Гатыповой Даримы Бадмажаповны
реклама
1 РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ НАУК СИБИРСКОЕ ОТДЕЛЕНИЕ ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ НАУКИ ИНСТИТУТ ОБЩЕЙ И ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ БИОЛОГИИ На правах рукописи ГАТЫПОВА ДАРИМА БАДМАЖАПОВНА АДАПТОГЕННЫЕ СВОЙСТВА КОМПЛЕКСНОГО РАСТИТЕЛЬНОГО СРЕДСТВА «ТОНОФИТ» 14.03.06 – фармакология, клиническая фармакология ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Научный руководитель: д.б.н., профессор Шантанова Л.Н. Улан-Удэ - 2015 2 ОГЛАВЛЕНИЕ ВВЕДЕНИЕ 5 ГЛАВА 1. СОВРЕМЕННЫЕ ПРЕДСТАВЛЕНИЯ О ПАТОГЕНЕТИ- 10 ЧЕСКИХ МЕХАНИЗМАХ СТРЕСС-ИНДУЦИРОВАННЫХ ПАТОЛОГИЧЕСКИХ СОСТОЯНИЙ И СРЕДСТВАХ, ПОВЫШАЮЩИХ НЕСПЕЦИФИЧЕСКУЮ РЕЗИСТЕНТНОСТЬ ОРГАНИЗМА 1.1. Современные представления об адаптации и механизмах 10 ее формирования 1.2. Краткие сведения о средствах, обладающих адаптогенной актив- 21 ностью 1.3. Сведения о растениях, входящих в состав «Тонофита» 28 ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ 43 ГЛАВА 3. ИССЛЕДОВАНИЕ СПЕКТРА ФАРМАКОЛОГИЧЕСКОЙ 51 АКТИВНОСТИ «ТОНОФИТА» 3.1. Определение острой токсичности «Тонофита» 51 3.2. Влияние «Тонофита» на устойчивость к интенсивным физическим 52 нагрузкам 3.2.1. Влияние на общую физическую выносливость 52 3.2.2. Влияние на силовую выносливость 53 3.3. Влияние «Тонофита» на устойчивость к кислороддефицитным 54 состояниям 3.3.1. Влияние на устойчивость к гемической гипоксии 54 3.3.2. Влияние на устойчивость к гипобарической гипоксии 56 3.3.3. Влияние на устойчивость к гиперкапнической гипоксии 57 3.3.4. Влияние на устойчивость к тканевой гипоксии 58 3.4. Влияние «Тонофита» на устоичивость к иммобилизвционному 59 стрессу 3.5. Влияние «Тонофита» на устойчивость к интоксикации тетрахлор- 60 3 метаном 3.6. Влияние «Тонофита» на устойчивость тканей к действию флого- 62 генных агентов 3.6.1. Влияние на процессы альтерации и регенерации 62 3.6.2. Влияние на фазу экссудации процесса воспаления 63 ГЛАВА 4. ИССЛЕДОВАНИЕ ВЛИЯНИЯ «ТОНОФИТА» НА ЦЕН- 65 ТРАЛЬНУЮ НЕРВНУЮ СИСТЕМУ 4.1. Исследование психотропной активности «Тонофита» 65 4.1.1. Влияние на поведенческую активность в тесте «открытое поле» 65 4.1.2. Влияние на поведенческую активность в тесте «приподнятый 67 крестообразный лабиринт» 4.1.3. Влияние на поведенческую активность в конфликтной 68 ситуации 4.2. Влияние «Тонофита» на выработку «условного рефлекса пассив- 70 ного избегания» 4.3. Влияние «Тонофита» на снотворное действие барбитуратов 71 ГЛАВА 5. ИССЛЕДОВАНИЕ ФАРМАКОТЕРАПЕВТИЧЕСКОЙ ЭФФЕКТИВНОСТИ «ТОНОФИТА» 5.1. Профилактическая эффективность 73 «Тонофита» при 73 иммобилизационном стрессе 5.2. Профилактическая эффективность «Тонофита» при интенсивных 78 физических нагрузках 5.3. Фармакотерапевтическая эффективность «Тонофита» при токсиче- 81 ском повреждении печени 5.4. Фармакотерапевтическая эффективность «Тонофита» при иммуно- 86 супрессивном состоянии ГЛАВА 6. ИЗУЧЕНИЕ ОСОБЕННОСТЕЙ МЕХАНИЗМОВ 89 4 АДАПТОГЕННОГО ДЕЙСТВИЯ «ТОНОФИТА» 6.1. Изучение мембраностабилизирующей активности «Тонофита» 89 6.1.1. Влияние на устойчивость мембран эритроцитов 89 6.1.2. Влияние на дегрануляцию тканевых базофилов 90 6.2. Изучение антиоксидантной активности «Тонофита» 92 6.2.1. Антирадикальная активность по отношению к супероксидным 92 радикалам 6.2.2. Антирадикальная активность по отношению к NO радикалам 93 6.2.3.. Влияние «Тонофита» на скорость накопления ТБК-активных 94 продуктов 6.2.4. Влияние «Тонофита» на инактивацию Н2О2 95 6.2.5. Определение хелатирующей активности «Тонофита» 95 ГЛАВА 7. ОБСУЖДЕНИЕ 97 ЗАКЛЮЧЕНИЕ 103 ВЫВОДЫ 105 ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ 106 СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 107 5 ВВЕДЕНИЕ Актуальность. В настоящее время одной из актуальных проблем медицинской науки и практического здравоохранения является проблема повышения неспецифической резистентности организма, что связано с усилением эколого-социального прессинга, увеличением числа стрессогенных факторов, действующих на человека на современном этапе развития общества. Вследствие этого в экономически развитых странах отмечается существенная депрессия защитно-компенсаторных механизмов человека и рост числа «болезней цивилизации», к которым относят патологии сердечнососудистой, нервной, иммунной, эндокринной, пищеварительной систем. Из них сердечно-сосудистые, онкологические, легочные болезни и сахарный диабет прочно заняли ведущие места среди причин смертности, инвалидности и временной нетрудоспособности (Пшенникова, 2001; Агаджанян и соавт., 2003). В связи с этим поиск и разработка новых эффективных адаптогенных средств является одной из приоритетных задач современной медицинской науки. При этом наиболее перспективным является использование адаптогенов растительного происхождения, имеющих несомненные преимущества перед синтетическими ввиду их высокой эффективности, отсутствия токсичности и риска развития негативных побочных реакций при длительном применении (Яременко, 2005; Арушанян, 2008). Растительные препараты находят все более широкое применение в качестве средств дополнительной терапии, а также в качестве лечебно-профилактических средств на начальных стадиях заболевания и на этапе противорецидивной терапии (Соколов, 2000). Перспективным направлением является разработка многокомпонентных растительных средств на основе тибетских рецептурных прописей, высокая фармакотерапевтическая эффективность которых обусловлена гармоничным сочетанием биологически активных веществ, осуществляющих коррекцию функционального состояния организма в целом. На основании данных литературных источников (Сумати Праждня, 2008; Вайдурья онбо, 2014) и в со- 6 ответствии с принципами составления многокомпонентных препаратов (Николаев и соавт., 1988) нами разработано комплексное растительное средство в форме экстракта жидкого, условно названное «Тонофит». В его состав входит сырье следующих видов растений: левзеи сафлоровидной (Leuizea carthamoides Willd.), родиолы розовой (Rhodiola rosea L.), девясила высокого (Inula helenium L.), имбиря лекарственного (Zingiber officinale Roscoe.), ревеня тангутского (Rheum tanguticum L.), боярышника кровавокрасного (Crataegus Sanguinea Pall.), шиповника (Rosa cinnamomea L.), кардамона (Elettaria cardamomum (L.) Maton., листья крапивы двудомной (Urtica dioica L.). Целью настоящего исследования явилось определение спектра адаптогенной активности и фармакотерапевтической эффективности комплексного растительного средства «Тонофит» при экспериментальных стресс- индуцированных повреждениях. Для достижения указанной цели необходимо было решить следующие задачи: - изучить влияние «Тонофита» на устойчивость организма животных к действию экстремальных факторов; - определить влияние данного средства на функциональное состояние ЦНС; - определить лечебно-профилактическую эффективность «Тонофита» при стресс-индуцированных патологических состояниях (иммобилизационном и эмоциональном стрессе, интенсивных физических нагрузках, интоксикации тетрахлорметаном, иммуносупрессивном состоянии); - определить особенности механизма адаптогенного действия «Тонофита». Научная новизна. Работа представляет собой экспериментальное исследование адаптогенного действия нового комплексного растительного средства «Тонофит». Установлено, что испытуемое фитосредство в экспериментально-терапевтических дозах (50 – 150 мг/кг) повышает неспецифическую сопротивляемость организма к экстремальным воздействиям различной природы: интенсивным физическим нагрузкам, гипобарической, гиперкапнической, гемической и тканевой гипоксии, иммобилизационному стрессу, ин- 7 токсикации ксенобиотиками. Показано, что «Тонофит» повышает ориентировочно-исследовательскую активность животных, оказывает анксиолитическое и ноотропное действие. Анксиолитические эффекты фитоэкстракта обусловлены активацией ГАМК-ергической системы. Курсовое введение «Тонофита» животным на фоне иммобилизационного и эмоционального стресса уменьшает выраженность признаков «триады Селье», что обусловлено способностью испытуемого фитосредства предотвращать гиперактивацию симпато-адреналовой и гипоталамо-гипофизарноадреналовой систем организма животных. Испытуемое средство повышает физическую выносливость животных, благодаря активации ресинтеза АТФ, увеличению энергетических запасов клетки и нормализации обменных процессов. Установлено также, что «Тонофит» обладает гепатопротективными и иммуномодулирующими свойствами, повышая устойчивость животных к повреждающему действию тетрахлорметана и азатиоприна. Показано, что центральные механизмы адаптогенного действия «Тонофита» связаны с оптимизацией баланса стресс-реализующих и стресс-лимитирующих систем организма под его влиянием. Периферические молекулярно-клеточные механизмы этого эффекта обусловлены стабилизацией мембранных структур в результате ингибирования процессов свободнорадикального окисления биомакромолекул, а также повышением энергетического потенциала организма при экстремальных воздействиях. Практическая значимость. Полученные экспериментальные данные явились основой для разработки и внедрения новой биологически активной добавки к пище под коммерческим названием «Арура-тан № 16», обладающей адаптогенными свойствами. Указанное оздоровительное средство используется в лечебно-профилактических учреждениях Министерства здравоохранения Республики Бурятия. Материалы диссертационной работы ис- пользуются в учебном процессе на кафедре фармакологии, клинической фармакологии и фитотерапии Медицинского института ФГБОУ ВПО «Бурятский государственный университет» (акт внедрения от 11.09.2015 г.). 8 Основные положения, выносимые на защиту: - комплексное растительное средство «Тонофит» в экспериментальнотерапевтических дозах оказывает выраженное адаптогенное действие, повышая неспецифическую резистентность организма к действию стрессорных факторов различной природы; - испытуемое средство обладает профилактической и фармакотерапевтической эффективностью при интенсивных физических нагрузках, экспериментальном токсическом повреждении печени, иммобилизационном стрессе и иммунодефицитном состоянии; - «Тонофит» повышает ориентировочно-исследовательские реакции, проявляет анксиолитические и ноотропные свойства; - базисным молекулярно-клеточным механизмом адаптогенного действия испытуемого средства является его способность ингибировать процессы свободно-радикального окисления и, тем самым, стабилизировать мембранные структуры клеток, а также повышать энергетический потенциал организма при экстремальных воздействиях различной природы. Апробация материалов диссертации. Основные положения диссертации доложены и обсуждены на: межрегиональной научно-практической конференции с международным участием, посвященной 10-летию медицинского факультета БГУ (Улан-Удэ, 2009); I научно-практической конференции с международным участием «Экология, здоровье, спорт» (Чита, 2009); 5th International symposium on present situation and future development of Mongolian traditional medicine (Ulaanbaatar, 2011); научно-практической конференции, посвященной 50-летию нейрохирургического отделения РКБ им. Н.А. Семашко (Улан-Удэ, 2011); международной конференции «Carrent situation and future trends of drug research and development from natural sources» (Ulaanbaatar, 2015). Публикации. По теме диссертации опубликовано 9 научных работ, из них 3 - в периодических изданиях, рекомендованных ВАК МО и науки РФ. 9 Работа выполнена в Отделе биологически активных веществ ИОЭБ СО РАН в соответствии с проектом № 146 «Разработка лекарственных и профилактических препаратов для медицины. Фундаментальные основы и реализация», утвержденным Президиумом СО РАН. 10 ГЛАВА 1. СОВРЕМЕННЫЕ ПРЕДСТАВЛЕНИЯ О МЕХАНИЗМАХ АДАПТАЦИИ И СРЕДСТВАХ, ПОВЫШАЮЩИХ НЕСПЕЦИФИЧЕСКУЮ РЕЗИСТЕНТНОСТЬ ОРГАНИЗМ 1.1. Современные представления об адаптации и механизмах ее формирования В настоящее время, несмотря на значительные успехи медицинской и фармацевтической науки, отмечается существенный рост заболеваемости населения т.н. «болезнями цивилизации», к которым относят ишемическую болезнь сердца, гипертоническую болезнь, онкологические заболевания, язвенную болезнь желудка и двенадцатиперстной кишки, сахарный диабет, иммунные заболевания и др. Частота стресс–индуцированных сердечнососудистых заболеваний в России составляет до 20% в общей медицинской практике (Российский..., 2010; Ромасенко Л.В., 2012). Как свидетельствуют эпидемиологические и экспериментальные исследования, в возникновении всех этих заболеваний важную, а иногда и решающую роль играет чрезмерно интенсивная и длительная стресс-реакция, вызванная воздействием факторов окружающей среды (Пшенникова, 2001; Меньщикова, 2006; Fazel et al., 2005). Анализ природы факторов указывает на несомненное негативное влияние резкого изменения среды обитания современного человека, связанного с ухудшением экологической обстановки, изменением режима и рациона питания, условий труда и проживания, неизмеримо возросшим, особенно в городах, темпом жизни. Наряду с этим, резкое повышение потока информации и широкое внедрение новых информационных технологий вызывают нервнопсихическое перенапряжение с развитием синдрома хронического эмоционального стресса (Пшенникова, 2001). Эти исторически обусловленные процессы протекают на фоне ослабления организма вследствие ограничения физической подвижности (гиподинамия, гипокинезия), недостаточного использования закаливающих мероприятий, злоупотребления медикаментозными 11 средствами, а также табаком и алкоголем. В результате, подвергаясь разного рода антропогенным стрессорным воздействиям, современный человек зачастую не в состоянии справиться с перегрузками и адаптироваться к новым условиям существования, вследствие чего наблюдается повсеместное распространение «болезней цивилизации» (Резников, 2007; Weisberg, 2009). Феномены стресса и адаптации, интуитивно предсказанные и в той или иной мере описанные многими поколениями естествоиспытателей и врачей, в настоящее время благодаря успехам биологических и медицинских наук получают научную базу. В результате накоплено большое количество фактов, отражающих различные аспекты проблемы стресса. Физиологические механизмы стресса впервые были освещены Кенноном – основоположником гомеостаза и учения о роли симпатоадреналовой системы в мобилизации функций организма для борьбы за существование. Кеннон еще в 1914 г. предвосхитил взгляды Селье на проблему психофизиологической стрессовой реакции, описав один из специфических аспектов стресса – нейроэндокринный процесс (Cannon,1932; Cannon, 1935). В отдельных работах отечественных ученых, относящихся к тому же периоду, четко прослеживаются верные направления в раскрытии механизмов неспецифической адаптации. В 1934г. Д. Н. Насонов в своих исследованиях показал, что содержимое протоплазмы однотипно реагирует на любые изменения окружающей среды. Этот стереотип ответов клетки был назван Насоновым «паранекрозом» (Насонов, 1959). Так, фактически был открыт стресс, на клеточном уровне. Классической концепцией развития адаптационного процесса к любым воздействиям внешней и внутренней среды по праву считается концепция общего адаптационного синдрома Г. Селье, который включает последовательно сменяющие друг друга стадии тревоги, резистентности и истощения. Селье рассматривал адаптационный синдром как неспецифическую реакцию организма на действие разнообразных стрессоров. Общий адаптационный синдром, согласно Селье, формируется однотипно – путем активации веду- 12 щего гормонального звена: системы гипоталамус – передняя доля гипофиза – кора надпочечников. (Селье, 1960; 1982; Selye, 1959). Согласно современным представлениям, в развитии адаптационных реакций прослеживается два этапа: начальный – «срочная», но несовершенная с точки зрения энергетической целесообразности адаптация и последующий этап – более совершенная или «долговременная» адаптация (Меерсон, 1993; Меерсон, Пшенникова, 1988; Пшенникова, 2001). Срочная адаптационная реакция включается непосредственно после начала действия стрессорного фактора и реализуется лишь на основе уже готовых генетически детерминированных физиологических механизмов. К таким стресс-реализущим системам относят: гипоталамо-гипофизарно-адреналовую и симпато-адреналовую системы, в результате активации которых в крови отмечается повышение уровня глюкокортикоидов и катехоламинов, обеспечивающих реализацию «срочного» этапа адаптации (Stratakis, Chrousos, 1995; Vellucci, Parrott, 1997). Гормоном «запускающим» активацию гипоталамо-гипофизарно-адреналовой оси является кортикотропин-рилизинг гормон (КРГ), активирующий секрецию адренокортикотропного гормона АКТГ), за что он был назван Г. Селье «рилизинг-фактором стресса» (Selye, 1959). В последние годы установлено, что наряду с КРГ, секрецию АКТГ стимулирует вазопрессин (Whitnall, 1993). Кроме этого, вазопрессин повышает активность симпатоадреналовой системы, участвует на центральном уровне в реализации защитного агрессивного поведения и подавляет иммунные реакции при стрессе (Shibasaku et al., 1998). Важнейшая черта этого этапа адаптации состоит в том, что деятельность организма протекает на пределе его физиологических возможностей при полной мобилизации функциональных резервов и далеко не в полной мере обеспечивает необходимый адаптационный эффект. «Долговременный» этап адаптации развивается постепенно, в результате длительного или многократного воздействия на организм факторов внешней среды. Формируется и закрепляется он на основе многократной реализации механизмов «срочной» адаптации. В итоге организм из неадапти- 13 рованного постепенно превращается в адаптированный. Долговременные механизмы адаптации всегда сопряжены с увеличением массы функционирующих структур, с переходом организма на новый уровень функционирования (Меерсон, 1993). Повышенный функциональный запрос приводит к формированию «структурного следа» адаптации, представляющего собой комплекс структурных изменений, обеспечивающих физиологическую мощность функциональной системы, ответственной за адаптацию (Меерсон, 1993; Судаков, Юматов, 1991). При повторном действии стрессорного фактора структурный след закрепляется. Долговременная адаптация достаточно надежна и является необходимой предпосылкой расширения сферы деятельности человека в новых, зачастую экстремальных условиях среды, важным фактором повышения резистентности организма (Яковлев и соавт., 1990). Как было показано Меерсоном Ф.З. (1986; 1988) в формировании структурного следа адаптации центральную роль играет увеличение массы мембранных структур, ответственных за восприятие сигналов, ионный транспорт и энергообеспечение. В качестве первого сдвига происходит увеличение скорости транскрипции РНК на структурных генах ДНК в ядрах соответствующих клеток, в результате чего возрастает общая масса структур и происходит увеличение функциональных возможностей клеток – сдвиг, составляющий основу долговременной адаптации (Меерсон, 1981; 1988). Развитие долговременной устойчивой адаптации к действию экстремальных факторов во многом связано с активностью стресс-лимитирующих систем, обеспечивающих ограничение чрезмерной активации стресс- реализующих систем, и тем самым предупреждающих переход физиологической адаптации в ее патологическое звено (Пшенникова, 2001; Меерсон, 1993; Юматов, 1997; Малышев, Манухина, 1998). К основным центральным стресс-лимитирующим системам относятся ГАМКергическая и опиоидергическая системы. Установлено, что гормоны, опосредующие стресс-реакцию (КРГ, АКТГ, вазопрессин и др.) одновременно стимулируют нейроны стресс-лимитирующих систем, в результате этого 14 выделяющиеся ими нейромедиаторы: гамма-аминомасляная кислота (ГАМК) и опиоидные пептиды (ОП) оказывают тормозное действие и ограничивают активность стресс - реализующих систем в целом (Colagero, 1995). На уровне тканей и органов активацию стресс-системы ограничивают периферические стресс-лимитирующие системы, к которым относят: системы простагландинов, аденозина, опиоидных пептидов и др. (Pshennikova et al., 1996; Пшенникова, 2001); антиоксидантную систему, включающую в себя антиоксидантные ферменты (супероксиддисмутазу, каталазу, глутатионпероксидазу), а также структурные антиоксиданты (α-токоферол, витамины А и С, восстановленный глутатион и др.) (Пшенникова, 2001); систему генерации NO, являющегося универсальным фактором регуляции физиологических систем и генетического аппарата клеток (Малышев, Манухина, 1998; Пшенникова, 2006; Torres et al., 1994; Wiegant et al., 2009). Вследствие нарушения баланса стресс-реализущих и стресс- лимитирующих систем, отмечается развитие дезадаптивных состояний, переходящих в разного рода стрессорные повреждения (Крыжановский, 2002). Среди патогенетических факторов стрессорных повреждений можно выделить несколько ведущих механизмов, в числе которых дефицит функциональных нейроэндокринных резервов, энергетический дисбаланс с нарастанием проявлений анаэробного катаболизма, нарушения в системе антигенноструктурного гомеостаза, активация процессов свободнорадикального окисления и истощение потенциала эндогенной антиокислительной системы с лабилизацией клеточных структур (Крыжановский, 2002). Молекулярно-клеточные механизмы развития дезадаптивных состояний связывают с несколькими сопряженными друг с другом, эффектами стрессорной реакции (Меерсон, Пшенникова, 1989; Пшенникова, 2001). Один из эффектов состоит в мобилизации функций клетки вследствие внутриклеточного повышения концентрации ионов кальция, а также активации ключевых регуляторных ферментов – протеинкиназ (Berridge, 1998). При затянувшейся стрессорной реакции избыток ионов кальция оказывает повреждаю- 15 щее действие, которое применительно к кардиомиоцитам, реализуется в т.н. «кальциевой триаде», состоящей из необратимых контрактурных повреждений миофибрилл, нарушения функций митохондрий и активации миофибриллярных протеаз и митохондриальных фосфолипаз, что приводит к развитию очаговых некрозов миокарда (Fleckenstein et al., 1985). Этот феномен находится в неразрывной связи с другим патогенетическим механизмом, заключающимся в активации процессов свободнорадикального окисления (СРО), и в первую очередь – перекисного окисления липидов (ПОЛ). Важную роль в поддержании гомеостаза имеет гуморальные механизмы регуляциия функций, осуществляемые с участием гормонов, нейромедиаторов, пептидов и других сигнальных веществ (Пшенникова, 2000). В частности, в основе стрессовой иммунносупрессии лежит повышенный уровень глюкокортикостероидов, который нарушает функции клеточного и гуморального звеньев иммунитета, меняет количественные соотношения Т- и В- лимфоцитов, влияет на процессы миграции и циркуляции лимфоидных клеток, подавляет фагоцитоз. В связи с этим стресс способствует развитию инфекционных, аллергических, аутоиммунных и онкологических заболеваний (Kamal, Habib et al., 2001). В настоящее время широко распространено мнение о том, что универсальной реакцией организма на действие экстремальных факторов среды является активация свободнорадикальных процессов (СРО), которую можно рассматривать как элемент неспецифического повреждения тканей, наблюдающийся при целом ряде патологических состояний. Активация СРО приводит к нарушению структурной организации липидного бислоя биологических мембран, что влечет за собой нарушение важнейших клеточных функций. Развивающиеся процессы липопероксидации к нарушениям гомеостаза и биоэнергетики клетки, что приводит, в конечном итоге к ее разрушению и гибели (Зенков и соавт.,2001; Меньщикова, 2008; Culter, 1995). Интенсивность СРО в тканях регулируется сложной антиоксидантной системой, включающей в себя ферменты: каталазу и супероксиддисмутазу 16 (SOD), а также ферменты глутатионовой системы (глутатионпероксидаза, глутатионтрансфераза, глутатионредуктаза (Кулинский, 1993; Remacle et al, 1992). Молекулярные механизмы поддержания гомеостаза при действии активных форм кислорода включают в себя также неферментные антиоксиданты: SHгруппы, витамины А, Е, F и др. Среди природных антиоксидантов можно выделить большую группу фенольных соединений, содержащих функциональные ОH-группы (Зенков и соавт., 2001; Меньщикова и соавт., 2008). 1.2. Краткие сведения о средствах, обладающих адаптогенной активностью Широкое распространение стресс-индуцированной патологии в современных условиях диктует необходимость поиска и разработки эффективных и безопасных лекарственных средств, способных повышать адаптационные возможности организма и обеспечить адекватный уровень физической, эмоциональной и когнитивной активности в экстремальных условиях, без повреждающих последствий для организма (Яременко, 2005; Арушанян, 2008). В соответствии с современными представлениями адаптогенами называют фармакологические средства, повышающие неспецифическую рези- стентность организма к воздействию стрессоров различной природы: физической, биологической, химической и психоэмоциональной, увеличивающие работоспособность, выносливость, предотвращающие развитие утомления (Olsson et al., 2009; Panossian, Wikman, 2010). Впервые термин «адаптогены» в научный оборот был введен Н.В.Лазаревым (1959, 1962), сформулировавшим концепцию о состоянии неспецифически повышенной сопротивляемости организма (СНПС), а лекарственные средства, вызывающие это состояние, были названы им «адаптогенами». Всесторонние фармакологические исследования адаптогенных средств были начаты с конца 50-х годов прошлого столетия и к настоящему времени 17 выявлено значительное количество средств, оказывающих регуляторное влияние на механизмы адаптации. Одним из основных фармакологических свойств адаптогенов, определяющим их защитные эффекты, следует считать их стресспротективное действие. Известно, что разнообразные по своей природе экстремальные воздействия вызывают стереотипный неспецифический ответ в виде общего адаптационного синдрома: стимуляции функции коры надпочечников, атрофии тимико-лимфатического аппарата и изъязвления желудочно-кишечного тракта, направленность этих изменений может наиболее достоверно охарактеризовать индивидуальную устойчивость организма к стрессу (Селье, 1982; Воробьева, 2009; Аксиненко, 2011). В настоящее время в клинической практике в качестве адаптогенных средств используются препараты из следующих групп: комплексы витаминов и микроэлементов (глутамевит, квадевит, декамевит, олиговит, мориамин, гериплекс, юникап, спектрум, берокка и др.); предшественники пуриновых и пиримидиновых нуклеотидов (рибоксин, оротат калия); энергодающие соединения (АТФ, креатинфосфат, фруктергил, глицерофосфат кальция); субстраты энергетического и пластического обмена (аминокислоты, панангин, янтарная, яблочная, лимонная кислоты); биогенные стимуляторы (актовегин, апилак, экстракт плаценты, гумизоль, сок алоэ, ленкин); антиоксиданты (токоферол, ионол, эмоксипин, мексидол и др.); антигипоксанты (цитохром С, амтизол, олифен, убихинон и др.); ноотропы и психоэнергизаторы (пирацетам, ацефен, пиридитол, пантогам, тонибрал); актопротекторы (бемитил, томерзол, яктон); пептидные биорегуляторы-цитомедины (тимоген, тималин,простатилен и др.); гормоны и гормонорегулирующие соединения (глюкокортикоидного, андрогенного, соматотропного звеньев) и другие (Фисенко, 2000; Новиков и соавт., 2001; Шабанов, 2003). Наиболее перспективным направлением является использование адаптогенных средств природного происхождения, обладающих рядом преимуществ перед синтетическими препаратами. Растительные средства представ- 18 ляют собой комплексы биологически активных веществ, которые близки по своей природе эндогенным соединениям организма, оказывают адекватное корригирующее действие на разных уровнях биологической организации; обладают широким спектром фармакологической активности; характеризуются низкой токсичностью и отсутствием неблагоприятных побочных реакций при длительном приеме. В настоящее время фитотерапии уделяется все большее внимание, а применение препаратов растительного происхождения обосновывается на строго научной платформе (Карпеев, 2006). Фармакологические исследования адаптогенных средств были начаты с конца 50-х годов ХХ века, и тогда же были сформулированы общие требования, предъявляемые к таким препаратам. Данные средства должны обладать такими свойствами как безвредность, широкий спектр терапевтического действия; способность формировать в организме состояние повышенной неспецифической сопротивляемости (Брехман, 1986). Один из первых растительных адаптогенных препаратов был получен из корневищ женьшеня (Брехман, 1957). Несколько позже была установлена высокая эффективность элеутерококка колючего, затем экстрактов из растений представителей семейства аралиевых: аралии маньчжурской, заманихи высокой, лимонника китайского (Брехман, 1960; Давыдов и соавт., 1996), а также родиолы розовой (Саратиков, 1974). Растительные адаптогены оказывают мягкое тонизирующее действие, которое проявляется в ослаблении симптомов общей астенизации, повышении физической и умственной работоспособности, уменьшении признаков утомления, повышении общей сопротивляемости организма к широкому спектру экстремальных воздействий (Брехман, 1968; Карпеев, 2006; Машковский, 2010). Важным отличием растительных адаптогенов от синтетических препаратов является повышение их эффективности при длительных курсах, отсутствие стадии истощения после стадии повышенной резистентности, они не вызывают привыкания и развития зависимости (Шабанов П.Д., 2003). 19 При этом следует отметить, что тонизирующее действие растительных адаптогенных средств принципиально отличается от стимуляторов – допингов, являющихся симпатомиметиками и реализующих свое действие посредством возбуждения стресс-реализующих систем ЦНС с истощением резервных ресурсов организма (Каплан и соавт, 1990). В связи с этим, прием таких средств абсолютно противопоказан лицам старших возрастных групп, больным с заболеваниями сердечно-сосудистой и нервной систем, нарушениями обмена веществ, т.е. тем лицам, которые наиболее нуждаются в коррекции работоспособности. Известно, что для адаптогенов растительного происхождения характерна выраженная антиоксидантная активность, наличие которой во многом обусловливает неспецифичность действия указанных лекарственных средств, поскольку большинство патологических состояний изначально сопровождается индукцией процессов свободнорадикального коисления в организме (Коган и соавт., 1992; Зенков и соавт., 2001). В настоящее время многочисленными исследованиями доказано наличие у растительных адаптогенов выраженного прямого и непрямого антиоксидантного действия, обусловленного снижением интенсивности процессов свободнорадикального окисления и повышением мощности эндогенной антиокислительной, что обусловливает повышение устойчивости биологических мембран к широкому кругу повреждающих воздействий и тем самым – повышение неспецифической резистентности организма системы (Барабой и соавт., 1998; Бурлакова, 2007; Rege, 1999). Растительные адаптогены обладают широким спетром фармакологических свойств. Так, адаптогены повышают физическую и умственную работоспособность на фоне стресса и усталости (Дардымов, 1976; Panossian, Wikman, 2005), обладают нейропротекторным, анксиолитическим, ноотропным и нейростимулирующим эффектами (Продиус и соавт., 1997; Panossian,Wagner, 2005; Panossian, Wikman, 2010), нормализуют артериальное давление (Брехман, 1957), снижают уровень сахара в крови (Фруентов, 1974; Fu, 20 2011), оказывают противовоспалительное, радиопротекторное (Гончаренко, 1991; Hong, 2011); противоопухолевое, противовирусное (Яременко, 2008; Panossian, Wikman, 2010); повышают устойчивость организма к действию гипоксии (Lu et al., 1989; Van, 2006 ), температурного стресса и электрического шока (Продиус и соавт., 1997). Особого внимания засуживает выраженная иммуномодулирующая активность, свойственная для растительных адаптогенов. При этом адаптогены характеризуются, преимущественно, иммуностимулирующим действием на организм, которое характерно для препаратов женьшеня, элеутерококка, аралии, золотого корня (Сафонова и соавт., 2001; Harikrishnan, 2012). В связи с наличием у адаптогенов иммуностимулирующей активности, повышения под их влиянием специфического и неспецифического иммунитета, возрастает устойчивость организма к инфекциям, а применение этих препаратов с профилактической целью в периоды эпидемий способствует сокращению количества заболевших и облегчает течение инфекций (Новиков и соавт., 2001; Wagner et al., 1994). В настоящее время адаптогенные свойства выявлены у препаратов из других видов растений: подорожника, почек березы, полыни, экстракта чаги (Поветьева, 2002); шлемника байкальского (Разина и соавт., 1987; Hsieh, 2007); леспедецы двуцветной, сирени амурской, аконита, листьев ореха маньчжурского (Зориков, Мартынова, 1986; Поветьева, 2002); настойки и экстракта девясила высокого (Нестерова, 2003), препаратов из солодки уральской, пиона белоцветкового, астрагала перепончатого (Яременко, 2005), бадана толстолистного, подорожника, маакии амурской (Горчакова, 2010) и некоторых других растений. Перспективным направлением представляется разработка многокомпонентных препаратов, обладающих, по сравнению с моносредствами, рядом преимуществ, основным из которых является более широкий спектр фармакологической активности. В настоящее время в клинической практике в качестве адаптогенных средств разрешены к применению многокомпонентные 21 лекарственные препараты и биологически активные добавки: бальзамы «Золотой дракон», «Маурера оригинальный», «Панта-форте», эликсир «Алтайский», гранулы «Гинрозин», таблетки «Сафинор» (Пронченко, 2002), таблетки «Леветон», «Тонофит», «Элтон» (Сейфулла и соавт., 2003) и некоторые другие. Многокомпонентные средства благоприятно воздействуют на разные функции организма, не воспринимаются организмом как чужеродные и, в отличие от синтетических, не отторгаются защитными системами. В их состав в сбалансированном виде включаются, помимо адаптогенных и иммуностимулирующих средств, компоненты богатые витаминами и микроэлементами, а также биологически активные вещества, нормализующие обменные процессы, оказывающие противовоспалительное, ранозаживляющее действие, а также снижающие уровень холестерина. Они могут применяться длительное время без риска развития побочных эффектов, оказывая профилактическое и комплементарное лечебное действие. Высокая профилактическая и фармакотерапевтическая эффективность многокомпонентных препаратов обусловлена гармоничным сочетанием биологически активных веществ, содержащихся в растениях, которые обеспечивают не только адекватное воздействие на основные звенья патологического процесса, а также способствуют оптимальной регуляции сопряженных систем и органов, повышают адаптивные возможности организма в целом. 1.2. Сведения о растениях, входящих в состав «Тонофита» Родиола розовая (Rhodiola rosea L.) – многолетнее травянистое растение семейства толстянковых (Crassulaceae). Произрастает в Западной и Востояной Сибири, на Дальнем Востоке. Промышленные заготовки осуществляют на Алтае. В медицинских целях используют корневища растения. Химический состав. Корневища и корни родиолы содержат фенольные соединения: фенолоспирт тирозол и его глюкозид салидрозид (родиолозид), флавоноиды – производные гербацетина, трицина и кемпферола, гликозиды 22 коричного спирта – розавин (до 2,5%), розин, розарин, а также флаволигнан родиолин, дубильные вещества. Выделены монотерпены: розиридол и розиридин, фенолкарбоновые кислоты и их производные (галловая, щавелевая, янтарная, лимонная, яблочная), эфирное масло (0,8-0,9%), содержащее коричный альдегид и цитраль (Соколов, Замотаев, 1990; Растительные ресурсы СССР, 1990; Мазнев, 2004). Растение содержит значительное количество сахаров, главным образом глюкозы и сахарозы; жиры, воски, стерины, белки. Родиола розовая в значительных количествах накапливает марганец (Путырский, Прохоров, 2000; Муравьева и др., 2002; Rohloff, 2002). Фармакологические свойства. Препараты родиолы обладают выраженными стимулирующими свойствами, повышая работоспособность лабораторных животных: увеличивают объем динамической и статической работы. Также способствуют повышению умственной работоспособности человека, улучшают память и внимание; способствуют нормализации обменных процессов (Соколов, Замотаев, 1990). Кроме того, у препаратов родиолы обнаружен широкий спектр фармакологических свойств: антитоксическое, антимутагенное, противовоспалительное, жаропонижающее, противотуберкулезное, антибактериальное, сахароснижающее, гипотензивное (Саратиков, Краснов, 1974; Турова, Сапожникова, 1984; Путырский, Прохоров, 2000; Муравьева и др., 2002; Мазнев, 2004; Стасюк, Альфонсова, 2012; Farhath, 2005). Установлено, что экстракт корня родиолы повышает иммунную защиту организма и оказывает противоопухолевое действие (Бочарова и др., 1994; Farhath, 2005). Применение. Корневища и корни родиолы используют для получения жидкого экстракта, который применяют как стимулирующее и тонизирующее средство при функциональных заболеваниях центральной нервной системы, гипотонии, нервном и физическом истощении (Растительные ресурсы СССР, 1990; Бакуридзе и др., 1993; Мазнев, 2004). Левзея сафлоровидная (Rhaponticum carthamoides Willd.) – семейство астровые – Astraceae (Compositae). Левзея сафлоровидная — многолетнее 23 травянистое растение высотой 50—150 см. Корневище деревянистое, горизонтальное, укороченное, ветвящееся, от коричневого до темно-бурого цвета, с отходящими от него многочисленными длинными шнуровидными корнями. Цветет в июле-августе, плодоносит в сентябре-октябре (Турова, 1984; Чериковская, 1952). Левзея сафлоровидная эндемичное растение, встречается в Западной и Восточной Сибири, Средней Азии. Для медицинских целей выращивается в культуре, в качестве сырья заготавливают корневища и корни растения. Химический состав. Корневища с корнями левзеи сафлоровидной содержат фитоэкдистероиды (0,03-0,06%) (экдистерон, инокостерон, интегристероны А и В и другие); органические кислоты (винную, лимонную, фумаровую, щавелевую, янтарную), аскорбиновую кислоту (до 1,2%); тритерпеновые сапонины (рапонтикозиды), каротиноиды, фенолкарбоновые кислоты (хлорогеновая, неохлорогеновая, изохлорогеновая), дубильные вещества (до 5%), эфирное масло (0,9%), смолы (11,4%), камеди, каротин, инулин (3,5%), кумарины, антрахиноны, катехины,. дубильные вещества, эфирное масло, флавоноиды (апигенин, геспередин, кверцетин, кверцетагетин, кемпферол, лютеолин, изорамнетин, патулетин, госсипетин и др.); углеводы (полисахариды, инулин), камеди, смолы и другие соединения (Задорожный, 1992; Ловкова, 1990; Муравьева, 2002; Путырский, Прохоров, 2000; Турова, Сапожникова, 1984; Koleckar et al., 2008). В надземной части обнаружено до 49 мг% аскорбиновой кислоты, до 21% протеина, до 13% сахара; из макроэлементов (мг/г): Мg - 2,20, Fe - 2,50; из микроэлементов (мкг/г): Сu - 16,50, Мn - 98,50, Zn - 30,50, Со - 0,80, А1 937,76 (Муравьева, 2002). Фармакологические свойства. Биологическая активность растения связана, главным образом, с содержанием фитоэкдистероидов, наибольшее количество которого накапливается в начале вегетации, минимальное - в фазу цветения. Подземные органы левзеи обладают психостимулирующим и адаптогенным свойствами, улучшают кровообращение, обладают сосудорасши- 24 ряющим действием, увеличивают число сердечных сокращений. Настой цветочных корзинок проявляет сильно выраженные антикоагулянтные свойства (Соколов, 2000). Препараты левзеи оказывают антиоксидантное действие, повышают умственную и физическую работоспособность, регулируют кровяное давление, обладают сосудорасширяющим действием, увеличивают число сердечных сокращений, а также действуют как антикоагулянты. Кроме того, препараты левзеи обладают сахаропонижающими свойствами, снижают концентрацию глюкозы при адреналиновой гипергликемии и препятствует развитию гипогликемии при введении инсулина (Телятьев, 1987; Ловкова, 1990; Блинова и др., 1996; Путырский, Прохоров, 2000, Тимофеев, Лапин, 2008; Тихонов и др., 2008; Kokoska, Janovska, 2009; Koleckar et al., 2008). Экс- тракт левзеи в эксперименте способствовал нормализации реологических свойств крови при ишемии головного мозга (Плотников и др., 2008). Применение. Экстракт жидкий левзеи сафлоровидной назначают в качестве стимулирующего средства, повышающего работоспособность при умственном и физическом переутомлении, импотенции, при лечении депрессии, хроническом алкоголизме и других случаях. Рекомендуют при астенических синдромах различного происхождения (Телятьев, 1987; Соколов, Замотаев, 1988; Тихонов и др., 2004). В народной медицине корневища, корни и траву растения применяют в виде настоев, отваров, настойки на водке в качестве стимулирующего средства при упадке сил, бессоннице, переутомлении, после перенесенных тяжелых заболеваний, чрезмерной раздражительности. Также они помогают при лечении алкоголизма, полезны при онкологических заболеваниях в период лечения цитостатиками (Пастушенков, 1998; Соколов, 2000; Муравьева и соавт., 2002). Шиповник коричный (Rosa Cinnamomea L.) – растение семейства розоцветные - Rosaceae. Кустарник высотой 50-150 см, с коричневыми ветвями. Произрастает повсеместно в лесной и лесостепной зонах Европейской части 25 РФ, Западной Сибири, Казахстане. Растение культивируется. В качестве лекарственного сырья используют плоды. Химический состав. Плоды шиповника содержат большое количество аскорбиновой кислоты от 2 до 17%, каротиноиды до 10 мг% (α-, β-, γкаротины, ликопин, фитофлуин, криптокантин и др.), витамины (В1, В2, К, Р, РР, Е). Также содержатся флавоноидные соединения: кверцетин (2,8%), рутин (2,5%), гесперидин (1,8%), кемпферол, изокверцетин, антоцианы. В зрелых плодах много сахара (до 24%), имеются пектиновые вещества (до 4%), жирное масло, органические кислоты (до 2,6%): яблочная, лимонная, олеиновая, линолевая, линоленовая; дубильные вещества (4,4%). В семенах – жирное масло, содержащее α- и δ-токоферолы, значительное количество макро- и микроэлементов (калий, железо, марганец, магний, кальций, фосфор) (Растительные ресурсы СССР, 1987; Ловкова, 1990; Блинова и др., 1996; Путырский, Прохоров, 2000; Муравьева и др., 2002; Тихонов и др., 2004). Фармакологические свойства. В эксперименте водный экстракт листьев замедляет свёртываемость крови и фибринообразование, снижает потребление кислорода и замедляет ритм сердечных сокращений (Чабанов и соавт., 1987), полифенольный комплекс предотвращает окисление липидов низкой плотности (Душкин и соавт., 1993), экстракт и лейкоантоцианидины обладают антиоксидантными свойствами (Головкина и соавт., 1968; Oktyabrsky et al., 2009), настой плодов — иммуномодулирующими (Новосёлов и соавт., 1994). Доказано противосклеротическое действие аскорбиновой кислоты плодов шиповника, которое проявляется в снижении концентрации холестерина в крови и ингибировании отложения атероматозных масс в стенках кровеносных сосудов (Соколов, Замотаев, 1990). Экспериментально установлено, что препараты из плодов шиповника усиливают регенерацию тканей, синтез гормонов, благоприятно влияют на углеводный обмен, снижают проницаемость сосудов, оказывают противовоспалительное, желчегонное и диуретическое действие, оказывают положительное действие на кроветворную функцию (Соколов, Замотаев, 1990; Минаева, 1991). 26 Плоды шиповника оказывают адаптогенное, противовоспалительное, диуретическое, гемостатическое, тонизирующее действия, усиливают регенерацию тканей, синтез гормонов и секрецию желудочного сока, оказывают влияние на углеводный обмен, на функции костного мозга, Плоды шиповника обладают иммуностимулирующим (в отношении гуморального и клеточного иммунитета) и желчегонным действием (обусловлено наличием органических кислот и флавоноидов) (Тихонов и др., 2004). Флавоноидные соединения плодов шиповника в сочетании с аскорбиновой кислотой обладают высокой биологической активностью: сосудоукрепляющим действием (Рвитаминной активностью), антиоксидантными свойствами (Растительные ресурсы СССР, 1987; Путырский, Прохоров, 2000). Применение. В медицинской практике плоды шиповника широко используют в качестве поливитаминного средства при гипо- и авитаминозах, особенно при авитаминозе С и Р, а также при различных заболеваниях, сопровождающихся повышением потребности организма в витаминах. С этой целью плоды применяют в виде лекарственных форм: настоев, отваров, экстрактов, сиропов, чаев. Плоды шиповника входят в состав многих витаминных сборов и комплексных фитопрепаратов (Ловкова и соавт., 1990; Задорожный и соавт., 1989; Михайлов, Шретер, 1999). Препараты шиповника назначают при острых и хронических инфекциях, при атеросклерозе, нефритах, острых и хронических заболеваниях печени, кишечника, при язвенной болезни, геморрагических диатезах, гемофилии, кровотечениях (легочных и маточных), при передозировке антикоагулянтов, гипертиреозе и недостаточности надпочечников, травматическом шоке, атеросклерозе, при пневмонии, бронхоэктазах, бронхиальной астме (Гаммерман и др., 1983; Путырский, Прохоров, 2000; Михайлов, Шретер, 1999). Также применяются при язвенной болезни, переломах, в качестве ранозаживляющего средства (Телятьев, 1987; Соколов, Замотаев, 1988; Мазнев, 2004). Масло шиповника используется наружно как ранозаживляющее средство (Соколов, 2000). В тибетской медици- 27 не плоды шиповника назначают при туберкулезах, неврастении, атеросклерозе; цветки применяют при изжоге (Минаева, 1991). Боярышник кроваво-красный (Crataegus Sanguinea Pall.) – кустарник семействя розоцветные (Rosaceae) высотой 3-5 м, с серовато-коричневой корой, с крепкими пурпурно-красными побегами, несущими толстые прямые колючки длиной 2-4 см. Цветет в мае-июле, плоды созревают в сентябреоктябре (Максютина, 1985). Произрастает повсеместно в Европейской части РФ, Сибири, Дальнем Востоке, Казахстане (Растительные…, 2009). В качестве лекарственного сырья используют цветки и плоды. Химический состав. В плодах боярышника содержится комплекс биологически активных веществ: флавоноиды (гиперозид, кверцитрин, кверцетин, витексин, ацетилвитексин) (Кашникова и соавт., 1984), дубильные вещества (Муравьева и соавт., 2002), каротиноиды, тритерпеновые сапонины до 4% (олеаноловая и урсоловая кислоты), сахара, органические кислоты (лимонная, яблочная, винно-каменная, стеариновая, пальмитиновая, уксусная, линолевая), гликозиды, сорбит, холин, ацетилхолин, жирное масло, макро- и микроэлементы (Растительные ресурсы СССР, 1987; Соколов,. Замотаев, 1988; Ловкова, 1990; Мазнев, 2004; Путырский, Прохоров, 2004; Тихонов и др., 2004); витамины К, Е, аскорбиновая кислота (Муравьева и соавт., 2002). В плодах содержится в значительных количествах янтарная кислота (Zhang Р. et al. 1999). Фармакологические свойства. Галеновые препараты боярышника оказывают главным образом кардиотоническое действие. Улучшая работу сердечной мышцы, препараты растения предупреждают ее преждевременное переутомление, устраняют нарушения ритма сердца. Настои и экстракты плодов и соцветий боярышника избирательно расширяют коронарные сосуды и сосуды головного мозга, что позволяет направленно использовать препараты растения для улучшения снабжения кислородом миокарда и нейронов головного мозга. Этот эффект связан с наличием в растении тритерпеновых соединений и флавоноидов (Соколов, 2000). Цветки и плоды боярышника 28 понижают проницаемость стенок сосудов и капилляров, причем цветки действуют сильнее плодов. Сок цветков и плодов положительно влияет на сердце, артериальное давление, центральную нервную систему, мочеполовые органы. Галеновые препараты нормализуют сон и общее состояние, способствует выздоровлению после тяжелых болезней и снижению уровня холестерина в крови (Гусейнов, 1985; Сиверцева, 1998; Shapat, 2002). В эксперименте экстракт листьев, цветков и плодов оказывал анальгезирующее действие (Фролова и соавт., 1995), экстракт плодов – желчегонными (Самбуева, Цыренжапова, 2006). Янтарная кислота, содержащаяся в плодах, оказывает антитоксическое действие, радиопротекторное, антиоксидантное и антистрессорное действие (Сейфулла, Орджоникидзе, 2003; Олейник и соавт., 2007). Применение. Плоды боярышника издревле применяются в качестве лекарственного средства. Первые сведения о боярышнике были обнаружены в трудах древнегреческих и древнеримских ученых Теофраста, Диоскорида, Галена и др. Плоды боярышника рекомендовали при заболеваниях желудочно-кишечного тракта, ожирении, кровотечениях и нарушении функции почек, особенно при мочекаменной болезни. В тибетской традиционной медицине – в качестве средства, стимулирующего обмен веществ; в монгольской народной медицине – при болезнях сердца и крови, печени и желчного пузыря, асците (Растительные …, 1987; Минаева В.Г., 1991). В настоящее время препараты боярышника применяют при функциональных расстройствах сердечной деятельности, при гипертонической болезни, стенокардии, антигионеврозах, мерцательной аритмии, пароксизмальной тахикардии, общем атеросклерозе, климактерическом неврозе, при повышенной функции щитовидной железы (Соколов, 2000). Экстракт увеличивает лактацию и устраняет диспепсические явления у детей грудного возраста. Жидкий экстракт входит в состав комплексного препарата "Кардиовалена" (Машковский, 2010). Производные янтарной кислоты широко используются в спортивной фармакологии (Сейфулла, Орджоникидзе, 2003; Олейник и соавт., 2007). 29 Девясил высокий (Inula helenium L.) семейство астровые Asteraceae – многолетнее травянистое растение высотой до 60 см. Распространен в Европейской части РФ, Западной Сибири и в Средней Азии. Культивируется как лекарственное растение, для медицинских целей заготавливают корневища и корни. Химический состав. Корневища и корни содержится до 3% эфирного масла, состоящего из смеси сесквитерпеновых лактонов, производных βселинена, из них основные - алантолактон, изоалантолактон, гидроалантолактон, проазулен и др. (Блинова К.Ф., 1996). Помимо этого, в корнях обнаружены до 40% инулина и родственных ему соединений; стероиды: стигмастерин, ß-ситостерин и другие, липиды (Максютина Н.П., 1986; Растения…, 1996); тритерпеновые сапонины, флавоноиды, витамины (аскорбиновая кислота и токоферол), смолы, дубильные вещества, органические кислоты (Соколов С.Я. и соавт., 1998; Путырский, Прохоров, 2000; Шретер и др., 2000; Биологически активные …, 2001; Мазнев, 2004; Тихонов и др., 2004). Фармакологические свойства. Препараты девясила имеют широкий спектр фармакологической активности. Извлечения из корней девясила высокого оказывают стресс-протекторное действие, при этом, адаптогенный эффект экстракта из девясила сопоставим с таковым у известных адаптогенов родиолы розовой, левзеи сафлоровидной (Зеленская и соавт., 2000; Нестерова, 2001, 2003), (Зеленская И.Л. и соавт., 2003). Также выявлено противовоспалительное, обезболивающее, ранозаживляющее, иммуномодулирующее, антиоксидантное действие, и воздействие на энергетический обмен. Выявлено, что препараты девясила корригируют функцию пищеварения: при их использовании нормализуется моторная и секреторная функция отделов пищеварительного тракта, снижается тонус гладкой мускулатуры кишечника и желчевыводящих путей, уменьшается активность воспалительного процесса в желудке, усиливается желчеотделение, нормализуется микробная флора кишечника (Соколов, Замотаев, 1988; Корсун и др., 1998; Муравьева и др., 2002; Мазнев, 2004; Митрофанова и др., 2012). У подземных органов девя- 30 сила обнаружена противостафилококковая и противовоспалительная активность. Эфирное масло растения обладает бактерицидным и противоглистным действием. (Зеленская И.Л. и соавт., 1999). Применение. В качестве отхаркивающего средства препараты девясила назначают для уменьшения секреции бронхов при острых и хронических заболеваниях дыхательных путей (Соколов, Замотаев, 1988). Выделенный из корневищ и корней галеновый препарат «Алантон», представляющий собой сумму сесквитерпеновых лактонов, назначают для лечения язвенной болезни (Самылина, Северцев, 1999; Путырский, Прохоров, 2000). В качестве противовоспалительного и противозудного средства используют в дерматологической практике (Ловкова, 1990). Крапива двудомная (Urticae dioica L.) – многолетнее травянистое растение семейства Urticaceae. Распространена повсеместно как сорное растение. Для медицинских целей заготавливают листья растения. Химический состав. Листья крапивы содержат витамин К (0,2%), аскорбиновую кислоту (до 0,6%), каротиноиды (β-каротин, ксантофиллы, виолаксантин и др.) - до 50 мг%, витамины группы В и Е. Также содержатся кумарины, флавоноиды, фенольные кислоты, дубильные вещества около 2%, фитонциды, гликозид уртицин, органические кислоты, стерины, хлорофилл (до 5%), алкалоиды и микроэлементы (Телятьев, 1987; Блинова и др., 1996; Биологически активные …, 2001; Коломиец и др., 2011). Фармакологические свойства. Листья крапивы обладают общеукрепляющим, противовоспалительным, радиозащитным, гемостатическим, сосудосуживающим, желчегонным, витаминным действиями и повышают процессы регенерации слизистых оболочек желудочно-кишечного тракта. Препараты крапивы используется как кровоостанавливающие средства при маточных, кишечных, легочных и почечных кровотечениях, так как они усиливают свертывание крови, способствуют повышению содержания гемоглобина и эритроцитов, повышают тонус гладкой мускулатуры. Хлорофилл оказывает стимулирующее и тонизирующее действие, усиливает основной обмен 31 веществ, а также повышает мышечный тонус матки и кишечника, улучшает деятельность сердечно-сосудистой системы и дыхательного центра; стимулирует грануляцию и эпителизацию пораженных тканей. Сумма действующих веществ, главным образом витамины и микроэлементы, содержащиеся в крапиве, нормализуют в организме липидный обмен, обладают стимулирующими и тонизирующими свойствами (Телятьев, 1987; Соколов, Замотаев, 1988; Ушанова и др., 2001; Тихонов и др., 2004; Корсун, Коваленко, 2007). Применение. Крапиву издавна применяли в лечении многих заболеваний человека. Настой и жидкий экстракт крапивы применяют в качестве кровоостанавливающего средства при легочных, почечных, маточных и кишечных кровотечениях Крапива применяется также при атеросклерозе, железодефицитной анемии, холециститах, гастритах, язвенной болезни желудка. В качестве эпителизирующего средства галеновые формы крапивы используют местно при трофических язвах, дерматитах, экземе, ожогах. Листья крапивы включены в состав витаминных, желудочных и кровоостанавливающих сборов (Соколов, Замотаев, 1990). Ревень тангутский (Rheum tanguticum Maxim.) – растение семейства гречишные - Polygonaceae. Ревень - мощное многолетнее травянистое растение высотой 150-250 см с коротким многоглавым темно-бурым корневищем. Цветет в июне, плоды созревают в июле. Родина - леса Центрального Китая. В России имеются промышленные плантации в Московской, Воронежской, Новосибирской и Кировской областях, в Белоруссии и на Украине (Растительные ресурсы…, 1987). В качестве лекарственного сырья используют корни с корневищами. Химический состав. В корнях и корневищах содержатся гликозиды двух различных групп: танногликозиды и антрагликозиды (производные антрохинонов) (Муравьева и соавт., 2002). В состав первой группы входят: глюкогаллин расщепляющийся на галловую кислоту и глюкозу; тетрарин, продуктами гидролитического расщепления, которого являются глюкоза, галловая и коричная кислота и альдегид реосмин, а также продукты их рас- 32 щепления. Из антрагликозидов найдены: хризофанеин, расщепляющийся на хризофановую кислоту (хризфанол) С и глюкозу; реохризин расщепляющийся на фисцион (реохризидин) и глюкозу, а также обнаружены их агликоны: реумэмодин (франгулаэмодин) и др. В листьях и цветках имеются рутин и органические кислоты. В корнях содержатся макроэлементы ( К, Са, Mg, Fe) и микроэлементы ( Мп, Сu, Zn, Со, Сг, Al, Se, Ni, Sr , Pb). Корневища концентрируют Se (Растительные ресурсы…, 1987). Также содержатся дубильные, смолистые, пектиновые вещества, органические кислоты (яблочная, лимонная, щавелевая, уксусная и др.), витамины (А, В, С, Д и РР), крахмал. Дубильные вещества (около 12%) представлены, главным образом, галлотанинами (Асеева, Найдакова, 1991; Задорожный и др., 1992; Шретер и др., 2000). Фармакологические свойства. Танногликозиды обладают вяжущим, противопоносным и антисептическим свойством. Антрагликозиды, напротив, оказывают слабительное действие, усиливают перистальтику кишечника. В малых дозах препараты ревеня оказывают вяжущее действие, обусловленное танногликозидами (Соколов, 2000; Муравьева и соавт., 2002). Галеновые формы растения усиливают желчеотделение (Яковлев, 1996; Носов, 2001). В больших дозах все галеновые препараты ревеня вызывают местное раздражение слизистой оболочки толстого отдела кишечника и поэтому усиливают прилив крови к органам малого газа, что особенно опасно при беременности. Из продуктов восстановления хризофановой кислоты и эмодина получен препарат хризаробин. В малых концентрациях этот препарат обладает сосудосуживающим свойством и дает выраженный противовоспалительный и кератолитический эффект, что обосновывает его применение в дерматологической практике (Соколов, 2000). В эксперименте водный экстракт ревеня обладает сосудорасширяющими и противовоспалительными (Moon et al., 2006), антиоксидантными свойствами (Matsuda et al.,2001). Сок и водный экстракт листьев проявляет антипротозойную активность (Казанцева, 1952). Корни 33 ревеня обладают также желчегонным действием (Соколов, Замотаев, 1988; Дудченко и др., 1989; Асеева, Найдакова, 1991; Тихонов и др., 2004). Применение. В лечебной практике препараты ревеня обычно назначают для получения мягкого и постепенного слабительного эффекта при атонии кишечника, метеоризме и при хронических запорах, а также в качестве желчегонного средства. В мал ы х дозах в результате действия танногликозидов ревень обладает вяжущими свойствами и оказывает закрепляющее действие на кишечник (Соколов, 2000). В больших дозах действуют антрагликозиды, усиливающие перистальтику кишечника. Назначают главным образом больным в пожилом возрасте и детям. Из растения получены препараты: порошок ревеня, таблетки ревеня, экстракт сухой ревеня, настойка ревеня и сироп ревеня (Машковский, 2010). Кардамон (Elettaria cardamomum (L.) Maton. семейство имбирные (Zingiberaceae). Многолетнее травянистое вечнозеленое тропическое растение с крупным корневищем, развивающим несколько стеблей высотой 2-3 м. Плоды - коробочки с многочисленными семенами. Родина кардамона Индия и Цейлон. Культивируется АО многих странах Юго-Восточной Азии: Индии, Вьетнаме и др. Химический состав. В семенах кардамона содержание эфирного масла достигает 3-8%, в его состав входят α-терпинил ацетат, 1,8-цинеол, терпинеол, лимонен, неоролидол, линалоол, α-пинен и др. Кроме того, в плодах кардамона присутствуют белок, жирное масло - 10 % и др. В кардамоне содержится макро- и микроэлементы, витамины: Bl, B2, В3 (Муравьева, 1983; Блинова и др., 1996; Войткевич, 1999; Шретер и др., 2000; al Zuhair et al., 1996; Zachariah, 2002), а также полисахариды в виде разветвленных альфа- глюканов (Оленников, 2013). Фармакологические свойства. Плоды кардамона обладают выраженным тонизирующим действием, стимулируют работу мозга, благотворно воздействуют на нервную систему, снимают напряжение и выводят из состояния депрессии, способствуют улучшению пищеварения, улучшают аппетит, 34 противовоспалительным, ветрогонным, мочегонным, антиоксидантным и обезболивающим свойствами. Также плоды кардамона обладают противораковой активностью, действуют как общеукрепляющее, повышают половую активность (афродизиак) (Девис, 2004; Николаев и др., 2004; Badei et al., 1991; Elgayyar et al., 2001; Duke et al., 2002; Suneetha, Krishnakantha, 2005; Jamal et al., 2006; Keezheveettil et al., 2010). Также кардамон и эфирное масло из него используют в качестве противомикробного средства при ларингите, бронхите, трахеите, пневмонии. В индийской медицине применяется как гастропротекторное средство, регулирует секреторную функцию желудочнокишечного тракта и применяется при желудочных и кишечных коликах, плохой переносимости пищи, рвоте (Jamal, 2006). Эфирное масло снимает депрессию, устраняет меланхолию, вялость, апатию, страхи, головную боль. Имбирь лекарственный Zingiber officinale Rose., растение семейства Zingiberaceae. Многолетнее вечнозеленое травянистое растение, образующее у поверхности почвы толстое, горизонтальное, клубневидное, расчлененное, ветвистое корневище. Произрастает и культивируется в странах ЮгоВосточной Азии и Африки. Химический состав. Пряный, терпкий аромат имбиря обусловлен содержащимися в нем эфирными маслами (1-3%), а его жгучий вкус зависит от наличия фенольных соединений типа генгерола. Главным компонентом эфирного масла имбиря является терпен - цингибирин (около 70%), в составе эфирного масла также найдены лимонен, а- и р-пинены, фелландрен, цинеол, липалоол, гераниол, териениол, карпофиллен, цитраль (Jolad, 2004). Корни и корневища имбиря также содержат витамины (C, B1, B2, A), капсаицин, кофейную кислоту, куркумин, липиды (6-8%), все незаменимые аминокислоты, фенольные соединения (гингерол и зингерон), соли магния, кальция, фосфора, крахмал (Муравьева, 1983; Ловкова, 1990; Шретер и др., 2000; Биологически активные …, 2001; Габрук, Тхуан, 2010). Фармакологические свойства. Корневища имбиря обладают антиоксидантным, нейропротекторным (Mehdizadeh М., 2012) и противоязвенным 35 действием (Siddaraju, 2007, Al-Yahya, 1989, Yoshikawa, 1994), а также тонизирующей, общеукрепляющей, противовоспалительной, иммуностимулирующей, антимикробной, противоопухолевой активностью (Kim, 2005; Shukla, 2007, Ali, 2008). . Имбирь снижает уровень холестерина в крови, понижает артериальное давление, препятствует слипанию тромбоцитов, чем снижает риск возникновения инфаркта (Биологически активные …, 2001; Габрук, Тхуан, 2010). Применение. Имбирь используется при заболеваниях ЖКТ как стимулирующее процессы пищеварения. Также имбирь широко применяется в качестве афродизиака и действенного средство борьбы с импотенцией. Обладая свойством анальгетика, уменьшает боль при артрите и ревматизме, помогает при судорогах, растяжениях, мышечных спазмах, особенно в области поясницы (Дудченко и др., 1989; Асеева, Найдакова, 1991; Биологически активные … , 2001; Габрук, Тхуан, 2010; Селлар, 2005; Duke et al.,2002;Zingiber…,2003). 36 ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Исследованию подвергался экстракт жидкий «Тонофит», полученный из сырья 9 наименований лекарственных растений: корни и корневища левзеи сафлоровидной (Leuizea carthamoides Willd.) – 10%, родиолы розовой (Rhodiola rosea L.) – 10%, девясила высокого (Inula helenium L.) – 15%, имбиря лекарственного (Zingiber officinale Roscoe.) – 5%, корни ревеня тангутского (Rheum tanguticum L.) – 5%, плоды боярышника кровавокрасного (Crataegus Sanguinea Pall.) – 20%, шиповника (Rosa cinnamomea L.) – 20%, кардамона (Elettaria cardamomum (L.) Maton. – 5%, листья крапивы двудомной (Urtica dioica L.) – 10%. Полученный экстракт представляет сумму экстрактивных веществ, представленных флавоноидами, полисахаридами, дубильными веществами, органическими кислотами, аминокислотами, эфирными маслами, витаминами и другими биологически активными веществами. Стандартизация экстракта жидкого осуществляется по сумме флавоноидов в пересчете на рутин и по сумме полисахаридов в пересчете на глюкозу (Сиденова, 2012). Перед экспериментами, с целью исключения влияния этанола, экстракт деалкоголизировали на роторном испарителе при 370С до 1/10 от исходного объема и полученный объем доводили дистиллированной водой до первоначального объема. Полученный водно-спиртовый раствор повторно упаривали на роторном испарителе, а остаток доводили дистиллированной водой до заданного объема. Водный раствор «Тонофита» вводили внутрижелудочно в объеме 1,0 мл/100 г массы животного. Животные контрольной группы получали эквиобъемное количество дистиллированной воды. В качестве препарата сравнения использовали деалкоголизированный экстракт элеутерококка жидкий в дозе, составляющем 5,0 мл/кг, обладающий выраженным адаптогенным эффектом (Дардымов, 1976). Исследования выполнены на лабораторных животных: 388 белых крысах линии Wistar обоего пола массой 160–220 г. и 90 мышах линии СВА, F1 37 (СВАхС57Вl/6) обоего пола массой 20–22 г. Животные находились в стандартных условиях содержания в виварии Института общей и экспериментальной биологии СО РАН на обычном рационе (Приказ МЗ СССР №1179 от 10.10.83 г.). Эксперименты осуществляли в соответствии с «Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных» (Приложение к приказу МЗ СССР №755 от 12.08.77 г.) и «Правилами Европейской конвенции по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и иных научных целей». Лабораторных животных умерщвляли методом мгновенной декапитации под легким эфирным наркозом. Кроме того, в качестве объектов исследования были использованы: суспензия эритроцитов, суспензия липосом и биохимические тест-системы. Суспензию эритроцитов готовили из свежей эритроцитарной массы донорской крови путем трехкратного отмывания в физиологическом растворе в соотношении 1:10 и центрифугирования при 1,5 тыс. об/мин в течение 10 мин. Суспензию липосом получали из свежего куриного яичного желтка путем суспендирования с фосфатным буфером (рН 7,4) в соотношении 1 : 10 на магнитной мешалке в течение 15 мин (Лопухин и соавт., 1983). Острую токсичность определяли по методу Кербера (Руководство…, 2000) при однократном внутрибрюшинном введении вещества в диапазоне доз: от 500 до 6000 мг/кг и внутрижелудочном введении в диапазоне доз: от 1000 до 8000 мг/кг. Все испытанные дозы доводили дистиллированной водой до конечного объема, составляющего 1,0 мл/100 г массы животного. Наблюдение за общим состоянием белых крыс и их поведением осуществляли в течение 14 дней. Для оценки спектра адаптогенной активности, фармакотерапевтической эффективности и механизма действия «Тонофита» были использованы наиболее адекватные модели и информативные методы исследования, позволяющие объективно оценить особенности адаптационной перестройки организма животных, происходящие под влиянием испытуемого средства. Исследование спектра адаптогенной активности включало определение влияния 38 «Тонофита» на физическую выносливость лабораторных животных; оценку влияния на устойчивость организма к действию экстремальных факторов различной природы: влияние на устойчивость к гипобарической, гемической, гиперкапнической и тканевой гипоксии, иммобилизационному стрессу. Общую физическую нагрузку моделировали общепринятым методом путем плавания с грузом, составляющим 7% от массы тела в бассейне с температурой воды 24,0±0,5°С до полного утомления, критерием которого служило 10-секундное погружение под воду. Силовые физические нагрузки воспроизводили по методу С.Я. Арбузова (1960) путем виса животных на шесте. Гипобарическую гипоксию воспроизводили общепринятым методом в специальной барокамере, в которой с помощью масляного насоса создавали разряжение воздуха, соответствующее «подъему» животных на высоту 10000 м. «Подъем» осуществляли со скоростью 20 м/мин до высоты 6000 м. На данной высоте «подъем» прекращался на 2 мин (площадка). Затем с такой же скоростью совершали «подъем» далее до высоты 10000 м. Модель гемической гипоксии воспроизводили путем однократного внутрибрюшинного введения животным водного раствора натрия нитрита в дозе 210 мг/кг (Костюченков, Фаращук, 1982). Модель гиперкапнической гипоксии создавали путем помещения животного в стеклянную емкость с герметичными крышками, которые опускали под воду для избежания подсоса воздуха. Устойчивость животных к действию гиперкапнической гипоксии определяли по времени жизни животных от момента закрытия емкости до прекращения дыхания (Руководство…, 2000). Модель тканевой гипоксии воспроизводили путем однократного внутрибрюшинного введения животным водного раствора нитропруссида натрия в дозе 42 мг/кг (Воронина, Неробкова, 2000). Влияние на устойчивость к стрессовому воздействию оценивали на модели иммобилизационного стресса путем фиксации животных в положении на спине в течение 12 и 24 часа. Для оценки антистрессорной активности определяли выраженность триады Селье: гипертрофию надпочечников, инво- 39 люцию иммунокомпетентных органов (тимуса и селезенки) и наличие деструктивных изменений в слизистой оболочке желудка. Желудок разрезали по большой кривизне и, после промывания в физиологическом 0,9% растворе NaCl, подсчитывали количество деструкций, которые подразделяли на точечные кровоизлияния, эрозии и полосовидные язвы. Для каждого вида повреждений подсчитывали «индекс Паулса» (ИП) по формуле (Амосова Е.Н., 1998): АхВ ИП = ------------ ; 100 где: А - среднее количество деструкций в группе; В - процент животных с повреждениями в группе. Оценку влияния фитосредства на поведенческую и познавательную активность животных проводили с использованием методов «открытое поле», «приподнятый крестообразный лабиринт» (ПКЛ), «условного рефлекса пассивного избегания» (УРПИ) (Методические рекомендации…, 2005). Анксиолитическое действие и влияние на ГАМК-ергическую системы исследовали с помощью метода конфликтной ситуации по Vogel (Воронина, Середенина, 2000). Для оценки влияния испытуемого средства на продолжительность наркотического сна использовали тиопентал натрия в дозе 42 мг/кг при его однократном внутрибрюшинном введении (Воронина, Неробкова, 2000). Регистрировали продолжительность сна по времени засыпания животных (принятия бокового положения) и времени пробуждения (выхода из бокового положения). Оценку фармакотерапевтической и профилактической эффективности испытуемого средства проводили с использованием моделей интенсивных физических нагрузок, токсического повреждения печени, 24-часового иммобилизационного стресса и азатиоприновой иммуносупрессии. Действие интенсивных физических нагрузок воспроизводили общепринятым методом путем плавания животных с 7% грузом в бассейне при 40 температуре воды 250 С. Определяли общую физическую выносливость по продолжительности плавания до полного утомления, критерием которого служило первое погружение под воду, а также определяли показатели, характеризующие состояние энергетических процессов и антиокислительной системы организма лабораторных животных. О влиянии испытуемого средства на энергетические процессы судили по содержанию АТФ (Алейникова, Рубцова, 1988) и концентрации гликогена в печени (Seifter, 1950). Для оценки антиоксидантной активности определяли концентрацию малонового диальдегида (МДА) в сыворотке крови (Темирбулатов, Селезнев, 1981). О состоянии антиоксидантной системы судили по активности супероксиддисмутазы (СОД) (Чевари и соавт., 1985), каталазы (Королюк и соавт., 1988). Модель токсического повреждения печени воспроизводили путем подкожного введения 50% (v/v) масляного раствора четыреххлористого углерода (СС14) в объеме 0,4 мл/100 г массы животных 1 раз в день в течение 3 дней (Венгеровский и соавт., 2000). Животным опытной группы интрагастрально вводили раствор испытуемого средства в дозе 100 мг/кг 1 раз в сутки в течение 21 дня. Крысы контрольной группы получали эквиобъемное количество дистиллированной воды по аналогичной схеме. На 7, 14 и 21 сутки с начала введения тетрахлометана проводили исследование функционального состояния печени животных. Для этого определяли активность аланинаминотрансферазы (АлТ), аспартатаминотрансферазы (АсТ), щелочной фосфатазы (ЩФ), уровни общего и прямого билирубина в сыворотке крови. Исследование проведено на анализаторе «SAPPHIRE 400» (Япония). Интенсивность процессов свободнорадикального окисления оценивали вышеописанными методами. Модель иммобилизационного стресса воспроизводили общепринятым методом путем фиксации животных в положении на спине в течение 24 ч. Для оценки антистрессорной активности определяли выраженность триады Селье: гипертрофию надпочечников, инволюцию иммунокомпетентных органов с подсчетом клеточности иммунных органов, а также оценивали коли- 41 чество повреждений в слизистой оболочке желудка. Для этого желудок разрезали по большой кривизне и подсчитывали количество деструкций, которые подразделяли на точечные кровоизлияния, эрозии и полосовидные язвы. Для каждого вида повреждений подсчитывали «индекс Паулса» (ИП) (Амосова и соавт., 1998). Также на автоматическом биохимическом анализаторе «Sapphire 400» были определены биохимические показатели сыворотки крови, характеризующие состояние обменных процессов в организме при имммобилизационном стрессе: общего белка, билирубина, глюкозы, триацилглицеридов (ТГ), АсТ, АлТ. Интенсивность процессов свободнорадикального окисления оценивали вышеописанными методами. Иммунодепрессивное состояние моделировали путем внутрижелудочного введения азатиоприна в дозе 50 мг/кг в течение 5 дней (Лазарева, Алехин, 1985). При исследовании иммуномодулирующей активности «Тонофита» состояние гуморального иммунитета оценивали методом локального гемолиза (Cunningham, 1965); состояние клеточного иммунитета оценивали в реакции гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) согласно стандартной методике локальной ГЗТ (Петров и соавт., 1987); состояние макрофагального звена иммунного ответа - в реакции фагоцитоза перитонеальных макрофагов мышей в отношении частиц коллоидной туши (Руководство…, 2005). Для оценки противовоспалительной активности «Тонофита» определяли его влияние на экссудацию, альтерацию, эффективность при остром перитоните. Изучение антиэкссудативной активности проводили на моделях острого асептического воспаления задней конечности животного и острого перитонита. Асептическое воспаление моделировали путем однократного субплантарного введения в заднюю конечность белых крыс 0,1 мл 3%-ного раствора формалина (Стрельников, 1960). Выраженность отека оценивали онкометрическим методом по разнице между объемами здоровой и отечной лапки. 42 Для определения влияния испытуемого средства на процессы альтерации воспалительный процесс моделировали по методу Menkin (Ойвин, Шетель, 1961) путем подкожного введения белым крысам в область спины 0,5 мл 9%-ного раствора уксусной кислоты, одновременно внутрибрюшинно вводили раствор декстрана в дозе 300 мг/кг. Площадь некротизированной ткани оценивали путем нанесения контура некроза на прозрачную пленку. Острый перитонит вызывали внутрибрюшинным введением 1,0 мл 0,2 % раствора нитрата серебра (Александров и соавт., 1986). Определяли объем экссудата в брюшной полости и количество дегранулированных тучных клеток в брыжейке, для чего брыжейку фиксировали смесью Карнуа и окрашивали 0,05% раствором толуидинового синего. Подсчет количества дегранулированных тучных клеток осуществляли в 100 окнах при увеличении (х 20). С использованием методов in vitro определяли мембраностабилизирующую активность фитосредства по выраженности перекисного и осмотического гемолиза эритроцитов. Перекисный гемолиз эритроцитов воспроизводили с помощью реактива Фентона, осмотический гемолиз моделировали добавлением к 1% суспензии эритроцитов равного объема дистиллированной воды (Ковалев и соавт., 1986). Для определения антирадикальной активности (АРА) использовали тест обесцвечивания радикала ABTS•+ (Re et. al., 1999). АРА по отношению к супероксидным анион-радикалам определяли по методу A.S. Chen и соавт. (2003), по отношению к NO - по методу R. Govindarajan и соавт. (2003). Хелатирующую активность определяли с использованием О-фенантролинового метода (Теселкин, 1997). Кроме того оценивали динамику накопления ТБКактивных продуктов в суспензии липосом яичного желтка (Клебанов и соавт., 1988). Полученные данные обработаны статистически с использованием Uкритерия Манна-Уитни (Сергиенко, Бондарева, 2001). Различия считали достоверными при P 0,05. 43 ГЛАВА 3. ИССЛЕДОВАНИЕ СПЕКТРА ФАРМАКОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ «ТОНОФИТА» Исследование спектра фармакологической адаптогенной активности «Тонофита» включало определение его влияния на устойчивость организма к действию экстремальных факторов различной природы: иммобилизационному стрессу, интенсивным физическим нагрузкам (динамическим и силовым), гипоксии (гипобарической, гемической, тканевой), интоксикации тетрахлорметаном и флогогенным агентам. В серии предварительных экспериментов была определена острая токсичность испытуемого фитосредства. 3.1. Определение острой токсичности «Тонофита» Эксперименты проведены на мышах линии СВА обоего пола массой 18-20 г. Острую токсичность адаптогенного средства определяли с использованием метода Кербера М.Л. (1963) при его однократном внутрижелудочном и внутрибрюшинном введении в виде деалкоголизированного водного раствора в дозах от 1,0 – до 395,0 мл/кг массы животного. Конечный вводимый объем животным составлял 1,0 мл/100 г. Животные контрольных групп получали эквиобъемное количество дистиллированной воды. Наблюдение за животными осуществляли в течение 14 дней с момента введения испытуемого средства. В течение всего периода эксперимента наблюдали за общим состоянием и поведением животных, регистрировали видимые признаки интоксикации и количество погибших животных с осмотром внутренних органов и гистологическим исследованием жизненно важных органов при гибели животных. Установлено, что внутрижелудочное и внутрибрюшинное введение адаптогенного средства в объемах 1,0 - 395 мл/кг не вызывало гибели животных в течение всего периода наблюдения. У животных, получавших испытуемое средство, не отмечали видимых признаков интоксикации; поведенческие реакции и общее состояние не отличалось от такового у животных кон- 44 трольной группы; животные опытных групп оставались активными, хорошо принимали корм, стул был нормальным в течение всего периода наблюдения. Полученные данные позволяют отнести адаптогенное средство к группе практически не токсичных веществ по классификации К.К. Сидорова (Требования..,1973) и H.Hodge, R. Sterner (1975). 3.2. Влияние «Тонофита» на устойчивость к интенсивным физическим нагрузкам 3.2.1. Влияние на общую физическую выносливость Эксперименты проведены на белых крысах линии Wistar обоего пола массой 180 - 200 г. Для определения общей физической выносливости использовали общепринятую методику плавания с грузом 7% от массы тела (Методические рекомендации..., 1999). «Тонофит» вводили внутрижелудочно в объемах 5,0 и 10,0 мл/кг однократно за 1 ч до тестирования, а также многократно в течение 7 дней в дозе 100 мг/кг 1 раз в день за 60 мин до приема пищи. Животным контрольной группы внутрижелудочно вводили аналогичный объем дистиллированной воды. В качестве препарата сравнения использовали деалкоголизированный водный раствор экстракта элеутерококка в объеме 5,0 мл/кг. Оценивали продолжительность плавания животных до полного утомления, критерием которого служило 10-секундное погружение под воду. Полученные данные приведены в таблице 3.2.1 Таблица 3.2.1.1 - Влияние «Тонофита» на общую физическую выносливость белых крыс Группы животных Доза, мл/кг Продолжительность плавания, мин при однократном введении Контрольная (n=8) 14,71,52 Опытная 1 (Тонофит) (n=10) 5,0 15,51,40 Опытная 2 (Тонофит) (n=10) 10,0 20,32,32* 45 Опытная 3 (элеутерококк) (n=10) 5,0 19,00,94* при многократном введении Контрольная (n=8) Опытная (Тонофит) (n=10) 17,11,55 5,0 31,03,22* Примечание: - здесь и далее значения, достоверно отличающиеся от данных животных контрольной группы при Р≤0,05. Как следует из данных, приведенных в таблице 3.2.1.1., однократное введение испытуемого средства в дозе 5 мл/кг не оказывает влияния на продолжительность плавания животных; тогда как при введении дозы 10 мл/кг отмечалось увеличение времени плавания на 38% по сравнению с данными животных контрольной группы. Более значимое повышение физической выносливости отмечено при многократном введении «Тонофита» в дозе 5,0 мл/кг: продолжительность плавания крыс опытной группы увеличилась на 80% по сравнению с показателями животных контрольной группы. При этом, актопротекторная активность «Тонофита» в дозе 5 мл/кг была аналогичной таковой у препарата сравнения – экстракта элеутерококка. 3.2.2. Влияние на силовую выносливость Эксперименты проведены на мышах линии F1(CBAxC57B1/6) обоего пола массой 18-20 г. Влияние испытуемого средства на силовую выносливость определяли по времени виса животных на шесте от начала удержания до момента падения (Арбузов и соавт., 1960). «Тонофит» вводили внутрижелудочно в дозе 5 мл/кг однократно за 1 ч до тестирования, а также многократно в течение 7 дней в указанной дозе 1 раз в день за 30 мин до приема пищи. Животным контрольной группы внутрижелудочно вводили аналогичный объем дистиллированной воды. В качестве препарата сравнения использовали деалкоголизированный раствор экстракта элеутерококка в аналогичной дозе. Полученные данные приведены в таблице 3.2.2.1. Таблица 3.2.2.1 - Влияние «Тонофита» на силовую выносливость мышей 46 Продолжительность виса, мин Группы животных при однократном при многократном введении введении Контрольная (n=8) 12,51,42 12,91,62 Тонофит (n=10) 13,71,53 19,51,61* Элеутерококк (n=10) 16,11,42* - Как следует из данных, приведенных в таблице 3.2.2.1., однократное введение «Тонофита» в дозе 5 мл/кг не оказывает влияния на силовую выносливость животных. Многократное введение испытуемого средства сопровождается выраженным повышением силовой выносливости животных, о чем свидетельствует увеличение продолжительности виса мышей опытной группы в 1,5 раза по сравнению с данными животных контрольной группы. При этом, актопротекторная активность «Тонофита» при однократном введении несколько уступала таковой у препарата сравнения – экстракта элеутерококка. Таким образом, полученные данные свидетельствуют, что многократное введение «Тонофита» в дозе 5 мл/кг оказывает стимулирующее действие на общую и силовую физическую выносливость животных. 3.3. Влияние «Тонофита» на устойчивость к кислороддефицитным со- стояниям 3.3.1. Влияние на устойчивость к гемической гипоксии Эксперименты проведены на белых крысах линии Wistar обоего пола массой 180-220 г. Модель гемической гипоксии воспроизводили путем однократного внутрибрюшинного введения животным водного раствора натрия нитрита в дозе 210 мг/кг (Костюченков, Фаращук, 1982). Животным опытной группы внутрижелудочно вводили испытуемое средство в дозах 5 и 47 10 мл/кг в течении 7 дней. Животным контрольной группы внутрижелудочно вводили аналогичный объем дистиллированной воды. В качестве препарата сравнения использовали экстракт элеутерококка в объеме 5,0 мл/кг. Устойчивость животных к действию тканевой гипоксии определяли по времени жизни животных от момента введения натрия нитрита до прекращения дыхания. Полученные данные приведены в таблице 3.3.1.1. Таблица 3.3.1.1 - Влияние «Тонофита» на продолжительность жизни белых крыс при гемической гипоксии Группы Доза, мл/кг Продолжительность жизни, мин - 32,52,65 Тонофит (n=8) 5,0 92,35,48* Тонофит (n=8) 10,0 46,73,68* животных Контрольная (n=8) Элеутерококк (n=8) 5,0 Как следует из приведенной таблицы, профилактическое введение испытуемого средства в указанных дозах сопровождается выраженным повышением устойчивости животных к гемической гипоксии. При этом, более выраженное антигипоксическое действие отмечено при введении «Тонофита» в дозе 5 мл/кг: продолжительность жизни животных у животных этой группы увеличивалась почти в 3 раза по сравнению с данными крыс контрольной группы. На фоне введения средства в дозе 10 мл/кг продолжительность жизни повышалась на 43% по сравнению с контролем. Антигипоксическое действие испытуемого средства в дозе 10 мл/кг было сопоставимым с таковым у препарата сравнения, а в дозе 5 мл/кг существенно превосходило действие экстракта элеутерококка в аналогичной дозе. 48 3.3.2. Влияние на устойчивость к гипобарической гипоксии Эксперименты проведены на белых крысах линии Wistar обоего пола массой 160-200г. Гипобарическую гипоксию воспроизводили общепринятым методом путем «подъема» животных на «высоту» 10000 м (атм. давление – 196,8 мм рт.ст., парциальное напряжение кислорода – 50 мм рт.ст.). «Тонофит» животным вводили внутрижелудочно в дозе 5 мл/кг однократно за 1 ч до тестирования, а также многократно в указанном объеме в течение 7 дней 1 раз в день за 1 ч до приема пищи. Животным контрольной группы внутрижелудочно вводили аналогичный объем дистиллированной воды. В качестве препарата сравнения использовали экстракт элеутерококка в объеме 5,0 мл/кг. Устойчивость животных к действию гипобарической гипоксии определяли по продолжительности жизни животных на высоте 10000 м. Полученные данные приведены в таблице 3.3.2.1 Таблица 3.3.2.1 - Влияние «Тонофита» на продолжительность жизни крыс при гипобарической гипоксии Продолжительность жизни, мин Группы животных при однократном при многократном введении введении Контрольная (n=8) 14,51,41 19,11,25 Тонофит (n=8) 21,22,34* 38,52,45* Элеутерококк (n=8) 18,41,63* 36,02,95* Как следует из данных, приведенных в таблице 3.3.2.1., однократное введение «Тонофита» в дозе 5мл/кг на фоне гипобарической гипоксии сопровождается повышением продолжительности жизни крыс в среднем на 46% по сравнению с данными животных контрольной группы. Более выраженное антигипоксическое действие установлено при многократном введении испытуемого средства: продолжительность жизни животных опытной группы возрастала практически в 2 раза по сравнению с контролем. При этом антиги- 49 поксическая активность испытуемого средства превосходила таковую у препарата сравнения экстракта элеутерококка. 3.3.3. Влияние на устойчивость к гиперкапнической гипоксии Эксперименты проведены на белых крысах линии Wistar обоего пола массой 180-200 г. Модель гиперкапнической гипоксии создавали путем помещения животного в стеклянную емкость, которую герметично закрывали и опускали под воду (Руководство…, 2000). Испытуемое средство вводили внутрижелудочно в дозе 5 мл/кг в течение 7 дней 1 раз в день за 1 ч до приема пищи. Животным контрольной группы внутрижелудочно вводили аналогичный объем дистиллированной воды. В качестве препарата сравнения использовали экстракт элеутерококка в объеме 5,0 мл/кг. Устойчивость животных к действию гиперкапнической гипоксии определяли по времени жизни животных от момента закрытия емкости до прекращения дыхания. Полученные данные приведены в таблице 3.3.3.1. Таблица 3.3.3.1 - Влияние «Тонофита» на продолжительность жизни крыс при гиперкапнической гипоксии Группы животных Продолжительность жизни, мин Контрольная (n=8) 24,11,72 Тонофит (n=8) 41,53,16* Элеутерококк (n=8) 37,03,14* Данные, приведенные в таблице 3.3.3.1., свидетельствуют, что при профилактическом введении «Тонофита» в указанной дозе отмечается повышение устойчивости животных к гиперкапнической гипоксии, о чем свидетельствует увеличение продолжительности жизни крыс опытной группы на 72% по сравнению с аналогичными показателями животных контрольной группы. Антигипоксическое действие исследуемого препарата было аналогичным таковому у препарата сравнения – экстракта элеутерококка. 50 3.3.4. Влияние на устойчивость к тканевой гипоксии Опыты проведены на белых крысах линии Wistar обоего пола массой 160–180 г. Тканевую гипоксию воспроизводили однократным внутрибрюшинным введением натрия нитропруссида в дозе 42 мг/кг (Воронина, Неробкова, 2000). Животным опытной группы внутрижелудочно вводили «Тонофит» в дозе 5 мл/кг в течение 7 дней 1 раз в день. Крысы контрольной группы получали эквиобъемное количество дистиллированной воды. В качестве препарата сравнения использовали экстракт элеутерококка в дозе 5,0 мл/кг. Оценивали продолжительность жизни животных после инъекции натрия нитропруссида. Полученные данные приведены в таблице 3.3.4.1. Таблица 3.3.4.1 - Влияние «Тонофита» на продолжительность жизни белых крыс при острой тканевой гипоксии Группы животных Продолжительность жизни, мин Контрольная (n=8) 23,1 0,40 Тонофит(n=8) 36,5 1,16* Элеутерококк (n=8) 30,4 2,32* Как следует из приведенных данных, семидневное введение испытуемого средства в указанной дозе сопровождалось увеличением продолжительности жизни животных опытной группы в среднем на 58% по сравнению с данными животных контрольной группы. При этом антигипоксическое действие испытуемого средства превосходило таковое у препарата сравнения. Таким образом, полученные данные свидетельствуют, что «Тонофит» в дозах 5 и 10 мл/кг обладает в антигипоксической активностью, повышая продолжительность жизни животных при кислороддефицитных состояниях различного генеза. Наиболее выраженное антигипоксическое действие испытуемое средство оказывает при многократном введении в дозе 5 мл/кг. При этом антигипоксическая активность «Тонофита» в указанной дозе при гипо- 51 барической, тканевой и гемической гипоксии превосходит таковую у препарата сравнения – экстракта элеутерококка. 3.4. Влияние «Тонофита» на устойчивость к иммобилизационному стрессу Эксперименты проведены на белых крысах линии Wistar обоего пола массой 160-200 г. Модель иммобилизационного стресса воспроизводили общепринятым методом путем фиксации животных в положении на спине в течение 12 ч. Крысам опытной группы внутрижелудочно вводили «Тонофит» в дозах 5 и 10 мл/кг однократно за 1 ч до стрессорного воздействия. Животные контрольной группы получали эквиобъемное количество дистиллированной воды. Через 12 часов животных декапитировали под легким эфирным наркозом и определяли массу надпочечников, тимуса, количество язвенных поражений в слизистой желудка с подсчетом «Язвенного индекса» (Амосова и соавт., 1998).. Полученные данные приведены в таблице 3.4.1. Таблица 3.4.1 - Влияние «Тонофита» на выраженность «триады Селье» у белых крыс на фоне 12-часового иммобилизационного стресса Масса, мг/100г Группы животных Интактная (n=6) Контрольная (n=6) Тонофит, 5 мл/кг (n=6) Тонофит, 10 мл/кг (n=6) надпочечник Количество кровоизлияний тимус селезенка 18,60,85 68,87,05 346,533,62 0 27,21,24 31,84,52 197,418,05 7,10,52 22,62,52* 31,93,26 340,030,35* 6,60,51 23,21,36* 31,62,53 299,025,33* 4,50,36* и в желудке Как видно из приведенной таблицы, в результате 12-часовой иммобилизации у животных развивается характерная картина стрессорной ре- 52 акции, т.н. «триада Селье», которая выражается в соответствующих изменениях со стороны внутренних органов: значительной гипертрофии надпочеников, инволюции тимуса и появлением деструкций в слизистой оболочке желудка. Установлено, что профилактическое однократное введение «Тонофита» в дозах 5 и 10 мл/кг оказывало выраженное стресс-протективное действие. Об этом свидетельствует уменьшение степени гипертрофии надпочечников среднем на 18%; увеличение относительной массы селезенки соответственно на 72 и 51% по сравнению с аналогичными показателями животных контрольной группы. В слизистой желудка крыс, получавших испытуемое средство в дозе 10 мл/кг отмечалось достоверное уменьшение количества точечных кровоизлияний. При этом, на массу тимуса «Тонофит» в указанных дозах влияния не оказывал. Таким образом, полученные данные свидетельствуют, что «Тонофит» в дозах 5 и 10 мл/кг оказывает антистрессорное действие, предотвращая развитие катаболических изменений во внутренних органах животных при иммобилизационном стрессе. 3.5. Влияние «Тонофита» на устойчивость к интоксикации тетрахлорметаном Опыты проведены на крысах линии Wistar обоего пола массой 150 – 180 г. Интоксикацию тетрахлорметаном осуществляли путем его внутрибрюшинного введения в виде 50 % масляного раствора в дозах ДI16, ДI50, ДI84, что составляло соответственно 1,5; 2,0; 2,5 мл/кг. Указанные дозы CCL4 были установлены в серии предварительных экспериментов с использованием метода Кербера (Беленький, 1963). Животным опытной группы растительное средство вводили профилактически внутрижелудочно в дозе 5 мл/кг в течение 7 дней до интоксикации. Крысы контрольной группы получали эквиобъемное количество дистиллированной воды. Антитоксическое действие испытуемого средства определяли по количеству 53 выживших животных в течение 48 часов после интоксикации. Полученные данные приведены в таблице 3.5.1. Таблица 1 - Влияние «Тонофита» на выживаемость белых крыс при интоксикации тетрахлорметаном Группы Контрольная Процент выживших животных при введении CCL4 1,5 мл/кг 2,0 мл/кг 2,5 мл/кг (n=6) (n=6) (n=6) 20 50 80 40 50 Опытная (Тонофит) 0 Как следует из данных, приведенных в таблице 3.5.1, профилактическое введение испытуемого средства сопровождалось повышением устойчивости белых крыс к интоксикации тетрахлорметаном в летальных дозах. Так, при интоксикации тетрахлорметаном в дозе, соответствующей 1,5 мл/кг. гибели животных, получавших испытуемое средство, не отмечалось, тогда как в контрольной группе погибло 20 % животных. При введении тетрахлорметана в дозах 2,0 мл/кг. и 2.5 мл./кг. погибло соответственно 40 и 50 % животных опытной группы при 50 и 80 % гибели животных контрольной группы. Полученные данные свидетельствуют, что профилактическое введение комплексного растительного средства в дозе 5,0 мл./кг оказывает выраженное антитоксическое действие, повышая выживаемость животных при интоксикации тетрахлорметаном. 6.1. Влияние «Тонофита» на устойчивость тканей к действию флогогенных агентов 6.1.1. Влияние на процессы альтерации и регенерации Опыты проведены на белых крысах линии Wistar обоего пола с массой 160-180 грамм. Моделирование воспалительного процесса осуществляли по методу Менкина (Ойвин, Шетель, 1961). Животным в область спины под- 54 кожно вводили 0,5 мл уксусной кислоты с одновременной внутрибрюшинной инъекцией раствора реополиглюкина. Введение «Тонофита» осуществляли внутрижелудочно за 1 час до инъекции уксусной кислоты, а затем ежедневно на протяжении 21 дня в дозе 100 мг/кг. Контрольная группа животных получала дистиллированную воду в соответствующем объеме по аналогичной схеме. В качестве препарата сравнения использовали калефлон в дозе 100 мг/кг. На 7, 14 и 21 сутки эксперимента определяли площадь некротизированной ткани планиметрическим методом. Полученные данные представлены в таблице 6.1.1.1. Таблица 6.1.1.1. Влияние «Тонофита» на процессы альтерации у белых крыс Группы Площадь альтерации, см 2 животных 7 сутки 14 сутки 21 сутки 1.Контрольная 1,93±0,170 0,61±0,122 0,25±0,051 2.Тонофит (n=6) 1,11±0,050* 0,32±0,050* 0,16 ±0,020* 3.Калефлон n=6) 1,13±0,042* 0,46±0,050* 0,19±0,014* (n=6) Как следует из данных, приведенных в таблице, «Тонофит» оказывает противовоспалительное действие, о чем свидетельствует уменьшение степени альтерации тканей и повышение интенсивности регенераторных процессов в очаге воспаления. На 7 сутки исследования выраженный антиальтеративный эффект был обнаружен у крыс, получавших испытуемое средство: площадь деструкции у них на 42% меньше, чем у животных контрольной группы. Исследование на 14 и 21 сутки эксперимента показало, что на фоне 55 курсового применения испытуемого средства отмечалось стимулирование процессов регенерации, что сопровождалось ускорением заживления кожномышечных дефектов. Так у животных, получавших «Тонофит» в указанной дозе на 14 сутки исследования площадь альтерированной ткани была в 2 раза меньше по сравнению с аналогичными данными у крыс контрольной группы, на 21 сутки исследования поврежденные участки кожи у животных опытной группы практически полностью восстановились. При этом антиальтеративная активность «Тонофита» была аналогичной таковой у калефлона. 6.1.2. Влияние на фазу экссудации процесса воспаления Эксперименты проведены на белых крысах линии Wistar обоего пола с исходной массой 180-200 г. Асептическое воспаление воспроизводили по методу Ю.В. Стрельникова (1960). За 3 часа до субплантарного введения белым крысам в заднюю конечность 0,1 мл 3% водного раствора формалина, а затем через 5 и 18 часов после этого животным внутрижелудочно вводили «Тонофит» в дозе 100 мг/кг массы. Животным контрольной группы вводили дистиллированную воду в равном объеме по аналогичной схеме. В качестве препарата сравнения использовали калефлон в терапевтической дозе 100 мг/кг. Оценку антиэкссудативной активности осуществляли онкометрическим методом через 24 часа после введения формалина. Результаты представлены в таблице 6.1.2.1. Таблица 6.1.2.1. Влияние «Тонофита» на экссудацию при формалиновом отеке у белых крыс Группы животных ∆ V, мл* % угнетения отека 1. Контрольная (n=6) 0,80±0,015 - 2. Тонофит (n=6) 0,42±0,035* 47 3. Калефлон (n=6) 0,41±0,039* 49 56 *Примечание: ∆ V – разность между объемами отечной и неотечной лапок. Из данных, приведенных в таблице 6.1.2.1., следует, что испытуемое средство оказывало выраженное антиэкссудативное действие, угнетая развитие формалинового отека на 47% по сравнению с данными животных контрольной группы. При этом антиэкссудативное действие «Тонофита» в указанной дозе была близкой к таковому у препарата сравнения. 57 ГЛАВА 4. ИССЛЕДОВАНИЕ ВЛИЯНИЯ «ТОНОФИТА» НА ЦЕНТРАЛЬНУЮ НЕРВНУЮ СИСТЕМУ 4.1. Исследование психотропной активности «Тонофита» 4.1.1 Влияние на поведенческую активность в тесте «открытое поле» Эксперименты проведены на белых крысах обоего пола линии Wistar массой 180-210 г. В каждой группе было по 10 животных. Для исследования ориентировочных реакций и поведенческой активности у крыс использовали метод «открытое поле» (Методические рекомендации…, 2005).. Испытание проводили однократно в течение 3 минут по стандартной методике. Животным опытной группы внутрижелудочно вводили «Тонофит» в дозе 5 мл/кг в течение 7 дней (1 раз в день за 40-50 минут до кормления). Крысы е контрольной группы получали дистиллированную воду в аналогичном режиме и эквиобъемном количестве. В качестве препарата сравнения использовали деалкоголизированный экстракт элеутерококка в дозе 5,0 мл/кг. Для оценки поведенческой активности регистрировали количество пересеченных периферических и центральных квадратов (горизонтальная активность), число подъемов на задние лапки (вертикальная активность), число дефекаций, груминг, число заглядываний в норки (норковый рефлекс). Общую двигательную активность определяли как сумму горизонтальной, вертикальной активности и норкового рефлекса. Полученные данные представлены в таблице 4.1.1.1. Таблица 4.1.1.1 - Влияние «Тонофита» на поведенческую активность белых крыс в тесте «открытое поле» Группы животных Показатели Общая двигательная активность Контрольная Опытная 1 (То- (n=10) нофит) (n=10) 23,1±1,58 32,5±2,31* Опытная (элеутерококк) (n=10) 33,7±3,71* 2 58 Горизонтальная ак- 13,6±1,23 16,4±1,25 23,1±2,15* 8,0±0,35 13,5±1,42* 9,0±0,55 Норковый рефлекс 1,5±0,17 2,6±0,18* 1,6±0,08 Дефекация 3,0±0,10 2,7±0,24 2,3±0,16* Груминг 5,7±0,40 4,2±0,33* 2,4±0,18* 1,4±0,12 3,3±0,25* 3,1±0,31* тивность Вертикальная актив- ность Кол-во выходов в центральную зону Как следует из приведенной таблицы, многократное введение «Тонофита» в указанной дозе сопровождалось существенным повышением ориентировочно-исследовательской активности, о чем свидетельствует повышением общей двигательной активности животных этой группы на 40% по сравнению с данными крыс контрольной группы. При этом, повышение двигательной активности у животных, получавших испытуемое фитосредство, происходило в результате увеличения вертикальной активности и норкового рефлекса: соответственно на 68 и 73% по сравнению с аналогичными показателями в контроле. На повышение ориентировочно-исследовательских реакций под влиянием «Тонофита» указывает также существенное увеличение количества выходов животных в центральную зону камеры в 2,3 по сравнению с данными крыс контрольной группы. Наряду с этим, под влиянием данного средства отмечалось уменьшение количества актов груминга на 26%, в то же время на число болюсов «Тонофит» не оказывал статистически значимого влияния. Влияние испытуемого средства на поведенческую активность превосходило действие препарата сравнения по таким показателям как горизонтальная активность, норковый рефлекс и груминг. Полученные данные свидетельствуют, что «Тонофит» способствует снижению уровня тревожно- 59 сти и ускорению периода адаптации животных к новым незнакомым условиям. 4.1.2. Влияние на поведенческую активность в тесте «приподнятый крестообразный лабиринт» Эксперименты проведены на белых крысах обоего пола линии Wistar массой 180-210 г. В каждой группе было по 10 животных. Для исследования поведенческой активности использовали тест «приподнятый крестообразный лабиринт» (ПКЛ), основанный на предпочтении грызунами темных нор и естественного страха нахождения на открытых площадках и падения с высоты. метод «открытое поле» (Методические рекомендации…, 2005). Животным опытной группы внутрижелудочно вводили «Тонофит» в дозе 5 мл/кг в течение 7 дней (1 раз в день за 40-50 минут до кормления). Крысы контрольной группы получали дистиллированную воду в аналогичном режиме и эквиобъемном количестве. Для оценки выраженности эмоциональной реакции и поведенческой активности регистрировали количество заходов и время пребывания животных в закрытых, открытых рукавах и на центральной площадке; количество выглядываний в открытые лучи; количество свешиваний через край открытых рукавов. Полученные данные приведены в таблице 4.1.2.1. Таблица 4.1.2.1 - Влияние «Тонофита» на поведенческую активность белых крыс в тесте «приподнятый крестообразный лабиринт» Показатели Количество заходов в закрытый рукав Количество заходов в открытый рукав Время пребывания закрытом рукаве Время пребывания в Контрольная (n=10) Тонофит (n=10) 1,57±0,23 1,61±0,15 0,37±0,01 1,13±0,44 183,8±4,10 130,7±9,14* в 23,4±1,72 39,5±2,68* 60 открытом рукаве Время пребывания на центральной 0,51±0.02 1,41±0,13 площадке Количество выгляды- ваний в открытые рука- 0,62±0,03 1,92±0,18* ва Количество ний свешива- 2,87±0,09 4,73±0,35* Как следует из данных, приведенных в таблице 4.1.2.1, крысы контрольной группы большую часть времени проводят в закрытых рукавах ПКЛ. Курсовое введение «Тонофита» в дозе 5,0 мл/кг сопровождается уменьшением выраженности реакции тревоги и эмоциональности, о чем свидетельствует уменьшение времени пребывания в закрытых рукавах в время пребывания животных в закрытых рукавах на 30%, а также увеличение количества заходов в открытые рукава в 3 раза и времени пребывания в них на 68% по сравнению с соответствующими данными крыс контрольной группы. Наряду с этим, у крыс опытной группы отмечалось увеличение времени пребывания в центральной площадке и количества свешиваний в 3 и 2 раза соответственно, что также подтверждает повышение исследовательской активности и уменьшение фобического компонента эмоционального статуса животных под влиянием испытуемого средства. 4.1.3. Влияние на поведенческую активность в конфликтной ситуации Эксперименты проведены на белых крысах обоего пола линии Wistar массой 180-210 г. В каждой группе было по 10 животных. Влияние «Тонофита» на поведенческую активность в конфликтной ситуации исследовали c использованием метода конфликтной ситуации по Vogel, основанной на столк- 61 новении питьевой и оборонительной мотиваций, путем подавления болевым электрическим раздражителем питьевого рефлекса при потреблении крысами воды из чашки (Воронина, 2000). Блокаду ГАМКА-рецепторов вызывали внутрибрюшинным введением бикукуллина (Sigma, США) в дозе 1,0 мг/кг, блокаду хлорных каналов ГАМК-бензодиазепинового рецепторного комплекса - внутрибрюшинным введением пикротоксина (Sigma, США) в дозе 1,0 мг/кг. Животным опытных групп «Тонофит» вводили внутрижелудочно в дозе 5 мл/кг в течение 7 дней (1 раз в день за 40-50 минут до кормления). Крысы контрольной группы получали дистиллированную воду в аналогичном режиме и эквиобъемном количестве. Тестирование проводили на 8 сутки эксперимента. Регистрировали число наказуемых взятий воды (через 10 секунд после начала питья) за 3 минуты нахождения в камере. Полученные данные приведены в таблице 4.3.1. Таблица 4.3.1 – Влияние «Тонофита» на питьевое поведение у интактных белых крыс и в конфликтной ситуации на фоне введения бикукуллина и пикротоксина Группы животных Количество наказуемых взятий воды Интактная 3,6 ± 0,25 Опытная 1 (Тонофит) 4,3 ± 0,32 Контрольная (бикуккулин) 1,1 ± 0,24 Опытная (бикукку- 2,3 ± 0,32* лин+Тонофит) Контрольная (пикротоксин) Опытная 1,6 ± 0,09 (пикроток- 1,8 ± 0,10 син+Тонофит) Установлено, что курсовое введение «Тонофита» интактным животным устраняет чувство тревоги и страха, увеличивая число наказуемых взятий воды на 36 % по сравнению с таковым показателем у интактных животных. Показано, что внутрибрюшинное введение животным блокатора ГАМКА- 62 рецепторов бикукуллина вызывало проконфликтный, анксиогенный эффект, что выражалось в снижении числа наказуемых взятий воды в 4 раза по сравнению с показателями у интактных животных. Введение «Тонофита» на фоне блокады ГАМК – рецепторов сопровождалось увеличением числа наказуемых взятий воды в 2,1 раза по сравнению с контролем. Установлено, что введение блокатора ГАМКА-каналов бикуккулина сопровождалось снижением числа наказуемых взятий воды в среднем на 40% по сравнению с данными интактных животных. При этом, введение испытуемого фитосредства на фоне действия пикротоксина практически не оказывало влияния на количество наказуемых взятий воды. Таким образом, полученные данные свидетельствуют, что анксиолитическое действие «Тонофита» в большей степени связано с активацией тормозной ГАМК–ергической системы. 4.2. Влияние «Тонофита» на выработку «условного рефлекса пассивного избегания» Эксперименты проведены на белых крысах обоего пола линии Wistar массой 180-210 г. В каждой группе было по 10 животных. Для оценки влияния «Тонофита» на формирование и воспроизведение памятного следа использовали метод условной реакции пассивного избегания (УРПИ) (Методические рекомендации…, 2005). Животным опытной группы внутрижелудочно вводили «Тонофит» в дозе 5 мл/кг в течение 7 дней (1 раз в день за 40-50 минут до кормления). Крысы контрольной группы получали дистиллированную воду в аналогичном режиме и эквиобъемном количестве. Обучение животных проводили в экспериментальной камере, состоящей из 2 отсеков: темного и освещенного. В 1 сутки проводилось обучение, путем помещения животного в светлый отсек, при переходе в темный – крысы получали электрокожное раздражение (параметры электроболевого раздражения, наносимого через электродный пол, составляла 0,3 – 0,6 мА). Проверка сохранения УРПИ состояла в помещении животного в светлый отсек через различные 63 интервалы времени: через 1, 3 и 7 суток. Для оценки степени обучения отмечали латентное время первого захода в темный отсек камеры и время пребывания в темном отсеке за фиксированный интервал времени – 3 минуты. Полученные данные представлены в таблице 4.2.1. Таблица 4.2.1 - Влияние «Тонофита» на выработку «условной реакции пассивного избегания» у белых крыс Показатели Через 1 сутки Через 3 суток Через 7 суток 139,7±9,20 118,8±4,05 91,4±2,16 163,2±5,06* 195,1±14,12* 166,7±9,97* Латентный период, с Контрольная (n=10) Тонофит (n=10) Данные, представленные в таблице 4.2.1, свидетельствуют, что курсовое введение «Тонофита» в указанной дозе стимулирует когнитивные функции животных и способствует сохранению памятного следа в отдаленные сроки исследования. Так, на фоне его введения животным наблюдали 100% выработку условного рефлекса, а также увеличение латентного периода через 1, 3 и 7 суток после обучения соответственно на 17, 35 и 83% по сравнению с данными контрольной группы. Таким образом, полученные данные свидетельствуют, что исследуемое фитосредство оказывает выраженное ноотропное действие, стимулируя когнитивные функции животных. 4.3. Влияние «Тонофита» на снотворное действие барбитуратов Эксперименты проведены на белых крысах линии Wistar массой 180– 200 г. В качестве снотворного средства использовали тиопентал натрия в дозе 42 мг/кг при однократном внутрибрюшинном введении (Воронина, Неробкова, 2000). Животным опытной группы внутрижелудочно вводили «Тонофит» в дозе 5,0 мл/кг 1 раз в сутки в течение 7 дней до тестирования. Крысам 64 контрольной группы вводили эквиобъемное количество дистиллированной воды. Регистрировали продолжительность сна по времени засыпания животных (принятия бокового положения) и времени пробуждения (выхода из бокового положения). Полученные данные приведены в таблице 4.3.1. Таблица 4.3.1 - Влияние «Тонофита» на продолжительность наркотического сна, индуцированного введением тиопентала натрия Группы животных Продолжительность сна, час Контрольная (n=7) 2,4 0,16 Тонофит (n=7) 1,8 0,12* Как следует из данных, приведенных в таблице 4.3.1., предварительное введение испытуемого средства оказывает антагонистическое действие на снотворное действие тиопентала натрия, о чем свидетельствует достоверное уменьшение продолжительности наркотического сна на 25% по сравнению с данными животных контрольной группы. 65 ГЛАВА 5. ИССЛЕДОВАНИЕ ПРОФИЛАКТИЧЕСКОЙ И ФАРМАКОТЕРАПЕВТИЧЕСКОЙ ЭФФЕКТИВНОСТИ «ТОНОФИТА» 5.1. Профилактическая эффективность «Тонофита» при иммобилизационном стрессе Эксперименты проведены на белых крысах линии Wistar обоего пола массой 180–200 г. Иммобилизационный стресс воспроизводили общепринятым методом путем фиксации животных в положении на спине в течение 24 ч. Крысам опытной группы внутрижелудочно вводили «Тонофит» в дозе 5 мл/кг профилактически в течение 7 дней до стрессорного воздействия (1 раз в день за 30 минут до кормления). Животные контрольной группы получали эквиобъемное количество дистиллированной воды по аналогичной схеме. На 7 сутки эксперимента животных контрольной и опытных групп подвергали иммобилизационному стрессу, после чего животных декапитировали под легким эфирным наркозом и определяли выраженность «триады» Селье: массу надпочечников и иммунокомпетентных органов, а также количество повреждений в слизистой оболочке желудка с подсчетом «язвенного индекса Паулса» (Амосова и соавт., 1998). В селезенке и тимусе подсчитывали количество ядросодержащих клеток. Интенсивность процессов свободнорадикального окисления оценивали по накоплению малонового диальдегида (МДА) в сыворотке крови (Темирбулатов, Селезнев, 1987). О состоянии антиоксидантной системы судили по активности супероксиддисмутазы (СОД) (Чевари и соавт., 1985), каталазы (Королюк и соавт., 1988). Также определяли влияние иммобилизационного стресса на биохимические показатели сыворотки крови: концентрацию общего белка, билирубина, глюкозы, триацилглицеридов, аспартаттрансферазы (АсТ), аланинтрансферазы (АлТ). Исследование проведено на автоматическом биохимическом анализаторе «Sapphire 400» (Япония). Полученные данные приведены в таблицах 5.1.1.– 5.1.5. Таблица 5.1.1 - Влияние «Тонофита» на массу тимуса, селезенки и надпочечников белых крыс при иммобилизационном стрессе 66 Относительная масса, мг/100г Группы животных надпочечник тимуса селезенки Интактная (n=6) 52,15,32 658,922,05 21,01,43 Контрольная (n=7) 26,510,21 299,126,32 36,22,01 Тонофит (n=7) 38,22,32* 423,025,32* 28,51,74* ов Как следует из данных, приведенных в таблице 5.1.1, у животных контрольной группы, подвергавшихся иммобилизационному стрессу, отмечается развитие классической «триады Селье»: гипертрофии надпочечников и инволюции иммунокомпетентных органов. Установлено, что курсовое превентивное введение «Тонофита» оказывало стресспротективное влияние, о чем свидетельствует уменьшение массы надпочечников на 22%, а также увеличение относительной массы тимуса и селезенки в среднем на 40% по сравнению с аналогичными данными у крыс контрольной группы. Наряду с этим, под влиянием стресса у крыс контрольной группы наблюдалось существенное уменьшение числа ядросодержащих клеток (ЯСК) тимуса и селезенки (табл. 5.1.2.), что свидетельствует о развитии иммуносупрессивного состояния. Установлено, что введение «Тонофита» на фоне иммунодепрессии, вызванной стрессом, способствует увеличению клеточности тимуса и селезенки соответственно на 21 и 50% по сравнению с аналогичными показателями у крыс контрольной группы. Таблица 5.1.2 - Влияние «Тонофита» на клеточность иммунных органов белых крыс при иммобилизационном стрессе Группы животных Тимус Селезенка 67 ЯСК, ЯСК, х106 /орган х106 /орган Интактная (n=6) 32,11,42 38,12,81 Контрольная (n=7) 10,51,01 10,01,05 Тонофит (n=7) 23,21,42* 26,03,55* Установлено также, что курсовое введение «Тонофита» на фоне иммобилизационного стресса препятствовало развитию глубоких повреждений слизистой оболочки желудка белых крыс (табл. 5.1.3). Tаблица 5.1.3 - Влияние «Тонофита» на выраженность повреждений слизистой оболочки желудка у белых крыс на фоне иммобилизационного стресса Группы животных Показатели Контрольная Опытная 1 (стресс+Н2О) (стресс+Тонофит) (n = 6) (n = 6) 100 75 3,25 1,9 ИП для кровоизлияний 3,25 1,4 Эрозии, % 100 30 1,25 0,8 1,25 0,24 66 0 0,6 0 0,4 0 Кровоизлияния, % Среднее число кровоизлияний на 1 крысу Среднее число эрозий на 1 крысу ИП для эрозий Язвы полосовидные, % Среднее число язв на 1 крысу ИП для язв 68 Так, у животных опытной группы количество мелкоточечных кровоизлияний и эрозий встречалось соответственно в 75 и 30 % случаев при 100% поражении в контроле. Соответственно, индекс Паулса для кровоизлияний и эрозий у животных, принимавших испытуемое средство, был меньше, чем таковой у крыс контрольной группы и составил 1,4 и 0,4 против 3,25 и 1,25 в контроле. При этом, у крыс, получавших «Тонофит», не наблюдалось образования полосовидных язв, тогда как у животных контрольной группы появление такого глубокого поражения слизистой как полосовидные язвы встречалось 66% случаев. Кроме этого визуально у одной крыс контрольной группы наблюдался резко выраженный отек и гиперемия, тогда как у крыс, получавших испытуемое средство отек и сглаженность рельефа слизистой желудка была умеренной. Таблица 5.1.4 - Влияние «Тонофита» на интенсивность процессов свободнорадикального окисления и состояние антиоксидантной системы белых крыс на фоне иммобилизационного стресса Группы животных Интактная Контрольная Тонофит (n=6) (n=7) (n=7) МДА, нмоль/мл 7,3±0,48 14,8±2,38 7,2±0,33* Каталаза, мкат/л 16,8±1,02 7,5±0,04 14,9±1,20* СОД, мкмоль/мл 21,1±0,95 4,6±0,52 17,0±1,35* Показатели Данные, приведенные в таблице 5.1.4. свидетельствуют, что 24-х часовая иммобилизация сопровождается индукцией процессов свободнорадикального окисления, на что указывает повышение концентрации МДА и значительное снижение активности ферментов антиоксидантной защиты. Профилактическое введение испытуемого средства оказывало выраженное антиоксидантное действие, о чем свидетельствует снижение концентрации МДА на 52% по сравнению с контролем, а также повышение активности каталазы 69 – в 2 раза и СОД – в 4 раза по сравнению с аналогичными показателями животных контрольной группы. Таблица 5.1.5 - Влияние «Тонофита» на биохимические показатели сыворотки крови при иммобилизационном стрессе Показатели Интактная Контрольная Тонофит (n=6) (n=7) (n=7) Общий белок, г/л 72,4±0,33 56,3±3,37 65,5±1,06* Глюкоза, ммоль/л 6,5±0,92 4,1±0,39 6,3±0,51* 1,3±0,09 1,1±0,11 1,2±0,41 7,2±0,02 9,3±0,75 8,0±0,71 2,4±0,04 2,9±0,09 2,3±0,13* АсТ, Ед/л 17,0±1,07 59,2±3,03 31,0±1,82* АлТ, Ед/л 33,7±1,87 74,7±4,42 40,0±2,63* Триацилглицериды, ммоль/л Билирубин общий, мкмоль/л Билирубин мкмоль/л прямой, Как следует из данных, представленных в таблице 5.1.5., иммобилизационный стресс вызывает существенные нарушения обменных процессов и оказывает повреждающее воздействие на функциональное состояние внутренних органов, в частности, печени. Установлено, что курсовое профилактическое введение испытуемого средства способствует их нормализации, о чем свидетельствует достоверное повышение концентрации глюкозы и общего в сыворотке крови практически до уровня физиологической нормы. Наряду с этим, «Тонофит» оказывает гепатопротекторное действие, способствуя достоверному снижению концентрации прямого билирубина на 20%, а также снижение активности трансаминаз АсТ и АлТ в среднем на 48% по сравнению с аналогичными показателями у животных контрольной группы. 70 Таким образом, полученные данные свидетельствуют, что профилактическое введение «Тонофит» в дозе 5 мл/кг на фоне 24-часового иммобилизационного стресса оказывает выраженное адаптогенное действие, уменьшая выраженность стресс-индуцированных изменений во внутренних органах и обменных процессов у белых крыс. Кроме того, испытуемое средство ингибирует процессы свободнорадикального окисления биомакромолекул и предупреждает истощение эндогенных антиоксидантных систем организма. 5.2. Профилактическая эффективность «Тонофита» при интенсивных физических нагрузках Эксперименты проведены на белых крысах линии Wistar обоего пола массой 180 – 200 г. Общую физическую выносливость определяли общепринятым методом по длительности плавания животных в бассейне c грузом, составляющим 7% от массы тела. Животным опытной группы внутрижелудочно вводили раствор испытуемого средства в дозе 5 мл/кг в течение 7 дней (1 раз в сутки за 30 минут до кормления). Животные контрольной группы получали эквиобъемное количество дистиллированной воды. Через 7 суток от начала введения средства определяли общую физическую выносливость путем плавания животных до утомления, критерием которого служило первое погружение животного под воду (Методические рекомендации…, 1999), после чего под легким эфирным наркозом крыс декапитировали и определяли: в гомогенатах скелетной и сердечной мышц – содержание АТФ (Алейникова, Рубцова, 1988), величину глюкозы, общего белка, триглицеридов (ТГ) в сыворотке крови. Исследование проведено на анализаторе «SAPPHIRE 400» (Япония). Содержание гликогена в печени определяли по методу S. Seifter (1950). Также оценивали интенсивность процессов свободнорадикального окисления (СРО) по содержанию малонового диальдегида (МДА) в сыворотке крови (Темирбулатов, Селезнев, 1981). О состоянии антиоксидантной системы судили по активности супероксиддисмутазы (СОД) (Чевари и соавт., 1985), каталазы (Королюк и соавт., 1988). Полученные данные представлены в таблицах 5.2.1. и 5.2.2. 71 Таблица 5.2.1 - Влияние «Тонофита» на общую физическую выносливость белых крыс и биохимические показатели на фоне интенсивной физической нагрузки Группы животных Показатели Интактная Контрольная Тонофит (n=6) (n=8) (n=8) Продолжительность плавания, мин - 6,81,92 11,51,04* Глюкоза, ммоль/л 6,7±0,78 4,0±0,29 5,9±0,42* Гликоген в печени, мг% 2017,080,63 1462,0129,9 1825,056,60* Триглицериды, ммоль/л 2,3±0,61 1,0±0,35 1,8±0,11* 2,80,18 1,50,10 2,30,14* АТФ в миокарде, мкм/г 1,50,05 0,90,04 1,40,09* Общий белок, г/л 73,0±1,74 67,3±2,83 71,5±5,28 АТФ в скелетной мышце, мкм/г Как следует из данных, приведенных в таблице 5.1.1, превентивное многократное введение «Тонофита» оказывало выраженное актопротекторное действие, о чем свидетельствует повышение общей физической работоспособности животных опытной группы: продолжительность плавания увеличилась на 58% по сравнению с данными животных контрольной группы. Установлено, что повышение физической выносливости под влиянием испытуемого фитосредства обусловлено достоверным повышение содержания энергетических запасов организма. Так, концентрация глюкозы и триглицеридов в сыворотке крови животных опытной группы была выше, чем в контроле на 47 и 80% соответственно. Наряду с этим, на фоне введения испытуемого фитосредства отмечалось повышение углеводных запасов в печени: концентрация гликогена повышалась на 25% по сравнению с данными животных контрольной группы. В связи с истощением углеводных запасов у 72 крыс контрольной группы интенсивная физическая нагрузка сопровождалась снижением концентрации АТФ в скелетной и сердечной мышцах. Анализ показателей энергетического обмена у крыс опытной группы свидетельствует, что повышение физической ваыносливости под влиянием «Тонофита» обусловлено активацией ресинтеза АТФ: содержание ее в скелетной и сердечной мышцах мышцах было в среднем на 55% выше, чем у крыс контрольной группы. Таблица 5.1.2 - Влияние «Тонофита» на интенсивность процессов свободнорадикального окисления и состояние антиокислительной системы организма на фоне интенсивной физической нагрузки Группы животных Показатели МДА в сыворотке крови, нмоль/мл Каталаза в сыворотке крови, мкат/л СОД, мкмоль/мл Интактная Контрольная Тонофит (n=6) (n=8) (n=8) 11,80,05 17,00,02 13,10,09* 7,740,05 2,90,12 5,70,04* 22,10,95 5,20,43 17,01,05* Как видно из данных, приведенных в таблице 5.1.2. у животных на фоне максимальной физической нагрузки отмечается существенная активация процессов свободнорадикального окисления биомакромолекул и угнетении активности эндогенной антиокислительной системы организма, о чем свидетельствует повышение концентрации конечного продукта этого процесса – малонового диальдегида (МДА), а также активности каталазы и супероксиддисмутазы (СОД) в сыворотке крови животных контрольной группы. Установлено, что на фоне превентивного введения «Тонофита» в указанной дозе отмечаются менее выраженные изменения в показателях свободнорадикального окисления и параметров антиокислительной системы. Так, концентра- 73 ция МДА в сыворотке крови животных опытной группы была на 25% меньше, чем у крыс контрольной группы. Наряду с этим, на фоне введения испытуемого средства в сыворотке крови животных опытной группы отмечалось существенное повышение активности ферментов антиоксидантной системы: активность каталазы и СОД была соответственно в 2 и 3 выше аналогичных данных у крыс контрольной группы. Таким образом, полученные данные свидетельствуют, что профилактическое введение «Тонофита» в дозе 5 мл/кг на фоне интенсивных физических нагрузок оказывает выраженное актопротекторное действие, повышая общую физическую выносливость животных. Установлено, что в стимуляция физической работоспособности связана с активацией энергетического обмена, усилением ресинтеза АТФ, очевидно, обусловленных ингибированием процессов свободнорадикального окисления мембран митохондрий, индукция которых сопровождает истощающую физическую нагрузку. Наряду с этим, под влиянием испытуемого фитосредства отмечается существенное увеличение энергетических запасов организма и, тем самым, концентрации основных субстратов окисления, необходимых для выполнения физической работы. 5.3. Фармакотерапевтическая эффективность «Тонофита» при токсическом повреждении печени Опыты проведены на белых крысах линии Wistar обоего пола массой 180 – 200 г. Острое токсическое повреждение печени воспроизводили путем внутрибрюшинного введения 50% масляного раствора тетрахлорметана (СС14) в объеме 0,4 мл/100 г массы животных 1 раз в день в течение 3 дней (Венгеровский и соавт., 2000). Животным опытной группы внутрижелудочно вводили раствор «Тонофита» в дозе 5,0 мл/кг 1 раз в сутки в течение 21 дня после интоксикации тетрахлорметаном. Крысы контрольной группы получали эквиобъемное количество дистиллированной воды по аналогичной схеме. На 7, 14 и 21 сутки с начала введения тетрахлометана проводили исследование функцио- 74 нального состояния печени животных. Для этого определяли активность аланинаминотрансферазы (АлТ), аспартатаминотрансферазы (АсТ), щелочной фосфатазы (ЩФ), уровни общего и прямого билирубина в сыворотке крови. Исследование проведено на анализаторе «SAPPHIRE 400» (Япония). Содержание гликогена в печени определяли по методу S. Seifter (1950). Также оценивали интенсивность процессов свободнорадикального окисления (СРО) по содержанию малонового диальдегида (МДА) в сыворотке крови (Темирбулатов, Селезнев, 1981). О состоянии антиоксидантной системы судили по активности каталазы (Королюк и соавт., 1988). Полученные данные приведены в таблицах 5.3.1 - 5.3.4. Таблица 5.3.1 - Влияние «Тонофита» на функциональное состояние печени белых крыс при интоксикации тетрахлорметаном Группы животных Показатели Интактная Контрольная Тонофит (n=6) (n=8) (n=8) 2 3 4 АлТ, ед/л 33,7±1,87 101,0±3,46 96,2±5,33 АсТ, ед/л 17,0±1,07 85,8±5,89 67,6±9,25 ЩФ, ед/л 75,8±3,41 265,2±17,30 237,2±19,34 4,3±0,02 8,2±1,60 7,8±0,63 1,4±0,04 3,1±0,80 2,7±0,18 1350,0±98,65 648,8±72,30 860,5±74,52* АлТ, ед/л 33,7±1,87 132,3±6,56 95,5±7,03* АсТ, ед/л 17,0±1,07 131,7±4,32 99,2±6,42* 1 7 сутки Билирубин общ., мкмоль/л Билирубин прямой, мкмоль/л Гликоген, мг% 14 сутки Продолжение таблицы 5.3.1. 75 1 2 3 4 ЩФ, ед/л 75,8±3,41 272,5±21,70 185,2±15,3* 4,3±0,02 9,4±0,69 6,5±0,30* 1,4±0,04 3,9±0,41 2,8±0,12* 1350,0±98,65 537,5±50,22 780,5±63,40* АлТ, ед/л 33,7±1,87 73,1±7,30 41,40±1,27* АсТ, ед/л 17,0±1,07 58,2±5,82 28,4±2,31* ЩФ, ед/л 75,8±3,41 128,0±9,80 83,2±9,25* 4,3±0,02 5,9±0,18 4,7±0,10* 1,4±0,04 2,9±0,16 1,8±0,23* 1350,0±98,65 855,3±65,32 1280,5±103,5* Билирубин общ., мкмоль/л Билирубин прямой, мкмоль/л Гликоген, мг% 21 сутки Билирубин общ., мкмоль/л Билирубин прямой, мкмоль/л Гликоген, мг% Как следует из данных, приведенных в таблице 5.3.1, на фоне интоксикации тетрахлорметаном развивается симпотоматика, характерная для острого токсического повреждения печени: повышение активности трансаминаз (АлТ и АсТ), щелочной фосфатазы (ЩФ), а также повышение концентрации билирубина в сыворотке крови. Установлено, что курсовое введение «Тонофита» на фоне токсического повреждения печени оказывает выраженное гепатопротекторное действие, нормализуя функциональное состояние печени белых крыс на более ранних сроках патологического процесса. Как видно из приведенной таблицы, фармакотерапевтическое влияние «Тонофита» начинает проявляться на 14 сутки заболевания, тогда как на 7 сутки изменения не носят статистически значимого характера. Так, на 14 сутки исследования под влиянием «Тонофита» отмечается снижение активности мембраносвязанных 76 ферментов АлТ и АсТ в среднем на 25%, а щелочной фосфатазы на 32% по сравнению с данными у крыс контрольной группы. При исследовании на 21 сутки эксперимента активность аминотрансфераз у крыс опытной группы, получавших испытуемое средство, была почти в 1,5 раз ниже, чем у животных контрольной группы и практически приблизилась к значениям физиологической нормы. Такая же тенденция отмечалась и по отношению к ЩФ, активность которой была на 35% меньше, чем в контроле. На фоне нормализации основных маркеров цитолитического и холестатического синдрома у крыс опытной группы отмечалась снижение концентрации билирубина в сыворотке крови до показателей интактных крыс. Наряду этим, курсовое введение «Тонофита» при интоксикации тетрахлометаном сопровождалось повышением синтетической функции печени. Так, концентрация гликогена в печени крыс опытной группы во все сроки исследования была достоверно выше таковой у крыс контрольной группы, а на 21 сутки достигала значений физиологической нормы. Таблица 5.2.3 - Влияние «Тонофита» на интенсивность процессов СРО и состояние антиокислительной системы организма белых крыс при остром повреждении печени тетрахлорметаном Показатели МДА в крови, нмоль/мл Каталаза в крови, мкат/л Сроки, Интактная Контрольная Тонофит сутки (n=6) (n=8) (n=8) 7 10,80,15 17,90,92 16,61,35 14 10,80,15 19,90,11 13,81,31* 21 10,80,15 18,40,93 10,40,11* 7 6,90,06 3,60,01 4,30,02* 14 6,90,06 3,10,02 5,80,22* 21 6,90,06 4,10,03 6,70,54* Как следует из данных, приведенных в таблице 5.2.3, повреждение печени тетрахлорметаном сопровождается индукцией процессов свободнора- 77 дикального окисления (СРО) и снижением активности эндогенной антиоксидантной системы организма. Установлено, что курсовое введение «Тонофита» оказывало выраженное антиоксидантное действие, о чем свидетельствует снижение концентрации МДА и повышение активности одного из ферментов антиоксидантной системы – каталазы крови во все сроки исследования. Так, на 7, 14 и 21 сутки опыта концентрация МДА в крови крыс опытной группы была соответственно на 10, 30 и 44% меньше по сравнению с аналогичными данными крыс контрольной группы. Наряду с этим у крыс опытной группы отмечалось повышение активности каталазы на 7, 14 и 21 сутки соответственно на 19,87 и 63% по сравнению с аналогичными данными крыс контрольной группы. Таким образом, полученные данные свидетельствуют, что «Тонофит» в экспериментально-терапевтической дозе при курсовом введении на фоне токсического повреждения печени оказывает выраженное гепатопротекторное действие, нормализуя функциональное состояние печени белых крыс на более ранних сроках патологического процесса. В частности, на фоне введения испытуемого средства отмечалось уменьшение признаков развития цитолитического и холестатического синдромов, а также нормализация синтетических и обменных процессов в печени животных. Установлено, что гепатопротекторное действие испытуемого средства на фоне острого токсического повреждения печени обусловлено его способностью ингибировать процессы СРО и повышать мощность эндогенной антиокислительной системы организма, благодаря чему обеспечивается стабилизация мембранных структур гепатоцитов и нормализуется функционирование мембраносвязанных ферментных систем печени. 5.4. Фармакотерапевтическая эффективность «Тонофита» при иммуносупрессивном состоянии 78 Эксперименты проведены на мышах обоего пола линий СВА и F1 (CВА х С57В1/6) массой 18–20 г. Иммуносупрессивное состояние у животных воспроизводили путем пероральным введением цитостатика азатиоприна в дозе 50 мг/кг 1 раз в сутки в течение 5 дней (Лазарева,1985). Животным опытной группы внутрижелудочно вводили водный раствор «Тонофита» в дозе 5,0 мл/кг в объеме 0,1 мл/100 г в течение 14 дней 1 раз в сутки. Мыши контрольной группы получали дистиллированную воду по аналогичной схеме. Через 1 сутки после последнего введения фитосредства животных декапитировали под легким эфирным наркозом и определяли относительную массу иммунных органов (по отношению к массе тела). Действие испытуемого средства на состояние клеточного звена иммунного ответа оценивали в реакции гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) (Петров и др. 1987), гуморального звена – по количеству антителообразующих клеток (АОК), определяемых методом локального гемолиза (Cunningham, 1965), макрофагального звена – в реакции фагоцитоза перитонеальных макрофагов мышей в отношении частиц коллоидной туши (Руководство…, 2005). Полученные данные приведены в таблице 5.4.1 – 5.4.3. Таблица 5.4.1 - Влияние «Тонофита» на массу селезенки и количество антителообразующих клеток селезенки мышей при азатиоприновой иммуносупрессии Относительная Группы животных масса селезенки, % Количество АОК Абсолютное на на селезенку спленоцитов Интактная (n=10) 0,360,02 875244114 606,034,42 Контрольная (n=10) 0,300,02 530133691 373,015,65 Тонофит (n=10) 0,390,02 973526547* 723,054,13* 106 Как следует из данных, представленных в таблице 5.4.1, введение азатиоприна сопровождалось развитием иммунодефицитного состояния, харак- 79 теризующегося инволюцией селезенки и угнетением антителообразующей функции. Установлено, что курсовое введение испытуемого фитосредства при азатиоприновой иммуносупрессии оказывало иммуностимулирующее действие, выражающееся в увеличении массы селензенки на 30% по сравнению с данными мышей контрольной группы. Наряду с этим, «Тонофит» способствовал увеличению количества АОК как в абсолютных значениях, так и при расчете на 106 спленоцитовна 83 и 94% соответственно по сравнению с контрольной группой. Таблица 5.4.2 - Влияние «Тонофита» на выраженность реакции гиперчувствительности замедленного типа при азатиоприновой иммуносупрессии у мышей. Группы животных Относительная Индекс реакции масса тимуса, % ГЗТ, % Коэффициент стимуляции ГЗТ, Интактная (n=10) 0,160,01 32,502,58 1,0 Контрольная (n=10) 0,140,02 16,220,90 0,850,03 Тонофит (n=10) 0,170,01 37,693,96* 1,060,07* Данные, представленные в таблице 5.4.2, свидетельствуют, что курсовое введение «Тонофита» при азатиоприновой иммуносупрессии препятствовало угнетению реакции гиперчувствительности замедленного типа, а также инволюции тимуса. Так, у животных опытной группы масса тимуса была на 20% выше, чем в контроле и соответствовала таковой у интакных мышей. Наряду с этим, на фоне введения испытуемого фитосредства отмечалось повышение индекса реакции ГЗТ более, чем в 2 раза по сравнению с данными мышей контрольной группы. Таблица 5.4.3 - Влияние «Тонофита» на показатели фагоцитоза макрофагов при азатиоприновой иммуносупрессии у мышей 80 Группы животных Фагоцитарный индекс (Е 620 нм) Интактная (n=10) 0,029 ± 0,0020 Контрольная (n=10) 0,013 ± 0,0009 Тонофит (n=10) 0,031 ± 0,0025* Как следует из данных, приведенных в таблице 5.4.3, иммуносупрессивное состояние характеризовалось также резким снижением фагоцитарного звена иммунного ответа. Курсовое введение «Тонофита» на фоне иммунодефицитного состояния оказывало выраженное иммуностимулирующее действие, о чем свидетельствует повышение фагоцитарной активности макрофагов более, чем в 2,5 раза по сравнению с таковой у мышей контрольной группы. Таким образом, полученные данные свидетельствуют, что курсовое введение «Тонофита» в экспериментально-терапевтической дозе на фоне азатиоприновой иммуносупрессии оказывает выраженное иммуномодулирующее, протективное действие, предотвращая развитие иммунодефицитного состояния. При этом установлено, что испытуемое средство способствует активации всех звеньев иммунного ответа организма: клеточного, гуморального и макрофагального. 81 ГЛАВА 6. ИЗУЧЕНИЕ ОСОБЕННОСТЕЙ МЕХАНИЗМОВ АДАПТОГЕННОГО ДЕЙСТВИЯ «ТОНОФИТА» Учитывая широкий спектр адаптогенного действия «Тонофита» были исследованы механизмы его неспецифического действия, для чего определяли его влияние на состояние клеточных мембран, а также процессы свободнорадикального окисления. 6.1. Изучение мембраностабилизирующей активности «Тонофита» 6.1.1. Влияние на устойчивость мембран эритроцитов Эксперименты проведены с использованием 1% суспензии отмытых эритроцитов донорской крови. Мембраностабилизирующую активность «Тонофита» оценивали с использованием метода перекисного и осмотического гемолиза эритроцитов (Ковалев и соавт., 1986). Перекисный гемолиз эритроцитов вызывали реактивом Фентона, компоненты которого были использованы в минимальных концентрациях, вызывающих 100% лизис эритроцитов: Fe2SO4* 7H2O – 0,01 мг/мл (в пересчете на 100% раствор перекиси водорода). Для получения осмотического гемолиза к суспензии эритроцитов добавляли равный объем дистиллированной воды. В инкубационную среду (общим объемом 10 мл) добавляли испытуемое средство в объемах: 1,0; 0,5 и 0,25 мл. Степень гемолиза измеряли через 24 часа по поглощению при 420 нм. Действие испытуемого средства на гемолиз оценивали в процентах по отношению к поглощению в контроле (без добавления испытуемого средства). Полученные данные приведены в таблице 6.1.1. Таблица 6.1.1 - Влияние «Тонофита» на гемолиз эритроцитов Условия опыта Объем средст- Гемолиз, % ва в пробе, мл осмотический перекисный Контроль - 0,802 100 0,405 100 Тонофит 1,0 0,048 5,9 0,046 11,3 0,5 0,634 79,0 0,069 17,0 0,25 0,751 93,6 0,120 29,6 82 Как следует из данных, приведенных в таблицах 6.1.1, внесение «Тонофита» в суспензию эритроцитов оказывает выраженное мембраностабилизирующее действие, уменьшая степень осмотического и перекисного гемолиза эритроцитов. При этом обнаружен дозозависимый эффект. При осмотическом гемолизе эффективность средства увеличивается с увеличением его объема в инкубационной среде: при добавлении 1 мл испытуемого средства степень осмотического гемолиза снижается на 94% по сравнению с показателями контрольной пробы. Аналогичная зависимость обнаружена и при перекисном гемолизе: эффективность средства наиболее выражена при использовании его в объеме 1,0 мл, с уменьшением его объема в инкубационной пробе мембраностабилизирующая активность снижается. Можно полагать, что механизм мембраностабилизирующего действия «Тонофита» при перекисном гемолизе связан с ингибированием процессов свободнорадикального окисления, поскольку свободные радикалы, образующиеся при распаде реактива Фентона индуцируют перекисное окисление липидов в клеточных мембранах и, как следствие этого, приводят к гемолизу эритроцитов. Механизм мембраностабилизирующее действия испытуемого средства при осмотическом гемолизе, очевидно, обусловлен высоким содержанием в его составе комплекса полисахаридов и витаминов, обладающих высокой осмотической активностью. 6.1.2. Влияние на дегрануляцию тканевых базофилов Эксперименты проведены на крысах линии Wistar обоего пола массой 170–190 г. Острое асептическое воспаление воспроизводили внутрибрюшинным введением 1,0 мл 0,2 % раствора нитрата серебра (Александров и соавт., 1986). Крысам опытной группы «Тонофит» вводили внутрижелудочно в объеме 10,0 мл/кг за 30 минут и через 1 час после инъекции серебра нитрата. Животным контрольной группы вводили соответствующий объем дистиллированной воды по аналогичной схеме. Через 3 часа после введения серебра 83 нитрата животных декапитировали под легким эфирным наркозом. Брыжейку фиксировали смесью Карнуа и окрашивали 0,2% раствором толуидинового синего. Критериями развития и выраженности острого асептического воспаления являлись объем экссудата в брюшной полости и процент дегранулированных тканевых макрофагов в брыжейке. Полученные данные представлены в таблице 6.1.2.1. Таблица 6.1.2.1 - Влияние «Тонофита» на экссудацию и дегрануляцию тканевых макрофагов при интоксикации остром асептическом воспалении у белых крыс остром асептическом процессе Группы животных Объем Дегрануляция внутрибрюшинной макрофагов, % тканевых жидкости, мл Интактная - 3,0 0,25 Контрольная (воспаление) 0,54 0,041 93,2 0,57 Опытная 26,8 0,15* (воспале- 0,26 0,012* ние+Тонофит) Установлено, что развитие интоксикация нитратом серебра сопровождается развитием острого воспалительного процесса, о чем свидетельствует выход экссудата в брюшную полость, а также тотальная (93,2%) дегрануляция тканевых базофилов в брыжейке крыс контрольной группы. Курсовое введение животным «Тонофита» в объеме 5,0 мл/кг на фоне острого перитонита оказывало выраженное противовоспалительное действие: количество экссудата в брюшной полости животных опытной группы было в два раза меньше, чем в контроле. Наряду с этим, в брыжейке животных этой группы существенно уменьшалась дегрануляция: количество дегранулированных тканевых базофилов было на 70% меньше, чем у крыс контрольной группы. Полученные данные свидетельствуют, что испытуемое фитосредство способствует стабилизации мембран тканевых базофилов. 84 6.2. Изучение антиоксидантной активности «Тонофита» 6.2.1. Антирадикальная активность по отношению к супероксидным радикалам Связывание супероксидных радикалов (ССР) определяли по методу Chen с соавт. (2001), в котором продукция О2▪- осуществлялась в неэнзиматической системе феназин метосульфат – НАДФ с последующей спектрофотометрической регистрацией количества окисленного тетразолия нитросинего. Испытуемое средство перед экспериментами высушивали до постоянной массы и использовали полученный сухой остаток. В инкубационную среду средство добавляли в концентрациях 0,3; 0,14; 0,21; 0,28; 0,56; 2,78; 5,55 мг/мл. В качестве препаратов сравнения использовали аскорбиновую кислоту (АК) и танин. Полученные данные приведены в таблице 6.2.1.1. Таблица 6.2.1.1 - Влияние «Тонофита» на уровень связывания супероксидных анион-радикалов Объект Концентрация, мг/мл 0,03 0,14 0,21 0,28 0,56 2,78 5,55 Тонофит 0.00 2.58 23.44 47.60 62.00 83.50 94.20 Танин 31.12 62.00 70.50 81.20 90.40 97.40 100 АК 40.34 52.12 57.40 65.60 76.30 94.20 100 Как следует из приведенной таблицы, уровень связывания супероксидных радикалов увеличивается при повышении концентрации «Тонофита» в инкубационной среде и достигает максимальных значений при использовании концентрации средства, составляющей 5,55 мг/мл. При этом в указанной концентрации антирадикальная активность испытуемого средства была аналогичной таковой у препаратов сравнения аскорбиновой кислоты и танина. 85 6.2.2. Антирадикальная активность по отношению к NO радикалам Связывание NO (СNO) определяли по методу Govindarajan (2003), заключающийся в связывании веществом NO нитропруссида натрия с последующей спектрофотометрической регистрацией остаточного содержания NO реактивом Грисса. Испытуемое средство в инкубационную среду добавляли в концентрациях 0,25; 1,25; 2,50; 5,0; 10,0 мг/мл. Полученные данные подвергали логарифмированию по концентрационной шкале с последующим регрессионным анализом и определением величины 50% связывания NO (IC50). Таблица 6.2.2.1 - Влияние «Тонофита» на уровень связывания NO - радикалов Объект Концентрация, мг/мл 0,25 1,25 2,50 5,00 10,00 Тонофит 24.83 33.33 46.50 65.52 77.34 АК 31.60 49.50 73.31 85.77 91.46 Танин 22.42 33.99 45.37 56.94 67.79 Как следует из данных, приведенных в таблице 6.2.2.1., «Тонофит» оказывает антирадикальное действие по отношению к NO-радикалам, при этом с увеличением концентрации средства его способность связывать указанные радикалы увеличивается. Показано, что его антирадикальная активность (IC50 = 2,96 мг/мл) была аналогичной действию таннина (IC50 = 3,50 мг/мл) и несколько уступала таковой у аскорбиновой кислоты (IC50 = 1,28 мг/мл). 6.2.3.. Влияние «Тонофита» на скорость накопления ТБК-активных продуктов Эксперименты проведены с использованием суспензии липосом, полученной из куриного желтка (Клебанов и соавт., 1988). «Тонофит» в инкубационную систему добавляли в концентрациях 0,25; 1,25; 2,50; 5,0; 10,0 мг/мл. Содержание продуктов свободнорадикального окисления в пробах определя- 86 ли путем определения концентрации ТБК-активных продуктов по методике Г.И. Клебанова и соавт. (1988). Интегральными показателями выраженности антиокислительного действия средства являлись: концентрация половинного ингибирования, вызывающая уменьшение содержания продуктов ПОЛ в реакционной системе в 2 раза (С50) и численные значения параметров их антиокислительной активности (АОА). Полученные данные приведены в таблице 6.2.3.1. Таблица 6.2.3.1 - Влияние «Тонофита» на скорость накопления ТБК-активных продуктов Условия опыта Концентрация, Содержание ТБК-активных мг/мл продуктов, С50 Контроль - 100,0 Тонофит 0,25 44,9 1,25 68,3 2,50 71,4 5,00 85,2 10,00 66,4 Данные, приведенные в указанной таблице, свидетельствуют, что «Тонофит» оказывает ингибирующее действие на скорость накопления ТБКактивных продуктов в модельной системе. Установлено, что под его влиянием концентрации ТБК-активных продуктов в системе уменьшаются с увеличением концентрации средства. Индекс антиокислительной активности испытуемого средства, рассчитанный по ТБК-тесту, составил 0,43 (г/л) -1 . 6.2.4. Влияние «Тонофита» на инактивацию Н2О2 Связывание H2O2 (СПВ) определяли по методу Chen с соавт. (2001), основанному на способности H2O2 вызывать окислительную деструкцию красителя фенолового красного. Испытуемое средство в инкубационную среду добавляли в концентрациях 0,25; 1,25; 2,50; 5,0; 10,0 мг/мл. В качестве препаратов сравнения использовали ионол и танин. Полученные данные под- 87 вергали логарифмированию по концентрационной шкале с последующим регрессионным анализом и определением величины 50% связывания H2O2 (IC50, мг/мл). Полученные данные представлены в таблице 6.2.4.1. Таблица 6.2.4.1 - Влияние «Тонофита» на инактивацию H2O2 Условия опы- Концентрация, мг/мл та 0,25 1,25 2,50 5,0 10,0 Тонофит 6.77 15.94 35.86 63.35 84.86 Ионол 8.97 21.13 28.87 87.13 100 Танин 0.00 10.38 20.07 41.21 97.89 Как следует из данных, приведенных в таблице 6.2.4.1, «Тонофит» оказывает выраженное инактивирующее действие на H2O2. При этом выявлен дозозависимый эффект: с увеличением концентрации испытуемого вещества в системе его активность повышается. Уровень половинного ингибирования «Тонофита» (IC50) составил 0,57 мг/мл, что соответствует таковому у препаратов сравнения ионола и таннина. 6.2.5. Определение хелатирующей активности «Тонофита» Хелатирующую активность определяли по отношению к ионам железа с использованием метода, основанного на способности о-фенантролина связывать ионы железа (Методы биохимического исследования …, 1987). Модельная система состояла из 0,2 мл 25 мМ раствора о-фенантролина; 0,2 мл 12,3 мМ раствора FeCl 3 ; 2,6 мл 96% этанола. «Тонофит» в систему вносили в концентрациях 0,25; 1,25; 2,50; 5,0; 10,0 мг/мл. Через 10 минут спектрофотометрически оценивали концентрацию железа при длине волны 505 нм. Железоcвязывающую активность испытуемого средства выражали в % по отношению к контролю, значения которого принимали за 100%. Полученные данные приведены в таблице 6.2.5.1. 88 Таблица 6.2.5.1 – Влияние «Тонофита» на уровень связывания Fe 3+ Условия опыта Концентрация, Показатели мг/мл Концентрация Железосвязываю Fe 3+ , % щая активность, % Контроль - 100 - Тонофит 0,25 2,7 97,3 1,25 3,1 96,9 2,5 10,1 89,9 5,0 44,0 56,0 10,0 77,7 22,2 В результате проведенных исследований установлено, что «Тонофит» обладает выраженной хелатирующей активностью, заключающейся в способности взаимодействовать с ионами трехвалентного железа (табл. 6.2.5.1). При этом обнаружен четкий дозазависимый эффект: повышение концентрации испытуемого вещества в системе сопровождается повышением хелатирующей активности. Так, при добавлении в реакционную среду «Тонофита» в концентрации 10,0 мг/мл отмечается практически 77,7% связывание ионов железа. 89 ГЛАВА 6. ОБСУЖДЕНИЕ Экспериментальные исследования комплексного растительного средства «Тонофит» свидетельствуют, что средство обладает широким спектром адаптогенной активности, повышая неспецифическую резистентность организма лабораторных животных к действию экстремальных факторов различной природы. Так, введение животным испытуемого средства в экспериментально-терапевтической дозе 5,0 мг/кг повышает устойчивость организма к действию интенсивных физических нагрузок (общих и силовых), иммобилизационному стрессу, гипоксии (гипобарической, гемической, гиперкапнической, тканевой), интоксикации тетрахлорметаном, флогогенным агентам, а также при иммуносупрессивном состоянии. Широкий спектр адаптогенной активности испытуемого средства свидетельствует, что под его влиянием формируется состояние неспецифически повышенной сопротивляемости, что свзано с оптимизацией баланса центральных стресс-реализующих и стресслимитирующих систем. В соответствии с современными представлениями о стресс-реакции причина любого расстройства стрессорного генеза носит сложный многоуровневый характер и связана с вовлечением в патологический процесс центральных и периферических отделов адаптивной реакции организма, обеспечивающих переход на новый уровень гомеостатической регуляции (Александровский, 1999, 2005; Маслова, 2005). На основании полученных данных можно полагать, что адаптационная перестройка, происходящая под влиянием «Тонофита», связана с оптимизацией баланса стресс-реализующих и стресс-лимитирующих систем организма. Известно, что ключевую роль в центральных механизмах стресс–реакции играют моноаминергические (серотонин–, катехоламин–, пептидергическая, адренергическая, норадренергическая) системы головного мозга, контролируемые стресс–лимитирующей центральной ГАМК–ергической системой, от мощности которой зависит устойчивость к стрессорным воздействиям (Семьянов А.В., 2002; Калуев А.В., 2004; Sabban E., 2007). Согласно совре- 90 менным представлениям, стресс-реализующих несбалансированное (моноаминергических) состояние и центральных тормозных (ГАМК– ергических) процессов, с преобладаем первых, является причиной патологических состояний, генез которых связан со стрессорными нагрузками на живой организм (Воробьева О.В., 2009; Мельникова О.З., 2009). В частности, центральные механизмы адаптогенного действия «Тонофита» связаны с активацией тормозных систем ЦНС, в частности, ГАМК– ергической системы, что ограничивает гиперактивацию стресс–реализующих систем, тем самым, предотвращается развитие негативных последствий стресс–реакции, поскольку известно, что мощность тормозной ГАМКергической истемы обусловливает устойчивость организма к стрессорным воздействиям (Калуев, 2004; Sabbah, 2007). Подтверждением данного механизма стресс–протективного действия испытуемого фитосредства служат полученные данные об уменьшении выраженности основных симптомов стресс-реакции в виде «триады Селье», свидетельствующих об ограничении гиперактивации центральных стрессреализующих систем при стрессе. Кроме этого, указанный механизм защитного действия испытуемого средства нашел подтверждение в серии экспериментов по изучению влияния «Тонофита» на поведенческую активность животных. В частности, его курсовое профилактическое введение в экспериментально-терапевтической дозе сопровождалось снижением уровня тревожности и эмоциональности животных, повышением их ориентирочноисследовательской активности, что обеспечивало ускорение адаптации животных к новым незнакомым условиям. Прямым доказательством активации ГАМК-ергической системы под влиянием фитосредства явились данные о сохранности питьевого рефлекса в конфликной ситуации, индуцированной введением антагониста ГАМКА-рецепторов бикуккилина. Также показано, что «Тонофит» обладает выраженными ноотропными свойствами, что выражается в ускорении времени выработки условного рефлекса и сохранности памятного следа в отдаленные сроки наблюдения. По- 91 лученные данные о способности испытуемого средства стимулировать когнитивные функции у животных имеет важное значение в проявлении его адаптогенных свойств, поскольку известно, что растительные адаптогены способны повышать умственную работоспособность (Барабой, 2004; Арушанян, 2008). Исследование механизмов актопротекторного действия «Тонофита» показало, что его введение на фоне интенсивных физических нагрузок способствует оптимизации энергетического обмена, стимулирует процессы ресинтеза макроэргических соединений в сердечной и скелетных мышцах, повышает концентрацию субстратов окисления в клетках, а также ингибирует процессы свободнорадикального окисления биомакромолекул и повышает мощность эндогенной антиокислительной системы организма животных. Можно полагать, что активация ресинтеза АТФ под влиянием испытуемого средства обусловлена улучшением доставки кислорода в ткани и оптимизацией лимитирующих звеньев энергетического обмена в клетке, что подтверждается полученными нами данными о наличии выраженной антигипоксической активности «Тонофита» при кислороддефицитных состояниях различного генеза. Учитывая, что под его влиянием повышалась устойчивость организма к гипобарической, гиперкапнической, гемической и тканевой гипоксии, можно полагать, что испытуемое фитосредство оказывет протекторное действие на все этапы транспорта кислорода к тканям. Уменьшение кислородной задолженности под влиянием «Тонофита», очевидно, имеет сложный молекулярный механизм и может быть обусловлено как активацией процессов оксигенации и дезоксигенации эритроцитов, так и процессов окислительного фосфорилирования. Важным звеном антигипоксического действия испытуемого средства является уменьшение выраженности метаболического ацидоза, связанного, очевидно, с активацией энергозависимых процессов глюконеогенеза и увеличением утилизации лактата за счет использования его в качестве предшественника глюкозы. В пользу указанного механизма свидетельствуют полу- 92 ченные нами данные о высоком содержании гликогена в печени в условиях гипоксии тканей при действии физических нагрузок высокой интенсивности, свидетельствующие о том, что антигипоксические эффекты «Тонофита» не связаны с активацией аденилатциклазного механизмаи усилением гликогенолиза. Данный механизм антигипоксического действия, характерный для классических антигипоксантов, связан со стимуляцией потока электронов по дыхательной цепи, сопровождаемого активацией НАДН-дегидрогеназного окисления в цикле Кребса, что приводит к увеличению энергопродукции (Виноградов, Бобков, 1986; Зайчик, Чурилов, 2007; Тимошенко, Горохов, 2007). При этом активация процессов окислительного фосфорилирования, очевидно, носит вторичный характер и обусловлена стабилизацией структур внутриклеточных мембран, в том числе, мембран митохондрий вследствие ингибирования «Тонофитом» процессов свободнорадикального окисления, являющихся триггерными молекулярно-клеточными механизмами нарушения функций всех клеточных мембран. Подтверждением наличия у «Тонофита» указанного неспецифического механизма защитного действия служат полученные данные о его выраженных мембраностабилизирующих свойствах. В частности, об этом свидетельствует повышение устойчивости эритроцитарных мембран к осмотическому и перекисному гемолизу, а также мембран тканевых базофилов к действию флогогенных агентов. Показано, что молекулярно-клеточный механизм реализации мембраностабилизирующего действия средства связан с ограничением окислительного стресса, ведущего к деструкции мембранных структур клеток. При этом антиоксидантная активность испытуемого средства обусловлена как ингибированием процессов перекисного окисления липидов, так и повышением мощности эндогенной антиокислительной системы организма, на что указывают полученные данные о снижении содержания продуктов пероксидации липидов в тканях, повышение концентрации структурных антиокислителей и активности ферментов антиоксидантной защиты организма при экстремальных воздействиях. Очевидно, что антиоксидантная 93 активность «Тонофита» является основным молекулярно-клеточным механизмом его защитного действия, поскольку известно, что индукция свободнорадикальных процессов является одним из ведущих патогенетических механизмов перехода физиологической адаптации в ее патологическое звено и развития разного рода стрессорных повреждений (Коган и соавт., 1992; Зенков и соавт., 2001; Пшенникова и соавт., 2008). Установлено, что ингибирование процессов свободнорадикального окисления обеспечивается входящими в состав фитосредства соединениями фенольной природы, обладающих прямым радикалперехватывающим действием (Елин, 2001), поскольку известно, что свободные радикалы являются пусковым механизмом свободнорадикальных реакций т разобщителями процесса окислительного фосфорилирования (Барабой, 2004; Чеснокова, 2009). Данное положение подтверждается полученными данными о выраженной антирадикальной активности «Тонофита» по отношению к супероксидным анион-радикалам и радикалам оксида азота.. Вместе с этим, ингибирование процессов свободнорадикального окисления связано с наличием у «Тонофита» хелатирующей активности по отшению к ионам переменной валентности, в частности Fe3+, и тем самым предотвращающей развитие свободнорадикальных процессов. Кроме этого, биологически активные соединения, входящие в состав испытуемого средства и, прежде всего, тритерпеновые гликозиды, флавоноиды, аскобиновая кислота оказывают опосредованное антиокислительное действие, выражающееся в способности защищать от окислительной деструкции важнейшие эндогенные соединения, участвующие в антиоксидантной защите: супероксиддисмутазу, каталазу и глутатион, способствуя тем самым усилению и пролонгированию их эффекта. Можно полагать, что выявленная нами иммунопротекторная активность «Тонофита» также связана с защитой мембранных структур иммунокомпетентных клеток от деструктивного действия свободных радикалов (Барабой, 2004; Pitas, 1990) и обусловлена комплексом соединений полисаха- 94 ридной и полифенольной природы, обладающих, как известно, выраженными иммуномодулирующими свойствами (Бакуридзе и соавт., 1993). Таким образом, полученные данные свидетельствуют, что в основе адаптационной перестройки организма, развивающейся под влиянием «Тонофита» лежит ряд функциональных и метаболических изменений на различных уровнях биологической организации. Испытуемое средство, содержащее комплекс биологически активных веществ, обеспечивает активацию ферментов антиокислительной защиты организма, восполнение пула структурных антиокислителей и уменьшение расхода эндогенных резервов антиоксидантов, что в конечном итоге обеспечивает инактивацию агрессивных продуктов пероксидации и индукцию процессов свободнорадикального окисления, ведущих к нарушению функциональной состоятельности биологических мембран при экстремальных состояниях различной природы. 95 ЗАКЛЮЧЕНИЕ Экспериментальные исследования свидетельствуют, что комплексное растительное средство «Тонофит» обладает широким спектром адаптогенной активности, повышая неспецифическую резистентность организма лабораторных животных к действию экстремальных факторов различной природы. Так, введение животным испытуемого средства в экспериментальнотерапевтической дозе 5,0 мг/кг повышает устойчивость организма к действию интенсивных физических нагрузок (общих и силовых), иммобилизационному стрессу, гипоксии (гипобарической, гемической, гиперкапнической, тканевой), интоксикации тетрахлорметаном, флогогенным агентам, а также при иммуносупрессивном состоянии. При этом установлено, что более выраженное адаптогенное действие испытуемое средство оказывает при многократном профилактическом введении. Установлено, что адаптогенные свойства «Тонофита» обусловлены его центральными и периферическими эффектами. В частности, испытуемое фитосредство оказывает выраженное влияние на центральную нервную системы животных: повышает ориентировочно-исследовательскую активность, способствует уменьшению уровня эмоциональности и тревожности животных, улучшает мнестические функции, ускоряет период адаптации животных к новым незнакомым условиям. Выявленные центральные эффекты «Тонофита» обусловлены активациейц тормозной ГАМК-ергической системы. Периферические защитные эффекты «Тонофита» связаны с оптимизацией энергетического статуса организма, ограничением катаболических и активацией синтетических процессов. Полученные данные свидетельствуют, что широкий спектр адаптогенной активности «Тонофита» связан с формированием под его влиянием состояния неспецифически повышеннной резистентности, обусловленного стабилизацией мембранных структур клеток и повышением их функциональной состоятельности. Установлено, что молекулярно-клеточный механизм мем- 96 браностабилизирующего действия испытуемого средства связан с ограничением окислительного стресса, обусловленного ингибированием процессов перекисного окисления липидов и повышением мощности системы эндогенной антиокислительной защиты организма при экстремальных воздействиях. Такой эффект растительной композиции обусловлен комплексом биологически активных веществ, входящими в его состав, такими как флавоноиды, полисахариды, терпеноиды, витамины и др., обеспечивающими более высокий уровнь процессов энергообеспечения структур, ответственных за реализацию адаптивных реакций организма. 97 ВЫВОДЫ 1. Комплексное растительное средство «Тонофит» обладает широким спектром адаптогенной активности, повышая неспецифическую резистентность организма к действию экстремальных факторов различной природы: интенсивным физическим нагрузкам; гипобарической, гиперкапнической, гемической и тканевой гипоксии; иммобилизационному стрессу, интоксикации ксенобиотиками. 2. Курсовое введение животным «Тонофита» в экспериментально- терапевтических дозах оказывает профилактическое и фармакотерапевтическое влияние при интенсивных физических нагрузках, иммобилизационном стрессе, интоксикации тетрахлорметаном и иммуносупрессивном состоянии. 3. Адаптогенная активность «Тонофита» обусловлена оптимизацией баланса стресс-реализующих и стресс-лимимитирующих систем. 4. «Тонофит» повышает ориентировочно-исследовательскую активность, снижает уровень тревожности и эмоциональности, повышает когнитивные функции ЦНС. 5. Основные молекулярно-клеточные механизмы стресс-протективного действия «Тонофита» заключаются в его способности ингибировать процессы свободнорадикального окисления биомакромолекул, стабилизировать мембранные структуры клеток, повышать энергетический потенциал клеток при экстремальных воздействиях различной природы. 98 ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ Выраженные адаптогенные свойства «Тонофита» аргументируют целесообразность его применения в клинической практике для повышения физической и умственной работоспособности, предупреждения утомления при повышенных физических и психических нагрузках у практически здоровых лиц, а также работающих на производствах с вредными условиями труда; для повышения сопротивляемости инфекциям, при астенических состояниях и повышенной утомляемости, а также в период реабилитации после перенесенных тяжелых заболеваний. Наличие иммуномодулирующей активности позволяет рекомендовать данное средство для лечения и профилактики таких широко распространенных заболеваний как грипп, острые респираторные инфекции, а также онкологических заболеваний, вторичных иммунодефицитов. 99 СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 1. Агаджанян H.A. Гипоксические, гипокапнические, гиперкапнические состояния / H.A. Агаджанян, А.Я. Чижов. - М., 2003. – 254 с. 2. Агаджанян Н. А. Проблемы адаптации и учение о здоровье / Н.А. Агаджанян, Р.М. Баевский, А.П. Берсенева. - М., 2006.- 283 с. 3. Агаджанян Н.А. Функциональные резервы организма и теория адапта- ции / Н.А. Агаджанян, P.M. Баевский, А.П. Берсенева // Вестн. восстан. медицины. - 2004. - № 3 (9). - С. 4-10. 4. Акопов И.Э. Важнейшие отечественные лекарственные растения и их применение / И.Э. Акопов. - Ташкент, 1986. – 234 с. 5. Алейникова Т.А. Количественное определение макроэргических со- единений мышц (АТФ, креатинфосфата) / Т.А. Алейникова, Г.В. Рубцова // Руководство к практическим занятиям по биологической химии. – 1988. – С. 115-117. 6. Александров П.Н. Влияние рутина и эскуламина на некоторые модели асептического воспаления / П.Н. Александров, Т.В. Сперанская, Ю.Г. Бобков // Фармакол. и токсикол. – 1986. - №1. – С. 84-86. 7. Александровский Ю.А. Психофармакотерапия пограничных психиче- ских расстройств / Ю.А. Александровский, А.С. Аведисова, Л.М. Берденштейн. - М., 2005. – 250 с. 8. Александровский Ю.А. К вопросу о механизмах развития невротиче- ских расстройств (Идеи И.П. Павлова и современность) / Ю.А. Александровский // VI Российский национальный конгресс "Человек и лекарство", 19-23 апреля 1999 г. - 1999. - 32 с. 9. Алехин Е.К. Иммунотропные свойства лекарственных средств / Е.К. Алехин, Д.Н. Лазарева, С.В. Сибиряк. – Уфа, 1993. – 208 с. 10. Али-заде 3.М. Формовое разнообразие облепихи в северо-западном Азербайджане / 3.М. Али-заде, Г.Н. Имамалиев, Ф.М. Азизов, Н.М. Кафаров // Растит. Ресурсы. - 1978. - Т. 14. - вып. 1. - С. 64-66. 100 11. Амосова Е.Н. Поиск новых противоязвенных средств из растении Си- бири и Дальнего Востока / Е. Н. Амосова, Е. П. Зуева, Т. Г. Разина, В. Ф. Турецкова, О В. Азарова, С. Г. Крылова, Е. Д. Гольдберг // Эксперим. и клинич. фармакология. – 1998. - Т. 61. - № 6. - С. 31. 12. Арушанян Э.Б. Препараты корня женьшеня и других растительных адаптогенов как ноотропные средства / Э.Б. Арушанян // Экспериментальная и клиническая фармакология. – 2008. - Т. 71, №6. – С. 58-66. 13. Барабой В.А. Биологическое действие растительных полифенольных соединений. - Киев, 1997. - 59 с. 14. Барабой В.А. Перекисное окисление и стресс / В.А. Барабой, И.И. Брехман, В.Г. Голотин, Ю.Б. Кудряшов. - СПб., 1992. - 142 с. 15. Батурина С.С. Оценка иммуномодулирующих свойств растительных масел в эксперименте // 3-й Рос. нац. конгр.: Человек и лекарство. Тез. докл. - 1996. - С. 10. 16. Безкровная Л.А. Поиск средств неспецифической профилактики по- следствий радиационного воздействия на организм / Л.А. Безкровная, Т.А. Лаптева // 1-й съезд физиологов Средней Азии и Казахстана. – 1991. - Ч. 1. С. 70. 17. Беликова А.П. Экспериментальные данные по фармакологии гиппо- фаина (хлорид 5-окситриптамина) / А.П. Беликова, Н.А. Кудрявина, Ю.И. Рампан, А.Б. Сыркин // Фармакология и токсикология. – 1962. - № 6. - С. 705-711. 18. Белозерцева Ю.А. Поиски растительных препаратов с ноотропным действием / Ю.А. Белозерцева, Е.Ю. Павлюшина, Ю.Ю. Антипова // Лекарственные растения в традиционной и народной медицине. – Улан-Удэ. – 1987. – С.19-20. 19. Брехман И.И. Человек и биологически активные вещества / И.И. Брех- ман. – М., 1980. – 120 с. 20. Брехман И.И. Элеутерококк / И.И. Брехман. – Л., 1968. – 186 с. 101 21. Венгеровский А.И. Методические указания по изучению гепатозащит- ной активности фармакологических веществ / А.И. Венгеровский, И.В. Маркова, А.С. Саратиков // Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. - М., 2000. - С.228232. 22. Виленский Б.С. Препараты нейротрофического действия в лечении ин- сульта / Б.С. Виленский // Журн. Качество жизни. Болезни сердечнососудистой системы. - 2008. - №2. - С. 53-56. 23. Виноградов В.М. Фармакологическая стратегия адаптации / В.М. Ви- ноградов, Ю.Г. Бобков // Фармакологическая регуляция состояний дезадаптации. - М., 1986. - С. 7-16. 24. Владимиров Ю.А. Свободные радикалы и антиоксиданты / Ю.А. Вла- димиров // Вестник РАМН. - 1998. – № 7. – С. 898-902. 25. Вознесенская Т.Г. Эмоциональный стресс и профилактика его послед- ствий / Т.Г. Вознесенская // Международный неврологический журнал. – 2007. - №2(12). – С. 45-49. 26. Войтенко A.M. Средства и методы сохранения и восстановления про- фессиональной работоспособности операторов / A.M. Войтенко. - СПб., 2002. - 215 с. 27. Воронина Т.А. Методические указания по изучению ноотропной ак- тивности фармакологических веществ / Т.А. Воронина, Р.У. Островская // Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. - М., 2000. - С. 153-161. 28. Гачечиладзе Н.Д. Биохимическая и морфологическая характеристика форм облепихи крушиновидной, произрастающей в Западном Памире / Н.Д. Гачечиладзе, Ю.С. Корзинников, Е.М. Глазунова, X.Ю. Юсуфбеков, В.В. Бондарь, Н.Б. Крымская, И.М. Потапова // Растит. Ресурсы. - 1981. - Т. 17. вып. 1. - С. 37-42. 29. Головкина М.Т. Лейкоантоцианы плодов шиповника и их синергизм с аскорбиновой кислотой / М.Т. Головкина, Н.В. Новотельнов, В.В. Седова // 102 Фенольные соединения и их биологические функции. - М. - 1968. - С. 189195. 30. Горелкина О.И. Влияние биологически активных веществ плодов обле- пихи на морфологические и гистохимические показатели органов животных при действии тетрахлорметана / О.И. Горелкина, А.А. Алтымышев, Н.М. Ярцев, В.М. Варваштян // Облепиха крушиновидная. – Фрунзе. - 1983. - С. 81-85. 31. Грубова Е.А. Применение экстракта родиолы розовой в комплексной терапии больных раком яичника / Е.А. Грубова, В.И. Купин, Ф.Ф. Бланко // Тез. докл. III Украинской конф. по медицинской ботанике. – Киев. – 1992. – Ч. II. – С. 5. 32. Гусейнов Д.Я. Фармакология боярышника / Д.Я. Гусейнов. - Баку, 1985. – 150 с. 33. Давыдов В.В. Фитоадаптогены как перспективные иммуномодуляторы / В.В. Давыдов, Е.В. Железкова, В.Г. Морозов // Актуальные проблемы создания новых лекарственных средств. – Санкт-Петербург. - 1996. – С. 131132. 34. Дамдинова Г.Х. Ноотропное действие экстракта шлемника байкальско- го / Г.Х. Дамдинова // Автореф. дисс. канд. мед. наук. – Улан-Удэ, 2001. – 20 с. 35. Дардымов И.В. Женьшень, элеутерококк (к механизму биологического действия) / И.В. Дардымов. – М., 1976. – 186 с. 36. Дранник Г.М. Иммунотропные препараты / Г.М. Дранник, Ю.Я. Грине- вич, Г.М. Дизик. – Киев, 1994. – 288 с. 37. Дубинина Е.Е. Роль активных форм кислорода в качестве сигнальных молекул в метаболизме тканей при состояниях окислительного стресса / Е.Е. Дубинина // Вопр. мед. химии. - 2001. - Т. 47. - № 6. - С. 561-581. 103 38. Дунгэрдорж Д. Изучение флавоноидных соединений некоторых видов рода астрагал (Astragalus L.), применяемых в народной медицине Монголии / Д. Дунгэрдорж // Автореф. дис. канд. фармац. наук. - М., 1978. - 23 с. 39. Дурнев А.Д. Влияние диоксина и циклофосфана на перекисное окисле- ние липидов и активность супероксиддисмутазы и каталазы у мышей линии С57В 1/6 и ВАLВ / А.Д. Дурнев, Т.Г. Сазонтова, Н.В. Гусева // Бюлл. экспер. биол. и мед. – 1996. – № 5. – С. 528-532. 40. Душкин М.И. Влияние природных полифенольных соединений на окислительную модификацию липопротеинов низкой плотности / М.И. Душкин, А.А. Зыков, Е.Н. Пивоварова // Бюлл. эксперим. биологии и медицины. – 1993. - Т. 11. - № 10. - С. 393-395. 41. Дычко С.Я. Состав и фармакологическая активность водного экстракта шрота облепихи / С.Я. Дычко, Е.С. Кулашна, В.В. Хасанов // Химикофармацевтич. журнал. - 1998. - Т. 32. - № 4. - С. 32-34. 42. Жамъянсан Я. Исследование масел семян и мякоти плодов Hippophae rhamnoides / Я. Жамъянсан // Химия природ. соедин. - 1978. - № 1. - С. 133134. 43. Жмырко Т.Г. Витамины масел плодов Hippophae rhamnoides / Т.Г. Жмырко, Э.И. Гигиенова, Ф.У. Умаров // Химия природ. соедин. - 1978. - № 3. - С. 313-317. 44. Жмырко Т.Г. Групповой состав нейтральных липидов в масле плодов Hippophae rhamnoides / Т.Г. Жмырко, Н.П. Гончарова, Э.И. Гигиенова, А.И. Глушенкова // Химия природ. соедин. - 1984. - № 3. - С. 300-305. 45. Жмырко Т.Г. Оксикислоты масла семян Hippophae rhamnoides / Т.Г. Жмырко, Я.В. Рашкес, А.И. Глушенкова // Химия природ. соедин. - 1986. № 2. - С. 161-168. 46. Задорожный А.М. Справочник по лекарственным растениям / А.М. За- дорожный, А.Г. Кошкин, С.Я. Соколов, А.И. Шретер. – М., 1989. – 415 с. 47. Зенков Н.К. Окислительный стресс / Н.К. Зенков, В.З. Ланкин, Е.Б. Меньшикова. - М., 2001. – 343 с. 104 48. Зуева Е.П. Модификаторы биологических реакции природного проис- хождения в терапии экспериментальных опухолей / Е.П. Зуева, Е.Н. Амосова, С.Н. Удинцев // Иммуномодуляторы природного происхождения. - Владивосток. – 1990. – С. 26-27. 49. Иванов К.П. Современные теории нормоксии и гипоксии мозга / К.П. Иванов // Тез. докл. Физиологическое общество им. И.П. Павлова. Съезд XX Москва, 4-8 июня 2007 г. - М. - 2007. - С. 40. 50. Казанцева Е.Х. Исследование листьев ревеня на содержание витамина С и фитонцидов / Е.Х. Казанцева // Учен. зап. Пятигор. фармац. ин-та. – 1952. - №1. - С.64-71. 51. Калуев А.В. Роль ГАМК в патогенезе тревоги и депрессии – нейрогене- тика, нейрохимия и нейрофизиология / А.В. Калуев // Нейрохимия и нейрогенетика поведения. – 2006. - №1. – С.29-41. 52. Калуев А.В. Стресс, тревожность и поведение. Актуальные проблемы моделирования тревожного поведения животного / А.В. Калуев. – М., 1998. – 145 с. 53. Кашникова М.В. Ацетилвитексин — новый флавоноид из цветков Cra- taegus sanguinea / М.В. Кашникова, В.И. Шейченко, В.И. Глызин, И.А. Самылина // Химия природ. соедин. - 1984. - № 1. - С. 108-109. 54. Кашникова М.В. Флавоноиды цветков Crataegus sanguinea / М.В. Каш- никова // Химия природ. соедин. - 1984. - № 1. - С. 107. 55. Киселева А.В. Биологически активные вещества лекарственных расте- ний Южной Сибири / А.В. Киселева, Т.А. Волхонская, В.Е. Киселев. – Новосибирск, 1991. – 136 с. 56. Клебанов Г.И. Оценка антиоксидантной активности плазмы крови с применением желточных липопротеидов / Г.И. Клебанов, М.В. Бабенкова, Ю.О. Теселкин // Лабораторное дело. – 1988. – № 5. – С. 59–62. 57. Ковалев И.Е. Влияние эномеланина на гемолиз эритоцитов, вызывае- мый свободнорадикальными реакциями и другими факторами / И.Е. Кова- 105 лев, Н.П. Данилова, С.А. Андронати, Ю.Л. Жеребин // Фармакол. и токсикол. – 1986. - № 4. – С. 89-91. 58. Коган А.Х. Свободнорадикальные перекисные механизмы патогенеза ишемии и инфаркта миокарда и их фармакологическая регуляция / А.Х. Коган, А.Н. Кудрин, Л.В. Коктурский, Н.И. Лосев / Патол. физиол. и эксперим. терапия. – 1992. – № 2. – С. 5-15. 59. Колчинская А.З. Анализ гипоксических состояний и метода их коррек- ции с позиции теории систем / А.З. Колчинская // Мат. Всерос. конф. «Гипоксия. Механизмы, адаптация, коррекция». - М. - 1997. - С. 59-60. 60. Коноплёва В.Г. О лечении маслом облепихи субатрофических и атро- фических назофарингитов / В.Г. Коноплёва // Сб. тр. Новосиб. отд-ния Всерос. об-ва отоларингологов. - 1963. - Вып. 1. - С. 128-131. 61. Коноплёва Е.В. Сравнительная характеристика обезболивающего про- тивогипоксического действия настоев некоторых видов Oxytropis DC. / Е.В. Коноплёва // Растит. ресурсы. - 1989. - Т. 25. - вып. 2. - С. 254-258. 62. Королюк М.А. Методы определения активности каталазы / М.А. Коро- люк, Л.И. Иванова // Лабор. дело. - 1988. - № 1 . - С. 16-19. 63. Костюк В.А. Биорадикалы и биоантиоксиданты / В.А. Костюк, А.И. Потапович. - Минск, 2004. – 192 с. 64. Костюк В.А. Свободнорадикальное повреждение клетки и использова- ние антирадикальных агентов в качестве защитных средств / В.А. Костюк, А.И. Потапович // Мат. конф. «Фармакологическая коррекция гипоксических состояний». - 1991. - Ч. 3. - С. 428-429. 65. Костюченков Ю.Ф. Влияние фармакологических средств на развитие гемической гипоксии / Ю.Ф. Костюченков, Н.Ф. Фаращук // Фармакол. и токсикол. – 1982. – № 1. – С 76-79. 66. Кошелев В.Б. Сердечно-сосудистые реакции организма в ответ на экзо- генную гипоксию / В.Б. Кошелев // Рос. физиол. журн. им. И.М. Сеченова. 2004. - Т. 90. - № 8. - Ч. 1. - С. 483. 106 67. Крыжановский Г.Н. Некоторые общепатологические и биологические категории: здоровье, болезнь, гомеостаз, саногенез, адаптация, иммунитет. Новые подходы и определения / Г.Н. Крыжановский // Патологическая физиология и экспериментальная терапия. - 2004. - № 2. - С. 3-6. 68. Крыжановский Г.Н. Фундаментальные исследования в системе медико- биологических наук / Г.Н. Крыжановский // Вестник РАМН. – 2006. - № 3. – С.31-33. 69. Крылова С.Г. О возможности использования новых лекарственных форм из облепихи крушиновидной в качестве гастропротективных средств / С.Г. Крылова // Актуальные проблемы фармакологии и поиска новых лекарственных препаратов. – Томск. - 1992. - Т. 5. - С. 54-58. 70. Кукес В.Г. Метаболизм лекарственных средств: клинико- фармаколо- гические аспекты / В.Г. Кукес. - М., 2004. – 113 с. 71. Кунпан-дудзи: Большой рецептурный справочник Агинского дацана. – М., 2008. – 214 с. 72. Лагазидзе Д.С. Содержание фармакологически активных веществ в жирном масле мякоти плодов облепихи, произрастающей в Грузии / Д.С. Лагазидзе, Ф.Д. Муравьёва, В.С. Бостоганашвили // Хим.-фармац. журн. 1984. - Т. 18. - № 6. - С. 713-717. 73. Лазарев Н.В. Актуальные вопросы изучения действия адаптогенов, в том числе элеутерококка колючего / Н.В. Лазарев // Материалы симп. по элеутерококку и женьшеню. – Владивосток. - 1962. - С. 7-10. 74. Лазарев Н.В. Состояние неспецифически повышенной сопротивляемо- сти / Н.В. Лазарев, Е.И. Люблина, М.А. Розий // Пат. физиол. и экспер. терапия. – 1959. – Т.3. - №4. – С.16-24. 75. Лазарева Л.Н. Стимуляторы иммунитета / Л.Н. Лазарева, Е.К. Алехин – М., 1985. – 255 с. 76. Лебедев A.A. Модуляция центральных механизмов стресса введением кортиколиберина и БТШ в раннем онтогенезе / A.A. Лебедев, В.П. Стеценко, В.П. Ганапольский, C.B. Марков, И.В. Воейков, Г.В. Саблина, O.A. 107 Яковлева, П.Д. Шабанов // XX съезд физиол. об-ва им. И.П. Павлова. Тез. докл. - М. - 2007. - С. 304. 77. Ловкова М.Я. Почему растения лечат / М.Я. Ловкова, А.М. Рабинович, С.М. Пономарева. – М., 1990. - 256 с. 78. Логинов А.С. Виды физиологической активности масла плодов обле- пихи / А.С. Логинов, В.А. Миронов, Н.Ш. Амиров, Л.И. Аруин, Г.С. Васильев, В.С. Матросов, И.Е. Трубицына, Б.3. Чикунова // Биология, химия и фармакология облепихи. – Новосибирск. - 1983 - С. 98-102. 79. Лопухин Ю. М., Владимиров Ю.А., Молоденков М.Н. // Бюлл. Экспер. Биол. –1983. –Т.95, №2. –С.61-63. 80. Максютина Н.П. Растительные лекарственные средства / Н.П. Максю- тина, Н.Ф. Комиссаренко. – Юнев, 1985. - 279 с. 81. Малышев И.Ю. Стресс, адаптация и оксид азота / И.Ю. Малышев, Е.Б. Манухина // Биохимия. – 1998. – Т. 63 – № 7. – С. 992-1006. 82. Мамедов С.Ш. Жирнокислотный состав масла облепихи крушиновид- ной / С.Ш. Мамедов, С.М. Асланов, Н.М. Исмаилов, Э.И. Гигиенова, А.У. Умаров // Масло-жир. пром-сть. - 1984. - № 2. - С. 18-19. 83. Манухина Е.Б. Защитные и повреждающие эффекты периодической ги- поксии: роль оксида азота / Е.Б. Манухина, Х.Ф. Дауни, Р.П. Маллет, И.Ю. Малышев // Вестн. Росс. АМН. - 2007. - № 2. - С. 25-33. 84. Масленникова Г.В. Результаты лечения больных глоссалгией облепи- ховым маслом / Г.В. Масленникова // Стоматология. - 1968. - № 3. - С. 8688. 85. Маслова М.Н. Молекулярные механизмы стресса / М.Н. Маслова // Российский физиологический журнал им. И.М.Сеченова. - 2005. - Том 91. № 11. - С.132-138. 86. Матафонов И.И. Облепиха / И.И. Матафонов. - Новосибирск, 1983. - 167 с. 87. Машковский М.Д. Лекарственные средства / М.Д. Машковский. - М., 2010. – 1020 с. 108 88. Меерсон Ф.3. Адаптация к стрессорным ситуациям и физическим на- грузкам / Ф.3. Меерсон, М. Г. Пшенникова. - М., 1988 - 256 с. 89. Меерсон Ф.З. Адаптационная медицина: механизмы и защитные эф- фекты адаптации / Ф.3. Меерсон. - М., 1993. - 345 с. 90. Методические рекомендации по изучению транквилизирующего фар- макологических (анксиолитического) действия фармакологических веществ / Т.А. Воронина, С.Б. Середенина // Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. - М. 2005. - С. 253-263. 91. Мизина Т.Ю. Противолучевая активность концентрата плодов Hippo- phae rhamnoides L. / Т.Ю. Мизина., С.Г. Ситникова // Растит. ресурсы. 1999. - Т. 35. - вып. 3. - С. 85-92. 92. Минаева В.Г. Лекарственные растения Сибири / В.Г. Минаева. – Ново- сибирск, 1991. – 431 с. 93. Миронов В.А. Химический состав и биологическая активность экс- трактов из компонентов плодов облепихи / В.А. Миронов, Т.Н. ГусеваДонская, Ю.Ю. Дубровина, Г.А. Осипов, Е.А. Шабанова, А.А. Никулин, Н.Амиров, И.Г. Трубицина // Хим.-фармац. журн. - 1989. - Т. 23. - № 11. - С. 1357-1364. 94. Михайлов И.В. Современные препараты из лекарственных растений / И.В. Михайлов, А.И. Шретер. - М., 1999. - 336 с. 95. Мишарин А.А. Опыт применения облепихового масла в оториноларин- гологии / А.А. Мишарин, А.Я. Олешкова, А.Л. Терехова // Вопросы общей и клинической оториноларингологии. - Иркутск. - 1964. - С. 138-139. 96. Муравьева Д.А. Полисахариды некоторых растений, оказывающие то- низирующее действие / Д.А. Муравьева, К.О. Гаспарян, О.И. Попова // Биол. науки. – 1990. – № 12. – С. 117-121. 97. Муравьева Д.А. Фармакогнозия / Д.А. Муравьева, И.А. Самылина, Г.П. Яковлев. – М., 2002. – 654 с. 109 98. Мухамедьярова M.M. Полифенолы листьев Hippophae rhamnoides / M.M. Мухамедьярова, Т.К. Чумбалов // Химия природ. соедин. - 1977. - № 2. - С. 281-282. 99. Мухин Е.И. Структурные, функциональные и нейрохимические основы сложных форм поведения / Е.И. Мухин. - Москва, 1990. - 240 с. 100. Наймушина А.Г. Психоэмоциональный стресс / А.Г. Наймушина. – Тюмень, 2009. - 144 с. 101. Николаев С.М. Растительные лекарственные препараты при повреждениях гепатобилиарной системы / С.М. Николаев. - Новосибирск, 1992. - 155 с. 102. Нимаева Ж.Г. Фармакологические свойства и механизм действия адаптогенного средства «Терцитон» / Ж.Г. Нимаева // Дисс. канд. мед. наук. – Улан-Удэ, 2003. - 114 с. 103. Новиков В.С. Патогенетические механизмы развития экстремальных состояний / В.С. Новиков // Вестник Российской военно-медицинской академии. – 1999. – № 1. – С. 57-65. 104. Новиков В.С. Способы оптимизации функционального состояния и работоспособности человека в экстремальных и субэкстремальных условиях / В.С. Новиков, Е.Б. Шустов, В.В. Благинин. – СПб., 2001. – 36 с. 105. Новиков Ю.В. Экология, окружающая среда и человек / Ю.В. Новиков. - М., 1999. - 320 с. 106. Новосёлов В.Г. Сравнительная оценка иммуномодулирующих свойств некоторых видов растительного пищевого сырья / В.Г. Новосёлов, С.Г. Глумов, Л.Г. Щёлокова // Матер. 1-го Межд. науч. конгр.: Традиционная медицина и питание. Теоретические и практические аспекты. - М. - 1994. - С. 191-192. 107. Новрузов Э.Н. Каротиноиды и стерины некоторых форм Hippophae rhamnoides / Э.Н. Новрузов // Химия природ. соедин. - 1981. - № 1. - С. 9899. 108. Носов A.M. Лекарственные растения / A.M. Носов. - М., 2001. - 350 с. 110 109. Ойвин И.А. Методика изучения местных нарушений капиллярной проницаемости / И.А. Ойвин, С.Л Шетель // Материалы по патогенезу воспаления и патологии белков крови. - Душанбе. - 1961. - №5. - С. 167-173. 110. Олейник С.А. Производные янтарной кислоты в спортивной фармакологии / С.А. Олейник, Н.А. Горчакова, И.Ю. Яковлева, С.В. Семенов, В.Е. Шевченко, И.С Чекман // Психофармакол. и биол. наркол. - 2007. - Т. 7. – С. 188. 111. Павлова Н.С. Исследование фенольных соединений в растениях дальневосточной флоры / Н.С. Павлова, Г.И. Пономарчук, К.П. Уланова, Д.Д. Басаргин, Е.Н. Здоровьева, П.Г. Горовой // Тез. докл. 3-го Всесоюз. симпоз. по фенольным соединениям. - Тбилиси. - 1976. - С. 111-112. 112. Пастушенков JI.B. Лекарственные растения: Использование в народной медицине и быту / JI.B. Пастушенков. - СПб., 1998. - 125 с. 113. Петров А.В. Методологические аспекты проблемы адаптации / А.В. Петров, Э.Г. Быков // Формы и механизмы процессов адаптации в норме и патологии. – Воронеж. – 1987. – С. 5-29. 114. Петрова М.Ф. Исследование оснований коры Hippophae rhamnoides / М.Ф. Петрова, Г.П. Меньшиков // Журн. общ. химии. – 1961. - Т. 31, вып. 7. С. 2413-2415. 115. Поветьева Т.Н. Механизмы адаптогенного действия лекарственных растений Сибири / Т.Н. Поветьева // Автореф. дисс. д.б.н. – Томск, 2002. – 32 с. 116. Подожий А.В. Лекарственные растения Сибири / А.В. Подожий. Томск, 1995. – 463 с. 117. Пронченко Г.Е. Лекарственные растительные средства / Г.Е. Пронченко. – М., 2002. – 285 с. 118. Пшенникова М.Г. Феномен стресса. Эмоциональный стресс и его роль в патологии / М.Г. Пшенникова // Пат. физ. и экспер. терапия. - 2001. - № 1. - С. 29-31. 111 119. Раднаева Д.Б. Фармакологические свойства и механизм действия адаптогенного средства «Сок каллизии душистой» / Раднаева Д.Б. // Дисс. канд. мед. наук. – Улан-Удэ, 2009. – 124 с. 120. Растительные ресурсы России. Дикорастущие цветковые растения, их компонентный состав и биологическая активность. – СПб. – М., 2008. – Т. 1. – 421 с. 121. Растительные ресурсы России. Дикорастущие цветковые растения, их компонентный состав и биологическая активность. – СПб. – М., 2009. – Т. 2. – 513 с. 122. Растительные ресурсы России. Дикорастущие цветковые растения, их компонентный состав и биологическая активность. – СПб. – М., 2010. – Т. 3. – 601 с. 123. Растительные ресурсы СССР: Цветковые растения, их химический состав, использование. - Л., 1987. – 326 с. 124. Родичкин П.В. Применение антигипоксантов в разных видах спорта / П.В. Родичкин, П.Д. Шабанов // Психофармакол. и биол. наркол. — 2007. — Т. 7. Спецвып. Ч. 2. - С. 1919. 125. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ МЗ РФ. Департамент контроля качества, эффективности и безопасности лекарственных средств. Научный центр экспертизы и государственного контроля лекарственных средств. Фармакологический Комитет МЗ РФ. – М., 2000. – 398 с. 126. Самбуева 3.Г. Желчегонное растительное сырьё традиционной медицины / 3. Г. Самбуева, А. В. Цыренжапова / Биоразнообразие экосистем Внутренней Азии. Тез. докл. Всерос. конф. с междунар. участием. - Улан-Удэ. 2006. - С. 109-110. 127. Сапожников A.M. Функции белков теплового шока в популяциях лимфоидных клеток / A.M. Сапожников // Дисс. д.б.н. - М., 2003. - 224 с. 128. Сафонова Г.М. Протективные эффекты растительных полифенольных соединений на иммунную систему при остром стрессе / Г.М. Сафонова, 112 Ю.И. Шилов, А.Б. Перевозчиков // Доклады академии наук. – 2001. – Т. 378. –№ 5. – С.697-699. 129. Сейфула Р.Д. Адаптогены и физическая работоспособность / Р.Д. Сейфула, И.А. Анкудинова, А.П. Азизов. – М., 1997. – 267 с. 130. Сейфулла Р.Д. Лекарства и БАД в спорте / Р.Д. Сейфулла, З.Г. Орджоникидзе. - М., 2003. - 320 с. 131. Селье Г. Очерки об адаптационном синдроме / Г. Селье. - М., 1960. 254 с. 132. Селье Г. Стресс без дистресса / Г. Селье. - М., 1982.124 с. 133. Сергиенко В.И. Математическая статистика в клинических исследованиях / В.И. Сергиенко, И.Б. Бондарева. – М., 2000. – 263 с. 134. Сиверцева И.И. Фармакологические исследования настойки боярышника./ И.И.Сиверцева // Бюл. эксперим. биологии и медицины. - 1998. - Т. 6. - С. 452-453. 135. Симоненков А.П. Уточнение классификации гипоксических состояний / А.П. Симоненков, В.Д. Фёдоров, В.М. Клюжев // Вестник РАМН. - 2004. № 1. - С. 46-48. 136. Скоромец A.A. Нейропротекция при острой и хронической недостаточности мозгового кровообращения: сб. науч. ст. / под ред. A.A. Скоромца, М.М. Дьяконова. - СПб., 2007. - 200 с. 137. Смирнов A.B. Актопротекторы и антигипоксанты как новые перспективные средства медицинского обеспечения космических полетов / A.B. Смирнов, Е.Б. Шустов, В.Ю. Ганчо // Тез. докл. межд. конф. «Профессиональная деятельность космонавта и пути повышения ее эффективности». Звездный городок. - 1993. - С. 157-159. 138. Соколов С.Я. Справочник по лекарственным растениям / С.Я. Соколов, И.П. Замотаев. – М., 1990. – 428 с. 139. Соколов С.Я. Фитотерапия и фитофармакология. Руководство для врачей / С.Я. Соколов. – М., 2000. - 970с. 113 140. Стратиенко E.H. Поиск и изучение новых химических соединений, повышающих физическую работоспособность / E.H. Стратиенко // Дисс. д.м.н. - М., 2003. - 244 с. 141. Стрельников Ю.Е. Сравнительная характеристика противо- воспалительного действия некоторых пиримидиновых производных / Ю.Е. Стрельников //Фармакол. и токсикол. – 1960. - №6. – С. 526-531. 142. Судаков К.В. Индивидуальная устойчивость к эмоциональному стрессу/ К.В. Судаков. - М., 1998. - 267 с. 143. Судаков К.В. Индивидуальность эмоционального стресса / К.В. Судаков // Журнал неврология и психиатрия. - 2005. - № 2. - С 4-12. 144. Сыров В.Н. Антиоксидантная активность некоторых растительных фенольных соединений / В.Н. Сыров, З.А. Хушбактова, В.М. Гукасов // Хим. фарм. журн. – 1987. – Т.ХХ1, – № 1. – С. 59-62. 145. Сюткина Н.И. Иммуномодулирующее и противоопухолевое действие препаратов из семейства аралиевых / Н.И. Сюткина, В.И. Купин, Ф.Ф Бланко // Тез. докл. Ш Украинской конф. по медицинской ботанике. – Киев. – 1992. – Ч. 1. – С. 44. 146. Темирбулатов Р.А. Метод повышения интенсивности свободнорадикального окисления липидсодержащих компонентов крови и его диагностическое значение / Р.А. Темирбулатов, Е.И. Селезнев // Лабор. Дело. – 1981. № 4. – С. 209-211. 147. Теселкин Ю.О. Взаимодействие дигидрокверцетина с ионами двухвалентного железа / Ю.О. Теселкин, И.В. Бабенкова, И.А. Руленко // Биоантиоксидант. – Тюмень. – 1997. – С. 22-24. 148. Турова А.Д. Левзея сафлоровидная. В кн.: Лекарственные средства растительного происхождения / А.Д. Турова, Д.М. Российский. - М., 1954. – 91 с. 149. Файман Б.А. Применение облепихового масла при лечении некоторых лор-заболеваний / Б.А. Файман // Автореф. дисс. канд. мед. наук. – Омск, 1971. - 14 с. 114 150. Файман Б.А. Применение облепихового масла при лечении операционных ран после тонзилэктомии / Б.А. Файман // Журн. ушных, носовых и горловых болезней. - 1968. - № 5. - С. 95-96. 151. Фёдоров В.Н. Фармакологические и токсикологические свойства новых препаратов облепихи / В.Н. Фёдоров, А.А. Раков, Н.А. Смирнов, И.Г. Ситников, Л.М. Фригидова, С.Н. Ковалёв // 3-й Рос. нац. конгр.: Человек и лекарство. Тез. докл. - М. - 1996. - С. 293. 152. Фисенко В.П. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / В.П. Фисенко. - М., 2000.384 с. 153. Фролова Н.Ю. Сравнительная оценка болеутоляющего действия ряда новых средств растительного происхождения / Н.Ю. Фролова, Т.И. Мельникова, М.Е. Дьякова, Е.Р. Петренко, Е.Л. Тамм // Тез. докл. 2-й конф. Рос. ассоциации по изучению боли. - СПб. – 1995. - С. 186-188. 154. Цыбикова Д.Ц. К вопросу химического исследования шрота облепихи / Д.Ц. Цыбикова, Г.Ж. Даржапова, М.Н. Болотова, Д.Н. Зылыкеева // Проблемы освоения лекарственных ресурсов Сибири и Дальнего Востока. - Новосибирск. – 1983. - С. 237-238. 155. Чабанов М.К. Результаты поиска лекарственного сырья среди растений семейства розоцветных, произрастающих в Западной Сибири / М.К. Чабанов, П.И. Левен, О.И. Дружинина, А.Я. Дош, И.Д. Нешта, И.Д. Кайб // Лекарственные растения в традиционной и народной медицине. - Улан-Удэ. 1987. - С. 148-149. 156. Чевари С. Роль супероксиддисмутазы в окислительных процессах клетки и метод определения ее в биологических материалах / С. Чевари, И. Чаба, Й. Секей // Лабор. дело. – 1985. – № 11. – С. 678-681. 157. Чериковская Т.Я. Жидкий экстракт из корневищ левзеи сафлоровидной как новое стимулирующее средство / Т.Я. Чериковская // Аптечн. дело. – 1952. - № 5. – С. 12-13. 115 158. Чернов М.П. Танины и алкалоиды из коры облепихи Hippophae rhamnoides L. и их биологическая активность / М.П. Чернов, И.А. Щепеткин, А.И. Хлебников, О.Н. Клубачук, Бьянг Се Квон // Ползуновский вестник. 2004. - № 4. - С. 148-149. 159. Чжуд-ши. Канон тибетской медицины. – М., 2001. – 765 с. 160. Чукаев С.А. Гепатопротекторное действие сухого экстракта листьев облепихи крушиновидной / С.А. Чукаев, С.М. Николаев, О.А. Роднаева, Л.А. Нагаслаева // Сиб. мед. журн. – Иркутск. - 2005. - № 4. - С. 61-64. 161. Чумбалов Т.К. Полифенолы из листьев Hippophae rhamnoides / Т.К. Чумбалов, М.М. Мухамедьярова., В.В. Поляков // Химия природ. соедин. 1976. - № 5. - С. 663-664. 162. Шабанов П.Д. Гипоксия и антигипоксанты / П.Д. Шабанов // Вестник Рос. Воен.-мед. академии. - 2003. - № 1(9). - С. 111-121. 163. Шабанов П.Д. Концепция адаптогенов: истоки, современное состояние, перспективы: Акт. речь на 2-х Лазаревских чтениях / П.Д. Шабанов. - СПб., 2002. - 72 с. 164. Шанин Ю.Н. Антиоксидантная терапия в клинической практике / Ю.Н. Шанин, В.Ю. Шанин, Е.В. Зиновьев. - СПб., 2003. - 237 с. 165. Шастун С.А. Исследование общих закономерностей адаптации человека к неблагоприятным факторам среды и выявление роли антропогенных воздействий / С.А. Шастун // Сб. трудов XI Междунар. конф. «Новые медицинские технологии и квантовая медицина». – Москва. - 2005. - С. 202. 166. Шипулина Л.Д. Корреляционный анализ противовирусных агентов: гидролизуемых танинов облепихи крушиновидной / Л.Д. Шипулина, О.Н. Толкачёв, О.П. Шейченко, Т.В. Фатеева, Н.М. Крутикова // 4-й Рос. нац. конгр.: Человек и лекарство. Тез. докл. - М. - 1997. - С. 239. 167. Шкаренков А.А. Доклиническое исследование канцерогенной активности гипорамина / А.А. Шкаренков, Л.Д. Шипулина, А.С. Кинзирский, В.В. Португалова, О.И. Лаврик, Л.В. Крепкова // Вопр. биол., мед. и фармац. химии. - 2007. - № 1. - С. 16-20 116 168. Шугам Н.А. Изучение биологически активных веществ облепихи / Н.А. Шугам // Автореф. дисс. канд. биол. наук. - М., 1969. - 26 с. 169. Шустов Е.Б. Влияние актопротектора бемитила на адаптацию организма к гипертермии / Е.Б. Шустов, A.B. Муравьев, A.B. Смирнов // Антигипоксанты и актопротекторы: Итоги и перспективы. — СПб. - 1994. - С. 165. 170. Яковлев Г.П. Растения для нас / Г.П. Яковлев, К.Ф. Блинова. – СПб., 1996. - 653 с. 171. Яременко К.В. Адаптогены в фитотерапии / К.В. Яременко // I Рос. фитотерапевт. съезд: сб. науч. тр. (14-16 марта 2008; Москва). - М. - 2008. - С. 363 -364. 172. Яременко К.В. Учение Н.В. Лазарева о СНПС и адаптогенах как базовая теория профилактической медицины / К.В. Яременко // Психофармакология и биологич. наркология. - 2005. - Т. 5, вып. 4. - С. 108. 173. Ahmed M.S. Treatment of idiopathic membranous nephropathy with the herb Astragalus membranaceus / M.S. Ahmed, S.H. Hou, M.C. Battaglia, M.M. Picken, D.J. Leehey // Am. J. Kidney Dis. – 2007. - Vol. 50. - № 6. - P. 10281032. 174. Andersson S.С. Tocopherols and tocotrienols in sea buckthorn (Hippophae rhamnoides) berries during ripening / S.C. Andersson, K. Rumpunen, E. Johansson, M.E. Olsson // J. Agric. Food Chem. – 2008. - Vol. 56. - № 15. - P. 67016706. 175. Belzung C. Mesuring normal and pathological anxiety-like havior in mice: a review / C. Belzung, G. Griebel // Behav. Brain Res. – 2001. – Vol. 125. – P. 141-149. 176. Bunn H.F. Oxygen sensing and adaptation to hypoxia / H.F. Bunn, R.O. Poyton // Physiol. Rev. - 1996. - Vol. 76. - P. 839-885. 177. Chabert P. Antimitotic properties of resveratrol analog (z,)- trimethoxystilbene / P. Chabert, A. Fougerousse, R. Brouillard // Biofactors. – 2006. - Vol. 27. - № 1-4. - P. 37-46. 117 178. Chawla R. Radioprotective and antioxidant activity of fractionated extracts of berries of Hippophae rhamnoides / R. Chawla, R. Arora, S. Singh, R.K. Sagar, R.K. Sharma, R. Kumar, A. Sharma, M.L. Gupta, S. Singh, J. Prasad, H.A. Khan, A.Swaroop, A.K. Sinha, A.K. Gupta, R.P. Tripathi, P.S. Ahuja // J. Med. Food. – 2007. - Vol. 10. - № 1. - P. 101-109. 179. Chen A.-S. Antioxidant activities of chitibiose and chititriose / A.-S. Chen, T. Taguchi, K. Sakai, K. Kikuchi, M.-W. Wang, I. Miwa // Biol. Pharm. Bull. 2003. - Vol. 26 (9). - P.1326-1330. 180. Chen Z.К. Effect of Astragalus membranaceus on baroreflex sensitivity in spontaneously hypertensive rats / Z.K. Chen, S.J. Ни, X. Zhen, G.B. Wang, J. Sun, Q. Xia, Y.L. Sheng // Zhongguo Zhong Yao Za Zhi. – 2003. - Vol. 28. - № 2. - P. 155-158. 181. Davies K.J. Oxidative stress: The paradox of aerobic life / K.J. Davies // Bio- chem. Sos. Symp. - 1995. - Vol. 61. - P. 1-31. 182. Dawson G.R. Ethological analysis may not be the answer to the problems of the elevated plus-maze / G.R. Dawson, M.D. Tricklebank // Tr. Pharmacol. Sci. – 1995. - Vol. 16. – P. 261. 183. Feng S., Qiao W. Determination methods of baicalin in membranous milk- vetch (Astragalus membranaceus) and its preparations / S. Feng, W. Qiao // Zhongcaoyao. – 1995. - Vol. 26. - № 7. - P. 381-383. 184. File S.E. The interplay of learning and anxiety in the elevated plus-maze / S.E.File // Behav.Brain Res. – 1993. – Vol. 58. – P. 199-202. 185. Ganju L. et al.. Anti-inflammatory activity of Seabuckthorn (Hippophae rhamnoides) leaves / L. Ganju, Y. Padwad, R. Singh, D. Karan, S. Chanda, M. K. Chopra, P. Bhatnagar, R. Kashyap // Fitoterapia. – 2005. – Vol. 80. – № 3. - P 164-167. 186. Gao Z.L. Effect of sea buckthorn on liver fibrosis: a clinical study / Z.L. Gao, X.H. Gu, F.T. Cheng, F.H. Jiang // World J. Gastroenterol. – 2003. - Vol. 9. - № 7. - P. 1615-1617. 118 187. Geetha S. Cytoprotective and antioxidant activity of seabuckthorn (Hippo- phae rhamnoides L.) flavones against tert-butyl hydroperoxide-induced cytotoxicity in lymphocytes / S. Geetha, M.S. Ram, S.K. Sharma, G. Ilavazhagan, P.K. Banerjee, R.C. Sawhney // J. Med. Food. – 2009. - Vol. 12. - № 1. - P. 151-158. 188. Govindarajan R. Studies on the Antioxidant Activities of Desmodium ga- genticum / R. Govindarajan, S. Rastogi, M. Vijayakumar // Biol. Pharm. Bull. 2003. - Vol. 26. - № 10. - P.1424-1427. 189. Gupta A. Influence of sea buckthorn (Hippophae rhamnoides L.) flavone on dermal wound healing in rats / A. Gupta, R. Kumar, K. Pal, V. Singh, P.K. Banerjee, R.C. Sawhney // Mol. Cell. Biochem. – 2006. - Vol. 290. - № 1-2. - P. 193198. 190. Gutzeit D. Preparative isolation and purification of flavonoids and protoca- techuic acid from sea buckthorn juice concentraite (Hippophae rhamnoides L. ssp. rhamnoides) by high-speed counter-current chromatography / D. Gutzeit, V. Wray, P. Winterhalter, G. Gerz // Chromatgraphia. - 2007. - Vol. 65. - № 1/2. - P. 1-7. 191. Haner J. Mechanism of stimulation of human natural killer cytotoxicity by arabinogalactan from Larix occidentalis / J. Haner, F. Anderer // Cancer Immunol. Immunother. - 1993. - Vol. 36. - № 4. - P. 237-244. 192. Hlastala M.P. Physiology of respiration / M.P. Hlastala, H.J. Berger. - New York: Oxford University Press, 1996. - 265 p. 193. Jia R.Z. Neuroprotective effects of Astragalus membranaceus on hypoxia- ischemia brain damage in neonatal rat hippocampus / R.Z. Jia, L. Jiang, L.X. Qiao, P.S. Chen // Zhongguo Zhong Yao Za Zhi. – 2003. - Vol. 28. - № 12. - P. 1174-1177. 194. Kim H. Ginsenosides protect pulmonary vascular endothelium against radi- cal-induced injury / H. Kim // Biochemical and biophysical research communication. – 1992. – Vol. 189. – P.670-676. 195. Kim J.S. NMR assignments including HMBC and 1D-TOCSY data of astra- galosides I, II and isoastragaloside I from the roots of Astragalus membranaceus / 119 J.S. Kim, J.S. Park,C. Kim, J.M. Kim // Saengyak Hakhoechi. – 2000. - Vol. 31. № 1. - P. 34-38. 196. Kim J.S., Kim Ch. A study on the constituents from the roots of Astragalus membranaceus / J.S. Kim, Ch. Kim // Saengyak Hakhochi. – 1997. - Vol. 28. - № 2. - P. 75-79. 197. Koyama Т. Effects of a herbal medicine, Hippophae rhamnoides, on cardi- ovascular functions and coronary microvessels in the spontaneously hypertensive stroke-prone rat / Т. Koyama, A. Taka, Н. Togashi // Clin. Hemorheol. Microcirc. – 2009. - Vol. 41. - № 1. - P. 17-26. 198. Kuo Y.H. Astragalus membranaceus flavonoids (AMF) ameliorate chronic fatigue syndrome induced by food intake restriction plus forced swimming / Y.H. Kuo, W.J. Tsai, S.H. Loke, T.S. Wu, W.F. Chiou // J. Ethnopharmacol. – 2009. Vol. 122. - № 1. - P. 28-34. 199. Li X. The protective effects of three components isolated from Astragalus membranaceus on shock wave lithotripsy induced kidney injury in rabbit model / X. Li, D.L. He, L.L. Zhang, X.F. Chen, Y. Luo, B.W. Sheng, L.H. Yu // Zhonghua Yi Xue Za Zhi. – 2005. - Vol. 85. - № 31. - P. 2201-2206. 200. Liu H Protective effects of astragaloside IV on porcine-serum-inducea ne- patic imrosis in rats and in vitro effects on hepatic stellate cells / H. Liu, W. Wei, W.Y. Sun, X. Li // J. Ethnopharmacol. – 2009. - Vol. 122. - № 3. - P. 502-508. 201. Liu Z.R. Changes of proteomic spectra of total flavones of Hippophae rhamnoides on myocardial protection / Z.R. Liu, Q. Zhang, Y.M. Yang, H. Guan, F.M. Liu // Zhongguo Zhong Yao Za Zhi. – 2008. - Vol. 33. - № 9. - P. 10601063. 202. Luo H.M. Nuclear cardiology study on effective ingredients of Astragalus membranaceus in treating heart failure / H.M. Luo, R.H. Sai, Li Y. // Zhongguo Zhong Xi Yi Jie He Za Zhi. – 1995. - Vol. 15. - № 12. - P. 707-709. 203. Luo Y. Astragaloside IV protects against ischemic brain injury in a murine model of transient focal ischemia / Y. Luo, Z. Qin, Z. Hong, X. Zhang, D. Ding, 120 J.H. Fu, W.D. Zhang, J. Chen // Neurosci. Lett. - 2009. - Vol. 363. - № 3. - P. 218-223. 204. Mao S.P. Modulatory effect of Th2 cytokine in patients with herpes simplex keratitis / S.P. Mao, K.L. Cheng, Y.F Zhou // Zhongguo Zhong Xi Yi Jie He Za Zm. – 2004. - Vol. 24. - № 2 . - P. 121-123. 205. Mastorakos G. Corticotropin releasing hormone and the immune inflamma- tory response/ G.Mastorakos, E.Karoutsou, M.Mizamtsidi // European Journal of Endocrinology. - 2006. - № 155. - P.77-84. 206. Matsuda H. Antioxidant constituents from rhubarb: structural requirements of stilbenes for the activity and structures of two new anthraquinone glucosides / H. Matsuda, T. Morikawa, I. Toguchida, J.Y. Park, S. Harima, M. Yoshikawa // Bioorg. Med. Chem. – 2001. - Vol. 9. - № 1. - P. 41-50. 207. Mc Ewen B.S. Physiology and Neurobiology of Stress and Adaptation: Cen- tral Role of the Brain / B.S. Mc Ewen // Physiol. - 2007. - Rev. 87. - P. 873-904. 208. Mishra К. P. Effect of Seabuckthom (Hippophae rhamnoides) flavone on immune system: an in-vitro approach / K.P. Mishra, S. Chanda, D. Karan, L. Ganju, R.C. Sawhney // Phytother. Res. – 2008. - Vol. 22. - № 11. - P. 1490-1495. 209. Moon M.К. Vasodilatory and anti-inflammatory effects of the aqueous ex- tract of rhubarb via a NO-cGMP pathway / M.K. Moon, D.G. Kang, J.K. Lee, J.S. Kim, H.S. Lee // Life Sci. – 2006. - Vol. 78. - № 14. - P. 1550-1557. 210. Nadal R.A. The effects of caffeine in the social interaction test and on explo- ration in rats: comparison with ethanol and clorazepate / R.A.Nadal, M.A.Pallares, N.S.Ferre // Behav. Pharmacol. – 1993. – Vol. 4. – P. 501-508. 211. Oktyabrsky O. Assessment of anti-oxidant activity of plant extracts using microbial test systems / O. Oktyabrsky, G. Vysochina, N. Muzyka, Z. Samoilova, T. Kukushkina, G. Smirnova // J. Appl. Microbiol. – 2009. - Vol. 106. - № 4. - P. 1175-1783. 212. Perez-Pinzon M.A. Neuroprotective effects of ischemic preconditioning in brain mitochondria following cerebral ischemia / M.A. Perez-Pinzon // J. Bioenrrg. Bio- membr. - 2004. - Vol. 36. - P. 323-327. 121 213. Rе R. Antioxidant activity applying an improved ABTS radical cation deco- lorization assay / R. Rе, N. Pellegrini, A. Proteggente, A. Pannala, M. Yang, C. Rice-Evans // Free Radic. Biol. Med. - 1999. - P.21-23. 214. Saggu S. Adaptogenic and safety evaluation of seabuckthora (Hippophae rhamnoides) leaf extract: a dose dependent study / S. Saggu, H.M. Divekar, V. Gupta, R.C. Sawhney, R.K. Banerjee, R. Kumar // Food Chem. Toxicol. - 2007. Vol. 45. - № 4. - P. 609-617. 215. Saggu S. Effect of seabuckthorn (Hippophae rhamnoides) leaf aqueous and ethanol extracts on avoidance learning during stressful endurance performance of rats: a dose dependent study / S. Saggu, R. Kumar // Phytother. Res. – 2008. Vol. 22. - № 9. - P. 1183-1187. 216. Sakac V. Free oxygen radicals and kidney diseases / V. Sakac, M. Sakac // Med. Pregl. - 2000. - Vol. 53. - № 9-10. - P. 463-474. 217. Seifter S. The estimation of Glycogen with the Antron Reagent / S. Seifter //Arch. Biochem. – 1950. – Vol. 25. – P. 191-200. 218. Shapat A.A. Antiviral and antioxidant activity of flavonoids and proantho- cyanidins from Crataegus sinaica / A.A. Shapat // Planta Med. - 2002. - Vol. 168. - № 6. - P. 539-541. 219. Sharma U.К. Microwave-assisted efficient extraction of different parts of Hippophae rhamnoides for the comparative evaluation of antioxidant activity and quantification of its phenolic constituents by reverse-phase high-performance liquid chromatography (RP-HPLC) / U.K. Sharma, K. Sharma, N. Sharma, A. Sharma, H.P. Singh, A.K. Sinha // J. Agric. Food Chem. – 2008. - Vol. 56. - № 2. - P. 374-379. 220. Shen H.H. Astragalus membranaceus prevents airway hyperreactivity in mice related to Th2 response inhibition / H.H. Shen, K. Wang, W. Li, Y.H. Ying, G.X. Gao, X.B. Li, H.Q. Huang // J. Ethnopharmacol. - 2008. - Vol. 116. - № 2. P. 363-369. 122 221. Shirataki Y. Antioxidative components isolated from the roots of Astragalus membranaceus Bunge (Astragali radix) / Y. Shirataki, M. Takado, S. Yoshida, S. Toda // Phytother. Res. - 1997. - Vol. 11. - №. 8. - P. 603-605. 222. Shukla S.К. Protection from radiation-induced mitochondrial and genomic DNA damage by an extract of Hippophae rhamnoides / S.K. Shukla, P.Chaudhary, I.P. Kumar, N. Samanta, F. Afrin, M.L. Gupta, U.K. Sharma, A.K. Sinha, Y.K. Sharma, R.K. Sharma // Environ. Mol. Mutagen. – 2006. - Vol. 47. № 9. - P. 647-656. 223. Sieghart W. Structure and pharmacology of gamma-aminobutyric acid A receptor subtypes / W.Sieghart // Pharmacol. Revs. – 1995. – Vol. 47. – №. 2. – P. 181-234. 224. Swaroop A. Isolation and characterization of l,3-dicapryloyl-2- linoleoylglycerol: a novel triglyceride from berries of Hippophae rhamnoides / A. Swaroop, A.K. Sinha, R. Chawla, R. Arora, R.K. Sharma, J.K. Kumar // Chem. Pharm. Bull. - 2005. - Vol. 53. - № 8. - P. 1021-1024. 225. Valko M. Free radicals and antioxidants in normal physiological functions and human disease / M. Valko, D. Leibfritz, J. Moncol, M.T. Cronin, M. Mazur, J. Telser // Int. J. Biochem. Cell Biol. - 2007. - Vol. 39. - № 1. - P. 44-84. 226. Valko M. Metals Toxicity and oxidative stress / M. Valko, H. Morris, M.T. Cronin // Curr. Med. Chem. - 2005. - Vol. 12. - № 10. - P. 1161-1208. 227. Vertuani S. The antioxidants and proantioxidants network: an overview / S. Vertuani, A. Angusti, S. Manfredini // Curr. Pharm. Design. - 2004. - Vol. 10. № 14. - P. 1677-1694. 228. Wagner H. Plant adaptogens / H. Wagner, H. Norr, H. Winterhoff // Phyto- medicine. – 1994. – Vol. 1. – P. 63-76. 229. Weisberg R.B. Overview of generalized anxiety disorder: epidemiology, presentation and course / R.B. Weisberg // J Clin Psychiat. – 2009. -Vol. 70. – Suppl., 2. – P.4-9. 123 230. Wu H.L. Astragalus membranaceus promote expression of insulin-like growth factor 1 in rat model of olivo-cerebellar degeneration / H.L. Wu, H.J. Zhou // Zhongguo Zhong Yao Za Zhi. - 2007. - Vol. 32. - № 3. - P. 242-245. 231. Wu Y. Hypoglycemic effect of Astragalus polysaccharide and its effect on PTP1B / Y. Wu, J.P. Ou-Yang, K. Wu, Y. Wang, Y.F. Zhou, C.Y. Wen // Acta Pharmacol. Sin. – 2005. - Vol. 26. - № 3. - P. 345-352. 232. Xing J. Effects of sea buckthorn (Hippophae rhamnoides L.) seed and pulp oils on experimental models of gastric ulcer in rats / J. Xing, B. Yang, Y. Dong, B. Wang, J. Wang, H.P. Kallio // Fitoterapia. – 2002. - Vol. 73. - № 7-8. - P. 644650. 233. Yang Y. Effects of Astragalus membranaceus on TH cell subset function in children with recurrent tonsilittis / Y. Yang, L.D. Wang., Z.B.Chen // Zhongguo Dang Dai Er Ke Za Zhi - 2006Vol 8. - № 5. - P. 376-378. 234. Yu P. Protective effects of Fructus Hippophae total fiavonoids against hy- poxic-ischemic encephalopathy of neonate rat / P. Yu, Y. Jin // Zhonghua Weichan Yixue Zazhi. - 2007. - Vol. 10. - № 3. - P. 192-194. 235. Zhang P.Ch. Studies on the chemical constituents of the fruits from Cratae- gus sanguinea / P.Ch. Zhang, S.X. Xu, H. Guo // Shenyang Huagong Xueyuan Xuebao. 1999. - Vol. 13. - № 2. - P. 87-89. 236. Zhang В.Q. Diphasic effects of Astragalus membranaceus Bunge (Legumi- nosae) on vascular tone in rat thoracic aorta / B.Q. Zhang, S.J. Hu, L.H. Qui, Q.X. Shan, J. Sun, Q. Xia, K. Bian // Biol. Pharm. Bull. 2005. - Vol. 28. - № 8. - P. 1450-1454. 237. Zheng R.X. Chemical constituents from the fruits of Hippophae rhamnoides / R.X. Zheng, X.D. Xu, Z. Tian, J.S. Yang // Nat. Prod. Res. 2009. Vol. 23. - № 15. - P. 1451-1456.
