Методика лабораторных работ

Методические рекомендации к проведению лабораторно-практических занятий.
По данным современной систематики, царство Дробянки MYCHOTA (SCHYSOBIONTA)
подразделяется на два подцарства: Bacteriobionta и Cyanobionta. Бактерии - наиболее широко
распространенная в природе группа микроорганизмов, размеры которых не превышают 100 мкм.
Все бактерии представлены особым типом клеток, лишенных истинного ядра, окруженного ядерной
мембраной. Аналогом ядра у бактерий является нуклеоид - ДНК-содержащая плазма, не
отграниченная от ядра мембраной. Кроме того, для бактериальных клеток характерно отсутствие
митохондрий, хлоропластов, а также особое строение и состав мембранных структур и клеточных
стенок.
Бактерии распространены повсюду. Они населяют все среды обитания, существующие на
планете. Бактерии способны осваивать самые экстремальные экотопы: скалы, полярные льды и
снега, пустыни, глубокие слои почвы, абиссальные зоны Мирового океана, горячие источники.
Лабораторно-практическое занятие №1
Цель занятия: изучить основные положения и приемы работы на лабораторно-практических
занятиях по микробиологии и освоить методику приготовления микробиологического препарата.
Общая часть:
 Правила работы при выполнении микробиологического практикума.
 Обработка и стерилизация лабораторной посуды.
 Правила работы с питательными средами.
ОПЫТ № 1
Методика приготовления микробиологического препарата «Флора зубного налета».
Оборудование: микроскоп, предметные и покровные стекла, препаровальная игла,
салфетки, деревянная зубочистка, краситель (тушь черная или синяя), спиртовка, спирт, колба с
водой и пипеткой.
Приготовление фиксированного препарата.
Ход работы:
1. Приготовить микроскоп и стекла к работе.
2. Зубочисткой снять осторожно налет с поверхности зубов у шейки.
3. Тщательно распределить субстрат по стеклу.
4. Приготовить мазок, для чего тщательно распределить материал по стеклу.
5. Высушить при комнатной температуре или высоко над пламенем спиртовки.
6. Фиксировать препарат, для чего большим и указательным пальцем держать стекло и
насколько раз проводить через горячую часть пламени спиртовки, препарат подвергается
действию пламени не более 2 сек., но неоднократно.
7. Окрасить препарат, для чего нанести на мазок одну или несколько капель красителя.
Держать краситель 5-6 мин.
8. Смыть краситель тонкой струей воды. Высушить при комнатной температуре или
осторожно вблизи пламени спиртовки..
9. Микроскопировать.
10. В тетради сделать рисунок и обозначения к нему. Сделать выводы. Коротко
охарактеризовать флору зубного налета.
Контролирующие вопросы:
1. Какие методы стерилизации лабораторной посуды применяются на занятиях?
2. Какие питательные среды применяют для изучения микрофлоры воздуха помещений?
3. Какие морфотипы бактерий присутствуют в микрофлоре зубного налета?
4. в чем заключаются функции бактерий в ротовой полости?
1
Лабораторно-практическое занятие №2
Цель занятия: освоить метод элективной накопительной культуры на примере методики
приготовления культур сенной и картофельной палочек.
ОПЫТ № 2
Методика приготовления элективной накопительной культуры сенной палочки Bacillus
subtilis и картофельной палочки B. mesentericus.
Накопительными элективными культурами называются такие, в которых создаются
условия для роста микроорганизмов одного вида и подавляется рост других видов. В данной
работе кипячение является фактором, убивающим неспороносные формы, вследствие чего Bacillus
subtilis и
B. mesentericus,имеющие устойчивые споры, получают преимущественные условия для
размножения. Этому способствует и специфика используемых сред.
Оборудование и материалы: колба термостойкая на 250 мл, стеклянная палочка, ватномарлевая пробка, сенная труха или солома, толченый мел, электроплитка или водяная баня,
кипяток, стеклограф, ножницы, клубни картофеля, чашки Петри.
Ход работы:
Получение культуры сенной палочки
1. Простерилизовать посуду.
2. Отвесить навеску 10-15 г сена или соломы.
3. Поместить в колбу. Залить кипятком, так, чтобы солома была полностью покрыта водой.
4. Засыпать 0,5 ч.л. мела. Кипятить 15 мин.
5. Закрыть пробкой и поставить в термостат на 7-10 суток при температуре 250.
6. По окончании микроскопировать.
На поверхности сенного отвара появляется сероватая пленка, состоящая из особей
грамотрицательной сенной палочки. Сделать рисунок в лабораторной тетради.
Ход работы:
Получение культуры картофельной палочки
1. Простерилизовать посуду.
2. Промыть клубень картофеля и, не снимая кожуры, нарезать тонкими ломтиками..
3. Поверхность ломтиков натереть мелом и положит в чашку Петри.
4. Выдержать чашки с ломтиками картофеля в сушильном шкафу при 1000С 10 мин..
5. Поставить в термостат на 7-10 суток при температуре 27-300.
6. По окончании микроскопировать.
На поверхности ломтиков картофеля образуется плотная морщинистая пленка, состоящая
из особей картофельной палочки. Она движется при помощи жгутиков, размеры клеток 4-5 мкм,
грамположительна.
Сделать рисунок в лабораторной тетради. Составить выводы и записать в тетрадь.
Контролирующие вопросы:
1. Что позволяет бактериям переносить процесс кипячения?
2. Каким типом морфоструктуры представлены изучаемые виды бактерий?
3. Каким движением обладают изученные виды бактерий?
4. Какую функцию выполняет сенная палочка в природе?
5. Какой тип метаболизма осуществляют изученные виды бактерий?
2
ОПЫТ № 3
Анализ микрофлоры воздуха помещений.
Цель работы: освоить методику анализа микрофлоры воздуха помещений и ознакомиться с
основными представителями микрофлоры воздуха помещений.
В окружающей нас атмосфере содержатся как сапротрофные микроорганизмы, так и
микроорганизмы, обитающие на слизистых оболочках дыхательных путей человека. Среди
последних могут быть как сапротрофные таки патогенные формы. Поэтому с
микробиологическим материалом, высеянном из воздуха закрытых помещений, следует
обращаться с осторожностью, учитывая возможность высева патогенных форм.
Материал и оборудование: стерильные чашки Петри, стерильный мясопептонный агар в
пробирках или голый агар-агар, водяная баня, электроплитка, спички, спиртовка, стеклограф,
микроскопы, предметные стекла с углублениями и без них, покровные стекла, химический стакан
на 500 мл или 250 мл, стеклянная палочка, дистиллированная вода.
Ход работы:
I этап. Приготовление питательной среды агар-агар.
Отвесить 5 г порошка сухого агар-агара и тщательно растворить в 250 мл холодной
дистиллированной воды. Нагреть до кипения и кипятить 2-3 мин. до полного расплавления.
Стерилизовать автоклавированием при 1200С в течении 15 мин. Среду охладить до 45-500С и
разлить в чашки Петри слоем 4-6 мм. При разливе крышку чашки открывают не полностью, а
настолько, чтобы под нее вошла струйка. Разлив производится на строго горизонтальной
поверхности, чтобы среда распределилась равномерно. После полного застывания среды чашки
готовы к употреблению.
II этап. Посев микрофлоры воздуха.
В избранном для анализа микрофлоры воздуха помещении чашки ставят на
горизонтальную поверхность и держат открытыми 10-15 мин. Закрыть и поставить в термостат на
7-10 суток при 250С.
III этап. Анализ полученных результатов. Работа выполняется в лабораторной тетради.
Произвести подсчет выросших на агаре колоний бактерий и грибов. Для подсчета при
большом количестве колоний чашку Петри делят иглой на секторы. Подсчитывают колонии
отдельно в каждом секторе, затем суммируют.
Произвести описание отдельных колоний по следующим признакам:
 Форма колонии (округлая, овальная, чечевицеобразная, сплющенная);
 Цвет колонии;
 Характер края (ровный, волнистый, лучистый, зубчатый и пр.);
 Блеск (блестящая, матовая, просвечивающая);
 Центр колонии (имеется или отсутствует);
 Поверхность (плоская, выпуклая, выгнутая, складчатая, зернистая).
Из колонии, которую описали приготовить микропрепарат в «раздавленной» и «висячей
капле» и окрашенный мазок. Сделать рисунок. При микроскопировании отметить форму клеток,
подвижность, наличие или отсутствие спор. Если колония грибная, отметить тип мицелия
(септированный или несептированный).
Все данные занести в тетрадь. Сделать выводы по полученным результатам.
Контрольные вопросы:
1. Отчего зависит количество микроорганизмов в воздухе помещения?
2. Какие группы микроорганизмов представлены в микрофлоре воздуха?
3. Какие формы бактерий преобладают в микрофлоре воздуха?
4. Какие грибы могут быть в составе микрофлоры воздуха?
3
ОПЫТ № 4
Изучение микроорганизмов маслянокислого брожения.
Цель: освоить методику приготовления культур маслянокислых бактерий и ознакомиться с
основными представителями группы.
Маслянокислое брожение – сложный процесс превращения углеводов в масляную кислоту
и другие продукты, совершаемый группой анаэробных спороносных бактерий. Маслянокислые
бактерии имеют различные активные ферменты, способные производить расщепление сложных
углеводов. Образующаяся масляная кислота в невысоких концентрациях является веществом,
стимулирующих рост высших растений.
Материалы и оборудование: большие пробирки, резиновые пробки к ним, клубни
картофеля, пинцеты, скальпели, толченый мел, водяная баня, раствор Люголя, 5%-ный раствор
хлорного железа.
Ход работы:
1. Неочищенный картофель нарезать ломтиками, которые могут легко войти в пробирку.
2. Заполнить ими пробирку на 1/3 объема, добавить щепотку мела и заполнить водой почти до
верха.
3. Пробирки поместить в водяную баню при температуре 800С на 10-15 мин.
4. Затем пробирки закрыть пробками и ставить в термостат с температурой 350С.
В этих условиях уже через 2-3 дня в жидкости обнаруживают бактерии маслянокислого брожения.
Культура является элективной. Для их преимущественного развития созданы анаэробные условия,
бесспоровые формы убиты предварительным нагреванием, добавка мела нейтрализует
образующиеся кислоты и способствует развитию бактерий.
Культуру микроскопировать, в ней обнаруживается главным образом Clostridium
pasteurianum – подвижные палочки с закругленными концами, одиночные и парные. В старых
культурах у одного из концов клетки обнаруживается спора. При микроскопировании можно
добавить к капле культуральной жидкости каплю раствора Люголя. Маслянокислые бактерии
содержат в клетках гранулезу, которая окрашивается раствором Люголя в синий цвет.
С культуральной жидкостью проводят качественную реакцию на масляную кислоту. Для
этого к 5 мл жидкости добавляют 2 мл 5%-ного хлорного железа. При нагревании образуется
маслянокислое железо коричневого цвета. Результаты занести в лабораторную тетрадь. Сделать
рисунок.
Контрольные вопросы:
1. Какую функцию в экосистеме выполняют маслянокислые бактерии?
2. Где в природе они обитают?
3. Какой запасной продукт синтезируют бактерии этой группы?
4. Назовите основных представителей группы маслянокислых бактерий.
5. Какой тип метаболизма осуществляют эти бактерии?
6. Какие экологические условия они предпочитают?
4
ОПЫТ № 5
Изучение микроорганизмов молочнокислого брожения.
Цель: освоить методику приготовления культур молочнокислых бактерий и ознакомиться с
основными представителями группы.
Молочнокислое брожение представляет собой анаэробный процесс разложения углеводов
ферментами молочнокислых бактерий с образованием молочной кислоты и другими продуктами.
В зависимости от вида бактерий, производящих этот процесс, конечные продукты могут быть
разными. Различают гомоферментативное молочнокислое брожение, при котором молочный сахар
образует только молочную кислоту и гетероферментативное, при котором кроме молочной
кислоты образуются и другие продукты: летучие кислоты спирты и эфиры.
Возбудители гомоферментативного брожения являются:
Streptococcus lactis – овальные кокки, диаметром 0,5-1 мкм, располагаются в культуре
попарно (диплококки), цепочками (стрептококки), реже одиночными клетками.
Streptococcus cremoris – клетки расположены более длинными цепочками.
Lactobacterium bulgaricum – болгарская палочка, крупная бактерия, длиной 4-5 мкм,
неподвижная, грамположительная, располагается в виде отдельных клеток и коротких цепочек
(стрептобактерия). Темепература развития 40-450С.
Lactobacterium acidophilum – ацидофильная палочка, по морфологии близка к болгарской,
но имеет другой температурный оптимум развития – 370С.
Lactobacterium cucumeris – огуречная палочка, короткая грамположительная неподвижная
бактерия. Располагается парами или цепочкой. Оптимальная температура ее развития – 20-250С.
Встречается в рассоле засоленных огурцов, капусты, силосе.
Возбудители гетероферментативного брожения это палочковидные бактерии:
Lactobacterium brassicae fermentatae – капустная палочка, Betabacterium breve, Leuconostoc
mesenteroides.
Молочнокислые бактерии широко распространены в природе. Они всегда имеются в почве,
на поверхности растений.
Материалы и оборудование: молочнокислые продукты (простокваша, кефир), огуречный
и капустный рассолы, микробиологические петли, спиртовки, раствор метиленового синего,
пинцеты, микроскопы, пробирки, спиртовки, смесь Никифорова (этиловый спирт и серный эфир в
равных объемах).
Ход работы:
1.
Указанные продукты нанести петлей на предметное стекло и смешать с каплей воды.
2.
Сделать микробиологический мазок.
3.
Мазок фиксировать в пламени спиртовки, одновременно обезжирить смесью Никифорова 10
мин.
4.
Произвести окраску в течение 3-5 мин водным раствором метиленового синего.
5.
Промыть водой, высушить при комнатной температуре или осторожно рядом с пламенем
спиртовки.
6.
Микроскопировать в иммерсии.
Результаты занести в лабораторную тетрадь. Сделать рисунок о обозначения.
Контрольные вопросы:
1. Какую функцию в экосистеме выполняют молочнокислые бактерии?
2. Где в природе они обитают?
3. Какой запасной продукт синтезируют бактерии этой группы?
4. Назовите основных представителей группы молочнокислых бактерий.
5. Какой тип метаболизма осуществляют эти бактерии?
6. Какие экологические условия они предпочитают?
5
ОПЫТ № 6
Изучение разнообразия цианобактерий.
Среди группы фотобактерий выделяют:
• бактерии, осуществляющие фотосинтез без выделения кислорода (аноксигенный
фотосинтез): в присутствии фотосинтезирующих пигментов бактериохлорофилл и
бактериовиридин, представители: зеленые, пурпурные серные и несерные;
• бактерии, осуществляющие фотосинтез с выделением кислорода (оксигенный фотосинтез):
основным фотосинтезирующим пигментом является хлорофилл а; представители: цианобактерии.
Цианобактерии выделены в самостоятельное подцарство Cyanobionta, так как это
единственные представители царство Дробянки MYCHOTA, способные осуществлять
оксигенный фотосинтез при отсутствии в клетке настоящего ядра и других органелл (в том числе
хлоропластов). Фотосинтез как доминирующий источник энергии обусловил интенсивные темпы
морфологической эволюции. Для одноклеточных представителей группы характерна коккоидная
форма строения тела. Для многоклеточных – нитчатая (трихальная), реже - разнонитчатая
(гетеротрихальная). Очень редко наблюдается тенденция к пластинчатому или объемному
расположению клеток в талломе. Есть представители, образующие колониальные формы тела.
Цианобактерии способны переходить от фотоавтотрофного типа питания к гетеротрофному в
особых условиях окружающей среды. Окраску таллома цианобактерий и возможность
использовать дополнительный квант света обеспечивает комплекс добавочных пигментов из
класса фикобилинов – фикоэритрин и фикоцианин.
Представители группы играют существенную роль в биосфере:
•
способны усваивать азот атмосферы;
•
осваивают бесплодные субстраты (голые скалы, продукты извержения
вулканов, поверхность снега и т.д.);
•
принимают участие в формировании первичных почв;
•
являются компонентами слоевища многих лишайников.
По современной классификации в подцарстве Cyanobionta выделяют отдел
Cyanobacteria, который объединяет 3 класса:
хроококковые Chroococcophyceae;
хамесифоновые Chamaesiphonophyceae;
гормогониевые Hormogoniophyceae
Материал и оборудование: микроскопы, предметные и покровные стекла,
препаровальные иглы, почвенная культура со стеклами обрастания, водная культура
цианобактерий.
Ход работы:
1. Ознакомиться с кратким описанием группы.
2. Приготовить микропрепарат цианобактерий.
3. На препаратах определить:
•
тип
морфоструктуры
(одноклеточный,
нитчатый
многоклеточный,
колониальный), наличие слизистого чехла и его особенности, окраску тела, форму клеток;
используя учебные картины, иллюстрации и пособия, обосновать особенности строения
оболочки клетки, протопласта;
•
местонахождение гетероцисты, ее форму, размеры, окраску; обосновать функции
гетероцист; споры;
•
гормогонии, обосновать значение гормогониев в жизнедеятельности
цианобактерий.
Результаты работы занести в лабораторную тетрадь. Сделать рисунки и обозначения.
Контрольные вопросы:
1. В чем особенности клетки цианобактерий в связи с их ролью в биосфере?
2. Каковы возможные причины многообразия морфоструктур цианобактерий?
3. Как адаптированы цианобактерий к жизни в разнообразных экстремальных условиях?
6
ОПЫТ № 7
Клубеньковые бактерии.
Клубеньковые бактерии, находясь в симбиозе с бобовыми растениями, способны фиксировать
молекулярный азот атмосферы.
Клубеньковые бактерии относятся к роду Rizobium. Форма и величина клубеньковых бактерий изменяются
в зависимости от стадии их развития. В молодой культуре они представлены короткими подвижными палочками,
со временем они утрачивают подвижность и переходят в стадию так называемых опоясанных палочек. При
окраске анилиновыми красителями ярко окрашенные участки цитоплазмы чередуются со светлыми полями, в
которых концентрируются жировые включения, не воспринимающие окраску. При старении культуры клетки
начинают ветвиться и тогда их называют бактероиды. Стадия опоясанных клеток и бактероидов обычно совпадает
со стадией бутонизации и цветения бобовых растений и характеризуется максимальной интенсивностью фиксации
азота.
Клубеньковые бактерии специфичны для определенных родов бобовых. Клубеньковые бактерии
внедряются в растения через кончик корневого волоска и образуют инфекционную нить. Она представляет собой
слизистый тяж, несущий массу бактериальных клеток. Инфекционная нить проходит по корневому волоску в
клетки коры корня до эндодермы. Клетки коры корня, инфицированные клубеньковыми бактериями, и соседние,
прилегающие к ним клетки активно делятся, образуя клубеньки.
Материалы и оборудование: зафиксированные корневые системы бобовых растений, фиксированные
клубеньки, ботаническая бритва, водный раствор фуксина, метиленовый синий, предметные, покровные стекла,
пинцет, препаровальные иглы, микроскоп.
Ход работы:
1. На фиксированных корневых системах рассмотреть клубеньки и зарисовать.
2. Лезвием сделать тонкий срез через клубенек. Срез поместить в каплю воды на предметное стекло.
Подкрасить фуксином или метиленовым синим и микроскопировать. На препарате хорошо видна
бактериодная ткань клубенька, а в ней просматривается масса клубеньковых бактерий.
3. Для более точного изучения клубеньковых бактерий приготовить фиксированный препарат.
4. Разрезать клубенек и отжать каплю сока в каплю воды на предметное стекло. Если клубеньки маленькие,
их разрушают препаровальными иглами и полученный материал хорошо размазать по стеклу.
5. Мазок фиксировать и окрасить. На препарате видны клубеньковые бактерии разных форм и размеров,
мелкие палочки, более крупные опоясанные и ветвистые (бактероиды).
Результаты работы занести в лабораторную тетрадь. Сделать рисунки и обозначения.
7
ОПЫТ № 8
Прямой просмотр почвенных микроорганизмов
Метод прямого просмотра почвенных микроорганизмов дает возможность, во-первых,
увидеть некоторых представителей почвенной микрофлоры, а, во-вторых, провести прямой
подсчет микроорганизмов для учета численности их в почве.
Материалы и оборудование: ступка, резиновая перчатка, спиртовка, часовое стекло,
весы, скальпель, пинцет, колба, содержащая 45 мл стерильной дистиллированной воды,
исследуемая почва, микропипетки на 0,1-0,2 мл, обезжиренные предметные стекла, краситель
(метиленовый синий или карболовый эритрозин), микроскоп.
Ход работы:
1. Небольшое количество исследуемой почвы растереть в течение 10 мин. в ступке пальцем
в резиновой перчатке. На часовом стекле отвесить 5 г почвы и перенести ее в колбу,
содержащую 45 мл стерильной воды, получив разведение 1/10. В колбу №2, содержащую
90 мл стерильной воды пипеткой приливают 10 мл почвенной суспензии из колбы №1,
получив разведение 1/100. Таким образом, получены два вида почвенного раствора.
2. Содержимое каждой колбы встряхнуть в течение 5 мин. Дать отстояться крупным
частицам 3-5 сек. и стерильной микропипеткой перенести 0,01-0,02 мл почвенной
суспензии на обезжиренное предметное стекло, равномерно распределяя по поверхности
(на площади примерно 4 см2). Получаем микробиологический мазок.
3. Подготовленный препарат высушить при комнатной температуре, фиксировать в пламени
спиртовки. Далее окрасить и держать краситель 30-40 мин.
4. Окрашенный препарат промыть, высушить и микроскопировать.
Полученные результаты обсудить и составить выводы.
8
ОПЫТ № 9
Изучение микроорганизмов уксуснокислого брожения
Процесс уксуснокислого брожения называют брожением скорее по традиции, чем по
смыслу, так как от брожения он отличается аэробным характером. Вызывается процесс группой
бактерий, которые являются облигатными аэробами. Любая среда, содержащая небольшое
количество спирта, не изолированная от атмосферы, является благоприятным субстратом для
развития уксуснокислых бактерий.
Уксуснокислые бактерии широко распространены в природе. Они встречаются в пыли, на
поверхности растений и, в частности, на их плодах. Морфологически они неоднородны.
Acetobacter aceti – короткая, неподвижная палочка, не образующая спор. Клетки
расположены в виде цепочек. От йода клетки окрашиваются в желтый цвет. Чаще всего палочка
развивается на пиве. Выносит концентрацию уксусной кислоты до 6%. Температурный оптимум
примерно 34оС. При массовом развитии бактерии образуют слизистую пленку на поверхности
раствора.
Acetobacter pasteurianum – морфологически близкая к первой, но клетки от йода
окрашиваются в синий цвет. Образует сухую морщинистую пленку.
Acetobacter xylinum образует в культуре грубую морщинистую пленку значительной
толщины. Клетки окрашиваются йодом в синий цвет. Бактерия является компонентом «чайного
гриба».
Acetobacterium Kutzingianum образует пленку, всползающую на стенки колбы, от йода
синеет.
Материалы и оборудование (на два занятия):
Конические колбы, пиво, этиловый спирт, предметные стекла, стеклянные палочки, р-р
метиленового синего, микроскопы, пинцеты, 10%-ный р-р соды, хлорное железо, пробирки, р-р
Люголя.
Ход работы:
1. В конические колбы налить пиво слоем 0,5-1 см. Толщина пива имеет решающее значение,
для исхода опыта, так как для этих бактерий нужны аэробные условия.
2. Добавить к пиву немного этилового спирта (не более 0,5 мл).
3. Колбы закрыть ватными пробками и поместить в термостат на несколько суток при
температуре 30-35о.
4. На следующем занятии просмотреть колбы, описать характер образовавшихся пленок.
5. Приготовить мазки, обработать йодом. Микроскопировать. Результаты записать и
зарисовать.
6. Провести качественную реакцию на уксусную кислоту. Для этого культуральную жидкость
отлить в пробирку, нейтрализовать 10%-ным р-ром соды, добавить несколько капель
хлорного железа. Смесь нагреть над спиртовкой. При наличии уксусной кислоты
появляется красное окрашивание вследствие образование ацетата железа.
9
ОПЫТ № 10
Изучение микроорганизмов спиртового брожения
Возбудители спиртового брожения широко распространены в природе (дикие дрожжи). Это
представители родов Torula и Mycoderma из группы дрожжевых грибов, плесневые грибы рода
Mucor и некоторые бактерии. Культурные дрожжи выведены путем длительной селекции из
диких дрожжей. К ним относятся Saccharomyces cerevisiae и Saccharomyces ellipsoideus.
Материалы и оборудование: колбы на 250 мл, сахарный песок, пекарские дрожжи, мерные
цилиндры, пробирки и изогнутые стеклянные трубки, водяная баня, баритовая вода,
микроскопы и оборудование для приготовления микропрепаратов.
Ход работы:
1. В колбу (250 мл) налить 50 мл 10%-ного р-ра сахара и добавить р-р пекарских дрожжей (1 г
дрожжей, разведенных 10 мл р-ра сахара). Раствор пекарских дрожжей приготовить за час
до занятия и поставить в теплое место (термостат).
2. Колбу закрыть пробкой с изогнутой стеклянной с трубкой. Нижний конец трубки
поместить в пробирку с баритовой водой.
3. Колбу с бродящей жидкостью помещают на водяную баню, при температуре 35-40оС. Через
несколько минут после установка прибора в пробирку с баритом начинают поступать
пузырьки газа. Вначале они выделяются неравномерно, толчками, так как из колбы
выходит нагретый воздух. Через некоторое время (20-30 мин) пузырьки начинают
выходить равномерной цепочкой. Это этап выделения углекислого газа, вследствие
образования которого баритовая вода мутнеет.
4. Культуральную жидкость микроскопировать. Результаты записать и зарисовать.
10
Опыт 11
Запасные клеточные включения.
В результате жизнедеятельности в клетках микроорганизмов
образуются запасные включения. Сюда относят волютин, гранулеза,
гликоген, жир и другие соединения.
Волютин – запвсное вещество, состоящее из неорганических веществ
(полифосфатов и полиметафосфатов) и соединений, близких к нуклеиновым
кислотам. Откладывается в запас в целюллозе у бактерии й и в вакуолях у
дрожжей.
Гранулеза – крахмалоподобное вещество, хорошо обнаруживается у
маслянокислых бактерий.
Гликоген – крахмалоподобное вещество, имеет зернистую структуру,
но иногда может находиться в растворенном состоянии.
Материалы и оборудование: чистые культуры Clostridium
pasteurianum, Bacillus subtilis, Bac. Mesentericus, Saccharomyces cerevisiae,
раствор Люголя для окраски гранулезы и гликогена, метиленовый синий,
микроскопы, предметные и покровные стекла, препаровальные иглы,
стеклянные палочки, спиртовка, фильтровальная бумага, лотки.
Ход работы:
1. Для обнаружения волютина на предметное стекло в каплю воды
добавляют исследуемые микроорганизмы, делают мазок, фиксируют
его окрашивают метиленовым синим. Волютиновые зерна
приобретают фиолетовый или фиолетово-красный цвет, а протоплазма
окрашивается в голубой.
2. Для обнаружения гранулезы на предметное стекло наносят взвесь
бактерий и смешивают с каплей слабого раствора йода. Гранулеза в
бактериальных клетках окрашивается йодом в темно-синий цвет.
3. Для обнаружения гликогена пользуются более концентрированным
раствором йода. На предметное стекло наносят взвесь бактерий и
смешивают с каплей йода. Гликоген окрашивается в красно-бурый
цвет.
Каждый препарат описать и зарисовать.
11
Опыт 12
Окраска бактериальных спор.
Материалы и оборудование: чистые культуры Clostridium
pasteurianum, Bacillus subtilis, Bac. Mesentericus, Saccharomyces cerevisiae,
раствор Люголя для окраски гранулезы и гликогена, метиленовый синий,
микроскопы, предметные и покровные стекла, препаровальные иглы,
стеклянные палочки, спиртовка, фильтровальная бумага, лотки.
Ход работы:
Окраска спор по методу Пешкова.
1. Мазок из культуры бактерий подсушивают на предметном стекле,
фиксируют в пламени горелки.
2. На мазок наливают р-р метиленового синего и, подогревая стекло,
доводят его до кипения.
3. Прогревают препарат 20 сек. после чего промывают водой и
докрашивают мазок 0,5 %-ным р-ром нейтрального красного или
эозином в течение 30 сек.
4. Снова промывают препарат, высушивают и рассматривают с
иммерсионной системой. При этом бактериальная клетка окрашивается
в красный цвет, а спора в синий.
Полученный препарат рассмотреть, зарисовать и описать.
12