ВИРУСОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА ОРЗ В СЕЗОН 2003-2004ГГ в Г. ХАБАРОВСКЕ. Л.В. Савосина, В.И. Резник, М.А. Перескокова. Центр госсанэпиднадзора в Хабаровском крае. С целью установления этиологической структуры ОРЗ проводили комплексное вирусологическое обследование заболевших для выделения вирусов гриппа, парагриппа, адено- и РС-вирусов. Для изоляции вирусов гриппа использовали культуру ткани MDCK, которую вели на среде с добавлением фетальной сыворотки (5%). Проводили посев и всегда один пассаж материала. Наличие вирусов гриппа определяли по гемагглютинации культуральной жидкости, независимо от наличия ЦПД. Использовали эритроциты человека “0” группы крови. Идентификацию гемагглютинирующих агентов проводили в РТГА с набором типоспецифических сывороток: А/Н0N1/, A/H1N1/Новая Каледония/99, A/H3N2/Сидней/05/97, A/H3N2/Панама/2007/99, B/91г., B/Гонконг/330/01. Выделение вирусов парагриппа вели на культуре ткани МА-104 с последующей гемадсорбцией с эритроцитами “0” группы крови человека. Для выделения респираторно-синцитиальных и аденовирусов использовали культуру клеток L-41 с последующим выявлением вирусов в РСК со специфическими сыворотками РС и адено. Этиология заболеваний гриппом и ОРЗ. Этиологическая расшифровка ОРЗ в г. Хабаровске началась в октябре 2003г в период начала эпидподъема заболеваемости. При обследовании больных в 14,5% случаев был изолирован вирус парагриппа, в 3,2% – аденовирус, в 6,4% случаев доказана респираторно-синцитиальная этиология заболеваний. Вирусологическая диагностика гриппа в данный период времени не проводилась. Первые вирусы гриппа за минувший сезон были выделены в ноябре 2003г – 30 вирусов от детей и 3 штамма от взрослых. Общая выделяемость в ноябре составила 20,2%. Это наивысший показатель за весь эпидсезон. В декабре изолировано 92 штамма – 12,7% выделяемости, в январе 2004г – 4 штамма – 2,2%, в феврале – 2 штамма – 2,2%. Всего в период с ноября 2003 по февраль 2004гг в г. Хабаровске при вирусологическом обследовании 1132-х заболевших 1 подтвержден 131 случай заболевания гриппом.(11,3%). Все изолированные штаммы при детальном типировании в лаборатории НИИ Гриппа (Санкт-Петербург) отнесены к разновидности А/H3N2/Панама/2007/99 вариант А/H3N2/Фуцзянь/411/02. Показатели общей выделяемости вирусов парагриппа в г. Хабаровске в зависимости от периода вспышки варьировали от 10,4% в декабре 2003г до 31,2% в феврале 2004г, при средней выделяемости 13,7%. При этом в начале эпидсезона наивысшие показатели были в группе взрослых (20,0% против 12,4% у детей – ноябрь; 19,5% против 8,1% у детей – декабрь), в январе соотношение было обратным (8,1% против 19,5%), в феврале 2004г выделяемость резко увеличилась и составила 21,6% у детей и 42,9% у взрослых. Вирусологическое подтверждение аденовирусной этиологии заболеваний было осуществлено в единичных случаях в течение всего эпидсезона и составило 4,4% от общего числа обследованных, с преобладанием у детского контингента. По результатам вирусологической диагностики наибольший удельный вес среди заболеваний ОРВИ негриппозной этиологии в минувшем эпидсезоне в г. Хабаровске принадлежит респираторносинцитиальной инфекции – она подтверждена в 16,6% случаев. При этом в начале вспышки заболеваемость была невысокой – 6,4% изолятов в октябре 2003г. В ноябре-декабре продолжался рост заболеваемости, и пик ее наступил в январе 2004г, когда показатель общей выделяемости составил 26,5% от числа всех обследованных, с преобладанием среди взрослого контингента (37,5% от числа обследованных взрослых). Кроме г. Хабаровска расшифровка этиологии гриппа и ОРВИ проводилась в г. Комсомольске-на-Амуре, где также удалось получить вирусологические доказательства гриппозной этиологии заболеваний (таблица 2). В группе детей до 14 лет с диагнозами «Грипп» и «ОРВИ» в 12,9% случаев были выделены вирусы гриппа A/H3N2/. Среди обследованного взрослого контингента случаев подтверждения гриппозной инфекции не было. Всего при обследовании больных в г. Комсомольске было выделено 8 штаммов вируса гриппа А/H3N2/, 2 – в декабре 2003г/(7,4% выделяемости), 4 – в январе(8,7%), 2 – в феврале 2004г (33,3%). При оценке динамики заболеваемости РС-вирусной инфекцией в г. Комсомольске наибольшие показатели выделения приходились на 2 декабрь 2003 – январь 2004гг (18,5% и 19,6%). В феврале выделяемость РС-вирусов снизилась. При этом наблюдалось увеличение выделения вирусов парагриппа и аденовирусов. Показатель общей выделяемости парагриппозных вирусов по г. Комсомольску составил 5,1%, с наивысшим показателем в феврале – 16,7%. У обследованных взрослых подтверждения гриппозной, парагриппозной и РС-инфекции не выявлено. Аденовирусная инфекция подтверждена в 10,8% случаев с преобладанием у детей – 12,1% против 6,25% у взрослых. При сравнительной оценке данных по гг. Хабаровску и Комсомольску общие показатели выделяемости вирусов гриппа составляют 11,3% и 10,1% соответственно, РС-вирусов – 16,6% и 17,6% соответственно. При этом наибольший процент выделения вирусов гриппа по г. Хабаровску пришелся на ноябрь-декабрь 2003г (20,2% и 12,7%), по г. Комсомольску-на-Амуре – на февраль 2004г (33,3%). Показатель общей выделяемости вирусов парагриппа по г. Хабаровску в 2,5 раза превысил аналогичный по г. Комсомольску и составил 13,7% против 5,1%. При этом в обоих городах наблюдался рост выделяемости к концу эпидсезона. Изучение антигенных связей вирусов гриппа, выделенных в c 2003-2004гг, с вирусами прошлых лет проводили по реакции торможения гемагглютинации с набором специфических сывороток. Для исследования антигенных свойств вирусов гриппа типа А/H3N2/ (в количестве 54-х штаммов) в РТГА были использованы специфические сыворотки А/H3N2/Сидней/5/97 и А/H3N2/Панама/2007/99 (таблица 3). В результате выяснилось, что вирусы 2004 года отошли от А/Сидней/97. Лишь 3,7% изученных штаммов взаимодействовали с сывороткой А/Сидней/5/97 до полного титра, а 9,3% – до 1/2 титра; 50,0% – до 1/4 титра, а 37,1% вирусов – лишь до 1/8-1/16 титра. В то же время с сывороткой А/Панама/2007/99 до полного титра реагировали все изученные нами штаммы. Можно сделать вывод, что исследованные изоляты гомогенны в отношении варианта А/H3N2/Панама/2007/99, но несколько различны по отношению к варианту А/H3N2/Сидней/5/97, причем только 3,7% из них гомологичны указанному варианту полностью, то есть мы наблюдаем 3 постепенную эволюцию вируса от варианта А3/Сидней/5/97, что видно по характеру эпидпроцесса минувшего сезона в г. Хабаровске. Пять изолятов были направлены в НИИ Гриппа РАМН (г. Санкт-Петербург) для контрольного исследования. Все они были отнесены к разновидности А/Панама/2007/99, вариант А/Фуцзянь/411/2002. Аналогичные результаты получены и в отношении 13 штаммов, типированных в ГУ НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского РАМН г. Москва.* Часть изолятов (n=24), кроме того, была исследована с сыворотками прошлых лет: А/Виктория/3/75 и А/Бангкок/1/79 (таблица 6). С вариантом А/Виктория/3/75 большинство штаммов взаимодействовали только до 1/16-1/32 доли титра, с одним вирусом торможения гемагглютинации не было вообще; с вариантом А/Бангкок/1/79 до 1/32 титра взаимодействовали только 33,3% изолятов, титр остальных с данной сывороткой в РТГА был равен 0. Полученные данные показывают, что вирусы 2003-2004гг практически полностью потеряли антигенные связи с вышеназванными вирусами. Тот факт, что популяция изученных нами штаммов неоднородна, доказывает и результат изучения их антигенных свойств с сыворотками, одна из которых получена при иммунизации петуха вирусом из вспышки этого года (A/Хабаровск/11183/04/H3N2/); вторая – сыворотка крови ребенка в возрасте 1года 10мес., перенесшего грипп в декабре 2003г, c сероконверсией только по отношению к антигену гриппа А/H3N2/. В РТГА с сывороткой ребенка до полного титра реагировали 8,3% штаммов, большинство – 79,2% – до 1/4-1/8 титра, ниже не реагировал ни один штамм. С сывороткой A/Хабаровск/11183/04/H3N2/ 54,2% вирусов были гомологичны полностью; 45,8% - до 1/2-1/4 титра. Таким образом, эти материалы подтверждают данные о продолжающемся постоянном антигенном дрейфе вирусов A/H3N2/. * За проведенные исследования выражаем искреннюю благодарность научному сотруднику НИИ Гриппа РАМН О.М. Литвиновой и профессору ГУ НИИ вирусологии им. Д.И. Ивановского РАМН А.Н. Слепушкину 4 Динамика заболеваемости гриппом и ОРВИ по результатам вирусологической диагностики в эпидсезоне 2003-2004гг в г. Хабаровске. Грипп А/H3N2/ Парагрипп Аденовирусы РС-вирусы КолКолКолКолМЕСЯЦ Возраст во Пол. % во Пол. % во Пол. % во Пол. % обсл. обсл. обсл. обсл. 0-14 лет 0 0 0 62 9 14,5 62 2 3,2 62 4 6,4 ОКТЯБРЬ 15 лет 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 Всего 0 0 0 62 9 14,5 62 2 3,2 62 4 6,4 0-14 лет 153 30 19,6 153 19 12,4 153 6 3,9 153 16 10,5 НОЯБРЬ 10 3 30,0 10 2 20,0 10 0 0 10 4 40,0 15 лет Всего 163 33 20,2 163 21 12,9 163 6 3,9 163 20 12,3 0-14 лет 620 81 13,1 529 47 8,9 543 30 5,5 551 90 16,3 106 11 10,4 106 19 17,9 93 2 2,1 93 13 14,0 15 лет ДЕКАБРЬ Всего 726 92 12,7 635 66 10,4 636 32 5,0 644 103 16,0 0-14 лет 141 4 2,8 123 24 19,5 121 4 3,3 122 34 27,9 ЯНВАРЬ 15 лет 40 0 0 37 3 8,1 39 1 2,5 40 9 22,5 Всего 181 4 2,2 160 27 16,9 160 5 3,1 162 43 26,5 0-14 лет 51 1 2,0 51 11 21,6 48 1 2,1 47 9 19,1 42 1 2,4 42 18 42,9 29 2 6,9 40 7 17,5 15 лет ФЕВРАЛЬ Всего 93 2 2,2 93 29 31,2 77 3 3,9 87 16 18,4 0-14 лет 965 116 12,0 918 110 12,0 927 43 4,6 935 153 16,4 ИТОГО 15 лет 198 15 7,6 195 42 21,5 171 5 2,9 183 33 18,0 Всего 1163 131 11,3 1113 152 13,7 1098 48 4,4 1118 186 16,6 5 Таблица 2. Динамика заболеваемости гриппом и ОРВИ по результатам вирусологической диагностики в эпидсезоне 2003-2004гг в г. Комсомольске-на-Амуре. МЕСЯЦ Возраст 0-14 лет ДЕКАБРЬ 15 лет Всего 0-14 лет ЯНВАРЬ 15 лет Всего 0-14 лет 15 лет ФЕВРАЛЬ Всего 0-14 лет ИТОГО 15 лет Всего Грипп А/H3N2/ Кол -во Пол. % обсл . 21 2 9,5 6 0 0 27 2 7,4 36 4 11,1 10 0 0 46 4 8,7 5 2 40,0 1 0 0 6 2 33,3 62 8 12,9 17 0 0 79 8 10,1 Парагрипп Кол -во Пол. % обсл . 21 0 0 6 0 0 27 0 0 36 3 8,3 10 0 0 46 3 6,5 5 1 20,0 1 0 0 6 1 16,7 62 4 6,5 17 0 0 79 4 5,1 Аденовирусы Кол -во Пол. % обсл . 18 3 16,7 6 0 0 24 3 12,5 35 2 5,7 9 1 11,1 37 3 8,1 5 2 40,0 1 0 0 6 2 33,3 58 7 12,1 16 1 6,25 74 8 10,8 РС-вирусы Кол -во Пол. % обсл . 21 5 23,8 6 0 0 27 5 18,5 36 9 25,0 10 0 0 46 9 19,6 5 0 0 1 0 0 6 0 0 62 14 22,6 17 0 0 79 14 17,7 6 Таблица 3. Антигенные связи вирусов гриппа А/Хабаровск/…/04г./H3N2** с вирусами А3/Сидней/5/97 и А3/Панама/2007/99. Специфические сыворотки. А3/Сидней/5/97 Т=1/320 А3/Панама/2007/ 99 Т=1/320 Разведение сывороток, до которого происходит торможение гемагглютинации с вирусными антигенами. 1/20 1/40 1/80 1/160 1/320 Абс.* %пол Абс.* %пол Абс.* %пол Абс.* %пол Абс.* %пол 1 1,9 19 35,2 27 50,0 5 9,3 2 3,7 0 0 0 0 0 0 0 0 54 100,0 **Число вирусов – 54 *Число штаммов, взаимодействующих с соответветствующей сывороткой до указанного до указанного титра. 7 Сравнительная оценка антигенных связей вирусов гриппа А/Хабаровск/…/04г./H3N2/ с вирусами прошлых лет в РТГА с эритроцитами 0 группы крови человека. Таблица 4. Сыв. Специфические сыворотки специф. Сыворотка Сыв. Сыв. Сыв. Сыв. Сыв. б-го с А/Бангкок/ А/Викто- А/Сидней А/Панама А/H3N2/ монопри1/79 рия/3/75 /5/97 /2007/99 11183* ростом Вирусы Т=1/320 Т=1/320 Т=1/320 Т=1/320 Т=1/320 Т=1/2048 1 11183 1/32 1/32 1/8 1 1 1/2 2 11184 0 1/32 1/8 1 1 1/2 3 11188 1/32 1/32 1/4 1 1 1/2 4 11191 1/32 1/32 1/4 1 1 1/2 5 11231 0 1/32 1/8 1 1 1/4 6 11240 0 1/32 1/8 1 1/2 1 7 11246 0 1/32 1/4 1 1/2 1/2 8 11301 0 1/16 --- --- 1 1/2 9 11306 0 1/32 1/8 1 1 1/4 10 11313 1/32 1/16 1/8 1 1 1/2 11 11331 1/32 1/32 1/4 1 1/2 1/4 12 11333 1/32 1/32 1/16 1 1 1/4 13 11357 0 1/32 --- --- 1/2 1/8 14 11358 0 1/32 1/4 1 1/2 1/2 15 11361 0 1/32 1/4 1 1/2 1/4 16 11364 0 1/32 1/4 1 1/2 1/4 17 11365 0 1/32 1/8 1 1 1 18 11577 0 1/32 1/4 1 1 1/2 19 11630 0 1/32 1/4 1 1/2 1/4 20 11634 0 1/16 1/8 1 1 1/2 21 11724 0 1/32 --- --- 1/4 1/8 22 11741 1/32 0 1/4 1 1/2 1/4 23 11766 0 1/16 1/8 1 1/4 1/4 24 409 1/32 1/16 1/4 1 1 1/8 - сыворотка к вирусу А/Хабаровск/11183/04/H3N2. 8 В таблице указаны доли титра Этиология эпидемий гриппа в г. Хабаровске 1988 – 2003 гг. Год месяцы 1988. I-II 1988. III-IY 1989. I-III 1990. I-II 1991. I-II 1992. I 1993 I-II 1993 III-IV 1994 II-III 1995 I-II 1995 XII-96 I 1996 XI- XII 1997г III 1998г I-II 1998-99гг XII-I 2000г 1кв.* 2001г 1 кв.* 2002г 1 кв.* 2003г 1 кв.** 2003г XI-XII всего Переболело в % взрос лые 7-14 л. 12,7 7,2 11,2 10,5 13,9 6,5 6,8 6,5 4,1 5,9 5,7 6,8 2,0 6,5 3,2 5,2 5,9 6,6 3,5 3,4 2,3 2,0 3,1 3,7 4,4 1,1 25,9 11,1 22,0 15,1 31,0 11,1 13,4 12,8 8,7 13,2 8,3 14,7 3,8 49,7 34,1 44,3 40,0 55,9 26,7 27,2 36,0 15,5 21,4 16,5 16,2 9,5 36,9 31,4 41,3 38,8 49,3 22,9 24,2 25,3 13,5 24,9 20,7 20,9 8,8 4,8 2,4 14,0 19,0 17,7 5,8 3,6 12,8 19,4 23,8 7,7 5,2 16,7 22,8 24,6 A/Н1N1/ A/H3N2/ A/H3N2/+B A/H3N2/ A/H3N2/+B B B+A/H3N2/ B+A/H3N2/ A/H3N2/ A/H3N2/ B A/H1N1/+ A/H3N2/ A/H3N2/+ A/H1N1/ А/H3N2/+B 4,8 2,3 16,0 17,2 17,0 A/H1N1/ 6,1 3,3 16,4 23,9 26,3 4,7 2,5 12,6 17,8 22,7 B+A/H1N1/+ +A/H3N2/ A/H3N2/+ B 3,7 1,7 10,1 16,2 21,6 A/H3N2/ этиология 3-6 л. 0-2 г. A/Н3N2/ B 9 VIROLOGIC DIAGNOSTICS RESPIRATORY VIRUS INFECTIONS DURING THE SEASON 2003-2004 IN KHABAROVSK. L.V.Savosina, V.I.Reznik, M.A.Pereskokova. The center of Gossanepidnadzor in Khabarovsk edge{territory}. With the purpose of an ethyological structures Respiratory Virus Infections (RVI) Center carried out complex inspection of viruses of a flu fallen ill for influenza, parainfluenza, adeno-and Respiratory Syncytial Viruses. Viruses of a influenza are isolated on culture cells MDCK and identify by hemagglutination-inhibition testing, parainfluenza - on culture MA-104, adenoviruses –on L-41. Ethyological decoding (RVI) in Khabarovsk began in October 2003г during the beginning outbreak deseases. At inspection of patients in 14,5 % of cases the parainfluenza virus, in 3,2 % - adenoviruses has been isolated, in 6,4 % of cases is proved RS-reason diseases. The first viruses of a influenza for the past season have been allocated in November 2003 - 30 viruses from children and 3 isolates from adults. General isolation in November has made 20,2 %. It is the best parameter for all season. In December it is isolated 92 isolates - 12.7 % isolation, in January 2004г - 4 isolates - 2,2 %, in February - 2 isolates - 2,2 %. In total during the period since November 2003 till January 2004 in Khabarovsk at virologic inspection 1132 fallen ill 129 cases of diseases are confirmed with a flu (11,4 %). All isolates are attributed to version А/H3N2/Panama/2007/99 variant А/H3N2/Fujian/411/02. Parameters of the common isolation parainfluenza viruses depending on the period of flash varied - from 10,4 % in December 2003г up to 31,2 % in February 2004г at average isolation 13,7 %. In the beginning season the best parameters were in group at adults (20,0 % against 12,4 % at children November; 19,5 % against 8,1 % at children - December), in January a parity{ratio} were the opposite (8,1 % against 19,5 %), in February 2004г isolation has sharply increased and has made 21,6 % at children and 42,9 % at adults. Virologic confirmation Adenoviruses cases diseases has been carried out in single instances during all season and has made 4,4 % from the common number surveyed, with prevalence among a children's contingent. The greatest densities among diseases RVI in past outbreak belonged Respiratory Syncytial Viruses infection - in 16,6 % of cases. Thus in the beginning of flash desease was low - 6,4 % isolates in October 2003г. In November - December growth of РС-disease is revealed, and the peak of it has come in January 2004г when common isolation has made 26,5 % from number of all surveyed, with small prevalence among a children's contingent (27,9 % at children against 22,5 % at adults). In 5,1 % of cases at children the virus mixt-infection - always in a combination only two any viruses is established. At adults this parameter has made 3,5 %. 10 11