Высокочувствительное прямое определение тироидных ВЭЖХ/МС/МС
реклама
Техническая заметка AN121 Высокочувствительное прямое определение тироидных гормонов Т3 и Т4 в сыворотке крови с помощью метода ВЭЖХ/МС/МС Краткое описание технической заметки: Представлен метод быстрого и чувствительного определения трииодотиронина и тироксина в сыворотке крови с помощью тройного квадрупольного массспектрометра IONICS 3Q 320 Нижний предел количественного определения обоих соединений при использовании IONICS 3Q 320 составляет менее 0.78 пг/мл Линейность калибровочной кривой соблюдается в интервале 0.78 пг/мл – 4,000 пг/мл время анализа менее 4 минут 1. Введение: Тироидные гормоны 3,3’,5 трииодотиронин и тироксин (T3 и T4 соответственно) являются эндогенными гормонами и играют важную роль во многих биологических процессах, включая метаболизм углеводов, потребление кислорода и синтез белков. Определение тироидных гормонов необходимо при диагностике гипер- и гипотироидизма и требует высокой специфичности и чувствительности, которые не могут обеспечить иммунные методы. В последние годы применение ВЭЖХ/МС/МС для анализа низких концентраций Т3 и Т4 продемонстрировало преимущества этого метода по сравнению с иммуными методами благодаря более высокой селективности и чувствительности определения. Применение ВЭЖХ/МС/МС метода с использованием тройного квадрупольного массспектрометра IONICS 3Q 320 позволяет не только существенно повысить специфичность и чувствительность определения этих гормонов, но и значительно упрощает пробоподготовку. 2. Метод 2.1 Пробоподготовка Маточные растворы Т3 и Т4 концентрацией 100 мкг/мл готовились в метаноле с добавлением 0.1N NH3. Сыворотка крови человека использовалась в качестве матрицы. Маточные растворы T3 и T4 вносились в сыворотку крови. Маточные растворы T3 и T4 вносились в сыворотку крови для получения аналитического раствора концентрацией 10 нг/мл, который затем последовательно разбавлялся для получения растворов для построения калибровочной кривой. Внутренний стандарт не применялся. 2.2 Параметры масс-спектрометра Для анализа T3 и T4 применялся масс-спектрометр IONICS 3Q 320 с источником ионов с электрораспылением. Использовались следующие параметры масс-спектрометра: Напряжение ESI = -5,000 В; HSID = 300 ºС; Газ-распылитель = 200; Газ-осушитель = 120; Газ-нагреватель = 350; Температура источника = 325 ºС. Компонент Т3 Т4 MRM 649.7/127.0 775.7/127.0 CE 50 49 CCL2 86 164 CCL4 82 73 2.3 Хроматографические условия Анализ тироидных гормонов проводился с использованием тройного квадрупольного масс-анализатора IONICS 3Q-320 подсоединенного к ВЭЖХ системе Shimadzu UFLC. Использовалась колонка Waters Xbridge C18 column (100 x 2.1 mm, 3.5µm) при температуре хроматографирования 40 ºC с градиентом подвижной фазы: растворитель Б (0.1% муравьиной кислоты и 2 мМ ацетата аммония в ацетонитриле), растворитель А: 0.1% муравьиной кислоты и 2 мМ ацетата аммония в 2 %-м ацетонитриле. Время цикла 6 мин при скорости подвижной фазы 60 мкл/мин. Техническая заметка AN121 3. Результаты Рис 1. Отсутствие эффекта памяти для Т3 и Т4 На рисунке 1 показаны результаты эксперимента по отсутствию эффекта памяти для Т3 и Т4. Компоненты хорошо разделяются в выбранных условиях хроматографирования. На рисунке 1 красной линией представлена хроматограмма 500 мкг/мл Т3 и Т4. Зеленой линией представлена увеличенная хроматограмма растворителя, проанализированного сразу же после образца Т3 и Т4. Перенос веществ. как видно из рисунка, не происходит. Предел обнаружения для Т3 и Т4 составил менее 0,7 пг/мл ( Рис 2.a и 2.b) 3.2 Линейность Калибровочная кривая Т3 и Т4 в сыворотке крови линейна в динамическом диапазоне 0.78-4000 пг/мл Нижний предел количественного определения обоих веществ в сыворотке 0.78 пг/мл при CV 14.4% и точности 117.3% (Рис. 3). Рис. 3. Калибровочная кривая Т3 в сыворотке крови человека Рис. 4. Калибровочная кривая Т4 в сыворотке крови человека 4. Заключение Применение тройного квадрупольного масс-спектрометра IONICS 3Q 320 позволило разработать селективный и высокочувствительный метод определения низких концентраций тироидных гормонов в сыворотке крови человека. Нижний предел количественного определения Т3 и Т4 составляет 0,78 пг/мл. Анализ контрольных образцов Т3 и Т4 демонстрирует высокую точность и воспроизводимость анализа низких концентраций при минимальной пробопорготовке, которые могут быть достигнуты с применением массанализатора IONICS 3Q 320 при ВЭЖХ/МС/МС анализе тироидных гормонов. 5. Контактная информация Для того, чтобы узнать больше о масс-спектрометрах, услугах и других продуктах компании IONICS Вы можете посетить веб-сайт www.ionics.ca или связаться с представителями компании напрямую. Контакты: ООО «БиоФармЭксперт», т. +7-915-180-5909 sales@biopharmexpert.com
