Диссертация Абдаладзе Н

На правах рукописи
АБДАЛАДЗЕ
НИНО СИМОНОВНА
МОДЕЛИРОВАНИЕ И КОРРЕКЦИЯ
ПСИХОМОТОРНЫХ РАССТРОЙСТВ НОВОРОЖДЕННЫХ
03.03.01-физиология
АВТОРЕФЕРАТ
диссертации на соискание ученой степени
кандидата медицинских наук
Санкт-Петербург
2011
Диссертационная работа выполнена в Физиологическом отделе им. И.П.
Павлова Учреждения Российской академии медицинских наук Научноисследовательский институт экспериментальной медицины Северо-Западного
отделения РАМН
Научный руководитель:
профессор, доктор медицинских наук
Виктор Матвеевич Клименко
Официальные оппоненты:
доктор медицинских наук
Игорь Игоревич Степанов
доктор биологических наук
Наталья Эдуардовна Ордян
Ведущее научное учреждение:
Учреждение Российской
академии наук Институт
эволюционной физиологии и
биохимии имени И. М. Сеченова РАМ
Защита диссертации состоится 26 мая 2011 г. в 13 часов на заседании
Диссертационного совета Д001.022.03 Учреждения Российской академии
медицинских наук Научно-исследовательский институт экспериментальной
медицины Северо-Западного отделения РАМН, 197376, Санкт-Петербург,
Каменноостровский проспект, 69/71.
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Учреждения Российской
академии
медицинских
наук
Научно-исследовательский
институт
экспериментальной медицины Северо-Западного отделения РАМН, 197376,
Санкт-Петербург, ул. Акад. Павлова, 12.
Автореферат разослан « __ » апреля 2011 года
Ученый секретарь Диссертационного совета
профессор, доктор биологических наук
2
Л.В. Пучкова
ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность проблемы. В структуре причин перинатальной
заболеваемости и смертности одно из ведущих мест занимают гипоксические
повреждения головного мозга плода. Гипоксические поражения центральной
нервной системы в антенатальный период жизни вызывают широкий спектр
отдаленных психомоторных расстройств у детей: синдром дефицита внимания,
детский церебральный паралич с двигательными, коммуникативными и
интеллектуальными расстройствами (Saigal et al., 2000; Hack, Fanoroff, 2000;
Delobel-Ayoub et al., 2006; Барашнев, 2007; Савельева и соавт., 2008; Berger et al.,
2009).
Одной из главных причин перинатальных гипоксических поражений
является плацентарная недостаточность, которая имеет мультифакторную
природу (Шниткова и соавт., 2000; Радзинский и соавт., 2007). Многочисленные
этиологические факторы реализуют свое действие на плод через нарушение
кровообращения первоначально в плаценте, а в последующем и у плода.
Морфофункциональные изменения в плаценте клинически проявляются
внутриутробной гипоксией и задержкой развития плода (Кулаков и др., 2004;
Rees, Jnder, 2005). Группу риска развития плацентарной недостаточности
составляют больные с невынашиванием беременности, гестозами,
экстрагенитальными и нейроэндокринными заболеваниями, недостаточностью
питания, перенесшие или находящиеся в состоянии стресса (Стрижаков и соавт.,
2000; Чернуха, 2001; Кошелева и соавт., 2002; Sibai, 2003; Jackson et al., 2004;
Ananth et al., 2006).
При осложненной беременности (преэклампсии, невынашивании,
сахарном диабете, анемии) в плаценте наблюдается тканевая гипоксия,
обусловленная явлениями окислительного стресса. Гипоксия любого генеза
реализуется через активацию процессов перекисного окисления мембранных
фосфолипидов и снижения активности антиоксидантных систем защиты.
Физиологическое значение перекисного окисления липидов многогранно:
активные формы кислорода являются вторичными посредниками
регуляторных влияний (пролиферации, апоптоза и дифференцировки,
участвует в процессах обновления мембранных клеточных структур).
Механизм перекисного окисления липидов лежит в основе синтеза тканевых
регуляторов – простагландинов и лейкотриенов. Накопления продуктов
переокисления приводят к повреждениям мембран отдельных клеток, тканей
и целого органа, что вызывает морфофункциональные изменения в плаценте
и развитие патологических состояний в последующем у плода (Erez et al.,
2008; Амиров и Фролова, 2009; Сидорова и Унанян, 2009; Haque et al., 2010).
Окислительный стресс приводит к повреждению эндотелия сосудов, мембран
форменных элементов крови, нарушению реологических и коагуляционных
свойств крови, микроциркуляции, что вызывает поражение плаценты и
головного мозга плода (Wang, Alexanderb, 2000; Roberts, Hubel, 2004;
Лехович и соавт., 2006). Параллельно с этими изменениями возникает
нарушение синтеза и дисбаланс простаноидов материнского и плодового
3
происхождения (простагландины класса Е и F, простациклин, тромбоксан).
Возникающий дисбаланс определяется концентрацией вазоактивных веществ
(недостаточная продукция простациклина и простагландинов класса Е или
гиперпродукция тромбоксана и простагландинов класса F) сопровождается
спазмом сосудов в маточно-плацентарно-плодовом комплексе, вносит
существенный вклад в нарушение кровотока между матерью и плодом и,
следовательно, влияет на весь ход обменных процессов между ними
(Крукиер, 2008; Мозговая и Зайнулина, 2008).
Для снижения перинатальной заболеваемости и отдаленных последствий
гипоксических поражений мозга наиболее актуальными становятся
своевременная диагностика развивающихся при беременности осложнений,
лекарственная терапия и проведение профилактических мероприятий.
Традиционные методы профилактики и лечения часто не дают должного
эффекта, в связи с чем одной из актуальных задач современного акушерства и
перинатологии является поиск новых методов предупреждения и терапии данной
патологии.
Для испытания и выбора новых методов лечения нами разработана модель
психомоторных поражений у новорожденных детей, реализуемая путем
введения амниотической жидкости женщин с осложнениями беременности или
сыворотки крови их детей беременным крысам, что вызывает
морфофункциональные нарушения у потомства. С целью профилактики и
коррекции осложнений, возникающих при беременности и гипоксических
поражений мозга плода, мы провели исследование влияния курса введений ω-3
полиненасыщенных жирных кислот (ω-3 ПНЖК) в эксперименте, а также в
клинике на показатели акушерских и перинатальных исходов. Основные
эффекты влияния данных веществ обусловлены тем, что они участвуют в
нейрогенезе, подавляют активность перекисного окисления липидов, повышая
активность ферментов антиоксидантной системы защиты крови, оказывают
мембраностабилизирующее
действие,
нормализуют
реологические и
коагуляционные свойства крови, и тем самым улучшают кровоток в системе
«мать-плацента-плод» (Bourre, 2004; Мозговая и Зайнулина, 2008; Громова и
соавт., 2009; Кошелева и соавт., 2009).
Цель работы: изучение эффективности применения ω-3 ПНЖК в
эксперименте на крысах и в клинике для профилактики и коррекции
психомоторных нарушений новорожденных, родившихся от матерей с
осложненным течением беременности.
В задачи исследования входило:
1. Воспроизвести на потомстве крыс модель психомоторных нарушений
новорожденных детей, родившихся от матерей с осложненным течением
беременности, путем введения беременным самкам амниотической жидкости
женщин или сыворотки пуповинной крови их детей.
2. Оценка эмбрионального развития, морфологических изменений
моторной области коры и психомоторного поведения экспериментальных крысят
в постнатальный период.
4
3. Исследование эффективности пренатального воздействия ω-3 ПНЖК
для коррекции и предотвращения структурных и функциональных нарушений у
крысят в модели психомоторных нарушений новорожденных детей.
4. Изучение эффектов включения ω-3 ПНЖК в комплексную терапию
беременных женщин для снижения частоты и тяжести осложнений,
возникающих при беременности и перинатальной заболеваемости.
Основные положения, выносимые на защиту.
1. Внутриамниотическое введение крысам на 14-й день эмбриогенеза
амниотической жидкости женщин с осложненным течением беременности
(невынашиванием, гестозом, плацентарной недостаточностью) или сыворотки
крови их новорожденных детей с церебральной ишемией вызывает у крысят
эмбриологические, морфологические и психомоторные нарушения.
2. Введение крысам ω-3 ПНЖК на 14-й, 15-й и 16-й дни беременности при
моделировании психомоторных нарушений новорожденных, корригирует
структурные и функциональные нарушения у крысят. Профилактическое
введение в рацион беременных крыс ω-3 ПНЖК, т. е. на 9-й, 12-й, 13-й и 14-й
дни беременности, оказывает выраженное нейропротективное действие.
3. Включение ω-3 ПНЖК в комплексную терапию осложнений
беременности
у
женщин
(невынашивание,
гестозы,
плацентарная
недостаточность) способствует снижению частоты и тяжести осложнений
гестационного периода и улучшению перинатальных исходов.
Научная
новизна
исследования.
Впервые
показано,
что
внутриамниотическое введение беременным крысам амниотической жидкости
женщин с осложнениями беременности (гестозами, невынашиванием,
плацентарной недостаточностью) или сыворотки крови новорожденных с
церебральной ишемией вызывает у потомства эмбриотоксический, тератогенный
эффекты, морфологические изменения в моторной области коры и нарушение
психомоторного поведения. Впервые показано, что введение в рацион
беременных крыс ω-3 ПНЖК оказывает корригирующее действие на
структурные и функциональные нарушения у крысят в модели психомоторных
нарушений новорожденных детей. Установлено, что нейропротекторный эффект
наиболее выражен при профилактическом приеме ω-3 ПНЖК. Своевременное
проведение курсовой терапии ω-3 ПНЖК позволяет снизить частоту,
длительность и тяжесть осложнений, возникающих при беременности (гестозов,
плацентарной недостаточности, невынашиваний) у женщин и перинатальную
заболеваемость.
Научно-практическое
значение
результатов
работы.
Амниотические жидкости женщин с осложнениями, возникающими при
беременности, или сыворотки крови новорожденных с церебральной
ишемией способны при внутриамниотическом введении беременным крысам
вызвать у их потомства структурные и функциональные нарушения. На
данной модели показана эффективность применения ω-3 ПНЖК в период
беременности для коррекции морфофункциональных нарушений у
потомства. Это позволило включить ω-3 ПНЖК в комплексную терапию
5
женщин для снижения частоты и тяжести осложнений, возникающих при
беременности (невынашивания, гестозов, плацентарной недостаточности),
пролонгирования беременности и улучшения перинатальных исходов.
Личный вклад соискателя. Автором проведен аналитический обзор
отечественной и зарубежной литературы по изучаемой проблеме.
Самостоятельно проведены экспериментальные и клинические исследования,
статистическая
обработка
и
изложение
полученных
данных.
Экспериментальная
часть
исследования
выполнена
на
базе
Физиологического отдела им. И.П. Павлова и Отдела эмбриологии НИИЭМ
СЗО РАМН. Морфологический анализ проводился совместно с к.б.н. Г.П.
Обуховой (Физиологический отдел им. И.П. Павлова НИИЭМ СЗО РАМН).
Клинические исследования проведены на базе женских консультаций № 9,
36, родильных домов № 9, 13, 16, 18 и НИИ акушерства и гинекологии
РАМН имени Д. О. Отта.
Апробация результатов работы. Результаты работы были
представлены и обсуждались на Междисциплинарной научной конференции
с международным участием «Новые биокибернетические и телемедицинские
технологии 21 века для диагностики и лечения заболеваний человека»,
Петрозаводск, 27-29 июня 2002 г.; на 2-й Всероссийской конференции
«Актуальные вопросы функциональной межполушарной асимметрии»
Москва, май 2003 г.; на Научной конференции «Актуальные вопросы
клинической и экспериментальной медицины» СПбМАПО, Санкт-Петербург,
2003 г.; на Международной конференции «Физиология развития человека»,
Москва, 22-24 июня, 2009 г. Материалы диссертационной работы
докладывались на научных заседаниях Физиологического отдела им. И.П.
Павлова НИИЭМ СЗО РАМН.
Публикации. По материалам диссертации опубликовано 12 научных
работ, в том числе 6 статей в рецензируемых журналах, рекомендованных
перечнем ВАК.
Структура и объем работы. Работа содержит введение, обзор
литературы, описание материалов и методов исследований, результаты
собственных исследований, их обсуждение, заключение, выводы и список
цитируемой литературы, включающий 302 источника. Материалы
диссертации изложены на 155 страницах печатного текста. Работа содержит
11 таблиц и 7 рисунков.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Экспериментальная часть работы выполнена на 145 белых крысах (самки и самцы)
породы Вистар массой 180-200 г. и на их потомстве (899 крысят). Животных содержали в
стандартных условиях вивария при естественном освещении и свободном доступе к воде и
пище, исследования проводили в соответствии с правилами, принятыми Европейской
конвенцией по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных целей
(Страсбург, 1986).
В работе использовали амниотические жидкости 21-й беременной женщины и
сыворотки пуповинной крови их новорожденных детей, которые получали из родильных домов
№ 9, 13, 16, 18 и НИИ акушерства и гинекологии РАМН имени Д.О. Отта Санкт - Петербурга.
6
У 11 женщин имело место физиологическое течение беременности и родов, оценка
новорожденных по шкале Апгар 8-9 баллов. У 10 женщин беременность протекала с
осложнениями (гестозом, угрозой прерывания беременности, предлежанием плаценты). Оценка
новорожденных по шкале Апгар составила 5-7 баллов (у одного новорожденного), 6-7 баллов
(у двух новорожденных), 6-8 баллов (у семи новорожденных). Биологические жидкости
центрифугировались в течение 15 минут со скоростью 3000 об /минуту, хранились при -18ºС.
Метод оценки эмбриотоксического эффекта и действие на постнатальное развитие
крысят
Самок на стадии эструс-проэструс подсаживали к самцам в соотношении 3:1 во второй
половине дня (после 17-18 часов). Критерием 1-го дня беременности у крыс считали
наличие сперматозоидов во влагалищном мазке (Чеботарь, 1985). На 14-й день беременности
крыс оперировали и в каждую амниотическую полость рога матки вводили по 0,03 мл
амниотической жидкости женщины или сыворотки пуповинной крови новорожденных. Детали
проведения методики описаны ранее (Абдаладзе и соавт., 1994). После эвтаназии и вскрытия
самок на 20-й день беременности оценивали эмбриотоксический эффект. Определяли
число живых и погибших плодов, массу тела плодов, пороки развития (Чеботарь и соавт.,
1995). Для обнаружения внешних видимых аномалий развития все живые плоды
обследовали под бинокулярным микроскопом типа МБС (Хабриев, 2005). Для выявления
патологии внутренних органов исследование проводили по методике Вильсона в
модификации А. П. Дыбана (Отдел эмбриологии НИИЭМ АМН СССР) (Чеботарь, 1985;
Хабриев, 2005). 20-ти дневные плоды фиксировали в жидкости Буэна не менее 1-й недели,
затем переносили в 70° спирт. Перед проведением исследований плоды в течение 10
минут отмачивали в дистиллированной воде и затем подвергали микроанатомическому
сечению. Для целей исследования плоды разрезали бритвой по 9-ти сагиттальным срезам,
которые изучали под бинокулярной лупой (Дыбан, 1967). В постнатальном периоде жизни
наблюдали за физическим развитием потомства. У родивших самок подсчитывали число
живых и мертвых новорожденных крысят, измеряли массу тела крысят на 1-е, 4-е и 21-е
сутки жизни (Котин, 1985; Методические указания по изучению эмбриотоксического
действия фармакологических веществ и влияния их на репродуктивную функцию, 1986;
Хабриев, 2005). Для оценки физического развития определяли индексы
жизнеспособности, лактации, прироста массы тела. Индекс жизнеспособности (ИЖ) отношение числа живых крысят на 4-е сутки жизни к числу родившихся крысят (в
процентах). Индекс лактации (ИЛ) - отношение числа живых крысят на 21-е сутки жизни
к числу живых на 4-е сутки (в процентах). Индекс прироста массы тела (ИПМТ) – отношение
массы крысенка на 21-е сутки жизни к его массе на 4-е сутки жизни (в процентах).
Морфологический анализ V слоя моторной области коры мозга крысят
Морфологический анализ больших пирамидных нейронов V слоя моторной области
коры мозга крысят, подвергшихся воздействию сывороткой крови новорожденных детей в
раннем онтогенезе, проводили на 23-е и 46-е сутки жизни, с использованием 2-х методов –
количественного и качественного. Для количественной оценки больших пирамидных
нейронов использовали метод, основанный на ретроградном аксональном транспорте
пероксидазы хрена. Детали проведения анализа описаны ранее (Обухова и соавт., 1992).
30% раствор пероксидазы хрена («Олайна») в объеме 2 мкл вводили билатерально в
люмбальное утолщение. Через 2 суток животное подвергали эвтаназии, мозг фиксировали
in situ путем перфузии физиологическим раствором, а затем 2,5%-ым раствором
глутаральдегида на фосфатном буфере (рН 7,4). Мозг фиксировали в этом растворе течение
5 часов при +4ºС затем его перекладывали на 48 часов в 30%-й раствор сахарозы на
фосфатном буфере. На микротоме изготавливали серию фронтальных срезов мозга
толщиной 60 мкм. Пероксидазу хрена выявляли по методике М.М. Мезулам (Mesulam,
1982). По атласу фронтальных срезов мозга крысы, в моторной области коры отбирали
уровни, соответствующие представительству задних лап (Paxinos, Watson, 1982; 2005).
Подсчитывалось количество нейронов на 3-х уровнях в правом и левом полушариях мозга,
7
отдельно по каждой крысе и суммарно по всем крысам.
Для анализа, отражающего развитие дендритной системы больших пирамидных
нейронов, был применен метод Гольджи-Копш (Озирская и Туманова, 1992; Мелик-Мусян
и Фанарджян, 2003). Мозг 23-х и 46-ти суточных крысят фиксировали смесью формалина и
3,5%-го бихромата калия в течение 3-4 суток. После серебрения 0,75%-ным раствором
нитрата серебра в течение 3-х суток мозг животных заливали целлоидином и изготавливали
на микротоме серии фронтальных срезов толщиной 100-120 мкм из моторной области коры
мозга крысят, соответствующей представительству задних конечностей. С препаратов
сделаны рисунки 82-х больших пирамидных нейронов при увеличении в 400 раз. Рисунки
были морфометрически проанализированы на специальном приборе МОР-30. Определяли
следующие характеристики больших пирамидных нейронов V слоя моторной области коры:
площадь дендритного ареала, длину апикального дендрита, суммарную длину дендритов и
суммарное число ветвлений дендритов для каждого нейрона.
Метод оценки психомоторного поведения крысят
Анализ психомоторного поведения животных проводили по ранее разработанной в
лаборатории методике (Атаева и др., 1993). На 21-30-е сутки жизни контрольные и
экспериментальные крысята тестировались на переходных сооружениях. Установка включала
две одинаковые площадки размером 20x20 см, расположенные на высоте 35 см, между
которыми помещались различные переходные сооружения длиной 120 см:
а) лестница, изготовленная из металлической проволоки диаметром 0,2 см, шириной 1,0
см, с расстоянием между ступенями 2 см; б) рельсы, состоящие из 2 параллельных
металлических реек, шириной 0,3 см, расстоянием между рейками 2 см; в) эстакада – рейка
шириной 1 см.
На одной из площадок находился съемный домик с норковым отверстием и пищевым
подкреплением, который переставлялся в зависимости от направления движения животного.
Животным предоставляли последовательно усложняющиеся варианты перехода с одной
площадки на другую (лестница, рельсы, эстакада). Каждый тест проводился 4 раза в день в
течение 3-х дней. Во время эксперимента регистрировали следующие показатели: время от
начала опыта до начала пробежки по переходным сооружениям (латентный период), время
пробежки крысят по переходным сооружениям, количество срывов лапок.
Метод коррекции морфофункциональных нарушений у потомства крыс, путем
пренатального воздействия ω-3 ПНЖК
Для коррекции структурных и функциональных нарушений у крысят, вызванных
введением амниотической жидкости женщин с осложнениями беременности или сыворотки
крови новорожденных детей с церебральной ишемией, использовали эпаден. Препарат
разработан в НИИ биотехнологий (Москва), представляет собой 30% концентрат ω-3
ПНЖК, содержащий эйкозапентаеновую и докозагексаеновую кислоты. Жирные кислоты,
входящие в состав препарата, участвуют в нейрогенезе, являются естественными
элементами функционирования клеток, обладают антиагрегационной, антитромботической
активностью и мембраностабилизирующим действием, оказывают антиоксидантное
воздействие, улучшают микроциркуляцию и метаболизм в тканях. Препарат утвержден
Госкомсанэпиднадзором России, сертификат № 63 от 10. 11. 1993 г. Регистрационное
удостоверение № 002600. Р. 643.02.2001 от 21.02. 2001 г. выдан Министерством
здравоохранения Российской Федерации.
Беременным крысам ω-3 ПНЖК вводили внутрижелудочно в дозе 0,5 мл. Использовали
2 варианта введения: 1-й вариант – после воздействия амниотической жидкости или сыворотки
крови новорожденных, на 14-й, 15-й и 16-й дни беременности и 2-й вариант – до воздействия
амниотической жидкости или сыворотки крови, на 9-й, 12-й, 13-й и 14-й дни беременности.
Контрольную группу составили крысята, матерям которых в те же сроки беременности и тем
же способом вводили физиологический раствор.
Клинические исследования. Обследованы 149 женщин с осложнениями, возникшими
при беременности, в возрасте от 18 до 34 лет, которые были разделены на 2 группы. 1-я группа
8
– 97 беременных, получили только традиционное лечение. 2-я группа – 52 беременных,
получили комплексную терапию, т. е. одновременно с традиционной терапией принимали
эпаден. В каждой капсуле содержится 300 мг эйкозапентаеновой и докозагексаеновой кислоты.
Беременные получали препарат с их письменного информированного согласия по 2 капсулы 3
раза в день или 1,8 г/сутки. Проводилось 2 курса лечения – с 20 по 24 неделю и повторно через
1,5 месяца с 30 по 34 недели беременности. Обследование беременных женщин включало
клинический и биохимический анализы крови, ультразвуковое исследование,
кардиотокографию, допплерометрию маточных, плацентарных и плодовых сосудов.
Клиническое обследование новорожденных детей включало оценку состояния по
шкале Апгар и неврологический осмотр. Оценку тяжести состояния ребенка при рождении
проводили с использованием критериев, предложенных В. Апгар (Шабалов и соавт., 2003;
Володин, 2007). Оценивали по балльной системе каждый из 5-ти показателей: частота
сердечных сокращений, дыхание, мышечный тонус, рефлексы, цвет кожи в конце 1-й и 5-й
минуты после рождения. Согласно шкале, при отсутствии сердечных тонов, дыхания,
мышечного тонуса, рефлексов, бледности кожи ставили оценку «0» баллов. При частоте
сердцебиения в 1 минуту менее 100 ударов, нерегулярном и медленном дыхании, умеренно
сниженном мышечном тонусе (слабые движения), легкой гримасе на лице, цианотичности
конечностей по «1» баллу. Сердцебиение в 1 минуту более 100 ударов, регулярное дыхание,
активные движения, физиологическая поза новорожденного, громкий крик, розовые
кожные покровы оценивали на «2» балла. В зависимости от суммарной оценки по шкале
Апгар в конце 1-й минуты жизни выделяли умеренную и тяжелую формы асфиксии.
Оценку 7 баллов и более через 1 минуту после рождения имели здоровые новорожденные
дети, что свидетельствовало об отсутствии асфиксии, 4 - 6 баллов – признак умеренной
асфиксии, 1 - 3 балла – тяжелая асфиксия.
При неврологическом осмотре проводили оценку поведенческого состояния,
коммуникабельности, мышечного тонуса, спонтанной двигательной активности,
физиологических рефлексов периода новорожденности, сухожильных рефлексов,
активности сосания и глотания, наличия патологических симптомов. Лабораторные
исследования заключались в изучении клинического анализа крови, общего анализа мочи,
определении величины гематокрита, содержания глюкозы в крови, показателей кислотноосновного состояния и газов крови, нейросонографии, компьютерной томографии. Все дети
до 1 года жизни находились под наблюдением невропатолога и неонатолога.
Методы статистической обработки данных. Оценку достоверности данных
эмбриологических изменений, морфометрии, психомоторного поведения, в том числе
показатели срывов лапок проводили с помощью t-критерия Стьюдента для независимых
выборок. Частоты появления той или иной патологии у беременных женщин и
новорожденных детей, приведенные в таблицах 4, 5, 6, 7 сравнивали путем анализа таблиц
сопряженности с использованием точного метода Фишера (Бююль, Цёфель, 2002). Все
статистические расчеты проводили с помощью компьютерной программы SPSS 11.5.
Результаты оценивали как статистически значимые при р≤0,05.
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
Эмбриотоксический эффект и постнатальное развитие крысят
Оценка показателей эмбриотоксического эффекта и постнатального
развития крысят показала, что введение амниотической жидкости женщин с
физиологическим течением беременности не оказывало эмбриотоксического и
тератогенного эффектов и не влияло на физическое развитие крысят (группа А)
(табл. 1 и 2). Воздействие амниотической жидкостью женщин с осложнениями
беременности (группа Б) вызывало внутриутробную гибель, аномалии развития
и снижало массу плодов (табл. 1).
9
Таблица 1. Эмбриотоксический эффект у плодов крыс, вызванный введением амниотической
жидкости женщин на 14-е сутки эмбрионального развития.
К
Количество
плодов,
подвергшихся
воздействию
304
А
58
Группы
крысят
Количество плодов,
выживших на 20-е
сутки беременности
278
Количество плодов,
погибших
внутриутробно
(абс. число %  ст. откл.)
26 (8,7±1,6)%
Средняя
масса
плода (г)
Частота пороков
развития плода
(абс. число %  ст. откл.)
2,04±0,3
0
58
0
2,01±0,04
0
1,65±0,0*▲
8 (30,7±1,2)%*▲
Б
61
26
35 (57,4±6,4)%*▲
В
62
30
32 (51,6 6,3)%*▲
2,010,03#
0
33
11 (25,5 7,5)%#
2,160,04#
0
Г
44
Обозначения: К - внутриамниотическое воздействие физиологическим раствором на 14-й день
беременности.; А - воздействие амниотической жидкостью женщин с физиологическим
течением беременности; Б - воздействие амниотической жидкостью женщин с осложненным
течением беременности (АЖ2); В - воздействие АЖ2 и внутрижелудочное введение ω-3 ПНЖК
на 14-й, 15-й, 16-й дни беременности; Г - воздействие АЖ2 и внутрижелудочное введение ω-3
ПНЖК на 9-й, 12-й, 13-й, 14-й дни беременности.
* - р≤0,05 статистически значимые различия по сравнению с контролем К.
▲- р≤0,05 статистически значимые различия по сравнению с группой А.
# - р≤0,05 статистически значимые различия по сравнению с группой Б.
Таблица 2. Физическое развитие крысят, подвергшихся воздействию амниотической жидкости
женщин на 14-е сутки эмбрионального развития.
Группы
крысят
К
А
Количество
Количество
плодов, подвергживорожденных
шихся воздействию
крысят
76
69
50
Количество плодов,
погибших внутриутробно
(абс. число %  ст. откл.)
7 (9,2  1,6)%
ИЛ %
ИПМТ %
ИЖ %
100
374
97,1
44
6 (12,04,6)%
100
460
100
75*▲
452
55,1*▲
Б
77
52
25 (32,5 5,3)%*▲
В
86
43
43(50,05,4) %*▲
100#
591
48,7*▲
Г
40
31
9 (22,54,8) %#
100#
582
87,9#
Обозначения: ИЛ - индекс лактации; ИПМТ – индекс прироста массы тела;
ИЖ - индекс жизнеспособности. Остальные обозначения те же, что и в таблице 1.
* - р≤0,05 статистически значимые различия по сравнению с контролем К.
▲- р≤0,05 статистически значимые различия по сравнению с группой А.
# - р≤0,05 статистически значимые различия по сравнению с группой Б.
Данные показатели крысят группы Б достоверно отличались от
соответствующих показателей крысят контрольной группы К и группы А.
Оценка постнатального развития показала, что крысята отставали в физическом
развитии, наблюдалось достоверное повышение эмбриолетального эффекта,
снижение индексов лактации и жизнеспособности по сравнению с контрольной
группой крысят К и группой А, а индекс прироста массы тела не претерпевал
значительных изменений (табл. 2).
Добавление в рацион беременным крысам ω-3 ПНЖК, независимо до или
после воздействия на 14-й день эмбриогенеза амниотической жидкостью
женщин с осложнениями беременности, не только предотвращало
возникновение пороков развития, но и сопровождалось увеличением массы
плодов, индексов лактации до контрольных показателей (табл. 1 и 2).
10
Достоверных отличий от контрольной группы К и группы А не наблюдалось,
однако, отмечалось достоверное увеличение показателей по сравнению с
группой Б. Только профилактическое (за 3 дня до моделирования патологии)
добавление в рацион беременным крысам ω-3 ПНЖК снижало внутриутробную
гибель плодов и увеличивало индекс жизнеспособности (табл. 2). Эти показатели
были сопоставимы с показателями крысят группы К и А и достоверно
отличались от показателей крысят группы Б.
Таким образом внутриамниотическое введение на 14-й день эмбриогенеза
крыс амниотической жидкости женщин с физиологическим течением
беременности не оказывало эмбриотоксического, тератогенного эффектов и не
влияло на физическое развитие крысят. Аналогичное воздействие амниотической
жидкостью женщин с осложненным течением беременности вызывало
эмбриотоксический и тератогенный эффекты, снижало жизнеспособность
потомства.
Известно, что рост и развитие плода зависят от функционирования
плаценты, возможности поступления кислорода и питательных веществ от матери
к плаценте, и изменений в ней, непосредственно связанных с нарушениями
кровотока. Последующие метаболические нарушения в системе «мать-плацентаплод», активация процессов перекисного окисления липидов с накоплением
конечных продуктов приводят к гипоксии клеток и тканей, являясь пусковым
механизмом структурных и функциональных нарушений в плаценте, а также в
жизненно важных органах плода (Кулаков и др., 2004). Нарушения функции
плаценты (транспортной, дыхательной, эндокринной) приводят к внутриутробной
гибели, возникновению пороков развития, снижению массы плодов и
жизнеспособности потомства (Rees, Jnder, 2005; Назарова и др., 2007; Eixarch et.
аl., 2009).
Введение в рацион беременных крыс ω-3 ПНЖК на 14-й, 15-й и 16-й дни
предотвращало тератогенный и снижало эмбриотоксический эффекты.
Профилактическое добавление в рацион беременных самок препарата, снижало
эмбриолетальность и повышало жизнеспособность потомства. Можно
предположить, что благодаря мембраностабилизирующему действию, влиянию на
перекисное окисление липидов и повышению антиоксидантной активности крови,
ω-3 ПНЖК улучшают перфузию плаценты (Степанян и соавт., 2010).
Корригирующий эффект может вызываться также изменением состояния
сосудистого тонуса и системы микроциркуляции вследствие устранения
дисбаланса простагландинов и лейкотриенов (Smuts et. al., 2003; Серов и
Сидельникова, 2008).
Морфологические изменения моторной области коры мозга крысят
при воздействии сывороткой крови новорожденных с церебральной
ишемией
Морфометрические исследования показали, что организация дендритной
системы больших пирамидных нейронов моторной коры на 23-е и 46-е сутки
жизни у контрольных животных и крысят группы А (перенесших пренатальное
11
воздействие сыворотки крови здоровых новорожденных) оказалась сходной. На
23-е сутки жизни крысят группы Б (крысята, подвергшиеся пренатальному
воздействию сывороток крови новорожденных детей с церебральной ишемией),
в организации дендритной системы нейронов коры были отмечены изменения,
чего не наблюдалось среди контрольных животных и крысят группы А. В V слое
моторной коры выявлено достоверное уменьшение площади дендритного ареала
(в 2-2,2 раза), суммарной длины дендритов и суммарного числа дендритных
разветвлений (на 50-70%) пирамидных нейронов. Длина апикального дендрита
крысят группы Б была сопоставима с контрольной группой животных и группой
А. На 46-е сутки постнатального онтогенеза у животных группы Б,
статистически значимых различий в организации дендритной системы нейронов
V слоя коры в сравнении с контролем и группой А не наблюдалось.
У 23 суточных крысят, перенесших воздействие сывороткой крови
здоровых новорожденных на 14-й день эмбриогенеза (группа А), достоверных
отличий в количестве пирамидных нейронов от контрольной группы (интактные
крысята) не наблюдалось (табл. 3). В левом полушарии мозга на уровне –2.3
(Paxinos, Watson, 2005) достоверно снизилось количество больших пирамидных
нейронов по сравнению с интактными животными. На 23-е сутки жизни крысят
группы Б (после пренатального воздействия сывороткой крови новорожденных с
церебральной ишемией) наблюдалось достоверное снижение количества
нейронов на всех уровнях и в обоих полушариях мозга по сравнению с
контрольной группой и группой А. На 46-е сутки жизни статистически
значимого снижения количества больших пирамидных нейронов в левом и в
правом полушариях мозга на всех уровнях зоны представительства задних лап у
крысят группы Б по сравнению с крысятами контрольной группы и группы А не
выявлено.
Таблица 3. Среднее количество нейронов моторной области коры мозга на разных уровнях
в зоне представительства задней лапы после пренатального воздействия ω-3 ПНЖК (х±Sx).
Уровни по стереотаксическому атласу [Paxinos & Watson, 2005]
Возраст
крысят
(сутки
жизни)
Левая
Правая
Левая
Правая
Левая
Правая
К
20-23
95,5±13,0
78±10
112±12,0
84±11,0
139±9,0
118±10,0
К
46
110±13,0
105±2,5
140±16,0
117±12,0
149±10,5
123±14,0
А
23
79,4±8,0
75±12,0
105,4±7,0
107±8,3
78±7,0*
92±8,0
Б
23
12,2±5,2*▲
10,4±5*▲
18,5±5,2**▲
23±7,0*▲
9±3,0**▲
9±4,0**▲
В
23
52,2±11,0#
50,2±11,0#
43±10,0*▲
45±11,0*▲
27±5,0*▲
44±10,0*▲
В
46
100±11,6
99±13,0
132±14,0
113±14,0
121±12,4
100±14,0
Группы
крысят
0.2
- 0.8
-2.3
Обозначения: К - интактные крысята; А - воздействие на 14-й день эмбриогенеза крыс
сывороткой крови здоровых новорожденных; Б - воздействие на 14-й день эмбриогенеза крыс
сывороткой крови новорожденных с церебральной ишемией (СК2); В - воздействие на 14-й
день эмбриогенеза крыс СК2 и внутрижелудочное введение ω-3 ПНЖК на 14-й, 15-й, 16-й дни
беременности.
* - р≤0,05, ** - р≤0,01 статистически значимые различия по сравнению с контролем К.
▲ - р≤0,05 статистически значимые различия по сравнению с группой А.
# - р≤0,05 статистически значимые различия по сравнению с группой Б.
12
Анализ дендритной системы нейронов на 23-е сутки жизни крысят группы
В показал, что введение беременным крысам ω-3 ПНЖК на 14-й, 15-й и 16-й дни
эмбриогенеза, после воздействия сывороткой крови новорожденных с
церебральной ишемией восстанавливает площадь дендритного ареала,
суммарную длину дендритов и суммарное число дендритных разветвлений.
Морфометрические показатели были достоверно выше, чем в группе Б и не
отличались от контроля и группы А. Количество больших пирамидных нейронов
на 23-е сутки постнатального онтогенеза у крысят группы В на уровне 0.2 в
левом и в правом полушариях мозга не отличалось от контроля (интактные
крысята) и группы А, и было достоверно выше, чем в группе Б (табл. 3). На
уровнях -0.8 и -2.3 коры в данной группе несмотря на значительное увеличение
количества нейронов по сравнению с группой Б, количество нейронов оставалось
достоверно меньше, чем у крысят группы А и в контроле. На 46-е сутки
постнатального онтогенеза крысят, матерям которых вводили в рацион ω-3 ПНЖК
(группа В), различий в количестве и в организации дендритной системы нейронов
V слоя моторной коры с контрольной группой и группой А не выявлено.
Полученные факты свидетельствуют о том, что пренатальное воздействие
сывороткой крови новорожденных с церебральной ишемией нарушает развитие
моторной коры мозга в постнатальном онтогенезе крысят. Уменьшение
количества нейронов и изменения в структуре дендритной системы моторной
области коры обнаружено только у крысят группы Б на 23-е сутки постнатального
онтогенеза. К 46-м суткам жизни различия в количественном составе и в строении
дендритной системы нивелируются. Так как обе группы (23-х и 46-ти суточные
крысята) подвергались в пренатальный период воздействию сыворотки крови
новорожденных с церебральной ишемией, можно предположить, что
задерживается нормальное по временным характеристикам образование
синаптического аппарата пирамидных нейронов, проявляющееся уменьшением
количества нейронов и их дендритной системы. Пренатальное введение в рацион
беременных самок ω-3 ПНЖК восстанавливало в постнатальном онтогенезе
животных количество и структуру дендритной системы нейронов, что
способствовало нормальному формированию и развитию двигательной области
коры.
Психомоторное поведение крысят в норме и при моделировании
патологии
Для оценки психомоторного поведения крысят на 21-30 сутки жизни
использованы тесты лестница, рельсы, эстакада. У интактных крысят время от
начала опыта до начала пробежки по сооружениям и время прохождения
животных по переходным сооружениям в 1-й день исследований во всех тестах
было больше, чем в последующие дни и снижалось по мере обучения.
Усложнение задания (предъявление более сложного теста «эстакада») вызывало
значительное увеличение времени от начала опыта до начала пробежки и времени
прохождения по переходным сооружениям (рис. 1, 2). Количество срывов лапок
13
по мере обучения и усложнения тестов у интактных крысят уменьшалось (рис. 3).
После пренатального воздействия сывороткой крови здоровых
новорожденных (группа А) время от начала опыта до начала пробежки по
сооружениям у крысят во всех тестах соответствовало контрольным
показателям. Показатели двигательной активности (время прохождения по
переходным сооружениям) в тестах «лестница» и «рельсы» соответствовали
показателям у контрольных крысят. По мере усложнения задания (предъявление
теста «эстакада») отмечалось достоверное снижение времени прохождения по
переходному сооружению по сравнению с животными контрольной группы, т. е.
выявлялось достоверное увеличение двигательной активности (рис. 2). Несмотря
на выявленное нами повышение двигательной активности в тесте «эстакада»,
количество срывов лапок не только не увеличилось, а также как и в тестах
«лестница», «рельсы», снижалось и соответствовало контрольным
показателям (рис. 3). Нарушение психомоторного поведения регистрировалось в
группе крысят, подвергшихся воздействию в раннем онтогенезе сывороткой крови
новорожденных с церебральной ишемией (группа Б). Особенности
психомоторного поведения заключались в том, что по мере усложнения тестов
(«эстакада») время от начала опыта до начала пробежки и время пробежки по
переходным сооружениям не только не возрастало, а даже достоверно было ниже,
чем в контрольной группе (интактные крысята) (рис. 1, 2). Динамика количества
срывов лапок у крысят в тестах («рельсы», «эстакада») совпадала: выявлялось их
достоверное увеличение во все дни опытов по отношению к группе А и к
контролю. На 3-й день исследования, несмотря на процесс обучения, количество
срывов лапок у животных было выше, чем в 1-й день (рис. 3).
Снижение времени от начала опыта до начала пробежки по сооружениям
свидетельствует о том, что крысята не способны выделять новизну ситуации, у
них нарушена ориентировочная реакция. Новизна ситуации (усложнение тестов)
влечет за собой ориентировочную реакцию, в которой присутствует
эмоциональная компонента. Выявленное уменьшение времени пробежки по
переходным сооружениям при усложнении тестов указывает на повышенную
двигательную активность крысят. Несмотря на процесс обучения, количество
срывов лапок по мере усложнения теста увеличивалось, т. е. тренировки не
приводили к снижению числа срывов лапок, что говорит об ухудшении
способности крысят к обучению. Полученные результаты свидетельствуют о том,
что воздействие в пренатальный период сывороткой крови новорожденных с
церебральной ишемией, приводит к изменениям ориентировочной реакции,
эмоциональности, двигательного поведения и когнитивным нарушениям у
потомства.
14
сек
60
лестница
рельсы
эстакада
*
#
#
45
##
**
#
#
30
*
*
15
0
1
2
3
1
2
3
1
2
3
дни
Рисунок 1. Динамика средних показателей времени от начала опыта до начала пробежки по
переходным сооружениям.
Обозначения: по оси ординат - время от начала опыта до начала пробежки по сооружениям в секундах, по оси
абсцисс - дни исследований.
□ - интактные крысята
- воздействие на 14-й день эмбриогенеза крыс сывороткой крови здоровых новорожденных.
- воздействие на 14-й день эмбриогенеза крыс сывороткой крови новорожденных с церебральной
ишемией (СК2).
- воздействие на 14-й день СК2 и внутрижелудочное введение ω-3 ПНЖК на 14-й,15-й, 16-й д. э. к.
- воздействие на 14-й день СК2 и внутрижелудочное введение ω-3 ПНЖК на 9-й, 12-й, 13-й, 14-й д. э. к.
* - р≤0,05, **- р≤0,01 статистически значимые различия по сравнению с контролем К.
# - р≤0,05 статистически значимые различия по сравнению с группой Б
сек
лестница
рельсы
эстакада
20
*
16
#
12
#
#
#
*
*
**
8
#
#
**
*
4
*
*
0
1
2
3
1
2
3
1
2
Рисунок 2. Динамика средних показателей времени пробежки по переходным сооружениям.
По оси ординат - время пробежки по переходным сооружениям в секундах, по оси абсцисс - дни
исследований. Остальные обозначения те же, что на рисунке 1.
* - р≤0,05, ** - р≤0,01 статистически значимые различия по сравнению с контролем К.
# - р≤0,05 статистически значимые различия по сравнению с группой Б.
15
3 дни
количество
лестница
рельсы
эстакада
▲▲
**
▲
▲
10
▲▲
*
**
▲
*
▲
8
▲▲
**
12
*
*
#
#
6
#
#
#
#
#
4
#
#
#
2
0
1
2
3
1
2
3
1
2
3 дни
Рисунок 3. Динамика средних показателей количества срывов лапок у крысят.
По оси ординат - количество срывов лапок, по оси абсцисс - дни исследований.
Остальные обозначения те же, что и на рисунке 1.
* - р≤0,05, ** - р≤0,01 статистически значимые различия по сравнению с контролем К.
▲ - р≤0,05 статистически значимые различия по сравнению с группой А.
# - р≤0,05 статистически значимые различия по сравнению с группой Б.
У крысят после пренатального введения беременным самкам ω-3 ПНЖК
на 14-й, 15-й, 16-й дни эмбриогенеза показатели времени от начала опыта до
начала пробежки, времени пробежки по сооружениям и количество срывов лапок
достоверно отличались от крысят группы Б и были сопоставимы с контролем и
группой А (рис. 1, 2, 3). Динамика показателей психомоторного поведения у
крысят, матери которых получили ω-3 ПНЖК на 9-й, 12-й, 13-й и 14-й дни
эмбриогенеза, выявила, что наиболее успешная коррекция достигалась при
профилактическом приеме препарата.
Таким образом проведенные исследования показали, что у крысят,
перенесших воздействие на 14-й день эмбриогенеза сыворотки крови
новорожденных с церебральной ишемией, наблюдаются уменьшение объема
дендритной системы и количества больших пирамидных нейронов в раннем
постнатальном онтогенезе, т. е. нарушается процесс развития сенсомоторной коры.
Уменьшение количества больших пирамидных нейронов может быть одной из
причин нарушения формирования двигательных реакций крысят. Изменение
структуры коры мозга в раннем онтогенезе может нарушать нормальный процесс
формирования межнейронных связей и приводить к нарушению двигательного
поведения, эмоциональности и к ухудшению процессов обучения. Добавление в
рацион беременных крыс ω-3 ПНЖК корректировало нарушения психомоторного
поведения крысят. Наиболее выраженный нейропротекторный эффект достигался
при профилактическом введении препарата беременным самкам.
Эффективность коррекции осложнений беременности и перинатальных
исходов с помощью ω-3 ПНЖК
Полученные экспериментальные данные указывают на эффективность
применения ω-3 ПНЖК для профилактики и коррекции структурных и
функциональных нарушений у крысят при моделировании психомоторных
16
нарушений новорожденных детей, что и определило целесообразность
применения ω-3 ПНЖК при осложнениях беременности у женщин
одновременно с патогенетической терапией. Обследованы 149 беременных
женщин: 1-я группа 97 беременных, которые получали только традиционное
лечение; 2-я группа 52 беременных, получавших комплексную терапию, т. е.
одновременно с традиционной терапией принимали ω-3 ПНЖК - эпаден по 2
капсулы 3 раза в день или 1,8 г/сутки (1 капсула содержит 300 мг
эйкозапентаеновой и докозагексаеновой кислоты). Проводилось 2 курса лечения
с 20 по 24 неделю и повторно через 1,5 месяца с 30 по 34 недели беременности.
К причинам, способствующим развитию перинатальных гипоксических
поражений мозга плода, относят соматические заболевания, осложнения
беременности и родов, частота которых была одинаково высока среди всех
обследованных женщин. Результаты нашего анализа показали отсутствие
достоверных различий влияний социально–биологических факторов,
акушерско-гинекологического анамнеза и соматических болезней на
развитие патологии беременности (табл. 4).
Таблица 4. Структура и частота выявленных факторов риска развития осложнений
беременности.
Факторы риска
1 группа
2 группа
Возраст матери моложе 20 лет
4 (4,1%)
3 (5,7%)
32 года и старше
9 (9,3%)
4 (7,6%)
12 (12,4%)
12 (23%)
6 (6,2%)
4 (7,6%)
Мертворождение, антенатальные потери плодов
11 (11,3%)
4 (7,6%)
Самопроизвольные и искусственные аборты
58 (59,7%)
24 (46,1%)
40 (41,2%)
19 (36,5%)
7 (7,2%)
5 (9,6%)
24 (24,7%)
12 (23%)
3. Миокардиодистрофия без НКО
9 (9,3%)
2 (3,8%)
Заболевания мочевыделительной системы
31(32%)
11 (21,2%)
24 (24,7%)
9 (17,3%)
2. Мочекаменная болезнь
7 (7,2%)
2 (3,8%)
Заболевания эндокринной системы
16(16,5%)
10 (19,2%)
11 (11,3%)
6 (11,5%)
5 (5,1%)
4 (7,7%)
36 (37,1%)
20 (38,4%)
I. Социально–биологические факторы
Вредные привычки
II. Акушерско-гинекологический анамнез
Миома матки
III. Соматическая патология
Сердечно-сосудистые заболевания
1. Гипертоническая болезнь I, II,III ст.
2. Вегетососудистая дистония по гипотоническому типу
1. Хронический пиелонефрит
1. Ожирение I, II, III степени
2. Дисфункции щитовидной железы
Железодефицитная анемия (Hb 80-110 г/л)
Примечание: 1 группа – беременные, получавшие традиционную терапию (n=97).
2 группа – беременные, получавшие комплексную терапию (n=52).
Большинство беременных отмечали в анамнезе самопроизвольные
выкидыши (в 1-й группе 59,7% и во 2-й группе 46,1%, р0,2), мертворождения и
17
антенатальные потери плодов (11,3% и 7,6%, р0,2). Результаты исследования
экстрагенитальной патологии в группе женщин получивших комплексную
терапию показали, что по структуре они не отличались от данных у женщин
получивших традиционную терапию (р>0,2), при этом ведущее место в обеих
группах занимали анемии, заболевания сердечно–сосудистой, эндокринной и
мочевыделительной систем (табл. 4).
Таблица 5. Структура и частота осложнений в период беременности и родов.
Факторы риска
1 группа
2 группа
Угроза прерывания во II и в III триместре беременности
37 (38,1%)
15 (28,8 %)
Гестозы
77 (79,3%)
30 (57,6 %)**
34 (35%)
14 (26,9 %)
2. Преэклампсия легкой степени
27 (27,8%)
10 (19,2 %)
3. Преэклампсия средней тяжести
12 (12,4%)
6 (11,5%)
4 (4,1%)
0
Задержка развития плода
21 (21,6 %)
8 (15,4 %)
Маловодие
14 (14,4 %)
4 (7,7 %)
Преждевременное излитие околоплодных вод
36 (37,1%)
20 (38,4 %)
Аномалии родовой деятельности
43 (44,3%)
23 (44,2%)
24 (24,7 %)
11 (21,1 %)
2. Дискоординация родовой деятельности
6 (6,2 %)
5 (9,6 %)
3. Стремительные роды
8 (8,3 %)
4 (7,7 %)
4. Затяжные роды
5(5,2 %)
3 (5,8 %)
Родостимуляция
24 (24,7%)
11 (21,1%)
Преждевременные роды
23 (23,7%)
6 (11,5 %)
Срочные роды
74 (76,3%)
46 (88,5 %)
1. Отеки беременых
4. Тяжелая преэклампсия
1. Первичная и вторичная слабость
Примечание: 1 группа – беременные, получавшие традиционную терапию (n=97).
2 группа – беременные, получавшие комплексную терапию (n=52).
** - р≤0,01 достоверность отличий от показателей женщин 1-й группы.
Частота интранатальных факторов риска (преждевременное излитие
околоплодных вод, аномалии родовой деятельности, родостимуляция) в группах
сравнения достоверно не отличались (табл. 5). Наиболее частыми осложнениями
беременности
были
гестозы,
угроза
прерывания
беременности,
преждевременные роды (табл. 5). Среди женщин, которые получали
традиционную терапию, доля гестозов была достоверно выше, чем среди
женщин, получивших комплексную терапию (р=0,007). Снижение гестозов было
обусловлено отсутствием случаев тяжелой преэклампсии, а также снижения
частоты легких форм гестоза (отеков беременных и преэклампсии легкой
степени). Неэффективность традиционной терапии, нарастание тяжести гестоза и
симптомов плацентарной недостаточности приводило к увеличению
преждевременных родов (явилось причиной родоразрешения беременных
женщин в 33–34 недели гестации) и негативно отражалось на состоянии здоровья
новорожденного. У детей выявлялись тяжелые неврологические нарушения,
18
которые требовали длительного лечения. В группе женщин, принимавших ω-3
ПНЖК, случаев прерывания беременности по причине тяжелого течения гестоза
не отмечено. Досрочное родоразрешение потребовалось при длительном течении
гестоза и проводилось на более поздних сроках (36–37 недель гестации), что
способствовало увеличению числа случаев своевременных родов и снижению
перинатальной заболеваемости.
Частота угрозы прерывания беременности в группе женщин, получивших
традиционную терапию, была в 1,3 раза выше, чем в группе женщин, получивших
комплексную терапию. После проведения комплексной терапии отмечалась
тенденция к более частому завершению беременности своевременными родами по
сравнению с группой женщин получивших традиционную терапию (88,5% во 2-й
группе против 76,3% в 1-й группе, р=0,085). У женщин, получивших
традиционную терапию, беременность осложнялась преждевременными родами в
2 раза чаще, чем у женщин, получивших комплексную терапию (выявлена
тенденция повышения числа преждевременных родов в отличие от женщин
получивших комплексную терапию - 23,7% и 11,5% соответственно, р=0,085). Это
закономерно и обусловлено высокой частотой угрозы прерывания беременности
(38,1%), а также гестозами у беременных этой группы. Установлено, что в группе
беременных, получивших комплексную терапию, гестационный возраст плода к
моменту рождения колебался от 34 до 36 недель. Наибольшая частота потерь
беременности, после традиционной терапии пришлась на сроки 29-32 недели, в
связи с этим исход для плода в данной группе беременных представляется
наиболее неблагоприятным. Полученные результаты показали, что включение ω-3
ПНЖК в комплексную терапию беременных женщин дало возможность улучшить
клиническое течение беременности, пролонгировать ее продолжительность,
снизить угрозу прерывания беременности, долю преждевременных родов и
увеличить количество своевременных родов.
Таким образом включение ω-3 ПНЖК в комплексную терапию приводило
к тому, что симптомы невынашивания, гестозов и плацентарной
недостаточности, выявленных на ранних сроках не прогрессировали или
прогрессировали медленно. Это способствовало пролонгированию беременности
до оптимальных сроков родоразрешения и, тем самым, снижало риск развития
перинатальной патологии.
Прием беременными ω-3 ПНЖК оказывал положительное воздействие и на
состояние новорожденных детей, несмотря на наличие материнских,
антенатальных и интранатальных факторов риска. Данные, представленные в
таблице 6, свидетельствуют о наибольшем проценте недоношенных детей,
отмечаемом среди женщин, получивших традиционную терапию, и
составляющим 23,7%, что объясняется высокой частотой угрозы невынашиваний,
преждевременных родов и гестозов. Применение женщинами ω-3 ПНЖК во время
беременности выявило тенденцию к снижению случаев рождения недоношенных
детей (11,5% во 2-й группе и 23,7% в 1-й группе, р=0,085). Частота рождения
недоношенных детей была в 2 раза ниже, чем среди женщин, получивших только
традиционную терапию. Необходимо отметить, что в структуре недоношенных
19
детей у беременных, получивших традиционную терапию, доля
глубоконедоношенных (менее 32 недель) встречалась достоверно чаще, чем среди
женщин, получивших комплексную терапию (р=0,007) (табл. 6).
Таблица 6. Частота рождения доношенных и недоношенных детей.
Срок гестации
1 группа
2 группа
Доношенные дети
74 (76,3%)
46 (88,5%)
Недоношенные дети
23 (23,7%)
6 (11,5%)
Глубоконедоношенные дети (срок гестации 28–32 недели)
20 (20,6%)
2 (3,8%)**
Примечание: 1 группа - дети, родившиеся от матерей, получавших традиционную терапию
(n=97); 2 группа - дети, родившиеся от матерей, получавших комплексную терапию (n=52).
** - р ≤0,01 достоверность отличий от показателей 1-й группы.
Это также вносит негативный вклад в показатели перинатальной и детской
заболеваемости у детей, родившихся от матерей, получивших традиционную
терапию. Данный факт является доказательством негативного влияния
осложненного течения беременности, в том числе, развития плацентарной
недостаточности, на внутриутробное развитие плода. Положительное влияние
комплексной терапии беременных на состояние новорожденных при рождении
проявлялось в оценке их состояния по шкале Апгар. Включение ω-3 ПНЖК в
комплексную терапию беременных женщин привело к тому, что достоверно
увеличилось число детей, родившихся в удовлетворительном состоянии
(р=0,043) (табл. 7).
Таблица 7. Оценка состояния новорожденных детей при рождении.
Состояние новорожденных при рождении
Удовлетворительное состояние
8 баллов в конце 1-й минуты
9 баллов в конце 5-й минуты
Умеренная асфиксия
4-6 баллов в конце 1-й минуты
7-8 баллов в конце 5-й минуты
Тяжелая асфиксия
1-3 баллов в конце 1-й минуты
5-6 баллов в конце 5-й минуты
1 группа
2 группа
69 (71,1%)
45 (82,7%) *
25 (25,8%)
9 (17,3%)
3 (3,1%)
0
Примечание: 1 группа - дети, родившиеся от матерей, получавших традиционную терапию
(n=97); 2 группа - дети, родившиеся от матерей, получавших комплексную терапию (n=52).
* - р ≤0,05 достоверность отличий от показателей 1-й группы.
Большинство детей, родившихся от матерей, принимавших ω-3 ПНЖК во
время беременности, родились в удовлетворительном состоянии или имели
умеренную асфиксию. Детей, родившихся в тяжелой асфиксии, не отмечено. В
то время как в группе матерей, получивших только традиционную терапию,
лишь 71,1% имели нормальную (8-9 баллов) оценку состояния по шкале Апгар,
28,9%-родилось в асфиксии различной степени тяжести, в том числе 3,1% в
асфиксии тяжелой степени. Это связано с осложненным течением беременности
у данной группы женщин, высокой частотой гестозов, преждевременных родов
(недоношенностью), отсутствием комплексной терапии и нарушениями
состояния новорожденных, выявленных впоследствии при проведении
обследования.
20
Новорожденные обеих исследуемых групп женщин имели различные по
степени выраженности неврологические нарушения в неонатальном периоде.
Неврологическая симптоматика в раннем неонатальном периоде, обусловленная
внутриутробной гипоксией при осложнениях беременности (угроза прерывания
беременности, гестозы, плацентарная недостаточность), чаще диагностировались
у детей, матери которых получили традиционную терапию, чем у детей, матери
которых получили комплексную терапию (28,9% и 17,3%, соответственно).
Гипертензионно-гидроцефальный, судорожный синдромы, синдром двигательных
нарушений и общего угнетения центральной нервной системы в 1,5-2 раза чаще
отмечались среди детей, родившихся от матерей, получивших традиционную
терапию, в связи с высокой частотой появления недоношенных детей и случаев
развития асфиксии. При этом если среди детей, родившихся от матерей,
прошедших курсовую терапию ω-3 ПНЖК, преобладали легкие формы, то среди
детей, родившихся от матерей, получивших традиционную терапию, установлены
нарушения тяжелые и среднетяжелые, что указывает на отрицательное влияние
внутриутробной гипоксии на развитие плода и становление организма
новорожденного.
Интерес представляют отдаленные последствия осложнений, возникающих
при беременности для новорожденных. Для этого совместно с неонаталогом и
невропатологом были изучены особенности нервно-психического развития
наблюдавшихся детей до 1 года. Результаты наблюдений показали, что на фоне
проводимой традиционной терапии во время беременности, отклонения в нервнопсихическом развитии к концу 1 года жизни выявлены у 35,4% детей (n=34 из 97,
р=0,002) и, в основном, у недоношенных. У детей, родившихся преждевременно,
имелись тяжелые неврологические нарушения, которые требовали длительного
лечения. Отклонения в нервно-психическом развитии проявлялись в виде
гипертензионного синдрома, перинатальной энцефалопатии. Проведение
курсовой терапии ω-3 ПНЖК во время беременности приводило к ранней
регрессии признаков перинатальной энцефалопатии (нормализации двигательных
реакций, регрессии признаков внутричерепной гипертензии, нормализации сна).
Признаки гипертензионного синдрома и повышенной нервно-рефлекторной
возбудимости к концу 1 года жизни сохранялись лишь в 11,5 % случаев (n=6 из
52), что достоверно меньше, чем в группе детей, родившихся от матерей,
получавших традиционную терапию (р=0,002).
Полученные нами результаты указывают на то, что наличие у беременных
осложнений (невынашивания, гестозов, плацентарной недостаточности)
неблагоприятно сказывается на внутриутробном развитии плода, состоянии
ребенка при его рождении и течении неонатального периода. У новорожденных,
родившихся от матерей с осложнениями беременности, чаще отмечаются
недоношенность, асфиксия различной степени тяжести, реализация
неврологических нарушений в раннем и позднем неонатальном периоде.
Несмотря на воздействие многочисленных антенатальных и интранатальных
факторов на центральную нервную систему плода, включение ω-3 ПНЖК в
комплексную терапию позволяет снизить частоту осложнений при беременности
21
(невынашивания, гестозов, плацентарной недостаточности), облегчает
клиническое течение и тяжесть, способствует пролонгированию беременности до
оптимальных сроков родоразрешения. Следует также полагать, что снижение
показателей перинатальной заболеваемости (недоношенности, асфиксии и
неврологических расстройств в неонатальном периоде у новорожденных)
находится в прямой связи с приемом ω-3 ПНЖК на фоне применения
общепринятых препаратов для терапии осложнений, возникающих при
беременности.
Учитывая изменения, происходящие в сосудах системы «матьплацента-плод» и в системе гемостаза у пациенток при осложнениях
беременности, можно сделать вывод о том, что лечебный эффект ω-3 ПНЖК
связан с их влиянием на патогенетическое звено развития гестозов,
невынашивания,
плацентарной
недостаточности.
Клиникофармакологические
эффекты
обусловлены
суммарным
действием
докозагексаеновой и эйкозапентаеновой кислот. Докозагексаеновая кислота,
в первую очередь необходима плоду для синтеза всех клеток и мембран
организма, клеток иммунной системы, сетчатки глаза, прежде всего для
структур мозга, увеличивая активность синтеза астроцитов, дендритов и их
разветвленность (William, 2000; Catatan et аl., 2002; Серов и Сидельникова,
2008). Положительный эффект эйкозапентаеновой кислоты обусловлен
мембраностабилизирующим действием, воздействием на сосудистотромбоцитарное звено гемостаза, а также, снижением интенсивности
свободнорадикального окисления и повышением антиоксидантной
активности крови (Furst, Kuhn, 2000; Breanne, David, 2009). При достаточном
поступлении в организм ω-3 ПНЖК частично вытесняет арахидоновую
кислоту, вступая в конкурентное замещение в фосфолипидах клеточных
мембран на циклооксигеназном и 5-липооксигеназном уровне метаболизма
(Marangell et al., 2004; Мозговая и Зайнулина, 2008). Изменение соотношения
ω-6/ω-3 ПНЖК приводит к изменению отношений концентраций различных
лейкотриенов и простаглaндинов, вызывая тем самым различные
физиологические эффекты. Конкурируя с арахидоновой кислотой как
субстрат реакции с участием фермента циклооксигеназы, они ингибируют
продукцию простагландинов (ПГЕ2), тромбоцитами тромбоксана (Tx2)
(сильного активатора агрегации тромбоцитов и эритроцитов), и вместо него
продуцируется физиологически неактивный тромбоксан (Tx3) (Rupp et al.,
2002; Громова и соавт., 2009). В дополнение этому из эйкозапентаеновой
кислоты синтезируется простациклин (ПЦ3), который также содействует
вазодилатации (Fisher, Weber, 1985). Результатом изменения баланса между
арахидоновой кислотой и ω-3 ПНЖК в сторону эйкозапентаеновой и
докозагексаеновой кислот является увеличение вазодилатации и уменьшение
агрегации тромбоцитов, эритроцитов. Немаловажное значение имеет
противовоспалительное действие. Превращения ω-3 ПНЖК с участием
фермена 5-липоксигеназы проявляется в повышении концентрации
лейкотриена (LT5) и в ингибировании синтеза лейкотриена (LT4), мощного
22
индуктора воспаления, хемотаксиса, адгезии лейкоцитов, а также
провоспалительных
цитокинов-фактора
некроза опухоли
(ФНОα),
интерлейкинов1β и 6 (ИЛ-1β, ИЛ-6) (Rupp et al., 2002; Calder, 2008; Richard et
аl., 2009).
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Воздействие амниотической жидкостью женщин с осложнениями
беременности или сывороткой крови их детей с церебральной ишемией на 14-й день
беременности крыс вызывает у потомства структурные и функциональные
расстройства. У крысят выявляются эмбриотоксический и тератогенный эффекты,
снижается жизнеспособность, задерживается нормальное формирование и
созревание нервной системы, что приводит к психомоторным изменениям и
когнитивным нарушениям. Добавление в рацион беременных самок ω-3 ПНЖК
снижает патогенное воздействие амниотической жидкости или сыворотки крови
детей, что способствует нормализации структурных и функциональных расстройств
у потомства. Наиболее успешная коррекция достигается при добавлении ω-3 ПНЖК
в пищу в профилактических целях. Полученные экспериментальные результаты
позволили применить ω-3 ПНЖК при осложнениях беременности женщин.
Проведение своевременной курсовой терапии ω-3 ПНЖК у женщин позволило
снизить частоту, длительность и тяжесть осложнений, возникающих при
беременности, а также улучшить перинатальные исходы.
ВЫВОДЫ
1. Разработана на крысах модель психомоторных нарушений у
новорожденных детей воспроизводимая путем внутриамниотического введения
беременным самкам амниотической жидкости женщин с осложнениями
беременности или сыворотки пуповинной крови их детей с церебральной
ишемией.
2. Внутриамниотическое введение крысам амниотической жидкости
женщин с осложнениями, возникающими при беременности или сыворотки
пуповинной крови их детей, вызывало у их потомства эмбриотоксический и
тератогенный эффекты, уменьшение дендритной системы и количества нейронов
в сенсомоторной области коры, а также психомоторные нарушения в
постнатальный период.
3. Ведение в рацион беременных крыс ω-3 ПНЖК снижало
эмбриотоксический эффект, предупреждало возникновение пороков развития,
оказывало корригирующее действие на структурные и функциональные
нарушения у потомства. Наиболее выраженный нейропротекторный эффект
отмечен при профилактическом пренатальном введении ω-3 ПНЖК в рацион
беременных крыс.
4. Включение ω-3 ПНЖК в комплексную терапию беременных женщин с
гестозами, невынашиваниями, плацентарной недостаточностью способствовало
снижению частоты и тяжести осложнений, возникающих при беременности и
улучшению перинатальных исходов.
23
СТАТЬИ, ОПУБЛИКОВАННЫЕ В ЖУРНАЛАХ РЕКОМЕНДОВАННЫХ ВАК
1. Обухова Г.П., Селиверстова С.Г., Варлинская Е.И., Авалиани Т.В., Абдаладзе
Н.С., Тер-Карапетян В.А., Богданов О.В. Нейроморфологический анализ моторной
области коры мозга крысят, подвергшихся пренатальному воздействию нормальной и
патологической сыворотки крови. // Журнал эволюционной биохимии и физиологии.
1992. Т. 28. № 4. С. 510-517.
2. Атаева О.В., Абдаладзе Н.С., Лазаренко Н.С., Авалиани Т.В., Богданов О.В.
Локомоторное и пространственно-ориентировочное поведение крысят в норме и при
экспериментальной патологии. // Журнал высшей нервной деятельности. 1993. Т. 43. № 1.
С. 150-156.
3. Авалиани Т.В., Незговорова И.В., Абдаладзе Н.С., Богданов О.В.
Биотестирование беременных как метод оценки риска двигательных нарушений у
новорожденных. // Экология человека. 1994. № 1. С. 33-36.
4. Абдаладзе Н.С., Авалиани Т.В., Чеботарь Н.А., Богданов О.В.
Эмбриотоксический эффект у крыс при воздействии сыворотки крови новорожденных
детей, тестируемых на наличие трансферных факторов. // Онтогенез. 1994. № 1. С. 38-43.
5. Чеботарь Н.А., Конописцева Л.А., Доросев Н.В., Абдаладзе Н.С., Пучков В.Ф.
Токсический эффект серотонина при прямом действии на эмбрионы крысы. //
Морфология. 1995. Т. 108. № 1. С. 22-24.
6. Авалиани Т.В., Абдаладзе Н.С., Лазаренко Н.С., Клименко В.М.
Полиненасыщенные жирные кислоты предотвращают развитие локомоторных
нарушений, вызванных изменением нейрогуморального фона у крысят. // Онтогенез.
2010. Т. 41. № 3. С. 1-7.
7. Авалиани Т.В., Абдаладзе Н.С., Обухова Г.П., Чеботарь Н.А., Тер-Катапетян В.А.,
Богданов О.В. Коррекция внутриутробного патогенного воздействия на развитие крысят
введением ЭПК-ДГК в период беременности крыс. // «Нейрофармакология на рубеже двух
тысячелетий» Международная конференция, посвященная 100-летию со дня рождения
академика С.В. Аничкова. 6-8 октября 1992, С-Петербург, С.1.
8. Людыно М.И., Абдаладзе Н.С., Спирина О.В. Трансферные факторы сыворотки
крови беременных как маркеры нейрогуморальных нарушений у новорожденных детей. //
«Механизмы регуляции физиологических функций». Тезисы докладов. С-Петербург,
конференция молодых ученых и специалистов. 1992. Изд-во Военно-Медицинской академии
им. С.М. Кирова. С. 132-133.
9. Белобокова Н.К., Абдаладзе Н.С., Авалиани Т.В. Полиненасыщенные жирные
кислоты предотвращают развитие грубых двигательных и эмоциональных нарушений у
потомства. // Материалы междисциплинарной научной конференции с международным
участием «Новые биокибернетические и телемедицинские технологии 21 века для диагностики
и лечения заболеваний человека», Петрозаводск, 27-29 июня, 2002. С.26 .
10. Белобокова Н.К., Абдаладзе Н.С., Авалиани Т.В., Цикунов С.Г. Профилактика
нарушения эмбрионального развития плода у крыс полиненасыщенными жирными кислотами.
// Материалы Научной конференции «Актуальные вопросы клинической и экспериментальной
медицины». С - Пб СПбМАПО, 2003. С. 321-322.
11. Авалиани Т.В., Огурцов Р.П., Серякова О.Р., Белобокова Н.К., Пузырева В.П.,
Абдаладзе Н.С., Цикунов С. Г. Влияние латерализованного структурного повреждения мозга
матерей на иммунные и двигательные паттерны их потомства. // Сборник статей и тезисов
Второй Всероссийской конференции «Актуальные вопросы функциональной Межполушарной
асимметрии» Москва, май 2003. С. 5.
12. Абдаладзе Н.С., Авалиани Т.В., Клименко В.М. Снижение риска развития
перинатальной патологии препаратами омега-3 полиненасыщенных жирных кислот. //
Материалы международной конференции «Физиология развития человека», Москва, 21-24
июня, 2009 г. С. 4-5.
24