification of metabolic processes took place in the connective tissue of uterus
neck from the beginning of pregnancy. On the eve of delivery the activity of components under research was increasing if compared to the previous gestation
weeks. In abortion threat the biochemical markers were different from those indices in women, whose pregnancy proceeded normally.
10
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ИСТОЧНИКОВ
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
Воскресенский С.Л., Кириленко В.П. Диагностика угрозы прерывания
беременности путем определения содержания гликозаминогликанов в
цервикальной слизи / С. Л. Воскресенский., В.П. Кириленко //
Медицинская панорама. – 2006. - № 7 [64]. – С. 71 – 75.
Гланц, С. Медико-биологическая статистика: пер. с англ. / С. Гланц. –
М.: Практика, 1998. – 459 с.
Колб, В.Г. Справочник по клинической химии / В.Г. Колб, В.С.
Камышников.– Минск, 1982. – 366 с.
О
методике
определения
суммарного
количества
кислых
мукополисахаридов в сыворотке крови при желтухах / Д.В.
Старосельский [и др.] // Лаб. дело. – 1973. - № 3. – С. 149-151.
Определение гиалуронидазной активности / П.Н. Шараев [и др.] //
Клин. лаб. диагностика. – 1996. - № 3. – С. 21-22.
Покровский, А.А. Определение активности кислых катепсинов –
модифицированный метод Anson / А.А. Покровский, А.И. Арчаков //
Современные методы в биохимии: в 2 т. / Под ред. В.Н. Ореховича. –
М., 1968. – Т. 2. – С. 48.
Юсипова, Н.А. Активность β-d-глюкозидазы / Н.А. Юсипова //
Рационализаторская работа в учреждениях здравоохранения БССР. –
1977. - № 3. – С. 21.
Greiling, H. Die turbdimetrische Bestimmung von Sulfomucopolysacchariden mit Resochin / H. Greiling // Rheumaforsch Z. – 1961. – Bd. 20. – S.
17
Кириленко Виктор Петрович
моб: 7577681, служ: 2673544
Воскресенский Сергей Львович
моб: 7068009, служ: 2673544
11