Практическое занятие №
реклама
Тема: Биохимия крови. Занятие №1. Актуальность темы. Врач должен знать химический состав и физико-химические свойства крови, поскольку малейшие изменения в организме сопровождаются изменением в составе крови. В связи с этим, проведение определения в сыворотке крови белковых фракций и общего белка, мочевины и креатинина имеет важное значение в диагностике различных заболеваний. Учебные и воспитательные цели: Общая цель: привить знания о клиническом значении биохимического анализа крови в практике врача. Частные цели: - уметь определять количество общего белка и белковых фракций в сыворотке крови рефрактометрическим методом; - владеть электрофоретическим методом определения белковых фракций. 1. Входной контроль знаний. 1.1. Тесты. 1.2. Устный опрос. 2. 2.1. 2.2. 2.3. 2.4. 2.5. 2.6. Основные вопросы темы: Что такое кровь и каковы ее функции? Физико-химические свойства и химический состав крови. Белки крови и их роль в организме. Гипопротеинемия, гиперпротеинемия, диспротеинемия, парапротеинемия, причины возникновения. Небелковые азотсодержащие вещества крови. Клиническое значение определения мочевины, креатинина в крови. Клиническое значение биохимического анализа крови. 3. Лабораторно-практические работы: 3.1. Методика определения общего белка и белковых фракций в сыворотке крови рефрактометрическим методом; 3.2. Методика определения белковых фракций методом электрофореза на бумаге. 4. Выходной контроль. 4.1. Ситуационные задачи. 5. Литература. 5.1. Материал лекций. 5.2. Березов Т.Т., Коровкин Б.Ф. Биологическая химия. М.: Медицина, 1990.С. 567-582. 5.3. Биохимия под ред. Е.С. Северина, А.Я. Николаева М.: ГЭОТАР-МЕД, 2011г. 2. Основные вопросы темы. 2.1. Что такое кровь и каковы ее функции? КРОВЬ – жидкая подвижная ткань, обеспечивающая постоянство внутренней среды организма. Функции крови: - Дыхательная – Hb транспортирует кислород и углекислый газ; - Транспортная – перенос питательных веществ, промежуточных и конечных метаболитов обмена веществ; - Выделительная функция – удаляет конечные продукты обмена (мочевина, креатинин, мочевая кислота и др.); - Защитная – участвует в иммунитете (иммуноглобулины), в процессе свертывания (фибриноген); - Регуляторная – осуществляет транспорт гормонов к органам мишеням; - Терморегуляторная – поддерживает постоянство температуры тела в разных его частях. 2.2. Физико-химические свойства и химический состав крови. Общий объем крови взрослого человека составляет 5-6 л или 7-8% массы тела, у детей эта цифра несколько выше. Кровь состоит из жидкой части плазмы и форменных элементов (эритроциты, лейкоциты и тромбоциты). Физико-химические свойства крови: - Поддерживает кислотно-щелочной баланс. В норме рН крови – 7,36-7,4; - Вязкость крови в 5-6 раз выше вязкости воды; - Относительная плотность цельной крови – 1,050-1,064; - Осмотическое давление плазмы крови ≈ 7,6 атм. Химический состав крови: 1.Белки плазмы (альбумины, глобулины, фибриноген) – 7%; 2.Небелковые компоненты (глюкоза, липиды, аминокислоты, креатин, мочевина, билирубин) – 2%; 3.Неорганические компоненты (NaCl, CaCl2, Na2HРO4) – 0,9%. 2.3. Белки крови и их роль в организме. Белки крови: альбумины, глобулины, фибриноген Содержание общего белка у взрослых – 65-85 г/л, у грудных детей – 41-73 г/л Функции белков крови: - Обуславливают онкотическое давление крови; - Поддерживают постоянство рН крови; - Обуславливают вязкость крови; - Осуществляют транспорт нерастворимых в воде веществ (жирные кислоты, билирубин, аспирин и др.); - Участвуют в иммунитете (γ-глобулины); - Участвуют в свертывании крови (фибриноген); - Являются резервом аминокислот (при белковом голодании и др.). Альбумины: содержание – 40-50 г/л, молекулярная масса – 68-70 тыс. дальтон Глобулины Содержание глобулинов в крови – 20-30 г/л. Молекулярная масса – 160-180 тыс. дальтон Методом электрофореза на бумаге выделены α1, α2, β и γ-глобулиновые фракции. α и β-глобулины синтезируются в печени, а γ-глобулины - В-лимфоцитами. α1- глобулины: - Ингибиторы протеиназ (антитрипсин и т.д.); - Протромбин α2- глобулины: - Церулоплазмин – белок небесно-голубого цвета, транспортирует медь, поддерживая нормальный уровень её в тканях, особенно в печени; - Гаптоглобины – комплексы белка с гемоглобином. Эти комплексы не могут экскретироваться (высокая м.м.) почками, предотвращается потеря Fe; - Антитромбин III - Ретинолсвязывающий белок – транспорт ретинола β-глобулины: - Трансферрин – транспорт Fe в различные ткани; - Фибриноген γ-глобулины (иммуноглобулины) – антитела У новорожденных и детей грудного возраста антитела не синтезируются и должны поступать в составе грудного молока. Фибриноген – 2-4 г/л, молекулярная масса – 330 тыс. дальтон. 2.4. Гипопротеинемия, гиперпротеинемия, диспротеинемия, парапротеинемия, причины возникновения. Гипопротеинемия – уменьшение содержания общего белка крови. Наблюдается при кровотечениях, злокачественных новообразованиях, нарушениях функции почек, печени, голодании и др. Гиперпротеинемия – повышение содержания общего белка крови. Относительная гиперпротеинемия связана с потерей воды, а, следовательно, повышением концентрации общего белка (поносы, рвота, сахарный и несахарный диабет, холера, дизентерия). Абсолютная гиперпротеинемия возникает вследствие повышенного образования белков, например, образование γ-глобулинов при инфекционных заболеваниях. Диспротеинемии – это изменения в соотношении отдельных белковых фракций. В норме А/Г=1,5-2,3 (альбумино-глобулиновый коэффициент). Содержание общего белка остается в норме. Причины: - Нарушения функций почек, А/Г коэффициент уменьшается за счет потери в большей степени альбуминов; - Нарушения функций печени. А/Г коэффициент снижается за счет уменьшения синтеза альбуминов и глобулинов; - Инфекционные заболевания, сопровождающиеся повышением антител. Парапротеинемии – появление белков, которые не существуют в норме. - Интерферон – специфический белок, синтезирующийся в организме в результате проникновения различных вирусов; - С-реактивный белок – появляется в крови в острый период болезни (белок острой фазы) или в период обострения хронического процесса (пневмония, ревматизм и др.); - Миеломные белки – при миеломной болезни; - Макроглобулины – при макроглобулинемия Вальденстрема; 2.5. Небелковые азотсодержащие вещества крови. Клиническое значение определения мочевины, креатинина в крови. К ним относятся конечные продукты обмена: мочевина – 50%, аминокислоты – 25%, мочевая кислота, креатин, креатинин, билирубин, индикан, холин, нуклеотиды, полипептиды. Азот, входящий в состав этих соединений «остаточный азот», т.е. остающийся в фильтрате после осаждения белков. В норме - 14,2-28,4 ммоль/л. При некоторых заболеваниях эта величина повышается (азотемия). Азотемия: 1.Ретенционная – почечная и внепочечная (сердечно-сосудистая недостаточность, снижение АД, снижение почечного кровотока). 2.Продукционная – усиленный распад белков тканей: злокачественные новообразования, ожоги, кахексия. В настоящее время вместо остаточного азота крови определяют содержание мочевины и креатинина. В норме: Мочевина- 3,3-8,3 ммоль/л Креатинин-0,044-0,11 ммоль/л. 2.6. Клиническое значение биохимического анализа крови. В норме химический состав крови постоянен, но может отражать малейшие изменения в метаболизме организма. Учитывая доступность этой биологической жидкости и возможность многократного проведения биохимического анализа крови, создается возможность по анализу крови установить диагноз, прогноз заболевания, а также осуществить контроль эффективности лечения. 3. Лабораторно-практические работы. 3.1. Методика определения общего белка и белковых фракций в сыворотке крови рефрактометрическим методом. ПРИНЦИП МЕТОДА состоит в том, что степень рефракции обусловлена количеством растворенных в растворе частиц. Практически коэффициент рефракции сыворотки крови довольно точно свидетельствует о количественном содержании в ней белка. ХОД АНАЛИЗА: Взять 2 пробирки для центрифугирования. В одну отмерить 0,6 мл сыворотки крови, а в другую - 0,6 мл воды. Затем той же пипеткой в обе пробирки добавить по 0,6 мл насыщенного раствора сернокислого аммония. Раствор сернокислого аммония к сыворотке крови добавляют маленькими порциями, медленно, чтобы не образовались пузырьки при этом происходит осаждение глобулина. Легкими поворотами содержимое пробирки осторожно смешивают и центрифугируют пробирку с сывороткой крови 5 мин при скорости 1000 – 1500 об/мин. Пока происходит центрифугирование сыворотки, рефрактометрируют: 1.Н2О (дистиллированная) 2.Полунасыщенный раствор сернокислого аммония (2-ая пробирка). 3.Неосажденную сыворотку. Записывают результаты рефрактометрирования - показатель рефракции (НД). Рефракция солей сыворотки - величина постоянная и равна 0,002. Из отцентрифугированной сыворотки берут каплю из прозрачного верхнего слоя и также рефрактометрируют. РАСЧЕТ ДЛЯ АЛЬБУМИНОВ: НД альбуминов = (НД осажденной сыворотки - НД полунасыщенного р-ра сернокислого аммония х 2 - 0,002/ показатель рефракции солей сыворотки). 1% р-р альбуминов имеет показатель рефракции равный 0,00177, затем рассчитывают процентное содержание альбуминов: 1% - 0,00177 Х% - НД альбуминов 1х НД альб. Х = 0,00177 РАСЧЕТ ДЛЯ ГЛОБУЛИНОВ: НД альбуминов = (НД неосажденной сыворотки - НД воды - НД альбуминов - 0,002). 1% р-р глобулинов имеет показатель рефракции равный 0,00229. По пропорции находят содержание глобулинов: 1% - 0,00229 1х НД глоб. Х% - НД глобулинов Х= 0,00229 По сумме альбуминов и глобулинов находят общий белок и коэффициент А/Г. 3.2. Методика определения белковых фракций методом электрофореза на бумаге. ПРИНЦИП МЕТОДА: Метод основан на различии величины заряда белков сыворотки крови. Если нанести каплю сыворотки на полоску хроматографической бумаги, смоченной буферным раствором, и пропустить через эту полоску постоянный электрический ток, отдельные белки будут продвигаться в электрическом поле с различной скоростью. При рН=8,6 белки сыворотки крови движутся по направлению к аноду, поскольку они обладают в этих условиях отрицательным зарядом. Наиболее быстро движутся альбумины, затем 1- и 2-глобулины, далее - глобулины и наконец - глобулины. АППАРАТУРА: Прибор для определения белков в крови методом электрофореза на бумаге состоит из выпрямителя, электрофоретической кюветы и денситометра. ХОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ: Кюветы заполняются вероналовым буфером рН = 8,6. Нарезают из хроматографической бумаги полоски длиной 38 см., шириной 3 см., полоски смачивают буферным раствором и помещают в кювету. Ближе к отрицательному полюсу наносится сыворотка (0,01 мл), затем прибор включается в электрическую сеть. Электрофоретическое разделение белков сыворотки на бумаге производится обычно в течение 6- 24 часов при напряжении 150 Вт и силе тока 6-8 А. По истечении указанного срока бумажные полоски сушат в сушильном шкафу при температуре около 100 градусов в течение 5 мин., затем красят бромфеноловым синим. Остатки красителя, не связавшегося с белками, отмывают с полоски бумаги 10% уксусной кислотой. Количественное определение белковых фракций проводится с помощью денситометра или путём экстрагирования спиртовым раствором щелочи с последующим определением концентрация краски фотоколориметрически. Тема: Биохимия крови. Метаболизм гемоглобина. Занятие №2. Актуальность темы. Минеральный состав крови чрезвычайно разнообразен и играет большую роль в жизнедеятельности организма, например, в процессе роста и развития ребенка обмен кальция и связанных с ним фосфатов. Снижение содержания кальция может сопровождаться повышением нервно-мышечной возбудимости, судорогами (тетания новорожденных). Развитию гипокальциемии у новорожденных способствует сахарный диабет у матери, недоношенность и т.д. Чрезмерные дозы витамина «Д» вызывают гиперкальциемию с отрицательными последствиями для организма. Основным белком, осуществляющим снабжение тканей кислородом и освобождение их от углекислоты, является гемоглобин. В связи с этим, изучение обмена гемоглобина и определение его концентрации является чрезвычайно важным, а также актуальным является клиническое значение определения содержания желчных пигментов крови, моче и кале в дифференциальной диагностике различных видов желтух (гемолитическая, желтуха новорожденных, обтурационная, паренхиматозная). Учебные и воспитательные цели: Общая цель: привить знания о минеральном составе крови, механизме свертывания крови, метаболизме гемоглобина. Частные цели: - уметь определять уровень кальция в сыворотке крови; - владеть методикой определения концентрации гемоглобина в крови. 1. Входной контроль знаний. 1.1. Тесты. 1.2. Устный опрос. 2. 2.1. 2.2. 2.3. 2.4. 2.5. 2.6. Основные вопросы темы: Минеральные составные части крови, значение их для организма. Механизм свертывания крови. Противосвертывающая система и система фибринолиза. Метаболизм гемоглобина. Синтез гема, гемоглобина. Распад гемоглобина. Прямой (конъюгированный) и непрямой (неконъюгированный) билирубин. Клиническое значение определения содержания желчных пигментов крови, моче и кале в дифференциальной диагностике различных видов желтух (гемолитическая, желтуха новорожденных, обтурационная, паренхиматозная). 3. Лабораторно-практические работы: 3.1. Методика определения кальция в сыворотке крови; 3.2. Методика определения концентрации гемоглобина в крови. 4. Выходной контроль. 4.1. Ситуационные задачи. 5. Литература: 5.1. Материалы лекций. 5.2. Березов Т.Т., Коровкин Б.Ф. Биологическая химия. М.: Медицина, 1990. С. 582-585, 599-607. 5.3. Биохимия под ред. Е.С. Северина, А.Я. Николаева М.: ГЭОТАР-МЕД, 2011г. 2. Основные вопросы темы: 2.1. Минеральные составные части крови, значение их для организма. Различают несколько фракций кальция: ионизированный кальций, кальций неионизированный, но способный к диализу, и недиализирующийся (недиффундирующий), связанный с белками кальций. Кальций принимает активное участие в процессах нервно-мышечной возбудимости (как антагонист ионов К+), мышечного сокращения, свертывания крови, образует структурную основу костного скелета, влияет на проницаемость клеточных мембран и т.д. Отчетливое повышение уровня кальция в плазме крови наблюдается при развитии опухолей в костях, гиперплазии или аденоме паращитовидных желез. В таких случаях кальций поступает в плазму из костей, которые становятся ломкими. Важное диагностическое значение имеет определение уровня кальция при гипокальциемии. Состояние гипокальциемии наблюдается при гипопаратиреозе. Нарушение функции паращитовидных желе приводит к резкому снижению содержания ионизированного кальция в крови, что может сопровождаться судорожными приступами (тетания). Понижение концентрации кальция в плазме отмечают также при рахите, спру, обтурационной желтухе, нефрозах и гломерулонефритах. 2.2. Механизм свертывания крови. Система свертывания крови представляет собой каскадную цепь протеолитических реакций. Каскадность реакций обеспечивает постепенное усиление первоначального слабого сигнала – воздействия, вызывающего активацию внутреннего и внешнего пусковых механизмов свертывания. Каждая последующая стадия приводит к образованию все больших количеств активной формы очередного фактора. Происходит лавинообразное нарастание «мощности» каждой следующей ступени каскада, в результате стадия превращения фибриногена в фибрин протекает очень быстро. Первая стадия – сокращение поврежденного сосуда. Вторая стадия – образование белого тромба. Протромбин (VII фактор) под действием тромбопластина (III) тромбоцитов и ионов кальция (IV) превращается в активную форму – тромбин. В этой стадии участвуют факторы внешнего пускового механизма свертывания: проконвертин (VII); проакцелерин (V); фактор Стюарта (Х), а также факторы внутреннего пускового механизма свертывания: фактор Кристмаса (IХ); фактор Розенталя (ХI); фактор Хагемана (ХII) Третья стадия – образование красного тромба. Тромбин активирует фибриноген (I), превращая его в активную форму фибрин – мономер. Затем образуется фибрин – полимер (фибриновый гель), который не отличается прочностью. Его легко может разрушить механическое воздействие. Под действием фермента трансглутаминазы (ХIIIa) образуются прочные ковалентные связи между мономерами фибрина, а также между фибрином и белком фибронектином, стабилизируя гель фибрина. Через час тромб сжимается (ретракция тромба). Затем происходит фибринолиз (четвертая стадия). Плазминоген под действием фермента урокиназы и тканевого активатора плазминогена (ТАП) превращается в активную форму – плазмин (частичный протеолиз), который расщепляет в фибрине – полимере пептидные связи. Тромб в течение нескольких дней рассасывается. СХЕМА СВЕРТЫВАНИЯ КРОВИ И ФИБРИНОЛИЗА IX – фактор Кристмаса XI – фактор Розенталя XII – фактор Хагемана X – фактор Стюарта VII – проконвертин V – проакцелерин Тромбопластин – III (тромбоцитов ) протромбин – II Ca2+ - IV тромбин фибриноген– I фибрин (мономер) урокиназа плазминоген плазмин фибрин (полимер) ТАП Расщепляет пептидные связи в фибрине-полимере36 Роль витамина К в свертывании крови. Витамин К входит в состав ферментов, катализирующих карбоксилирование глутаминовой кислоты с образованием γ-карбоксиглутаминовой кислоты, входящей в состав факторов свертывания крови: II, VII, IХ, Х. 2.3. Противосвертывающая система. Ингибиторы факторов свертывания крови: 1. белок плазмы антитромбин III, инактивирующий большинство факторов свертывания крови; 2. другие белки – ингибиторы протеиназ (α- макроглобулин, антиконвертин, тромбомодулин). Антикоагулянты: 1. гепарин, активирующий антитромбин III; 2. антивитамины К – дикумарин, неодикумарин и др. 2.4. Метаболизм гемоглобина. Синтез гема, гемоглобина. МЕТАБОЛИЗМ ГЕМОГЛОБИНА Синтез и распад происходит в клетках РЭС: селезенка, печень, костный мозг. Схема биосинтеза гемоглобина аминолевулинсинтаза аминолевулиновая к-та COOH CH2 - COOH + (CH2)2 O C ~ S КоА СУКЦИНИЛ-КоА порфобилиоген NH2 Глицин протопорфирин + Fe 2+ (феррохелатаза) Гем + глобин- Нb Регуляция синтеза гемоглобина Гем и Нв - аллостерические репрессоры аминолевулин -синтетазы, а стероидные гормоны - индукторы аминолевулинсинтазы(механизм обратной связи). 18 2.5.Распад гемоглобина. Прямой (конъюгированный) и непрямой (неконъюгированный) билирубин. Гемоглобин, освобождающийся из эритроцитов, которые разрушаются через 120 дней, в крови соединяется с гаптоглобином –α2-глобулин и транспортируется в клетки РЭС, главным образом селезенки. Здесь Нb окисляется в метгемоглобин, а затем подвергается распаду. При этом гаптоглобин отщепляется и переходит в кровь. Под действием гемоксигеназы происходит расщепление α-метинового мостика гема, соединяющего два соседних пиррольных кольца. Кольцевая структура гема разрывается и образуется вердоглобин. От вердоглобина отщепляется железо, которое связывается с белком – трансферином и доставляется с кровью в печень и глобин. Глобин гидролизуется катепсинами селезенки до аминокислот и в результате образуется биливердин – желчный пигмент зеленого цвета, который восстанавливается при участии биливердинредуктазы в билирубин – желчный пигмент красно-желтого цвета. Он является токсичным, неконъюгированным (не связанным с глюкуроновой кислотой), непрямым (так как не может давать прямую реакцию с диазореактивом), плохо растворим в воде и крови и поэтому, транспортируется в печень в комплексе с альбумином. Одна молекула альбумина свободно присоединяет 10-35 молекул билирубина. Вследствие прочной связи с белком, билирубин не экскретируется с мочой. В печени под действием УДФ – глюкуронилтрансферазы билирубин взаимодействует с глюкуроновой кислотой (в составе УДФ-ГК) образуется билирубинглюкуронид – конъюгированный, прямой, нетоксичный и хорошо растворимый в воде. Билирубинглюкурониды лишь в незначительных количествах могут диффундировать в кровеносные капилляры. Поэтому в плазме крови присутствуют две формы билирубина: неконъюгированный – 75% и конъюгированный – 25%,которые вместе составляют общий билирубин. Концентрация общего билирубина в крови здорового человека - 3,5-19 мкмоль/л, у грудных детей – 3,4-14 мкмоль/л. В составе желчи прямой билирубин секретируется в 12-перстную кишку, где под действием гидролаз бактерий происходит отщепление глюкуроновой кислоты. В тонком кишечнике билирубин под действием бактерий превращается в мезобилиноген (уробилиноген). Часть мезобилиногена всасывается в кишечнике и по воротной вене поступает в печень, где полностью расщепляется до моно- и дипирролов. Большая часть мезобилиногена из тонкой кишки поступает в толстый кишечник, где под действием анаэробных бактерий восстанавливается до стеркобилиногена, который, как и уробилиноген, бесцветен. Основная часть стеркобилиногена, выделяемая с каловыми массами, окисляется на воздухе в стеркобилин – оранжево-желтый пигмент, определяющий цвет каловых масс. В сутки с калом выделяется до 250 мг стеркобилина. Небольшая часть стеркобилиногена всасывается в прямой кишке, через систему геморроидальных вен поступает в нижнюю полую вену и через почки выводится с мочой. Стеркобилиноген мочи окисляется в стеркобилин, частично определяя нормальный соломенно-желтый цвет мочи. В сутки с мочой выделяется 1-4 мг стеркобилина. СХЕМА РАСПАДА ГЕМОГЛОБИНА Hв + гаптоглобин (α2- глобулин) ЭРИТРОЦИТЫ 120 дней Клетки РЭС +3 Hв окисляется в метгемоглобин (Fe ) Кровь - гаптоглобин гемоксигеназа ВЕРДОГЛОБИН катепсины Аминокис-ты глобин ПеченьтрансферинFe+3 БИЛИВЕРДИН – пигмент зеленого цвета НАДФH+H+ биливердинредуктаза НАДФ БИЛИРУБИН – пигмент красно-желтого цвета ( непрямой, неконъюгированный, + токсичный) АЛЬБУМИН КРОВЬ 25 ПЕЧЕНЬ БИЛИРУБИН + УДФ-глюкуроновая кислота УДФ-глюкуронилтрансфераза Моно-, диглюкуронид билирубин (прямой, конъюгированный, нетоксичный) Глюкуроновая кислота Мезобилиноген (уробилиноген) Тонкий кишечник Толстый кишечник в печени распаддо моно- и дипирролов Стеркобилиноген – бесцветный пигмент В прямой кишке- по системе геморроидальных вен в нижнюю полую вену стеркобилин- желто-оранжевый (выделяется с фекалиями 250 мг в сутки) почки моча 26 Стеркобилин- 1- 4 мг в сутки 2.6. Клиническое значение определения содержания желчных пигментов крови, моче и кале в дифференциальной диагностике различных видов желтух (гемолитическая, желтуха новорожденных, обтурационная, паренхиматозная). Под влиянием различных факторов в организме может нарушаться образование и выведение билирубина и продуктов его метаболизма. Повышение содержания билирубина в крови ведет к отложению его в тканях, в том числе в слизистых оболочках и коже, вызывая их окрашивание в желтый цвет – возникновению желтухи. В дифференциальной диагностике желтух различной этиологии важное значение имеет определение содержания желчных пигментов в крови, моче и кале. Различают несколько видов желтух. Гемолитическая желтуха Возникает в результате усиленного гемолиза эритроцитов. Причины возникновения: серповидноклеточная анемия, талассемии, стимулирующие гемолиз, переливания несовместимых групп крови и т.д. В результате при распаде Нb образуется большое количество непрямого, токсичного билирубина, который в печени не успевает конъюгироваться. Неконъюгированный билирубин не выделяется с мочой, так как он нерастворим в воде. Для гемолитической желтухи характерны: • гипербилирубинемия за счет неконъюгированного билирубина; • увеличение содержания стеркобилина в кале и моче. В результате кал становится почти темного цвета, а моча окрашивается в интенсивно оранжево-желтый цвет. Желтуха новорожденных Желтуха новорожденных (гемолитическая желтуха) считается физиологической. Она возникает вследствии: •недостатка синтеза фермента конъюгации билирубина – УДФ – глюкуронилтрансферазы; •недостаточного образования УДФ – глюкуроновой кислоты; Это приводит к повышению в крови уровня неконъюгированного, токсичного билирубина. Желтуха обычно проходит через 3-5 дней. У недоношенных детей - продолжается дольше. Длительное повышение неконъюгированного билирубина может быть опасным, вследствие токсического действия билирубина на развивающийся мозг (билирубиновая энцефалопатия). У взрослых клетки мозга малопроницаемы для билирубина и, как правило, осложнений при гипербилирубинемии не происходит. Обтурационная желтуха Возникает в результате нарушения оттока желчи в кишечник. Причины: закупорка или сдавление общего печеночного протока камнем или опухолью головки поджелудочной железы, некоторые формы вирусного гепатита и др. Обтурационная желтуха сопровождается высоким содержанием в крови конъюгированного билирубина, вследствие того, что желчь не поступает в кишечник и билирубин всасывается из печени в кровь. Так как конъюгированный билирубин – водорастворимое соединение, он в больших количествах выделяется с мочой. Из-за этого моча имеет цвет пива с ярко-желтой пеной. Одновременно и в кале, и в моче снижается содержание стеркобилина. Кал приобретает серовато-белый, глинистый цвет. Паренхиматозная желтуха Возникает вследствие повреждения паренхимы печени (инфекционный и токсический гепатиты, цирроз печени и т.д.). Повреждение гепатоцитов снижает захват ими неконъюгированного билирубина из крови и интенсивность образования в них конъюгированного билирубина. Поэтому, не смотря на нормальный гемолиз, повышается (но не так выражено, как при гемолитической желтухе) содержание неконъюгированного, а также конъюгированного билирубина (застой желчи). В каловых массах и в моче снижается содержание стеркобилина. Кал слабо окрашен. В моче появляется уробилин и небольшое содержание конъюгированного билирубина. 3. Лабораторно-практические работы. 3.1. Методика определения кальция в сыворотке крови. ПРИНЦИП МЕТОДА: органические соединения-комплексоны взаимодействуют с кальцием. В качестве комплексона используется трилон Б (ЭДТА-этилендиаминтетраацетат). Трилоном Б титруют ионы кальция, предварительно связанные с мурексидом (индикатор). Комплекс кальций-мурексид имеет красно-оранжевый цвет. ХОД РАБОТЫ: свободный от кальция мурексид окрашивается в сине-фиолетовый цвет. 1.Готовится раствор мурексида для всей группы: в колбу вносят 100мл воды и 0,8мл 36% р-ра NaOH, перемешивают, затем добавляют смесь мурексида до появления ярко-фиолетовой окраски. 2.В широкую пробирку наливают 5мл р-ра мурексида и вносят 0,2мл исследуемой сыворотки (раствор розовеет), титруют (без промедления) р-ром трилона Б до фиолетовой окраски. РАСЧЕТ: 1мл 0,1 моль/л р-ра трилона Б эквивалентен 0,12 мг кальция Х= х 0,12 х 100 мг% - количество мл трилона Б, пошедшего на титрование опытной пробы. Коэффициент перерасчета: 0,2495 на ммоль/л N = 2,25 – 2,64 ммоль/л 3.2. Методика определения концентрации гемоглобина в крови. ПРИНЦИП МЕТОДА: Гемоглобин при взаимодействии с железосинеродистым калием (красная кровяная соль) окисляется в метгемоглобин, образующий с ацетонциангидридом окрашенный гемиглобинцианид, поглощающий свет при длине волны 540 (520-560) нм. Концентрация образовавшегося гемиглобинцианида пропорциональна концентрации гемоглобина. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА: В пробирку вносят 5 мл трансформирующего раствора, затем добавляют 1 каплю крови и тщательно перемешивают. Инкубируют при комнатной температуре (+18-+20) в течение 20 минут и затем фотометрируют при длине волны 540 (520-560) нм. Концентрация гемоглобина в пробе крови вычисляют по формуле: Е________ С= Ек*Ск*251, где: С – концентрация гемоглобина, г/л. Е – оптическая плотность пробы; Ек – оптическая плотность в калибровочном растворе гемиглобинцианида; Ск –концентрация гемиглобинцианид в калибровочном растворе, г/л. 251 –коэффициент разведения пробы крови Оптическая плотность калибровочного раствора гемиглобинцианида Ек=0,54 Ск = 0,602 г/л Норма гемоглобина у мужчин равна 130-160 г/л , у женщин – 120-145 г/л
