VitriFreeze ES medium VitriThaw ES medium

VitriFreeze ES medium
VitriThaw ES medium
VitriFreeze ES medium - набор сред для витрификации эмбрионов человека ранней стадии,
универсальный
VitriThaw ES medium - набор сред для оттаивания эмбрионов человека ранней стадии,
универсальный
Документ FP09I46 02 R01В.2, дата издания 14/01//2011
VitriFreeze ES medium и VitriThaw ES medium (VitriFreeze/Thaw ES) стерилизованы
стерильной фильтрацией
Использование
Протокол витрификации и оттаивания с помощью VitriFreeze ES medium и VitriThaw ES
medium предназначен для использования человеческих эмбрионов на любой стадии от 2PN
до бластоцист (зигота - стадия дробления – бластоциста).
Введение
Витрификация – процедура быстрого замораживания с использованием жидких растворов,
проникающих в клетки, без образования кристаллических структур. Данная технология
может быть более популярна, чем медленное замораживание. Ультра-быстрая витрификация
зигот и эмбрионов с использованием открытых систем, таких как «Hemi-Straw» и «VitriPlug»,
допускавших прямой контакт с жидким азотом, явились результатом большого количества
здоровых детей. Но, в соответствии с Европейским законодательством в сфере
криоконсервации человеческих клеток, были разработаны герметичные закрытые
(асептические) системы, которые позволяют избегать прямого контакта эмбриона с жидким
азотом при замораживании и длительном хранении. С этой целью разработаны HSV (High
Security Vitrification kit - CryoBioSystem) и VitriSafe Plug (MTG). Оба устройства состоят из
внутренней соломинки с желобком, для размещения небольшого количества среды с 1-м или
2-мя эмбрионами. Далее внутренняя соломинка помещается во внешнюю, защитную
соломинку, которая запечатывается до погружения в жидкий азот.
Благодаря термоизоляции, скорость охлаждения в этой системе уменьшена в сравнении с
открытыми системами. Поэтому, большая часть криопротектора успевает проникать в клетки
и предохраняет их от разрушения. Формула VitriFreeze ES medium разработана таким
образом, что позволят криопротектору проникать в клетки на любых стадиях развития
эмбриона, а VitriThaw ES – постепенно удалять из них криопротектор.
Состав
VitriFreeze/Thaw ES medium - ДМСО/ этиленгликолевая (DMSO/EG) базовая
витрификационная среда, содержащая фосфатный буфер, сахарозу, фиколь, человеческий
альбумин. VitriFreeze/Thaw ES medium не содержит антибиотиков.
Материалы, включенные в набор
Замораживающий набор - VitriFreeze ES medium
1флакон VitriFreeze ES – Pre-incubation medium - пре-инкубационная среда
1флакон VitriFreeze ES – Freezing medium1– замораживающая среда 1 этап (5% DMSO –
5%/EG)
1флакон VitriFreeze ES – Freezing medium2 - замораживающая среда 2 этап (10% DMSO –
10%/EG)
1флакон VitriFreeze ES – Freezing medium3 - замораживающая среда 3 этап (20% DMSO –
20%/EG)
Размораживающий набор - VitriThaw ES medium
1флакон VitriThaw ES –Thawing medium 1 - оттаивающая среда 1 этап
1флакон VitriThaw ES –Thawing medium 2- оттаивающая среда 2 этап
1флакон VitriThaw ES –Thawing medium 3 - оттаивающая среда 3 этап
1флакон VitriThaw ES –Thawing medium 4 - оттаивающая среда 4 этап
1флакон VitriThaw ES –Thawing medium 5 - оттаивающая среда 5 этап
Среды должны использоваться в соответствии с указанными номерами
Материалы, не включенные в набор
Планшеты с лунками (e.g. Nunc 144 444)
Замораживающая ёмкость с жидким азотом
Водяная баня 37°С
Дозирующие пипетки
Держатель
Набор для витрификации «High Security Vitrification kit», CryoBioSystem
Ламинарный шкаф микроскоп таймер
VitriFreeze/Thaw ES medium и эмбриональные культуры
VitriFreeze/Thaw ES medium могут использоваться в комбинации со средами FertiPro для
культивирования, такими как среды FertiCult Flushihg, FertiCult IVF/FIV, FertiCult G 3
medium как до замораживания, так и после оттаивания.
Спецификация продукта и контроль качества
VitriFreeze ES и VitriThaw ES (VitriFreeze/Thaw ES) произведены в соответствии со следующей
спецификацией:
Контроль рН
7.20 – 7.40
Контроль осмолярности
VitriFreeze ES – Pre-incubation medium - пре-инкубационная среда 270-290 mOsm/кг
VitriThaw ES – Thawing ES 2 - оттаивающая среда 2
815-845 mOsm/кг
VitriThaw ES – Thawing ES 3 - оттаивающая среда 3 этап
535-565 mOsm/кг
VitriThaw ES – Thawing ES 4 - оттаивающая среда 4 этап
405-435 mOsm/кг
VitriThaw ES – Thawing ES 5 - оттаивающая среда 5 этап
270-290 mOsm/кг
Тест на уровень эндотоксинов (LAL) < 0.25 EU/ml
Тест на стерильность
стерилен
Эмбрионы мыши (бластоцисты через 96 часов в среде)
≥ 80%
Предварительная подготовка
Убедитесь, что все среды хорошо размешены перед использованием.
Проверьте, нет ли взвесей или помутнения. При наличии осадка - не использовать!
Процедура проводится в ламинарном потоке, во избежание загрязнения растворов.
Тщательно ознакомьтесь с инструкцией перед началом работы
Инструкция по хранению
Хранить при температуре 2-8˚С, не замораживать перед использованием. Защищать от
солнечного света. Среда предназначена для однократного использования. Не использовать в
процедуре повторно, а также после окончания срока годности.
Предостережения
VitriFreeze ES medium и VitriThaw ES medium содержат человеческий сывороточный
альбумин. Все человеческие органические материалы могут быть потенциально
инфицированы. Соблюдайте меры предосторожности! Все компоненты крови должны
рассматриваться как потенциально инфекционные. Источники материалов, из которых эти
компоненты получены, показали отрицательный результат при тестировании на антитела
HIV HBc HCV HTLV 1/2 и отрицательную реакцию на HbsAg, HCV RNA и HIV-1 RNA и
сифилис. VitriFreeze ES medium и VitriThaw ES medium не содержат антибиотиков. Среды
должны всегда использоваться в ламинарном потоке во избежание контаминации.
Влияние длительного хранения витрифицированных эмбрионов с использованием данной
среды на деторождение - не установлено. Не использовать при помутнении!
Метод
Убедитесь, что все среды хорошо размешены перед использованием.
Проверьте, нет ли взвесей или помутнения. При наличии осадка - не используйте!
Процедура проводится в ламинарном потоке, во избежание загрязнения растворов
Тщательно ознакомьтесь с инструкцией перед началом работы. Мы рекомендуем строгое
следование пошаговой инструкции по витрификации и оттаиванию
Подготовка к процедуре
В четырех- луночной чашке заполните: в первую лунку - 300 мкл пре-инкубационной среды
Pre-incubation medium, во вторую – замораживающую среду 1 - Freezing medium1, в третью –
замораживающую среду 2 - Freezing medium 2 и в четвёртую – замораживающую среду 3 Freezing medium 3, Далее, откройте столько соломинок, сколько необходимо для
витрификации, имея в виду, что 1 соломинка удерживает до 2-х эмбрионов. Поочередно
разложите составные части соломинок в ламинарном шкафу для упрощения их дальнейшего
использования в процедуре. В одной подготовленной порции среды может быть проведено
до 5 витрификационных циклов для одного пациента. Не используйте данную среду для
других пациентов.
Подготовка к замораживанию
Переносите эмбрионы из среды, где они находятся, в витрификационные растворы по
следующей схеме:
Замораживающая процедура в закрытой (асептической) системе
Перед использованием подогрейте все среды VitriFreeze ES medium до комнатной
температуры (22°С). Время нахождения эмбрионов в витрификационных растворах:
Стадия
Pre-incubation
medium
зиготы
2-х
клеточные
4-8 клеток
морулы
ранние
бластоцисты
увеличенные
бластоцисты
2'
Freezing
medium 1
5'-10'
Freezing
medium 2
4'-5'
Freezing
medium 3
40"-60"
2'
2'
2'
5'-7'
5'-7'
5'-7'
4'
4'
4'
40"-60"
40"-60"
40"-60"
2'
5'-10'
4'
40"-60"
Внимание: Полная процедура, включая помещение эмбриона в среду Freezing medium 3
(VitriFreeze ES), загрузка эмбриона во внутреннюю витрификационную соломинку, перенос
во внешнюю соломинку и её запечатывание, должны занимать не более 60 секунд перед
погружением в жидкий азот. В случае, если этот процесс займёт более 60 секунд, обратите
внимание на полученный результат позднее.
Замораживающая процедура в открытой системе
Перед использованием подогрейте все среды VitriFreeze ES medium до комнатной
температуры (22°С). Время нахождения эмбрионов в витрификационных растворах:
Стадия
зиготы 2-х
клеточные
4-8 клеток
морулы
ранние
Pre-incubation
medium
2'
Freezing
medium 1
2'
Freezing
medium 2
3'
Freezing medium
3
30"-40"
2'
2'
2'
2'
2'
2'
3'
3'
3'
30"-40"
30"-40"
30"-40"
бластоцисты
увеличенные
бластоцисты
2'
2'
4'
30"-40"
Внимание: Полная процедура, включая помещение эмбриона в среду Freezing medium 3
(VitriFreeze ES), загрузка эмбриона во внутреннюю витрификационную соломинку, перенос
во внешнюю соломинку и её запечатывание, должны занимать не более 60 секунд перед
погружением в жидкий азот. В случае, если этот процесс займёт более 60 секунд, в
последствии обратите внимание на результат.
Оттаивающая процедура в закрытой системе
Перед использованием подогрейте среду VitriThaw ES –Thawing 1 (оттаивающая среда 1) до
температуры 37°С, все остальные среды до комнатной температуры (22°С).
Время нахождения эмбрионов в витрификационных растворах:
Стадия
зиготы 2-х
клеточные
4-8 клеток
морулы
ранние
бластоцисты
увеличенные
бластоцисты
Thawing ES
1оттаивающая
среда 1
1'
Thawing ES
Thawing ES
Thawing ES
Thawing ES
1/2
2
3
4
оттаивающая оттаивающая оттаивающая оттаивающая
среда 1/2
среда 2
среда 3
среда 4
1'
1' -2'
2' -4'
2' -4'
1' -1' 30"
1' -1' 30"
1' -1' 30"
1' -1' 30"
1' -1' 30"
1' -1' 30"
1' -2'
1' -2'
1' -2'
2' -4'
2' -4'
2' -4'
2' -4'
2' -4'
2' -4'
1' -1' 30"
1' -1' 30"
1' -2'
2' -4'
2' -4'
* - Смесь 1 часть VitriThaw ES –Thawing 1 и 1 часть VitriThaw ES –Thawing 2
Оттаивающая процедура в открытой системе
Перед использованием подогрейте среду VitriThaw ES –Thawing 2 (оттаивающая среда 2) до
температуры 37°С, все остальные среды до комнатной температуры (22°С).
Время нахождения эмбрионов в витрификационных растворах:
Стадия
зиготы 2-х
клеточные
4-8 клеток
морулы
ранние
бластоцисты
увеличенные
бластоцисты
Thawing ES
Thawing ES
Thawing ES
2
3
4
оттаивающая оттаивающая оттаивающая
среда 2
среда 3
среда 4
2'
2' -4'
2' -4'
2'
2'
2'
2' -4'
2' -4'
2' -4'
2' -4'
2' -4'
2' -4'
2'
2' -4'
2' -4'