УДК 616.1 ОЦЕНКА РЕЗУЛЬТАТОВ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ТРОПОНИНОВ РАЗНЫМИ МЕТОДАМИ И ВОЗНИКАЮЩИЕ С НИМИ ПРОБЛЕМЫ Республиканский кардиологический диспансер, Чебоксары, Россия Е.В. ЮРЬЕВА В.Н.МИХАЙЛОВ Т.Н. МИЗУРОВА Т.А. ТАРАБАН Аннотация В статье рассматриваются вопросы, возникающие при сравнении результатов определений кардиоспецифических тестов тропонина Т качественным бесприборным методом и тропонина I проведенных на разных анализаторах с разным уровнем нижнего предела определения и проблемы их трактовки на практике. Ключевые слова. Тропонины, методы определения, кардиоспецифические тесты, чувствительность. Введение. В настоящее время количественное определение тропонинов, наряду с другими биохимическими маркерами ОКС, входит во все рекомендации по диагностике острого коронарного синдрома (ОКС) и инфаркта миокарда (ИМ). В клинико-диагностической лаборатории (КДЛ) 2 Республиканского кардиологического диспансера определение тропонина Т (сТнТ) бесприборным методом началось с 2000 года, количественное определение тропонина I (сTnI) проводится с 2009 года и с 2013 году проводится определение высокочувствительного тропонина I (hs-сTnI). Однако, по мере внедрения более современных методов появляются новые вопросы и проблемы использования тропонинов в диагностике ИМ и ОКС. Повышенный уровень тропонинов отражает некроз клеток миокарда, хотя вопрос о возможности утечки тропонинов из ишемически обратимо поврежденных клеток нельзя считать окончательно решенным. В то же время, в литературе представляются заболевания и состояния, при которых отмечается гипертропонинемия, не связанная и не обусловленная ОКС, как кардиального генеза, так и «внесердечного» генеза. В частности, гипертропонинемии, различными манипуляциями на сердечной мышце связанные с (кардиохирургические вмешательства, стентирование, кардиоверсия, травмы сердца), заболеваниями сердца (застойная сердечная недостаточность, миокардиты, кардиомиопатии, гипертензия с выраженной дистрофией левого желудочка, фибрилляция предсердий, суправентрикулярная тахикардия, хроническим ревматическим болезнью сердца (ХРБС)), ишемической болезнью сердца (ИБС), стенокардией напряжения (СН) разного функционального класса (ФК) и «внесердечными» заболеваниями, при которых гипертропонинемии могут быть обусловлены повреждением миокарда скорее токсического, уремического генеза (ХПН – 3 терминальная стадия, тромбоэмболия легочной артерии (ТЭЛА), мультиорганная недостаточность, химиотерапия, рабдомиолиз, токсическое воздействие – укус скорпиона, передозировка наркотиков, тяжелая физическая нагрузка и др.). Механизм данных повреждений, как правило, неишемического характера и может быть связано гибелью кардиомиоцитов как через некроз, так и через апоптоз [3, 4]. Есть также проблема, связанная с методами определения тропонинов. Количественное определение тропонинов базируется на моноклональных антителах к различным эпитопам сTnI , которые циркулируют в крови как свободный сTnI, бинарный комплекс сTnI- сTnС, как тройной комплекс сTnIсTnC-сTnT, как фосфорилированные и окисленные производные как свободного сTnI, так и его комплексов, от наличия интерферирующих гетерогенных антител и аутоантител и т.д. [1, 2]. В связи с чем, тропониновые тесты различных производителей отличаются по чувствительности, и в реальности, по специфичности к разным эпитопам. Цель и задачи. Проанализировать возможные коррелятивные связи между бесприборным качественным тестом сТнТ и количественным определением сTnI и сходимость и корреляцию между количественным определением сTnI и hs-сTnI системами разных производителей. Материалы и методы. Были проанализированы результаты исследования сыворотки крови больных (n=153) за 5 месяцев 2011 года с определением в 4 крови сТнТ бесприборным методом тест-системами второй генерации «Троп Т сенситив» с нижним пределом чувствительности 0,06 нг/мл в венозной крови (производитель COBAS) у которых одновременно разницей времени не более 1 часа определяли в сыворотке крови (сTnI) методом хемилюминесцентного иммунного анализа на иммунохимической системе Access 2 (производитель BECMAN CULTER) с нижним пределом определения (НПО) 0,01 нг/мл (99 перцентилем здоровых людей 0,05 нг/мл) – всего 153 пациента без ИМ, у которых в последующем не было нарастания уровня сTnI. Отдельно были проанализированы результаты исследования сыворотки крови пациентов (n=35), которым одновременно определили количественно сTnI и hs-сTnI методом хемилюминесцентного иммунного анализа на анализаторе PATHFAST (производитель Mitsubishi Chtmical Medience Corporation) с НПО 0,001 нг/мл (99 перцентилем здоровых людей 0,02 нг/мл). Были выделены следующие группы по выявлению сТнТ и уровня сTnI: группа А («тропонин-негативные»), группа В («тропонин-позитивные»). Группы А и В были поделены на подгруппы в зависимости от уровня сTnI: - А1 (n=109) - не превышающие 99 перцентиль (0,00-0,05 нг/мл); - А2 (n=18) – не превышающие 2-кратно 99 перцентиль (0,05-0,10 нг/мл); - А3 (n=13) - не превышающие 99,9 перцентиль (0,11-0,5 нг/мл); - А4 (n=4) - не превышающая 20 кратного увеличения от верхнего предела референсной нормы (0,51-1,0 нг/мл); 5 - А5 (n=1) - превышающие верхний предел референсной нормы более 20 кратно (выше 1,01 нг/мл); - В1 (n=0) - не превышающие 99 перцентиль (0,00-0,05 нг/мл) - случаев не было; - В2 (n=4) – не превышающие 2-кратно 99 перцентиль (0,05-0,10 нг/мл); - В3 (n=4) - не превышающие 99,9 перцентиль (0,11-0,5 нг/мл); В группе В с положительным результатом сТнТ не было случаев сTnI превышающих 99,9 перцентиль (более 0,51 нг/мл) (таблица 1). Отдельно были проанализированы исследования крови больных вне зависимости от патологии количественно сTnI и hs-сTnI и были сформированы следующие группы (кровь для исследования забиралась одномоментно): - С (n=23) - hs-сTnI не превышающие 99 перцентиль 0,02 нг/мл; - Д (n=10) - hs-сTnI превышающий 99 перцентиль 10-кратно (0,02-0,2 нг/мл); - Е (n=2) - hs-сTnI превышающий 99 перцентиль более 100-кратно 0,2 нг/мл (таблица 2). Результаты и обсуждение. Как показывают результаты исследований, при отрицательном тесте на сТнТ уровень сTnI, определенный количественно, варьирует в достаточно широких пределах (от 0,00 до 1,21 нг/мл) и в нашем случае, повышенный уровень сTnI в группе А2 выявлялся у больных с ИБС СН ФК II-III - 12 случаев, оперированное сердце по поводу ХРБС – 1, 6 постинфарктный кардиосклероз (ПИКС) – 5; в группе А3 – ИБС полная АВблокада - 7, ПИКС – 3, дилятационная кардиомиопатия – 2, ТЭЛА – 1; в группе А4 – ИБС ПИКС -3, послеоперационное состояние по поводу протезирования митрального клапана (МК) и трикуспидального клапана (ТК) – 1; в группе А5 – ИБС СН ФК III ПИКС – 1 (таблица 1). Кажущееся несоответствие повышения уровня сTnI и отрицательный тест на сТнТ в группах А2-А5 может быть связано недостаточной чувствительностью тест-систем и моноклональных антител к различным эпитопам тропонинов. Выявление сТнТ и повышение уровня сTnI у больных без ИМ полностью согласуется с литературными данными о возможности повышения тропонинов без нарушения целостности кардиомиоцита [1]. Анализ проведенных исследований сTnI и hs-сTnI (таблица 2) показал, что уровень тропонина I определенный на разных анализаторах, отличается более чем в 2 раза при наличии достоверной корреляции, более выраженной при повышенных уровнях. Выводы и заключение. Для оценки выраженности повышения кардиальных тропонинов необходимо использование не абсолютного значения, а его относительного повышения относительно 99 перцентиля, который у разных производителей может отличаться значительно и даже в несколько раз, что согласуется с данными авторов [1, 2]. Повышение уровня тропонинов вне ИМ, в нашем случае были кардиального генеза, связанные с болезнями сердца и 7 манипуляциями на сердце. Более низкий уровень hs-сTnI по сравнению с сTnI, с большей долей вероятности, необходимо отнести к особенностям технологии, заложенной в метод определения производителем и учитывать при необходимости сравнения аналитических характеристик тестов. Таблица 1 Уровни тропонина сTnI в зависимости от обнаружения сТнТ Группа n Уровень сTnI, нг/мл Частота выявления, % «тропонин-отрицательные» А1 109 0,023±0,005; (0,00-0,05) 71,2 А2 18 0,076±0,003; (0,06-0,10) 11,8 8 А3 13 0,212±0,024; (0,11-0,50) 8,5 А4 4 0,765±0,087; (0,51-1,0) 2,6 А5 1 1,21 0,7 «тропонин-положительные» В2 4 0,078±0,006; (0,06-0,10) 2,6 В3 4 0,235±0,035; (0,11-0,50) 2,6 Таблица 2 Взаимосвязь тропонинов hs-сTnI и сTnI Группа n hs-сTnI, нг/мл сTnI, нг/мл r С 23 0,0055±0,0008 0,0348±0,0096 0,432 (Р*=0,0199) (Р**=0,0039) 9 Д 10 Е 0,0504±0,0102 2 11,7-39,2 0,1180±0,0248 0,973 (Р*=0,021) (Р**=1,15) 32,32-95,0 где Р* - достоверность разницы между уровнем hs-сTnI и сTnI; Р** - достоверность коэффициента корреляции r между hs-сTnI и сTnI. Список литературы 1. Вельков В.В. Революция в кардиологии – высокочувствительное определение кардиальных тропонинов – «тропонин-отрицательных» больше нет. Клиниколабораторный консилиум. Научно-практический журнал, 2011; 4 (40),С. 24-43 2. Вельков В.В. Высокочувствительное измерение кардиальных тропонинов: тест, который спасает жизни. Клинико-лабораторный консилиум, Научно- практический журнал 2012; № 1 (41), С. 47-52. 3. Сапрыкин Д.Б. Гипертропонинемии, не обусловленные повреждением миокарда, при остром коронарном синдроме. Лабораторная медицина, Журнал Российской ассоциации медицинской лабораторной диагностики, 2005; 7, С 25-28. 10 4. Сапрыкин Д.Б. Современный статус применения миокардиальных маркеров некроза при остром коронарном синдроме. Лабораторная медицина, Журнал Российской ассоциации медицинской лабораторной диагностики, 2009; 10, С 3538. СВДЕНИЯ ОБ АВТОРАХ Юрьева Елизавета Васильевна, заведующая клинико-диагностической лаборатории БУ «Республиканский кардиологический диспансер» Минздравсоцразвития Чувашии, кандидат биологических наук, Заслуженный работник здравоохранения Чувашской Республики; Михайлов Владимир Николаевич, заведующий отделением реанимации и интенсивной терапии БУ «Республиканский кардиологический диспансер» Минздравсоцразвития Чувашии; Мизурова Татьяна Николаевна, главный врач БУ «Республиканский кардиологический диспансер» Минздравсоцразвития Чувашии, Залуженный врач Чувашской Республики; Тарабан Татьяна «Республиканский Александровна, кардиологический заместитель главного диспансер» Минздравсоцразвития Чувашии, Заслуженный врач Чувашской Республики. Адрес: г. Чебоксары, ул. Ф. Гладкова, д. 29А Тел. 554245 врача БУ 11 Email: ipkard_2@medinform.su, rkd-omo-002@med.cap.ru