EmbryoFreeze/Thaw kit with Propanediol Набор сред для замораживания и оттаивания эмбрионов человека. EmbryoFreeze/ Thaw kit with Propanediol стерилизована методом фильтрования. Документ FP09I10 R01B.2 Дата издания 22/03/2011 Общая информация EmbryoFreeze и EmbryoThaw представляют собой набор сред для замораживания (криоконсервации) и оттаивания человеческих эмбрионов на стадии между 2PN – 4 клеток. Содержат пропандиол, неорганический фосфатный буфер (PBS), сахарозу и человеческий альбумин (тестированный на ВИЧ и гепатит). EmbryoFreeze/ Thaw не содержит антибиотики. Материалы, включённые в набор Код продукта EMF30_P – на 30 процедур 3фл х10 мл EmbryoFreeze 3фл х10 мл EmbryoThaw №1 3фл х10 мл EmbryoThaw №2 3фл х10 мл EmbryoThaw №3 Материалы, не включённые в набор Стерильные микропипетки Чашки Петри Соломинки Автоматический замораживатель Ёмкость с жидким азотом (LN2) Стол с подогревом Микроскоп Водяная баня Таймер EmbryoFreeze/Thaw with Propanediol и культуральные среды EmbryoFreeze/ Thaw with Propanediol может быть использована в комбинации со средами FertiCult Flushing, FertiCult IVF/FIV, FertiCult G3 medium как до замораживания, так и после оттаивания. Спецификация продукта и контроль качества EmbryoFreeze/ Thaw произведена в соответствии со сл. спецификацией РН 7.2 – 7.4 Осмолярность EmbryoThaw 3 530-560 mOsm/kg Стерильность SAL 10ˉ³ Эндотоксины < 0.25 EU/ml Эмбрионы мыши (бластоцисты после 96 часов) ≥ 80% Сертификат анализов по запросу Предварительные рекомендации Не используйте продукт, если появилось помутнение или признаки микробной контаминации. Не используйте продукт, в случае повреждения крышки флакона во время транспортировки. Инструкция по хранению - хранить при 2-8С - не замораживать перед использованием - хранить в темном месте, беречь от солнца - после вскрытия контейнера не использовать продукт дольше 7 дней - не использовать после даты, указанной на упаковке Меры предосторожности EmbryoFreeze/ Thaw with Propanediol содержит человеческий сывороточный альбумин. Источники материалов, из которых эти компоненты получены, показали отрицательный результат при тестировании на антитела HIV и HCV и отрицательную реакцию на HbsAg, HCV RNA и HIV-1 RNA и сифилис. Известные на сегодняшний день методы подтверждают, что продукты, полученные из крови человека, не переносят какие-либо инфекции. Тем не менее, работайте со всеми компонентами так, как если бы они были опасны на ВИЧ или гепатит. Всегда надевайте защитную одежду. Всегда работайте с соблюдением строгих гигиенических условий во избежание возможной контаминации. Метод Убедитесь, что растворы хорошо перемешаны и не содержат взвеси. Замораживание 1. Используя стерильную пипетку, поместите 1мл замораживающей среды в центр лунки (при комнатной температуре) 2. Поместите эмбрионы в стадии 2 PN в замораживающую среду и оставьте на 30 сек. Внимание! Из-за разной плотности эмбрионы имеют тенденцию всплывать и сморщиваться. 3. Загрузите эмбрионы в соломинки, оставив приблизительно 1/5 часть воздуха в соломинке. 4. Запечатайте соломинки и промаркируйте именем, датой и кол-вом эмбрионов 5. Начинайте программу по замораживанию через 5-10 минут. Ниже в таблице приводится протокол замораживания Этап Этап 1 Этап 2 Этап 3 Этап 4 Этап 5 Температурный режим от комнатной темп. до +4оС от +4оС до -6оС -6оС (выдержка) от -6оС до -30оС от -30оС до -196оС Скорость изменения температуры -10оС/мин -2оС/мин 0оС/мин -0,3оС/мин -199оС/мин Время 2 минуты 5 минут 10 минут 80 минут 1 минута Оттаивание 1. Поместите в 4-х луночную плашку по 1 мл каждого оттаивающего раствора №№ 1,2,3. Оставшаяся пустая лунка необходима для эмбрионов. 2. Подготовьте водяную баню t 37ºС для оттаивания соломинок. Подготовьте 1-мл туберкулиновый шприц, наполнив его 0,8 мл воздуха и затем 0,2 мл оттаивающей среды №1 3. Перенесите соломинки из жидкого азота и оставьте при комнатной температуре на 5 секунд 4. Погрузите соломинки в водяную баню на 5 секунд. (Убедитесь, что в соломинке не остались замороженные частички) 5. Освободите соломинки, открыв оба конца, над пустой лункой и выдавите содержимое шприца через соломинку со смесью 6. Используя микроскоп, соберите эмбрионы и переместите их в лунку с раствором №1 7. Переместите эмбрионы в оттаивающий раствор №2 через 3-5 мин 8. Через следующие 3-5 минут перенесите эмбрионы в оттаивающий раствор №3, оставьте их в растворе на 3-5 минут перед дальнейшей процедурой. 9. На финальной стадии эмбрионы переносятся в культуральную среду FertiCult IVF/FIV (FertiPro) для промывки и дальнейшего культивирования