DATA SHEET

http://www.biolabmix.ru
Выделение нуклеиновых кислот
Наименование
Реагент для выделения
РНК из клеток и тканей
«ЛИРА»
Описание
Предназначен для проведения лизиса
биологических материалов для
последующей фенол-хлороформной
экстракции нуклеиновых кислот
Кат. №
Количество, мл
LR-0100
100
LR-0200
200
Меры предосторожности:
Осторожно! Реагент для лизиса клеток тканей содержит агенты, оказывающие раздражающее и
токсичное действие. При работе с реагентом необходимо соблюдать правила общей и личной техники
безопасности. Токсичен при попадании на кожу и внутрь. Вызывает ожоги.
Работайте под тягой! При попадании на кожу промойте немедленно большим количеством воды и
моющего средства (детергента). При необходимости покажитесь врачу.
Описание продукта:
Реагент используют для выделения РНК из клеток и препаратов тканей животных и растений.
Протокол применения:
Для выделения РНК из клеток и тканей необходимо провести полный лизис биологического образца с
использование реагента «ЛИРА». Для этого к образцу добавьте реагент в количестве достаточном для
получения однородного прозрачного лизата.
Ориентировочные количества необходимого реагента:
для клеток млекопитающих, собранных из монослоя или суспензии центрифугированием – 900 мкл
на 2-5 млн клеток;
при лизисе в культуральной посуде – 900 мкл на 10 см2 (реагент должен равномерно покрыть всю
площадь);
для образцов тканей – 900 мкл на 40-80 мг ткани (на качество препарата РНК, в первую очередь,
влияют условия хранения образца ткани; гомогенизацию ткани необходимо проводить непосредственно в
реагенте).
Проведите лизис образца при комнатной температуре в течение 3-10 мин. Соберите лизат в пробирку
Eppendorf объемом 1,5 мл (при необходимости можно использовать стандартные пробирки большего
объема). К лизату добавьте хлороформ в количестве 1/5 от объема литического реагента, энергично
перемешайте в течение 15 секунд и разделите фазы смеси центрифугированием при 12000 g при 4 ºС в
течение 10 минут. Отберите аккуратно водную фазу (!!! не захватывая интерфазы) и перенесите в чистую
пробирку. К водной фазе добавьте равный объем изопропилового спирта, тщательно перемешайте и
выдержите в течение 10 минут при комнатной температуре (для повышения выхода РНК можно выдерживать
при пониженных температурах до -20 ºС и использовать холодный изопропиловый спирт), затем проведите
центрифугирование при 16000 g при 4 ºС в течение 15 минут. Супернатант удалите, осадок промойте 80%
этанолом (используя этиловый спирт объемом не менее половины объема исходного лизата), для
формирования осадка на дне пробирки проведите центрифугирование при 12000 g при 4 ºС в течение 5
минут. Полученные осадки подсушите на воздухе в течение 15-30 мин и растворите в деионизованной воде
(!!! специально подготовленной без РНКаз) для дальнейшего использования и хранения.
После выделения РНК определите оптическую плотность растворов при длинах волн 260 и 280 нм.
Соотношение 260/280 для растворов РНК должно соответствовать диапазону 1,60 – 1,95.
Примечания:
при работе с РНК всегда необходимо использовать перчатки и специально подготовленные посуду и
растворы без РНКаз для предотвращения деградации РНК;
для повышения выхода РНК на стадии осаждения можно использовать ацетат натрия (до 0,3 М) и
соосадители (например, гликоген в концентрации 5-10 мг/мл).