1. К-антиген

Методическая разработка
по подготовке и работе на лабораторном занятии №1
для студентов стоматологического факультета.
Тема: Организация бактериологической лаборатории. Микроскопические методы исследования.
Микроскопия биологических препаратов с иммерсионной системой микроскопа.
1.1. Актуальность темы. Микробиология – общемедицинская дисциплина, и, потому, необходима врачу
любой специальности. Микробы являются возбудителями не только инфекционных болезней, а также
многих неинфекционных и их осложнений. Врач на протяжении своей профессиональной деятельности
неоднократно сталкивается с ними. Для того, чтобы правильно поставить диагноз болезни, необходимо
хорошо знать морфологию микробов, уметь различать их под микроскопом. Каждый врач должен
безупречно владеть методом микроскопии, знать строение микроскопа и правила работы с ним.
1.2. Цель изучения темы.
В системе микробиологической диагностической службы лечебных и диагностических учреждений
здравоохранения бактериологическая лаборатория является самой важной структурной частью.
1.2.1. Цель общая:
Усвоить основные требования и правила работы в микробиологической лаборатории, изучить технику
микроскопирования при исследовании морфологии микроорганизмов.
1.2.2. Цель конкретная:
1. Придерживаться правил поведения и техники безопасности при работе в микробиологической
лаборатории.
2. Проводить микроскопию препаратов, используя иммерсионную систему.
3. Определить форму и расположение микроорганизмов в поле зрения.
4. Определить систематическое положение основных групп микроорганизмов.
1.3. Обеспечение исходного уровня знаний-умений:
1. Знать строение оптического микроскопа, принцип его работы.
2. Иметь понятие о преломлении света, оптически однородных и неоднородных средах, показателе
преломления среды.
3. Уметь объяснить ход лучей в оптическом микроскопе с сухой и иммерсионной системами, границы
разрешающей способности микроскопа (кафедра биофизики).
4. Уметь пользоваться световым микроскопом (кафедры биологии и гистологии).
5. Объяснить систематическое положение основных групп микроорганизмов. Понятия об эукариотах и
прокариотах (кафедра биологии).
1.4. Содержание обучения:
1. Микробиологическая лаборатория, оснащение, режим работы, правила поведения.
2. Систематика микроорганизмов.
3. Микроскопы, микроскопический метод исследования.
4. Определение величины и формы микроорганизмов, как этапы микроскопического метода
исследования.
1.4.1. Граф логической структуры содержания.
Микробиологическая лаборатория → исследуемый материал → микроскопическое исследование →
определение ориентировочного возбудителя.
1.4.2. Перечень теоретических вопросов.
1. Назначение микробиологической лаборатории, оснащение, режим работы в ней.
2. Правила работы в микробиологической лаборатории.
3. Типы современных микроскопов. Техника микроскопии иммерсионной системой биологического
светового микроскопа.
4. Возможности использования оптического микроскопа при изучении морфологии основных групп
микроорганизмов.
1
1.4.3. Источника учебной информации.
Литература теоретическая основная:
К.Д. Пяткин, Ю.С. Кривошеин. Микробиология. М. Медицина, 1980, стр.4-23.
В. Д. Тимаков и соавт. Микробиология. М. Медицина 1993. стор. 5-20
Крок-1. Загальна лікарська підготовка. Київ, Медицина 2004
А.А. Воробьев и соавт. Микробиология. М. Медицина, 1994, стр.6-16.
Л.Б. Борисов и соавт. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология. М. Медицина, 1994, стр.
6-24.
Г.К. Палій і співавт. Мікробіологія, вірусологія, імунологія, інфекційні хвороби.
Литература теоретическая дополнительная:
А.А. Воробьев. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология. М., МИА, 2004, стр.17-28.
А.И. Коротяев, С.А. Бабичев. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология. С.Петербург.
Спецлит., 2002, стр.7-18.
В.И. Покровский. Медицинская микробиология. ГЭОТАР-МЕД, М., 2002, стр. 7-19
И.Л. Дикий и соавт. Микробиология. Харьков, изд. Укр ФА, 1999, стр. 7-16.
А.М. Королюк, В.Б. Сбойчаков. Медицинская микробиология. С.Петербург, 1999, стр. 5-21.
В.И. Покровский, О.К. Поздеев. Медицинская микробиология. ГЭОТАР Медицина, Москва, 1998, стр. 114.
З.Н. Кочемасова и соавт. Санитарная микробиология и вирусология. М., Медицина, 1987, стр. 5-15
Литература практическая основная:
Л.Б. Борисов и др. Руководство к практическим занятиям по микробиологии. М., 1984, стр. 5-19.
Литература практическая дополнительная:
М.Н. Лебедева. Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии. М., Медицина,
1973, стр. 12-22.
В.В. Тец Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии, вирусологии и
иммунологии. М., Медицина, 2002, стр. 8-16.
Л.Г. Бранцевич и соавт. Микробиология. Практикум. К., Вища школа, 1987, стр. 3-10.
Ф.К. Черкес. Руководство к практическим занятиям по микробиологическим исследованиям. М.,
Медицина, 1980, стр. 3-14.
К.Д. Пяткин и соавт. Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии. М.,
Медицина, 1969, стр. 8-17.
1.5. Ориентировочная основа действия.
Исследуемый материал (мазок) → микроскопическое исследование → выявление микроорганизмов →
ориентировочное определение возбудителя за морфологическими признаками
1.7. Короткие методические указания для работы студентов на лабораторном занятии.
Записать правила работы в бактериологической лаборатории. Ознакомиться с формой ведения
протокола. Придерживаясь правил работы с иммерсионным микроскопом, промикроскопировать
демонстрационный мазок. Зарисовать в протоколе. Сделать выводы.
1.7.1. Методика проведения занятия.
- Провести контроль исходного уровня знаний-умений.
- Ознакомить студентов с формой ведения протокола занятия, провести инструктаж и записать в
протокольной тетради правила работы в микробиологической лаборатории. Расписаться в журнале об
инструктаже студентов относительно режима и правил работы в микробиологической лаборатории.
- Промикроскопировать окрашенные препараты микроорганизмов, используя сухую и иммерсионную
системы. Исследовать возможности иммерсионного микроскопа.
- Зарисовать исследуемые объекты в протоколе.
- Сделать выводы.
Автор: доцент, кандидат медицинских наук Мруг Валентина Максимовна
Методическая разработка
по подготовке и работе на лабораторном занятии №2
2
для студентов стоматологического факультета.
Тема: Морфология бактерий. Изготовление препаратов из бактериальных культур. Простой
метод окраски.
1.1. Актуальность темы. В микробиологической диагностике инфекционных болезней одним из первых
используют микроскопическое исследование материала от больного. Выявление в нем микроорганизмов
и изучение их морфологии разрешает ориентировочно определить возбудителя и в дальнейшем
провести четкую идентификацию с помощью других методов микробиологической диагностики.
Морфологические признаки бактерий можно изучать с помощью микроскопического метода
диагностики, то есть метода, который включает в себя работу по приготовлению мазка из
патологического материала или культуры микроба и его окраску, с последующим микроскопическим
исследованием. Возможно изучение морфологии возбудителя и в нативном состоянии, но в
большинстве случаев используют окрашенные или контрастированные препараты.
1.2. Цель изучения темы.
Уметь провести микроскопическое исследование культур бактерий.
1.2.1. Цель общая.
Уметь использовать морфологические свойства бактерий для дифференциации их в микроскопической
диагностике инфекционных заболеваний.
1.2.2. Цель конкретная:
1. Уметь приготовить мазки-препараты из бактериальных культур, зафиксировать их.
2. Уметь покрасить препарат простым способом.
3. Уметь распознать основные формы бактерий, морфологические группы.
1.3. Обеспечение исходного уровня знаний-умений:
1. Уметь определить требования к препаратам для микроскопического исследования (кафедра
гистологии).
2. Уметь выбрать способ микроскопии, исходя из величины исследуемого объекта (занятие №1).
3. Уметь использовать иммерсионную систему светового микроскопа (занятие №1).
1.4. Содержание обучения:
1. Изучение основных форм бактерий.
2. Изготовление препаратов из культуры бактерий на плотной среде.
3. Окрашивание простым методом.
4. Выявление бактерий в препарате микроскопическим методом.
5. Определение морфологических форм.
1.4.1. Граф логической структуры содержания.
Мир бактерий → деление на морфологические группы → изучение морфологии бактерий
микроскопическим методом.
1.4.2. Перечень теоретических вопросов.
1. Основные морфологические группы бактерий. Формы и размеры клеток, их расположение в поле
зрения.
2. Правила работы в микробиологической лаборатории.
3. Этапы приготовления мазка-препарата из бактериальных культур.
4. Классификация красок, которые используются в микробиологической практике.
5. Простые методы окраски микробиологических препаратов.
1.4.3. Источника учебной информации.
Литература теоретическая основная:
К.Д. Пяткин, Ю.С. Кривошеин. Микробиология. М. Медицина, 1980, стр.23-38.
А.А. Воробьев и соавт. Микробиология. М. Медицина, 1994, стр. 16-18, 26-30
В.Д. Тимаков и соавт. Микробиология. М., Медицина, 1993, стр. 21-28
3
Крок-1. Загальна лікарська підготовка. Київ, Медицина, 2005
Л.Б. Борисов и соавт. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология. М. Медицина, 1994, стр.
25-31
Г.К. Палій і співавт. Мікробіологія, вірусологія, імунологія, інфекційні хвороби.
Литература теоретическая дополнительная:
А.А. Воробьев. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология. М., МИА, 2004, стр. 29-35
А.И. Коротяев, С.А. Бабичев. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология. С.Петербург.
Спецлит., 2002, стр. 18-33
В.И. Покровский. Медицинская микробиология. ГЭОТАР-МЕД, М., 2002, стр. 28-31, 47-54.
И.Л. Дикий и соавт. Микробиология. Харьков, изд. Укр ФА, 1999, стр. 18-19, 26-27
В.И. Покровский, О.К. Поздеев. Медицинская микробиология. ГЭОТАР Медицина, Москва, 1998, стр.
17
Литература практическая основная:
Л.Б. Борисов и др. Руководство к практическим занятиям по микробиологии. М., 1984, стр. 20-24
Литература практическая дополнительная:
М.Н. Лебедева. Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии. М., Медицина,
1973, стр. 22-36
В.В. Тец Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии, вирусологии и
иммунологии. М., Медицина, 2002, стр. 16-22
Л.Г. Бранцевич и соавт. Микробиология. Практикум. К., Вища школа, 1987, стр. 77-98
Ф.К. Черкес. Руководство к практическим занятиям по микробиологическим исследованиям. М.,
Медицина, 1980, стр. 14-23
К.Д. Пяткин и соавт. Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии. М.,
Медицина, 1969, стр. 17-25
1.5. Ориентировочная основа действия.
Культура бактерий → изготовление и фиксация мазка → окрашивание мазка простым методом →
микроскопическое исследование мазка с использованием иммерсионной системы → выявление
бактерий по морфологии → изучение формы, расположения бактерий → определение морфологических
групп в препаратах.
1.7. Краткие методические указания для работы студентов на лабораторном занятии.
Используя технику изготовления препаратов из агаровой культуры, приготовить мазки из культуры
стафилококка и кишечной палочки, зафиксировать их в пламени горелки и покрасить простым
способом. Для окрашивания мазков стафилококка использовать генцианвиолет по Синеву, кишечной
палочки – фуксин Пфейффера. С помощью иммерсионной системы промикроскопировать мазки,
микроскопическую картинку зарисовать в протокольной тетради. Дать морфологическую
характеристику культурам. После завершения работы привести рабочее место в порядок и завершить
изучение морфологии бактерий исследованием разных морфологических групп в демонстрационных
препаратах. Зарисовать микроскопическую картинку, сделать выводы.
1.7.1. Методика проведения занятия.
- Инструктаж студентов по технике безопасности при работе с газовой горелкой с отметкой в
соответствующем журнале.
- Контроль исходного уровня знаний.
- Контроль знаний изучаемой темы.
- Самостоятельная работа студентов по освоению методик приготовления мазка и окрашивания простым
способом.
- Микроскопическое исследование приготовленных и демонстрационных мазков. Изучения морфологии
бактерий и дифференциации их на морфологические группы.
- Оформление протокола.
Автор: доцент, кандидат медицинских наук Мруг Валентина Максимовна
Методическая разработка
по подготовке и работе на лабораторном занятии №3
4
для студентов стоматологического факультета.
Тема: Строение и химический состав бактериальной клетки. L-формы бактерий. Окрашивание
препаратов по методу Грама.
1.1. Актуальность темы.
Клеточная стенка у разных групп микроорганизмов характеризуется разным макромолекулярным
строением, разновидностью химического состава и биологических свойств. Таким образом, основным
компонентом клеточной стенки большинства водорослей является целлюлоза, мицелиальных грибов –
хитин, дрожжевых – мананы и глюканы, бактерий – пептидогликаны. Химический состав и структура
клеточных стенок определяют окрашивание бактерий по Граму.
Впервые этот метод был предложен Х. Грамом в 1884 г. для выявления бактерий в гистологических
срезах. На сегодня этот метод широко используется в микробиологии для идентификации бактерий по
тинкториальным свойствам. По отношению к окрашиванию по Граму все бактерии делятся на две
группы: грампозитивные и грамнегативные.
1.2. Цели изучения темы.
При микроскопической диагностике многих заболеваний микробной природы придется использовать
сложные методы окрашивания, в частности, метод Грама. Для того, чтобы правильно оценить
полученные результаты, необходимо не только научиться правильно красить препараты, но и хорошо
понимать принцип сложного метода окрашивания, его механизм.
1.2.1. Цель общая.
Уметь дифференцировать бактерии, окрашенные по Граму, по тинкториальным свойствам на
грампозитивные и грамнегативные.
1.2.2. Цель конкретная:
- Знать особенности структуры прокариотической клетки сравнительно с эукариотической.
- Знать особенности строения и химического состава клеточной стенки бактерий и их L-форм.
- Знать отличия структуры и химического состава клеточной стенки у грампозитивных и
грамнегативных бактерий.
- Уметь покрасить мазки по Граму и объяснить его механизм.
- Уметь распознать грампозитивные и грамнегативные бактерии по цвету.
1.3. Обеспечение исходного уровня знаний-умений:
- Знать общую систему строения эукариотической клетки (кафедры биологии и гистологии).
- Уметь объяснить механизм дифференциальной окраски клетки (кафедры гистологии и биохимии).
- Знать основные морфологические формы бактерий (занятие № 2).
- Уметь приготовить мазок из культур бактерий (занятие № 2).
- Уметь пользоваться иммерсионной системой микроскопа (занятие № 1).
- Знать правила работы с инфекционным материалом (занятие № 2).
1.4. Содержание обучения:
- Ультраструктура бактерий, как представителей прокариотических клеток.
- Строение клеточной стенки бактерий, химический состав.
- Сложный метод окрашивания по Граму.
- Тинкториальные свойства бактерий. Дифференциация по методу Грама.
1.4.1. Граф логической структуры по содержанию.
Исследуемый инфекционный материал → изготовление мазка → окрашивание по Граму →
микроскопия мазка → выявление грампозитивных и грамнегативных бактерий.
1.4.2. Перечень теоретических вопросов.
- Ультраструктура бактериальной клетки, функция основных органелл.
- Строение, химический состав клеточной стенки. L-формы бактерий,
предопределяют их образование.
факторы,
которые
5
- Отличия строения и химического состава клеточной стенки у грампозитивных и грамнегативных
бактерий. Механизм окрашивания по Грамму, критерий дифференциации бактерий на грампозитивные и
грамнегативные.
1.4.3. Источники учебной информации.
Литература теоретическая основная:
К.Д. Пяткин, Ю.С. Кривошеин. Микробиология. М. Медицина, 1980, стр.31-32.
В. Д. Тимаков и соавт. Микробиология. М. Медицина 1993. стр. 28-40
Крок-1. Загальна лікарська підготовка. Київ, Медицина 2004
А.А. Воробьев и соавт. Микробиология. М. Медицина, 1994, стр.19-26.
Л.Б. Борисов и соавт. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология. М. Медицина, 1994, стр.
31-39.
Г.К. Палій і співавт. Мікробіологія, вірусологія, імунологія, інфекційні хвороби.
Литература теоретическая дополнительная:
А.А. Воробьев. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология. М., МИА, 2004, стр.35-41.
А.И. Коротяев, С.А. Бабичев. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология. С.Петербург.
Спецлит., 2002, стр.33-45.
В.И. Покровский. Медицинская микробиология. ГЭОТАР-МЕД, М., 2002, стр. 50-53.
И.Л. Дикий и соавт. Микробиология. Харьков, изд. Укр ФА, 1999, стр. 19-29.
А.М. Королюк, В.Б. Сбойчаков. Медицинская микробиология. С.Петербург, 1999, стр. 21-24.
В.И. Покровский, О.К. Поздеев. Медицинская микробиология. ГЭОТАР Медицина, Москва, 1998, стр.
17-26.
Литература практическая основная:
Л.Б. Борисов и др. Руководство к практическим занятиям по микробиологии. М., 1984, сир. 24-26.
Литература практическая дополнительная:
М.Н. Лебедева. Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии. М., Медицина,
1973, стр. 37-39.
В.В. Тец Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии, вирусологии и
иммунологии. М., Медицина, 2002, стр. 23-24.
Л.Г. Бранцевич и соавт. Микробиология. Практикум. К., Вища школа, 1987, стр. 108-117.
Ф.К. Черкес. Руководство к практическим занятиям по микробиологическим исследованиям. М.,
Медицина, 1980, стр. 24-25.
К.Д. Пяткин и соавт. Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии. М.,
Медицина, 1969, стр. 25-27.
1.5. Ориентировочная основа действий.
Смесь культуры стафилококка и кишечной палочки в физрастворе → изготовление мазка → фиксация
мазка → окрашивание по Граму в модификации Синёва (вместо раствора используют предварительно
пропитанные генцианвиолетом лоскутки фильтровальной бумаги, которые кладут на мазок и увлажняют
водой до выделения красителя) → высушивание мазка → микроскопия иммерсионной системой →
выявление грампозитивных клеток (фиолетового цвета) стафилококка и грамнегативных клеток
(розового цвета) кишечной палочки → зарисовывание результатов микроскопии → выводы
относительно тинкториальных свойств бактерий исследуемых по методу Грама.
1.7. Короткие методические указания для работы студентов на лабораторном занятии.
Для изучения тинкториальных свойств бактерий по методу Грама используют смесь Гр+ и Гр– бактерий,
представленных взвесью стафилококка и кишечной палочки в физрастворе. Придерживаясь правил
работы с живыми культурами и техники изготовления мазка из жидкого материала, изготовить
препарат, зафиксировать и покрасить по методу Грама. Окрашенный мазок высушить,
промикроскопировать, определить тинкториальные свойства стафилококка и кишечной палочки по
цвету, который они приобретают при окрашивании по Граму. Ход исследований записать в протокол,
микроскопическую картину зарисовать, сделать выводы в протокольной тетради. Убрать рабочее место.
1.7.1. Методика проведения занятия.
- Определение актуальности темы, которая изучается на занятии.
- Контроль исходного уровня знаний.
- Контроль знаний по изучаемой теме.
6
- Самостоятельная практическая работа, оформление протокола.
- Объявление результатов контроля знаний, подведение итогов.
Автор: доцент, кандидат медицинских наук Мруг Валентина Максимовна
Методическая разработка
по подготовке и работе на лабораторном занятии №4
для студентов стоматологического факультета.
Тема: Кислотоустойчивые бактерии. Споры бактерий. Методы их выявления. Окрашивание
препаратов по методу Циля-Нильсена.
1.1. Актуальность темы.
Кислотоустойчивые и спорообразующие бактерии достаточно распространены в природе. Благодаря
физико-химическим свойствам оболочки клетки или споры, они являются достаточно стойкими по
отношению к повреждающему действию различных факторов окружающей среды. Среди этих бактерий
есть патогенные для человека виды. Обнаружение в патологическом материале микроорганизмов со
свойствами кислотоустойчивых бактерий с помощью специального метода окрашивания, каковым
является метод Циля-Нильсена, помогает своевременно провести диагностику заболеваний, вызванных
патогенными видами.
Спорообразование также является важным критерием для идентификации возбудителей сибирской язвы,
ботулизма, столбняка, газовой раневой инфекции. Особенностью этих возбудителей является то, что их
споры имеют характерные размер, форму и расположение относительно центра вегетативной части.
Изучение методов выявления у бактерий кислотоустойчивости и спорообразования дает возможность
своевременно диагностировать заболевания, вызванные патогенными видами микроорганизмов с
такими свойствами.
1.2. Цели изучения темы.
Врачу любой специальности необходимо знать какие из бактерий способны противостоять факторам
окружающей среды и благодаря каким свойствам. Кислотоустойчивость и спорообразование у бактерий
являются факторами защиты . Такими свойствами наделены микобактерии – возбудители туберкулеза и
лепры (им присущая кислотоустойчивость). Споры являются своеобразной формой сохранения вида
возбудителя в неблагоприятных для него условиях. Споры формируются в определенных участках
клетки, имеют характерные размеры, кислотоустойчивость. Умение обнаружить кислотоустойчивые
бактерии и споры у возбудителей сибирской язвы, столбняка, ботулизма, газовой анаэробной инфекции
должно быть обязательным для врача.
1.2.1. Цель общая.
Уметь использовать метод окраски по Цилю-Нильсену для спор и дифференциации кислотоустойчивых
бактерий.
1.2.2. Цель конкретная:
1. Уметь объяснить морфологическую и функциональную ультраструктуру бактериальной клетки.
2. Уметь мазки по методу Циля-Нильсена.
3. Уметь дифференцировать кислотоустойчивые бактерии от некислотоустойчивых в препарате,
окрашенном по Цилю-Нильсену.
4. Уметь обнаруживать споры в препарате, окрашенном по Цилю-Нильсену, определять место их
расположения в клетке, размеры (сравнивая с поперечным размером вегетативной формы).
1.3. Обеспечение исходного уровня знаний-умений:
1. Знать основные морфологические формы бактерий (занятие №2)
2. Уметь объяснить функцию основных ультраструктурных элементов клетки (кафедры биологии и
гистологии)
3. Знать функцию клеточной стенки у бактерий (занятие № 3).
4. Уметь объяснить механизм дифференциальной окраски бактериальных клеток (занятие №3)
5. Уметь приготовить мазок из агаровых культур бактерий (занятие № 2).
7
6. Знать правила работы с инфекционным материалом (занятие № 2).
1.4. Содержание :
1. Ультраструктура и химический состав прокариотической клетки.
2. Кислотоустойчивость бактерий.
3. Споры у бактерий.
4. Метод окрашивания по Цилю-Нильсену, его значение для кислотоустойчивых бактерий и спор.
1.4.1. Граф логической структуры по содержанию.
Мазок исследуемого материала, который содержит кислотоустойчивые бактерии → окрашивание по
Цилю-Нильсену → микроскопия мазка → выявление кислотоустойчивых бактерий, дифференциация с
некислотоустойчивыми элементами.
Исследуемый материал, который содержит споры бактерий → изготовление мазка → окрашивание по
Цилю-Нильсену → микроскопия мазка → спор.
1.4.2. Перечень теоретических вопросов.
1. Особенности химического состава кислотоустойчивых бактерий.
2. Спорообразование у бактерий, физико-химические свойства спор, их биологическое значение.
3. Метод окраски по Цилю-Нильсену – техника и назначение.
1.4.3. Источники учебной информации.
Литература теоретическая основная:
К.Д. Пяткин, Ю.С. Кривошеин. Микробиология. М. Медицина, 1980, стр.36-38.
В. Д. Тимаков и соавт. Микробиология. М. Медицина 1993. стр. 38-40
Крок-1. Загальна лікарська підготовка. Київ, Медицина 2005
А.А. Воробьев и соавт. Микробиология. М. Медицина, 1994, стр.24-26.
Л.Б. Борисов и соавт. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология. М. Медицина, 1994, стр.
38-39.
Г.К. Палій і співавт. Мікробіологія, вірусологія, імунологія, інфекційні хвороби.
Литература теоретическая дополнительная:
А.А. Воробьев. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология. М., МИА, 2004, стр. 40-41
А.И. Коротяев, С.А. Бабичев. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология. С.Петербург.
Спецлит., 2002, стр. 43-46
В.И. Покровский. Медицинская микробиология. ГЭОТАР-МЕД, М., 2002, стр. 78-79
И.Л. Дикий и соавт. Микробиология. Харьков, изд. Укр ФА, 1999, стр. 24-25
А.М. Королюк, В.Б. Сбойчаков. Медицинская микробиология. С.Петербург, 1999, стр. 24-25
Литература практическая основная:
Л.Б. Борисов и др. Руководство к практическим занятиям по микробиологии. М., 1984, стр. 26
Литература практическая дополнительная:
М.Н. Лебедева. Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии. М., Медицина,
1973, стр. 39
В.В. Тец Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии, вирусологии и
иммунологии. М., Медицина, 2002, стр. 24-25
Л.Г. Бранцевич и соавт. Микробиология. Практикум. К., Вища школа, 1987, стр. 124-129
Ф.К. Черкес. Руководство к практическим занятиям по микробиологическим исследованиям. М.,
Медицина, 1980, стр. 27.
К.Д. Пяткин и соавт. Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии. М.,
Медицина, 1969, стр. 34-35.
1.5. Ориентировочная основа действия.
Споровая культура аэробных бацилл на плотной питательной среде → приготовление мазка → фиксация
→ окрашивание по Цилю-Нильсену → микроскопия иммерсионной системой → выявление спор,
окрашенных в розовый цвет, представленных круглыми структурами → ние в протоколе.
Демонстрационный мазок мокроты больного туберкулезом легких, окрашенным по Цилю-Нильсену →
микроскопия иммерсионной системой → выявление кислотоустойчивых бактерий туберкулеза, которые
имеют ярко-розовый цвет → дифференциация с некислотоустойчивыми элементами мокроты → в
протоколе.
8
Сделать выводы о тинкториальных свойствах кислотоустойчивых бактерий и спор, окрашенных по
методу Циля-Нильсена.
1.7. Короткие методические указания для работы студентов на лабораторном занятии.
Из агаровой культуры спорообразующих бацилл-сапрофитов приготовить мазок, зафиксировать и
покрасить по методу Циля-Нильсена. Мазок промикроскопировать,
споры красного цвета.
Отдифференцировать от вегетативных форм по цвету. Препарат зарисовать. В демонстрационном мазке
мокроты больного открытой легочной формой туберкулеза, окрашенного по Цилю-Нильсену, бактерии
возбудителя, дать морфологическую характеристику с точки зрения тинкториальных свойств. Препарат
зарисовать. Сделать выводы, оформить протокол.
1.7.1. Методика проведения занятия.
- Обоснование актуальности темы, которая изучается на занятии.
- Контроль исходного уровня знаний-умений.
- Контроль знаний по изучаемой теме.
- Самостоятельная практическая работа для усвоения знаний-умений, оформление протокола.
- Объявление результатов контроля знаний-умений, подведение итогов. Задание на следующее занятие
Автор: доцент, кандидат медицинских наук Мруг Валентина Максимовна
Методическая разработка
по подготовке и работе на лабораторном занятии №5
для студентов стоматологического факультета.
Тема: Капсула у бактерий. Жгутики. Внутриклеточные включения. Способы их выявления.
1.1. Актуальность темы.
Знание строения бактериальной клетки имеет большое значение в практике врача, поскольку
особенности течения некоторых болезней обусловлены структурой возбудителя. Например,
капсулообразование у таких микроорганизмов как пневмококк и клебсиелла, обусловливает угнетение
фагоцитоза, хронизацию воспалительного процесса, длительное течение заболеваний, вызванных ими.
В лабораторной диагностике знание структуры бактерий определяет сущность микроскопического
метода исследования.
Капсулообразование считают приспособительной функцией бактерий. Она может образовываться у
некоторых бактерий только в организме человека или животного, у других – как в организме, так и вне
его. В зависимости от особенностей бактерий, химический состав бактериальной капсулы может быть .
Выявление капсулы является одним из весомых критериев идентификации микроорганизмов.
Бактерии, по способности передвигаться разделяются на подвижных и неподвижных. Их способность к
активному движению обусловлена наличием особенных поверхностных придатков – жгутиков.
Обнаруживают наличие этих анатомических структур определением подвижности бактерий,
применением особенных методов обработки их протравами, адсорбцией особенных веществ и
красителей на поверхности клетки бактерии и с помощью электронной микроскопии.
В цитоплазме бактериальной клетки накапливаются
вещества, сложные соединения, которые
используются ею в процессе жизнедеятельности. Наибольшими являются гранулы волятина,
липопротеидные тельца, гликоген, капли пигмента, серы и тому подобное. Иногда размеры включений
настолько большие, что определяются как морфологическая особенность и используются в качестве
критерия видового или родового признака микроба.
1.2. Цель изучения темы.
Морфологические особенности используются при идентификации бактерий. Изучение методов
выявления капсулы, жгутиков и внутриклеточных включений позволяет широко и эффективно
распознать принадлежность выделенного возбудителя к тому или другому виду и, тем самым,
своевременно диагностировать инфекционную болезнь.
1.2.1. Цель общая.
Уметь использовать морфологические свойства бактерий для их идентификации.
9
1.2.2. Цель конкретная:
1. Усвоить метод выявления капсулы по Бурри-Гинсу.
2. Усвоить метод выявления зерен волютина по Нейссеру.
3. Усвоить технику приготовления препаратов «висячая»
микроскопическое исследование
и
«раздавленная»
капля
и
их
1.3. Обеспечение исходного уровня знаний-умений:
1. Уметь приготовить мазок из агаровой культуры
2. Уметь сложными методами
3. Уметь микроскопировать сухим объективом биологического микроскопа
4. Уметь микроскопировать иммерсионным объективом биологического микроскопа
5. Знать принципы темнопольной микроскопии живых микроскопических объектов при использовании
темнопольного и фазово-контрастного микроскопов.
1.4. Содержание :
1. Ультраструктура бактерий
2. Капсула у бактерий, ее химический состав, методы выявления
3. Жгутики у бактерий, их строение, методы подвижности
4. Внутриклеточные включения у бактерий, методы
1.4.1. Граф логической структуры по содержанию.
Исследуемая культура бактерий → приготовление мазка → окрашивание по Бурри-Гинсу →
микроскопия мазка → капсулы
Исследуемая культура бактерий → приготовление препаратов «висячая капля» или «раздавленная
капля» → микроскопия препарата → подвижности бактерий
Исследуемый материал, окрашенный по Нейссеру → микроскопия мазка → выявление зерен волютина
1.4.2. Перечень теоретических вопросов.
1. Капсула и ее биологическая роль для бактериальной клетки. Химический состав капсулы.
2. Внутриклеточные включения. Биологическая роль в жизнедеятельности бактерий. Методы выявления.
3. Органы движения бактерий. Строение жгутика. Виды подвижных бактерий.
4. Методы подвижности бактерий.
5. Метод контрастирования капсулы по Бурри-Гинсу.
1.4.3. Источники учебной информации.
Литература теоретическая основная:
К.Д. Пяткин, Ю.С. Кривошеин. Микробиология. М. Медицина, 1980, стр. 28-30, 32-36.
А.А. Воробьев и соавт. Микробиология. М. Медицина, 1994, стр. 23-26
В. Д. Тимаков и соавт. Микробиология. М. Медицина 1993. стр. 28-31, 38-40
Крок-1. Загальна лікарська підготовка. Київ, Медицина 2004
Л.Б. Борисов и соавт. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология. М. Медицина, 1994, стр.
35-37, 38-39.
Г.К. Палій і співавт. Мікробіологія, вірусологія, імунологія, інфекційні хвороби.
Литература теоретическая дополнительная:
А.А. Воробьев. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология. М., МИА, 2004, стр. 39-41.
А.И. Коротяев, С.А. Бабичев. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология. С.Петербург.
Спецлит., 2002, стр. 40-45.
В.И. Покровский. Медицинская микробиология. ГЭОТАР-МЕД, М., 2002, стр. 47-50, 54.
И.Л. Дикий и соавт. Микробиология. Харьков, изд. Укр ФА, 1999, стр. 21-22, 24-25.
А.М. Королюк, В.Б. Сбойчаков. Медицинская микробиология. С.Петербург, 1999, стр. 24-26.
В.И. Покровский, О.К. Поздеев. Медицинская микробиология. ГЭОТАР Медицина, Москва, 1998, стр.
17-19.
Литература практическая основная:
Л.Б. Борисов и др. Руководство к практическим занятиям по микробиологии. М., 1984, стр. 26-27.
Литература практическая дополнительная:
10
М.Н. Лебедева. Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии. М., Медицина,
1973, стр. 40-42, 43, 44-45.
В.В. Тец Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии, вирусологии и
иммунологии. М., Медицина, 2002, стр. 20, 25-26.
Л.Г. Бранцевич и соавт. Микробиология. Практикум. К., Вища школа, 1987, стр. 109-110, 112-115, 121124.
Ф.К. Черкес. Руководство к практическим занятиям по микробиологическим исследованиям. М.,
Медицина, 1980, стр. 27-30.
К.Д. Пяткин и соавт. Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии. М.,
Медицина, 1969, стр. 29, 30-34.
1.5. Ориентировочная основа действия.
Агаровая культура клебсиелл → приготовление мазка по методу Бурри (смешивают культуру с тушью,
широко, как мазок крови, растирают шлифовальным стеклом) → высушивают → красят разведенным
фуксином 2 мин. по методу Бурри-Гинса → промывают → высушивают → микроскопируют →
обнаруживают на черном тушевом фоне розовые бактерии, окруженные бесцветной капсулой.
Бульонная культура B. subtilis → приготовление препаратов «висячая капля» (культуру наносят петлей
на покровное стекло, сверху накрывают специальным стеклом с лункой, края которой смазывают
вазелином) или «раздавленная капля» (культуру петлей наносят на предметное стекло, сверху
накрывают покровным стеклом, вытесняя пузырьки воздуха) → микроскопируют со стороны
покровного стекла, при опущенном конденсоре, сухим объективом х40 → наблюдают передвижение
бактерий серого цвета в поле зрения.
Демонстрационный мазок, с культурой бактерий, которые содержат волютиновые зерна, окрашенный по
Нейссеру → микроскопия → выявление темносиних зерен волютина на фоне желтой цитоплазмы
клеток.
Препараты
→ делают выводы относительно особенностей выявления капсулы, жгутиков и
волютиновых включений → приводят примеры возбудителей, которые имеют их.
1.7. Короткие методические указания для работы студентов на лабораторном занятии.
Используя технику приготовления мазка по методу Бурри, приготовить мазки из агаровой культуры
клебсиелл, покрасить разведенным фуксином 2-3 минуты, промыть и высушить. При микроскопии
обнаружить капсулу, результат исследования зарисовать в протокол.
Освоить технику изготовления из бульонной культуры B. subtilis препарата «раздавленная капля»,
технику микроскопии в затемненном поле зрения, подвижность бактерий в жидкой среде.
Усвоить культуральный способ определения подвижности бактерий и их дифференциацию с
неподвижными на примере посевов уколом в столбик полужидкого агара культур ешерихий и
клебсиелл. Отметить в протокольной тетради.
Промикроскопировать демонстрационные препараты из культуры возбудителя дифтерии, окрашенного
по Нейссеру. зерна волютина, микроскопическую картину зарисовать в протокол. Сделать выводы.
Убрать рабочее место.
1.7.1. Методика проведения занятия.
- Определение актуальности темы, которая изучается на занятии.
- Контроль исходного уровня знаний.
- Контроль знаний изучаемой темы.
- Самостоятельная практическая работа, оформление протокола.
- Объявление результатов контроля знаний, подведение итогов.
Автор: доцент, кандидат медицинских наук Мруг Валентина Максимовна
Методическая разработка
по подготовке и работе на лабораторном занятии №6
для студентов стоматологического факультета
11
Тема: Морфология, особенности строения и способы выявления спирохет, риккетсий, хламидий,
микоплазм, актиномицетов.
1.1. Актуальность темы состоит в необходимости получения знаний по морфологии основных групп
патогенных микроорганизмов для правильного проведения микроскопического метода диагностики
инфекционных болезней.
1.2. Цели изучения темы:
1.2.1. Цель общая: уметь использовать морфологические особенности микроорганизмов для их
идентификации.
1.2.2. Цель конкретная: усвоить методы изучения морфологии спирохет, актиномицетов, микоплазм,
риккетсий, хламидий, простейших и грибов.
1.3. Обеспечение исходного уровня знаний-умений:
1. Основные анатомические структуры, которые входят в состав бактериальной клетки.
2. Основные компоненты клеточной стенки бактерий.
3. Методы изучения структур клеточной стенки бактерий.
1.3.1. Тесты исходного уровня знаний-умений:
Для структуры клеточной стенки бактерий характерны все нижеуказанные свойства. Кроме:
A. Клеточная стенка грамотрицательных бактерий более чувствительна к действию лизоцима, чем стенка
грамотрицательных бактерий.
B. Включает в себя полимер – пептидогликан.
C. Строение включает в себя свойство воспринимать окрашивание по Граму.
D. Представляет уникальную пластическую систему.
E. Содержит d-изомеры аминокислот.
Правильный ответ: А.
1.4. Содержание обучения.
1.4.1. Граф логические структуры содержания.
Материал для исследования трепонем: пунктат лимфатических узлов, отделяемое твердого шанкра.
Микроскопическое исследование – готовят препарат „висящую” каплю и изучают в темном поле зрения.
Изучают морфологию трепонем окрашивание по методу Бурри, Морозова.
Материал для исследования лептоспир и боррелий: кровь, моча. Микроскопическое исследование –
готовят препарат для микроскопии в темном поле. Изучают морфологию лептоспир и боррелий по
методу Романовского-Гимзе, Бурри, Морозова.
Материал для исследования риккетсий – кровь больного. Микроскопическое исследование – готовят
препарат из культур тканей или из зараженного кровью больного куриного эмбриона, окрашивают по
методу Здрадовского.
Материал для исследования хламидийных инфекций – мокрота, мазки-отпечатки из коньюктивы
глаз, биоптат с влагалища. Микроскопическое исследование – изготовление препаратов, окрашивание
по методу Романовского-Гимзе.
Материал для исследования заболеваний, вызванных актиномицетами – мокрота, гной.
Микроскопическое исследование – исследование неокрашеных и окрашеных по методу Грама
препаратов для определения друз.
Материал для исследования патогенных простейших, которые относятся к классу жгутиковых –
мазки-отпечатки из гранулем, пунктат из костного мозга, кровь, кал. Микроскопическое исследование –
изготовление препаратов из исследуемого материала и окраска по Романовскому-Гимзе, Граму.
Материал для исследование простейших, которые относятся к классу саркодовых – кал.
Микроскопическое исследование кала проводят для выявления в нем цист или зерен гликогена,
окрашивание проводят метиленовым синим, раствором Люголя.
Материал для исследования патогенных простейших, которые относятся к классу ресничковых –
свежий кал. Микроскопическое исследование – нефиксированые препараты из кала для определения
трофозоитов.
Материал для исследования патогенных простейших, которые относятся к классу споровики – кровь,
спинномозговая жидкость, плевральный эксудат. Микроскопическое исследование – изготовление
препаратов из исследуемого материала и окраска по методу Романовского-Гимзе.
Материал для исследования дрожжеподобных грибов – мокрота, гной, моча. Микроскопическое
исследование – изготовление препаратов и окраска по методу Грама.
12
Материал для исследования дейтеромицетов – пораженные волосы, ногти, чешуйки кожи.
Микроскопичесское исследование – взятый материал помещают на предметное стекло в каплю 10-20%
раствора КОН или NaOH, накрывают покрывным стеклом и изучают под микроскопом.
1.4.2. Перечень практических вопросов.
1. Морфология спирохет. Методы изучения.
2. Морфология риккетсий. Методы изучения.
3. Морфология хламидий. Методы изучения.
4. Морфология микоплазм. Методы изучения.
5. Морфология актиномицетов. Методы изучения.
6. Морфология простейших, которые относятся к классам: жгутиковых, саркодовых, споровиков,
ресничковых. Методы изучения.
7. Морфология дрожжеподобных грибов и дейтеромицетов. Методы изучения.
1.4.3. Источники учебной информации.
Основные:
1. К.Д. Пяткин, Ю.С.Кривошеин. – Микробиология. – М. – М.,1980. – С. 354, 358-359, 364-365, 368-369,
374-375, 386-387, 390, 453, 449, 464, 467, 471, 476, 486.
2. К.Д. Пяткин, Ю.С.Кривошеин. – Микробиология. – М., 1981 – С. 359, 364-365, 374-375, 386-387, 390,
354-355, 464, 465, 467, 470, 471, 476-477, 481, 486, 453, 451-452.
3. А.И. Коротяев, С.А. Бабичев. – Медицинская микробиология, иммунология и вирусология. – СанктПетербург., 2002 – С. 448-449, 464, 473, 477, 481, 485, 488, 496, 503-504, 512, 514, 517, 520, 521, 522.
4. И.Л. Дикий, И.Д. Холупяк, Н.Е. Шевелева, М.Ю. Стегний. – Микробиология. – Харьков, 1999 – С.
29,32,34,39.
5. И.Л. Дикий, И.Д. Холупяк. – Руководство к лабораторным занятиям. – К., 2004, С. 68-744.
6. Л.Б. Борисов. – Руководство к практическим занятиям по микробиологии. – М.,1984 – С.28-29, 30, 217,
224, 249-252.
7. М.Н. Лебедева. – Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии. – М., 1973 –
С. 49, 54.
8. Ю.С. Кривошеин. – Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии. – М., 1980
– С. 169, 171-172, 177-178, 180-181,187,257, 259, 284-308.
Дополнительные:
1.
Словарь по микробиологии, вирусологии, иммунологии и инфекционным заболеваниям. Под ред.
Проф. Г.К.Палия. – К., 2004. – С. 152-291.
1.5. Ориентовачная основа действия (ООД).
Изготовление мазков из исследуемого материала и окрашивание их адекватными методами.
1.5.1. Окраска готовых мазков риккетсий по методу Здрадовского.
1.5.2. Микроскопирование и зарисовывание морфологии риккетсий.
1.5.3. Микроскопирование и зарисовывание спирохет в препаратах „толстая” капля окрашивание по
Романовскому-Гимзе.
1.5.4. Микроскопирование и зарисовывание лептоспир в препаратах по Морозову.
1.5.5. Микроскопирование и зарисовывание трепонем по Бурри.
1.5.6. Микроскопирование и зарисовывание хламидий в препаратах клеток епителия, инорицированых
ними, окрашеных по Романовскому-Гымзе.
1.5.7. Микроскопирование и зарисовывание малярийного плазмодия по Романовскому-Гимзе.
1.5.8. Микроскопирование и зарисовывание лейшманий по Романовскому-Гимзе.
1.5.9. Микроскопирование и зарисовывание цист лямблий раствором Люголя.
1.5.10. Микроскопирование и зарисовывание кандид по Граму.
1.7. Короткие методические указания для работы студентов на лабораторном занятии.
1.7.1. Методика проведения занятий.
Спирохеты – это извитые подвижные бактерии, характер движения и особенности формы дают
возможность легко отличить их от других бактерий. Применяя разные лабораторные приемы, их легко
обнаружить в нативном материале, который оказывает содействие установлению микробиологического
диагноза.
Актиномицеты – это также бактерии с особой морфологией. Длинные, ветвистые клетки этих
бактерий напоминают мицелий грибов. Правильное изготовление препарата из исследуемого материала,
окраска и знание морфологических особенностей актиномицетов даст возможность определить
принадлежность выявленного возбудителя к указанной таксономической группе.
13
Риккетсии и хламидии принадлежат к особым биологическим разновидностям бактерий внутриклеточных паразитов, размножение которых происходит в живых клетках эпителиального
происхождения. Знание морфологических особенностей на разных этапах развития и методов их
изучение дает возможность правильно установить микробиологический диагноз заболевания,
вызванного ними.
Микоплазмы, будучи бактериями, лишенными клеточной стенки, имеют большую склонность к
полиморфизму. Поэтому, морфологические признаки не является ведущим признаком в идентификации
этих микроорганизмов. Однако, знание этой особенности микоплазм помогает в правильной
диагностике инфекций микоплазменной природы.
Простейшие - одноклеточные эукариоты, более высокоорганизованные, чем бактерии. Они имеют
цитоплазму, дифференцированное ядро, разную по оптическим свойствам оболочку и примитивные
органоиды. Выделяют 4 класса простейших: жгутиковые, саркодовые, споровики и ресничковые.
Морфологические признаки представителей простейших являются типичными, окраска препаратов идет
по методу Романовского-Гимзе, цитоплазма приобретает голубой, ядро - ярко-красный цвета.
Патогенные грибы отнесены к организмам-эукариотам, которые не имеют хлорофилла. Основным
структурным компонентом клеток является мицелий, построенный из разветвленных бесцветных нитей
(гиф). Знание морфологических особенностей разных видов грибов дает возможность установить
микробиологический диагноз заболеваний, вызванных грибами.
1.8. Приложение (набор тестов исходного уровня обучающих целевых задач, ответа на них, графы,
алгоритмы).
Автор: доцент, к.м.н. Кордон Ю.В.
Методическая разработка
по подготовке и работе на лабораторном занятии №7
для студентов стоматологического факультета.
Тема: Физиология микроорганизмов. Питание бактерий. Выделение чистой культуры аэробов (І этап).
1.1. Актуальность темы состоит в необходимости получения знаний в исследовательских приемах
патологического материала, выделенного от больного, для проведения бактериологического метода
диагностики инфекционных заболеваний.
1.2. Цели изучения темы:
1.2.1.Цель общая - уметь проводить посевы бактерий на разные питательные среды и выделять чистую
культуру из смеси бактерий.
1.2.2. Цель конкретная:
1.Выучить питательные среды и ингредиенты, которые использованы для их изготовления.
2.Усвоить технику посева микроорганизмов.
3.Ознакомиться с прибором, который используется для культивирования бактерий.
4.Усвоить методы выделения чистых культур аэробов.
1.3. Обеспечение исходного уровня знаний-умений:
1.Уметь готовить микроскопические препараты.
2. Уметь окрашивать препараты по методу Грама.
3.Уметь микроскопировать микропрепараты с помощью иммерсионного объектива.
1.3.1. Тесты исходного уровня знаний-умений.
Описать методику изготовления сложной питательной среды для культивирования бактерий, которые
требуют для своего роста и питания животный белок.
Ответ: Сложные питательные среды содержат сыворотку крови, кровь, асцитическую жидкость и тому
подобное. Методика их изготовления состоит в добавлении к МПА, МПБ стерильных компонентов
(кровь, сыворотку, желчь, асцетическую жидкость).
1.4. Содержание обучения.
1.4.1. Граф логические структуры содержания.
Питательные среды делятся по консистенции: твердые - основной средой является мясо-пептонный
агар. Жидкие, которые не содержат агара - мясо-пептонный бульон; полужидкие среды - это среды,
которые содержат небольшое количество агара - до 2%.
14
Питательные среды делятся по назначению: универсальные среды, на которых может расти
большинство микроорганизмов - МПА, МПБ; елективные среды - состав этих сред создается для роста
конкретного микроорганизма, например, для выделения коринебактерий дифтерии это среды с
телуритом.
Из исследуемого материала делают мазки, окрашивают по методу Грама. После определения
микроорганизмов (по морфологии), которые находятся в исследуемом материале, проводят посев его на
твердую питательную среду для получения изолированных колоний. Чашки Петри с посевами
помещают на 18-24 часа в термостат.
1.4.2. Перечень теоретических вопросов.
1.Метаболизм бактерий, как способ получения питательного материала и энергии.
2.Механизм питания бактерий.
3.Классификация бактерий за типом питания и характером использования энергии.
4.Принципы культивирования бактерий.
5.Питательные среды, техника их изготовления и классификация. Требования к питательным средам.
1.4.3.Источник учебной информации.
Основной:
1. К.Д. Пяткин, Ю.С.Кривошеин. - Микробиология. - Г. - М. - 1980 - С. 42, 47-51.
2. К.Д. Пяткин, Ю.С.Кривошеин. - Микробиология. - Г., 1981 - С. 47-51, 70-74.
3. А.И. Коротяев, С.А. Бабичев. - Медицинская микробиология, иммунология и вирусология. - СанктПетербург., 2002 - С. 46-53, 72-73.
4. И.Л. Дикий, И.Д. Холупяк, Н.Э. Шевелева, М.Ю. Стегний. - Микробиология. - Харьков, 1999 - С. 50-56.
5. И.Л. Дикий, И.Д. Холупяк. - Руководство к лабораторным занятиям. - К., 2004, С. 85-95.
6. Л.Б. Борисов. - Руководство к практическим занятиям по микробиологии. - Г.,1984- С.42-52.
7. М.Н. Лебедева. - Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии. - Г., 1973 - С.
67-85, 87.
8. Ю.С. Кривошеин. - Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии. - Г., 1980 С. 25-26.
Дополнительный:
1. Словарь по микробиологии, вирусологии, иммунологии и инфекционным заболеваниям. Под ред. Проф.
Г.К.Палия. – К., 2004. – С. 152-291.
1.5.Ориентировочная основа действия (ОДД).
1.5.1. Изготовление мазка из исследуемого материала, окрашивание его по методу Грама.
1.5.2. Посев исследуемого материала с помощью бактериальной петли на пластинчатый агар.
1.5.3. Изучение принципа работы термостата.
1.5.4. Изучение в демонстрации различных питательных сред и принципов их изготовления.
1.5.5. Изучение в демонстрационном опыте посева на питательные среды с помощью шпателя по методу
Дрыгальского.
1.7. Короткие методические указания для работы студентов на лабораторном занятии:
1.7.1. Методика проведения занятия.
В лабораторной диагностике инфекционных болезней важную, а иногда и основную роль отводят
бактериологическому исследовательскому приему. Этот метод разрешает выделить возбудителя в
чистом виде, выучить всесторонне его биологические свойства, доказать его этиологическую роль в
инфекционном процессе.
Чистая культура, или потомство одной клетки, может быть получена путем механического
разделения микроорганизмов, которые помещаются в инфекционном материале на поверхности твердой
среды.
Накопить и выделить культуру возбудителя можно используя разные по субстрату питательные
среды, создавая для развития микроорганизмов условия выращивания.
1.8. Приложение (набор тестов исходного уровня обучающих целевых задач, ответы на них,
графы, алгоритмы).
Автор: доцент, к.м.н. Кордон Ю.В.
Методическая разработка
по подготовке и работе на лабораторном занятии №8
для студентов стоматологического факультета
15
Тема: Физиология микроорганизмов. Размножение бактерий. Выделение чистой культуры
аэробов (2 этап).
1.1. Актуальность темы заключается в умении проводить посевы на разные питательные среды и
выделения чистой культуры из смеси бактерий.
1.2. Цели изучения темы.
1.2.1. Цель общая: Студенты должны обосновать бактериологический метод исследования материала,
полученного от больного инфекционной болезнью.
1.2.2. Цель конкретная: Студент должен уметь провести идентификацию микроорганизмов по
культуральным свойствам.
1.3. Обеспечение исходного уровня знаний - умений.
1. Усвоить технику посева микроорганизмов.
2. Ознакомиться с приборами, которые применяются для выращивания бактерий.
3. Усвоить методы выделения чистых культур аэробов.
1.3.1. Тесты на исходный уровень знаний - умений.
Какие культуральные признаки изучают с помощью стереомикроскопа?
А. Размеры колоний.
B. Характер поверхности.
C. Форма поверхности.
D. Структуру.
E. Способность к емульгации в физрастворе.
Ответ: (D).
1.4. Содержание учебы.
1.4.1. Граф логической структуры содержания.
Визуальное изучение результатов посева исследуемого материала на пластинчатый агар. Визуально и с
помощью стереомикроскопа или малого увеличения светового микроскопа изучаются и описываются
свойства изолированных колоний по следующим признакам.
По поверхности – гладкая (S - формы), шероховатая (R - формы), исчерченная, бугристая. Края ровные, зазубренные, волоконные, бахромчатые. Форма - круглая, розеткообразная, звездообразная,
древовидная. Величина - большие (4 - 5мм), средние (2 - 4мм), мелкие (1 - 2мм), карликовые (меньше
1мм). По консистенции; густотой; цветом; окрашенные и бесцветные; влажные, сухие, слизистые;
плоские, выпуклые, куполообразные, вдавленные.
Колонию, в которой предположительно находится возбудитель, отмечают карандашом по
стеклу, готовят из нее микропрепарат. Высушенный и зафиксированный препарат красят по методу
Грама, микроскопируют и зарисовывают. Фиксируют в протоколе морфологию и тинкториальные
свойства возбудителя.
Остаток подозрительной колонии высевают на скошенный агар для получения чистой культуры
и ее последующего исследования.
Перечень теоретических вопросов.
Механизм размножения бактерий.
Факторы роста и размножения бактерий.
Скорость и фазы размножения бактерий. Понятие "колония", "культура" .
Этапы выделения чистых культур бактерий.
Культуральные свойства бактерий, методы изучения.
Значение выделения чистых культур бактерий при бактериологическом методе диагностики
инфекционных болезней.
1.4.3. Источники учебной информации.
Литература.
Основная:
1. К.Д. Пяткин, Ю.С.Кривошеин. - Микробиология. - Г. - М. - 1980 - С. 66-73.
2. К.Д. Пяткин, Ю.С.Кривошеин. - Микробиология. - Г., 1981 - С. 47-52, 63-71.
3. А.И. Коротяев, С.А. Бабичев. - Медицинская микробиология, иммунология и вирусология. - СанктПетербург., 2002 - С. 72-83.
4. И.Л. Дикий, И.Д. Холупяк, Н.Э. Шевелева, М.Ю. Стегний. - Микробиология. - Харьков, 1999 - С. 58-60.
1.4.2.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
16
5. И.Л. Дикий, И.Д. Холупяк. - Руководство к лабораторным занятиям. - К., 2004, С. 99-105.
6. Л.Б. Борисов. - Руководство к практическим занятиям по микробиологии. - Г.,1984- С.47-54.
7. М.Н. Лебедева. - Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии. - Г., 1973 - С.
83-89.
8. Ю.С. Кривошеин. - Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии. - Г., 1980 С. 25-29.
Дополнительная:
1. Словарь по микробиологии, вирусологии, иммунологии и инфекционным заболеваниям. Под ред. Проф.
Г.К.Палия. – К., 2004. – С. 152-291.
1.5.Ориентировочная основа действия (ООД).
1.5.1. Изучение результатов высева исследуемого материала на пластинчатый агар.
1.5.2. Визуальное изучение изолированных колоний, которые выросли на пластинчатом агаре.
1.5.3. Изучение и описание с помощью стереомикроскопа или малого увеличения светового микроскопа
изолированных колоний.
1.5.4. Из колонии, в которой предположительно находится возбудитель, готовят микропрепарат, красят
по методу Грама.
1.5.5. Фиксируют в протоколе морфологию и тинкториальные свойства возбудителя.
1.5.6. Остаток подозрительной колонии высевают на скошенный агар для получения чистой культуры.
1.7. Короткие методические указания для работы студентов на лабораторном занятии.
1.7.1. Методы проведения занятия.
В методике выделения чистой культуры микроорганизмов необходимо уметь макро- и
микроскопически изучать культуральные свойства бактерий.
Овладеть методикой пересева изученной колонии на скошенный агар.
Автор: доцент, к.м.н. Кордон Ю.В.
Методическая разработка
по подготовке и работе на лабораторном занятии №9
для студентов стоматологического факультета
1.1.
1.2.
1.2.1.
1.2.2.
1.3.
1.
2.
3.
1.3.1.
1.4.
1.4.1.
Тема: Физиология микроорганизмов. Ферментативная активность бактерий. Выделение чистой
культуры аэробов (3 этап).
Актуальность темы заключается в умении идентифицировать выделенную чистую культуру бактерий с
помощью определения ее биохимической активности.
Цели изучения темы.
Цель общая: Овладеть методами биохимической идентификации бактерий.
Цель конкретная: Ознакомиться с сахаролитическимими, амилолитическими и гемолитическими
свойствами микроорганизмов в демонстрационных опытах.
Обеспечение исходного уровня знаний - умений.
Уметь определить чистоту выделенной колонии.
Усвоить методы определения ферментативной активности бактерий.
Усвоить методы экспресс - идентификации бактерий по биохимическим свойствам.
Тесты на исходный уровень знаний - умений.
Какие признаки положены в основу определения чистоты выделенной культуры?
А. Чувствительность к антибиотикам.
B. Биологические свойства.
C. Культуральные свойства.
D. Антигенное строение.
E. Чувствительность к бактериофагам.
Ответ: С.
Содержание обучения.
Граф логические структуры содержания.
Микроскопически и визуально проверяется чистота выделенной культуры, микроскопическую
картину зарисовывают.
17
При подтверждении чистоты культуры выделенного микроорганизма, проводится посев его на
среды короткого «пестрого» ряда Гисса, который содержит лактозу, глюкозу, маннит, мальтозу,
сахарозу, МПБ с индикаторными бумажками для выявления индола и сероводорода.
В демонстрационном опыте студенты изучают биохимические свойства бактерий с помощью
системы индикаторных бумажек (СИБ).
1.4.2. Перечень теоретических вопросов.
1. Биохимическая активность бактерий.
2. Классификация ферментов бактерий.
3. Питательные среды, которые используются для биохимической идентификации бактерий.
4. Методы изучения биохимических свойств бактерий.
5. Значение изучения биохимической активности бактерий для идентификации.
6. Использование ферментов бактерий в медицинской практике и промышленности.
1.4.3. Источники учебной информации.
Литература основная:
1. К.Д.Пяткин, Ю.С.Кривошеин. Микробиология.- М., 1981. - с.51 - 59.
2.
К.Д.Пяткин, Ю.С.Кривошеин. Микробиология.- М., 1980. - с.51 - 59.
3. А.И.Коротяев, С.А.Бабичев. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология.,- Санкт Петербург. 2002. - с.54 - 55.
4. И.Л.Дикий, И.Ю.Холупяк, Н.Е.Шевелева, Микробиология.,- Харьков., 1999. - с.56 - 57.
5. И.Л.Дикий. Микробиология. Руководство к лабораторным занятиям.,- Харьков., 2004. - с.106 - 113.
6. Л.В.Борисов. Руководство к практическим занятиям по микробиологии. – М., 1980. – с. 46 – 47, 52 –
56.
7. М.Н.Лебедева . Руководство к практическим занятиям по микробиологии- М., 1973. – с. 92-95.
8. Ю.С. Кривошеин. Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии - М., 1986.
- с.26- 29.
Дополнительная:
1.Словарь по микробиологии, вирусологии, иммунологии и инфекционным заболеваниям. Под. ред. проф.
Г.К. Палий . К. 2004,- С. 152-291.
1.5.Ориентировочная основа действия (ООД).
1.5.1. Макроскопически и микроскопически проверить чистоту выделенной колонии, микроскопическую
картину зарисовать.
1.5.2. Изучение биохимических свойств выделенного микроорганизма. Высевают культуру на среды
короткого «пестрого» ряда Гисса для определения сахаролитических свойств.
1.5.3. В демонстрационных тестах учесть гемолитические, протеолитические свойства бактерий.
1.5.4. В демонстрационном опыте изучить биохимические свойства микроорганизмов с помощью СИБ
(системы индикаторных бумажек).
1.7. Короткие методические указания для работы студентов на лабораторном занятии.
1.7.1. Методы проведения занятия.
В методике идентификации чистой культуры микроорганизмов необходимо овладеть методикой
проверки чистоты культуры.
Овладеть методом пересевания чистой культуры на среды короткого «пестрого» ряда Гисса,
которые содержат лактозу, глюкозу, маннит, мальтозу, сахарозу.
Автор: доцент, к.м.н. Кордон Ю.В.
Методическая разработка
по подготовке и работе на лабораторном занятии №10
для студентов стоматологического факультета
Тема: Физиология микроорганизмов. Дыхание бактерий. Способы культивирования и выделения
чистой культуры анаэробов.
1.1. Актуальность темы заключается в необходимости получения знаний в методах выделения чистых
культур патогенных анаэробных бактерий.
1.2. Цели изучения темы.
1.2.1. Цель общая: Завершить этапы бактериологического метода по идентификации анаеробних бактерий.
1.2.2. Цель конкретная: Усвоить методы культивирования и выделения чистых культур анаэробных
микроорганизмов.
18
1. Выучить методы культивирования анаэробов.
2.Ознакомиться с аппаратурой, которая применяется для культивирования анаэробов.
3. Усвоить методы выделения чистых культур анаэробов.
1.3. Обеспечение исходного уровня знаний - умений.
1. Знать типы дыхания микроорганизмов.
2. Уметь засевать микроорганизмы в разные питательные среды.
1.3.1. Тесты на исходный уровень знаний - умений.
Какие субстраты введены в короткий "пестрый" ряд Гисса?
А. Желатина.
B. Лакмусовое молоко.
C. Маннит.
D. МПБ с индикаторными бумажками на индол и сероводород.
E. Фруктоза.
Ответ: С.
1.4. Содержание обучения.
1.4.1. Граф логические структуры содержания.
Изучение морфологии и тинкториальних свойств споровых форм микроорганизмов путем
микроскопии окрашенного по методу Грама препарата.
Ознакомление с питательными средами для культивирования анаэробов (Китта - Тароцци,
Вильсон - Блера, полужидкий сахарный агар высоким столбиком).
Ознакомление с аппаратурой для выращивания анаэробных микроорганизмов.
1.4.2. Перечень теоретических вопросов.
1. Классификация микрорганизмов по типу дыхания.
2. Сущность процесса дыхания у микроорганизмов.
3. Принципы культивирования анаэробов.
4. Этапы выделения чистых культур споровых и неспоровых анаэробов.
1.4.3. Источники учебной информации.
Литература основная:
1.
К.Д.Пяткин, Ю.С.Кривошеин. Микробиология.- М., 1980. - с.59 - 64.
2.
К.Д.Пяткин, Ю.С.Кривошеин. Микробиология.- М., 1981. - с.59 - 64.
3.
А.И.Коротяев, С.А.Бабичев. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология.,- Санкт
- Петербург. 2002. - с.66 - 72.
4.
И.Л.Дикий, И.Ю.Холупяк, Н.Е.Шевелева, Микробиология.,- Харьков., 1999. - с.57 - 58.
5.
И.Л.Дикий. Микробиология. Руководство к лабораторным занятиям.,- К., 2004. - с.113 - 122.
6.
Л.В.Борисов. Руководство к практическим занятиям по микробиологии. – М., 1980. – с. 52 – 56.
7.
М.Н.Лебедева. Руководство к практическим занятиям по микробиологии- М., 1973. – с. 92-95.
8.
Ю.С. Кривошеин. Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии - М.,
1986. - с.29- 31.
Дополнительная:
1. Словарь по микробиологии, вирусологии, иммунологии и инфекционным заболеваниям. Под ред. Проф.
Г.К.Палия. – К., 2004. – С. 152-291.
1.5.Ориентировочная основа действия (ООД).
1.5.1. Изучение морфологии и тинкториальних свойств споровых форм микроорганизмов путем
окрашивания по методу Грама.
1.5.2. Изучение питательных сред для культивирования анаэробных микроорганизмов.
1.5.3. Изучение роста анаэробных микроорганизмов на среде Китта - Тароцци, молоке.
1.5.4. Ознакомиться с работой анаеростата.
1.5.5. Ознакомиться с химическими и биологическими методами культивирования анаэробных
микроорганизмов.
1.7. Короткие методические указания для работы студентов на лабораторном занятии.
1.7.1. Методика проведения занятия.
Уметь выделить чистую культуру анаэробов из смеси микроорганизмов.
Овладеть методами культивирования и идентификации анаэробных микроорганизмов
Ознакомиться с питательными средами и демонстрационными аппаратами для культивирования
анаэробов.
19
Автор: доцент, к.м.н. Кордон Ю.В.
Методическая разработка
по подготовке и работе на лабораторном занятии №11
для студентов стоматологического факультета.
ТЕМА: Генетика микроорганизмов. Основы генной инженерии. Трансдукция. Трансформация.
Конъюгация.
1.1.
1.2.
1.2.1.
1.2.2.
Актуальность темы: Рост инфекций обусловлен в значительной степени стойкими к лекарствам
формами бактерий, которые образовались под действием разных факторов.
Цель изучения темы:
Цель общая: Усвоить методы изучения генетической и адаптационной изменчивости микроорганизмов.
Цель конкретная: Изучить формы проявления изменчивости микроорганизмов.
1.3. Обеспечение исходного уровня знаний-умений.
1. Определение понятий: “ген”, “геном”, “генотип”, “фенотип”.
2. Внехромосомний генетический материал (транспозони, плазмиди).
3. Виды модификаций.
1.3.1. Задание.
Пример. Что является материальной основой изменчивости, которая определяет генетические
свойства всех организмов:
1. ДНК;
4. липиды;
2. РНК;
5. гаптени.
3. полисахариды;
Ответ: материальной основой изменчивости, определяющей генетические свойства всех организмов есть
ДНК.
о
о
о
о
о
о
о
о
о
о
о
о
о
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
1.4. Содержание обучения.
1.4.1. Графологической структуры содержания занятия:
Определение морфологии инволюционных форм микроорганизмов.
Изучение с помощью стериомикроскопа S-, R-, M-, D-форм колоний микроорганизмов.
Учет опыта трансдукции.
Учет опыта трансформаций.
Определение резистентности стафилококка к антибиотикам методом стандартных дисков.
Ознакомление с биопрепаратами полученными методом генной инженерии (интерфероны,
ронколейкин).
1.4.2. Перечень теоретических вопросов:
Формы проявления изменчивости микроорганизмов.
Организация генетического аппарата бактерии.
Генетические рекомбинации бактерий: трансформация, трансдукция, кон”югация.
Плазмиди и их характеристики (R-, F-, Col, Tain).
Фенотипическая изменчивость. Значение в микробиологической диагностике инфекционных
заболеваний. L-формы бактерий.
Роль мутаций, рекомбинаций, селекции в изменчивости стойких к лекарствам форм бактерий.
Генная инженерия, практическое использование в медицинской микробиологии.
1.4.3. Источники учебной информации:
Основные:
К.Д.Пяткін, Ю.С.Кривошеїн Микробиология К.1982 (укр) с.96-115.
К.Д.Пяткін, Ю.С.Кривошеїн Микробиология М.1980 (росс) с.109-134.
В.Д.Тимаков Микробиология Г. 1983 (росс) с.94-124.
А.И.Коротлев, С.А.Бабич Медицинская микробиология, иммунология и вирусология Санки – Петерб
2002 (росс).
И.Л.Дикий, И.Ю.Холуняк, Н.С.Шевелева, М.Ю.Стегний, Микробиология Харк. 1999(росс), с. 68-76.
Микробиология, Руководство к лабораторным занятиям. Харк. 2002.
О.І.Климнюк, І.О.Ситник, М.С.Творчо, В.П.Широбоков, Практическая микробиология, Терн. 2004 с.111113.
20
8.
9.
10.
1.
2.
Л.Б.Борисов, Руководство к практическим занятиям по микробиологии Г. 1984 (росс) с.68-75.
М.Н.Лебедева, Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии Г. 1973 (росс), с.
156-161.
Ю.С.Кривошеин, Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии Г. 1986 (росс).
Дополнительные:
Словарь по микробиологии, вирусологии, иммунологии и инфецийним заболеваниям. Заг. ред. проф.
Г.К.Палій, К, 2004.
Гайдаш І.С., Флегонтові В.В., Медицинская вирусология, Луганск 2002 с.59-70.
1.5. Ориентировочная основа действия (ООД).
Изменчивость микроорганизмов деференцируют на ненаследственную (модификационную),
предопределенную неоднородностью условий развития особей одного генотипа, и наследственную, что
создается мутациями и генетическими рекомбинациями.
Ненаследственная изменчивость микроорганизмов возникает под воздействием факторов
окружающей среды и не действует на генетический аппарат – это модификации.
Под воздействием любых факторов внешней среды микроорганизмы могут изменять
морфологические признаки (действие пеницилину вызывает образование L-форм), культуральные
(недостаток кальция в питательной среде влечет образование слизистых колоний у бацилл сибирской
язвы).
Наследственная изменчивость наступает у бактерий при изменении генетических структур. В
реализации генетической информации посредником между ДНК и белком является РНК.
Наследственная изменчивость у бактерий проявляется в виде мутаций и рекомбинаций. Как мутагенные
факторы используют ультрафиолетовое, рентгеновское, Y-излучение, быстрые нейтроны, етиленамин,
диетилсульфат. В результате действия мутагенов получены самые производительные штамы
микроорганизмов, которые применяются в производстве антибиотиков. Метод генетических
рекомбинаций патогенных и непатогенных видов бактерий дает возможность получить высокоиммуногенные вакцинные штаммы.
С помощью генной инженерии появилась возможность приготовления интерферонов,
ронколейкинов и др.
1.6. Система обучающих заданий.
Пример. Установлено, что передача генетической информации происходит в одном направлении:
ДНК – РНК – белок. Существуют другие направления передачи генетической информации:
A. РНК – ДНК – белок;
B. РНК – ДНК – полисахарид;
C. ДНК – РНК – полисахарид;
D. ДНК – липиды – РНК;
E. липиды – ДНК – РНК.
Ответ: A.
1.7.1. Короткие методические указания для работы студентов на лабораторном занятии.
С агаровой культуры, где растут инволюционные формы бактерий приготовить мазок,
зафиксировать, окрасить по методу Грама. Промикроскопировать. Зарисовать.
Изучить под стериомикроскопом различные формы колоний микроорганизмов, растущих на
классическом агаре.
Провести учет опыта трансформации и трансдукции. Изучить препараты.
Автор: доцент, доктор мед. наук С.А. Иванова
Методическая разработка
по подготовке и работе на лабораторном занятии №12
для студентов стоматологического факультета
Тема: Влияние физических и химических факторов на микроорганизмы. Методы стерилизации.
21
Актуальность темы. Разнообразные физические и химические факторы способствуют
жизнедеятельности опасных для здоровья человека микроорганизмов или, наоборот, ее подавляют. На
знаниях характера влияния на микроорганизмы химических и физических факторов окружающей среды
основывается вся система мероприятий борьбы с биологическими патогенами.
1.1.
Цели изучения темы.
Цель общая. Овладеть знаниями о влиянии физических и химических факторов на
жизнеспособность опасных для здоровья человека микроорганизмов.
1.2.1. Цель конкретная. Усвоить методы обеззараживания объектов окружающей среды.
1.2.
1.2.1.
1.3.
1)
2)
3)
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
Исходный уровень знаний.
Оптимальные условия для роста и размножения патогенных микроорганизмов.
Влияние на биологические объекты давления, температурного фактора,
концентрации
водородных ионов и электролитов, ионизирующего и УФ облучения, разнообразных химических
веществ.
Способы выживания микроорганизмов в экстремальных условиях окружающей среды.
1.4.2. Перечень теоретических вопросов.
1.4.2.1. Действие физических (температура, давление, лучевая энергия) и химических факторов на
жизнедеятельность микроорганизмов.
1.4.2.2. Определение понятий асептики и антисептики. Дезинфекция и ее место в системе
противомикробных мероприятий.
1.4.2.3. Методы асептики и антисептики.
1.4.2.4. Стерилизация и ее способы.
1.4.2.5. Химические стерильянты, антисептики и дезинфектанты. Классификация по химической
структуре и механизму их действия.
1.4.3. Источники учебной информации.
1.4.3.1. Литература основная.
К.Д. Пяткин, Ю.С. Кривошеин. Микробиология К. 1982 (укр)
К.Д. Пяткин, Ю.С. Кривошеин. Микробиология М. 1980 (рус)
В.Д. Тимаков. Микробиология М. 1983 (рус)
А.И. Коротяев, С.А. Бабич. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология СанктПетербург. 2002 (рус)
И.Л. Дикий, И.Ю. Холупяк, Н.С. Шевелева, М.Ю. Стегний, Микробиология Харьк. 1999 (рус)
Микробиология. Руководство к лабораторным занятиям. Харьк. 2002
О.І. Климнюк І.О. Ситник, М.С. Творко, В.П. Широбоков, Практическаямикробиология. Терн.
2004.
Л.Б. Борисов, Руководство к практическим занятиям по микробиологии М. 1984 (рус)
М.Н. Лебедева. Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии М. 1973
(рус)
Ю.С. Кривошеин. Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии М. 1986
(рус)
22
1.4.
1.4.1. Граф логической структуры смысла.
Влияние на микроорганизмы внешних факторов
Физических
Давление
Атмосферний
Температура
Осмотический
Низкая
Кислоты, щелочи
рН
Высокая
Виживают
Химических
 4,0
Окислители
 10,0
ПАВ
Фенолы
Спирты
Галогенсодержащие
Соли тяжелых
металов
Альдегиды
Губительное влияние
Практическое использование в медицине
Антисептика
Асептика
Дезинфекция
Стерилизация
Очаговая
Профилактическая
Методы
Механическая
Физическая
Химическая
23
1.4.3.2. Дополнительная
Словарь по микробиологии, вирусологии и иммунологии, инфекционным заболеваниям.
Общ. ред, проф., Г.К. Палий. К. 2004.
2.
Гайдаш И.С., Флегонтова В.В. Медицинская вирусология. Луганск. 2002.
3.
Вашков В.И. Средства и методы стерилизации, применяемые в медицине. М.: Медицина.
– 1973.
4.
Жизнь микробов в экстремальных условиях // Под ред. Д Кашнера. – М.: Мир. – 1981.
1.5.
Ориентировочная основа действия.
1.
Исследование
эфективности
способов
обеззараживания
Исследование эфективности
обеззараживания кипячением
тест-обьектов,
инфицированых
вегетативними и споровими
формами бактерий
Исследование
эфективности
обеззараживания обьектов
химическим способом
Подбор
эфективной
концентрации
вещества
Метод серийных
последовательных
розведений препарата в
жидкой питательной
среде
Подбор эфективной
экспозиции
обеззараживання
Метод искусственно
инфицированых
тест-обьектов
1.7. Короткие методические указания для работы студентов на лабораторном занятии.
1.7.1. Методика проведения занятия
1.7.1.1. Изучение действия температуры кипения на вегетативные и споровые формы
микроорганизмов. Изготовляют суспензию суточной культуры кишечной палочки и, отдельно,
суспензию недельной культуры антракоидов. Пробирки с суспензиями прогревают на кипящей
водяной бане на протяжении 3 мин. Выполняют посевы из обеих пробирок на МПА и помещают в
термостат. После 24 час. инкубации оценивают эффективность обеззараживания кипячением.
1.7.1.2. Исследование эффективности обеззараживающего действия химических антисептиков.
Искусственно контаминируют 7 марлевых тест-обьектов путем погружения во взвесь суточной
культуры кишечной палочки на 1-3 мин. Контаминированные тест-обьекты по одному погружают
на 5 мин. в 0,01% и 0,1% растворы хлорамина, карболовой кислоты, декаметоксина и 0,9%
раствор хлорида натрия (контроль). По завершении экспозиции обеззараживания каждые тестобьект переносят в отдельную пробирку с МПБ. Посевы 24 часа инкубируют в термостате.
Оценивают
эффективность
обеззараживающего
действия
каждого
раствора
по
наличию/отсутствию роста.
Автор: профессор, д.м.н. В.П. Ковальчук
МЕТОДИЧЕСКАЯ РАЗРАБОТКА
по подготовке и работе на лабораторном занятии №13
для студентов стоматологического факультета
Тема: Антимикробные химиотерапевтические средства. Антибиотики. Методы определения
чувствительности бактерий к антимикробным препаратам.
1.1.
Актуальность темы. Поиск эффективных средств борьбы с возбудителями
инфекционных болезней является самой актуальной задачей медицинской микробиологии.
Современный арсенал средств этиотропного лечения инфекционных болезней исчисляется
сотнями препаратов с разными механизмами и спектром противомикробного действия,
определенными особенностями лечебной эффективности, без знания которых невозможно
предоставить квалифицированную медицинскую помощь. Актуальность темы обостряется
непрерывной адаптацией микроорганизмов к внешним влияниям в борьбе за сохранение видов.
1.2.
Цели изучения темы.
24
Цель общая. Овладеть знаниями принципов этиотропного лечения
заболеваний
микробного происхождения.
1.2.2.
Ознакомиться с современным арсеналом противомикробных лекарственных средств.
Освоить методики определения чувствительности бактерий к противомикробным средствам.
1.3.
Обеспечение исходного уровня знаний-умений.
А. Влияние на микроорганизмы разнообразных химических факторов.
Б. Основные типы взаимоотношений микроорганизмов в природе.
В. Механизмы конкурентных взаимоотношений микроорганизмов в природе.
1.4. Смысл обучения.
1.4.1. Граф логической структуры содержания.
1.2.1.
Химиотерапевтические
средства
Антибиотики
Синтетические химические
соединения
Классификация по химической
структуре
Классификация по механизму
действия
Спектр протимикробного действия
Методы определения
чуствительности микроорганизмов
Методы преодоления резистентности
микроорганизмов и принципи
рациональной химиотерапии
1.4.2. Перечень теоретических вопросов.
1.4.2.1.
Определение
химиотерапии,
химиопрофилактики,
химиотерапевтических
средств
химиотерапевтического индекса.
1.4.2.2. Основные группы химиотерапевтических средств по химической структуре.
1.4.2.3. Антибиотики, классификация по химической структуре и механизму противомикробного действия.
1.4.2.4.
Механизм
формирования
и
распространения
резистентности
микроорганизмов
химиотерапевтическим средствам, пути ее преодоления.
1.4.3. Источники учебной информации.
и
к
25
Основные:
1.
К.Д. Пяткин, Ю.С. Кривошеин. Микробиология К. 1982 (укр.).
2.
К.Д. Пяткин, Ю.С. Кривошеин. Микробиология К. 1980 (рус.).
3.
В.Д. Тимаков. Микробиология Г. 1983 (рус.).
4.
А.И. Коротяев, С.А. Бабич. Медицинская микробиология, імунологіяи вирусология,
Санкт-Петербург, 2002 (рус.).
5.
И.Л. Дикий, И.Ю. Холупяк, Н.С. Шевелева, М.Ю. Стегний. Микробиология, Харк.,
1999 (рус.).
6.
Микробиология. Руководство к лабораторным занятиям. Харьк. 2002
7.
О.И. Климнюк, И.О. Ситник, М.С. Творко, В.П. Широбоков. Практическая
микробиология. Терн., 2004
8.
Л.Б. Борисов. Руководство к практическим по микробиологии, М. 1984 (рус.).
9.
М.Н. Лебедева. Руководство к практическим занятиям по медицинской
микробиологии, М. 1973 (рус.).
10.
Ю.С. Кривошеин. Руководство к практическим занятиям по медицинской
микробиологии, М. 1986 (рус.).
Дополнительные:
1.
Словарь по микробиологии, вирусологии, иммунологии и инфекционным
заболеваниям. Общ. ред., проф., Палий, К, 2004
1.5. Ориентировочная основа действия (ООД).
1.6.
Определение
чуствительности культуры
микроорганизмов к
антибиотикам методом
бумажных дисков.
Измерение зон задержки
роста вокруг стандартных
бумажных дисков
Определение
чуствительности культуры
микроорганизмов к
химиотерапевтическому
средству методом серийных
разведений
Расчет минимальных
бактериологических и
бактерицидных
концентраций препарата
Прогнозирование
возможного
клинического
эффекта
1.7. Короткие методические указания для работы студентов на лабораторном занятии.
1.7.1. Методика проведения занятия.
1.7.1.1. Тестовый контроль исходного уровня знаний и усвоения темы.
1.7.1.2. Обсуждение теоретических вопросов.
1.7.1.3. Освоение метода определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам с помощью
стандартных бумажных дисков. На предварительно подготовленных чашках с МПА, засеянными
культурами микроорганизмами, с размещенными на них бумажными дисками с антибиотиками
проводят измерение зон задержки роста бактерий.
1.7.1.4. Освоение метода последовательных серийных двукратных разведений препарата в жидкой
питательной среде. Пользуясь предварительно подготовленными и засеянными тест-культурами
микроорганизмов штативами с пробирками высчитывают минимальную бактериостатическую
концентрацию исследуемого препарата. С помощью демонстрационных чашек с высевами
пробирок в штативе, в которых визуально незаметен рост, высчитывают минимальную
концентрацию препарата.
1.7.1.5. Оформление протокола лабораторного занятия и подведения итогов.
Автор: профессор, д.м.н. В.П. Ковальчук
Методическая разработка
по подготовке и работе на лабораторном занятии №14
для студентов стоматологического факультета
26
Тема: Инфекция. Факторы патогенности микроорганизмов, их определение. Биологический
метод исследования.
1.1. Актуальность темы: учение об инфекции играет важную роль, так как дает
возможность понять, чем обусловлена способность некоторых микроорганизмов вызывать
развитие инфекционного процесса. Существующие знания разрешают разрабатывать препараты
для лечения и профилактики инфекционных болезней, вызванных этими микроорганизмами, а
также совершенствовать диагностические методы их исследования. Знание особенностей развития
и хода инфекционного процесса разрешает грамотно влиять на него, облегчая его ход.
1.2. Цели изучения темы:
1.2.1. Цель общая: Ознакомиться с основными понятиями „инфекция”, „инфекционный
процесс”, „инфекционная болезнь”. Ознакомиться с основными факторами вирулентности
микроорганизмов.
1.2.2. Цель конкретная:
1. Выучить основные факторы патогенности микроорганизмов. Усвоить методы их
лабораторного определения:
а) ферментов патогенности
б) токсинов и др.
2.
Выучить
возможность
использования
в
микробиологической
практике
экспериментального
(биологического)
метода
диагностики.
Овладеть
методикой
внутрибрюшинного заражения экспериментальных животных.
3. Усвоить методику вскрытия и микробиологического исследования трупа лабораторного
животного, которое погибло от экспериментальной инфекции.
1.3. Обеспечение исходного уровня знаний-умений.
1. Формы симбиоза микро- и макроорганизмов.
2. Паразитизм, его характеристика, виды.
3. Специальные питательные среды, их назначение.
4. Капсула бактерий, функции. Метод выявления.
5. Клеточная стенка бактерий, функции. Метод выявления.
6. Пили (фимбрии) бактерий, их биологическая роль.
1.4. Содержание обучения.
1.4.1. Граф логической структуры содержания:
Инфекция
Инфекционный процесс
Инфекционная болезнь
это активное проникновение патогенного
микроорганизма в макроорганизм, следствием
чего является развитие инфекционного
процесса.
это совокупность физиологических, адаптационноприспособительных и патологических
процессов в организме, которые возникают
вследствие заражения.
это крайняя степень инфекционного процесса,
когда вследствие преобладания патологических
реакций над компенсаторными, возникает
нарушение гомеостаза организма человека,
который проявляется характерными
клиническими признаками, биохимическими,
гистологическими и иммунологическими
изменениями.
27
Факторы патогенности микроорганизмов
Свойства патогенного микроорганизма
Факторы патогенности
пили адгезии
капсула
пептидогликан
тейхоевые кислоты
жирные кислоты
А и М белки
Адгезивность и колонизация






Инвазивность
 жгутиками
ферментами инвазии и агрессии
- гиалуронидаза
-лецитиназа
-ДНК-аза и РНК-аза
-фибринолизин
-плазмокоагулаза
-коллагеназа
-гемолизин
Экзо- и эндотоксины
Токсичность
Характеристика микробных токсинов
Экзотоксини
 представленный белком
 имеет специфическое действие на
определенные клетки
 действует в малых концентрациях
 переходит в анатоксин
 термолабильный
Эндотоксини








представленный липополисахаридом
имеет неспецифичное действие
вызывает пирогенную реакцию организма
вызывает эндотоксический шок
повышает проницаемость капилляров
действует в больших концентрациях
не переходит в анатоксин
термостабильный
Механизмы и пути передачи инфекции
Механизмы
Пути
Аэрогенний
Фекально-оральний
Контактный (прямой, через предметы)
Трансмиссивный
Вертикальный
воздушно-капельный
воздушно-пылевой
 алиментарный
 водный




слизистые оболочки
поврежденная кожа
неповрежденная кожа
половой
 укус кровососных насекомых
 парентеральный
через плаценту
28
Признак
По источнику:
По проявлениям:
По количеству возбудителей:
Виды и формы инфекции
Виды инфекций
 антропонозные
 зоонозные
 сапронозные
 манифестные
 инапаратнтые
 моноинфекция
 вторичная (оппортунистическая)
 смешаная (микст-инфекция)
По продолжительности:




острая (до 3 месяцев)
затяжная (до 6 месяцев)
хроническая (>6 месяцев)
персистирующая (года, десятилетия)
По способности вызывать повторные
проявления:
 реинфекция (тем же возбудителем после
выздоровления)
 суперинфекция (тем же возбудителем к
выздоровлению)
 рецидив (активация инфекции к
выздоровлению)
По происхождению:
По локализации:
По распространению:




экзогенная
эндогенная (аутоинфекция)
местная
генерализованая (бактериемия, вирусемия,
токсинемия, септицемия, септикопиемия,
токсико-септичний шок)




спорадичные
эндемические
эпидемические
пандемические
1.4.2. Перечень теоретических вопросов:
1. Определение понятия „инфекция”, „инфекционный процесс”, „инфекционное» болезнь.
2. Понятие патогенности и вирулентности микроорганизмов.
3. Генетические аспекты патогенности и вирулентности. Единицы вирулентности
микроорганизмов.
4. Факторы вирулентности микроорганизмов.
5. Токсины микроорганизмов, их характеристика и получение.
6. Распространение микроорганизмов и их токсинов в организме человека.
7. Динамика инфекционного заболевания. Этапы.
8. Формы инфекции.
9. Экспериментальный метод диагностики инфекционных болезней. Лабораторные
животные, их использование в диагностике.
1.4.3. Источника учебной информации
29
Основная
1. К.Д. Пяткин, Ю.С.Кривошеин. Микробиология. Г. 1980. -с.135-158.
2. В.Д.Тимаков. Микробиология. Г. 1983 - с.145-156.
3. А.И. Коротяев, С.А.Бабич. Медицинская микробиология, иммунология и
вирусология. Санкт-Петербург, 2002, с- 124-132.
5. И.Л.Дикий, И.Ю.Холупяк. Микробиология. Харьков, 1999. - с.77-85.
6. И.Л.Дикий. Микробиология. Руководство к лабораторным занятиям. Харьков
2002. с.168-176.
7. М.Н. Лебедева. Руководство к практическим занятиям по медицинской
микробиологии. Г. 1973. с. 118-125.
10. Ю.С. Кривошеин. Руководство к практическим занятиям по медицинской
микробиологии. Г.1986. с. 69-79
11. Лекции
Дополнительная
Словарь по микробиологии, вирусологии, иммунологии и инфекционным заболеванием.
Общ. ред., проф. Палия Г.К, К. 2004.
1.5. Ориентировочная основа действия (ОДД)
Этапы экспериментального (биологического) метода диагностики инфекционных
болезни.
1.
Подготовка животных к заражению. Включает такие этапы:
Отбор лабораторного животного
Маркирование
Фиксация.
2. Заражение. При внутрибрюшинном введении материала животных фиксируют головой вниз
для перемещения кишечника к диафрагме. Поверхность разреза обрабатывают дезинфицирующим
раствором.
3. Разрез внешних покровов начинают из продольного разреза кожи от нижней челюсти к лобку.
Кожу отсепарируют. Делают надрезы по направлению к конечностям. Отмечают состояние
подкожной клетчатки и лимфатических узлов. При наличии в них изменений готовят мазкиотпечатки и осуществляют посев на питательные среды.
4. Разрез грудной полости. Всю область разреза обрабатывают дезинфицирующим раствором.
Пинцетом захватывают мечевидний отросток, после чего делают продольные разрезы. Исследуют
состояние органов грудной клетки. (отмечают наличие эксудата, делают посев крови в среду и
мазки-отпечатки из легочной ткани.
5. Разрез брюшной полости. Поднимают пинцетом брюшную стенку, ножницами осуществляют
продольные разрезы от диафрагмы до лобка и 2 поперечных разреза. После этого отворачивают
мышечные лоскуты и исследуют состояние органов брюшной полости. Обращают внимание на
размер, цвет, консистенцию селезенки, печени, надпочечников.
6. После завершения работы трупп животных и инструменты опускают в дезраствор.
Определение экзотоксинов и экзоферментов
Гиалуронидаза
Гидролизует гиалуроновую кислоту, которая
перестает образовывать сгусток при добавлении
уксусной кислоты. Для определения этого
30
фермента в пробирку с субстратом вносят
суточную культуру бактерий, инкубируют 15
мин при 370С. Потом прибавляют 2-3 капли
концентрированной уксусной кислоты. В
пробах, где содержится гиалуронидаза, не
происходит образование сгустка
Определяют при посеве исследуемой культуры
в стерильную цитратную плазму. Посевы
инкубируют при 370С на протяжении 2-5 ч. В
результате происходит образование белков
плазмы, тогда как в контроле она не изменяет
своей консистенции.
Изучают путем посева исследуемой культуры
„бляшками” в чашки Петри с кровяным агаром.
Чашки инкубируют в термостате на протяжении
суток. При положительном результате вокруг
посева образуются прозрачные зоны гемолиза.
Обнаруживают при посеве на агар с лецитином.
Вокруг колоний бактерий, которые выделяют
фермент, образуется зона помутнения с
перламутровым блеском.
Для выявления некоторых бактериальных
токсинов используют культуры клеток, где они
проявляют цитопатическое действие (ЦПД).
Бактериальные
токсины
различают
по
характеру ЦПД, которое может сопровождается
изменением
формы,
размеров
клетки,
появлением
вакуолей
в
цитоплазме,
нарушением целостности клеточного монослоя.
Плазмокоагулаза
Гемолизин
Лецитиназа
Цитотоксины
1.7. Короткие методические указания для работы студентов на лабораторном занятии.
1.7.1. Методика проведения занятия.
1. Провести вскрытие трупа белой мыши, которая погибла от экспериментальной
инфекции: отсепарировать кожу, отметить изменения в подкожной клетчатке, сделать разрез
грудной и брюшной полостей.
2. Сделать посев крови из сердца, кусочков внутренних органов в сахарный МПБ.
3. Сделать мазки-отпечатки из органов, окрасить по Грамму, промикроскопировать.
4. Выучить действие ферментов патогенности бактерий (гемолизы, лецитиназа,
плазмокоагулаза) в демонстрационном опыте.
5. Оформить протокол, сделать выводы.
Автор: доцент, к.м.н.
З.Н.Прокопчук
Методическая разработка
по подготовке и работе на лабораторном занятии №15
для студентов стоматологического факультета
Тема: Видовой иммунитет. Исследование факторов неспецифической
организма человека.
резистентности
1.1. Актуальность темы: Сегодня известно, что в процессе эволюции у теплокровных
сформировалась целая система противодействия генетически чужеродным веществам (антигенам),
которые проникают в макроорганизм, или при определенных условиях, возникают в нем.
Поэтому, есть довольно актуальным и необходимым изучение механизмов защиты организма
31
человека от антигенов. Это разрешает достигать значительных результатов в снижении
численности инфекционных заболеваний, сохранении и поддержании здоровья населения
планеты.
1.2. Цели изучения темы:
1.2.1. Цель общая: Ознакомиться с понятием „иммунитет”. Выучить основные виды и
формы иммунитета. Ознакомиться с особенностями видового иммунитета и факторами защиты,
которые его обуславливают.
1.2.2. Цель конкретная:
1. Выучить основные анатомо-физиологические факторы защиты.
2. Овладеть методикой определения титра комплемента по 100% гемолизу. Ознакомиться с
составом и особенностями получения гемолитической (индикаторной) системы.
3. Овладеть методикой определения активности лизоцима в биологических жидкостях
(слюна, слезы и др).
4. Выучить этапы фагоцитоза, как одного из основных механизмов защиты организма
человека. Освоить методику определения уровня фагоцитарной активности (определение
фагоцитарного числа и фагоцитарного индекса).
1.3. Обеспечение исходного уровня знаний-умений.
1. Кожа. Структура. Функции.
2. Соединительная ткань. Структура. Функции.
3. Клетки ретикуло-эндотелиальной системы
4. Фагоцитирующие клетки, их разновидности, функции.
5. Нормальная микрофлора организма человека, ее функции.
1.4. Содержание обучения.
1.4.1. Граф логической структуры содержания:
Иммунитет – целостная система защитно-адаптационных механизмов, с помощью которых организм
распознает и уничтожает все чужеродное, что попадает или возникает в нем.
Виды иммунитета:
Видовой
Врожденный
Плацентарный
Приобретенный
Естественный:
Искусственный:
Активный
Активный
Пассивный
Пассивный
Неспецифичные факторы защиты
Анатомо-физиологические
Клеточные
Гуморальные
1.Белки системы комплемента
(С)
2.Белки системы пропердина (Р)
3.Цитокины
► провоспалительные (выделяют
лимфоциты) – ИЛ-1,ИЛ-6, ИЛлимфатических узлов
-мигрирующие (моноциты)
8, фактор некроза опухолей,
Выделительная функция почек-фиксированные (кл. Купфера,
интерфероны: α-интерфероны
Нормальная микрофлора
альвеолярные гистиоциты, кл.
(лейкоциты), β-интерфероны
организма человека
микроглии, остеокласты
(фибробласты), γ-интерфероны
Лихорадка
и т.п.)
(лимфоциты).
Воспаление
Микрофаги
► противовоспалительные –
-нейтрофилы
► ИЛ-4, ИЛ-10, ИЛ-13,
► Кожа
1.Фагоциты
► Слизистые оболочки (верхние Функции:
дыхательные пути, ЖКТ,
► защитная
мочеполовая система,
► презентующая
конъюнктива глазу)
► секреторная
► Барьерная функция
Макрофаги
►
►
►
►
32
трансформирующий ростовой
фактор.
4.Лизоцим (фагоциты)
5.Лактоферин (лейкоциты)
6.Трансферин (гепатоциты)
7.Фибронектин (макрофаги,
фибробласты)
8.Низкомолекулярные вещества и
ионы - ионы галогенов, ионы
водорода, жирные кислоты,
фактор активации тромбоцитов
-эозинофилы
2.NK-клетки (нормальные
киллеры)
1.4.2. Перечень теоретических вопросов:
1. Понятие об иммунитете.
2. Виды иммунитета.
3. Неспецифичные факторы защиты.
4. Анатомо-физиологические факторы неспецифичной защиты.
5. Клеточные факторы неспецифичной защиты. Виды фагоцитирующих клеток.
6. Фагоцитоз, его роль в иммунитете. Этапы фагоцитоза.
7. Неспецифичные гуморальные факторы защиты: комплемент, лизоцим, лизины и др.
1.4.3. Источники учебной информации
Основная
1. К.Д. Пяткин, Ю.С.Кривошеин. Микробиология. Г. 1980. -с.163-169.
2. В.Д.Тимаков. Микробиология. Г. 1983 - с.171-175.
3. А.И. Коротяев, С.А.Бабич. Медицинская микробиология, иммунология и
вирусология. Санкт-Петербург, 2002, с. - 152-163.
4. И.Л.Дикий, И.Ю.Холупяк. Микробиология. Харьков, 1999. - с.86-89.
5. И.Л.Дикий. Микробиология. Руководство к лабораторным занятиям. Харьков
2002. с.163-167.
6.
М.Н. Лебедева. Руководство к практическим занятиям по медицинской
микробиологии. Г. 1973. с. 128.
7. Ю.С. Кривошеин. Руководство к практическим занятиям по медицинской
микробиологии. Г.1986. с. 48
11. Лекции
Дополнительная
Словарь по микробиологии, вирусологии, иммунологии и инфекционным заболеванием.
Общ.. ред. проф. Палий Г.К., К. 2004.
1.5. Ориентировочная основа действия (ОДД)
Схема определения титра комплемента по 100% гемолизу
Пробирки
Компоненты
Исследуемая
Сыворотка (1:10)
Физиологический
Раствор
Гемолитическая
система
Эритроциты барана
Гемолитическая
Сыворотка
Контроль
1
2
3
4
5
6
7
8
0,1
0,2
0,3
0,4
0,5
0,6
0,7
0,8
0,8
0,9
0,8
0,7
0,6
0,5
0,4
0,3
0,2
0,2
1,5
0,5
0,5
0,5
0,5
0,5
0,5
0,5
0,5
0,5
0,5
33
Схема определения действия лизоцима
Пробирки
Компоненты
Раствор яичного белка (1:25)
1
2
1
-
1
1
-
1
Взвесь культуры Micrococcus lysodeicticus
Физиологический раствор
Методика определения фагоцитарной активности
1)
2)
3)
Метод основан на поглощении (фагоцитировании) микроорганизмов лейкоцитами при их
контакте в оптимальных условиях с суточной культурой исследуемого микроба.
В пробирке смешивают гепарин, исследуемую кровь и взвесь E. coli. Инкубируют 30 мин
при 370С. Из смеси готовят мазки-препараты, фиксируют метанолом и красят по РомановськиомуГимзе.
Результаты учитывают, определяя:
активность фагоцитоза - фагоцитарный индекс - число фагоцитирующих клеток,
относительно общего числа нейтрофилов;
интенсивность фагоцитоза - фагоцитарное число - среднее число
микроорганизмов, поглощенная одним нейтрофильным лейкоцитом;
завершенность фагоцитоза - индекс переваривания - отношение числа погибших
микробных клеток к жизнеспособным в мазке-препарате.
Короткие методические указания для работы студентов на лабораторном занятии.
1.7.1. Методика проведения занятия.
1. Определить в демонстрационном опыте активность лизоцима яичного белка,
поставленного по методике описанной выше.
2. Определить титр комплемента в сыворотке крови здорового человека.
3. В демонстрационных мазках-препаратах определить показатели активности фагоцитоза:
а) фагоцитарный индекс;
б) фагоцитарное число.
4. Оформить протокол, сделать выводы.
Автор: доцент, к.м.н.
З.М.Прокопчук
Методическая разработка
по подготовке и работе на лабораторном занятии №16
для студентов стоматологического факультета.
34
Тема: Приобретенный иммунитет. Антигены. Антитела. Серологические реакции. Реакция
агглютинации. Реакция преципитации.
1.1.
Актуальность темы.
Обусловлена широким использованием реакции агглютинаци и преципитации в диагностике
инфекционных заболеваний.
1.2. Цели изучения темы.
1.2.1. Цель общая.
Понять биологическую суть иммунитета как механизма, поддерживающего антигенный статус
организма.
1.2.2. Цель конкретная.
Студент должен уметь ставить и оценивать результаты ориентирочной и развернутой реакции
агглютинации. Овладеть техникой постановки реакции кольцепреципитации и уметь использовать
ее для диагностики инфекционных болезней.
1.3. Обеспечение исходного уровня знаний-умений:
1. Иммунная система, ее строение.
2. Неспецифические и специфические факторы резистентности организма.
3. Механизмы иммунитета.
4. Полноценные и неполноценные антигены (гаптены, полугаптены).
5. Корпускулярные и растворимые антигены.
6. Принцип взаимодействия антигенов и антител.
1.3. Тесты на исходному уровеню знаний-умений:
1.3.1. Какие органы иммунной системы относятся к центральным:
A – вилочковая железа
B – костный мозг
C – селезенка
D – лимфатические узлы
E – печень
Правильный ответ: А, B
1.4. Содержание занятия.
Реакция агглютинации (РА) является иммунологической реакцией, которая роявляется в
склеивании и выпадении в осадок корпускулярних антигенов (бактерии, эритроциты). Характер и
скорость проходжения реакции зависит от антигенного строения бактерий. Мелкозернистая Оагглютинацию дают бактерии, лишенные жгутиков. При наличии жгутиков (Н-агглютинация)
проявляется в оброзовании крупнохлопчатого осадка, РА достаточно специфичная и
чувствительная. Она широко применяется в практике серологической диагностики инфекционных
болезней для идентификации выделенного возбудителя с применением известных стандартных
видовых, типовых агглютинирующих сывороток, а также для выявления в сыворотке больных
агглютининов с помощью известных бактерий (диагностикумов).
В практике диагностики инфекционных болезней применяют также непрямую (писсивную)
гемагглютинацию-РНГА (РПГА), включающуюся в использовании эритроцитов, поверхности
которых адсорируется антиген.
Реакция преципитации (РП) состоит в осаждении (преципитации) антигена (преципитиногена),
находящегося в дисперстном коллоидном состоянии под воздействием специфических антител
(преципитинов) в растворе электролита. РП применяется для диагностики инфекционных
заболеваний (сибирская язва, туляремия), в судебно-медицинской экспертизе для определения
видовой принадлежности белка (кровь, сперма) и в санитарной практике для определения
фальсификации продуктов. РП обладает высокой специфичностью и чувствительностью.
Преципитигеногеном могут быть белки животного, растительного и микробного происхождения,
35
фильтраты культур бактерий или тканей, пораженных ими. РП ставят в различных модификациях:
кольцепреципитации, в геле, для тонких иммунологических исследований применяется
иммуноэлектрофорез, основанный на разделении антигенного комплекса в электрическом поле в
присутствии специфических иммунных сывороток.
1.4.1. Граф логической структуры содержания.
Использование РА в диагностике инфекционных заболеваний:
1. Идентификация возбудителя.
Исследуемый материал – выделенная чистая культура бактерий.
Постановка РА бактерий на стекле со специфическим агглютинирующими видовыми и типовыми
сыворотками.
Конечный результат через 10-15 мин.
2. Определение титра антител в сыворотке больного.
Исследуемый материал – сыворотка крови больного.
Постановка развернутой РА с сывороткой больного в разведениях 1:50-1:1600 со специфическими
диагностикумами.
Конечный результат через 18-20 час.
Граф логической структуры РП.
Материал для исследования: коллоидный растворимый антиген, экстрагированный из
патологического материала РП ставится в узких пробирках со специфической преципитирующей
сывороткой путем наслаивания.
Конечный результат через 1-2 мин.
1.4.2. Перечень теоретических вопросов:
1. Определение понятия „иммунитет”.
2. Антигены, общая характеристика, детерминантные группы.
3. Антигенная структура бактериальной клетки.
4. Антитела, общая характеристика, химическихая природа.
5. Классы иммуноглобулинов, строение и функции.
6. Серологические реакции и феномены, лежащие в их основе.
7. Реакция агглютинаци (РА), ее механизм.
8. Агглютиногены, агглютинины, их свойства.
9. Реакция пассивной гемагглютинации (РПГА), ее механизмы.
10. Методические варианты, техника постановки, диагностическое значение РА и РПГА.
11. Гаптены, их свойства.
12. Характеристика преципитиногенов и преципитинов.
13.
Механизм взаимодействия преципитиногенов и преципитинов, их получение и
использование.
14. Методические варианты РП: кольцепреципитации, РП в геле, иммуноэлектрофорез (РИЭФ).
15. Практическое использование РП в медицине и биологии.
1.4.3. Источники учебной информации.
Основная литература:
К.Д.Пяткін, Ю.С.Кривошеїн. Мікробіологія, 1982, с.145-157, 172-177
К.Д.Пяткин, Ю.С.Кривошеин. Микробиология, 1980, с.169-181, 195-197
В.Д.Тимаков. Микробиология, 1983, с.180-184, 188-192, 218-222
А.И.Коротяев, С.А.Бабич. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология, СанктПетергбург, 2002, с.151-161, 163-171, 176-181, 229-232
О.І.Клименюк, І.О.Ситник, М.С.Творко, В.П.Широбоків. Практична мікробіологія, 2004, с.126-136
И.Л.Дикий, И.Ю.Халупяк, Н.Е.Шевелева, М.Ю.Стогний. Микробиология, Харьков, 1999, с.85-86,
89-93, 94-96, 112-114
Л.Б.Борисов. Руководство к практическим занятиям по микробиологии, М., 1984, с.107-112
М.Н.Лебедева. Руководство к практическим занятиям по медицин ской микробиологии, М., 1973,
с.136-143
36
Дополнительная литература:
Словник по мікробіології, вірусології, імунології та інфекційним захворюванням. Заг. ред. проф.
Палій, К., 2004.
1.5. Ориентировочная основа действий (ООД)
Использование РА в диагностике инфекционных болезней:
Исследуемый материал
Чистая культура возбудителя
Сыворотка крови больного
РА на стекле со специфическими
видовыми, типовыми,
агглютинирующими сыворотками
Развернутая РА с разведениями
сыворотки больного 1:50-1:1600 со
специфическими диагностикумами
Конечный результат
через 10-15 мин.
Конечный результат
через 18-20 час.
Использование РП в диагностике инфекционных заболеваний, санитарии, судмедэкспертизе:
Исследуемый материал
Экстракт из возбудителей, вытяжка из
инфицированных органов, стенномозговая жидкость больных, смыв
кровяных пятен, пищевые продукты
Культуры возбудителей,
продуцирующие экзотоксин
РП кольцепреципитации с
специфическими сывовотками
РП в геле, иммуноэлекрофорез
Конечный результат
через 5-10 мин.
Конечный результат
через 18-20 час.
1.6. Система обучающих заданий.
1.6.1. Укажите компоненты, необходимые для постановки развернутой реакции агглютинации:
A – сыворотки крови больного
B – физиологический раствор
C – чистая культура бактерий
D – известная иммунная неадсорбированная сыворотка
E – взвесь эритроцитов
F – диагностикум
G – комплемент
Правильный ответ: А, B, F
1.7. Методичкие указания для работы студентов на лабораторном занятии.
37
1.7.1. Методика проведения занятия.
Реакция агглютинации (РА) широко используется в лабораторной диагностике инфекционных
заболеваний. Ее применяют как для идентификации возбудителя с помощью диагностических
агглютинирующих сывороток, так и для определения антител в сыворотке крови больного по
известным антигенам (диагностикумам).
С целью идентификации бактерий ставят ориентировочную реакцию агглютинации на стекле. Для
этого в каплю диагностической агглютинирующей сыворотки вносят петлей выделенную
культуру и перемешивают. Сопроводжается РА контролем – в каплю физраствора добавляют
выделенную бактериальную культуру. Наблюдают за появлением зерен агглютината в опыте, в
контроле – помутнения.
Для выявления антител в сыворотке больного к ее разведениям (1:50-1:1600) добавляют известный
диагностикум и помещают в термостат (37оС) на 18-24 часа. Затем определяют титр антител по
появлению зерен или хлопьев агглютината в разведениях сыворотки, в контроле диагностикума –
равномерное помутнение, в контроле сыворотки – жидкость прозрачная.
Наиболее специфическая реакция пассивной гемагглютинации (РПГА) широко применяется для
выявления специфических антител в сыворотке крови больного при вирусных и других
инфекционных заболеваниях. Для этого используют стандартный эритроцитарный диагностикум,
добавляемый к разведениям сыворотке больного в лунки планшета. Инкубируют в термостате
(37оС) и производят первичный учет через 2 часа, окончательный – через 18-20 часа.
Положительная РПГА выражается в появлении на дне лунок крыхлого осадка в виде зонтика,
отрицательная – осадок в виде компактного диска с ровными краями.
Реакция преципитации (РП) высокоспецифичная и чувствительна. Используют для выявления
антигенов в исследуемом материале. РП применяют в микробиологии, санитарии и гигиене,
судебной медицине для выявления антигенов в исследуемом материале. В микробиологии РП
наиболее часто проводится с прозрачными коллоидными растворимыми антигенами,
экстраперованными из патологического материала, чистых культур бактерий. В реакции
используют диагностические преципитирующие сыворотки. Варианты постановки РП:
кольцепреципитации, в геле (агаре), иммуноэлектрофорез (ИЭФ).
При постановке РП кольцепреципитации используют диагностические преципитирующие
сыворотки, к которым осторожно по стенке пробирки наслаивают исследуемый раствор антигена.
Учет реакции проводится через 1-2 мин. Положительный результат выражается в появлении
преципитации в виде белого кольца на границе между сывороткой и исследуемым антигеном.
РП в геле ставят используя лунки, вырезанные в агаре: в центральную вносят диагностическую
сыворотку, в периферические – исследуемый материал. Положительный результат проявляется в
виде тонких мутных линий.
Иммуноэлектрофорез проводится в 2 этапа: I – электрофоретическое разделение исследуемого
материала в агаре; II – иммунологический анализ. В агаре вырезают траншеи, в которые вносят
иммунную сыворотку, содержащую антитела к исследуемым антигеном, в лунки – исследуемый
материал. В случае положительной реакции формируется преципитат в виде тонких дуг.
Порядок выполнения лабораторной работы:
1. Поставить и учесть результат ориентировочной реакции агглютинации на стекле с целью
идентификации выделенной культуры бактерий.
2.
Поставить развернутую реакцию агглютинации с целью серологической диагностики
инфекционного заболевания.
3. Учесть реакцию пассивной гемагглютинации в демонстрационном опыте.
4. Ознакомиться с биопрепаратами для РА и РПГА.
5. Поставить реакцию кольцепреципитации для выявления термопреципитиногена возбудителя в
исследуемом материале с помощью известной диагностической сыворотки.
6. Познакомиться с методикой постановки и результатами РП в геле в демонстрационном опыте.
Автор: ассистент, к.м.н. Колодий С.А.
Методическая разработка
по подготовке и работе на лабораторном занятии №17
38
для студентов стоматологического факультета.
Тема:
Серологические реакции. Реакция
использоанием меченых антигенов и антител.
1.2.
связывания
комплемента.
Реакции
с
Актуальность темы.
Реакция связывания комплемента (РСК), являясь высоко специфической, широко используется в
диагностике спирохетозов, риккетсиозов, микоплазмозов, вирусных и других инфекционных
заболеваний.
Широкое
использование
иммунофлюоресцентного, радиоиммунного
и
иммуноферментного методов обусловлена высокой чувствительностью, возможностью выявления
широкого круга биологических веществ.
1.2. Цели изучения темы.
1.2.1. Цель общая.
Уметь использовать РСК для диагностики инфекционных заболеваний. Освоть принципы,
механизмы и назначение иммунофлюоресцентного, радиоиммунного и иммуноферментного
методов в диагностике.
1.2.2. Цель конкретная.
1. Освоить механизм РСК.
2. Овладеть техникой постановки и учетом РСК для серодиагностики инфекционных заболеваний.
3. Оволадеть техникой постановки иммуноферментного метода (ИФА). Уметь интерпретировать
результаты иммунофлюоресцентного прямого и непрямого метода, а также ИФА.
1.3. Обеспечение исходного уровня знаний-умений:
1. Принцип и механизмы реакций иммунитета.
2. Специфические реакции организма на антиген.
3. Иммунохимические основы взаимодействия антител с антигенами.
4. Корпускулярные и растворимые антигены.
5. Принципы серологической диагностики инфекционных заболеваний.
6. Серологическая идентификация возбудителей, как один из основных методов исследования
микроорганизмов.
1.3. Тесты на исходный уровень знаний-умений:
1.3.1. Взаимодействие антител с антигенами характеризуются:
A – быстрым соединением детерминантных групп
B – медленным соединением детерминантных групп
C – обратимостью реакции и легкостью элюции
D – необратимостью реакции и трудностью элюции
E – виделением небольшого количества энергии
Правильный ответ: В, C, E
1.4. Содержание занятия.
Реакция связывания комплемента (РСК) состоит их 2 систем: антиген + антитело + комплемент (І
система), взвесь эритроцитов + гемолитическая система (ІІ система). Протекает в 2 фазы: Іспецифическая – обусловливает связывание комплемента в случае соответствия антител и
антигена, при несоответствии – антиген остается свободным. При введении в опыт II
индикаторной системы гемолиз произойдет только при наличии свободного комплемента (реакция
отрицательная). В случае, если комплемента адсорбировался на системе антиген-антитело,
гемолизе не будет (реакция положительная).
РСК высоко чувствительна и специфична, применяют в диагностике бактериальных,
риккетсиозных, вирусных и микоплазменных заболеваний.
Реакции, в которых участвуют меченые антигены или антитела (иммунофлюоресценции,
радиоиммунный и иммуноферментный методы) по своей чувствительности превосходят все
серологические реакции.
39
Реакция иммунофлюоресценции Кунса (РИФ) позволяет обнаружить микробные антигены в
патологическом материале с помощью меченых флюорохромами диагностических сывороток. При
наличии специфических антигенов диагностической сыворотки в люминисцентном микроскопе
выявляют свечение (прямой метод).
В непрямом методе вначале антиген связывают с обычным антителом, а затем этот комплекс
обрабатывают меченым антиглобулином, который соединяется с ним. Образующийся комплекс
легко обнаруживают по свечению в люминисцентном микроскопе.
В радиоиммунном методе (РИМ) используют очищенные и концентрированные антигены и
антитела, меченные радиоизотопом. РИМ применяется для выявления как антигенов, так и
антител. Для выявления антител к исследуемой сыворотке добавляют определенное количество
меченого антигена. Для выявления антигена к исследуемому материалу добавляют
специфическую диагностическую сыворотку, а затем – гомологичный меченый антиген. Если
меченый антиген остается свободным – реакция положительная.
Иммуноферментный метод (ИФМ) используется выявления антигенов и антител с применением
твердофазных носителей (полистероловые и поливиниловые пластины). Для выявления антител
используют пластины, на дне которых находятся фиксированные антигены и добавляют
исследуемую сыворотку. Затем (после промывки буфером) обрабатывают антисывороткой
(антиглобуменом), меченой ферментом. Для выявления фермента используют Н2О2 и индикатора.
ИФМ находит широкое применение при вирусных инфекционных заболеваниях.
1.4.1. Граф логической структуры РСК.
Материал для исследования: сыворотка крови больного.
Постановка РСК с сывороткой крови больного и специфическим диагностикумом, используя
индикаторную гемолитическую систему.
1.4.2. Граф логической структуры реакции иммунофлюоресценции (РИФ).
Исследуемый материал: патологический материал, содержащий бактериальные или вирусные
антигены.
Постановка
прямой
РИФ
(метод
Кунса)
с
диагностическими
специфическими
флюоресцирующими сыворотками.
Постановка
непрямой
РИФ
сопровождается
использованием
флюоресцирующей
антиглобулиновой сыворотки, содержащей антитела только против кроличьих глобулинов.
1.4.3. Граф логической структуры иммуноферментного метода (ИФМ).
Постановка ИФМ с целью выявления антигенов или антител с использованием пластиковых
(полистироловых) панелей с адсорбиванными на дне лунок антител или антигенев.
1.4.2. Перечень теоретических вопросов:
1. Характеристика антигенов в РСК.
2. Характеристика комплементсвязывающих антител.
3. Природа комплемента.
4. Участие комплемента в реакциях иммунитета.
5. Гемолитическая система, ее роль в РСК.
6. Механизм, техника постановки и учет результатов РСК.
7. Практическое использование РСК.
8. Иммунофлюоресцентный метод, феномены, лежащие в его основе.
9. Методические варианты реакции иммунофлюоресценции (РИФ): прямой и непрямой методы
Кунса.
10. Техника постановки и диагностическое использование РИФ.
11. Радиоиммунологический анализ (РИА), его принцип и назначение.
12. Иммуноферментный анализ (ИФА). Твердофазный иммуноферментный метод. Его принцип и
механизм взаимодействия ингредиентов.
13. Иммуноблотинг. Этапы иследования.
14. Использование ИФА и иммуноблотинга в диагностике инфекционных заболеваний.
1.4.3. Источники учебной информации.
Основная литература:
К.Д.Пяткін, Ю.С.Кривошеїн. Мікробіологія, 1992, с.180
40
К.Д.Пяткин, Ю.С.Кривошеин. Микробиология, 1980, с.173-181, 200-202
В.Д.Тимаков. Микробиология, 1983, с. 188-189, 200-202
А.И.Коротяев, С.А.Бабич. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология, СанктПетергбург, 2002, с.234-235
И.Л.Дикий, И.Ю.Халупяк, Н.Е.Шевелева, М.Ю.Стегний. Микробиология, Харьков, 1999, с.116
О.І.Клименюк, І.О.Ситник, М.С.Творко, В.П.Широбоків. Практична мікробіологія, 2004, с.141-145
Л.Б.Борисов. Руководство к практическим занятиям по микробиологии, М., 1984, с.118-122
М.Н.Лебедева. Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии, М., 1973,
с.143-152
Ю.С.Кривошеин. Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии и
диагностике инфекционных болезней, 1986, с.47-55
Дополнительная литература:
Словник по мікробіології, вірусології, імунології та інфекційним захворюванням. Заг. ред. проф.
Палій Г.К., 2004, с.105-106, 248
1.5. Ориентировочная основа действий (ООД)
Использование РСК в диагностике инфекционных заболеваний:
Материал для исследования
Сыворотка крови
Метод исследования
Серологический
РСК
Конечный результат
через 18-24 час.
1. Использование ИФМ для обнаружения антигенов и антител:
Выявление антител
Антиген (АГ) + Антитела (АТ)
(сыворотка больного)
АГ + АТ
+ Антиглобулиновая сыворотка с ферментом (АГСФ)
41
АГ + АТ + АГСФ
+ Н2О2 + ортофенилдиамин (ОФД)
окончательный ответ
Выявление антигенов
Антитела (АТ) + Антиген (АГ)
(исследуемый материал)
АТ + АГ
+ Антиглобулиновая сыворткатка с ферментом (АГСФ)
АТ + АГ + АГСФ
+ Н2О2 + ортофенилдиамин (ОФД)
окнчательный ответ
2. Использование иммунофлюоресценции в диагностике инфекционных заболеваний:
Прямой метод (метод Кунса)
Антиген
(АГ)
+
Антитела (АТ)
(специфические
флюоресцирующие)
АГ + АТ
Светящийся
комплекс
Непрямой метод
Антигены (АГ) + Антитела (АТ)
АГ + АТ
+ Антиглобулиновая сыворотка (АГС)
АГ + АТ + АГС
+ Светящийся комплекс
1.6. Система обучающих заданий.
1.6.1. Укажите ингредиенты, необходимые для постановки РСК:
A – дистилированная вода
B – физиологический раствор
C – комплемент
D – сыворотка крови больного
E – чистая культура возбудителя
F – токсины бактерий
G – гемолитическая система
H – диагностикум
Правильный ответ: В, C, D, G, H
1.7. Короткие методические указания для работы студентов на лабораторном занятии.
42
1.7.1. Методика проведения занятия.
Постановка РСК с целью выявления антител в сыворотке больного с помощью оттитрованных
антигена и компонента в рабочих дозах. Опыт сопровождается 2 контролями – сыворотки
(физраствор, сыворотка, комплемент) и антигена (физраствор, антиген, комплемент).
Одновременно готовится индикаторная система. Обе системы выдерживаются в термостате
40минут, после чего к основному опыту и контролям добавляется индикаторная система.
Повторно реакция выдерживается в термостате до появления гемолиза в контролях. РСК считается
положительной при задержке гемолиза в опытной пробирке.
Ознайомится с принципом постановки метода иммунноферметного анализа с целью выявления
специфических антител в сыворотке крови больного. В лунки планшета с адсорбированным на дне
антигеном вносят по 1 капле исследуемой сыворотки и помещают в термостат (37оС). Затем
промывают буферным раствором и вносят по 1 капле меченые ферментом (пероксидазой хрена)
антивидовые (антиглобулиновые сыворотки. Планшеты помещают в термостат (37оС). Промывают
лунки буферным раствором и вносят по 1 капле перекись водорода и ортофенилдиамин (ОФД).
Помещают в термостот до появления желтого окрашивания в лунке с контрольной позитивной
сывороткой.
Автор: ассистент, к.м.н. Колодий С.А.
Методическая разработка
по подготовке и работе на лабораторном занятии №18
для студентов стоматологического факультета
Тема: Специфическая профилактика и терапия инфекционных заболеваний. Вакцины и
анатоксины.
1.1. Актуальность темы: иммунопрофилактика и иммунотерапия находят широкое
применение в разных сферах медицины. В первую очередь в профилактике и лечении
инфекционных болезней, аллергий, иммунопатологических состояний, в онкологии,
трансплантологии, при первичных и вторичных иммунодефицитах. Иногда это единственный или
основной способ, среди других медицинских влияний, для предупреждения и лечение болезней.
Для этого используют существующие и разрабатывают новые, современные препараты, которые
объединяют в группу - иммунобиологических. Одними из них являются вакцины и анатоксины,
применение которых направлено на создание искусственного активного иммунитета.
1.2. Цели изучения темы:
1.2.1. Цель общая: ознакомиться с основными группами вакцинных препаратов и
возможностями их применения с целью профилактики и лечение инфекционных болезней.
1.2.2. Цель конкретная:
1. Выучить основные группы вакцин, способы их получения, примеры и практическое
применение.
2. Овладеть методикой изготовления инактивированной нагреванием аутовакцины.
3. Ознакомиться с существующим в Украине календарем прививок, перечнем вакцинных
препаратов, сроками вакцинаций и ревакцинаций.
1.3. Обеспечение исходного уровня знаний-умений.
1. Иммунитет, виды и формы иммунитета.
2. Антигены, структура, функции. Антигенное строение микроорганизмов.
3. Антитела, структура, функции.
4. Классы иммуноглобулинов.
5. Виды иммунного ответа. Первичный, вторичный иммунный ответ.
1.4. Содержание обучения.
43
1.4.1. Граф логической структуры содержания:
Виды вакцин
Виды вакцин
Примеры
Живые
БЦЖ, чумная, туляремийная, СТИ,
бруцеллезная, полиомиелитнач, коревая,
паротитная, гриппозная, риккетсиозная
Атенуированные
• натуральная оспа
Дивергентные
Генно-инженерные (рекомбинантные,
векторные)
Убитые
Корпускулярные
Аутовакцины
• гриппозная
•
•
•
•
коклюшная
лептоспирозная
против клещевого энцефалита
гонорейная
•
•
•
•
•
TABte
сипнотифозная
холерная
менингококковая
сальмонелезная
шигелезная
•
•
•
•
столбнячный
ботулинический
дифтерийный
дизентерийный (из токсина Шига)
Химические
Классические
•
•
•
•
•
Современные
ДНК-вакцины
рибосомальные
липосомальные
полипепидные
антиидиотипические
Анатоксины
КАЛЕНДАРЬ ПРОФИЛАКТИЧЕСКИХ ПРИВИВОК В УКРАИНЕ
(приказ МЗО Украины № 276 от 31.10.2000 г.)
Возраст
1 день
3 день
Гепатита В
Туберкулеза
1 месяц
3 месяца
Гепатита В
4 месяца
5 месяцев
Прививка против
Дифтерии,
столбняка
Гепатита В
Дифтерии,
столбняка
коклюша, Полиомиелита
Дифтерии,
столбняка
коклюша, Полиомиелита
коклюша, Полиомиелита
44
6 месяцев
12-15 месяцев
18 месяцев
3 года
6 лет
7 лет
11 лет
14 лет
15 лет
18 лет
Взрослые
Кори,
краснухи,
паротита
Дифтерии, столбняка
Полиомиелита
Кори, краснухи, паротита
Полиомиелита
Дифтерии, столбняка
Полиомиелита
Кори, краснухи, паротита
Туберкулеза
Дифтерии, столбняка
Кори, краснухи, паротита
(при
отсутствии
вакцинации в 6 лет)
Туберкулеза
Дифтерии, столбняка
Полиомиелита
Краснухи (девушки),
паротита (ребята)
Дифтерии, столбняка
Гепатита В
Дифтерии, столбняка
1.4.2. Перечень теоретических вопросов:
1. Понятие о вакцинах, профилактике и вакцинотерапии инфекционных болезней.
2. Характеристика вакцинных препаратов:
а) живые вакцины. Разновидности, способы получения, примеры;
б) убитые вакцины. Разновидности, способы получения, примеры;
в) химические вакцины, способы получения, примеры. Современные химические вакцины,
особенности их получения;
г) анатоксины, получения, примеры.
3. Вакцинотерапия хронических заболеваний. Аутовакцины.
4. Этапы изготовления инактивованной нагреванием аутовакцины.
5. Календарь прививок, перечень вакцинных препаратов, которые входят в его состав.
1.4.3. Источники учебной информации
Основная
1. К.Д. Пяткин, Ю.С.Кривошеин. Микробиология. Г. 1980. -с. 212-214.
2. В.Д.Тимаков. Микробиология. Г. 1983 - с.225-228.
3. А.И. Коротяев, С.А.Бабич. Медицинская микробиология, иммунология и
вирусология. Санкт-Петербург, 2002, с- 224-225.
4. И.Л.Дикий, И.Ю.Холупяк. Микробиология. Харьков, 1999. - с.183-191.
5. И.Л.Дикий. Микробиология. Руководство к лабораторным занятиям. Харьков
2002. с.224-231.
6. М.Н. Лебедева. Руководство к практическим занятиям по медицинской
микробиологии. Г. 1973. с. 152.
11. Лекции
Дополнительная
Словарь по микробиологии, вирусологии, иммунологии и инфекционным заболеванием.
Общ. ред., проф. Палия Г.К., К. 2004.
Ориентировочная основа действия (ОДД)
Этапы приготовления инактивированной нагреванием аутовакцины
1. Накопление биомассы культуры микроорганизма.
2. Проверка чистоты культуры (микроскопия).
45
3. Приготовление маточной взвеси культуры в физиологическом растворе.
4. Инактивация микробной взвеси.
5. Контроль стерильности вакцины.
6. Титрование (стандартизация) вакцины.
7. Консервирование вакцины.
8. Исследование безвредности.
9. Разливание вакцины в ампулы.
10. Составление исходных данных.
1.7.1. Методика проведения занятия.
1. Изготовить инактивированную нагреванием аутовакцину:
1.1. С целью проверки чистоты приготовить мазки-препараты из культуры, выделенной
из организма больного с хронической стафилококковой инфекцией, окрасить их по методу
Грамма.
1.2. Приготовить смыв из биомассы путем добавления физиологического раствора.
1.3. Перенести 1 мл маточной взвеси в стерильную пробирку для дальнейшей инактивации.
1.4. Прогреть суспензию бактерий на водяной бане на протяжении 1 ч при 80 0С.
1.5. Проверить инактивированную вакцину на стерильность. Осуществить посев суспензии
в стерильную питательную среду. Посевы поместить в термостат, выдерживают 24 ч при 370 С.
2. Ознакомиться с набором вакцинных препаратов и особенностями их применения.
Результаты записать в таблицу.
Препарат
Группа
(классификация)
Назначение
Способ введения
Вакцины
3. Ознакомиться с календарем прививок и перечнем вакцинных препаратов, которые
используют для иммунизации.
4. Оформить протокол, сделать выводы.
Автор: доцент, к.м.н.
З. М. Прокопчук
Методическая разработка
по подготовке и работе на лабораторном занятии №19
для студентов стоматологического факультета
Тема: Специфическая профилактика и терапия инфекционных заболеваний. Сыворотки и
иммуноглобулины.
1.1. Актуальность темы: Антитела принадлежат к основным иммунореагентам, которые
принимают участие в большинстве иммунологических реакций, которые определяют состояние
иммунитета организма. На основе антител создано много иммунобиологических препаратов,
которые применяют для профилактики и лечения инфекционных болезней, а также их
46
диагностики. Поиск новых современных сывороточных препаратов постоянно продолжается.
Поэтому их изучение остается довольно актуальным вопросом.
1.2. Цели изучения темы:
1.2.1. Цель общая: Ознакомиться с сыворотками и иммуноглобулинами, а также с
принципами их применения для профилактики и лечения инфекционных болезней.
1.2.2. Цель конкретная:
1. Выучить основные группы сывороточных препаратов.
2. Ознакомиться с принципами получения сывороток и иммуноглобулинов.
3. Ознакомиться с практическим применением сывороточных препаратов.
4. Ознакомиться с использованием сывороток в диагностической практике.
1.3. Обеспечение исходного уровня знаний-умений.
1.Искусственный пассивный иммунитет. Характеристика. Препараты, которые
используются для его создания.
2. Антитела, структура, функции.
3. Реакции гиперчувствительности (немедленного и замедленного типа). Механизмы.
4. Первичный и вторичный иммунный ответ.
Граф логической структуры содержания.
Виды сывороточных препаратов
Иммунные сыворотки
Иммуноглобулины
это препараты сыворотки крови, которые
получают путем иммунизации животных или
человека и используются для создания
пассивного антитоксического,
антибактериального или антивирусного
иммунитета
Это биологические препараты, которые
получают из иммунных сывороток, путем
очищения от балластных фракций белков
Классификация сывороточных препаратов
Признак
По назначению:
Примеры
• диагностические (агглютинирующие,
преципитирующие, гемолитические)
• лечебно-профилактические
По происхождению:
• гетерологические (животные)
• гомологические (человеческие)
• биотехнологические (гибридомы)
По механизму действия:
• антитоксические (противостолбнячная,
•
•
•
•
противодифтерийная)
антибактериальные (противосибиреязвенная,
противочумная)
антивирусные (противоэнцефалитная,
противооспенная)
антиопухолевые
антилифоцитарные
47
• антиаллергические
Способы получения сывороточных препаратов
Вид сывороточного препарата
Способ получения
Гомологические
•
получают из сыворотки крови доноров,
волонтеров, реконвалесцентов
Гетерологические
•
получают путем гипериммунизации животных
вакцинными препаратами
•
•
Биотехнологические
(моноклональные) получают из искусственно
созданных клеток продуцентов гибридом,
которые образованы путем скрещивая Влимфоцитов и миеломных клеток
Современные сывороточные препараты
•
•
•
•
•
•
Иммуноглобулин G
Биоглобулин
Вейноглобулин (бимолекула Ig G)
Гаммавенин (Ig G без Fc-фрагменту)
Интраглобулин (Ig G, покрытый (-протолактамом)
Сандоглобулин (Ig G, стойкий к рH 4,0)
Схема введения сывороточных препаратов по методу Безредко
1. Вводят внутрикожно в сгибательную поверхность предплечья 0,1 мл сыворотки,
разбавленной 1:100. Учет результатов проводят через 20 мин. Проба считается отрицательной,
если диаметр отека (гиперемии) в месте инъекции меньше 1 см. Проба положительная, если
диаметр равняется 1 см и больше.
2. В случае отрицательной кожной пробы неразведенную сыворотку в количестве 0,1 мл
вводят подкожно в участок средней трети плеча. При отсутствии местной или общей реакции
через 30-60 мин внутримышечно вводят
необходимую дозу сыворотки, подогретую до
температуры 360С.
1.4.2. Перечень теоретических вопросов:
1. Сывороточные препараты, назначение.
2. Классификация сывороток по механизму действия, способом получения, по назначению.
3. Принципы получения сывороточных препаратов. Гомологические и гетерологические
сыворотки.
4. Современные методы получения сывороточных препаратов. Понятие о гибридомах.
5. Иммуноглобулины. Классификация. Назначение.
6. Современные иммуноглобулины, их применение в медицинской практике.
7. Способы введения сывороточных препаратов. Побочные реакции.
1.4.3. Источники учебной информации
Основная
48
1. К.Д. Пяткин, Ю.С.Кривошеин. Микробиология. Г. 1980. -с.215-217.
2. В.Д.Тимаков. Микробиология. Г. 1983 - с.229-230.
3. А.И. Коротяев, С.А.Бабич. Медицинская микробиология, иммунология и
вирусология. Санкт-Петербург, 2002, с. - 224-227.
4. И.Л.Дикий, И.Ю.Холупяк. Микробиология. Харьков, 1999. - с.192-195.
5. И.Л.Дикий. Микробиология. Руководство к лабораторным занятиям. Харьков
2002. с.224-231.
6. М.Н. Лебедева. Руководство к практическим занятиям по медицинской
микробиологии. Г. 1973. с. 130.
11. Лекции.
Дополнительная
Словарь по микробиологии, вирусологии, иммунологии и инфекционным заболеванием.
Общ. ред. проф. Палия Г.К., К. 2004.
Ориентировочная основа действия (ОДД)
Этапы приготовления инактивированной нагреванием аутовакцины
1. Накопление биомассы культуры микроорганизма.
2. Проверка чистоты культуры (микроскопия).
3. Приготовление маточной взвеси культуры в физиологическом растворе.
4. Инактивация микробной взвеси.
5. Контроль стерильности вакцины.
6. Титрование (стандартизация) вакцины.
7. Консервирование вакцины.
8. Исследование безвредности.
9. Разливание вакцины в ампулы.
10. Составление исходных данных.
1.7.Короткие методические указания для работы студентов на лабораторном занятии.
1.7.1. Методика проведения занятия.
1. Продолжить изготовление инактивованной нагреванием стафилококковой аутовакцины.
Проверить вакцину на стерильность после 24-х часовой инкубации. При условии отсутствия
видимых признаков роста, исследования продолжают.
2. Провести стандартизацию вакцины с помощью оптического стандарта мутности. Для
этого мерно прибавить пипеткой физиологический раствор, постоянно сравнивая его со
стандартом. Полученные данные записать в таблицу. Определить титр вакцины.
Количество вакцины (мл)
Количество добавленного физиологического
раствора (мл)
Общее количество раствора (мл)
Титр вакцины равняется_________________ бактерий/мл.
49
3. Провести консервирование вакцины 0,5 % карболовым раствором. Прибавить 0,5% раствор
карболовой кислоты к стандартизированной вакцине в соотношении 1:10.
К вакцине добавлено_________ мл карболовой кислоты.
4. Разлить вакцину шприцем в стерильные ампулы по 1 мл и запаять над огнем газовой горелки,
составить этикетные данные.
Место изготовления вакцины:
Название вакцины:
Вид вакцины:
Титр вакцины:
Дата изготовления:
Срок годности:
4. Ознакомиться с коллекцией сывороточных препаратов, выучить их виды и назначение.
Полученные данные занести в таблицу.
Препарат
Группа
Назначение
Способ введения
(классификация)
Сыворотки
Иммуноглобулины
Автор: доцент, к.м.н. З.М.Прокопчук
Методическая разработка
по подготовке и работе на лабораторном занятии №21
для студентов стоматологического факультета
Тема: Патогенные риккетсии. Биологические свойства. Методы лабораторной діагностики
риккетсиозов. Серологическая діагностика эпидемического сыпного тифа и Ку-лихорадки
.
1.Актуальность темы. Риккетсии – обширная группа мелких полиморфных грамотрицательных
бактерий, являющихся паразитами членистоногих, различных животних и человека; риккетсиозы
заболевания, вызываемые ими.
2.1.
2.2.
2.Цель изучения темы.
Цель общая. Ознакомиться с серологическими реакциями в диагностике риккетсиозных
инфекций.
Цель конкретная. Знать дифференциальные признаки серологических реакций, которые
используют для типирования риккетсий в исследуемом материале.
3. Обеспечение исходного уровня знаний-умений:
1.Иммунитет. Факторы специфической иммунной защиты.
2.Полноценные и неполноценные антигены.
3.Принципы взаимодействия антигенов и антител.
4.Иммунодианостические реакции.
50
3.1. Задачи на исходный уровень знаний-умений:
От больного с острой кишечной инфекцией выделен вирус, который отнесен к роду
энтеровирусов. Для определения серотипа вируса применяют диагностические сыворотки. Какие
антитела должны содержать эти сыворотки?
А. К белкам суперкапсидной оболочки.
В. К белкам капсида *
С. К неструктурным белкам вируса.
Д. К вирусным ферментам
Е. К вирусным гемаглютининам
3.2.Знать систематическое положение риккетсий среди представителей микромира.
3.3.Знать принципы микроскопии, что позволяет выучить морфологию риккетсий.
3.4.Знать отличия в ультраструктуре риккетсий, вирусов и бактерий.
4.Содержание обучения.
4.1.Графлогической структуры содержания.
Выявление антител – РНГА, ИФА, РИА, РА Вейгля --- выявление генетического материала
риккетсий– ПЛР.
4.2.Перечень теоретических вопросов:
Источники учебной информации.
К.Д.Пяткин, Ю.С.Кривошеин. Микробиология, К., 1980.- С.406
А.А.Воробьев. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология. М., 2004.- С. 261.
А.И.Коротяев, С.А.Бабичев. Медицинская микробиология, имунология и вирусология.
С.Петербург, 2002.- С.239
Л.Б.Борисов. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология.М., 2001 С.68.
И.Л.Дикий и соавт. Микробиология, Харьков,2004.- С.93
Л.Б.Борисов. Руководство к практическим занятиямм по микробиологии, М. 1986.- С.126.
Литература дополнительная:
Микробиология, вирусология, иммунология, инфекционные болезни. Словарь / За ред. Г.К.Палий,
В.Г.Палий. Киев: Здоровье, 2004. С.83,88.
Сборник задач для подготовки к тестовому экзамену по естественно научным дисциплинам „Крок
-1. Общая врачебная подготовка” /Кол. авторов; За ред. В.Ф.Москаленка и пел.- К.:
Медицина,2004.
5.Ориентировочная основа действия.
Выявление антител – РНГА, ИФА, РИА, РА Вейгля.
Выявление генетического материала риккетсий – ПЦР.
6.Система целевых обучающих задач.
В лабораторию доставлена кровь больного сыпным тифом. Какую из перечислених
серологических реакций следует применить?
А. РеакциюАсколи
В. Преципитации
С. Агглютинации Вейгля●
Д. Связывания комплемента
Е. Реакцию Васермана
7.Краткие методические указания для работы студентов на лабораторном занятии.
7.1.Методика проведения занятия:
- Усвоить макроскопическую реакцию агглютинации Вейгля. Во время проведения
реакции используют корпускулярный риккетсиозный антиген (500 млн клеток/мл). Сыворотку
больного разводят от 1:40 до 1:1280 в объеме 0,25 мл и в каждую пробирку добавляют по 0,25 мл
антигена. При этом необходимо учесть, что после внесения антигена разведения сыворотки
удваивается. Учет результатов проводим, через 2 часа после того, как пробирки проинкубировали
в термостате. Диагностический титр равняется 1:40 – 1:80 и больше почти в 100% больных
сыпным тифом уже на 4-5 день болезни.
- Ознакомиться с принципом постановки ИФА с целью выявления специфических
антигенов в сыворотке кровь и больного. На занятии в качестве твердофазного носителя
используют планшетки с адсорбируемыми на дне ячеек антителами. В лунки вносят по 1 капле
исследуемой сыворотки и вмещают в термостат при темп. С
37. Промывают луночки буферным
раствором и вносят меченые ферментом (пероксидазою хрена) антитела против этого антигена
51
(прямой вариант). Планшетки вмещают в термостат при темп. 37С. Промывают луночки
буферным раствором, вносят по одной капле перекиси водорода и ортофенилдиамина (ОФД).
Планшетки вмещают термостат к появлению желтой расцветки в контроле. Количество
присоединенного к фазе энзима отвечает количеству антигенов. При наличии в исследуемой
сыворотке антигенов вируса в лунках изменяется цвет жидкости на желтый или желтовато –
коричневый (результат положительный). В лунках с сывороткой, которая не содержит антигенов
вирусов, цвет жидкости не изменяется (результат отрицательный).
Зарисовать схему реакции.
- Познакомиться с принципом постановки реакции гибридизации нуклеиновых кислот.
Целью метода является выявление в исследуемом материале участков ДНК, характерных для
данного возбудителя. Для этого используют их гибридизацию с диагностическими ДНК –
зондами. ДНК – зонды – это однониточные фрагменты ДНК (комплементарные к специфическим
участкам ДНК возбудителя), меченые радионуклидами, ферментами или флюорохромами.
Схемы реакции зарисовать.
- Провести учет результатов реакции связывания комплемента, результаты зарисовать.
Разведение сыворотки
1:5
1:10
1:20
1:40
1:80
1:160
- Провести учет результатов реакции пассивной гемагглютинации, результаты зарисовать.
Разведение сыворотки:
1:5
1:10
1:20
1:40
1:80
1:160
Начало заболевания:
Через 10 дней:
Автор: асистент Рымша Е.В.
Методическая разработка
по подготовке к лабораторному занятию №22
для студентов стоматологического факультета
Тема: Патогенные кокки. Стафилококки. Стрептококки. Морфология и биологические
свойства. Микробиологическая диагностика заболеваний.
1.1.Актуальность темы. Гнойно-воспалительные заболевания относятся к наиболее
распространенным. Ежегодно ими болеют десятки миллионов людей. Больше всего гнойных
52
1.
2.
3.
1.
2.
3.
процессов предопределяют патогенные кокки.
1.2. Цель изучения темы.
Общая. Выучить основные свойства патогенных кокков и основы патогенеза гнойновоспалительных заболеваний, обусловленных патогенными кокками, методы микробиологической
диагностики стафилококковых и стрептококковых инфекций.
Конкретная.
Выучить факторы патогенности стафилококков.
Овладеть методами лабораторной диагностики стафилококковых инфекций.
Овладеть методами лабораторной диагностики стрептококковых инфекций.
1.3. Обеспечение исходного уровня знаний - умений.
Ультраструктура бактериальной клетки.
Морфология шаровидных бактерий.
Строение клеточной стенки грамположительных бактерий.
1.3.1.Тести на исходный уровень знаний - умений.
Классификация кокков по морфологии основана на:
А. Размерах кокков.
В. Количеству и расположению жгутиков.
С. Спорообразованию.
Д. Делению в разных плоскостях.
Е. Отношению к окрашиванию по Граму.
Ответ: Д.
1.4. Содержание обучения.
1.4.1.Графологическая структура содержания.
Графологическая структура микробиологического исследования стафилококковой
инфекции.
Материал для исследования: гной, экссудат, мокрота, слизистые выделения из зева, носа и
др.
Микроскопическое исследование
- мазок, окрашенный по Граму
Ответ.
Бактериологическое исследование
- посев на ЖСА, кровяной агар,
- характер роста,
- наличие гемолиза,
- лецитиназная активность на ЖСА,
- посев на скошенный агар,
- посев на развернутый ряд Гисса,
- фаготипирование,
- определение плазмокоагулазы,
- определение чувствительности к антибиотикам.
Ответ.
Графологическая структура микробиологического исследования стрептококковой
инфекции.
Материал для исследования: гной, экссудат, мокрота, слизистые выделения из зева, носа и
др.
Микроскопическое исследование:
- мазок, окрашенный по Граму.
Ответ.
Бактериологическое исследование:
- посев на кровяной или сахарный агар,
- характер роста колоний,
- наличие гемолиза,
- мазок, окрашенный по Граму,
- посев на кровяной или сахарный агар,
- определение серогруппы,
- определение чувствительности к антибиотикам.
Серологическое исследование
53
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
- определение О-стрептолизина в сыворотке крови
Ответ.
1.4.2.Перечень теоретических вопросов.
Морфология, классификация, антигенное строение стафилококков.
Культуральные, биохимические свойства, токсинообразование стафилококков.
Экология, резистентность стафилококков.
Морфология, классификация, антигенное строение стрептококков.
Культуральные, биохимические свойства, токсинобразование стрептококков.
Факторы и ферменты патогенности стафилококков и стрептококков.
Значение стафилококков в возникновении инфекций
и внутрибольничных заболеваний.
Стафилококковое носительство.
Роль стрептококков в возникновении гнойно-воспалительных процессов, скарлатине и
ревматизме.
Стрептококки пневмонии, основные свойства. Особенности микробиологической диагностики
заболевания.
Методы микробиологической диагностики стафилококковых инфекций.
Методы микробиологической диагностики стрептококковых инфекций.
Специфическая профилактика и лечение заболеваний, вызванных пиогенными кокками.
1.4.3.Источники учебной информации.
Основные:
К.Д. Пяткин, Ю.С. Кривошеин. - Микробиология. - К., 1992 (укр..) - с. 243 - 255.
К.Д. Пяткин, Ю.С. Кривошеин. - Микробиология. - Г. 1980 (рус.). - с. 227-244.
В.Д. Тимаков, В.С. Левашов. - Микробиология. - Г. 1983 (рус.). - с.253 - 266.
А.И. Коротяев, С.А. Бабичев - Медицинская микробиология и вирусология. - СанктПетербург, 2002 (рус.). - с. 330-341.
И. Л. Дикий, И.Д. Холупяк. - Микробиология. - Харьков, 1999 (рус.). - с. 214-220.
В.И. Покровский. - Медицинская микробиология._М., 1998 (рус.). - с. 183-206.
О.И.Климнюк, И.О. Ситник. - Практическая микробиология. - Терн. 2004 (укр..). - с. 172183.
Л.П. Борисов. - Руководство к практическим занятиям по микробиологии. - М. 1984 (рус.).
- с. 131-141, 152-153.
М.Н Лебедева. - Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии. М. 1973 (рус.). с. 158-176.
Ю.С. Кривошеин. - Руководство к практическим занятиям по медицинской
микробиологии. - К. 1986 (рус.). - с. 86-92.
Дополнительные:
Словарь по микробиологии, вирусологии, иммунологии и инфекционным заболеваниям. Заг. ред.
проф.. Г.К. Палий, К. 2004. с. 7-146.
1.5.Ориентировочная основа действия (ООД).
Изготовление и окрашивание препаратов стафилококка.
Микроскопия готовых препаратов стрептококков.
Изучение культуральных свойств стафилококков и стрептококков.
Изучение метода фаготипирования стафилококков.
Определение чувствительности стафилококков и стрептококков к антибиотикам.
Оформление протокола.
1.6.Система обучающих заданий.
1) Определить признаки патогенности стафилококков:
1) наличие гемолиза; 2) выделение энтеротоксина; 3) выделение лейкоцидина 4) выделение
фибринолизина 5) выделение некротоксина; 6) выделение амилазы; 7) выделение липазы.
Ответ:1, 2, 3, 4, 5.
2) В хирургическом отделении возникло подозрение на наличие внутрибольничной
стафилококковой инфекции, источником которой является медицинский персонал. На какую
среду следует высеять материал с носоглотки работников отделения для выявления носительства
патогенных стафилококков?
А. Среда Ресселя.
В. Жосчно-солевой агар.
54
С. Мясо-пептонный бульон.
Д. Кровяной агар.
Е. Среда Эндо.
Ответ:В.
1.7. Короткие методические указания для работы студентов на лабораторном занятии.
1.7.1. Методика проведения занятия.
1. Изготовить, окрасить по Граму и посмотреть под микроскопом препараты культуры
стафилококка.
2. Посмотреть под микроскопом и зарисовать готовые препараты культур стрептококков.
3. Провести микроскопическое исследование гнойного выделения.
4. Выучить рост стафилококков и стрептококков на питательных средах (кровяной агар,
глюкозный МПБ) и выявить наличие пигмента у стафилококков на молочно-солевом агаре.
5. Провести фаготипирование стафилококков в демонстрационном опыте.
6. Определить чувствительность стрептококков и стафилококков к антибиотикам методом
стандартных дисков.
7. Внести в протокол схему бактериологической диагностики стафилококковых и стрептококковых инфекций.
Автор: доцент, к.б.н. Макац Е.Ф.
Методическая разработка
для работы на лабораторном занятии №26
для студентов стоматологического факультета
Тема: Патогенные кокки. Менингококки. Гонококки. Морфология и биологические
свойства. Микробиологическая диагностика заболеваний.
1.1 Актуальность темы.
Заболевания, обусловленные патогенными нейсериями, достаточно широко распространены среди
населения. В последние годы увеличиваются случаи заболевания эпидемическим менингитом
(особенно среди детей), а гонококковая инфекция сопровождает человечество в течение всей его
истории. Поэтому знания о природе этих заболеваний, их выявлении и диагностики крайне
необходимы практическим врачам.
1.2 Цели изучения темы.
Цель общая. Изучить свойства патогенных нейсерий и основы патогенеза менингококковых и
гонококковых инфекций. Усвоить микробиологическую диагностику инфекционных заболеваний,
обусловленных нейсериями.
Цель конкретная.
1.Изучить морфологические и культуральные свойства менингококков и гонококков.
2. Овладеть методами микробиологической диагностики менингококковой инфекции.
3. Овладеть методами лабораторной диагностики гонореи и бленореи младенцев.
4. Выучить особенности диагностики хронической гонореи.
1.3 Обеспечение исходного уровня знаний - умений.
1. Морфология шаровидных бактерий.
2. Строение клеточной стенки грамотрицательных бактерий.
3. Специальные питательные среды.
1.3.1 Тесты на исходный уровень знаний - умений.
Нейсерии имеют следующие морфологические и тинкториальные свойства:
А. Грамотрицательные парные палочки.
В. Грамположительные парные палочки.
С. * Грамотрицательные парные кокки.
D. Грамположительные парные кокки.
Е. Грамотрицательные извилистые бактерии.
1.3.2 Тесты на исходный уровень знаний - умений.
1). Реакция иммунофлюорисценции широко используется для экспресс-диагностики многих
бактериальных и вирусных инфекций. Выберите условие, без которого невозможно определить
результат реакции.
55
А. *Наличие люминесцентного микроскопа.
В. Наличие электронного микроскопа.
С. Наличие иммерсионного микроскопа.
D. Выделенной чистой культуры возбудителя.
Е. Сыворотки больного.
1.4. Графологическая структура содержания.
1.4.1. Графологическая структура микробиологической диагностики менингококковой инфекции.
Материал для исследования: спинномозговая жидкость, слизь из носоглотки, кровь.
Бактериоскопическое исследование: окраска мазков по Граму, изготовление и
окрашивание толстой капли крови.
Ответ.
Бактериологическое исследование
- посев на сывороточный агар,
- посев на шоколадный агар,
- характер роста колоний,
- проба на оксидазу и каталазу,
- определение серогруппы с диагностическими сыворотками,
- определение чувствительности к антибиотикам,
Ответ.
Серологический метод
- выявление в сыворотке антител в реакциях РНГА и ИФА.
Ответ.
1.4.2. Графологическая структура микробиологического исследования гонококковой инфекции.
Материал для исследования: гнойные выделения из уретры, моча, сыворотка.
Бактериоскопический метод
- мазок, окрашенный по Граму и метиленовым синим,
- реакция иммунофлуоресценции,
Ответ.
Бактериологический метод
- посев на кровяной агар, сывороточный агар, асцитный,
- изучение культуральных свойств,
- дифференциация гонококков от других видов рода Neisseria,
- определение чувствительности к антибиотикам
Ответ.
Серологический метод
- выявление антител в сыворотке крови в реакциях Борде-Жангу (РСК), РНГА, РИФ
Ответ.
1.4.3. Перечень теоретических вопросов.
1. Морфология, культуральные свойства, антигенное строение менингококков.
2. Микробиологическая диагностика заболеваний, вызванных ими. Обследование
бактерионосительство.
3. Гонококки, их свойства.
4. Методы лабораторной диагностики острой и хронической гонореи.
5. Профилактика и лечение заболеваний обусловленных нейсериями.
на
1.4.4. Источники учебной информации.
Основные:
1) К. Д. Пяткин, Ю.С. Кривошеин. - Микробиология. - К. 1992 (укр). - с. 196 - 201.
2) К.Д. Пяткин, Ю.С. Кривошеин. - Микробиология. - Г. 1980 (рус). - с. 244 - 249.
3) В.Д. Тимаков, В.С. Левашев. - Микробиология. - Г. 1983 (рус). - с. 266 - 272.
4) А.И. Коротяев, С.А. Бабичев. - Медицинская микробиология, иммунология и вирусология. Санкт - Петербург. 2002 (рус). - с. 342 - 346.
5) И.Л. Дикий, И.Д. Холупяк. - Микробиология. - Харьков. 1999 (рус). - с. 238 - 243.
6) В.И. Покровский. - Медицинская микробиология. - Г. 1998 (рус). - с. 275 - 291.
7) О.И. Климнюк, И.О. Ситник. - Практическая микробиология. - Терн., 2004 (укр). с. 183 - 190.
56
8) Л.Б. Борисов. - Руководство к практическим занятиям по микробиологии. - Г. 1984 (рус). - с. 157
- 160, 222.
9) М.Н. Лебедева. - Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии, - Г.
1973 (рус). - с. 176 - 179.
10) Ю.С. Кривошеин. - Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии. Г. 1986 (рус). - с. 92 - 07.
Дополнительные:
1) Г.К. Палий. - Словарь по микробиологии, вирусологии, иммунологии и инфекционным
заболеваниям. - 2004 (укр). - с. 7 - 146.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
1)
2)
3)
4)
5)
6)
1.5. Ориентировочная основа действия (ОДД)
Микроскопия готовых препаратов менингококка.
Микроскопия демонстрационных препаратов гнойных выделений из уретры больного
гонореей.
Постановка реакции преципитации со спинномозговой жидкостью больного.
Определение чувствительности менингококков и гонококков к антибиотикам.
Учет РСК с сывороткой крови больного.
Ознакомление со схемой микробиологической диагностики заболеваний.
Оформление протокола.
1.6. Система обучающих заданий.
1. Укажите питательные среды для культивирования менингококков:
1. МПБ.
2. МПА.
3. Кровяной агар.
4. Сахарный агар.
5. *Сывороточный агар.
6. * Сывороточный бульон.
7. Среда Китт-Тароцци.
8.* Асцит-агар.
9. Среда Бучина.
1.7. Короткие методические указания для работы студентов на лабораторном занятии.
1.7.1. Методика проведения
Просмотреть под микроскопом и нарисовать препараты из культур менингококка.
Просмотреть под микроскопом и нарисовать препараты с гнойных выделений уретры
больного.
Поставить реакцию преципитации спинномозговой жидкостью больного с
преципитирующими сыворотками А и В. Через 5 минут провести учет результатов. Определить
серогруппу.
Провести учет РСК с сывороткой крови больного гонореей.
Определить чувствительность менингококков к антибиотикам методом стандартных
дисков (при этом измерение зон задержки роста производить миллиметровой линейкой).
Внести в протокол схему диагностики заболеваний, вызванных патогенными
грамотрицательными кокками.
Автор: доцент, к.б.н. Макац Є.Ф.
Методическая разработка
по подготовке к лабораторному занятию №24
для студентов стоматологического факультета
Тема: Патогенные этеробактерии. Эшерихии. Шигеллы. Морфология и биологические
свойства. Микробиологическая диагностика эшерихиозов и шигеллеза.
1.1.Актуальность темы. Возбудители кишечных инфекций очень распространены во внешней
среде. Они загрязняют ее, пищевые продукты, воду. Среди них наиболее опасные энтеропатогенные кишечные палочки и возбудители бактериальной дизентерии. Болеют кишечными
57
инфекциями преимущественно дети разного возраста и поэтому диагностика этих заболеваний
имеет большое значение в работе практических врачей.
1.2. Цель изучения темы.
Общая. Выучить основные общие свойства представителей семьи энтеробактерий. Усвоить
биологические свойства кишечной палочки и возбудителей бактериальной дизентерии. Овладеть
основами патогенеза дизентерии и колиэнтерита у младенцев. Выучить микробиологическую
диагностику дизентерии и колиэнтерита.
Конкретная :
1.Изучить морфологию, культуральные и биохимические свойства кишечной палочки и
возбудителей дизентерии.
2.Ознакомиться с международной классификацией шигелл.
3.Освоить бактериологический метод исследования при колиэнтеритах младенцев.
4. Изучить методы микробиологической диагностики острой и хронической форм
дизентерии.
5.Освоить методы профилактики и лечения кишечных инфекций.
1.3.Обеспечение исходного уровня знаний-умений :
1.Морфология и тинкториальные свойства палочковидных бактерий.
2.Строение клеточной стенки грамотрицательных бактерий.
3.Дифференциально-диагностические среды.
1.3.1.Тесты на исходный уровень знаний-умений :
Бактерии характеризуются:
А. Палочковидной формой.
B. Обязательным наличием жгутиков.
C. Размерами от 1 до 10 мкм.
D. Размерами от 1 до 10 нм.
E. Спорообразованием во внешней среде .
Ответ: A,C.
1.4. Графологическая структура содержания.
1.4.1. Графологическая структура микробиологического исследования при колиэнтеритах:
1.Материал для исследования: испражнение больного ребенка.
2.Посев на среду Эндо.
3.Характер и цвет колоний.
4.Мазок,окрашивание по Граму.
5.Реакция агглютинации на стекле с ОВ-сыворотками.
6.Пересев агглютинабельных колоний на скошенный МПА.
7.Реакция агглютинации с типоспецифическими сыворотками.
8.Розвернутая реакция агглютинации.
9.Посев на "пестрый ряд".
Ответ.
1.4.2. Графологическая структура микробиологического исследования при дизентерии:
1.Материал для исследования: испражнения.
2.Бактериологический метод: посев на дифференциальную среду.
3.Характер роста, цвет колоний.
4.Мазок,окраска по Граму.
5.РА на стекле с дизентерийными сыворотками.
6.Пересев на среду Расселя.
7.Мазок,окраска по Граму.
8.Пересев на "пестрый ряд".
9.РА на стекле с видовыми и типоспецифическими сыворотками.
10.Материал для исследования: сыворотка крови.
11.Серодиагностика: РА с дизентерийными диагностикумами.
12.РПГА с эритроцитными диагностикумами.
Ответ.
1.4.3. Перечень теоретических вопросов.
1.Общая характеристика семейства энтеробактерий.
2.Морфология, культуральные и биохимические свойства эшерихий.
3.Антигенная структура эшерихий.
58
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
4.Дифференциация условно-патогенних и патогенных эшерихий.
5.Значение кишечной палочки в патологии человека.
6.Микробиологеская диагностика эшерихиозов.
7.Современная международная классификация шигелл.
8.Морфология, культуральные и биохимические свойства шигелл.
9.Антигенное строение шигелл.
10.Фактори патогенности шигелл, механизм внутриклеточного паразитизма.
11.Методы микробиологической диагностики острой и хронической дизентерии.
12.Бактерионосительство при дизентерии и методы его выявления.
13.Профилактика дизентерии.
1.4.4. Источники учебной информации.
Основные.
1. К.Д. Пяткин, Ю.С. Кривошеин Микробиология К.1982 (укр) - 211-216
2. К.Д. Пяткин, Ю.С. Кривошеин Микробиологая М. 1980 (русс) 255-259,270-273
3. В.Д. Тимаков Микробиология М. 1983 (русс) 273-279,286-288
4. А.И. Коротяев С.А. Бабич Медицинская микробиология, иммунология и вирусология
Санкт – Петерб. 2002 (русс), 373-377,389-384
5. И.Л. Дикий, И.Ю. Холупяк. Н.С. Шевелева, М.Ю. Стегний, Микробиология Харк.224-227,23223 6
6. Микробиология . Руководство к лабораторным занятиям. Харк 2002
7. О.И. Климнюк, И.О, Ситник, М.С. Творчко, В.П. Широбоков, Практическая микробиология,
Терн, 2004 190-194,209-212
8. Л.Б. Борисов, Руководство к практическим занятиям по микробиологии М. 1984 (русс),176-181
9. М.Н. Лебедева, Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии \ 1973
(русс) 182-186,195-200
10. Ю.С. Кривошеин Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии К.
1986 (русс), 97-98,107-109
Дополнительные
1. Словарь по микробиологии, вирусологии, иммунологии и инфекционным заболеваниям. Общ.
ред, проф. Г.К. Палий, К, 2004,7-146
1.5.Ориентировочная основа действия (ОДД).
Изготовление мазков из культуры кишечной палочки, окраска по Граму, микроскопия.
Изготовление, состав и назначение дифференциально-диагностических сред.
Изучение колоний эшерихий визуально и под стереомикроскопом на средах Эндо, Плоскирева,
Левина.
Учет ферментативных свойств эшерихий на углеводном ряду Гисса.
Изготовление препаратов из культуры дизентерийных бактерий, окраска, микроскопия.
Изучение культуральных свойств шигелл на дифференциально-диагностических средах.
Изучение биохимических свойств шигелл на СИБ.
Учет РПГА с целью серодиагностики дизентерии.
Ознакомление с биопрепаратами, которые применяют для диагностики и профилактики
дизентерии.
Оформление протокола.
1.6.Система обучающих заданий.
1.6.1. С испражнений больного выделена культура грамотрицательных, полиморфных,
палочковидних бактерий. На средах Эндо и Плоскирева колонии окрашены в бледно-розовый
цвет, на среде Левина - в бледно-голубой. Культура не разжижает желатин, не образует индол и
сероводород. На "пестром ряду" ферментирует глюкозу, маннит, мальтозу и медленно лактозу с
образованием кислоты. Какой микроорганизм выделено?
Эталон ответа: с материала больного выделена культура шигел Зонне.
1.6.2. При гнилостных дисбактериозах с повышенным рН испражнений, следует назначать
биологические препараты изменяющие рН в кислую сторону и имеющие антагонистическое
действие. Какие микроорганизмы подходят для такой цели?
А. Клебсиеллы.
B. Азотобактер.
C. Энтеробактер.
D. Бифидумбактерии.
59
E. Протеи.
Ответ:D
1.7.Краткие методические указания для работы студентов на лабораторном занятии.
1.7.1.Методика проведение занятия.
1.Приготовить мазок с культуры кишечной палочки, окрасить по Граму, посмотреть под
микроскопом, зарисовать в протоколы.
2.Изучить состав и назначение дифференциально-диагностических сред Эндо, Левина,
Плоскирева.
3.Рассмотреть колонии эшерихий визуально и под стереомикроскопом на средах Эндо,
Плоскирева, Левина. Соответствующие характеристики внести в протокол.
4.Учесть ферментативные свойства эшерихий в тест-системе СИБ и углеводном ряду Гисса.
Обратить внимание на расщепление лактозы, глюкозы, маннита, мальтозы, образование индола,
сероводорода.
5.С целью бактериологической диагностики колиэнтерита высеять испражнения больного
ребенка на среду Эндо. Поместить в термостат.
6.Приготовить препарат с культуры дизентерийных бактерий, окрасить по Граму,
посмотреть под микроскопом, зарисовать в протоколы.
7.Изучить культуральные свойства шигелл на средах Эндо, Плоскирева, висмут-сульфит
агаре, отметить особенности колоний.
8.Изучить биохимические свойства шигелл в демонстрационном наборе СИБ.
9.Учесть РПГА с сывороткой больного и дизентерийным эритроцитарным дигностикумом в
демонстрационном опыте. Определить титр антител.
10.Ознакомиться с биопрепаратами, которые применяют для диагностики и профилактики
дизентерии.
Автор: доцент, к.б.н. Макац Е.Ф.
Методическая разработка
по подготовке лабораторного занятия №25
для студентов стоматологического факультета
Тема: Патогенные энтеробактерии. Сальмонеллы. Возбудители брюшного тифа, паратифа А
и В. Сальмонеллы - возбудители острых гастроэнтеритов. Морфология и биологические
свойства. Микробиологическая диагностика заболеваний.
1.1. Актуальность темы. Инфекционные заболевания обусловленые возбудителями тифо-паратифозной группы, достаточно распространенны среди людей. Наиболее опасный среди них
брюшной тиф. Развитие заболевания и микробиологическая диагностика тесно связаны с
особенностями патогенеза. Студенты должны хорошо овладеть последовательностью течения
болезни, чтобы на разных этапах верно подобрать методы диагностики брюшного тифа.
Заболеваемость на сальмонеллезные острые гастроэнтериты ежегодно увеличивается во всех
странах. Проблема борьбы с сальмонеллезами является актуальной проблемой медицинской науки
и практики. Под действием различных факторов, главным образом социально-экономических и
биологических, происходят постоянные изменения территориального распространения,
сезонности, возрастной структуры больных острым гастроэнтеритом. Поэтому врачу необходимо
знать этиологические, эпидемиологические, клинические и микробиологические особенности
этих заболеваний.
1.2.Цель изучение темы.
Общая: Усвоить микробиологическую диагностику тифо-паратифозных болезней в
зависимости от стадии заболевания.
Конкретная: Уметь выбрать адекватные методы диагностики брюшного тифа на 1,2,3, и 4
неделе заболевания. Идентифицировать сальмонеллы по биохимическим и антигенным свойствам.
Верно интерпретировать результаты реакции Видаля.
Выучить морфологию, культуральные, биохимические свойства возбудителей пищевых
инфекций. Знать способы неспецифической профилактики пищевых гастроэнтеритов. Уметь
провести бактериологическое исследование пищевых продуктов на наличие сальмонелл.
1.3.Обеспечение исходного уровня знаний-умений.
1.3.1. Тести на исходный уровень знаний-умений.
60
1.
2.
3.
4.
5.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
-
Определите, какой токсин образует возбудитель брюшного тифа.
А. Екзотоксин
В. Ендотоксин
С. Ентеротоксин
D. Нейротоксин
Е. Некротоксин
Ответ:В
1.4. Содержание обучения.
1.4.1.Графологические структуры содержания.
1) Графологическая структура выделения чистой гемокультуры при брюшном тифе и
паратифах.
Материал для исследования: кровь
Посев на среду Рапоппорта. Мазок по Граму.
Посев на дифференциальную среду. Пересев на Расселя.
РА с поливалентными и монорецепторными сальмонельозными сыворотками
Пересев на "пестрый ряд". Фаготипирование.
Ответ.
2) Графологическая структура постановки реакции Видаля.
Материал для исследования: сыворотка больного.
Разведение сыворотки физраствором в соотношении от 1:100 до 1:1600 в четырех рядах пробирок.
Внесение в первый ряд пробирок О-диагностикума возбудителя брюшного тифа.
Во второй ряд - Н-диагностикума возбудителя брюшного тифа.
В третий ряд - О-диагностикума сальмонеллы паратифа А.
В четвертый - О-диагностикума сальмонеллы паратифа В.
Сопровождение реакции контролями сыворотки и диагностикумов.
Термостатирование - 2 часа.
Выдержка при комнатной температуре.
Учет. Ответ.
3) Графологические структуры микробиологического исследования острых гастроэнтеритов.
Материал для исследования: рвотные массы, промывные воды, испражнения, моча,
остатки пищи.
посев на среду Эндо, Плоскирева, конденсационную воду скошенного МПА.
изучение культуральных особенностей на питательних средах
мазок, окрашивание по Граммом
пересев на скошенный МПА (чистая культура)
реакция агглютинации на стекле со специфическими сыворотками
пересев на пестрый ряд Гисса.
Ответ.
1.4.2. Перечень теоретических вопросов.
1.Морфологические, культуральные и биохимические свойства сальмонелл брюшного тифа,
паратифа А та В.
2.Антигенная структура тифо-паратифозных сальмонелл.
3.Принцип классификации сальмонелл по Кауфману-Уайту.
4.Этиопатогенез брюшного тифа и паратифа.
5.Методы микробиологической диагностики в зависимости от периода заболевания.
6.Ранняя диагностика брюшного тифа методом гемокультуры.
7.Обоснование серодиагностики при брюшном тифе. Накопление О-, Н-, Vі-антител в разные
периоды заболевания, их значение для серодиагностики.
8.Реакция Видаля, техника ее постановки.
9. Морфология, биохимические свойства и антигенное строение сальмонелл - возбудителей
пищевых токсикоинфекций.
10. Классификация сальмонелл - возбудителей острых гастроэнтеритов.
11. Этиопатогенез острых сальмонеллезных гастроэнтеритов.
12. Бактериологическая дифференциация пищевых токсикоинфекций, которые вызываются
сальмонеллами, ешерихиями, стафилококками, протеями.
61
13. Профилактика острых гастроэнтеритов.
1.4.3.Источники учебной информации:
Основные
1.К.Д. Пяткин, Ю.С. Кривошеин Микробиология К. 1982 (укр) 201-208
2. К.Д. Пяткин, Ю.С. Кривошеин Микробиология М. 1980 (русс) 259-267
3. В.Д. Тимаков Микробиология М. 1983 (русс) 279-285
4.А.И. Коротяєв С.А. Бабич Медицинская микробиология, иммунология и вирусология СанктПетерб. 2002 (русс) 377-381
5. И.Л. Дикий, И.Ю. Холупяк, Н.С. Шевелева, М.Ю.Стегний, Микробиология Харк. 1999 (русс)
227-230
6. Микробиология . Руководство к лабораторным занятиям. Харк 2002
7. О.И. Климнюк,И.О, Ситник, М.С. Творчко, В.П. Широбоков, Практическая микробиология,
Терн, 2004 199-206
8. Л.Б. Борисов, Руководство к практическим занятиям по микробиологии Г. 1984 (русс) 181-188
9. М.Н. Лебедева, Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии Г. 1973
(русс) 182-194
10. Ю.С. Кривошеин Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии Г.
1986 (русс) 99-104
Дополнительные
1.Словарь по микробиологии, вирусологии, иммунологии и инфекционным заболеваниям. Заг.
ред, проф., Г.К. Палий, К, 2004 7-146
1.5. Ориентировочная основа действия.
1.Приготовление мазка с культур возбудителей брюшного тифа, паратифов А и В.
2.Изучение культуральных свойств возбудителей тифо-паратифозных групп на
дифференциально-диагностических средах.
3. Изучение биохимических свойств в тест-системе СИБ.
4.Учет серологической реакции агглютинации Видаля.
5. Изготовление и окрашивание препаратов сальмонелл - возбудителей острых
гастроэнтеритов.
6. Изучение культуральных свойств сальмонелл на дифференциально-диагностических средах.
7. Изучение биохимических свойств на сахаролитических средах.
8. Проведение бактериологического исследования пищевого продукта.
9.Оформлення протокола.
1.6.Система учебных заданий.
Назовите среду накопления для выделения возбудителей тифо-паратифозной инфекции.
А. МПБ.
В. Сахарный МПБ.
С. Среда Китт-Тароцци.
D. Среда Рапопорта.
Е. Среда Эндо.
Ответ:D
1.7. Краткие методические указания по работе студентов на лабораторном занятии.
1.7.1. Методика проведения занятия.
1.Приготовить мазки культур возбудителей брюшного тифа, паратифа А та В, окрасить их по
Граму, зарисовать.
2.Изучить культуральные свойства возбудителей брюшного тифа и паратифов на дифдиагности-ческих средах Эндо, Плоскирева, висмут-сульфит агаре и описать характер роста.
3.Изучить ферментативные свойства возбудителей тифо-паратифозной группы в тест-системе
СИБ.
4.Провеси учет развернутой реакции агглютинации Видаля с целью серодиагностики
брюшного тифа.
5.Ознакомиться с биологическими препаратами, которые используют для диагностики и
профилактики брюшного тифа и паратифа.
6. Изготовить, окрасить по Граму и просмотреть препараты с культуры сальмонелл - возбудителей
острых гастроэнтеритов.
7. Изучить культуральные и биохимические свойства сальмонелл - возбудителей острых
62
гастроэнтеритов на средах Эндо, Плоскирева, Левина, СИБ.
8. Провести бактериологическое исследование пищевого продукта: высеять его на среду Эндо- и в
конденсационную воду на МПА.
Автор: доцент, к.б.н.
Е.Ф.Макац
Методическая разроботка
по подготовке и роботе на лабораторном занятии №26
для студентов стоматологического факультета
Тема: Условно-патогенные энтеробактерии - клебсиеллы, протеи. Псевдомонады.
Морфология и биологические свойства. Микробиологическая диагностика заболеваний.
Актуальность темы. Актуальность темы связана с тем, что энтеробактерии и псевдомонады
вызывают заболевания, как правило, в условиях снижения
защитных механизмов
макроорганизма. Возбудители могут попадать из внешней среды разными путями, но чаще
вызывают аутоинфекции, для которых характерно хроническое течение в виде разнообразных
клинических форм, в том числе и госпитальных инфекций, лечение которых осложняется всвязи с
их антибиотикорезистентностью.
1.
Цели изучения темы.
Цель общая. Познакомиться с характеристикой возбудителей, патогенезом, принципами
лабораторной диагностики заболеваний, вызваных клебсиеллами, протеями, псевдомонадами.
Цель конкретная. Усвоить дифференциальные признаки псевдомонад, клебсиелл, протеев.
Познакомиться с методами диагностики соответствующих заболеваний, знать роль данных
микроорганизмов в возникновении госпитальных инфекций.
2.
Обеспечение исходного уровня знаний-умений.
3.1. Лекции „Специфическая профилактика и терапия инфекционных заболеваний”, „Современные
методы диагностики инфекционных заболеваний”.
3.2. Тесты исходного уровня знаний-умений.
Пример теста.
Для диагностики заболевания, вызванного бактериальной инфекцией, необходимо использовать
все методы кроме:
А. Аллергического
В. Вирусологического
C. Бактериологического
D. Бактериоскопического
E. Биологического
Правильный ответ: В – вирусологического
4.Содержание обучения.
4.1.
Графологические структуры содержания.
Семейство
Морфология
Методы
культивирования
Условно-патогенные энтеробактерии- Клебсиеллы.
Enterobacteriaceae-Род Klebsiella
Klebsiella pneumoniae
Klebsiella ozaenae
Klebsiella rhinoscleromatis
форма
Гр- элипсовидные палички
расположение Одиночно, попарно или короткими цепочками
спора
Нет
подвижность Неподвижна
капсула
Есть
Факультативный анаэроб
36º С
рН - 7,0- 7,4
Питательные среды- МПА, МПБ
63
Резистентность
Ферментативная
активность
Антигены
Культуральные
свойства
Чувствительны к действию дезинфектантов.
Стойкие к низким и высоким температурам (25º С –недели, месяцы)
Сахаролитические свойства снижаются от Klebsiella pneumoniae,
Klebsiella ozaenae до Klebsiella rhinoscleromatis .
Протеолитические свойства: индол, Н² S не продуцируют.
О- АГ : 5 серогрупп
К- АГ : 72 серовара
МПБ- диффузное помутнение
МПА-образование
S- формы колоний,
крупные,
слизистые,
випуклые.
Среды Эндо, Левина, Плоскирева – колонии Klebsiella pneumoniae
И Klebsiella ozaenae окрашиваются в цвет индикатора.
Расположение клебсиелл в юных колониях :
Klebsiella pneumoniae- петлеподобно
Klebsiella ozaenae- спиралевидно
Klebsiella rhinoscleromatis- концетрично
Методы лабораторной Микроскопический (определение капсулы методом Бурри - Гинса,
Романовського - Гимза)
диагностики
Бактериологический
Серологический ( РЗК )
Биологический
Аллергический ( аллерген - склерозан)
Не разработана
Специфическая
профилактика
Аутовакцины при хронических формах
Специфическая
терапия
Условно-патогенные энтеробактерии- Протеи.
Семейство
Морфология
Методы
культивирования
Enterobacteriaceae- Род Proteus.
Proteus vulgaris
Proteus mirabilis
Proteus rettgeri
Proteus inconstans
форма
Гр- полиморфные палочки
расположение Попарно или цепочками
спора
Нет
подвижность + перитрих
капсула
Нет
Факультативный анаэроб
25-37º С
рН - 7,2- 7,4
Питательные среды- МПА, МПБ
Стойкие к физическим факторам и противомикробным препаратам.
Оксидаза –
Каталаза+
Ферментативная активность снижается от Proteus vulgaris
до Proteus inconstans.
О- АГ : 49 сероваров
Антигены
Н- АГ : 19 сероваров
МПБ- диффузное помутнение с осадком.
Культуральные
МПА- О- колонии (отдельные S- формы с ровными краями),
свойства
Н- колонии ( вид “ роения ” с дочерними отростками)
Бактериологический
( посев по методу Шукевича в конденсационную
Методы лабораторной
воду скошеного агара, среда Эндо, МПА ).
диагностики
Резистентность
Ферментативная
активность
64
Факторы
вирулентности
Эндотоксин
Протеаза
Фимбрии
Уреаза
Жгутики
Гемолизин
Синегнойная палочка
Семейство
Морфология
Методы
культивирования
Резистентность
Pseudomonadaceae- Род Pseudomonas
Pseudomonas aeruginosa
форма
Гр- палочки
расположение Поодинчно или короткими цепочками
спора
Нет
подвижность + монотрих, амфитрих
капсула
Нет
Облигатный аэроб.
4-42º С
Питательные среды- МПА, МПБ
Стойкие к физическим факторам и противомикробным препаратам.
Сахаролитические свойства: ферментация глюкозы до кислоты.
Протеолитические свойства: индол, сероводород продуцирует слабо.
О- АГ : 20 серогрупп
Н- АГ : 15 серотипов
Культуральные свойства МПБ- диффузное помутнение с осадком.
МПА- колонии S- формы, плоские, слизистые.
Виделяют пигмент при рН< 7красного цвета, при рН> 7 – синезеленого цвета. Виделяют специфический запах.
Методы лабораторной Бактериологический
диагностики
Экзотоксин А
Факторы
Цитотоксин
вирулентности
Екоензим S
Гемолизин
Нейраминидаза
Энтеротоксин
Эндотоксин
Протеаза || ( еластаза )
Протеаза ||| (щелочная протеаза )
Ферментативная
активность
Антигены
4.2.
Список теоретических вопросов.
1.Источники и пути распространения госпитальной инфекции.
2. Условия и факторы, благоприятствующие проявлению вирулентности условно-патогенных
бактерий и возникновению госпитальных инфекций.
3 .Морфология, культуральные и биохимические свойства клебсиелл.
4. Факторы патогенности клебсиелл.
5. Микробиологическая диагностика склеромы.
6. Морфология, культуральные и биохимическик свойства протей и псевдомонад.
7. Методы лабораторной диагностики инфекций, вызваных протеями и синегнойной палочкой.
8.Профилактика госпитальных инфекций.
4.3. Источники учебной информации.
К.Д.Пяткін, Ю.С.Кривошеїн. Мікробіологія, К., 1992. – С. 216 -221, 309-314
К.Д.Пяткин, Ю.С.Кривошеин. Микробиология, М., 1980. – С. 250-255, 274 -279.
В.Д.Тимаков. Микробиология, М., 1983. – С. 288-291, 303-304.
А.І. Коротяєв, Г. А. Бабічев Медицинская микробиология, иммунология и вирусология, 2002.
С 348- 354.
65
Л.Б.Борисов. Руководство к практическим занятиям по микробиологии, М., 1984.
Ю.С.Кривошеин. Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии, М.,
1986. – С. 135-138, 142-143.
М.Н.Лебедева. Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии, М., 1973. –
С. 208-211, 266-267.
Література додаткова.
Мікробіологія, вірусологія, імунологія, інфекційні хвороби. Словник/ За ред Г.К.Палія, В.І.Палія.
– Київ: Здоров'я, 2004.
Збірник завдань для підготовки до тестового екзамену з природничо-наукових дисциплін
«Крок-1. Загальна лікарська підготовка» /Кол.авторів; За ред. В.Ф.Москаленка та співавт. –
К.:Медицина, 2004.
5.
Ориентировочная основа действия.
Графологические структуры лабораторного исследования клебсиеллезов .
Материал для исследования: мокрота, слизь носовой полости, гранулематозная ткань, сыворотка
крови .
Бактериоскопическое исследование
 Мазок, окрашеный по Граму, по Бурри- Гинсу, по Романовскому- Гимза.
Бактериологическое исследование

– посев на МПА;

- агар-микроскопия “юных” колоний;

- мазок, окрашеный по Бурри- Гинсу, по Граму;

- пересев на скошенный агар;

- характеристика колоний;

- посев на углеводный ряд Гисса, на желточный МПА;

- РА на стекле с антикапсульными сыворотками;

- развернутая РА с прокипяченой культурой и диагностическими О-сыворотками;
Серологическое исследование
РСК с сыворотками больных и капсульным антигеном;
РА с сыворотками больных и бескапсульными клебсиеллами;
РПГА с сыворотками больных и эритроцитарным диагностикумом.
Граф логические структуры лабораторного исследования протейных и псевдомонадных
заболеваний .
Материал для исследования: гной, эксудат, кровь, рвотные массы, испрожнения, вода, пищевые
продукты ( при протейных пищевых токсикоинфекциях ).
Бактериологическое исследование
Посев на МПА, МПБ, среду Плоскирева, свежескошенный агар по Шукевичу.
Характеристика колоний;
Мазок, окрашеный по Граму;
Препарат “раздавленная капля” ;
Пересев на скошенный агар;
Посев на углеводный ряд Гисса, на желатин, на МПБ с мочевиной ( пробы на индол,
сероводород, уреазу, каталазу ).
6.
Система целевых обучающих заданий.
Примеры тестов.
Род Klebsiella принадлежит к семейству:
А. Enterobacteriacea
B. Bacillaceae
C. Pasteurellaceae
D. Vibrionaceae
E. Pseudomonadaceae
Правильный ответ: А- Enterobacteriacea
7.
7.1.
1.
Краткие методические указания для работы студентов на лабораторном занятии.
Методика проведения занятия.
Студенты готовят мазки из культур клебсиелл, окрашивают по Бурри- Гинсу и
микроскопируют, отмечают наличие капсулы.
66
2.
Визуально под стереомикроскопом изучают культуральные свойства клебсиелл.
3. Проводят агар- микроскопию юных колоний клебсиелл с целью ускоренной идентификации.
4. Учитывают результаты реакции агглютинации с парными сыворотками больного склеромой
для определения наростания титра антител.
5. С целью постановки диагноза токсикоинфекции протейной этиологии студенты учитывают
результаты посева пищевых продуктов на скошеном агаре по Шукевичу. Обращают внимание на
“ползучий” рост протея. Готовят мазки, окрашивают по методу Грама для изучения морфологии,
тинкториальных свойств протея.
6. Учитывают чувствительность псевдомонад и протея к антибиотикам в демонстрационном
опыте.
Автор: ассистент Жорняк Е. И.
Методическая разработка
по подготовке и работе на лабораторном занятии №27
для студентов стоматологического факультета
1.1.
1.2.
1.2.1.
1.2.2.
1.
2.
3.
4.
1.3.
1.
2.
3.
4.
5.
1.4.
1.4.1.
Тема: Патогенные вибрионы. Морфология и биологические свойства холерного вибриона.
Микробиологическая диагностика холеры.
Актуальность темы.
Седьмая пандемия холеры, начавшись в 1961 г., длится по сегодняшний день. Знание
биологических характеристик возбудителя необходимо для подтверждения клинического диагноза
«холера» и дифференциации холеры от холероподобных энтеритов, которые не являются
особенно-опасными инфекциями с быстрым эпидемиологическим распространением. Учитывая
быстрое распространение инфекции и тяжелое течение заболевания будущим врачам любой
специализации необходимо знать основные противоэпидемические профилактические и лечебные
мероприятия, которые выполняются в очаге холеры.
Цель изучения темы.
Цель общая: ознакомиться с особенностями возбудителя холеры, имеющие значение в
лабораторной диагностике и профилактике заболевания.
Цель конкретная:
Знать ключевые признаки рода Vibrio, дифференциальные культуральные и
биохимические свойства патогенных для человека вибрионов.
Знать, как правильно забрать материал от больного и провести предварительную
лабораторную диагностику холеры.
Усвоить этапы микробиологической диагностики холеры и холероподобных энтеритов.
Знать основные противоэпидемические и профилактические мероприятия по
предупреждению распространения заболевания в очаге.
Обеспечение исходного уровня знаний-умений.
Морфологические особенности вибрионов, методы микроскопического исследования.
Методы изучения монотрихиальной подвижности бактерий.
Методы определения соматических антигенов бактерий.
Этапы бактериологического метода диагностики.
Сравнительная характеристика экзотоксинов и эндотоксинов бактерий.
Содержание обучения.
Граф логической структуры содержания:
1.Таксономия патогенных для человека вибрионов
Семейство Vibrionaceae
Род Vibrio
Виды: V.cholerae, V.parahaemolyticus, V.vulnificus
2.
Морфология:
Общая характеристика вибрионов, патогенных для человека
3.
Культуральные свойства:
67
Грамм-отрицательные, слегка изогнутые
палочки в виде запятой
0,5 - 1,5-3 мкм, спор и капсул не образуют,
подвижные (монотрихи)
Методы изучения морфологии:
Нативные препараты «висящая» или 1.
«раздавленная» капля (подвижность);
2.
препараты, окрашенные за Граммом, 2.
Пффейфером
1.
1.
2.
3.
4.
3.
Факультативные анаэробы или аэробы;
Адаптированные к щелочной среде
(оптимальное рн 7,6-8,2);
Оптимальная температура 18-370С;
Не требовательны к питательным средам и
условиям культивирования;
Для быстрого роста культивируют на
специальных или селективных средах;
Некоторые виды адаптированы к повышенным
концентрациям NaCl (галофильные)
Питательные среды для культивирования:
Щелочной агар, щелочная пептонна
вода
Дифференциально-диагностические:
TCBS-агар, среда Монсура
Характеристика роста:
На пептонной воде образуют голубую
пленку через 4-6 ч.
на щелочном агаре образуют
дисковидные прозрачные S-колонии
на TCBS-агаре образуют желтые
колонии (ферментируют сахарозу)
на среде Монстра образуют колонии с
темно-серым центром
Дифференцирующие признаки вибрионов
Антигенная структура
1.О-Аг (группоспецифи-ческий)
2. Н-Аг (общий)
Вирулентность
1. Патогенные вибрионы
(V.cholerae)
2. Условно-патогенные
вибрионы (V.parahaemolytiМетод изучения: РА со
cus, V.vulnificus, V.metschспецифической О-сывороткой
nicovi)
Делятся на 139 О-серогрупп
3.Сапрофитные вибрионы
Возбудитель холеры (V.cholerae) относится к О-1 серогруппе и I хемогруппе по Хейбергу
4.
Биохимические свойства
Ферментация маннозы,
сахарозы, арабинозы
(триада Хейберга)
Делятся на 8 хемогрупп
Внутривидовая классификация V.cholerae
По структуре О-Аг
О-1 группа:
Серотип Огава (АВ)
Серотип Інаба (АСС)
Серотип Гиікошима (АВС)
2.
НАГ вибрионы
3.
О-139 группа (штамм bengal)
1.
1.
2.
3.
4.
1.
2.
3.
4.
5.
За биологическими свойствами
Биовар cholerae
Биовар el-tor
Биовар proteus
Биовар albensis
Классификационные признаки:
Гемолиз куриных эритроцитов
агглютинация еритроцитов барана
чувствительность к полимиксину
фаголизабельность типовыми фагами
реакция Фогеса-Проскауера
Патогенность и факторы вирулентности возбудителя холеры
Патогенность
Факторы вирулентности
Вызывает особо-опасную кишечную инфекцию1.
Жгутик
человека, которая сопровождается водянистой 2.
Пили (адгезины)
диареей и выраженной дегидратацией и
3.
Ферменты патогенности:
характеризуется быстрым эпидемическим
плазмокоагулаза, лецитиназа, фибринолизин,
5.
68
распространением
нейраминидаза, протеазы
Эндотоксин
Экзотоксин (холероген) вызывает
угнетение аденилатциклазы, что приводит к
накоплению цАМФ и выходу в просвет
кишечника воды и электролитов
6.
Короткая характеристика заболевания
Стадии
Основные
Иммунитет
Профилактика Лабораторная
заболевания
клинические
диагностика
признаки
-выраженная
НапряженНеспециИнкубационн
Ускоренная:
интоксикация;
ный,
стойкий,
фичная
Микроскопия
ый период 1-6 суток
-профузный
антибактеконвенцион(нативная,
водянистый
риальный и
ная и
окрашенных
понос;
антитоксичэтиотропная
препаратов,
-рвота;
ный
антибактерииммунофлюо-симптомы
альная
ресцентная)
обезвоживаСпецифичесПатогенеОсновная:
ния (сухость
кая (только в
Бактериолотические
кожи,
постоянных
ггический
стадии:
уменьшение
-энтерит;
очагах
метод
тургора;
-гастрохолеры):
падение
энтерит;
ИнактивироВспомогадавления;
- холерный
ванная
тельная:
тромбозы)
алгид;
холерная
(ретроспективн
-кома
вакцина;
ая)
ХолерогенСерологичесанатоксин
кий метод
4.
5.
Механизм и
пути передачи
заболевания
Фекальнооральный
Водный;
Алиментарный;
Бытовой
Факторы
передачи:
Вода
Пищевые
продукты
Грязные руки
Источник
инфекции
Больной
человек;
Вибрионоситель
1.4.2. Перечень теоретических вопросов.
1.
Общая характеристика вибрионов, патогенных для человека
2.
Морфология и биологические свойства возбудителя холеры.
3.
Дифференциация биоваров холерного вибриона
4.
Микробиологическая диагностика холеры. Этапы бактериологического исследования.
5.
Методы ускоренной диагностики холеры.
6.
Профилактика холеры.
7.
Этиология и особенности микробиологической диагностики холероподобных
гастроэнтеритов.
1.4.3. Источники учебной информации.
Литература (основная):
1.
К.Д.Пяткин, Ю.С.Кривошеин. Микробиология, М., 1980. Стр. 284-291.
2.
В.Д.Тимаков.Микробиология, 1983. Стр. 298-302.
3.
А.И.Коротяев, С.А.Бабич. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология,
Санкт-Петерб.,2002. Стр. 394-401.
4.
И.Л.Дикий, И.Ю.Холупяк, Н.С.Шевелева, М.Ю.Стегний. Микробиология, Харьков, 1999.
Стр.242-247.
5.
Микробиология. Руководство к лабораторным занятиям. Под ред. И.Л.Дикого, Харьков,
1999. Стр.280-286.
6.
Л.Б.Борисов. Руководство к лабораторным занятиям по микробиологии, 1984. Стр. 188193.
7.
Л.Б.Борисов. Медицинская микробиология, вирусология,иммунология, М., 2002. Стр. 409412.
8.
Ю.С.Кривошеин. Руководство к практическим занятиям по микробиологии, 1973. Стр.
200-208.
Литература (дополнительная):
69
Словарь по микробиологии, вирусологии, иммунологии и инфекционным заболеванием.
Общая ред.. Г.К.Палий, К., 2004.
2.
Б.Л.Черкасский. Особо опасные инфекции, М.: «Медицина», 1996. Стр. 38-44.
3.
Лекционный материал.
1.5.
Ориентировочная основа действия (ОДД)
Схема микробиологической диагностики холеры и холероподобных энтеритов
Материал для исследования: испражнения, рвотные массы, секционный материал (сегменты
тонкого кишечника), вода, пищевые продукты
Ускоренная диагностика:
РИФ;
Реакция иммобилизации вибрионов О-1 сывороткой
Бактериологический метод:
Первый этап:
микроскопия нативних мазков для определения подвижности;
микроскопия окрашенных по Грамму мазков испражнений;
посев исследуемого материала в щелочную ПВ, на щелочной агар, среду ТЦБС;
Второй этап (через 4-6 часов):
микроскопическое исследование пленки со щелочной ПВ (нативная микроскопия);
мазок, окраска по Грамму;
постановка ориентировочной РА с О-1 сывороткой;
при необходимости (отсутствие видимых признаков роста) пересев в другую ПВ и на
плотные среды;
Третий этап (через 14-16 часов):
изучение колоний, которые образовались на плотных средах: мазок по Грамму,
ориентировочная РА с О-1 сывороткой;
пересев подозрительных колоний на щелочную ПВ.
Четвертый этап (через 20-24 часа):
идентификация чистых культур:
o
определение сахаролитических свойств (триада Хейберга);
o
определение серотипа в ориентировочной и развернутой РА;
o
постановка биологических тестов для определения биовара;
Пятый этап (через 24-36 часов):
учет результатов;
выдача окончательного микробиологического диагноза.
Серологический метод (вспомогательный, ретроспективная диагностика, выявление носителей,
оценка напряженности иммунитета):
определение вибриоцидов в сыворотке больных в реакции лизиса (с 3-го дня);
диагностический титр 1:1000
определение агглютининов в развернутой РА; диагностический титр 1:80;
определение антитоксинов с помощью РНГА; диагностический титр 1:160.
1.
1.6.
1.6.1.
1.
2.
3.
4.
5.
Краткие методические указания для работы студентов на лабораторном занятии.
Методика проведения занятия.
Промикроскопировать демонстрационные препараты из культуры холерного вибриона,
окрашенные по Грамму. Изучите характерную морфологию возбудителя. Микроскопическую
картину зарисуйте в протокол.
Изучить характер роста холерного вибриона на 1% пептонной воде. Данные внесите в
протокол.
Ознакомиться с демонстрационными питательными средами, которые используют для
выделения холерного вибриона и условно-патогенных вибрионов из патологического материала
(щелочной агар, кровяно-солевой агар, ТЦБС). Культуральные признаки патогенных для человека
вибрионов внести в протокол.
Поставить ориентировочную РА на стекле с культурой вибриона и группоспецифической
О-сывороткой. Учесть результат, сделать вывод.
Учесть результаты демонстрационной РА культуры вибриона с группоспецифической Осывороткой, разбавленной до половины титра.
70
Изучить диагностические и лечебно-профилактические препараты, которые используют
для лабораторной диагностики, профилактики и лечения холеры (диагностические О-сыворотки
группо- и типоспецифические, бактериофаги el-tor, C IV Мукерджи, инактивированная холерная
вакцина, холероген-анатоксин, тетрациклин, доксициклин). Данные записать в протокол.
7.
Оформить протокол, сделать выводы.
6.
Автор:
доцент, к.м.н. Вовк И. Н.
Методическая разработка
по подготовке и работе на лабораторном занятии №28
для студентов стоматологического факультета
Тема: Возбудители зоонозов – чумы, туляремии, сибирской язвы. Морфология и
биологические свойства. Микробиологическая диагностика заболеваний.
Актуальность темы.
Чума и туляремия - особенно-опасные зоонозные инфекции, природные очаги которых
существуют почти на всех континентах. На Украине выявлены природные очаги циркуляции
возбудителя туляремии среди диких грызунов. Несмотря на низкую вирулентность европейских
штаммов возбудителя, заболевание может иметь тяжелое течение у ослабленных лиц, поэтому
своевременная лабораторная диагностика туляремии позволяет скорректировать лечение и
избегнуть летальных исходов.
Учитывая быстрое развитие туризма, существует вероятность заболевания чумой среди
людей, побывавших в устойчивых природных регионах циркуляции возбудителя в тропических
странах, где ежегодно регистрируются десятки случаев заболевания этой особо-опасной
инфекцией среди людей. Так, последняя вспышка инфекции была зарегистрирована в 1997 г. в
Индии, когда заболело более 800 лиц. Быстрое эпидемическое распространение инфекции можно
предупредить только строжайшими противоэпидемическими мероприятиями, для внедрения
которых необходимо лабораторно подтвердить диагноз. Таким образом, информация о
биологических свойствах возбудителя заболевания не теряет своей актуальности и сегодня.
3.2.
Цели изучения темы.
3.2.1.
Цель общая: изучить биологические свойства возбудителя туляремии и патогенных
йерсиний, знать особенности микробиологической диагностики этих заболеваний, основные
противоэпидемические мероприятия в очаге возникновения особо-опасных зоонозов
3.2.2.
Цель конкретная:
3.2.2.1.
Знать дифференцирующие биологические свойства патогенных йерсиний
3.2.2.2.
Усвоить идентификационные критерии патогенных францисел.
3.2.2.3.
Знать и уметь правильно избрать метод для предварительной и окончательной
микробиологической диагностики чумы, туляремии, пищевых йерсиниозов.
3.2.2.4.
Знать основные профилактические мероприятия в очаге чумы и туляремии, показания к их
внедрению; знать специфические и неспецифичные профилактические препараты, которые
применяют при вспышке инфекции.
3.2.2.5.
Усвоить основные противоэпидемические мероприятия при вспышках особенно-опасных
инфекций.
3.3.
Обеспечение исходного уровня знаний-умений.
6.
Общая характеристика семейства энтеробактерий, морфологические и культуральные
свойства.
7.
Дифференциально- диагностические среды для выделения возбудителей кишечных
инфекций.
8.
Специальные питательные среды, характеристика факторов роста для требовательных к
условиям культивирования микроорганизмов.
9.
Этапы бактериологического метода диагнстики.
10.
Механизмы и пути передачи возбудителей инфекционных заболеваний.
3.1.
71
Понятие о микробных аллергенах. Методы определения гиперчувствительности
клеточного типа на микробные аллергены, значение аллергического метода в лабораторной
диагностике инфекционных заболеваний.
12.
Серологический метод диагностики инфекций, особенности забора материала, основные
серологические реакции.
3.4.
Содержание обучения.
3.4.1.
Граф логической структуры содержания:
1.Таксономия патогенных для человека йерсиний и франциселл
Семейство Enterobacteriaceae
Виды: Y.pestis,
Род Yersinia
11.
Семейство Brucellaceae
Род Francisella
Виды: F.tularensis
4.
Общая характеристика патогенных для человека йерсиний и францисел
Морфология:
Условия культивирования:
Патогенные йерсинии:
Y.pestis – Грамм (–) полиморфные палочки
овоидной формы, окрашиваются биполярно.
Неподвижные, не образуют спор, но образуют
капсулу (в организме человека и животных)
Патогенные йерсинии:
Y.pestis : Факультативные анаэробы;
Оптимальная температура 18-370С;
Оптимальная температура для культивирования
других йерсиний- 22-280С
Нетребовательны к составу питательной среды;
Для быстрого роста культивируют на
специальных или селективных средах
Francisella tularensis:
Francisella tularensis:
Мелкие полиморфные Грамм (-) коккобактерииОблигатные аэробы, ауксотрофы, требовательны к
или палочки; неподвижные; не образуют спор; составу питательной среды (нуждаются в
имеют нежную капсулу
добавлении экстрактов из органов и тканей,
цистина, глюкозы, яичного желтка)
Очень медленно растут на питательных средах,
особенно в первых генерациях
5.
Виды
Y.pestis
F. tularensis
Культуральные свойства йерсиний и францисел
Среды для культивирования
Характеристика роста
1. МПА, МПБ;
1. Образуют R-формы колоний на МПА:
2. Среда Туманского,
через 10-12 ч - “юная колония” - стадия “битого
цистеиновий агар
стекла”;
(специальные)
через 18-24 ч - “зрелая колония” - “смятый
кружевной платок” - бледно-серый
уплотненный центр, прозрачный нежный
край;
через 48 ч - “старая колония” («ромашка») центр коричневого цвета, края бледно-серые,
кружевные
2. На МПБ - R- форма
а) белые хлопья на дне пробирки
б) пленка на поверхности, от которой вниз
опускаются нитевидные отростки
(“сталактиты”)
Селективные среды
Колонии появляются через 2-5 суток;
1. Свернутая яично-желочная S-формы ( мелкие, выпуклые).
среда Маккоя и Чепина
2. Кровяной, рыбно-дрожжевой
агар с глюкозой и цистином.
72
Антигенная структура и факторы патогенности
Антигенная структура
Факторы патогенности
1. К-антиген
1. Адгезины - капсула, пили
2. О-антиген
2.Ферменты патогенности- гемолизы, фибриноли-зин,
3. Протективные антигены:
плазмокоагулаза
V и - W -антигены
3. Перекрестно-реагирующие антигены
4. Перекрестно-реагирующие АГ 4. Аллергены (формируют ГЧЗТ)
5. Экзотоксин -“мышиный токсин”
6. Эндотоксин
7. Антифагоцитарные факторы: капсула, протективные
антигены, аденилатциклаза
6.
Виды
Y.pestis
F. tularensis 1.О-АГ (соматический)
2.Vі-АГ (протективный)
3. Аллергены
Механизм и
пути
передачи
заболевания
1.трансмиссивн
ый
2.воздушнопылевой
3.воздушнокапельный
4.контактный
5.алиментарный
Переносчи-ки
- блохи
Механизм и
пути
передачи
заболевания
1.трансмиссивн
ый
2.воздушно-
Источник
инфекции
дикие,
синантроп
ные и
домашние
животные
(около 300
видов);
больной
легочной
формой
человек
Источник
инфекции
1. Капсула
2. Протективный антиген
3. Эндотоксин
4.. Аллергены
7.
Краткая характеристика чумы
Формы
Основные
Иммунитет
заболевания
клинические
признаки
Инкубационн
ый период 1-3 суток
Патогенетические
формы:
1.Бубонная
2. Кожнобубонная
3. Кожная
4. Кишечная
5. Легочная
6.Первичносептическая
7. Вторичносептичес-кая
-выраженная Стойкий,
интоксика- Длительный
ция;
Антибактериаль
-специфичес- ный
кое воспале- Антитоксически
ние реґионар- й
ных лимфа- Клеточный
тических уз(ГЧЗТ)
лов (бубон);
- геморрагический понос
(ки-шечная
фор-ма);
-кашель, выделение
большого
количества
мокроты,
быстрое развитие отека
легких;
- редко:
появление
пустулы в
месте укуса
блохи
5. Краткая характеристика туляремии
Патогенетическ Основные
Иммунитет
ие формы:
клинические
признаки
дикие,
1.Глазносинантропн бубонная
ые
2. Кожно-
-первичный Стойкий,
аффект в
Длительный
месте укуса Антибактериаль
Профилак-тика
Лабораторна
диагностика
Неспецифическая
конвенционная и
этиотропная
антибактериальная
(стрептомицин)
Специфическая (только в
постоянных
очагах чумы):
Живая EV
вакцина;
Ускоренная:
Микроскопия
( окрашенных
препаратов,
иммунофлюо
ресцентная)
Профилактика
Лабораторна
я
диагностика
Специфическая (только в
постоянных
Ранняя:
Аллергическая проба
Основная:
Бактериологический
Биологичес-к
Вспомогательная:
(ретроспекти
ая)
Серологический;
аллергически
73
пылевой
3.контактный
5.алиментарный
Переносчики
- клещи
9.
10.
11.
12.
13.
14.
15.
16.
17.
4.
5.
6.
7.
1.5.
грызуны,
насекомоядные
(около 300
видов);
бубонная
3. Ангиноз-ная
4. Кишечная
5. Легочная
6.Первичносептичес-кая
клеща;
ный
интоксикация;Клеточный
-специфи(ГЧЗТ)
ческое
воспаление
регионарных
лимфатических узлов
(бубон);
- понос
(кишечная
форма);
-кашель,
одышка;
-симптомы
ангины
-конъюнктивит
очагах
туляремии):
Живая вакцина
ГайскогоЭльберта;
Основная:
Биологическая проба,
Бактериолог
ический
метод
Серологичес
кий метод
1.4.2. Перечень теоретических вопросов.
1. Биологические свойства возбудителя туляремии, особенности его выделения из исследуемого
материала.
2. Патогенность возбудителя туляремии для человека, механизмы заражения, патогенез,
иммунитет.
3. Методы лабораторной диагностики туляремии.
4.
Биологическая характеристика возбудителя чумы и других патогенных для человека
йерсиний.
5. Эпидемиология, патогенез и иммунитет при заболеваниях, вызванных патогенными
йерсиниями.
6. Методы микробиологической диагностики чумы.
7. Специфическая профилактика и основные противоэпидемические мероприятия в очаге
возникновения чумы и туляремии.
1.4.3. Источники учебной информации.
Литература (основная):
К.Д.Пяткин, Ю.С.Кривошеин. Микробиология, М., 1980. Стр. 279-284, 297-301.
В.Д.Тимаков.Микробиология, 1983. Стр.293, 296-297, 311-313.
А.И.Коротяев, С.А.Бабич. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология,
Санкт-Петерб.,2002. Стр.355-361, 364-367.
И.Л.Дикий, И.Ю.Холупяк, Н.С.Шевелева, М.Ю.Стегний. Микробиология, Харьков, 1999.
Стр.247-250, 254-258.
Микробиология. Руководство к лабораторным занятиям. Под ред. И.Л.Дикого, Харьков,
1999. Стр.294-297, 301-304.
Л.Б.Борисов. Руководство к лабораторным занятиям по микробиологии, 1984. Стр.198-204.
Л.Б.Борисов. Медицинская микробиология, вирусология,иммунология, М., 2002. Стр.426428.
Ю.С.Кривошеин. Руководство к практическим занятиям по микробиологии, 1973. Стр.118125.
М.Н.Лебедева. Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии. Г.,
1973. Стр. 211-220.
Литература (дополнительная):
Словарь по микробиологии, вирусологии, иммунологии и инфекционным заболеваниям.
Общая ред.. Г.К.Палий, К., 2004.
Б.Л.Черкасский. Особо опасные инфекции, М.: «Медицина», 1996. Стр.35-38, 44-50.
А.Н.Маянский. Микробиология для врачей, Н.Новгород: НГМА, 1999. Стр.176-180.
Лекционный материал.
Ориентировочная основа действия (ОДД)
74
Схема микробиологической диагностики туляремии
Методы диагностики для проведения в
Методы лабораторной диагностики, которые
лабораториях особо-опасных инфекций
можно проводить в обычных лабораториях
7.1.1.1.
Биологический
1.
Серологический
7.1.1.2.
Бактериологический
2.
Аллергический (ранняя)
Материал для исследования: пунктат из бубонов, гной из язв, конъюнктивы, кровь, мокрота,
секционный материал.
Бактериологическое исследование :
- заражение белых мышей или морских свинок материалом от больного
- через 5-14 суток вскрытие погибших животных;
- микроскопическое исследование мазков-отпечатков внутренних органов, брюшного
экссудата, пунктата лимфатических узлов (окраска по Грамму, Романовському-Гимзе).
- посев выше указанного материала на яично-желочную среду Маккоя-Чепина или на
глюкозо-цистиновый кровяной агар Френсиса;
- идентификация выделенной культуры по морфологии, культуральным, биохимическим
признакам и антигенной структурой (РА с видовой О-сывороткой).
Материал для исследования: сыворотка крови
Серологический метод
- ускоренный ориентировочный метод – кровяно-капельная реакция агглютинации
- РА (с 10-12 дня); диагностический титр 1:100
-РНГА (ранняя серологическая диагностика, ретроспективная, определение поствакцинального
иммунитета); диагностический титр 1:1280
-непрямая РИФ (ретроспективная диагностика, состояние после вакцинации, диагностика
заболевания); диагностический титр 1:400
Аллергическая проба с тулярином (ранняя диагностика) - положительная с 3-5 дня заболевания
Схема микробиологической диагностики чумы (проводят в специализированных
лабораториях)
Материал для исследования: выделения из язвы, пунктат из бубона, кровь, фекалии, мокрота
(зависит от формы инфекции); секционный материал
Бактериоскопический метод: (предварительная диагностика)
- мазок, окраска по Грамму
-мазок, окраска по Леффлеру
- прямая РИФ
Бактериологический метод:
-посев материала в флаконы с 50-100 мл МПБ, на МПА, на среду Туманского, цитратный
дезоксихолевый агар
-исследование колоний через 10-12 ч., через 18-20ч. учет типичного роста в МПБ (мазок, окраска
по Грамму, Леффлеру)
-пересев изолированных колоний на скошенный агар
-через 24 ч. идентификация чистой культуры:
-РА с диагностической О-сывороткой
- РП с диагностической К-сывороткой
- проба на фаголизабельность чумным бактериофагом (метод стекающей капли)
- определение сахаролитических свойств на средах Гисса (дифференциация йерсиний см.ниже)
Биологический метод
- заражение морских свинок или белых мышей (подкожно, внутрибрюшинно, накожно)
- исследование животных погибших через 2-3 дня (зараженные внутрибрюшинно) или
через 5-7 дней:
-мазки из внутренних органов;
- высев крови на питательные среды, выделение чистой культуры, идентификация
Серологический метод (ретроспективная диагностика)
Материал для исследования: сыворотка крови
-РНГА; диагностический титр 1:40
Аллергическая проба с пестином (определение поствакцинального иммунитета,
ретроспективная диагностика)
75
Ускоренные методы диагностики ( базируются на определении антигенов возбудителя в
материале): -РИФ;
-РНГА с антительным эритроцитарным диагностикумом;
- реакция кольцепреципитации по типу Асколи;
- определение фаголизиса культуры противочумным бактериофагом.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
1.7. Краткие методические указания для работы студентов на лабораторном занятии.
1.7.1. Методика проведения занятия.
Промикроскопировать демонстрационные препараты франциселл, патогенных йерсиний.
Микроскопическую картину зарисовать.
Поставить реакцию кольцепреципитации по типу Ассколи с целью выявления туляремийного
преципитиногена в исследуемом материале.
Провести учет демонстрационного опыта фаголизиса методом «стекающей капли», который
используется для ускоренной диагностики чумы.
Учесть результаты развернутой РА с парными сыворотками больного туляремией в
демонстрационном опыте, сделать выводы.
Учесть результаты РПГА с парными сыворотками больного и эритроцитарными
диагностикумами йерсиний псевдотуберкулеза и энтероколита. Сделать выводы.
Изучить иммунобиологические препараты для диагностики и профилактики заболеваний,
вызванных патогенными йерсиниями и франциселлами.
Ознакомиться с антибиотиками, которые используют для экстренной профилактики и
этиотропного лечения чумы и туляремии.
Оформить протокол, сделать выводы.
Автор:
доцент, к.м.н. Вовк И. Н.
Продолжение
Актуальность темы.
Заболевание сибирской язвой спорадично возникают среди животных (последний случай на
Украине зарегистрирован в Николаевской области в 2003 году) и могут распространяться среди
людей благодаря продолжительному сохранению спор сибирской язвы в окружающей среде.
Угроза заболевания сохраняется в связи с существованием на территории каждой области
скотомогильников. Исходя из этого, будущие врачи должны знать основные проявления
инфекции, биологические свойства возбудителя, которые позволят поставить предварительный
диагноз, а также тактику проведения лабораторной диагностики и правила отбора материала при
подозрении на сибирскую язву.
Цели изучения темы.
Цель общая: усвоить основные биологические свойства патогенных для человека бацилл,
ориентироваться в выборе методов лабораторной диагностики этих зоонозных заболеваний, знать
основные профилактические мероприятия в очаге заболевания.
Цель конкретная:
Усвоить признаки возбудителя сибирской язвы.
Уметь правильно выбрать метод лабораторной диагностики, определиться с материалом, который
необходимо взять у больного, для каждого конкретного метода.
Усвоить этапы микробиологической диагностики сибирской язвы.
Уметь поставить реакцию термопреципитации по Асколи для проверки животноводческого сырья
на предмет контаминации спорами возбудителя сибирской язвы.
Уметь проводить экспресс-диагностику сибирской язвы с помощью микроскопии.
Знать основные противоэпидемические и профилактические меры по предупреждению
распространения заболевания в очаге.
Обеспечение исходного уровня знаний-умений.
1.
Значение спорообразования у бактерий, методы окраски спор, чувствительность спор к
действию неблагоприятных физико-химических факторов.
2.
Серологический метод диагностики инфекционных заболеваний, материал для
исследования, реакции для обнаружения специфических антибактериальных иммуноглобулинов.
76
Реакция кольцепреципитации, методика постановки, применение в диагностике
инфекционных заболеваний.
4.
Факторы вирулентности бактерий.
5.
Этапы бактериологического метода диагностики.
6.
Выявление аллергии на микробные антигены, значение в лабораторной диагностике.
7.
Живые вакцины, характеристика, особенности применения.
7.2.
Содержание обучения.
7.2.1.
Граф логической структуры содержания:
1.Таксономия патогенных для человека бруцелл и бацилл
Семейство Bacillaceae
Виды: B. anthracis - возбудитель сибирской язвы
Род Bacillus
Условно-патогенные: B.subtilis , B.cereus,
B.megaterium
3.
Морфология
Условия культивирования, среды, признаки роста
Патогенные бациллы:
Патогенные бациллы:
Грамм (+) стрептобациллы с обрубленными
Факультативные анаэробы;
концами
Оптимальная температура 370С;
Неподвижные
Неприхотливы, культивируются на МПА, МПБ
Образуют капсулу (только в организме человека На МПА - образуют R-формы колоний (“львиная грива”,
или животных)
“голова Медузы”)
В окружающей среде образуют спору, центрально На МПБ - образуют осадок в виде хлопьев или кусочков
расположенную
ваты, бульон прозрачный.
Под действием пенициллина образуют L-формы В столбике желатина - рост, который напоминает
(“жемчужное ожерелье”)
“перевернутую” елку
8.
Общая характеристика патогенных для человека бруцелл и бацилл
3.
Антигенная структура и факторы патогенности
Виды
Антигенная структура
Факторы патогенности
1. Капсульный (К-АГ) 1. Капсула
Bacillus anthracis
полипептидный, термолабильный.
2. Экзотоксин.
2. Соматический (О-АГ) Состоит из 3 фракций:
полисахаридный, термостабильный.1)
Протективный антиген
3. Протективный АГ - термолабильный2, )
Летальный фактор
одна из фракций экзотоксина.
3)
Отечный фактор
Механизм и пути
передачи
заболевания
Контакт-ный
трансмиссивный;
Аэроген-ный
Фекальнооральный
Пути:
Контакт-ный
Воздушнопылевой;
Алиментарный
Факторы
передачи:
Животновод
ческое сырье
Источник
инфекции
Крупный
рогатый
скот;
мелкий
рогатый
скот; парнокопитные
(травоядные);
свиньи
Формы
заболевани
я/
инкубацион
ный период
Инкубацио
нный
период2-3 дня.; до
8 дней
Формы:
Кожная;
Легочная;
Кишечная
Септическая
Основные
клинические
признаки
Иммунитет
Профилакти-ка
Лабораторная
диагностика
Кожная:
Карбункул с
черным
струпом;
лимфаденит
Легочная:
Пневмония с
быстрым
развитием
отека
Кишечная:
Геморрагический колит
Септическая:
Выраженная
Стойкий
Напряженный
Гуморальный
Клеточный
Формируется состояние
ГЧЗТ
Неспецифичес
кая
(ликвидация
заболевания
среди
животных,
обследование
профессиональных групп,
проверка
сырья)
Специфическа
я - живая
вакцина СТИ
(безкапсульный штамм
Ранняя:
Бактериоскопия
Основная:
Бактериологический метод
Ретроспективная:
Серологический
Аллергический
Дополнительный
метод:
Биологический
77
(кожа, мех );
Продукты
животноводс
тва (молоко,
мясо)
1.4.2.
1.
2.
3.
4.
18.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
1.
2.
3.
1.4.
a.
b.
c.
i.
ii.
iii.
1.
2.
3.
4.
интоксикация,
симптомы
ИТШ
B.anthracis)
4.
Краткая характеристика сибирской язвы
Перечень теоретических вопросов.
Морфология и биологические свойства возбудителя сибирской язвы, дифференцирующие
признаки патогенных и условно-патогенных бацилл.
Эпидемиология и патогенез сибирской язвы. Особенности иммунитета.
Микробиологическая диагностика сибирской язвы: предварительная, основная,
ретроспективная. Методы определения загрязненности животноводческого сырья спорами
сибирской язвы (РИФ, реакция кольцепреципитации).
Специфическая профилактика и лечение сибирской язвы.
Источники информации.
Литература (основная):
К.Д.Пяткин, Ю.С.Кривошеин. Микробиология, М., 1980. Стр. 291-297, 308-316.
В.Д.Тимаков. Микробиология, 1983. Стр. 307-311, 318-322.
А.И.Коротяев, С.А.Бабич. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология,
Санкт-Петерб.,2002. Стр. 361-364, 367-370.
И.Л.Дикий, И.Ю.Холупяк, Н.С.Шевелева, М.Ю.Стегний. Микробиология, Харьков, 1999.
Стр.250-254, 258-263.
Микробиология. Руководство к лабораторным занятиям. Под ред. И.Л.Дикого, Харьков,
1999. Стр.297-301,304-307.
Л.Б.Борисов. Руководство к лабораторным занятиям по микробиологии, 1984. Стр. 204211.
Л.Б.Борисов. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология, М., 2002. Стр 423426, 446-448.
Ю.С.Кривошеин. Руководство к практическим занятиям по микробиологии, 1973. Стр.
125-132, 143-147.
М.Н.Лебедева. Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии. Г.,
1973. Стр.220-225, 310-312.
Литература (дополнительная):
Словарь по микробиологии, вирусологии, иммунологии и инфекционным болезням.
Общая ред.. Г.К.Палий, К., 2004.
Б.Л.Черкасский. Особо опасные инфекции, М.: «Медицина», 1996. Стр. 21-25, 31-35.
Лекционный материал.
Ориентировочная основа действия (ОДД)
Схема микробиологической диагностики сибирской язвы
Материал для исследования зависит от формы инфекции: содержимое карбункула, везикул
(кожная форма); мокрота (легочная форма); испражнения (кишечная форма); кровь (септическая
форма).
Бактериоскопический метод (предварительная диагностика)
мазки по Грамму,
мазки по Романовському-Гимзе.
РИФ.
Бактериологический метод (окончательная диагностика)
посев материала на МПА, кровяной агар, в МПБ;
через 18-20 ч. подозрительные колонии пересевают на скошенный агар;
идентификацию чистой культуры проводят на основании результатов :
биологической пробы (заражение белых мышей, определение в мазках-отпечатках
капсулированных бацилл)
теста «жемчужного ожерелья» (высев в среду с пенициллином, где возбудитель сибирской язвы
образует L-формы);
фаголизабельность сибиреязвенным бактериофагом;
способности образовывать капсулу на средах с добавлением природного белка (сывороточный
агар)
78
5. отсутствия гемолитической активности;
6. отсутствия подвижности
Дифференционные признаки бацилл
Признак или тест
B.anthracis
B.anthracoides
B.subtilis
B.megaterium
B.cereus
Капсула
+
Патогенность для белых
+
мышей
Лизис специфическим
+
фагом
Тест «жемчужного
+
ожерелья»
РИФ с
+
антисибиреязвенной
сывороткой
Подвижность
+
+
+
+
Гемолиз
+
+
лецитиназа
+
+
+
+
Фосфатаза
+
+
+
+
Биологический метод – материалом от больного подкожно заражают белых мышей; животные
гибнут через 1-2 дня после введения материала; во внутренних органах обнаруживают
возбудители с типичной морфологией
Методы для ретроспективной диагностики или определения поствакцинального иммунитета:
Аллергический метод – постановка внутрикожной пробы с антраксином
Серологический метод:
Материал для исследования: сыворотка крови
РСК, РНГА, ИФА , реакция коагглютинации с сибиреязвенным антигеном
Методы для определения антигенов сибиреязвенных бацилл в материале, животноводческом
сырье, и т.п..
Серологическая диагностика: Реакция термокольцепреципитации по Асколи
1.7. Краткие методические указания для работы студентов на лабораторном занятии.
1.7.1. Методика проведения занятия.
1. Изучить морфологию возбудителя сибирской язвы в демонстрационных препаратах,
окрашенных по Грамму, Цилю-Нильсену, Бурри-Гинсу. Микроскопическую картину
зарисовать.
2. Провести визуальное и стереомикроскопическое исследование R-форм колоний антракоидов
на кровяном агаре.
3. Поставить реакцию кольцепреципитации по типу Асколи , учесть результаты, внести в
протокол сведения о цели применения реакции.
4. Ознакомиться с препаратами, которые используют для диагностики, лечения и профилактики
сибирской язвы. Данные внести в протокол.
5. Оформить протокол, сделать выводы.
Автор: доцент, к.м.н. Вовк И. Н.
Методическая разработка
по подготовке и работе на лабораторном занятии №29
для студентов стоматологического факультета
Тема: Возбудители анаэробных инфекций – столбняка, ботулизма. Морфология и
биологические свойства. Микробиологическая диагностика заболеваний.
1.1. Актуальность темы. Несмотря на то, что ботулизм регистрируется намного реже других
79
кишечных заболеваний, значимость этой инфекции, учитывая тяжелое течение и высокую
смертность, остается актуальной. Столбняк по определению ВОЗ является контролируемой
инфекцией, заболеваемость которой можно предупредить эффективной иммунизацией. К
сожалению, раневой столбняк и столбняк новорожденных продолжает уносить жизни около 1 млн.
людей ежегодно. Для эффективной профилактики и терапии этих клостридиозов будущим врачам
необходимо знать биологические особенности возбудителей, пути передачи инфекции и
особенности патогенеза заболеваний. Лабораторная диагностика заболеваний позволит
своевременно распознать заболевание и провести специфическую терапию.
1.2. Цели изучения темы.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
1.3.
1.3.1.
Цель общая: усвоить основные биологические свойства возбудителей столбняка и ботулизма,
принципы лабораторной диагностики, специфической профилактики и лечения инфекций.
Цель конкретная:
Усвоить основные биологические свойства клостридий, условия
спорообразования и прорастания спор.
Знать механизмы действия нейротоксинов возбудителей столбняка и
ботулизма.
Уметь правильно выбрать метод лабораторной диагностики столбняка и
ботулизма (предварительная и окончательная диагностика)
Знать пути проникновения клостридий в организм человека, условия для
возникновения инфекций.
Уметь правильно назначить препараты для экстренной профилактики
столбняка и ботулизма; знать схему иммунизации детей столбнячным анатоксином для плановой
профилактики столбняка.
Знать препараты для специфической терапии столбняка и ботулизма.
Содержание обучения.
Граф логической структуры содержания:
1.Таксономия возбудителей столбняка и ботулизма
Семейство Bacillaceae
Род Clostridium
Виды
C.tetani- возбудитель столбняка
C.botulinum – возбудитель ботулизма
(рановой клостридиоз)
(энтеральный клостридиоз)
2.
Морфо-биологическая характеристика возбудителей столбняка и ботулизма
Морфология
Условия культивирования, среды, признаки роста
Общая характеристика:
(общая характеристика)
Грамм-положительные
Облигатные анаэробы;
спорообразующие палочки,
оптимальное рН 7,2-7,6;
которые во время споруляции
Культивируют на специальных средах для анаэробов:
имеют веретенообразную форму;
среда Китта-Тароцци, кровяно-сахарный агар Цейсслера,
Не образуют капсулу;
среда Вильсон-Блера
Малоподвижные перитрихи
Оптимальная температура культивирования +30-370С
C.tetani
Грамм (+) тонкая палочка (0,3Образуют R-формы колоний на плотных средах.
0,8x4-8 мкм);
В среде Китта-Тароцци дает диффузное помутнение без
образует терминально
газообразования.
расположенную сферическую
На агаре Цейсслера образует серовато-белые колонии с
спору ( “барабанные палочки” );
компактным центром, окруженные зоной гемолиза;
Способны к ползучему росту и образованию тонкого
полупрозрачного слоя на поверхности агара
Имеет слабые протеолитические и сахаролитические
свойства: медленно свертывают молоко (на 4-5 сут.),
разрежают желатин, некоторые штаммы ферментируют
глюкозу.
80
C.botulinum
короткая Грамм-положительная
палочка, образует овальную
субтерминально расположенную
спору («теннисная ракетка»)
Виды
C.tetani
C.botulinum
Антигенная структура
1. видовой О-Аг
2. типоспецифический Н-Аг (13
серотипов);
3. Экзотоксин (одинаковый по
специфичности у всех
серотипов)
Факторы патогенности
3.
Экзотоксин.
Имеет 2 фракции: тетаноспазмин (нейротоксин) и
тетанолизин (мембранотоксин, гемолизин)
Механизм действия нейротоксина: угнетение
выделения тормозящих нейромедиаторов в
синапсах вставочных нейронов ЦНС
1. Экзотоксин
(типоспецифический Аг);
Виделяют 8 сероваров (А, В,
С1, С2, D, E, F )
2.
О-Аг
3.
Н-Аг
5.
4.
Оптимальная температура культивирования +25-300С
Образует R-форму колоний (в виде капелек росы),
На средах с кровью колонии в виде «отпечатков пальцев»,
окруженные зонами гемолиза.
На среде Китта-Тароцци образует помутнение и осадок.
Серотипы A,B, F имеют более выраженные
протеолитические свойства;
Серотипы C,D.E проявляют сахаролитические свойства,
протеолитические не выражены
1.
Экзотоксин- ботулотоксин ( у некоторых
серотипов выделяется в виде протоксина,
активируется протеолитическими ферментами)
Механизм действия: нейротоксин, который
связывает ацетилхолин в нервно-мышечных
синапсах центральной, вегетативной и
периферической нервной системы
Антигенная структура и факторы патогенности
Эпидемиология, патогенез и лабораторная диагностика столбняка
Столбняк – острая токсичная раневая инфекция, которая вызывается нейротоксином C. tetani, и
проявляется судорогами скелетных мышц и периодическими генерализованными судорогами.
Механизм и
пути
передачи
заболевания
Контактный
Факторы
передачи:
инородные
тела в ране;
Нестерильны
й
инструментар
ий, и т.п.
Источник
инфекции
Животные,
человек
(клостридии постоянные
комменсалы
ЖКТ людей и
животных)
Патогенез
Формы
заболевания
/ инкуб.
период
1.Попадание
Инкубацион
спор в рану
ный период
2.проростани - от 2 до 14
е спор в
суток.
анаэробных
Формы:
условиях
-раневой
3. Фиксация
столбняк;
экзотоксина в -столбняк
мышечноноворожден
нейронных
ных;
синапсах
- после4. Ретрородовой
градный
столбняк;
аксональный
- крипттранспорт
генный
токсина в
столбняк.
ЦНС
5.Фиксация в
синапсах
тормозящих
Основные
клинические
признаки
Иммунитет
Профилактика
Лабораторная
диагностика
Подергивание
в области
раны;
Развитие
вегетативных
нарушений;
Тризм;
развитие
судорог по
нисходящемут
ипу;
Опистотонус;
паралич
Постинфекционный,
Антибактериальный
Антитоксический,
Слабо
напряженный,
Непродолжительный.
Неспецифичес
кая
Хирургическая
обработка
раны, удаление
чужеродных
тел, сгустков
крови;
соблюдение
асептики при
хирургических
вмешательствах
Специфическая:
1) плановая:
иммунизация
детей АКДС,
АДС;
2) экстренная:
Осуществляется редко
Основные
методы:
1. Бактериоскопичес-кий
2.
Биоло
гическая
проба
(реакция
нейтрализации на
белых
мышах)
3.
Бактериологический (посев
по Филдсу)
4.
Серологический
81
нейронов,
связывание
медиаторов
5.
-активная
(анатоксин);
-активнопассивная
(анатоксин +
сыворотка;
Пассивная
(антитоксическая сыворотка)
(определение тетаноспазмина в
материале с
помощью
ИФА, РНГА
Эпидемиология, патогенез и лабораторная диагностика ботулизма
Ботулизм – острое инфекционное заболевание, обусловленное специфическим действием
нейротоксина С. botulinum , которое характеризуется развитием прогрессирующих вялых
Механизм и
пути
передачи
заболевания
Алиментарн
ый
Факторы
передачи:
Консервиров
анные
продукты,
мясные
изделия;
Вяленная,
копченая,
соленая
рыба
Патогенез
Формы
заболевани
я/инкуб.
период
Инкубацио
нный
период - от
2 часов до
10 суток
Формы:
1) гастроинтестинальная;
2) раневой
ботулизм;
3)
ботулизм
новорожденных
Основные
клинические
признаки
Экзотоксин
Симптомы
накапливает
пищевой
ся в
токсикоинпродуктах,
фекции +
при
неврологическ
попадании в
ие нарушения
желудок
со стороны
может
двигатель-ных
активироЧМН
ваться
(нарушение
протеолитиглотания,
ческими
птоз, глазные
ферментами
симптомы)
;
Вегетатив-ные
Всасывание
нарушения
в кровь;
Фиксация в
нервномышечных
синапсах;
транспорт к
ЦНС
параличей и гастроинтестинального синдрома
1.4.2.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
Иммунитет
Профилактика
Лабораторная
диагностика
Постинфекционный,
Антибактериальный
Антитоксический,
Слабо
напряженный,
Непродолжительный.
Неспецифическая:
Контроль за
изготовлением
консервированных продуктов;
Специфическая
экстренная:
1) активная
(редко);
2) пассивная
(поливалентная
антитоксическая
вакцина)
1)Бактериоскопический метод
2)Биологическая проба
3)Бактериологический метод
4)Серологический метод для
выявления
ботулотоксина в
пищевых
продуктах,
материале от
больного (ИФА,
РНГА)
Перечень теоретических вопросов.
Морфобиологическая характеристика патогенных клостридий, значение в
патологии человека.
Морфология, культуральные, вирулентные свойства возбудителя столбняка.
Характеристика токсина, механизм действия.
Принципы лабораторной диагностики столбняка.
Специфическая профилактика и лечение столбняка.
Морфология, культуральные, вирулентные свойства возбудителя ботулизма.
Характеристика токсинов, антигенные свойства, механизм действия.
Микробиологическая диагностика ботулизма.
Специфическая профилактика и терапия ботулизма. Характеристика
иммунобиологических препаратов.
Реакция нейтрализации, методика определения экзотоксинов патогенных
клостридий.
82
1.4.3.
Источники учебной информации.
Литература (основная):
К.Д.Пяткин, Ю.С.Кривошеин. Микробиология, М., 1980. Стр. 316-322, 329-333.
В.Д.Тимаков.Микробиология, 1983. Стр. 330-336.
А.И.Коротяев, С.А.Бабич. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология, СанктПетерб.,2002. Стр.427-435.
И.Л.Дикий, И.Ю.Холупяк, Н.С.Шевелева, М.Ю.Стегний. Микробиология, Харьков, 1999. Стр.291297.
Микробиология. Руководство к лабораторным занятиям. Под ред. И.Л.Дикого, Харьков, 1999.
Стр.308-310, 314-316,317-319.
Л.Б.Борисов. Руководство к лабораторным занятиям по микробиологии, 1984. Стр. 193-198, 148149.
Л.Б.Борисов. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология, М., 2002. Стр. 453-455.
Ю.С.Кривошеин. Руководство к практическим занятиям по микробиологии, 1973. Стр. 150-154.
М.Н.Лебедева. Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии. Г., 1973.
Стр.270-276.
Литература (дополнительная):
Словарь по микробиологии, вирусологии, иммунологии и инфекционным заболеванием. Общая
ред.. Г.К.Палий, К., 2004.
Б.Л.Черкасский. Особо опасные инфекции, М.: «Медицина», 1996. Стр. 50-56.
А.Н.Маянский. Микробиология для врачей. Н.Новгород, 1999. Стр.139-153.
Лекционный материал.
1.5.
Ориентировочная основа действия (ОДД)
Схема микробиологической диагностики столбняка
Материал для исследования: раневое содержимое, екссудат, некротизованные ткани, тампоны
из раны, при родовом столбняке – выделения и биоптаты из матки, вагины; при столбняке
новорожденных – выделение из пупка
Бактериоскопический метод (предварительная диагностика):
Мазок, окраска по Грамму (клостридии в виде «барабанных палочек)
Иммунофлюоресцентная микроскопия
Бактериологический метод
Материал прогревают при 800С на протяжении 20 мин;
Высев материала на среду Китта-Тароцци или в конденсационную воду скошенного кровяного
агара по Филдсу;
Инкубация 48-72 ч., пересев на кровяной агар Цейсслера;
Инкубация 24-48 ч, изолированные колонии пересевают на Китта-Тароцци;
Инкубация 24-48 ч.
Идентификация чистой культуры на основании:
Морфологии, культуральных свойств;
Ферментативных признаков;
Результатов биологической пробы (реакция нейтрализации)
Методы для определения нейротоксина клостридий столбняка в исследуемом материале
Биологический метод (реакция нейтрализации)
введение смеси фильтрата материала ( или жидкой культуры) и антитоксической сыворотки,
предварительно выдержанной в термостате 30-40мин. (экспериментальная мышь)
введение фильтрата материала без антитоксической сыворотки (контрольная мышь);
учет результатов биологической пробы через 4-5 суток
Серологический метод:
определение тетаноспазмина с помощью РНГА с антительным эритроцитарным диагностикумом;
выявление токсина с помощью ИФА
1)
2)
3)
4)
5)
6)
a.
b.
c.
iv.
v.
vi.
vii.
viii.
Схема микробиологической диагностики ботулизма
Материал для исследования: промывные воды желудка, рвотные массы, кровь, остатки пищевых
продуктов
Бактериоскопический метод (предварительная диагностика):
83
1.
2.
3.
4.
5.
i.
ii.
iii.
ix.
x.
xi.
xii.
xiii.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
Мазок из остатков пищевых продуктов, окраска по Грамму (клостридии в виде «теннисных
ракеток»)
Бактериологический метод
Материал прогревают при 800С на протяжении 20 мин;
Высев материала на среду Китта-Тароцци; инкубация 48-72 ч.,
пересев на кровяной агар Цейсслера; инкубация 24-48 ч.
изолированные колонии пересевают на Китта-Тароцци; инкубация 24-48 ч.
Идентификация чистой культуры на основании:
Морфологии, культуральных свойств;
Ферментативных признаков;
Результатов биологической пробы (реакция нейтрализации) для определения серотипа
токсина
Методы для определения типа ботулотоксина в исследуемом материале
Биологический метод (реакция нейтрализации) – проводят на 5 парах мышей
введение смеси фильтрата материала ( или жидкой культуры) и антитоксической сыворотки
определенного типа (A, B, E, F), предварительно выдержанной в термостате 30-40мин.
экспериментальным мышам;
введение фильтрата материала без антитоксической сыворотки (контрольная мышь);
учет результатов биологической пробы через 2-3 суток
Серологический метод:
определение ботулотоксина с помощью РНГА с антетельным эритроцитарным диагностикумом;
выявление токсина с помощью ИФА, иммуноелектрофореза
1.7. Краткие методические рекомендации для работы студентов на лабораторном занятии.
1.7.1. Методика проведения занятия.
Изучить морфологию возбудителей стовбняка и ботулизма в демонстрационных препаратах,
окрашенных по Грамму. Микроскопическую картину зарисовать в протокол, обращая внимание на
форму, размер и место расположения спор.
Изучить характер роста клостридий в среде Китта-Тароцци, на лакмусовом молоке.
Ознакомиться с питательными средами, которые используют для выделения патогенных
клостридий из исследуемого материала и накопления чистой культуры (кровяно-сахарный агар
Цейсслера, среда Вильсона- Блера, среда Китта-Тароцци, скошений кровяно-сахарный агар по
Филдсу).
Учесть результаты демонстрационной РПГА, поставленной с целью выявления ботулотоксина
в разных образцах пищевых продуктов.
Ознакомиться с препаратами, которые используют для диагностики, специфической терапии и
профилактики стовбняка и ботулизма. Данные внести в протокол.
Внести схему лабораторной диагностики стовбняка и ботулизма в протокол.
Оформить протокол, сделать выводы.
Автор: доцент, к.м.н. Вовк И.Н.
Методические рекомендации
по подготовке и работе на лабораторном занятии №30
для студентов стоматологического факультета
Тема: Споровые и аспорогенные анаэробные бактерии – возбудители раневой газовой
инфекции и гнойно-воспалительных процессов. Морфология и биологические свойства.
Микробиологическая диагностика заболеваний.
1.1. Актуальность темы. Анаэробные микроорганизмы достаточно часто вызывают гнойновоспалительные заболевания человека в ассоциации с факультативно-анаэробными и аэробными
бактериями. Особенно тяжелым течением характеризуется раневая клостридиальная инфекция,
которая сопровождается токсичным поражением продуктами распада тканей почек, центральной
нервной системы и т.д. Особенностью этой группы раневых инфекций также является трудности в
лечении в связи с резистентностью большинства клостридий к химиотерапевтическим
препаратам, а также их недоступности в очаге поражения из-за нарушения кровообращения. Такие
особенности течения раневой анаэробной инфекции обуславливают основную роль профилактики
84
подобных осложнений. Знание биологических особенностей возбудителей, их экологии и условий,
при которых споры клостридий приобретают возможность прорастать в контаминированных
тканях, необходимо будущему врачу для проведения полноценных профилактических
мероприятий с целью предупреждения развития анаэробной инфекции в ране.
1.2. Цели изучения темы.
1.2.1. Цель общая: усвоить основные биологические свойства возбудителей газовой анаэробной
инфекции и гнойно-воспалительных осложнений, принципы лабораторной диагностики,
профилактики и лечения инфекций.
1.2.2. Цель конкретная:
1. Усвоить основные биологические свойства клостридий, возбудителей газовой анаэробной
инфекции, условия для спорообразования и прорастания спор в ране.
2. Знать механизмы действия экзотоксинов возбудителей газовой анаэробной инфекции и гнойновоспалительных процессов.
3. Уметь правильно выбрать метод лабораторной диагностики раневой газовой инфекции и гнойновоспалительных процессов (предварительной и окончательной).
4. Знать пути проникновения клостридий и неспорообразующих анаэробов в рану, условия для
развития осложнений раневого процесса.
5. Уметь правильно выбрать препараты для лечения газовой анаэробной инфекции и гнойновоспалительных процессов.
6. Знать основные биологические свойства неспорообразующих анаэробов, - возбудителей гнойновоспалительных процессов.
1.3. Содержание обучения.
1.3.1. Граф логической структуры содержания:
1.
Классификация патогенных для человека анаэробов – возбудителей
газовой раневой инфекции и гнойно-воспалительных осложнений
№№
Название рода
Патогенные виды
неспорообразующие анаэробы
1
Bacteroides
B. fragilis,
B.melaninogenicus
2
Fusobacterium
F.nucleatum, F.necroforum
3
Propionobacterium
P. acnes, P.avidus
4
Peptococcus
P. niger
5
Peptostreptococcus
P. anaerobius
6
Veilonella
V.atipica, V.dispar
спорообразующие анаэробы
7
Clostridium
C. perfringens
C. novi
C. septicum
C. hystolyticum
C. difficile
C. sporogenes
2.
1)
2)
3)
4)
Роль неспорообразующих анаэробов в развитии инфекций
Вызывают эндогенные гнойно-воспалительные инфекции в ассоциациях с факультативными
анаэробами или аэробами:
А) мягких тканей (флегмоны, абсцессы, нагноение трофических язв, раневые инфекции)
Б) дыхательной системы (абсцессы легких, эмпиема плевры и др.)
В) опорно-двигательного аппарата ( остеомиелиты)
Г) моче-половой системы
Д) стоматологические заболевания (глубокий кариес, периодонтиты, периоститы, пародонтиты,
хелитозис и др.).
3. Условия развития заболеваний
нарушение тканевых баръеров кожи и слизистих оболочек
уменшение уровня кислорода иі окислительно-восстановительного потенциала в тканях
вследствие травм, спазмо вили нарушения проницаемости кровеносных сосудов
хирургические вмешательства (операции на кишечнике, в челюстно-лицевой области)
сахарный диабет, онкозаболевания, лейкозы, артериосклероз, эндартериит, алкоголизм
85
5) длительное использование препаратов с иммуносупрессивным действием (кортикостероиды,
иммунодепрессанты, антибиотики
6) рентгеновское и гамма-облучение
4. Лабораторная диагностика инфекций, вызванных неспорообразующими анаэробами
Материал для исследования : рановое содержимое, экссудат и др.( помещают в специальные
контейнеры, наполненные инертным газом)
Методы диагностики:
Бактериоскопический – предварительная диагностика
Бактериологический – основан на виделении чистой культуры возбудителя и её идентификации
по биохимическим свойствам
Биологический – проводят заражение белых мышей и кроликов при условии загрязнения
исследуемого материала посторонними микроорганизмами
5. Возбудители газовой анаэробной инфекции
Морфология (общая характеристика)
Грамм-положительные спорообразующие
палочки, которые во время споруляции
приобретают веретеноподобную форму;
Не образуют капсулу (кроме C. perfringens);
Малоподвижные перитрихи (кроме C.
perfringens)
C.perfringens
Грамм (+) толстая палочка (1,5-2,0x4-8 мкм);
образует центрально или субтерминально
расположенную овальную спору;
имеет капсулу;
не подвижна
Условия культивирования, среды, признаки
роста
Облигатные анаэробы;
оптимальное рН 7,2-7,6;
Культивируют на специальных средах для
анаэробов: среда Китта-Тароцци, кровяносахарный агар Цейсслера, среда Вильсон-Блера,
среда Виллиса_Хобса
Оптимальная температура культивирования +30370С
Образуют R-формы колоний на плотных средах.
В среде Китта-Тароцци дает диффузное
помутнение и большое количество газа.
молоко – быстрое сворачивание за 3-5 часов „штормовая реакция” (интенсивное
газообразование и образование губчатого
сгустка)
среда Вильсона-Блера - почернение и разрывы
среды
Классификация патогенных клостридий по ферментативным свойствам
клостридии с преимущественно
Клостридии с преимущественно
сахаролитическими свойствами
протеолитическими свойствами
C. perfringens, C. septicum
C. novyi, C. hystoliticum
6.
Краткая характеристика особенностей патогенеза, клинического течения и
лабораторной диагностики газовой анаэробной инфекции
Факторы
Патогенез
Клинические
Лабораторная
Профилактика и
патогенност
проявления
диагностика
лечение
и
1. Ферменты Действие
3 клинические
Методы:
Профилактика:
патогенности экзотоксинов:
1.Бактериоскопи- Неспецифическая формы газовой
2.
гемолитическое,
ческий
ПХО раны
анаэробной
многофракдермонекротическо инфекции:
(предварительны Специфическая ционные
е, летальное,
эмфизематозная
й диагноз)
поливалентная
экзотоксины: энтеротоксическое, отечная
2. Бактериолопротивогангренозна
основные (α, нейротоксическое,
смешанная
гический
я гетерологическая
β, ε , ι )
кардиотоксическое, Характерно:
(основной)
сыворотка
минорные (δ, нефротоксическое.
отсутствие ярких 3.Биологический Лечение
τ, κ, µ, ξ и
Пусковое звено:
проявлений
4. ИммунохимиНеспецифическое
др.)
в
о
с
п
а
л
е
н
и
я
в
ч
е
с
к
и
й
– антибиотики
разрушение -3.Капсула
ране, бістро
(цефалоспорины
токсином клеток в
прогрессирующи
или пенициллины)
месте поражения,
86
что делает
возможным
дальнейший
протеолиз тканей
й некроз тканей и
выраженная
интоксикация
Специфическое видоспецифические
антитоксические
сыворотки
1.3.2. Перечень теоретических вопросов.
1.
Морфология и культуральные свойства клостридий анаэробной
инфекции.
2.
Факторы патогенности клостридий анаэробной инфекции,
патогенетическое действие их токсинов и ферментов.
3.
Условия возникновения газовой анаэробной инфекции, основные
проявления в ране.
4.
Микробиологическая диагностика раневой анаэробной инфекции.
5.
Специфическая профилактика и терапия раневой анаэробной инфекции.
6.
Основные представители неклостридиальных анаэробных бактерий
семейств бактероидов, пептококков, вейлонелл. Их роль в возникновении гнойно-воспалительных
процессов в ране.
1.3.3. Источники информации:
Литература (основная):
1.
К.Д.Пяткин, Ю.С.Кривошеин. Микробиология, М., 1980. Стр. 322-329,333-334.
2.
В.Д.Тимаков.Микробиология, 1983. Стр. 323-330, 336-340.
3.
А.И.Коротяев, С.А.Бабич. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология,
Санкт-Петерб.,2002. Стр.423-427.
4.
И.Л.Дикий, И.Ю.Холупяк, Н.С.Шевелева, М.Ю.Стегний. Микробиология, Харьков, 1999.
Стр.286-291.
5.
Микробиология. Руководство к лабораторным занятиям. Под ред. И.Л.Дикого, Харьков,
1999. Стр.310- 314, 316-317, 318.
6.
Л.Б.Борисов. Руководство к лабораторным занятиям по микробиологии, 1984. Стр. 141147.
7.
Л.Б.Борисов. Медицинская микробиология, вирусология,иммунология, М., 2002. Стр. 448453.
8.
Ю.С.Кривошеин. Руководство к практическим занятиям по микробиологии, 1973. Стр.
147-150.
9.
М.Н.Лебедева. Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии. М.,
1973. Стр.267-270.
Литература (дополнительная):
Словарь по микробиологии, вирусологии, иммунологии и инфекционным заболеваниям. Общая
ред.. Г.К.Палий, К., 2004.
А.Н.Маянский. Микробиология для врачей. Н.Новгород, 1999. Стр.139-152, 153-164.
Лекционный материал.
1.4. Ориентировочная основа действия (ООД)
Схема микробиологической диагностики газовой анаэробной инфекции
Материал для исследования: некротизированные ткани, экссудат из раны, перевязочный и шовный
материал, инородные тела из раны
Бактериоскопическое исследование
- мазок, окраска по Грамму;
- мазок, окраска метиленовым синим;
- мазок, окраска по Бурри-Гинсу;
- РИФ.
Ответ.
Бактериологическое исследование:
1.
посев на среду Китта-Тароцци, Вильсона-Блера, молоко, среду Виллиса-Хобса;
2.
пересев на кровяной агар с глюкозой;
3.
характер колоний;
4.
мазок, окраска по Грамму;
5.
препарат «висячая капля» для определения подвижности;
6.
пересев на среду Китта-Тароцци (чистая культура);
87
7.
посев на углеводный ряд Гисса, желатин;
8.
реакция нейтрализации токсина антитоксином (определение серотипа).
Ответ.
Ускоренные методы:
лецитиназная проба для выявления токсина перфрингенс в исследуемом материале с помощью
диагностической сыворотки анти-перфрингенс
посев материала на Китта-Тароцци, молоко, среду Вильсона-Блера для определения через 6-8
часов специфичесих признаков роста C.perfringens.
Ответ.
Биологическое исследование (для определения серотипа выделенной чистой культуры)
РН с целью определения типа токсина в опыте на мышак, зараженных смесью фильтрата культуры
и типоспецифических антитоксических сывороток.
Ответ.
Дифференцирующие признаки патогенных клостридий – возбудителей газовой анаэробной
инфекции
Вид
Сахаролитические свойства
лактоза глюкоза
маннит
C.perfringens
+ (КГ)
+ (КГ)
-
Разжижен
ие
желатина
+
C.hystoliticum
-
-
-
+
C.novyi
-
+
-
+
C.septicum
+(КГ)
+(КГ)
-
+
C.sporogenes
-
+ (КГ)
-
+
C.sordelii
-
+(КГ)
-
+
C.difficile
-
+
+
+
Рост в молоке
Колонии на среде ВиллисаХобса
Быстрое
створаживание
(«штормовая
реакция»)
Быстрое
створаживание
и
пептонизация
Медленное
створаживание
Красные,
с
зоной
опалесценции (за счет
расщепления лактозы и
образования лецитиназы)
Медленное
створаживание
Медленное
створаживание
Бесцветные,
без
зоны
опалесценции (лактозо- и
лецитиназоотрицательные)
Бесцветные
с
зоной
опалесценции
(образуют
лецитиназу,
лактозоотрицательные)
Бесцветные
с
зоной
опалесценции
Бесцветные,
без
зоны
опалесценции (лактозо- и
лецитиназоотрицательные)
Медленное
Бесцветные
с
зоной
створаживаопалесценции
(образуют
ние
лецитиназу,
лактозоотрицательные)
Не створажи- Бесцветные,
без
зоны
вает
опалесценции (лактозо- и
лецитиназоотрицательные)
1.5. Краткие методические рекомендации для работы студентов на лабораторном занятии.
1.5.1. Методика проведения занятия.
1. Приготовить препараты из споровых культур клостридий, выращенных в молоке, окрасить по
Грамму и Цилю-Нильсену, промикроскопировать, обращая внимание на морфологию
вегетативных клеток, размеры и расположение спор.
2. Изучить характер роста клостридий газовой анаэробной инфекции на средах Китта-Тароцци,
Вильсон-Блера, кровяном агаре, молоке.
3. Изучить в демонстрационном опыте сахаролитические свойства клостридий на средах Гисса.
88
4. Провести ускоренную диагностику газовой анаэробной инфекции путем обнаружения в материале
лецитиназы C.perfringens. Для этого в 3 пробирки вносят по 0,3 мл исследуемого материала, в две
из них – по 0,1 мл лецитина, затем в первую добавляется 0,1 мл сыворотки анти-перфрингенс, во
вторую – 0,1 мл, а в третью – 0,2 мл физиологического раствора. Учет результатов производится
через 40 мин. инкубации в термостате. При положительном результате (в материале лецитиназа
C.perfringens) в первой пробирке раствор остается прозрачным за счет нейтрализации лецитиназы
сывороткой анти-перфрингенс. Во второй пробирке содержимое мутнеет за счет расщепления
лецитина, а в третьей – жидкость остается прозрачной.
5. Ознакомиться с лечебно-диагностическими препаратами, которые используют для лечения,
профилактики и лабораторной диагностики раневых клостридиозов.
6. Внести в протокл данные про несопрообразующих анаэробов, возбудителей гнойновоспалительных осложнений.
Автор: доцент, к.м.н. Вовк И.Н.
Методическая разработка
по подготовке и работе на лабораторном занятии №31
для студентов стоматологического факультета.
1.1.
1.2.
Тема: Коринебактерии дифтерии. Бордетеллы коклюша. Морфология и биологические
свойства. Микробиологическая диагностика заболеваний.
Актуальность темы.
Случаи заболевания дифтерии и коклюша встречаются на Украине, поэтому изучение этой темы
является обязательным для студентов медицинского университета.
Цели изучения темы.
1.2.1. Цель общая: усвоить методы микробиологической диагностики дифтерии и коклюша.
1.2.2. Цель конкретная:
а). студенты должны знать морфологию и свойства возбудителей дифтерии и коклюша.
б). должны знать методы диагностики заболевания.
в). студенты должны знать методы специфической терапии и профилактики дифтерии и коклюша.
1.3.1. Обеспечение исходного уровня знаний- умений.
а). Определение понятий «патогенность» и «вирулентность».
б).Факторы вирулентности бактерий.
в).Характеристика токсинов бактерий.
г). Периоды развития инфекционной болезни.
Перечисление исходных знаний умений: знать факторы вирулентности бактерий и уметь их
определять.
1.3.2. Тесты исходного уровня знаний – умений.
1.Пример ситуационной задачи:
В препарате от больного дифтерией выявлены желтые палочки с синими зернами на концах.
Какой метод окраски был использован в этом случае?
А. Грама.
В. Циля – Нильсена.
С. Романовского – Гимзе.
Д. Нейссера.
Е. Леффлера.
Правильный ответ: Метод Нейссера
Содержание обучения
1.4.1.Граф логической структуры содержания
- изучить морфологию коринебактерий и бордетелл в демонстрационных препаратах покрашенных по
Грамму и Леффлеру;
- познакомиться с питательными средами на которых культивируют коринебактерии и бордетеллы (
среда Ру, среда Леффлера, среда Клауберга, среда Бучина, кровяной агар, теллуритовый кровяной
агар, казеино-угольный агар);
- осуществить забор материала из зева с помощью ватно – марлевого тампона, приготовить препарат,
покрасить по Грамму, промикроскопировать и зарисовать;
89
- провести дифференциацию коринебактерий дифтерии биоваров гравис, митис и дифтероидов по
биохимическим свойствам в демонстрационном опыте
- познакомиться с методами определения токсигенности коринебактерий (метод преципитации в
агаре)
- изучить биопрепараты, используемые для диагностики, профилактики и лечения дифтерии и
коклюша
1.4.2.Перечень теоретических вопросов:
- морфология, тинкториальные и культуральные свойства возбудителей коклюша и дифтерии .
- токсинообразование.Методы изучения токсигенности коринебактерий дифтерии
.
- методы лабораторной диагностики дифтерии и коклюша .
- особенности иммунитета при дифтерии и методы изучения уровня антитоксинов в крови человека,
- специфическая профилактика и лечение дифтерии и коклюша.
1.4.3.Источники обучающей информации:
Основная литература.
: К.Д.Пяткін, Ю.С.Кривошеїн Мікробіологія К.1992 (укр) с.240-243,286-292
К.Д.Пяткин, Ю.С.Кривошеин. Микробиология. М. 1980 (рос) с.301-305,335-341.
А.И.Коротяев, С.А.Бабич. Мед.микробиология, иммунология и вирусология. С-П.2002 (рос) с.406412.
И.Л.Дикий, И.Ю.Холупяк, Н.С.Шевелева, Практическая микробиология Харьков. 1999 (рос) с.274279.
Микробиология.Руководство к лабораторним занятиям Под ред. И.Л.Дикого Харьков 2004 (рос)
с.433-440
О.І.Климнюк, І.О.Ситник, М.С.Творко, В.П.Широбоков Практична мікробіологія, Тернопіль 2004
(укр) с.257-264
Л.Б.Борисов Руководство к практическим занятиям по микробиологии М.1984 (рос) с.171-175
М.Н.Лебедева Руководство к практическим занятиям по мед.микробиологии. М.1973 (рос) с.262264,276-283.
Ю.С.Кривошеин Руководство к практическим занятиям по микробиологии.М.1986 (рос) с.154-160.
Додаткова: Словник по мікробіології, вірусології, імунології та іефекційним захворюванням.
Заг.ред. проф.Г.К.Палій К. 2004 с.64.
1.5.Ориентировочная основа действия.
Граф логической структуры микробиологической диагностики коклюша:
- материал для исследования: слизь из носоглотки и гортани, которые получают методом
«кашлевых пластинок», мокроту, кровь;
- бактериоскопическое исследование: приготовление мазков – препаратов, окраска по
методу Грама;
- бактериологическое исследование: посев материала на одну из элективных питательных
сред ( КУА, Борде – Жангу, кровяной МПА);
- изучение подозрительных колоний
- мазок, окраска по Граму;
- пересев на скошенный агар;
- посев на углеводный ряд Гиса, среду с тирозином, среду с мочевиной;
- одновременно проводят РА на стекле со специфической сывороткой;
Серологическое исследование:
- РПГА, РСК, РА с сывороткой больного,
Окончательный ответ.
Граф логической структуры лабораторной диагностики дифтерии:
- материал для исследования: отделяемое пораженной слизистой оболочки зева, носа,
конъюнктивы глаза, наружных половых органов.
- бактериоскопическое исследование
- приготовление мазков, окраска по Грамму, Леффлеру, Нейссеру.
Предварительный результат.
- бактериологическое исследование:
посев материала на одну из элективных питательных сред.
- через 8 – 12 часов инкубации готовят мазки, при отрицательном результате
микроскопическое исследование повторяют через 18 – 24 часа;
90
- через 24 – 48 час. Изучают выросшие колонии и подозрительные пересевают на
сывороточную среду;
- чистые культуры засевают на «пестрый ряд», среду с цистеином и мочевиной;
- одновременно проводят РА на стекле со специфическими противодифтерийными
сыворотками;
- определяют токсигенность в РП в геле;
Биологический метод исследования.
- внутрикожное введение или подкожное введение материала морским свинкам.
Серологическое исследование
- РА или РНГА
Окончательный ответ.
1.7.Короткие методические указания для работы студентов на лабораторном занятии.
1.7.1.Методика проведения занятия.
1этап. Промикроскопировать демонстрационные препараты из коринебактерий и
бордетелл, окрашенные по методу Грамма, Нейссеру, Лефлеру.
Способы изучения: готовые демонстрационные препараты.
Оборудование – микроскопы, иммерсионное масло.
Место изучения – учебная комната.
Время обучения – 15 мин.
2 этап. Ознакомиться с питательными средами, которые используют для культивирования
коринебактерий и бордетелл,
Способ обучения – готовые питательные среды Бучина, кровяной агар, Клауберга, казеино
– угольный агар, свернутая сыворотка.
Место обучения – учебная комната.
Время обучения – 10 мин.
3. этап.Ознакомиться с методом изучения токсигенности коринебактерий
Способы изучения – таблица «Реакция преципитации», Чашка «реакция преципитации в
геле».
Место изучения – учебная комната.
Время изучения – 15 мин.
4 этап. Провести дифференциальную диагностику биоваров коринебактерий дифтерии и
дифтероидов.
Способы изучения – демонстрационный штатив с дифференциально – диагностическими
средами ( МПБ с глюкозой, сахарозой, крахмалом, мочевиной)
Место проведения – учебная комната.
Время проведения – 15 мин.
5 этап. Изучить биопрепараты которые применяют для профилактики и специфического
лечения дифтерии и коклюша.
Способы изучения – противодифтерийная сыворотка, вакцинв АКДС, АД анатоксин, АДС
анатоксин.
Место изучения – учебная комната.
Время изучения – 15 мин.
6 этап. Зарисовать возбудителей и записать методы диагностики, определения
токсигенности, дифференциальные признаки, схему микробиологической диагностики.
Место проведения – учебная комната.
Время проведения – 20 мин.
Автор: ассистент Стукан О.К.
Методическая разработка
по подготовке и проведению лабораторного занятия №32
для студентов стоматологического факультета
91
Тема:
Микобактерии
туберкулеза.
Морфология,
Микробиологическая диагностика туберкулеза.
1.1.
биологические
свойства.
Актуальность темы.
Заболевание туберкулезом на Украине носит эпидемический характер, поэтому изучение
этой темы для студентов медуниверситета является необходимым.
1.2.Цели изучения темы.
1.2.1.Цель общая: Усвоить методы микробиологической диагностики туберкулеза.
1.2.2.Цель конкретная:
- студенты должны знать морфологию и свойства возбудителя туберкулеза.
- должны знать методы диагностики туберкулеза
- студенты должны знать методы специфической профилактики туберкулеза.
1.3.1.Обеспечение исходного уровня знаний – умений
- источники, механизмы и пути передачи инфекции;
- роль факторов внешней среды и социальных условий в возникновении болезни;
- характеристика токсинов микобактерий
Перечисление исходных знаний – умений : знать особенности кислотоустойчивых бактерий и
уметь их выявлять в исследуемом материале.
Тесты на исходный уровень знаний – умений.
Пример. При микроскопии препарата, изготовленного из мокроты больного и окрашенного по
методу Циля – Нильсена, обнаружены рубиново – красного цвета палочки. Какие из
перечисленных бактерий это могут быть?
А. Кишечная палочка.
В.Коринебактерии.
С.Микобактерии.
Д.Стафилококки.
Е. Стрептококки.
Ответ : Микобактерии.
1.4.Содержание обучения.
1.4. 1.Препарат из культуры БЦЖ покрасить по методу Циля-Нильсена,
промикроскопировать и зарисовать.
Изучить питательные среды, которые применяют для культивирования микобактерий.
.Ознакомиться с биопрепаратами, применяемыми для диагностики и профилактики
туберкулеза
1.4.2. Список теоретических вопросов
- типы микобактерий туберкулеза, их биологические свойства
- атипичные микобактерии, их роль при иммунодефицитах
- особенности патогенеза туберкулеза
- туберкулин, его свойства. Способ изучения инфицированности микобактериями
туберкулёза.
- Особенности иммунитета при туберкулёзе
- специфическая профилактика туберкулёза
1.4.3.Источник учебной информации:
Основная литература:
К.Д.Пяткін, Ю.С.Кривошеїн Мікробіологія К.1992 (укр) с.274-280
К.Д.Пяткин, Ю.С.Кривошеин. Микробиология. М. 1980 (рос) с.343-354
А.И.Коротяев, С.А.Бабич. Мед.микробиология, иммунология и вирусология. С-П.2002 (рос) с.437444
И.Л.Дикий, И.Ю.Холупяк, Н.С.Шевелева, Практическая микробиология Харьков. 1999 (рос) с.265274
Микробиология.Руководство к лабораторним занятиям Под ред. И.Л.Дикого Харьков 2004 (рос)
с.422-433.
О.І.Климнюк, І.О.Ситник, М.С.Творко, В.П.Широбоков Практична мікробіологія, Тернопіль 2004
(укр) с.272-279
92
Л.Б.Борисов Руководство к практическим занятиям по микробиологии М.1984 (рос) с.163-169
Ю.С.Кривошеин Руководство к практическим занятиям по микробиологии.М.1986 (рос) с.160-166.
Додаткова: Словник по мікробіології, вірусології, імунології та іефекційним захворюванням.
Заг.ред. проф.Г.К.Палій К. 2004 с.136, 78..
Р.О.Драбкина. Микробиология туберкулеза. (рос). 1983.
М.П.Заков, Т.В.Ильина Потенциально-патогенные бактерии и лабораторная диагностика
микобактериозов.(рос) М. 1978.
1.5.Ориентировочная основа действия
.Граф логической структуры диагностики туберкулеза.
Бактериоскопическое исследование
- приготовить препарат, окрасить по Цилю-Нильсену, промикроскопировать.
Бактериологическое исследование.
- засевают, предварительно обработанный серной кислотой или щелочью, материал на
элективные питательные среды
- посев инкубируют при 37 ºС на протяжении 4 – 6 и больше недель
- для идентификации изучают характер роста на питательных средах, биохимические
свойства и вирулентность для лабораторных животных.
Биологическое исследование
- заражают морских свинок, через 4 месяца проводят микроскопическое и
макроскопическое исследование.
Серологическое исследование.
- ставят РСК и РНГА
Аллергический метод диагностики
- туберкулиновые пробы.
1.7.Краткие методические указания для работы студентов на лабораторном занятии.
1.7.1.Методика проведения занятия
- приготовленный мазок из культуры БЦЖ окрашивают по методу Циля – Нильсена.
Микроскопируют и зарисовывают выявленные бактерии;
- изучают питательные среды, применяемые для культивирования микобактерий;
- знакомятся с биопрепаратами, применяемыми для диагностики и профилактики
туберкулёза.
Автор: ассистент Стукан О.К.
Методическая разработка
по подготовке и работе на лабораторном занятии №33
для студентов стоматологического факультета.
ТЕМА: Патогенные спирохеты. Трепонемы. Морфология, биологические свойства.
Микробиологическая диагностика сифилиса.
1.1.Актуальность темы. Венерические болезни в наше время довольно распространены на
Украине. Поэтому знать возбудителя, его особенности, патогенез заболевания и методы
диагностики сифилиса необходимо знать каждому врачу.
1.2.Цели изучения темы.
1.2.1.Цель общая: Усвоить особенности возбудителя и методы диагностики сифилиса.
1.2.2.Цель конкретная: Студенты должны знать морфологию возбудителя, особенности окраски и
микроскопии;
-должны знать особенности патогенеза сифилиса;
-знать методы диагностики сифилиса.
1.3.1.Тести исходного уровня знаний-умений.
1.Какой метод окрашивания препаратов используют для выявления спирохет?
А. По Граму.
В. По Цилю-Нильсену.
93
С. По Нейссеру. Д. По Бурри—Гинсу.
Е. По Романовскому – Гимзе.
Ответ: По Романовскому – Гимзе.
1.4.1.Содержание обучения.
Изучить морфологию трепонем в демонстрационных препаратах, покрашенных по Бурри и
Морозову.
Поставить реакцию Вассермана с исследуемой сывороткой.
Поставить реакцию микропрециптации на стекле с кардиолипиновым антигеном.
1.4.2.Перечень теоретических вопросов.
- Морфология, культуральные свойства и антигенная структура трепонем.
- Особенности патогенеза сифилиса.
- Микробиологическая диагностика сифилиса.
1.4.3.Источники обучающей информации:
Основная литература.
К.Д.Пяткін, Ю.С.Кривошеїн Мікробіологія К.1992 (укр) с.294-299
К.Д.Пяткин, Ю.С.Кривошеин. Микробиология. М. 1980 (рос) с.358-363
А.И.Коротяев, С.А.Бабич. Мед.микробиология, иммунология и вирусология. С-П.2002 (рос) с.485488
И.Л.Дикий, И.Ю.Холупяк, Н.С.Шевелева, Практическая микробиология Харьков. 1999 (рос) с.297301
Микробиология.Руководство к лабораторним занятиям Под ред. И.Л.Дикого Харьков 2004 (рос)
с.446-454
О.І.Климнюк, І.О.Ситник, М.С.Творко, В.П.Широбоков Практична мікробіологія, Тернопіль 2004
(укр) с.284-291
Л.Б.Борисов Руководство к практическим занятиям по микробиологии М.1984 (рос) с.224-229
М.Н.Лебедева Руководство к практическим занятиям по мед.микробиологии. М.1973 (рос) с.249298
Ю.С.Кривошеин Руководство к практическим занятиям по микробиологии.М.1986 (рос) с.171-177
Дополнительная: Словник по мікробіології, вірусології, імунології та іефекційним захворюванням.
Заг.ред. проф.Г.К.Палій К. 2004 с.129
1.5.Ориентировочная основа действия.
Граф логической структуры микробиологической диагностики сифилиса.
Материал для исследования: пунктат лимфатического узла, отделяемое твердого шанкра или
кожных высыпаний, сыворотка крови, ликвор.
- Микроскопическое исследование – готовят препараты «висячая капля» и исследуют в темном
поле зрения.
- Серологическое исследование – ставят реакцию Вассермана (РСК), осадочные реакции с
кардиолипиновым антигеном, реакцию иммобилизации трепонем или непрямой
иммунофлюоресценции.
Окончательный ответ.
1.6.Система обучающих заданий.
Пример ситуационной задачи.
В препарате, приготовленном из исследуемого материала и окрашенном по методу Романовского
– Гимзе, обнаружены спиралевидные микроорганизмы бледнорозового цвета с 8 – 12
равномерными завитками и заостренными концами.
Назовите возбудитель.
Правильный ответ : Treponema pallidum
Краткие методические указания для работы студентов на лабораторном занятии:
1.7.1.Методика проведения занятия.
– промикроскопировать готовые препараты , приготовленные из трепонем и окрашенных по Бури
и Морозову.
- поставить реакцию Вассермана с исследуемой сывороткой.
94
- поставить реакцию микропреципитации на стекле с кардиолипиновым антигеном.
Автор:ассистент Стукан О.К.
Методическая разработка
по подготовке и работе на лабораторном занятии №34
для студентов стоматологического факультета
Тема: Патогенные актиномицеты и грибы рода Candida. Морфология и биологические свойства.
Микробиологическая диагностика актиномикоза и кандидоза.
1.1.
Актуальность темы.
Актиномикоз - широко распространенное заболевание, особенно среди взрослого населения
сельской местности. Болеют также домашние животные. Характеризуется хроническим гнойным
поражением разных органов и систем с характерной инфильтрацией тканей, абсцессами и
свищами, плотными зернами (друзами) в гное. Возбудители актиномикоза относятся к отдельному
роду Actinomyces (actis - луч, myces- гриб), иногда называются стрептомицетами. Наиболее
частыми возбудителями актиномикоза у человека есть A.israelii, а реже A.albus, A.bovis. Иногда
актиномикозы рассматривают как проявление аутоинфекции, которая прогрессирует на фоне
гнойно-воспалительных заболеваний, травм, имунодефицитных состояний.
Кандидоз - оппортунистическое инфекционное заболевание кожи, слизистых оболочек и
внутренних органов. Встречается повсеместно, чаще всего, как осложнение после многих
инфекционных заболеваний, при иммунодефицитных состояниях.
1.2. Цели изучения темы.
1.2.1. Цель общая.
кандидоза.
Усвоить морфологические особенности возбудителей актиномикоза и
ль конкретная. Уметь промикроскопировать патологический материал и оценить результаты серологических
реакций с целью диагностики актиномикоза и кандидоза.
1.3. Обеспечение исходного уровня знаний-умений.
1. Особенности токсономического положение актиномицетов.
2. Особенности строения клеточной стенки актиномицетов, отличия от грибов.
1.4.
1.4.1.
1.4.2.
1.4.3.
Содержание обучения.
Граф логической структуры содержания.
Выучить морфологические особенности актиномицетов и кандид в демонстрационных препаратах
окрашенных за Граммом →
→ ознакомиться с питательными средами для культивирования актиномицетов и кандид →
→ ознакомиться с биохимической активностью возбудителей →
→ ознакомиться с патогенетическими аспектами актиномикоза и кандидоза →
→ ознакомиться с методами лабораторной диагностики заболеваний.
Перечень теоретических вопросов.
1. Морфологические, тинкториальные особенности актиномицетов..
2. Морфология, тинкториальные особенности грибов рода Candida
3. Факторы, влияющие на возникновение актиномикоза и кандидоза.
4. Микробиологическая диагностика кандидозов и актиномикозов.
5. Принципы лечения заболеваний, вызванных возбудителями.
6. Профилактика актиномикозов и кандидозов.
Источник учебной информации.
Литература основная.
К. Д. Пяткин, Ю. С. Кривошеин. Микробиология, М., 1980. - С. 354-357.
А. И. Коротяев, С. А. Бабичев. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология. С.Петербург, 2002. - С. 447-480, 509.
95
Медицинская микробиология, вирусология и иммунология под ред. А. А. Воробьева. - Г.:
Медицинское информативное агентство, 2004 - С. 469-470, 634-636.
Литература дополнительная.
Микробиология, вирусология, иммунология, инфекционные болезни. Словарь/ Под ред
Г.К.Палия, В.И.Палия. - Киев: Здоровье, 2004.
Сборник задач для подготовки к тестовому экзамену «Крок-1. Общая врачебная подготовка»
/Кол.авторов; Под ред. В.Ф.Москаленко и соавт. - К.:Медицина, 2004.
Сборник тестов кожных и венерологических болезней для студентов стоматологического
факультета. Винница, 2005 - 108 с.
Методические рекомендации кожных и венерических болезней для самостоятельной работы
студентов стоматологического факультета. Винница, 2005 - 88 с.
1.5.Ориентировочная основа действия.
1.5.1. Граф логической структуры микробиологической диагностики актиномикоза.
Материал для исследования: отделяемое язв, гной, мокрота, кровь, моча, пунктаты лимфатических
узлов, спинномозговая жидкость.

Микроскопическое исследование. Готовят микропрепараты, окрашивают по Граму, ЦилюНильсену, исследуют с помощью иммерсионной системы светового микроскопа.

Бактериологическое исследование: высевают исследуемый материал на плотные и жидкие
питательные среды:
КА,
глицериновый агар и бульон,
глюкозный МПБ,
среды Сабуро, Чапека,
сусло-агар

Серологическое исследование: РНГА, РСК, ИФА, ЦПР, ИФ.

Аллергический метод: внутрикожная проба с актиномицетином
Окончательный ответ
1.5.2. Граф логической структуры микробиологической диагностики кандидоза.
Материал для исследования: кожные и ногтевие чешуйки, отделяемое пораженных участков
слизистых оболочек, гной, испражнения, спинномозговая жидкость, биоптаты тканей.



Микроскопическое исследование. Готовят мазки, окрашивают по Грамму.
Микологическое исследование: высевают исследуемый материал на питательные среды:
среда Сабуро,
сусло-агар,
кандида-агар
Серологическое исследование: РА, РП, РНГА, РСК, ЦПР.
Окончательный ответ
1.7. Короткие методические указания для работы студентов на лабораторном занятии.
1.6.
1. Методика проведения занятия.
1. Приготовление мазков из исследуемого материала больного на кандидоз →
→ окрасить простым методом, промикроскопировать, зарисовать. →
2. выучить культуральные свойства кандид на среде Сабуро →
96
3. провести учет результатов РА, РСК, РПГА, поставленных с сывороткой крови больного на
хронический кандидоз.
Автор: доцент, к.м.н. Л. К. Сорокоумова
Методическая разработка
по подготовке и работе на лабораторном занятии №35
для студентов стоматологического факультета
Тема: Патогенные простейшие. Токсоплазмы. Амебы, трихомонады. Морфология и
биологические свойства. Лабораторная диагностика заболеваний.
1.1. Актуальность темы.
Актуальность проблемы токсоплазмоза определяется широким распространением инвазии
токсоплазмами среди населения, преимущественно безсимптомным течением токсоплазмоза у
беременных с неблагоприятными последствиями для плода, развитием тяжелых манифестных
форм у пациентов с иммуносупрессией. Полиморфизм клинических проявлений как
приобретенного, так и врожденного токсоплазмоза, отсутствие патогномонических симптомов
обуславливают необходимость тщательного подтверждения диагноза с использованием
специфических лабораторных исследований.
1.2. Цели изучения темы
Учитывая трудное течение заболеваний, вызванных простейшими будущим врачам любой
специализации необходимо знать основные противоэпидемические профилактические и лечебные
мероприятия что касается токсоплазмоза. Хорошие знания биологии возбудителя, особенностей
патогенеза токсоплазмозной инфекции, уменьшат гипердиагностику данной болезни и назначение
лечения лицам с иммунными титрами антител и будут оказывать содействие своевременной
диагностике основного заболевания.
1.2.1. Цель общая.
Овладеть методами лабораторной диагностики инфекционных заболеваний,
простейшими.
1.2.2. Цель конкретная.
1. Уметь обнаруживать в исследуемом материале возбудителей токсоплазмоза.
2. Уметь проводить учет РНГА и РСК по методу Кальметта при токсоплазмозе.
1.3. Обеспечение исходного уровня знаний-умений:
1. Характеристика и классификация простейших.
2. Методы микроскопического исследования простейших.
3. Уметь объяснить принцип постановки и учет РСК
4. Уметь объяснить принцип постановки и учет РНГА
вызванных
1.4. Содержание обучения:
Усвоить морфологию и биологические свойства возбудителя токсоплазмоза. Овладеть методами
лабораторной диагностики инфекционных заболеваний, вызванных простейшими.
1.4.1. Граф логической структуры содержания.
1.4.2. Перечень теоретических вопросов:
1. Морфология и биологические свойства возбудителей токсоплазмоза.
2. Патогенез токсоплазмоза.
3. Методы лабораторной диагностики токсоплазмоза.
4. Основные направления в профилактике заболеваний, вызванных плазмодиями и токсоплазмами.
1.4.3. Источники учебной информации.
Основная литература:
К. Д. Пяткин, Ю. С. Кривошеин. Микробиология, М., 1980. - С. 476-486.
В. Д. Тимаков. Микробиология, М., 1983. - С. 480-488.
А. И. Коротяев, С. А. Бабичев. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология. С.Петербург, 2002. - С. 511-512, 521-524.
97
И. Л. Дикий и соавт. Микробиология, Харьков, 1999. - С..
Ю. С. Кривошеин. Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии, М.,
1986. - С. 221-225.
М. Н. Лебедева. Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии, М., 1973.
- С. 301-308.
Литература дополнительная.
Словарь по микробиологии, вирусологии, иммунологии и инфекционным заболеваниям / Под.
ред. проф. Г.К.Палия К., 2004.
1.5. Ориентировочная основа действия.
Граф логической структуры микробиологического исследования токсоплазмоза.
Материал для исследования: кровь.
-
Бактериоскопическое исследование
окраска мазков крови и “толстой” капли крови по Романовскому-Гимза.
Серологическое исследование. (с парными сыворотками крови)
РСК, РИФ, РНГА - при токсоплазмозе.
Биологическая проба.
заражение мышей, белых крыс, морских свинок (токсоплазмоз).
Аллергологическое исследование.
- кожно-аллергическая проба с токсоплазмином.
1.7. Короткие методические указания для работы студентов на лабораторном занятии.
Промикроскопировать демонстрационные препараты тканевых форм токсоплазм. Выявить
простейших в форме полумесяца с одним заостренным, а другим закругленным концами,
протоплазма которых вакуолизирована и окрашена в голубой цвет, ядро - рубиново-красное.
Микроскопическую картину зарисовать в протокол.
2.
Провести учет результатов РСК, поставленную по методу Кальметта с сывороткой
больного на токсоплазмоз в объеме 1,25 мл (диагностический титр 1:5-1:40). Разведение
сыворотки больного 1:5-1:320. По титру антител установить форму инфекции: острая, латентная.
3.
Провести учет результатов РНГА с сывороткой крови больного токсоплазмозом.
4.
Внести в протокол данные о диагностических и профилактических препаратах, которые
применяются при токсоплазмозе.
1.
1.7.1. Методика проведения занятия
- Обоснование темы, которая изучается на занятии
- Контроль исходного уровня знаний-умений
- Контроль знаний темы, которая изучается
- Самостоятельная практическая работа для усвоения знаний-умений, оформление протокола
- Объявление результатов контроля знаний-умений, подведение итогов. Задание на следующее
занятие.
Продолжение
1.1. Актуальность темы.
В мире существует большое количество одноклеточных организмов, которые
соответственно современной систематики относят к подцарству простейших (Protozoa). Среди них
представители нескольких десятков видов паразитируют в организме человека. Так, в кишечнике
находятся лямблии и амебы, во внутренних органах - токсоплазмы, плазмодии и др. Вот почему
протозойные заболевания многообразны по клиническим проявлениям и требуют тщательного
лабораторного исследования разного материала от больных.
1.2. Цели изучения темы
Патогенные простейшие широко распространены и поражают людей и животных.
Заболевания, которые они вызывают наносят большой вред здоровью населения. Будущим врачам
98
любой специализации необходимо знать основные противоэпидемические, профилактические и
лечебные мероприятия по отношению к заболеваниям вызванным простейшими.
1.2.1. Цель общая.
Овладеть методами
простейшими.
лабораторной
диагностики
инфекционных
заболеваний,
вызванных
1.2.2. Цель конкретная.
1. Выучить морфологические особенности амеб в демонстрационных препаратах.
2. Уметь обнаруживать в исследуемом материале возбудителей трихомониаза.
3. Знать препараты, которые используют для лечения протозойных инфекций.
1.3. Обеспечение исходного уровня знаний-умений:
1. Характеристика и классификация простейших.
2. Методы микроскопического исследования простейших.
1.4. Содержание обучения:
Уметь обнаруживать в исследуемом материале возбудителей протозойных заболеваний: амебиаза,
трихомониаза.
1.4.1. Граф логической структуры содержания.
Выучить морфологические особенности цистных форм амеб > микроскопическую картину
зарисовать >
Выучить морфологические особенности трихомонад > микроскопическую картину зарисовать.
1.4.2. Перечень теоретических вопросов:
1. Возбудитель амебиаза. Морфология. Лабораторная диагностика амебиаза.
2. Трихомонады. Морфология. Культивирование. Лабораторная диагностика трихомониаза.
3. Особенности противопротозойного иммунитета.
4. Основные направления в профилактике заболеваний, вызванных патогенными простейшими.
1.4.3. Источники учебной информации.
Основная литература:
К. Д. Пяткин, Ю. С. Кривошеин. Микробиология, М., 1980. - С. 476-486.
В. Д. Тимаков. Микробиология, М., 1983. - С. 463-480, 488-489.
А. И. Коротяев, С. А. Бабичев. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология. С.Петербург, 2002. – С..
И. Л. Дикий и соавт. Микробиология, Харьков, 1999. - С..
Ю. С. Кривошеин. Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии, М.,
1986. - С. 272-307.
М. Н. Лебедева. Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии, М., 1973.
- С. 305-306,308-310.
Литература дополнительная.
Словарь по микробиологии, вирусологии, иммунологии и инфекционным заболеваниям / Под.
ред. проф. Г.К.Палия К., 2004.
1.5. Ориентировочная основа действия.
Граф логической структуры микробиологического исследования протозойных инфекций.
-
Материал для исследования: выделение язв, уретры, влагалища, мокрота, кровь, пунктат грудины,
печени, испражнения, спин-мозговая и плевральная жидкость.
Бактериоскопическое исследование
мазков железным гематоксилином, раствором Люголя (амебы).
99
-
-
Бактериологическое исследование.
- специальные среды для культивирования трихомонад, амеб.
Серологическое исследование. (с парными сыворотками больного)
РНГА, реакция агглютинации латекса, двойная диффузия в геле, встречный электрофорез при амебиазе.
Биологическая проба.
заражение котят (амебиаз).
1.7. Короткие методические указания для работы студентов на лабораторном занятии.
1. Выучить морфологические особенности цистных форм амеб в готовых препаратах.
2. Ознакомиться с морфологическими особенностями возбудителя трихомониаза.
3. Провести учет РНГА с парными сыворотками больного амебиазом.
1.7.1. Методика проведения занятия
- Обоснование темы, которая изучается на занятии
- Контроль исходного уровня знаний-умений
- Контроль знаний темы, которая изучается
- Самостоятельная практическая работа для усвоения знаний-умений, оформление протокола
- Объявление результатов контроля знаний-умений, подведение итогов. Задание на следующее
занятие.
Автор: доцент, к.м.н. Шевчук Наталья Николаевна
Методическая разработка
по подготовке и работе на лабораторном занятии №36
для студентов стоматологического факультета
ТЕМА: Общая характеристика клинической микробиологии. Микробиоценозы здоровых и
патологически измененных биотопов тела человека.
1.1. Актуальность темы обусловлена изменениями в микроэкологии организма человека под
влиянием внешних факторов и лечебных препаратов
1.2. Цели изучения темы
1.2.1 Цель общая: уметь оценивать состояние микроэкологии организма человека
1.2.2. Цель конкретная: Уметь дать оценку микробиоценоза в каждой экосистеме
1.3. Обеспечение исходного уровня
1. Основные морфологические группы бактерий
2. Факторы патогенности организмов
3. Бактериологический метод исследования
1.3.1. Тесты исходного уровня знаний-навыков. Задача.
Пример: Основные морфологические группы бактерий
а.
б.
в.
г.
шарообразные
палочкоподобные
извитые
нитчастые
Правильный ответ: а, б, в, г
1.4. Содержание обучения
100
1.4.1.
1.4.2.
1.
Графогической структуры содержания
Клиническая микробиология являетсчя разделом медицинской микробиологии, которая изучает
микробиологические аспекты этиологии, патогенеза, имунитета микробных заболеваний в
неинфекционной клинике. Микроорганизмы, которые способны принимать участие в развитии
патологического состояния человека и являются представителями нормобиоценоза, получили
название: условно–патогенные. Насчитывают более 100 видов условно–патогенних
микроорганизмов.
Для определенного биотопа организма человека микрофлора стабильна. Изменение
количественного и качественного состава микроорганизмов называется - дисбиоз.
Для определения состояния дисбиоза необходимо проводить бактериологическое исследование
(моча, мокроты, фекалии, и др.) с обязательным определением количества микроорганизмов в 1
мл, или 1г.
Перечень теоретических вопросов
Главные представители микрофлоры:
а) полости рта
б) кожи
в) дыхательных путей
г) мочеполовой системы
д) желудочно - кишечного тракта
2.
Роль нормальной микрофлоры в жизнедеятельности організма.
3.
Дисбиоз, факторы, его обусловливающие (возникновение, диагностика)
4.
Пробиотики. Использование.
1.5. Ориентировочная основа действий
Схема лабораторной диагностики дисбиоза на примере исследования
содержимого кишечника
Материал
Микроскопическое
исследование
Содержимое кишечника
Посев 0,1мл в розведении
1 : 100; 1 : 1000; 1 : 10 000 на
питательные среды (Эндо,
Плоскирева, Сабуро, тиогликоливу,
кровяной МПА, и др.) культивирование
в аэробных и анаэробных условиях.
Подсчет количества колоний на питательных
средах и определение в 1мл (1г)
исследуемогоматериала (аэробов и
анаэробов).
Идентификация микроорганизмов по
морфологическим, культуральным,
101
ферментативным особенностям, антигенному
строению.
Определение характера дисбиоза
(кандидозный, протейный, клебсиеледный)
1.6. Система обучающих знаний
Пример. Врач получил результаты бактериологического исследования, в котором выделены
клостридии, кишечные палочки, энтерококки, бифидобактерии. Из какой части кишечника был
взят материал для исследования?
а. желудок
б. тонкий кишечник
в. толстый кишечник
г. двенадцатиперстная кишка
д. еюнум
Правильный ответ: в
1.7.
1.7.1.
Краткие методические указания для работы студентов на
лабораторном занятии
Для качественного изучения состава микрофлоры организма человека
используют микроскопический и бактериологический методы исследования
(обязательно определяя количество микроорганизмов в 1мл (г)
исследуемого материала – КОЕ – колони-образующая единица).
Исследование зубного налета. Микроорганизмы, которые находятся в
зубном налете можно определить при окрашивании по методу Грама, по
Бурри или в препаратах «раздавленная» капля (определение
подвижных микроорганизмов).
Определение степени чистоты Vagina с помощью окрашенных по
Граму микропрепаратов. В микропрепаратах определяют наличие
лактобактерий, (палочки Додерляйна) грампозитивных и грамнегативных
кокков, эпителия и лейкоцитов, нейсерий, гарднерел и др.
В микропрепаратах, изготовленных из содержимого кишечника
младенца и взрослого человека, определяют наличие грампозитивных
и грамнегативных бактерий, грибов рода candida и др.
Определение количества бактерий в моче проводят по методу Голда
или при разведении мочи в физиологическом растворе (1 : 100; 1 : 1000;
1 : 10 000) и посева 0,1мл на питательную среду. Через сутки
термостатирования подсчитывают количество колоний на границе и
умножают на разведение.
Автор: доцент, доктор мед. наук С.А. Иванова
Методическая разработка
по подготовке и работе на лабораторном занятии №37
для студентов стоматологического факультета
102
Тема: Основы санитарной микробиологии и вирусологии. Санитарно-микробиологическое
исследование воды, почвы, воздуха.
1.1
Актуальность темы состоит в том, что патогенные микроорганизмы, которые находятся в
организме больных или носителей, попадают в окружающую среду, которая делает его фактором
передачи инфекции.
1.2
Цели изучения темы:
1.2.1
общие: уметь проводить бактериологическое и вирусологическое исследования
почвы, воды, воздуха;
1.2.2
конкретные: уметь определить санитарно-бактериологический показатель воды,
почвы, воздуха.
1.3
Обеспечения исходного уровня:
1.строение бактериальной клетки;
2.бактериологический метод исследования;
3.ферменты микроорганизмов;
1.3.1тесты исходного уровня знаний-умений. Задача.
Приклади:
- При посеве на среду Endo кишечной палочки и других организмов образовались красные и
бесцветные колонии. Какие колонии на среде Endo образовывает кишечная палочка?
1.Белые. 4.Желтые.
2.Розовые. 5.Полупрозрачные.
3.Красные.
Ответ: на среде Endo кишечные палочки образовывают красные колонии.
- Какие патогенные для человека вирусы могут находиться в воздухе, воде, почве, и быть
причиной возникновения инфекционных заболеваний у человека?
Ответ: в воду и почву могут попадать вирусы из кишечника человека (полиомиелита, Коксаки,
ЕСНО, энтеровирусы, гепатита, ротавирусы, реовирусы, аденовирусы). Из воздуха выделяются
респираторные вирусы, к которых относятся вирус гриппа, парагрипа, аденовирусы, риновирусы,
коронавирусы, респираторно-синдитиальные вирусы.
1.4. Содержание занятия:
1.4.1. Для определения санитарно-гигиенического состояния разных объектов окружающей среды,
воды, воздуха, почвы, продуктов питания и др. проводятся бактериологические исследования,
целью которых есть опредиление эпидемической безопасности.
Микробное загрезнение определяется микробным числом. Микробное число - это количество
микроорганизмов, которое находится в единице объема (1 мл воды, 1 г почвы, 1 м3 воздуха).
Определение санитарно-показательных микроорганизмов проводится по двум показателям: титру
и индексу. Титром называется та минимальная маса или объем, в котором есть даные бактерии;
индексом - количество санитарно-показательных бактерий, которые находятся в 1 л жидкости, 1
г плотного вещества,1 м3 воздуха.
1.4.2. Список теоретических вопросов.
1. Определение, цель и задачи санитарной микробиологии. Санитарно-показательные
микроорганизмы.
2. Правила отбора воды для исследований.
3. Определение микробного числа воды, коли-титра, коли-индекса.
4. Санитарно-виросологические исследования воды. Требования к питьевой воде.
5. Постоянная микрофлора и патогенные микробы (патогенные стафилококки, стрептококки)
6. Методы определения микрофлоры воздуха (по Коху, по Кротовой)
7. Определение патогенных бактерий и вирусов в воздухе.
8. Патогенные микробы, которые находятся в почве. Определение микробного числа почвы.
9. Определение санитарного состояния почвы (коли-титр, коли-индекс, перфрингенс-титр).
1.4.3. Учебная литература.
103
Основная:
1. К.Д. Пяткiн, Ю.С. Кривошеiн Мiкробiологiя К. 1982(укр) с. 71-89
2. К.Д. Пяткiн, Ю.С. Кривошеiн Микробиология М. 1980 (рос)
3. В.Д. Тимаков Микробиология М. 1983 (рос) с. 124-134
4.А.И. Коротеєв С.А. Бабич Медицинская микробиология, иммунология и вирусология Санкт Петерб 2002 (рос) с. 107-118
5.И.Л. Дикий, И.Ю. Холуняк, Н.С. Шевелёва, М.Ю. Стегний, Микробиология Харк. 1999 (рос)
с. 143-147
6.О.І. Климнюк, І.О. Ситник, М.С. Творчо, В.П. Широбоков, Практична мiкробiологiя, Терн.
2004 с. 78-89
7.Л.Б. Борисов, Руководство к практическим занятиям по микробиологии М. 1984 (рос) с. 8195
8.М.Н. Лебедева, Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии М.
1973 (рос) с. 107-115
Дополнительная:
1. Словник по мiкробiологiї, вiрусологiї, iмунологiї та iнфекцiйним захворюванням. Заг. ред,
проф., Г.К. Палiй, К, 2004
1.5. Ориентировочная основа действий
Методы проведения санитарнобактериологических иследований
А. Методы прямого
опредиления возбудителя
Посев на
питательной среде
Идентификация
микроорганизмов
Б. Методы косвенного
опредиления возбудителя
Опредиление
общего
микробного
числа (ОМЧ)
Подщет
микроорганизмов
в 1 мл, или 1 г
Состав санитарнопоказательных
микроорганизмов
(СПМ)
Прямой
подсчет
микроорганизмов
(камера
Петрова
Гельбера)
Посев на
питатель
ной
среде
Определение
титра
или
индекса
104
1.6 Система обучающих знаний.
Пример. Нужно провести обезвреживание воздуха в боксах. Аэрозоли каких химических веществ
можно использовать?
a. триэтиленгликоль;
b. молочную кислоту;
c. смесь эфирных масел;
d. перекись водорода;
e. все ответы правильные.
Ответ: e
1.7. Короткие методические указания для работы студентов на лабораторном занятии.
1.7.1. Методика проведение занятия.
Микрофлору окружающей среды изучает санитарная микробиология, задача которой это
разработка методов микробиологических и вирусологических исследований почвы, воды, воздуха,
предметов быта, пищевых продуктов и др.
Важным показателем санитарного состояния почвы есть общее количество наличия в ней
сапрофитов, термофильных микроорганизмов, энтаробактерий (E. coli, протей), анаэробов. Почва
является чистой, если коли-титр = 1,0 и больше, титр C. Perfringens – 0,01 и выше.
Микрофлора воды имеет важное значение. Водопроводная вода пригодна для питья, если
общее количество бактерий в 1 мл. составляет 100, коли-индекс: = 2-3, коли-титр = 300.
Воздух является неблагоприятной средой для жизнедеятельности бактерий и вирусов.
Микроорганизмы воздуха можно определить седиментадионным или аспирационным методами.
Автор: доцент, доктор мед. наук С.А. Иванова
Методическая разработка
по подготовке и работе на лабораторном занятии №39
для студентов стоматологического факультета
Тема: Общая вирусология. Морфология и ультраструктура вирусов. Методы
культивирования вирусов. Методы индикации и идентификации виру сов. Принципы
диагностики вирусных заболеваний.
Актуальность темы. Вирусы - это автономные генетические структуры, которые способны
репродуцироваться у восприимчивых к ним клетках, используя их генетический и
белоксинтезирующий потенциал. Способность вирусов вносить новую генетическую информацию
в генетический аппарат клетки хозяина, определяет их роль важного фактора изменчивости и
биологической эволюции всего живого.
Цель изучения темы.
Цель общая. Ознакомиться с морфологией, ультраструктурой и методами
культивирования вирусов.
Цель конкретная. Знать значения открытия Д.И.Ивановского, этапы развития
вирусологии; систематическое положение вирусов среди представителей микромира. Знать этапы
постановки современных методов культивирования, индикации и идентификации вирусных
заболеваний.
.
Обеспечение исходного уровня знаний-умений.
Лекции „Вирусы. Общая характеристика. Биологические свойства” „Современные методы
диагностики вирусных болезней” „Иммунитет. Особенности противовирусного иммунитета”.
3.2. Тесты на исходный уровень знаний-умений.
Пример теста.
Тест . Укажите компоненты РСК для серологической диагностики вирусной инфекции.
A.
Сыворотка больного, вирусный материал, комплемент, эритроциты барана
105
B.
Парные сыворотки больного, вирусный диагностикум, комплемент, гемолитическая
сыворотка
C.
Вирусный диагностикум, парные сыворотки больного, комплемент, гемолитическая
система
D.
Вирус, специфическая сыворотка, комплемент, эритроциты барана
E.
Специфическая сыворотка, вирусный диагностикум, гемолитическая система
Ответ: B.
Парные сыворотки больного, вирусный диагностикум, комплемент,
гемолитическая сыворотка
Содержание обучения.
Граф логическая структура содержания.
Перечень теоретических вопросов
1.
Значение открытия Д.И Ивановского. Этапы развития вирусологии;
2.
Систематическое положение вирусов среди представителей микромира.
3.
Принципы электронной микроскопии вирусов ;
4.
Морфология, ультраструктура и классификация вирусов
5.
Принципы культивирования вирусов
6.
Общая характеристика методов культивирования вирусов.
7.
ознакомиться с методом цитопатичной действия вирусов
8.
усвоить феномен бляшкоутворення и включений в цитоплазме
9.
познакомиться с реакциями гемаглютинации, гемадсорбции и
нейтрализации
3.
4. Источники учебной информации.
Литература основная.
К.Д.Пяткин, Ю.С.Кривошеин. Микробиология, К., 1982. – С. 385-391.
А.И.Коротяев, С.А.Бабичев. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология. С.Петербург, 2002. – С. 319-327.
И.С. Гайдаш, В.В. Флегонтова. Медицинская вирология. Луганск, 2002. – С. 195-213.
И.Л.Дикий и соавт. Микробиология, Харьков, 1999. – С. 375-387.
С.И.Климнюк и соавт. Практическая микробиология. Тернополь, 2004. – С. 375-379.
Литература дополнительная.
Микробиология, вирусология, иммунология, инфекционные болезни. Словарь/ Ред Г.К.Палия,
В.Г.Палия. – Киев: Здоровье, 2004. – С. 58, 122, 110-111.
Сборник заданий для подготовки к тестовому экзамену по естественно научным дисциплинам
«Крок-1. Общая врачебная подготовка» / За ред. В.Ф.Москаленка и соавт. – К.: Медицина, 2004. С.328-331.
5.
Ориентировочная основа действия структуры вирусологического исследования
патологического материала.
Забор материала → обработка материала антибиотиком → культивирование вирусов
Серологична диагностика.
Выявление антител с помощью ИФА,РІА,РНГА.
Выявление антигенов ИФА, РИА.
Молекулярно генетический метод.
Выявление вирусных нуклеиновых кислот в патологическом материале с помощью ПЦР.
5.
Система контрольных заданий.
Примеры тестов.
Тест Что такое цитопатическое действие вирусов?
A.
Изменение биологических свойств вирусов после проникновения их в клетку.
B.
Дегенеративные изменения в клетках под воздействием вирусов.
C.
Изменение биологических свойств вирусов после выхода их из клетки.
D.
Образование многоядерных клеток в результате проникновения в них вирусов. Е
Образования внутриядерных или внутришнецитоплазматичних включений в
клетках под влиянием вируса
106
Ответ: В Дегенеративные изменения в клетках под воздействием вирусов.
6.
Краткие методические указания для работы студентов на лабораторном занятии.
Методика проведения занятия.
♦ ознакомиться с методом репродукции вирусов в культурах клеток;
♦ усвоить метод постановки цветной пробы
1. Ознакомиться с принципом постановки методов индикации и идентификации
вирусных инфекций
Автор: ассистентРымша Е.В.
Методическая разработка
по подготовке и работе на лабораторном занятии №40
для студентов стоматологического факультета
Тема: Вирусы гриппа, парагриппа, кори. Биологические свойства. Методы лабораторной
диагностики заболеваний.
3. Актуальность темы. Вирусы гриппа, парагриппа, кори вызывают тяжелые инфекционные
заболевания со склонностью к осложнениям: пневмония, энцефалит. В 40-60 % детей после
иммунизации наблюдаются клинически выраженные симптомы кори (митигированная форма).
Существует возможность трансплацентарной передачи вируса кори. У пациентов с выраженной
клинической картиной гриппа и парагриппа диагностическое значение имеет нарастание титра
антител в 4 раза. Против кори вакцинируют детей в возрасте 1 года живой вакциной. Для
иммунизации против гриппа используют живую, инактивированную, химическую вакцины. Вирус
гриппа имеет высокую степень изменчивости, которая усложняет разработку вакцинных
препаратов.
4.
Цели изучения темы.
Цель общая. Усвоить методы лабораторной диагностики гриппа, парагриппа, кори.
Цель конкретная. Уметь идентифицировать вирус гриппа; проводить учет результатов
нарастания титра антител в парных сыворотках больного парагриппом; знать препараты для
активной и пассивной иммунизации против гриппа.
Обеспечение исходного уровня знаний-умений.
Лекции „Вирусы. Общая характеристика. Биологические свойства”, „Специфическая
профилактика и терапия инфекционных болезней”, „Современные методы диагностики
инфекционных болезней”.
3.2. Тесты на исходный уровень знаний-умений.
Пример теста.
При размножении (репродукции) вирусов его составные части (нуклеиновая кислота, вирусные
белки) синтезируются в клетке отдельно и лишь потом идет сборка вирионов. Такой тип
размножения носит название:
А - репродуктивный
В - дизъюнктивный
С - лизогенный
Д - спонтанный
Е - рекомбинативный
Правильный ответ: В - дизъюнктивный.
5.
3.1.
6.
7.2.
Содержание обучения.
Граф логической структуры содержания.
Вирусы гриппа, парагриппа, кори
Ortomyxoviridae - вирус гриппа
Семейство
Paramyxoviridae - вирусы парагриппа, кори
Тип НК
Однониточная РНК
Морфология
Форма
Сферическая
Сложность строения Сложный
107
Антигенное строение
Вирус гриппа
Вирус
Вирус кори
N- нейраминидаза (N1, N2)
H
парагриппа
H- геагглютинины (H1, H2, H3)
H, N
1)
куриный эмбрион (вирус гриппа)
Методы
2)
культура клеток
культивирования
Чувствительны к высушиванию, УФЛ, ультразвуку, изменению рН,
Резистентность
дезинфектантам.
Устойчивые к низким температурам.
Больной человек
Источник заражения
Механизм
и
пути Воздушно-капельный
передачи заболевания
Клетки слизистых оболочек верхних дыхательных путей, клетки
Органотропность
органов дыхания
Грипп, парагрипп - неустойчивый
Иммунитет
Корь - стойкий
Методы лабораторной Вирусологический
Серологический
диагностики
РИФ
Риноцитоскопия
1)
Противогриппозный и противокоревой гамма-глобулин
Специфическая
2)
Живая, инактивированная, рекомбинантная, химическая
профилактика
гриппозные вакцины
3)
Живая коревая вакцина
Специфическая терапия Противогриппозный и противокоревой гамма-глобулин
Перечень теоретических вопросов.
Систематическое положение, ультраструктура, антигенное строение и изменчивость
вируса гриппа.
7.3.2.
Резистентность вируса гриппа. Методы культивирования, индикации и идентификации
вируса гриппа.
7.3.3.
Патогенез гриппа, методы лабораторной диагностики заболевания.
7.3.4.
Систематическое положение, ультраструктура, антигенное строение вируса парагриппа.
7.3.5.
Резистентность вируса парагриппа. Методы культивирования, индикации и
идентификации вируса парагриппа.
7.3.6.
Патогенез парагриппа, методы лабораторной диагностики заболевания.
7.3.7.
Систематическое положение, ультраструктура, антигенное строение вируса кори.
7.3.8.
Резистентность вируса кори. Методы культивирования, индикации и идентификации
вируса кори.
7.3.9.
Патогенез кори, методы лабораторной диагностики заболевания.
7.3.10.
Препараты для лечения и специфической профилактики гриппа и кори.
7.3.
7.3.1.
7.4.
Источники учебной информации.
Литература основная.
К. Д. Пяткин, Ю. С. Кривошеин. Микробиология, М., 1980. - С. 406-411, 413-415.
В. Д. Тимаков. Микробиология, М., 1983. - С. 403-413.
А. И. Коротяев, С. А. Бабичев. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология. С.Петербург, 2002. - С. 263-269, 271-273.
И. Л. Дикий и соавт. Микробиология, Харьков, 1999. - С. 348-354.
Л. Б. Борисов. Руководство к практическим занятиям по микробиологии, М., 1984. - С. 229-239.
Ю. С. Кривошеин. Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии, М.,
1986. - С. 221-225.
М. Н. Лебедева. Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии, М., 1973.
- С. 232-235, 261.
Литература дополнительная.
Микробиология, вирусология, иммунология, инфекционные болезни. Словарь/ Под ред
Г.К.Палия, В.Г.Палия. - Киев: Здоровье, 2004.
108
Сборник задач для подготовки к тестового экзамену по естественно-научным дисциплинам
«Крок-1. Общая врачебная подготовка» /Кол.авторов; Под ред. В.Ф.Москаленка и соавт. К.:Медицина, 2004. - С.328-331.
8.


-




-

9.
Ориентировочная основа действия.
Граф логической структуры лабораторного исследования гриппа и парагриппа.
Материал для исследования: смыв из носоглотки, кровь, секционный материал.
Вирусологическое исследование
Заражение куриных эмбрионов (вирус гриппа)
Заражение культуры клеток
индикация: бляшкообразование на ХАО, капилляротоксикоз, ЦПД (вирус гриппа),
РГА, РГадс (вирусы гриппа и прагриппа)
идентификация: РТГА, РТГАдс, РН, РИФ
Серологическое исследование
Выявление титра антител в парных сыворотках больного с помощью РТГА, РН, РСК.
Биологический метод (грипп)
заражение белых мышей или хомяков
индикация вируса по изменениям в трахеях, бронхах, легких, РГА
идентификация вируса в РТГА, РН
Экспресс-диагностика
РИФ
Риноцитоскопия
Граф логической структуры лабораторного исследования кори.
Материал для исследования: смывы из носоглотки, кровь, моча, секционный материал.
Вирусологическое исследование
Заражение культур клеток
индикация: ЦПД (симпластообразование), РГА
идентификация: РН, РТГА, РСК
Серологическое исследование

РТГА, РСК
Экспресс-диагностика
РИФ
Система целевых обучающих задач.
Примеры тестов.
Вирус кори принадлежит к семейству:
А. Orthomyxoviridae
B. Paramyxoviridae
C. Togaviridae
D. Rinoviridae
E. Adenoviridae
Ответ: В – Paramyxoviridae
10.
Короткие методические указания для работы студентов на лабораторном занятии.
10.1. Методика проведения занятия.
3.
Для серотипирования вируса гриппа ставят РТГА капельним методом. На предметные стекла
наносят 5 капель смыва из носоглотки больного. Прибавляют по капле типоспецифические
антигриппозные сыворотки N1H1, N2H2 и нормальную сыворотку для контроля. Потом в каждую
каплю прибавляют по 1 капле взвеси куриных эритроцитов. Результаты учитывают через 2-5 мин.
Тип вируса отвечает той диагностической сыворотке, в присутствии которой происходит
торможение гемагглютинации. Другие сыворотки, в частности нормальная, не тормозят
агглютинацию эритроцитов.
4.
Студенты учитывают результаты РТГА в демонстрационном опыте для выявления титра
противогриппозных антител в парных сыворотках больного.
Разведение
1:10
1:20
1:40
1:80
1:160
1:320
1:640
сыворотки
109
Начало заболевания
N1H1
N2H2
Через 7 дней
N1H1
N2H2
3. Студенты учитывают результаты РСК в демонстрационном опыте для выявления титра
противопарагриппозных антител в парных сыворотках больного.
Разведение
1:10
1:20
1:40
1:80
сыворотки
Начало заболевания
I
II
Через 5 дней
I
II
4.Студенты в протокол записывают сведения о диагностических, терапевтических и
профилактических препаратах, которые применяют при гриппе, парагриппе, кори.
7.
Студенты записывают в протокольную тетрадь сроки плановой вакцинации против кори.
Автор: доцент, к.б.н. А.В.Крижановськая
Методическая разработка
по подготовке и работе на лабораторном занятии №41
для студентов стоматологического факультета
Тема: Вирусы полиомиелита, ЕСНО, Коксаки. Вирусы бешенства и энцефалитов.
Биологические свойства. Методы лабораторной диагностики заболеваний.
Актуальность темы. Основное количество случаев заболеваемости на полиомиелит, ЕСНО,
Коксаки приходится на детей. Важное значение в предупреждении заболевания имеет вакцинация
против полиомиелита, разрыв путей передачи заболевания.
Цели изучения темы.
Цель общая. Ознакомиться с методами вирусологической диагностики полиомиелита, ЕСНО,
Коксаки.
Цель конкретная. Студенты должны знать принципы микробиологической диагностики
энтеровирусных инфекций, уметь проводить учет результатов „цветной пробы”, ЦПД вируса на
культуре клеток, реакции нейтрализации цветной пробы; знать преимущества и недостатки живой
и инактивированной вакцин против полиомиелита, календарь прививок против полиомиелита.
Обеспечение исходного уровня знаний-умений.
3.1. Лекции „Вирусы. Общая характеристика. Биологические свойства”, „Специфическая
профилактика и терапия инфекционных болезней”, „Современные методы исследования
инфекционных болезней”.
3.2. Тесты на исходный уровень знаний-умений.
Пример теста.
Перед заражением культуры клеток врач-лаборант обработал исследуемый материал
пенициллином и стрептомицином. Какой возбудитель планируется выделить от больного?
А. Бактерии
В. Грибы
С. Риккетсии
Д. Вирусы
Е. ПростейшиеПравильный ответ: Д – вирусы
8. Содержание обучения.
Граф логической структуры содержания.
110
Вирусы полиомиелита, ЕСНО, Коксаки
Picornaviridae
Тип НК
Однониточная РНК
Форма
Многогранник
Сложность строения Простой
Вирус полиомиелита - серовары I, II, III
Вирусы ЕСНО - 31 серотип
Вирусы Коксаки А - 23 серотипа
Вирусы Коксаки В - 6 серотипов
Культура клеток фибробластов, HeLa
Семейство
Морфология
Антигенное строение
Методы
культивирования
Резистентность
Источник заражения
Механизм
и
пути
передачи заболевания
Органотропность
Иммунитет
Методы лабораторной
диагностики
Специфическая
профилактика
Терапия
4)
5)
Устойчивые к детергентам, спиртам
Чувствительны к альдегидам, соединениям хлора, фенола, УФЛ,
высушиванию
Больной человек, носитель
Фекально-оральный механизм
Алиментарный путь
Энтероциты, лимфоидный аппарат тонкого кишечника, мотонейроны
головного и спинного мозга
Типоспецифический
Вирусологический
Серологический
РИФ
Полиомиелита:
Живая вакцина Сейбина
Инактивированная вакцина Солка
Интерферон, иммуноглобулин
Перечень теоретических вопросов.
Классификация пикорнавирусов. Морфология и антигенная структура вирусов полиомиелита,
ЕСНО, Коксаки.
Резистентность, методы культивирования вирусов полиомиелита, ЕСНО, Коксаки.
Патогенез полиомиелита, ЕСНО, Коксаки.
Методы лабораторной диагностики заболеваний.
Профилактика заболеваний: неспецифичная, препараты для специфической профилактики
полиомиелита.
Источника учебной информации.
Литература основная.
К. Д. Пяткин, Ю. С. Кривошеин. Микробиология, М., 1980. - С. 418-423.
В. Д. Тимаков. Микробиология, М., 1983. - С. 388-393.
А. И. Коротяев, С. А. Бабичев. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология. С.Петербург, 2002. - С. 278-284.
И. Л. Дикий и соавт. Микробиология, Харьков, 1999. - С. 361-369.
Л. Б. Борисов. Руководство к практическим занятиям по микробиологии, М., 1984. - С. 264-248.
Ю. С. Кривошеин. Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии, М.,
1986. - С. 238-245.
М. Н. Лебедева. Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии, М., 1973.
- С. 236-239, 260.
Литература дополнительная.
Микробиология, вирусология, иммунология, инфекционные болезни. Словарь/ Под ред
Г.К.Палия, В.Г.Палия. - Киев: Здоровье, 2004.
Сборник задач для подготовки к тестового экзамену по естественно-научным дисциплинам
«Крок-1. Общая врачебная подготовка» /Кол.авторов; Под ред. В.Ф.Москаленка и соавт. К.:Медицина, 2004. - С.328-331.
9. Ориентировочная основа действия.
Граф логической структуры лабораторного исследования полиомиелита, ЕСНО и Коксаки
111
Материал для исследования: фекалии, ликвор, кровь, моча, секционный материал.
Вирусологическое исследование
1.
Культивирование вирусов: заражение культуры клеток HeLa (вирусы полиомиелита,
ЕСНО, Коксаки), белых мышей (вирусы Коксаки).
2.
Индикация вирусов по ЦПД, бляшкообразованию, „цветной” пробе, спастическому
параличу и смерти мышей.
3.
Идентификация вирусов в РСК, РН в культуре клеток или на новорожденных мышах.
Серологическое исследование
Выявление титра антител в парных сыворотках с помощью РСК, РН.
Экспресс-диагностика
РИФ, иммунная электронная микроскопия
10. Система целевых обучающих задач.
Примеры тестов.
У больного ребенка из испражнений выделены вирусы ЕСНО. К какому семейству они
принадлежат?
А. Ortomyxoviridae
B. Picornaviridae
C. Coronaviridae
D. Herpesviridae
E. Retroviridae
Ответ: B. Picornaviridae
7.1.
1.
2.
7. Короткие методические указания для работы студентов на лабораторном занятии.
Методика проведения занятия.
Микроскопия и зарисовка неизмененной культуры клеток и ЦПД вируса полиомиелита.
Учет результатов РН методом „цветной” пробы для идентификации вируса полиомиелита.
№ пробирки
Компоненты для постановки реакции
Рисунок
1
Культура клеток Сыворотка
Вирус типа І
в среде 199
пациента
2
Культура клеток Сыворотка
Вирус типа ІІ
в среде 199
пациента
3
Культура клеток Сыворотка
Вирус типа ІІІ
в среде 199
пациента
3. Учесть результаты РН методом „цветной” пробы для установления титра антител в сыворотке
крови больного полиомиелитом.
Разведение сыворотки
1:4
1:8
1:16
1:32
1:64
4.
Учесть результаты РСК. Определить титр антител в парных сыворотках больного
полиомиелитом.
Тип вируса
Разведение сыворотки
1:5
1:10
1:20
1:40
1:80
1:160
Начало заболевания
І
ІІ
10-и день заболевания
І
ІІ
5. Познакомиться с препаратами для профилактики и диагностики полиомиелита, ЕСНО, Коксаки.
Продолжение
112
Актуальность темы. Бешенство - острая инфекция ЦНС, которая сопровождается дегенерацией
нейронов головного и спинного мозга; летальность для человека составляет 100%. С точки зрения
передачи инфекции наиболее опасными являются собаки (до 90 % всех случаев), коты, дикие
животные (скунсы, волки, лисицы).
Вирус клещевого энцефалита встречается в западных областях Украины. Инфицирование
человека возможно алиментарным путем (некипяченое коровье и козье молоко) и при укусе
иксодовых клещей. Сезонность - весенне-летняя.
Вирус японского энцефалита вызывает заболевание в основном у детей до 14 лет. Смертность
достигает 20-80 %. Человек - тупиковый хозяин вируса. Сезонность - июнь-сентябрь. Переносчики
вируса - комары рода Culex. Ареал вируса - Япония, Китай, Индия, Корея, Филиппины, Тайвань,
юг Приморья.
Цели изучения темы.
Цель общая. Познакомиться с биологическими свойствами вирусов бешенства, японского и
клещевого энцефалитов, методами лабораторной диагностики бешенства, японского и клещевого
энцефалитов.
Цель конкретная. Усвоить: 1) методы прижизненного и постмортального выявления вируса
бешенства в организме человека; 2) дифференциальные признаки уличного и фиксированного
вирусов бешенства; 3) препараты для специфической профилактики бешенства. Уметь: 1)
осуществлять постановку РТГА с целью идентификации вирусов японского и клещевого
энцефалитов; 2) проводить учет результатов РСК, РТГА, РН с целью установления титра антител к
возбудителям японского и клещевого энцефалитов.
Обеспечение исходного уровня знаний-умений.
Лекции „Вирусы. Общая характеристика. Биологические свойства”, „Современные методы
диагностики инфекционных болезней”, „Иммунитет. Особенности противовирусного
иммунитета”.
3.2. Тесты на исходный уровень знаний-умений.
Пример теста.
Для профилактики инфекционного заболевания пациенту ввели вакцину. Какой вид
иммунитета формирует такой препарат?
А. Активный искусственный
В. Активный приобретенный
С. Пассивный искусственный
Д. Пассивный приобретенный
Е. Врожденный.
Ответ: А. Активный искусственный.
4. Содержание обучения.
4.1. Граф логической структуры содержания.
Вирус бешенства
Rabdoviridae
Семейство
Тип НК
РНК
Морфология
Форма
Пулевидная
Сложность строения Сложный
Различают „дикий” штамм и фикс-вирус.
Антигенное строение
1) Перевиваемые культуры HeLa
Методы
2) Куриный эмбрион
культивирования
3) Белые мыши
Чувствителен к детергентам, эфиру, спирту, УФЛ
Резистентность
Стойкий к низким температурам
Больные животные (кошки, собаки)
Источник заражения
Механизм
и
пути Укусы и ослюнение ран.
Инкубационный период - 12 дней - 1 год
передачи заболевания
Клетки ЦНС
Органотропность
Вируснейтрализующие АТ, интерферон.
Иммунитет
Методы лабораторной Экспресс-диагностика: РИФ, ИФА, РИА.
Молекулярно-генетический: ПЦР.
диагностики
Серологический: РСК, РТГА.
113
Биологический.
Цитоскопический: выявление телец Бабеша-Негри в гистологических
срезах головного мозга.
Живая аттенуированная вакцина
Профилактика
Культуральная инактивованная вакцина
Иммуноглобулин
Вирусы клещевого и японского энцефалитов
Flaviviridae
Семейство
Тип НК
РНК
Морфология
Форма
Сферическая
Сложность строения Сложные
Вирус клещевого энцефалита - 3 серотипа
Антигенное строение
Вирус японского энцефалита - 2 серотипа
Чувствительные к УФЛ эфиру, высокой температуре.
Методы
Стойкие к низким температурам, высушиванию.
культивирования
Клеточные культуры HeLa
Резистентность
Оболочки куриного эмбриона
Белые мыши
Животных и птицы
Источник заражения
Механизм
и
пути Трансмиссивный: иксодовые клещи, комары рода Culex.
Алиментарный: молоко.
передачи заболевания
Клетки ЦНС
Органотропность
Стойкий
Иммунитет
Методы лабораторной Вирусологический
Серологический
диагностики
Биологический
Молекулярно-генетический
Инактивированные вакцины
Профилактика
Гетерологические и гомологические иммуноглобулины
Терапия
Интерферон
4.2. Перечень теоретических вопросов.
4.1.1. Таксономическое положение, морфология и резистентность вируса бешенства.
4.1.2. Патогенез бешенства.
4.1.3. Лабораторная диагностика бешенства: прижизненная и постмортальная.
4.1.4. Профилактика бешенства: неспецифичная и специфическая.
4.1.5. Таксономическое положение, морфология и резистентность вирусов клещевого и японского
энцефалитов.
4.1.6. Методы культивирования и резистентность флавивирусов.
4.1.7. Патогенез клещевого и японского энцефалитов.
4.1.8. Методы лабораторной диагностики клещевого и японского энцефалитов.
4.1.9. Профилактика клещевого и японского энцефалитов: специфическая и неспецифичная.
4.3. Источники учебной информации.
Литература основная.
К. Д. Пяткин, Ю. С. Кривошеин. Микробиология, М., 1980. - С. 415-418, 425-427, 429-430.
В. Д. Тимаков. Микробиология, М., 1983. - С. 394-397.
А. И. Коротяев, С. А. Бабичев. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология. С.Петербург, 2002. - С. 302-306, 312-315.
И. Л. Дикий и соавт. Микробиология, Харьков, 1999. - С. 369-375.
Л. Б. Борисов. Руководство к практическим занятиям по микробиологии, М., 1984. - С. 239-240,
244-246.
Ю. С. Кривошеин. Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии, М.,
1986. - С. 232-238, 248-249.
М. Н. Лебедева. Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии, М., 1973.
- С. 239-241, 261.
114
Литература дополнительная.
Микробиология, вирусология, иммунология, инфекционные болезни. Словарь/ Под ред
Г.К.Палия, В.Г.Палия. - Киев: Здоровье, 2004. - С. 67, 102, 139, 146.
Сборник задач для подготовки к тестового экзамену по естественно-научным дисциплинам
«Крок-1. Общая врачебная подготовка» /Кол.авторов; Под ред. В.Ф.Москаленка и соавт. К.:Медицина, 2004. - С.328-331.
5.
Ориентировочная основа действия.
Граф логической структуры лабораторного исследования бешенства
Материал для исследования: слюна, слюнные железы, мозг, сыворотка крови.
Микроскопическое исследование: окраска по Туревичу и Муромцеву гистологических срезов
слюнных желез, мозга для выявления телец Бабеша-Негри.
Биологическое исследование: интрацеребральное заражение белых мышей (развитие
паралитической формы бешенства); выявление телец Бабеша-Негри.
Серологическая диагностика: выявление антирабических антител в РСК, РИА, ИФА, РН на
мышах.
Экспресс-диагностика: РИФ для выявления вирусных антигенов на мазках-отпечатках роговицы,
гистологических срезах слюнных желез или мозга.
Граф логической структуры лабораторного исследования клещевого и японского
энцефалитов.
Материал для исследования: спинномозговая жидкость, мозг, сыворотка крови.
Вирусологический метод: культивирование в культуре клеток, оболочках куриного эмбриона,
в организме новорожденных мышей.
Индикация: ЦПД, бляшкообразование, гибель мышей и куриных эмбрионов.
Идентификация: РН, РТГА, РСК.
Серологический метод: выявление титра антител в РН, РТГА, РСК с парными сыворотками.
Обнаруживают Ig M ( 3-4 день), Ig G (3 неделя).
Биологический: заражение новорожденных мышей.
Экспресс-диагностика: РИФ, РИА, ИФА.
Молекулярно-генетический метод: ПЦР.
6. Система обучающих задач.
Примеры тестов.
Пациенту для профилактики бешенства была введена живая аттенуированная вакцина. Чем
обеспечивается иммунитет после прививки против бешенства?
А. Фагоцитозом
В. Антитоксинами
С. Интерференцией
Д. Преципитинами
Е. Гемолизинами
Ответ: С. Интерференцией.
7. Краткие методические указания для работы студентов на лабораторном занятии.
7.1. Методика проведения занятия.
1. Осуществить постановку реакции торможения гемагглютинации (капельний метод) с целью
идентификации вирусов японского и клещевого энцефалитов. На предметное стекло к
исследуемому материалу вносят диагностические сыворотки, а потом взвесь эритроцитов. Вид
вируса определяют по сыворотке, которая тормозит гемагглютинацию эритроцитов.
2. Провести учет результатов реакции нейтрализации, поставленную с целью установления титра
антител к вирусу клещевого энцефалита в сыворотке крови пациента. Диагностический титр - 1:10
и выше.
Разведение сыворотки
1:10
1:20
1:40
1:80
1:160
115
3. Провести учет реакции связывания комплемента, поставленной с целью установления титра
антител в сыворотке крови больного японским энцефалитом. Диагностический титр - 1:64-1:256.
Разведение сыворотки
1:5
1:10
1:20
1:40
1:80
1:160
1:320
11.
Провести учет результатов реакции торможения гемагглютинации, поставленную с целью
установления титра антител к возбудителям японского и клещевого энцефалитов. В первый ряд
луночек планшетки к разведению сыворотки (1:10-1:5120) внесли диагностикум вируса клещевого
энцефалита, во второй ряд - диагностикум вируса японского энцефалита. Диагностический титр 1:1280 и выше.
Разведение
1:10
1:20
1:40
1:80
1:160
1:320
1:640
1:1280 1:2560
сыворотки
Вирус
клещевого
энцефалита
Вирус
японского
энцефалита
Автор: доцент, к.б.н. А.В.Крижановская
Методическая разработка
по подготовке и работе на лабораторном занятии №42
для студентов стоматологического факультета
Тема: Вирусы гепатитов. Биологические свойства. Методы лабораторной диагностики
заболеваний.
1. Актуальность темы. Проблема заболеваемости вирусными гепатитами чрезвычайно актуальна
сегодня, так как возбудители служат причиной массовые заболеваний на всех континентах.
Ежегодно регистрируют приблизительно 350 случаев заболевания на 100 тыс. население. Сейчас
описано и изучено 9 видов вирусов гепатитов, которые принадлежат к разным семействам.
Наиболее полно изучены вирусы гепатитов А и В.
Цели изучения темы.
Цель общая. Ознакомиться с методами микробиологической диагностики гепатитов.
Цель конкретная. Знать дифференциальные признаки вирусов гепатитов; уметь объяснить
принципы постановки иммуноферментного анализа (ИФА) с целью выявления антигенов вирусов
в исследуемом материале.
3.
Обеспечение исходного уровня знаний-умений.
3.1. Лекции «Вирусы. Общая характеристика. Биологические свойства”, „Современные методы
диагностики инфекционных болезней”.
3.2. Тесты на исходный уровень знаний-умений.
Пример теста.
Защита организма от возбудителей инфекционных болезней обеспечивается неспецифичными и
специфическими факторами иммунитета. Определите факторы, которые характерные для
противовирусного иммунитета.
А. Ингибиторы ферментов агрессии
В. Интерферон, секреторные иммуноглобулины А
С. Нормальные антитела
Д. Реагины
Е. Специфические антитела-антитоксины
2.
116
4.
Семейство
Размеры
(нм)
Форма
Правильный ответ: В. Интерферон, секреторные иммуноглобулины А.
Содержание обучения.
Граф логической структуры содержания.
ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЕЙ ВИРУСНЫХ ГЕПАТИТОВ
ВГА
ВГВ
BГС
ВГД
ВГЕ
ВГF
HepadnaFlaviviridae Дефектный СaliciАdenoPICORNAviridae
рибозим
viridae
viridae
VIRIDAE
27
42
30-60
35
30-32
50-100
Сферический
РНК
сложный
Сферический
РНК
сложный
Икосаедр
Икосаедр
РНК
простой
Сферический
ДНК
сложный
Стойкий
к
кислотам,
дезрастворам, t0
(90)
фекальнооральный
Сезонное
Стойкий к t0
(120),
чувствителен
к кислотам
парентеральный
Везде
Чувствителен
к
эфиру,
кислотам
парентеральный
Везде
Чувствителен
к кислотам
Острая
Хроническая
Острая
Средняя
Хроническая
Тяжелая
Острая
Легкая
Хроническая
Легкая
Легкая
Легкая
Хроническая
Средняя
Нет
Есть
Есть
Есть
Нет
Нет
Есть
ИКОСАЕДР
Геном
Вирион
Резистентность
Механизм
передачи
Распространение
Форма
инфекции
Степень
тяжести
Онкогенн
ые
свойства
ВГG
Flavivirida
e
парентеральный
Эпидемиическое
40-50
Сферический
РНК
ДНК Рнк
простой
простой СЛОЖНЫ
Й
ЧувствиСтойкий к Стойкий
телен
к кислотам
к
перепаду
T0 (90)
температур
фекальнофекальнопарентеоральный
оральный
ральний
Эпидемии- СпорадиЭпидемии
ческое
ческое
-ческое
Перечень теоретических вопросов.
Классификация вирусов гепатитов. Их дифференциальные признаки.
Ультраструктура, антигенное строение и резистентность вируса гепатита А.
Патогенез вирусного эпидемического гепатита.
Ультраструктура, антигенное строение и резистентность вируса гепатита В.
Патогенез вирусного эпидемического гепатита.
Методы лабораторной диагностики вирусных гепатитов.
Профилактика вирусных гепатитов.
Источника учебной информации.
Литература основная.
А. И. Коротяев, С. А. Бабичев. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология. С.Петербург, 2002. - С. 286-295.
И. Л. Дикий и соавт. Микробиология, Харьков, 1999. - С. 356-361, 387-391.
Л. Б. Борисов. Руководство к практическим занятиям по микробиологии, М., 1984. - С. 246-248.
Ю. С. Кривошеин. Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии, М., 1986.
- С. 245-248.
Литература дополнительная.
Микробиология, вирусология, иммунология, инфекционные болезни. Словарь/ Под ред Г.К.Палия,
В.К.Палия. - Киев: Здоровье, 2004.
Сборник задач для подготовки к тестовому экзамену по естественно-научным дисциплинам
«Крок-1. Общая врачебная подготовка» /Кол.авторов; под ред. В.Ф.Москаленка и соавт. К.:Медицина, 2004. - С.328-331.
5.
Ориентировочная основа действия.
117
1.
2.
3.
4.
6.
Граф логической структуры микробиологического исследования гепатитов
Материал для исследования: сыворотка крови, испражнения.
Выявление вирусов - иммунная электронная микроскопия
Выявление антигенов вирусов - ИФА, РИА.
Выявление антител - РНГА, ИФА, РИА.
Выявление генетического материала вирусов - ПЦР.
Система целевых обучающих задач.
Примеры тестов.
К вирусам гепатитов, которые содержат РНК принадлежат:
А. Вирус гепатита А, дельта-вирус
В. Вирусы гепатитов F и D
С. Вирусы гепатитов А и В
Д. Вирусы гепатита G и TT-вирус
Е. Вирусы гепатита В и Sen-вирус
Ответ: А - Вирус гепатита А, дельта-вирус
Краткие методические указания для работы студентов на лабораторном занятии.
Методика проведения занятия.
1. Ознакомиться с принципом постановки ИФА с целью выявления специфических антигенов в
сыворотке крови больного. На занятии в качестве твердофазного носителя используют планшеты с
адсорбированными на дне лунок антителами. У лунки вносят по 1 капле исследуемой сыворотки и
помещают планшеты в термостат при t 37 0C. Промывают луночки буферным раствором и вносят
меченые ферментом (пероксидазой) антитела против этого антигена (прямой вариант). Планшеты
помещают в термостат при t 37 0C. Промывают луночки буферным раствором, вносят по 1 капле
перекиси водорода и ортофенилдиамина (ОФД). Планшеты помещают в термостат до появления
желтой окраски в лунке с контролем. Количество присоединенного к твердой фазе энзима
соответствует количеству антигенов. При наличии в исследуемой сыворотке антигенов вируса в
лунках изменяется цвет жидкости на желтый или на желто-коричневый (результат
положительный). В лунках с сывороткой, которая не содержит антигенов вирусов, цвет жидкости
не изменяется (результат отрицательный). Зарисовать схему реакции.
2. Познакомиться с принципом постановки реакции гибридизации нуклеиновых кислот. Целью
метода является выявление в исследуемом материале участков ДНК, характерные для данного
возбудителя. Для этого используют их гибридизацию с диагностическими ДНК-зондами. ДНКзонды - это однониточные фрагменты ДНК (комплементарные к специфическим участкам ДНК
возбудителя), меченные радионуклидами, ферментами или флуорохромами. Схему реакции
зарисовать.
3. Провести учет результатов реакции связывания комплемента, поставленную с сывороткой
больного гепатитом А.
Разведение сыворотки
1:5
1:10
1:20
1:40
1:80
1:160
7.
Провести учет результатов реакции пассивной гемагглютинации, поставленную с
сывороткой больного хроническим гепатитом В и эритроцитами, нагруженными HBsAg.
Разведение сыворотки
1:5
1:10
1:20
1:40
1:80
1:160
Начало заболевания
4.
Через 7 дней
5.
Записать препараты для профилактики гепатитов А и В план прививок против гепатита В.
Автор: доцент, к.б.н. А.В.Крижановская
Методическая разработка
по подготовке и работе на лабораторном занятии №43
для студентов стоматологического факультета
118
Тема: Вирус иммунодефицита человека. Биологические свойства. Методы лабораторной
диагностики СПИДа.
Актуальность темы. Среди пораженных вирусом иммунодефицита 10-30 % пациентов болеют
тяжелой формой, 30-40 % - средней тяжести, а другие много лет остаются носителями.
Цели изучения темы.
Цель общая. Ознакомиться с методами диагностики ВИЧ-инфекции.
Цель конкретная. Знать этапы постановки иммуноферментного анализа для выявления
противовирусных антител; интерпретировать результаты ИФА, поставленную с целью выявления
противовирусных антител.
Обеспечение исходного уровня знаний-умений.
Лекции „Вирусы. Общая характеристика. Биологические свойства”, „Современные методы
диагностики инфекционных болезней”, „Иммунитет. Особенности противовирусного
иммунитета”.
3.2. Тесты на исходный уровень знаний-умений.
Пример теста.
У пациент диагностировано вирусное заболевание. Какой метод микробиологической диагностики
был использован для установления диагноза?
А. Аллергический
В. Микроскопический
С. Молекулярно-генетический
Д. Биохимический
Е. Фаготипирование
Ответ: С. Молекулярно-генетический
Содержание обучения.
Граф логической структуры содержания.
Вирус иммунодефицита человека
Retroviridae
Семейство
Тип НК
Двухниточная РНК
Морфология
Форма
Сферическая
Сложность строения Сложный
Поверхностные Аг (гликопротеины суперкапсида (gp 41, gp 120)
Антигенное строение
Внутренние типоспецифические Аг (структурные белки капсида матриксный белок - р17, капсидный белок - р 24, связывающие белки
- р9 и р6)
Перевиваемые культуры лейкозных Т-хелперов
Методы
Монослойные культуры астроцитов
культивирования
Первичные культуры Т-хелперов, стимулированные ИЛ-2.
Чувствительный к Н2О2, концентрированным кислотам и щелочам,
Резистентность
жирорастворителям
(этиловый
спирт,
эфир,
ацетон),
глютаральдегиду.
Стойкий к низким температурам, ионизирующей радиации, УФЛ
Больной человек, носитель (ВИЛ-инфицированный)
Источник заражения
Механизм
и
пути Парентеральный и трансплацентарный механизмы.
Половой, трансфузионный, инструментальный, инъекционный,
передачи заболевания
трансплантационный, трансплацентарный пути.
Клетки из CD-4 рецепторами: макрофаги, моноциты, дендритные
Органотропность
клетки лимфатических узлов, астроциты, олигодендроциты
головного мозга, клетки Лангерганса, Т-хелперы.
Развитие иммунодепрессии.
Иммунитет
Методы лабораторной 1) ИФА
2) РИА
диагностики
3) иммуноблотинг
4) ПЦР
Раннее выявление источника инфекции.
Профилактика
119
Терапия
1.
2.
3.
4.
5.
Разрыв механизмов и путей передачи инфекции.
1)
нуклеозидные ингибиторы обратной транскриптазы
2)
ненуклеозидные ингибиторы обратной транскриптазы
3)
ингибиторы протеазы
4)
ингибитор интегразы
5) блокираторы вирусных рецепторов
Перечень теоретических вопросов.
Общая характеристика семейства Ретровирусов. Классификация, роль в патогенезе
человека.
Ультраструктура, антигенное строение, резистентность ВИЧ.
Патогенез ВИЧ-инфекции.
Методы лабораторной диагностики ВИЧ-инфекции.
Профилактика СПИДа.
Источника учебной информации.
Литература основная.
А. И. Коротяев, С. А. Бабичев. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология. С.Петербург, 2002. - С. 319-327.
И. Л. Дикий и соавт. Микробиология, Харьков, 1999. - С. 375-387.
Литература дополнительная.
Микробиология, вирусология, иммунология, инфекционные болезни. Словарь/Под ред.
Г.К.Палия, В.Г.Палия. - Киев: Здоровье, 2004.
Сборник задач для подготовки к тестового экзамену по естественно-научным дисциплинам
«Крок-1. Общая врачебная подготовка» /Кол.авторов; Под ред. В.Ф.Москаленка и соавт. К.:Медицина, 2004. - С.328-331.
Ориентировочная основа действия.
Граф логической структуры микробиологического исследования ВИЧ-инфекции
Материал для исследования: кровь, сыворотка.
Серологическая диагностика.
1 этап - выявление антител с помощью ИФА (трехкратный повтор).
2 этап - выявление антител к определенным вирусным белкам с помощью иммуноблотинга.
Молекулярно-генетический метод.
Выявление провируса в лимфоцитах, вирусных нуклеиновых кислот в патологическом материале
с помощью ПЦР.
Вирусологическая диагностика.
1 этап - заражение культур клеток Т-лимфоцитов.
2 этап - идентификация вирусов с помощью ИФА, РИА.
13.
Система целевых обучающих задач.
Примеры тестов.
Репродукция каких вирусов включает обязательную интеграцию их нуклеиновой кислоты в геном
клетки-хозяина.
А. Ретровирусов
В. Ортомиксовирусов
С. Пикорнавирусов
Д. Рабдовирусов
Е. Ротавирусов
Ответ: А. Ретровирусов
12.
14.
Короткие методические указания для работы студентов на лабораторном занятии.
Методика проведения занятия.
1. Ознакомиться с принципом постановки иммуноферментного метода с целью выявления
специфических антиВИЧ-антител в сыворотке крови больного.
Для воспроизведения принципа ИФА на занятии в качестве твердофазного носителя
используются планшетки с адсорбированными на дне лунок антигенами. Студенты в лунки вносят
120
по одной капле исследуемых сывороток и ставят планшетки в термостат на 30 минут (37 0С).
Потом промывают буферным раствором и вносят меченные ферментом (пероксидазой)
антивидовые (антииммуноглобулиновые) сыворотки. Планшеты ставят в термостат на 30-40
минут при температуре 37 0С. Промывают лунки буферным раствором, вносят по капле Н2О2 и
ортофенилдиамина (ОФД). Ставят в термостат до появления желтой окраски в лунке с
контрольной положительной сывороткой. Интенсивность окраски коррелирует с количеством
присоединенного к твердой фазе энзима и отвечает количеству вирусспецифических антител в
исследуемой сыворотке. Схему реакции зарисовать.
Автор: доцент, к.б.н. А.В.Крижановская
Методическая разработка
по подготовке и работе на лабораторном занятии №44
для студентов стоматологического факультета.
Тема:
Герпесвирусы. Биологические свойства. Методы лабораторной диагностики
заболеваний.
1.3.
Актуальность темы.
Множество путей и легкость передачи герпесвирусов, большое разнообразие клинических форм и
распространенность заболеваний, возможная онтогенная активность возбудителя обусловливает
актуальность герпесной инфекции.
1.2. Цели изучения темы.
1.2.1. Цель общая.
Освоить биологические свойства вирусов альфа-, бета- и гамма-герпесвирусов, их роль в
патологии человека.
1.2.2. Цель конкретная.
1. Овладеть методами идентификации вирусов герпеса.
2. Освоить методы диагностики герпетической инфекции.
3. Освоить специфическую профилактику и лечение герпетической инфекции.
1.3. Обеспечение исходного уровня знаний-умений:
1. Морфология и ультраструктура вирусов.
2. Взаимодействие вируса с клеткой хозяина.
3. Культивирование вирусов.
4. Индикация вирусов.
1.3. Тесты на исходный уровень знаний-умений:
1.3.1. Вирусы, являющиеся абсолютными внутриклеточными паразитами, культивируют:
A – в культурах тканей
B – в среде 199
C – в среде Хэнкса
D – в куриных эмбрионах
E – в организме чувствительных животных
Правильный ответ: A, D, E
1.4. Содержание занятия.
Вирусы роду Herpesviridae являются возбудителями широко распространенных – простого
герпеса, ветряной оспы и опаясывающего герпеса. Среди взрослых часто выявляется
вирусоносительство.
121
Для диагностики этих заболеваний используют вирусологические и серологические исследования.
Виросологическое исследование проводят путем заражения исследуемым материалом культур
ткани (почки кролика, эмбрионы человека).
Серологическая диагностика основана на выявлении с помощью РСК, РН, РИФ, ИФА –
нарастание в 4 раза титра специфических антител в крови больного в динамике заболевания.
Используют экпресс-диагностику – в мазках-отпечатках из спинно-мозговой жидкости выявляют с
помощью противогерпесной флюоресцирующей сыворотки.
1.4.1. Граф логической структуры микробиологической диагностики герпесвирусной инфекции.
1. Вирусологический метод.
Материал для исследования: содержимое пузырьков, соскобы в области высыпаний.
Поставить и учесть ИФА.
2. Граф логической структуры вирусологической диагностики ветряной оспы.
Серологический метод.
Материал для исследования: сыворотка крови больного.
Учесть результаты РСК, поставленной с парными сыворотками больного.
1.4.2. Перечень теоретических вопросов:
1. Общая характеристика семейства герпесвирусов.
2. Классификация герпесвирусов.
3. Морфология и биологические свойства вируса простого герпеса, характеристика серотипов
вируса.
4. Патогенез заболеваний, обусловленных вирусами простого герпеса. Особенности течения
герпетической инфекции. Персистенция вируса.
5. Морфология и биологические свойства вируса ветряной оспы и опоясывающего лишая.
6. Морфология и биологические свойства цитомегаловируса.
7. Патогенез заболеваний, которые вызывают вирусы ветряной оспы и цитомегаловирусы.
8. Лабораторная диагностика герпетичной инфекции (цитологический, вирусологический,
серологический, биологический методы).
9.
Специфическая профилактика и терапия герпетических инфекций. Химиопрепараты,
используемые для лечения герпетических инфекций.
1.4.3. Источники учебной информации.
Основная литература:
К.Д.Пяткін, Ю.С.Кривошеїн. Мікробіологія, 1992, с.340-342
К.Д.Пяткин, Ю.С.Кривошеин. Микробиология, 1980, с.380-403
В.Д.Тимаков. Микробиология, 1983, с.418-422
А.И.Коротяев, С.А.Бабич. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология, СанктПетергбург, 2002, с.294-299
И.Л.Дикий, И.Ю.Халупяк, Н.Е.Шевелева, М.Ю.Стегний. Микробиология, Харьков, 1999, с.391394
О.І.Клименюк, І.О.Ситник, М.С.Творко, В.П.Широбоків. Практична мікробіологія, Тернопіль,
2004, с.354-356
Л.Б.Борисов. Медицинская микробиологии, вирусология, иммунология, М., 2002, с.256-552
Ю.С.Кривошеин. Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии,
М.,1986, с.225-227
Дополнительная литература:
Гайдаш І.С., Флегонтові В.В. Медична вірусологія, Луганськ, 2002, с.150-156
Посібник з медичної вірусології. Заг. ред. В.М.Гиріна, К., 1995, с.256-261
1.5. Ориентировочная основа действий (ООД)
Диагностика герпесвирусной инфекции
Материал для исследования
Сыворотка крови
122
Клинический – корочки, содержимое везикул, слюна,
спинно- мозговая жидкость, сгусток
крови, клетки крови в выделениях
шейки матки или влагалища, мазки из
выделений язвы слизистой оболочки
полости рта, половых органов,
соскобы пораженной роговицы.
Секционный – кусочки ткани головного и спинного
мозга, печени, лимфотические узлы,
нервные ганглии.
Методы исследования
Экспрессные
Вирусологический
І этап
МФА,
РИА, ИФА
Выделение вируса в
культурах тканей (почки
кроликов, эмбрионы
человека)
Конечный
результат 6-24 час.
час.
ІІ этап
Индикация поЦПД
(образование
синцития)
ІІІ этап
Идентификация
вируса по РН, МФА
Конечный
результат 3-4 суток
Биологический
Серологический
І этап
Заражения
животных (белые
мыши, кролики,
куриные
эмбрионы)
ІІ этап
РСК, РПГА,
ИФА, РИА
Конечный
результат 18-48
Индикация по клиническим
проявлениям (кератоконьюктивит, язвы и рубцы на
роговице; энцефалит,
летальный исход. На
хорионалантоисной оболочке
куриных эмбрионов-бляшки)
ІІІ этап
Идентификация ви
руса по РН
Конечный
результат 40 час.-5 суток
1.6. Система обучающиих заданий.
1.6.1. Больная М. 25 лет, страдает рецидивирующим лабиальным герпесом. Какие методы лечения
можно рекомендовать больной:
A – лечение химиопрепаратами (зовиракс, герпевир и др.) во время обострения
B – антибиотикотерапия
C – использование герпетической инактивированной вакцины в период реконвалесценции
D – серотерапия
E – рентгенотерапия
Правильный ответ: во время оборстрения используют лечение химиопрепаратами, в период
реконвалесценции – герпетическая инактивированная вакцина.
1.7. Короткие методические указания для работы студентов на лабораторном занятии.
1.7.1. Методика проведения занятия.
Лабораторная диагностика герпесной инфекции базируется на испльзовании экспресс-методов
(вирусологический и серологический) и серологического.
123
Экспресс-диагностика включает методы выявления вирус-специфического антигена с помощью
ИФА и МФА.
Серологический метод основан на выявлении увеличения титра антител с помощью РПГА, ИФА,
РСК.
1. С целью экспресс-диагностики герпетической инфекции поставить и учесть ИФА для
выявления вирус-специфического антигена в исследуваемом материале (содержимое везикул,
соскобы в области высыпаний). Для этого в лунки полистеролового планшета, на дне которых
коньюгированы антигерпетические антитела, вносим исследуемый материал, помещаем в
термостат, промывами буферным раствором и добавляем антиглобулиновую (антивидовую)
сыворотку, меченую ферментом пероксидазой хрона. После термостатирования и промывки
буфером вносим Н2О2 и ортофенилдиамин (ОФД). Изменение цвета жидкости свидетельствует о
наличии герпесвируса в исследуемом материале.
2. Учесть результаты РСК, поставленной с парными сыворотками больного для выявления
нарастания (в 4 рази) титра антител с целью диагностики ветряной оспы.
Автор: ассистент, к.м.н. Колодий С.А.
124