«Биохимическое изучение клеточного биосенсора на основе

«Биохимическое изучение клеточного биосенсора на основе взаимодействия
углеродов и лектинов»
Актуальность
темы
исследования.
Эта
работа
посвящена
биохимическим
исследованиям гликозилирования раковых клеток и гликана гликопротеинов клеточной
поверхности с сиаловой кислотой специфических лектинов для потенциальной
полезности лектинов на основе анализа, как биосенсор для наступления рака .
Перспективы на метаболические глико- инженерной методике, разработанной для
дискриминации раковых клеток через чувствуя свою измененную экспрессию гликана
поверхности.
Целью диссертационной работы является идентификация углевод - лектиновых
взаимодействий, которые участвуют в распознавании раковых клеток и предложить
новый тип биосенсоров на основе углевод - лектиновых взаимодействий.
Для целей настоящей диссертационной работы были выбраны конкретные задачи:
- Разработка сиаловой кислоты зависит стратегия glycoengineering метаболических для
обнаружения изменений между нормальными и раковыми клетками.
- Определение профилей сиалилирования клеточной поверхности с использованием линии
нормальных и раковых клеток молочной железы.
- Оценки изменении сиалилтрансферазой экспрессии в связанных с раковыми клетками
- Исследование изменении на сиалилирования на молекулярном уровне с использованием
двух различных типов гликопротеинов клеточной мембраны в качестве моделей.
- Предложение метода поверхностно плазменного резонанса (SPR) – биосенсор метод,
основанный на углеводно-лектиновых взаимодействий.
Цель исследования является разработка нового метода обнаружения раковых клеток на
основе специфических паттернов гликозилирования раковых клеток лектин-углеводными
взаимодействиями.
Предметом исследования является описание биохимических исследования на углеводный
- лектинов взаимодействий для достижения в диагностике рака . Кроме того, мы
предлагаемметод биосенсоров , в которых углеводы содержат существенную часть
биологической системы распознавания .
Методологическая база исследования. Междисциплинарное исследование, описанное в
данной диссертации, сочетает в себе технологии, инновации в области химии, биологии и
медицины,
отражающие
стандартные
приемы
и
методы
исследований.
Здесь
используются пять клеточных линий человеческих эпителиальных клеток, MCF10A и
HB4A (нормальные клетки груди), T47D , MCF7 и MDA MB231 (раковые клетки
молочной железы) в качестве модельных систем для мониторинга и детекции изменений в
гликозилировании клеточных поверхностей при обработке сиаловой кислотой в условии
недостатка питательных веществ. Мы исследовали жизнеспособность клеток при
условиях нехватки питательных веществ, внутриклеточные и поверхностные уровни
экспрессии сиаловой кислоты, экспрессию CMP- Neu5Ac синтетазы и сиалилтрансферазы
и дифференциальной экспрессии сиало гликоконъюгат, сиалилирование Muc1 EGFR и
гликопротеинов на поверхности клеткок. Следующие методы использовались в данном
исследовании, включая спектрометрию, проточную цитометрию, НРАЕС, HPAEC, HPLC,
RT-PCR, qRT-PCR, вестерн-блоттинг, иммуно и лектин преципитация,
клеточной
миграции и анализы кровы.
Основные научные позиции выносимые на защиту:
-Воздействие сиаловой кислоты в концентрации 10 mМ в течение 2 часов на MCF10A ,
HB4A , T47D , MCF7 и MDA MB231 клеточные линии не влияет жизнеспособность или
пролиферацию клеток.
- Обработка сиаловой кислотой клеток находящихся в условии нехватки питательных
веществ увеличивает внутриклеточное состояние поверхности и сиаловой кислоты.
- Обработка клеток находящихся в условии нехватки питательных веществ, в частности
злокачественных клеток сиаловой кислотой приводит к повышению связывания
специфических WGA , SNA и MAL- I лектинов с сиаловой кислотой.
- Мы предполагаем, что повышенная экспрессия поверхности Neu5Acα2 → 3Gal и
Neu5Acα2 → 6Gal может повысить WGA , SNA и MAL- я связывания лектинов с
клеточной поверхности после обработки сиаловой кислоты.
- MAL-I лектин показывает лектинов в 2,8 раза увеличилось связывание со
злокачественными клетками после сиаловой кислоты лечения клеток при нехватки
питательных веществ состоянии. MAL- я связывания лектинов дискриминирует
злокачественные клетки от нормальных клеток.
- Злокачественные клетки показывают увеличение в 2.8 раза при сиалилировании
Muc1 и EGFR может быть связано с α2 → 3 и α2 → 6.
- Мы предлагаем лектине углеводов биомолекулярными признание того, что
составляет ядро нового биосенсора гликозилирования.
Теоретическое значение исследования. В первый раз было проиллюстрировано
универсальность и преимущества углевод-лектиновых взаимодействии, а также аспекты
гликозилирования связанные с улучшением диагнозом улучшений и открытая площадка
биосенсоров ячейку, где дальнейшее развитие событий и будет полезно для создания
следующего поколения биосенсоров как привлекательная альтернативой существующим
датчикам.
Практическая значимость нашего исследования ориентировано на исследование профилей
гликозилирования раковых клеток и углевод-лектиновых взаимодействии, привело к
развитию
чувствительного
злокачественных
гликоинженерного
заболеваний.
Характеризуя
подхода
время
для
раннего
биохимического
выявления
проявления
заболевания через обобщенные гликозилирования, а не конкретных антигенов,
обнаружение возможно на более ранних стадиях рака. рекомендации об улучшении
состояния
кредитного
портфеля
коммерческих
банков
и
других
институтов
правотворческой деятельности , которая связана с кредитованием. Кроме того, путем
определения гликозилирования уникальным для активности заболевания и контроля за их
уровней , информация может быть получена от стадии болезни и агрессивность или
эффективноститерапии заболевания в .
Информация о публикациях. На основании полученных данных и результатов этой
диссертации было опубликовано в общей сложности 10 публикаций: три статьи были
опубликованы в местных изданиях журнала, две международные конференции
опубликованных в США, и один предварительный патент в США. А также были
опубликованы две международные конференции в Казахстан; один тезис и одна статья в
международных журналах имеющих высокий импакт-фактор (Thomson Reuters).