Anti-Hantavirus IIFT (IgG, IgM)

Anti-Hantavirus IIFT (IgG, IgM) EUROIMMUN
1
_____________________________________________________________________________________________________
Регистрационное удостоверение ФС №2005/1125 от 18.08.2005 г
Мозаики Хантавирус 1 и 2 РНИФ (IgG, IgM)
Anti-Hantavirus IIFT (IgG, IgM)
Номера по каталогу: FI 278h-####-1, FI 278h-####-2 (см. стр.4)
FI 278h – 1003 -1 G или M
FI 278h – 1005 -1 G или M
FI 278h – 1010 -1 G или M
FI 278h – 2005 -1 G или M
FI 278h – 2010 -1 G или M
Набор на 30 определений (10 предметных стекол×3 зоны)
Набор на 50 определений (10 предметных стекол×5 зон)
Набор на 100 определений (10 предметных стекол×10 зон)
Набор на 100 определений (20 предметных стекол×5 зон)
Набор на 200 определений (20 предметных стекол×10 зон)
Набор был произведен при участии Института Роберта Коха (Robert Koch Institute) в Берлине,
Германия.
ПОКАЗАНИЯ
Геморрагическая лихорадка с почечным синдромом, почечная недостаточность, синдром острой
дыхательной недостаточности, хантавирусный пульмональный синдром.
НАЗНАЧЕНИЕ
Непрямой иммунофлуоресцентный тест для качественного определения in vitro антител классов IgG или
IgM в сыворотке и плазме крови человека.
ПРИНЦИП МЕТОДА
В набор включены предметные стекла с биочиповыми реакционными зонами, поверхность которых покрыта
инфекционными агентами (см. список на стр.4). Стекла инкубируют на первой стадии реакции с образцами
разведенной сыворотки или плазмы крови пациента. Имеющиеся в положительных образцах специфичные
антитела классов IgA, IgG и IgM связываются с антигенами. На второй стадии связавшиеся антитела
выявляют флуоресцентным окрашиванием, которое происходит в результате инкубации стекол с
меченными флуоресцеином антителами к соответствующим иммуноглобулинам человека. Характер
свечения оценивается с помощью флуоресцентного микроскопа.
МАТЕРИАЛЫ И РЕАГЕНТЫ
Необходимые реагенты и материалы, входящие в состав набора на 50 определений (например, FI
278h-1005-1G):
Компоненты набора
1. Предметные стекла, каждое с 5 реакционными зонами (по 6
биочипов на каждой), покрытыми клетками, инфицированными
Хантавирусом (6типов)
2. Конъюгат
меченные флюоресцеином антитела к IgG человека (козы); готовый к
использованию
3. Положительный контроль
содержащий антитела к Хантавирусу (IgG), человека; готовый к
использованию
4. Отрицательный контроль
не содержит антител к Хантавирусу, человека; готовый к
использованию
5. Буфер для разведения образцов
готовый к использованию
6. Соли для ФСБ (фосфатно-солевого буферного раствора, PBS), рН 7,2
7. Твин 20
8. Среда для заливки;
готовая к использованию
9. Покровные стекла (62 мм × 23 мм)
10.
Инструкция к набору
Формат
10 шт.
Символ
SLIDE
1 × 1,5 мл CONJUGATE
1 × 0,1 мл POS CONTROL
1 × 0,1 мл NEG CONTROL
3 × 4,5 мл SAMPLE BUFFER
2 шт.
PBS
2 × 2,0 мл TWEEN 20
1 × 3,0 мл GLYCEROL
12 шт.
1 шт.
COVERGLASS
Серия
Температура хранения
Для in vitro диагностики
Невскрытый набор использовать до
Отдельные предметные стекла (например, номер по каталогу EUROIMMUN FK 278h-1005-1) поставляются
вместе с покровными стеклами. Также можно заказать дополнительно положительный контроль (например,
_____________________________________________________________________________________________________
© Перевод на русский язык ЗАО «АНАЛИТИКА», Москва, 2008
тел.: 737-0363, факс: 737-0365, e-mail: info@analytica.ru
Anti-Hantavirus IIFT (IgG, IgM) EUROIMMUN
2
_____________________________________________________________________________________________________
номер по каталогу CI 278h -0101-1G) и отрицательный контроль (например, номер по каталогу CI 278h 0101-1 Z). Имеются также наборы для определения антител класса IgM (FI 278h-1005-1 M).
Для проведения теста необходимы шаблоны-подложки TRAY , которые не включены в состав набора. Их
можно заказать у фирмы EUROIMMUN (кат. номер ZZ 9999-0110 для предметных стекол, включающих до
10 реакционных зон).
ХРАНЕНИЕ И СТАБИЛЬНОСТЬ НАБОРА
Предметные стекла должны храниться при температуре от минус 40°С (не ниже) до плюс 8 °С, остальные
реагенты набора – при температуре+2 – +8°С. При соблюдении условий хранения стабильность набора
гарантируется в течение 18 месяцев со дня изготовления.
УТИЛИЗАЦИЯ ОТХОДОВ
Обращайтесь с исследуемыми образцами, калибраторами, контролями и предметными стеклами как с
потенциально инфицированными материалами. Все реагенты и материалы, являющиеся отходами, должны
утилизироваться в соответствии с действующими нормативами.
ПРОЦЕДУРА ИССЛЕДОВАНИЯ (реакционные зоны 5 × 5 мм)
Техника TITERPLANE разработана фирмой EUROIMMUN с целью стандартизации иммунологических
анализов: образцы или меченые антитела вначале наносят на реакционные зоны специального шаблонаподложки. Затем в углубления шаблона-подложки помещают предметные стекла с биочипами, так что
сразу все биочипы приходят в соприкосновение с каплями жидкости, и реакция со всеми биочипами
начинается одновременно. Расположение и высота капель точно заданы геометрией всей системы. Все
жидкости заключены в огороженное пространство, поэтому не нужна обычно используемая в таких случаях
”влажная камера”. Таким образом, можно инкубировать в идентичных условиях любое количество
образцов, размещая их один за другим.
Подготовка реагентов и образцов сыворотки или плазмы крови описаны на стр. 3 и 4
Подготовка
данной инструкции.
Нанесение
Нанесите по 25 мкл разведенного образца сыворотки или плазмы крови в каждую
реакционную зону шаблона-подложки. Избегайте образования пузырьков воздуха.
Нанесите до начала инкубации все образцы, исследуемые в данной постановке
анализа (до 200 капель). Для удобства используйте полистироловый шаблон для
нанесения.
Инкубация
образцов
(1-я стадия)
Начните все реакции одновременно, поместив предметные стекла с биочипами в
соответствующие углубления шаблона-подложки. Следите, чтобы каждый образец
контактировал с биочипом на предметном стекле и чтобы отдельные образцы не
соприкасались друг с другом. Инкубируйте в течение 30 минут при комнатной
температуре (от +18 °С до +25 °С).
Промывка
Ополосните предметные стекла под струей буфера ФCБ-Т (используйте стакан или
колбу), сразу же поместите их в промывочную кювету, содержащую ФCБ-Т, и
промывайте в течение как минимум 5 минут. По возможности используйте
встряхивание на шейкере вращательного типа. Промывайте максимум 16 слайдов в
одной кювете, затем замените ФСБ-Т на свежий раствор.
Нанесение
Нанесите по 20 мкл меченых флуоресцеином антител к глобулинам человека в
каждую реакционную зону чистого шаблона-подложки. Все капли реагента должны
быть нанесены до начала 2-й инкубации. Для нанесения используйте пипеткустеппер. Перед использованием меченые антитела необходимо перемешать с
помощью пипетки. Для экономии времени можно нанести конъюгат на отдельные
шаблоны-подложки, пока идет инкубация с разведенными образцами сыворотки или
плазмы крови.
Инкубация
конъюгата
(2-я стадия)
Извлеките одно предметное стекло с биочипом из кюветы с буфером ФCБ-Т, в
течение пяти секунд бумажной салфеткой протрите только заднюю сторону и края по
длине стекла и сразу поместите предметное стекло с биочипами в углубления
шаблона-подложки. Не высушивайте области между реакционными зонами. Следите,
чтобы каждая капля конъюгата контактировала с биочипом на предметном стекле.
Затем ту же процедуру проделайте со следующими предметными стеклами. С этого
момента предохраняйте стекла от воздействия прямых солнечных лучей.
Инкубируйте в течение 30 минут при комнатной температуре (от +18 °С до +25 °С).
Ополосните предметные стекла в течение 1 секунды под струей буфера ФCБ-Т
(используйте стакан или колбу), поместите их сразу в промывочную кювету,
содержащую ФCБ-Т, и промывайте в течение как минимум 5 минут. По возможности
используйте встряхивание на шейкере вращательного типа. Для контрастного
Промывка
_____________________________________________________________________________________________________
© Перевод на русский язык ЗАО «АНАЛИТИКА», Москва, 2008
тел.: 737-0363, факс: 737-0365, e-mail: info@analytica.ru
Anti-Hantavirus IIFT (IgG, IgM) EUROIMMUN
3
_____________________________________________________________________________________________________
окрашивания на каждые 150 мл фосфатного буфера можно добавить 10 капель
синьки Эванса. Промывайте максимум 16 слайдов в одной кювете, затем замените
ФСБ-Т на свежий раствор.
Заливка
Нанесите среду для заливки на покровное стекло – капли объемом 10 мкл на
каждую реакционную зону. Используйте полистироловый шаблон для заливки.
Извлеките одно предметное стекло с биочипами из кюветы с буфером ФCБ-Т,
бумажной салфеткой протрите заднюю сторону, все четыре края стекла, а также всю
поверхность вокруг, но не между реакционными зонами. Положите предметное стекло
биочипами вниз на подготовленное покровное стекло. Сразу проверьте, чтобы
покровное стекло попало в прорези предметного стекла. При необходимости
скорректируйте положение стекол.
Учет
результатов
Флуоресценцию оценивают с помощью микроскопа.
Объектив: для срезов органов 20х, для инфицированных клеток 20х, для клеточных
субстратов 40х.
Фильтр возбуждения: 488 нм, цветоделительное устройство: 510 нм, блокирующий
фильтр: 520 нм.
Источник света: ртутная лампа, 100 ватт, EUROIMMUN LED, EUROStar Bluelight.
ПРИГОТОВЛЕНИЕ И СТАБИЛЬНОСТЬ РЕАГЕНТОВ
Примечание. Реагенты каждой серии подобраны друг к другу, поэтому не следует смешивать в одном
анализе реагенты разных серий. После первого использования все реагенты стабильны до истечения
указанного срока годности при хранении при температуре +2-8°С и предохранении от микробной
контаминации, если ниже не оговорены особые условия хранения.
- Предметные стекла с биочипами
Предметные стекла готовы к использованию. Снимите предохраняющую упаковку со стекла только
после того, как стекло нагреется до комнатной температуры во избежание конденсации влаги и
повреждения субстрата. Промаркируйте стекла фломастером с мягким стержнем. Не дотрагивайтесь до
биочипов. После вскрытия упаковки предметные стекла с биочипами должны быть проинкубированы в
течение 15 минут. Если предохраняющая упаковка повреждена, стекло нельзя использовать для
диагностики.
- Меченые флуоресцеином вторичные антитела (ФИТЦ)
Меченые антитела готовы к использованию. Перед использованием меченые антитела необходимо
тщательно перемешать с помощью пипетки. Конъюгат чувствителен к свету. Предохранять от
воздействия солнечных лучей.
- Положительный и отрицательный контроли
Контроли готовы к использованию. Перед использованием контроли необходимо тщательно
перемешать.
- Буфер для разведения образцов
Готов к использованию.
- ФCБ-Т
1 упаковку «Соли для ФCБ-Т» следует растворить в 1 л дистиллированной воды (оптимальной является
вода для вливаний, вода для инъекций) и смешать с 2 мл Твин 20. Приготовленный ФCБ-Т стабилен в
течение 1 недели при хранении при температуре 2-8 °С и соблюдении правил использования. Если
раствор ФCБ-Т помутнел или в нем появился пророст, использовать его нельзя.
- Среда для заливки
Готова к использованию.
-
Шаблоны-подложки
Поверхность реакционных зон шаблона-подложки должна быть гидрофильна, а поверхность вокруг этих
зон - гидрофобна. Если необходимо, протрите их обезжиривающим реагентом (например, Extran MA 01,
“Merck”) и промойте большим количеством воды. Для дезинфицирования погрузите шаблон-подложку на
1 час в дезинфицирующий раствор (например, в 3% раствор Sekusept Extra, “Henkel”). После
дезинфицирования промойте подложку большим количеством воды и протрите ее фильтровальной
бумагой.
Внимание! Биочипы, покрытые антигенным субстратом, обработаны дезинфицирующим фиксирующим
реагентом. Контроли были проверены на отсутствие антигена гепатита В, а также антител к вирусу гепатита
С, ВИЧ-1 и ВИЧ-2 с помощью методов иммуноферментного анализа и непрямой иммунофлуоресценции.
Однако, все компоненты тест-системы следует считать потенциально инфекционно опасными
материалами и обращаться с ними, соблюдая необходимые меры предосторожности. Часть
реагентов содержит токсичный азид натрия. Избегайте контакта реагентов с кожей.
_____________________________________________________________________________________________________
© Перевод на русский язык ЗАО «АНАЛИТИКА», Москва, 2008
тел.: 737-0363, факс: 737-0365, e-mail: info@analytica.ru
Anti-Hantavirus IIFT (IgG, IgM) EUROIMMUN
4
_____________________________________________________________________________________________________
ПОДГОТОВКА И СТАБИЛЬНОСТЬ ИССЛЕДУЕМЫХ ОБРАЗЦОВ
Исследуемые образцы:
Сыворотка или плазма (с ЭДТА, гепарином или цитратом) крови человека.
Стабильность
Исследуемые образцы сыворотки или плазмы крови могут храниться до 14 дней при температуре 2-8 °С.
Разведенные образцы следует исследовать в течение одного рабочего дня.
Антитела класса IgM
Прежде чем исследовать образцы на наличие специфических антител класса IgM, из сыворотки крови
следует удалить антитела класса IgG ультрацентрифугированием, хроматографией или иммуносорбцией
(например, реагентом EUROSORB, не входящим в состав набора: номер по каталогу EUROIMMUN ZF 12700145). Эти меры предпринимаются для предотвращения связывания ревматоидных факторов класса IgM,
присутствующих в сыворотке крови, с IgG. В противном случае могут быть получены ложноположительные
(по наличию IgM) результаты теста. Это также предотвращает вытеснение из комплекса с антигеном
антител класса IgM специфическими антителами класса IgG, что может привести к ложноотрицательным
результатам. При иммуноабсорбции одновременно удаляются ревматоидные факторы (RF абсорбент).
Расположение субстратов на слайдах:
1
Поле1-10
Название
Номер
1
2
3
4
5
6
Поле 1-10
Название
Номер
1
2
3
4
5
6
1
6
6
6
1
6
1
6
2
5
2
5
2
5
3
4
3
4
3
4
1
2
5
3
4
6
1
6
1
6
1
6
1
6
5
2
5
2
5
2
5
2
5
3
4
3
4
3
4
3
4
2
5
3
4
1
2
3
4
1
6
2
7
3
8
Мозаика Хантавирус 1
FI 278h-1010-1 G или M
Хантавирус тип Хантаан (HTNV)
Хантавирус тип Пуумала (PUUV)
Хантавирус тип Сеул (SEOV)
Хантавирус тип Сааремаа (SAAV)
Хантавирус тип Добрава (DOBV)
Хантавирус тип Син-Номбре (SNV)
Мозаика Хантавирус 2: Евразия
FI 278h-1010-2 G или M
Хантавирус тип Хантаан (HTNV)
Хантавирус тип Пуумала (PUUV)
Хантавирус тип Сеул (SEOV)
Хантавирус тип Сааремаа (SAAV)
Хантавирус тип Добрава (DOBV)
Не инфицированные клетки
4
9
5
10
Рекомендуемое
разведение
IgG
IgM
1:100
1:100
Рекомендуемое
разведение
IgG
IgM
1:100
1:100
Рекомендуемые разведения образцов для качественного анализа
Определение антител класса IgG. Образцы сыворотки или плазмы крови пациентов разводят 1:100
буфером для разведения образцов. Например, разведите 11,1 мкл исследуемого образца в 100 мкл буфера
для разведения образцов и тщательно перемешайте (например, на вортексе в течение 4 секунд), а затем
11,1мкл разведения 1:10 добавьте в 100мкл буфера для разведения образцов и перемешайте еще раз.
Определение антител класса IgM. Для иммуносорбции исследуемые образцы сыворотки или плазмы
крови пациентов разводят 1:100. Сначала 1:10 реагентом EUROSORB, разведите 11,1 мкл исследуемого
_____________________________________________________________________________________________________
© Перевод на русский язык ЗАО «АНАЛИТИКА», Москва, 2008
тел.: 737-0363, факс: 737-0365, e-mail: info@analytica.ru
Anti-Hantavirus IIFT (IgG, IgM) EUROIMMUN
5
_____________________________________________________________________________________________________
образца в 100 мкл реагента EUROSORB и тщательно перемешайте (например, на вортексе в течение 4
секунд). Проинкубируйте смесь в течение 15 минут при комнатной температуре и затем отцентрифугируйте
(5 минут, 2000 об/мин, при комнатной температуре). Получивщийся супернатант разведите 1:10 буфером
для разведения образцов, к 11,1 мкл супернатанта добавьте 100 мкл буфера и тщательно перемешайте
(например, на вортексе в течение 4 секунд). Итоговое разведение получилось 1:100. Если антитела класса
IgG удаляются ультрацентрифугированием или хроматографией, образцы также должны быть доведены до
конечного разведения 1:100. Разведите 11,1 мкл исследуемого образца в 100 мкл буфера для разведения
образцов и тщательно перемешайте (например, на вортексе в течение 4 секунд). Из полученного
разведения 1:10 отберите 11,1мкл и внесите в 100мкл буфера для разведения образцов и перемешайте.
Рекомендуемые разведения образцов для количественного анализа
Образцы сыворотки или плазмы крови пациентов разводят буфером для разведения образцов. Для
разведения образцов смешать 100 мкл буфера для разведения образцов и 11,1 мкл следующего более
концентрированного разведения, затем смесь перемешивают (например, на вортексе в течение 4 секунд).
EUROIMMUN рекомендует использовать для анализа образцы, начиная с разведения 1:100 (IgG, IgM).
Разведение
1:10
1:100
Схема разведения
100 мкл ФСБ-Т + 11,1 мкл неразведенного
образца
11.1
100 мкл ФСБ-Т + 11,1 мкл образца,
разведенного 1:10
11.1
1:1000
100 мкл ФСБ-Т + 11,1 мкл образца,
разведенного 1:100
...
...
После каждых двух
шагов разведения
следует сменить
наконечники на
новые для
предотвращения
выбросов
ОЦЕНКА РЕЗУЛЬТАТОВ
Образец положительной реакции флюоресценции
При наличии в образце антител к Хантавирусу наблюдается флюоресцентное свечение в виде мелких
капель в цитоплазме инфицированных клеток. Некоторые клетки в поле зрения не инфицированы, в них
отсутствует специфическая флюоресценция.
Если в образце пациента содержатся антитела к Хантавирусу, то должно наблюдаться такое же свечение,
как и с положительной контрольной сывороткой.
Если флюоресцируют ядра или цитоплазма всех клеток, включая неинфицированные клетки, это
свидетельствует о наличии антиядерных антител или антител к митохондриям и другим клеточным
антигенам.
Если с положительным контролем не происходит специфической флюоресценции или явная
специфическая флюоресценция наблюдается с отрицательным контролем, результаты анализа не
учитывают, тест следует повторить.
На веб-сайте фирмы EUROIMMUN (www.euroimmun.com) можно найти широкий спектр примеров различных
картин флюоресценции.
Качественный анализ
Антитела класса IgG
Отсутствие реакции при разведении 1:100
Оценка
Отрицательная. Антитела класса IgG к Хантавирусу не
выявлены.
Инфекция не может быть исключена.
Положительная реакция при разведении 1:100 Положительная. Прошлая или острая инфекция.
Антитела класса IgM
Отсутствие реакции при разведении 1:100
Оценка
Отрицательная. Антитела класса IgM к Хантавирусу не
выявлены.
Инфекция не может быть исключена.
Положительная реакция при разведении 1:100 Положительная. Показатель острой инфекции.
_____________________________________________________________________________________________________
© Перевод на русский язык ЗАО «АНАЛИТИКА», Москва, 2008
тел.: 737-0363, факс: 737-0365, e-mail: info@analytica.ru
Anti-Hantavirus IIFT (IgG, IgM) EUROIMMUN
6
_____________________________________________________________________________________________________
Количественный анализ
Титр определяют как разведение образца, при котором специфическая флюоресценция еще вполне
отчетлива. При этом следует проводить сравнение с реакцией, полученной при эквивалентном разведении
отрицательной сыворотки крови.
Титр антител можно оценить по результатам флюоресценции, полученным при различных разведениях
образца, используя следующую таблицу.
1:10
слабая
средняя
сильная
сильная
сильная
сильная
сильная
.
.
.
Флюоресценция при разведении образца
1:100
1:1000
отсутствует
отсутствует
отсутствует
отсутствует
слабая
отсутствует
средняя
отсутствует
сильная
слабая
сильная
средняя
сильная
сильная
.
.
.
1:10 000
отсутствует
отсутствует
отсутствует
отсутствует
отсутствует
отсутствует
слабая
.
.
.
Титр антител
1:10
1:32
1:100
1:320
1:1000
1:3200
1:10 000
.
.
.
.
.
.
Увеличение титра антител класса IgG в два и более раз в течение двухнедельного периода
свидетельствует о наличии острой инфекции.
При постановке диагноза наряду с серологическими результатами следует всегда учитывать и клинические
симптомы.
АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
Антиген
При определении антител к Hantavirus путем непрямой иммунофлюоресценции в качестве стандартного
субстрата использовали клетки инфицированные Хантавирусом типа EU 14.
Стабильность
При соблюдении условий хранения стабильность набора гарантируется в течение 18 месяцев со дня
изготовления.
Диапазон определения
Начальными разведением для данной тест-системы является 1:100 (IgG, IgМ). Далее образцы можно
разводить с шагом 10, так что получается серия разведений 1:1000, 1:10000 и т.д. Верхнего предела
определения нет.
Воспроизводимость в пределах одной постановки
Воспроизводимость в пределах одной постановки оценивали более чем по 10 различным сериям. При
количественном анализе отклонения составляли не более + 1 уровня интенсивности флюоресценции.
Таким образом, гарантируется воспроизводимость в пределах одной постановки. Интенсивность
специфической флюоресценции в числовом выражении фирмой EUROIMMUN называется уровнем
интенсивности флюоресценции. Эта величина может измеряться числами от «0» (отсутствие
специфической флюоресценции) до «5» (чрезвычайно высокая степень специфической флюоресценции).
Воспроизводимость между постановками
Воспроизводимость между постановками оценивали более чем по 10 различным сериям. При
количественном анализе отклонения составляли не более + 1 уровня интенсивности флюоресценции.
Таким образом, гарантируется также и воспроизводимость между постановками.
Воспроизводимость между сериями
Воспроизводимость между сериями оценивали более чем по 10 различным сериям. При количественном
анализе отклонения составляли не более + 1 уровня интенсивности флюоресценции.
Перекрестные реакции
Следующие сыворотки (происхождение: Институт Роберта Коха, Берлин, Германия и Лаборатория Dr.
Stöcker, Гросс Грёнау (Groß Grönau), Германия показали положительную реакцию при анализе набором на
антитела к Хантавирусу Anti-Hantavirus IIFT:
Anti-Krim-Kongo fever virus – вирус Геморрагической лихорадки Крымской – Конго (IgG, n=5):
20% (IgG)
Anti-Sandfly fever virus – вирус флеботомной лихорадки (IgG, n=4):
0% (IgG)
Распространенность антител к Хантавирусу составляет 3,8% (IgG ). Ее определяли на панели образцов
сывороток крови здоровых доноров из Германии методом непрямой иммунофлюоресценции наборами
EUROIMMUN IIFT. Перекрестная реакция с антителами к вирусу Крымской – Конго геморрагической
лихорадки (IgG) не исключается, а с антителами к вирусу флеботомной лихорадки (IgG) маловероятна.
_____________________________________________________________________________________________________
© Перевод на русский язык ЗАО «АНАЛИТИКА», Москва, 2008
тел.: 737-0363, факс: 737-0365, e-mail: info@analytica.ru
Anti-Hantavirus IIFT (IgG, IgM) EUROIMMUN
7
_____________________________________________________________________________________________________
Влияние гемоглобина, триглицеридов и билирубина
Не отмечено искажения результатов при исследовании данным набором гемолизированных, липемических
или желтушных образцов сывороток.
Референсные значения Титр ≥1:100
Следующая распространенность антител была обнаружена на панели образцов сывороток крови здоровых
доноров из Германии, Турции и Зимбабве:
Антитела
Хантавирус, общий
Хантавирус, тип Хантаан (HTNV)
Хантавирус, тип Пуумала (PUUV)
Хантавирус, тип Сеул (SEOV)
Хантавиру, тип Син-Номбре (SNV)
Хантавирус, тип Добрава (DOBV)
Хантавирус, тип Сааремаа (SAAV)
IgG (n = 260)
IgM (n = 149)
3.8%
3.1%
0%
0%
0.4%
0.4%
0%
3.4%
2.0%
1.3%
0%
0.7%
0%
0%
Специфичность и чувствительность:
Чувствительность и специфичность набора на Anti-Hantavirus IIFT анализировали с использованием
образцов (ранее серологически охарактеризованных в соответствующих институтах) сывороток пациентов
инфицированных Хантавирусом (типы Пуумала (PUUV), Сеул (SEOV) и Син-Номбре (SNV)) и здоровых
доноров (в качестве отрицательного контроля).
Anti-Hantavirus положительные (IgG)
IgG
n=
PUUV пациенты
52
SEOV пациенты
5
DOBV пациенты
8
SNV пациенты
20
Доноры крови
89
HTNV
PUUV
SEOV
SAAV
DOBV
SNV
41
(79%)
5
(100%)
8
(100%)
1
(5%)
2
(2%)
52
(100%)
5
(100%)
3
(38%)
12
(60%)
0
(0%)
20
(38%)
5
(100%)
8
(100%)
0
(0%)
0
(0%)
15
(29%)
5
(100%)
8
(100%)
0
(0%)
0
(0%)
15
(29%)
5
(100%)
8
(100%)
0
(0%)
0
(0%)
40
(77%)
5
(100%)
3
(38%)
18
(90%)
0
(0%)
Hantavirus
суммарный
52
(100%)
5
(100%)
8
(100%)
19
(95%)
2
(2%)
Специфичность (суммарная)
98%
Чувствительность (суммарная)
99%
Anti-Hantavirus положительные (IgM)
IgM
n=
PUUV пациенты
52
SEOV пациенты
5
DOBV пациенты
3
SNV пациенты
17
Доноры крови
89
HTNV
PUUV
SEOV
SAAV
DOBV
SNV
25
(48%)
5
(100%)
3
(100%)
1
(6%)
0
(0%)
51
(98%)
3
(60%)
0
(0%)
8
(47%)
0
(0%)
8
(15%)
4
(80%)
2
(67%)
0
(0%)
0
(0%)
3
(6%)
4
(80%)
3
(100%)
0
(0%)
0
(0%)
6
(12%)
3
(60%)
3
(100%)
0
(0%)
0
(0%)
40
(77%)
2
(40%)
1
(33%)
15
(88%)
0
(0%)
Hantavirus
суммарный
51
(98%)
5
(100%)
3
(100%)
16
(94%)
0
(0%)
Специфичность (суммарная)
100%
Чувствительность (суммарная)
97%
Ссылки:
(1) n=52 (IgG,IgM) использовались сыворотки пациентов инфицированных Хантавирусом тип
Пуумала, который вызывает геморрагическую лихорадку с почечным синдромом; происхождение
_____________________________________________________________________________________________________
© Перевод на русский язык ЗАО «АНАЛИТИКА», Москва, 2008
тел.: 737-0363, факс: 737-0365, e-mail: info@analytica.ru
Anti-Hantavirus IIFT (IgG, IgM) EUROIMMUN
8
_____________________________________________________________________________________________________
образцов – Институт Хаартмана, Университет Хельсинки, Финляндия (Haartman Institute, University
of Helsinki)
(2)
n=5 (IgG,IgM) использовались сыворотки пациентов азиатского региона инфицированных
Хантавирусом тип Сеул, который вызывает геморрагическую лихорадку с почечным синдромом;
происхождение образцов – отделение микробиологии Медицинского Факультета, Китайский
Университет Гонконга, Китай (Medical Faculty, Chinese University of Hongkong)
(3)
n=20 (IgG) и n=17 (IgM) использовались сыворотки пациентов инфицированных Хантавирусом тип
Син-Номбре, который вызывает пульмональный синдром; происхождение образцов –
национальная микробиологическая лаборатория, Федеральный Департамент Здравоохранения
Канады, Виннипег, Канада (Health Canada, Winnipeg, Canada)
(4)
n=8 (IgG) и n=3 (IgM) использовались сыворотки пациентов инфицированных Хантавирусом тип
Добрава, который вызывает геморрагическую лихорадку с почечным синдромом; происхождение
образцов – референсный центр изучения арбовирусов, лаборатория инфекций распространяемых
животными-переносчиками, Институт Иоана Кантакузино (Cantacuzino Institute), Бухарест, Румыния
(5)
n=89 (IgG,IgM) использовались сыворотки здоровых доноров крови; происхождение образцов –
клиника Университета Шлезвиг-Гольштейн (Schleswig-Holstein), Университетский городок, Любек и
национальная микробиологическая лаборатория, Федеральный Департамент Здравоохранения
Канады, Виннипег, Канада
КЛИНИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ
Хантавирусы – это одноцепочечные РНК вирусы (ssRNA) относящиеся к роду буньявирусов (Bunyaviridiae),
геном представлен одноцепочечной минус-цепью РНК, состоящей из трех сегментов.
Переносчиками хантавирусов служат различные виды инфицированных крыс и мышей (в их организме
вирус сохраняется долгое время), постоянно выделяющих вирус во внешнюю среду через слюну,
экскременты, мочу. Вирус попадает в организм человека через респираторный тракт, при вдыхании пыли
или аэрозолей содержащих частицы экскрементов инфицированных грызунов (часто с бессимптомной
инфекцией).
Хантавирус широко распространен во всем мире:
Серотип
Хантавируса
Область распространения
Переносчик
Заболевание
Полосатая
HFRS
полевая мышь
Син-Номбре
Белоногая
HPS
оленья мышь
Центральная, северная и западная Европа, Рыжая лесная
Пуумала
HFRS
западные области России.
полёвка
Добрава
Балканские государства
Желтогорлая
HFRS
мышь
Распространён во всём мире
Серая или
HFRS
Сеул
амбарная крыса
Центральная
Европа,
Северные
и Полосатая
Сааремаа
HFRS
Балтийские страны
полевая мышь
HFRS (ГЛПС) = haemorrhagic fever with renal syndrome, геморрагическая лихорадка с почечным синдромом;
Хантаан
Корея и Юго-Восточная Азия, восточные
области России, юг Европы
Северная и Южная Америка
HPS (ГПС) = Hantavirus pulmonary syndrome, хантавирусный пульмональный синдром.
Хантавирусы типа Хаантан, Сеул, Пуумала и Добрава являются возбудителями такого заболевания как
геморрагический нефрозо-нефрит или геморрагическая лихорадка с почечным синдромом, причем степень
проявления заболевания зависит от типа вызвавшего его вируса. ГЛПС лечится химиотерапией.
Инкубационный период длиться от 5 до 35 дней. Заболевание обычно начинается с резкого повышения
температуры, которая длится 3-4 дня, и неспецифичных гриппоподобных симптомов, например, головная
боль, боль в мышцах, озноб и конъюнктивит. Эта фаза продолжается 4-10 дней. Приблизительно в 30 %
случаев появляются признаки геморрагического синдрома: петехиальная сыпь, преимущественно на груди,
кровоизлияния в склеры и слизистые оболочки, носовые и кишечные кровотечения, (из-за повышенной
проницаемости мелких кровеносных сосудов), тромбоцитопения (пониженное содержание тромбоцитов в
крови), гематурия (наличие крови в моче) и протеинурия (повышенное содержание белка в моче). Функция
почек может быть снижена настолько, что потребуется диализ. Уровень смертность при эпидемической
нефропатии составляет приблизительно 1%. Приблизительно в 16 % случаев острая почечная
недостаточность связана с нарушениями функции легких, при которых наблюдается перибронхиальный
инфильтрат и плевральный выпот. Первая неделя инфекции характеризуется снижением кровяного
_____________________________________________________________________________________________________
© Перевод на русский язык ЗАО «АНАЛИТИКА», Москва, 2008
тел.: 737-0363, факс: 737-0365, e-mail: info@analytica.ru
Anti-Hantavirus IIFT (IgG, IgM) EUROIMMUN
9
_____________________________________________________________________________________________________
давления, которое приводит к шоковому состоянию у 1-15% пациентов и является фатальным в одном из
трех случаев.
Период реконвалесценции протекает медленно, с постепенным восстановлением функции почек,
сопровождается длительной астенизацией, лабильностью сердечно-сосудистой системы, часто симптомы и
нарушения в уровнях электролитов держатся до 3-х месяцев.
Хантавирус серотип Пуумала вызывает более мягкую версию геморрагической лихорадки с почечным
синдромом, который часто называют эпидемической нефропатией. Переносчиком вируса этого серотипа
является рыжая лесная полёвка. Так как вирусные частицы, например, в пыли, остаются инфекционно
опасными в течение длительного времени, уборка наполненных мышами подвалов, чердаков или работа в
лесу – типичные пути передачи инфекции.
С 2005 года возросло количество случаев заражения хантавирусной инфекцией в Европе. Только в
Германии было зарегистрировано более 500 случаев заболевания, реальное же количество, включая
незарегистрированные случаи, значительно выше.
Другой серотип Хантавируса, Син-Номбре был выделен в США в 1993 году. В отличие от других серотипов
он вызывает инфекцию респираторного тракта, которая выражается очень тяжелой формой пневмонии
(хантавирусный пульмональный синдром) с уровнем смертности около 60% от общего количества
зараженных.
В настоящее время не существует надежной вакцины против Хантавируса. В связи с этим следующие
профилактические меры приобретают особую важность: по возможности предотвращение контакта с
зараженной землей и пылью, ношение масок при уборке. Единственно это не возможно для групп риска:
работников ферм, каналов, дорожных рабочих.
Хантавирусная инфекция устанавливается серологическим путем. Антитела класса IgM к Хантавирусу
определяются уже на ранних стадиях заболевания, часто еще до появления симптомов; антитела класса
IgG несколько дней спустя. Обычно через 2-3 месяца антитела класса IgM уже не обнаруживаются в
сыворотке крови, хотя слабоположительная реакция на IgM антитела может сохраняться в отдельных
случаях на протяжении 1-3 лет после инфекции. Антитела IgG, как предполагают, сохраняются на
несколько лет, десятилетий или даже на протяжении всей жизни.
Вследствие того, что имеются существенные серологические различия между типами Хантавирусов и во
многих областях могут встречаться сразу несколько серотипов, рекомендуется для дифференцирования
типов вируса и постановки правильного диагноза проводить анализ с использованием
иммунофлюоресцентных мозаик.
СПИСОК ЦИТИРУЕМОЙ ЛИТЕРАТУРЫ
Список литературы приведен в оригинале инструкции на английском языке.
Внимание! Перевод сделан с английского оригинала инструкции. Перед постановкой исследования
сверьте номер и дату издания вложенного в набор оригинала с указанными в настоящем переводе (см.
внизу справа). При несовпадении номеров или дат обратитесь в «Аналитику» за новым переводом, либо
руководствуйтесь оригиналом инструкции.
Mosaic-Hantavirus FI 278h-1GM_rus
9/8/2008 3:37:00 PM
Оригинал
FI_278h-1GM_A_UK_C04.doc Version:21.08.2008 17:49
_____________________________________________________________________________________________________
© Перевод на русский язык ЗАО «АНАЛИТИКА», Москва, 2008
тел.: 737-0363, факс: 737-0365, e-mail: info@analytica.ru
Anti-Hantavirus IIFT (IgG, IgM) EUROIMMUN
10
_____________________________________________________________________________________________________
Техника TITERPLANE
_____________________________________________________________________________________________________
© Перевод на русский язык ЗАО «АНАЛИТИКА», Москва, 2008
тел.: 737-0363, факс: 737-0365, e-mail: info@analytica.ru
Anti-Hantavirus IIFT (IgG, IgM) EUROIMMUN
11
_____________________________________________________________________________________________________
Слайды для непрямой иммунофлуоресценции могут быть изготовлены как с одним субстратом, так
и с мозаикой Биочипов (до 45 различных субстратов в соответствии с Вашими требованиями).
Щитовидная железа, околощитовидная железа, поджелудочная железа, надпочечная железа, яичник,
плацента, яички, сперматозоиды, гипофиз, гипоталамус*, головной мозг, мозжечок, варолиев мост*, черная
субстанция*, периферические нервы, спинной мозг, глаз*, гранулоциты (фиксированные этанолом или
формальдегидом), лимфоциты*, тромбоциты, почка, легкое*, печень, слизистая рта, тело желудка, полость
желудка, тонкая кишка, прямая кишка, пупочный канатик, молочная железа*, слезная железа*, околоушная
железа, простата*, семенные пузырьки, скелетная мускулатура, миокард, тимус*, липоциты*, хрящ*,
эпидермис, пищевод, язык, губы*, меланоциты*, клетки НЕр-2, клетки НЕр-20-10, почка крысы, почка мыши,
желудок крысы, желудок мыши, печень крысы, печень мыши, пищевод крысы, мочевой пузырь крысы,
Crithidia luciliae и другие.
Аденовирусы, Afipia felis*, Bartonella clarridgeiae, Bartonella henselae, Bartonella quintana, Bordetella
parapertussis, Bordetella pertussis, Borrelia afzelii, Borrelia burgdorferi sensu stricto, Borrelia garinii, Candida
albicans, Candida glabrata*, Candida krusei*, Candida tropicalis*, Candida parapsilosis*, Campylobacter coli*,
Campylobacter jejuni, Chlamydia pneumoniae, Chlamydia trachomatis, Chlamydia psitacci*, ЦМВ, вирусы
Коксаки (А7, А9, А16, А24, от В1 до В6), EBV-CA, EBNA, EBV-EA, Echinococcus granulosus, эховирусы, вирус
клещевого энцефалита, Haemophilus influenzae*, Helicobacter pylori, ВИЧ-1*, ВИЧ-2*, HHV-6, ВПГ-1, ВПГ-2,
HUVEC, вирус гриппа А (штамм Шэнгдонг, Сингапур и Пекин), вирус гриппа В (штамм Панама), Klebsiella
pneumoniae*, Legionella bozemanii*, Legionella dumoffii*, Legionella gormanii*, Legionella jordanis*, Legionella
longbeachae*, Legionella micdadei*, Legionella pneumophila от 1 до 14, Leishmania donovani, Listeria
monocytogenes (1/2a и 4b)*, корь, паротит, Mycoplasma hominis, Mycoplasma pneumoniae, парагрипп типов 14, вирус краснухи, респираторно-синцитальный вирус, вирус тяжелого острого респираторного синдрома,
Saccharomyces cerevisiae, Toxoplasma gondii, Treponema pallidum, Treponema phagedaenis*, Ureaplasma
urealiticum, вирус опоясывающего герпеса, Yersinia enterocolitica (O:3, О:4, О:6 и О:9)*.
EUROPLUS®: почка крысы плюс АМА М2, желудок примата (париетальные клетки) плюс внутренний фактор,
кишечный тракт примата (эндомизий) плюс глиадин.
* На данный момент не могут быть использованы в Евросоюзе.
_____________________________________________________________________________________________________
© Перевод на русский язык ЗАО «АНАЛИТИКА», Москва, 2008
тел.: 737-0363, факс: 737-0365, e-mail: info@analytica.ru