Комплексная диагностика аллергии на металлы in vitro у больных с

Иммунопатология, аллергология, инфектология
Immunopathology, allergology, infectology
2012, №2:8088
АЛЛЕРГОЛОГИЯ
Комплексная диагностика аллергии на металлы in vitro у больных с
непереносимостью металлов
Н.А. Карпук, И.Ю. Карпук
УО «Витебский государственный медицинский университет»
Complex diagnostics of the allergy to metals in vitro at patients with intolerance
of metals
N.A. Karpuk, I.Y. Karpuk
State Medical University, Vitebsk, Belarus
Аннотация
Summary
Описана разработка и клиническая апробация метода ди
агностики аллергии на металлы при помощи реакций ал
лергениндуцированного повреждения лейкоцитов
(РАПЛ) и дегрануляции тучных клеток (РДТК) и имму
ноферментного анализа (ИФА).
Объектом исследования служили группы пациентов с
непереносимостью металлических изделий, с резкополо
жительными, сильноположительными и положительны
ми реакциями по результатам аппликационных проб к
хлоридам: никеля, хрома, кобальта, меди.
Комплексная диагностика аллергии на металлы использо
ванием РАПЛ и ИФА позволяет достигнуть высокой ди
агностической эффективности: по 97,5% с Ni2+, Cr3+ и
Co2+, а с использованием РАПЛ и РДТК – с Ni2+ – 92,5%,
с Cr3+ – 95%, с Co2+ – 90%, с Cu2+ – 95%, что говорит о
возможности использования предложенного метода для
диагностики аллергии к металлам.
Development and clinical approbation of a way of diagnostics
of an allergy to metals by means of reactions of
allergenindutsirovanny damage of leukocytes (RADL) and a
degranulation of corpulent cages (RDCC) and the enzyme
linked immunosorbent assay (ELISA) is described.
As object of research groups of patients with intolerance of
metal products, with harshpositive, strongpositive and positive
reactions by results of patch tests, to chlorides served: nickel,
chrome, cobalt, copper.
Complex diagnostics of an allergy to metals use of RADL and
ELISA allows to reach high diagnostic efficiency: on 97,5 %
from Ni2+, Cr3+ with Co2+ – 100%, and with RADL and RDCC
use – with Ni2+ 95%, with Cr3+ – 97,5%, with Co2+ – 95%, with
Cu2+ – 95% that speaks about possibility of use of the offered
method for allergy diagnostics to metals.
Ключевые слова
Keywords
Аллергия, диагностика, лейкоциты, IgEантитела.
Allergy, diagnostics, leukocytes, IgEantibodies.
Введение
Металлические изделия, используемые в
повседневной жизни, являются сложными,
многокомпонентными металлургическими
продуктами и состоят чаще всего из 4 и более
компонентов. Более 40 элементов периодичес
кой таблицы могут быть использованы в раз
личных сплавах [1,2].
Сложность и разнообразие состава сплавов
затрудняют понимание их и влияния на орга
низм человека. Большинство биологических
эффектов сплавов все еще не изучено изза по
стоянного прогресса в области их разработки.
Данные литературы, касающиеся диагнос
тики аллергии к металлам достаточно проти
воречивы, что обусловлено различными
взглядами на патогенез аллергии к металли
ческим изделиям.
Считается, что развитие аллергических реак
ций к протезным и восстановительным матери
алам может быть обусловлено как немедленны
ми реакциями I типа (анафилактическими),
80
Immunopathology, Allergology, Infectology 2012 N°2
Аллергология: Комплексная диагностика аллергии на металлы in vitro у больных с непереносимостью металлов
так и замедленными реакциями IV типа по
классификации Кумбса [37].
И лишь небольшое количество исследований
указывает на возможность формирования ре
акций II типа и III типа к ионам металлов [8, 9].
Понякиной И.Д., Лебедеву К.А в своих иссле
дования аллергонепереносимости стоматоло
гических сплавов не удалось найти ни специ
фических IgE антител, ни специфических Т
лимфоцитов, это побуждает их утверждать,
что в большинстве клинических случаев непе
реносимость металлических компонентов
зубных протезов развивается по типу аллер
гоидных реакций [10].
Другие авторы считают, что на практике ча
сто клинические проявления аллергонеперено
симости обусловлены смешанными реакциями,
аллергоидные и аллергические реакции либо
аллергические реакции разных типов [11].
Некоторые исследователи рассматривают
контактную аллергию на металлические мате
риалы как аллергический контактный дерма
тит. Сенсибилизация на одно или более ве
ществ развивается в течение нескольких дней,
а клинические проявления могут присутство
вать многие годы после начального контакта
с аллергеном [11].
Таким образом, анализ специальной литера
туры убедительно показывает, что симптомы
аллергических реакций на металлические изде
лия могут сопровождается смешанными меха
низмами аллергии реакциями различных ти
пов. Поэтому нет оснований полностью отно
сить ту или иную клиническую нозологическую
форму только к одному ее типу, а соответствен
но и разрабатывать методы диагностики аллер
гии, направленные на выявление нескольких ти
пов реакций.
Цель исследования: разработка и клиничес
кая апробация метода диагностики аллергии
на металлы с использованием реакций аллерге
ниндуцированного повреждения лейкоцитов и
дегрануляции тучных клеток и иммунофер
ментного анализа.
Материалы и методы
Для решения поставленной задачи нами
были сформированы группы пациентов с не
переносимостью металлических изделий, с
резкоположительными, сильноположительны
ми и положительными реакциями по результа
там АП, к солям NiCl 2(n=20), CrCl 3(n=20),
CoCl2(n=20), CuCl2(n=20). Контрольную группу
составили 20 практически здоровых человек со
поставимых по полу и возрасту с пациентами
исследуемой группы.
Определение IgE%антител к металлам методом
ИФА.
Для выявления IgEантител к ионам ме
таллов мы использовали стандартную имму
ноферментную
тестсистему
фирмы
EUROIMMUN (Германия).
В качестве аллергенов были использованы
аллергодиски с NiHSA, CrHSA, CoHSA, Au
HSA.
Кровь забирали из вены в пробирку и полу
чали сыворотку. Сыворотку хранили в течение
23 дней при температуре 280С. Специфические
IgEантитела, присутствующие в сыворотке па
циента с аллергией на металлы, при внесении
сыворотки в планшету и инкубации 1 час при
370С присоединялись к ионам металлов (аллер
генам), ковалентно связанным с целлюлозными
дисками. Неспецифические IgE удаляли при
промывке. Ферментмеченые анти IgE добав
ляли в систему и инкубировали 1 час при 370С,
после чего образовывался комплекс аллерген
IgEантиIgEщелочная фосфатаза. После пос
ледующей промывки добавляли хромогенный
субстрат (раствор пнитрофенилфосфата – p
NPP), что приводило к развитию желтой окрас
ки реакционной смеси, интенсивность которой
измеряли фотометрически (405 нм).
Для получения сопоставимых результатов
различных серий опытов и исключения зависи
мости от активности компонентов иммунофер
ментной реакции результаты ИФА выражали в
условных единицах (ЕU, Elisa Units), рассчитан
ных по формуле 1 [3]:
EU=(OD оп. х OD ср. сч.): (OD oп. сч.) х 100% (1)
где: EU – значение скорректированной ак
тивности ИФА;
OD оп. – оптическая плотность в лунке с ис
следуемым образцом в данном опыте;
OD оп.ст. – оптическая плотность в лунке с
положительной контрольной сывороткой в
данном опыте;
OD ср.ст. – средняя оптическая плотность в
лунках с положительной контрольной сыво
роткой в серии из независимых опытов.
Положительной реакцию считали: при визу
альной оценке результатов: окраска опытной
пробы была более желтая, чем пробы отрица
тельного контроля, и легко различима. По ок
рашенной шкале – оценка от «+» до «+++». В
других случаях реакцию трактовали как сомни
тельную; при фотометрической оценке резуль
Иммунопатология, Аллергология, Инфектология 2012 N°2
81
Н.А. Карпук, И.Ю. Карпук
татов: оптическая плотность опытной пробы
превышала оптическую плотность пробы отри
цательного контроля не менее чем вдвое, и она
не менее 0,600. При превышении оптической
плотности опытной пробы по сравнению с про
бой отрицательного контроля менее чем в 2
раза, а также в других случаях результат счита
ли сомнительным.
Определение сенсибилизации лейкоцитов с
использованием РАПЛ
В качестве аллергенов использовали раство
ры солей металлов. Оптимальная концентрация
аллергенов для РАПЛ была определена с лейко
цитами 20 пациентов с аллергией на металлы и
20 здоровых лиц без аллергии. Установлено, что
0,01% растворы NiCl 2, CrCl 3, 0,005% раствор
CoCl2 и 0,001% раствор CuCl2 не вызывают не
специфического повреждения лейкоцитов в ре
акции аллергениндуцированного повреждения
лейкоцитов.
Поэтому как аллергены использовали ра
створы солей металлов в физиологическом ра
створе хлорида натрия в вышеуказанных кон
центрациях.
Для исследования из вены 10 мл крови в
пробирку, в которую добавляли 20 ед/мл ге
парина. Использовали суспензию неразделен
ных лейкоцитов, полученных из плазмы кро
ви после её отстаивания 3040 мин. Лейкоци
ты отмывали от плазмы крови раствором
хлорида натрия и готовили их суспензию в
концентрации 2х106 в 1мл.
0,25 – 0,05 мл суспензии лейкоцитов смеши
вали с равным объемом различных концентра
ций испытуемых аллергеноврастворов солей
металлов, к одной пробе (контроль) аллерген
не добавляли. Смеси лейкоцитов с аллергенами
инкубировали при 37°С в течение 30 мин. Все
пробы дублировали. После инкубации смесь
центрифугировали при 1000 об/мин 5 мин, на
досадочную жидкость сливают, добавляют 2
капли 0,1% раствора трипанового синего, ресус
пендировали и подсчитывали в камере Горяева
процент окрашенных лейкоцитов.
Цитотоксический индекс (ЦИ) рассчитыва
ли по формуле 2:
(а–б):а х 100%
(2)
где: а – процент окрашенных клеток в опы
те после инкубации с аллергеном; б – то же, но
в опыте без аллергена [1].
Интерпретация результатов.
Цитотоксические индексы больше 0,15 или
присутствие более 15% поврежденных клеток в
82
опыте по сравнению с контролем, указывают на
наличие сенсибилизации лейкоцитов к испыту
емому аллергену, т.е. на его аллергическую эти
ологическую роль в данном заболевании.
Диагностика IgE зависимой аллергии с
использованием РДТК
1. Подготовка исследуемой сыворотки.
Кровь больного, взятую путем венепункции,
в количестве 57 мл обводили по краю стеклян
ной палочкой, отстаивали до образования сгу
стка, затем центрифугировали при 1500 об/мин,
после этого отбирают сыворотку в пробирку.
Сыворотку хранили при –20°С до исследования,
не допуская повторного замораживания и от
мораживания.
2. Получение тучных клеток мыши.
Мышь декапитировали, в брюшную полость
вводили 58 мл подогретого до 37 °С 0,9 % ра
створа NaCl, приготовленного на 0,15 М фос
фатном буфере рН 7,2, и оставляли мышь на 20
минут периодически массируя ее переднюю
брюшную стенку. Затем послойно вскрывали
брюшную полость и пинцетом выводили петлю
кишечника. Тушку переворачивали в воронку
так, чтобы содержимое брюшной полости сте
кало по петле в пробирку, содержащую 1 мл за
буференного физиологического раствора с 12
каплями гепарина. Перитонеальные клетки от
мывали путем центрифугирования при 1000 об/
мин по 35 минуты дважды, добавляя по 2 мл
зубуференного физиологического раствора.
Полученную суспензию тучных клеток разбав
ляли до концентрации 2,5х105мл забуференным
физиологическим раствором (80100 тучных
клеток в камере Горяева).
Для определения концентрации клеток в
лунку круглодонной планшеты вносили 0,02 мл
суспензии тучных клеток и 0.02 мл красителя
толуидиного синего и подсчитывали камере Го
ряева окрашенные клетки.
3. Приготовление растворов аллергенов в рабо
чей концентрации.
В качестве аллергенов использовали 0,01%
растворы NiCl2, CrCl3, CoCl2 и CuCl2 разведен
ные раствором Хенкса.
4. Приготовление красителя толуидиного сине
го 0,025% спиртового раствора: 25 мл крас
ки растворяли в 100 мл 30% этилового спир
та, рН которого доводят до 3,23,4 добавле
нием ледяной уксусной кислоты, примерно
0,030,04мл на 10 мл красителя.
5. Постановку реакции осуществляли в планше
тах для иммунологических исследований. В
Immunopathology, Allergology, Infectology 2012 N°2
Аллергология: Комплексная диагностика аллергии на металлы in vitro у больных с непереносимостью металлов
опытную лунку вносили 0,02 мл суспензии
тучных клеток, добавляли равные объемы
растворов аллергенов и снова инкубировали
15 минут при 37°С, а затем вносили по 0,02
мл растворов аллергенов и снова инкубиро
вали при тех же условиях еще 15 минут.
Паралельно ставили два контроля: 1)тучные
клетки + сыворотка больного + раствор Хенк
са; 2) тучные клетки + раствор Хенкса + раствор
аллергена.
В опыт и два контроля добавляли 0,02 мл
красителя и проводили учет реакции в камере
Горяева. Подсчитывали количество тучных
клеток, учитывая только целые неповрежден
ные окрашенные клетки, в горизонтальных ря
дах сетки всей камеры. Разница между контро
лем и опытом указывала на количество дегра
нулированных клеток.
Результат реакции рассчитывали по формуле 3:
Х=(КО): К х 100%
(3)
где: Х – процент дегранулированых тучных
клеток;
К – количество клеток в контроле;
О – количество клеток в опыте.
Реакцию считали положительной, если чис
ло окрашенных клеток в опыте уменьшалось на
20%, по сравнению с контролем.
Для качественной оценки степени деграну
ляции базофилов у конкретного пациента вы
деляли три степени дегрануляции:
прирост до 10% – «– » – отрицательная реак
ция;
прирост 10 – 19 % – « ± » – сомнительная ре
акция;
прирост 20 – 40 % – « + » – положительная ре
акция;
прирост более 40 % – « ++ » – резкоположи
тельная реакция.
Для статистической обработки результатов
исследования использована прикладная про
грамма Statistica 6.0.
Расчет диагностических показателей и
экономической эффективности тестов.
Возможность использования предложенных
тестов аллергодиагностики оценивали по четы
рехпольной таблице 2.3. Рассчитывали показа
тели диагностической чувствительности, специ
фичности и диагностической эффективности
[45, с.192].
Диагностическую специфичность теста
(ДС) – способность теста давать отрицательные
результаты у здоровых людей рассчитывали по
формуле 2.3:
ДС= ИО: (ИО + ЛП) х 100%
(3)
Диагностическую чувствительность теста
(ДЧ) – способность теста выявить аллергию у
больных рассчитывали по формуле 2.4:
ДЧ= ИП: ( ИП + ЛО) х 100%
(4)
Диагностическую эффективность теста
(ДЭ) – способность теста правильно отличать
больных аллергией от здоровых рассчитывали
по формуле 2.5:
ДЭ=(ИП+ИО): (ИП+ЛП+ИО+ЛО) х 100% (5)
где: ИО – истинно отрицательные,
ЛО – ложноотрицательные,
ЛП – ложноположительные результаты ис
следования,
ИП – истинно положительные.
Результаты исследования
Результаты диагностики аллергии к Ni 2+in
vitro
В опытную группу (n=20) были включены 5
(25%) пациентов с резкоположительными и 15
(75%) с сильноположительными реакциями к
NiCl2 по данным АП.
По спектру положительных результатов к
NiHSA в опытной группе IgEантитела
встречались у 12 (60%) пациентов в ИФА, к
раствору соли NiCl 2 в РДТК – у 11 (55%), а
РАПЛ была положительна у 16 (80%) пациен
тов (таблица 1).
Таблица 2.3. Оценка клинической эффективности предлагаемого метода диагностики
Предлагаемый метод
Отрицательный результат
Положительный результат
Всего
Стандартный метод
Отрицательный результат
у здоровых
Положительный результат
у больных
Всего
А (ИО)
С (ЛП)
A+C
B (ЛО)
D (ИП)
B+D
A+B
C+D
A+B+C+D
Иммунопатология, Аллергология, Инфектология 2012 N°2
83
Н.А. Карпук, И.Ю. Карпук
При обследовании сывороток крови паци
ентов контрольной группы IgEантитела к Ni
HSA выявлены не были; к раствору соли NiCl2 в
РДТК у 1 (5%) пациента; сенсибилизация лей
коцитов к раствору соли NiCl2 по РАПЛ уста
новлена у 1 (5%) пациента (таблица 2).
Результаты диагностики аллергии к Cr 3+
in vitro
В группу с непереносимостью хрома вошли 6
(30%) пациентов с резкоположительными и 14
(70%) пациентов сильноположительными реак
циями к раствору соли CrCl3 по данным АП.
По спектру положительных результатов к
CrHSA в опытной группе IgEантитела встре
чались у 14 (70%) пациентов по ИФА и у 8
(40%) к раствору соли NiCl2 по РДТК, а РАПЛ
была положительна у 17 (85%) пациентов (таб
лица 3).
У пациентов контрольной группы обнару
жены IgEантитела к Cr HSA методом ИФА у 1
(5%) пациента; сенсибилизация к раствору со
лей CrCl3 в РДТК и по РАПЛ обнаружена у 1
(5%) пациента (таблица 4).
Результаты диагностики аллергии к Co 2+
in vitro
В группу пациентов с непереносимостью ко
бальта вошли ранее обследованные 7 (35%) па
циентов с резкоположительными, 8 (40%) па
Таблица 1. Результаты обследования пациентов с непереносимостью металлических изделий на наличие сенси
билизации к Ni2+, определяемой в РАПЛ, РДТК и ИФА (n=20)
Методы диагностики in vitro
Положительные
реакции n (%)
Отрицательные
реакции n (%)
ИФА
РДТК
РАПЛ
12 (60%)
11 (55%)
16 (80 %)
8 (40%)
9 (45%)
4 (20%)
Таблица 2. Результаты обследования пациентов контрольной группы на наличие сенсибилизации к Ni2+, опреде
ляемой в РАПЛ, РДТК и ИФА (n=20)
Методы диагностики
in vitro
Положительные
реакции n (%)
Отрицательные
реакции n (%)
ИФА
РДТК
РАПЛ
0
1 (5%)
1 (5%)
20(100%)
19 (95%)
19 (95%)
Таблица 3. Результаты обследования пациентов с непереносимостью металлических изделий на наличие сенси
билизации к Cr3+, определяемой в РАПЛ, РДТК и ИФА (n=20)
Методы диагностики
in vitro
ИФА
РДТК
РАПЛ
Положительные
реакции n (%)
14 (70%)
8 (40%)
17 (85%)
Отрицательные
реакции n (%)
6 (30%)
12 (60%)
3 (15%)
Таблица 4. Результаты обследования пациентов контрольной группы на наличие сенсибилизации к Cr3+, опреде
ляемой в РАПЛ, РДТК и ИФА (n=20)
Методы диагностики
in vitro
Положительные
реакции n (%)
Отрицательные
реакции n (%)
ИФА
РДТК
РАПЛ
1 (5%)
1 (5%)
1 (5%)
19 (95%)
19 (95%)
19 (95%)
84
Immunopathology, Allergology, Infectology 2012 N°2
Аллергология: Комплексная диагностика аллергии на металлы in vitro у больных с непереносимостью металлов
циентов с сильноположительными и 5 (25%)
пациентов с положительными реакциями к ра
створу соли CoCl2 по данным АП.
Методом ИФА IgEантитела к CoHSA вы
явлены у 11 (55%) пациентов, с помощью
РДТК сенсибилизация к раствору соли CoCl 2
обнаружена у 14 (70%) пациентов, а РАПЛ
была положительна у 18 (90%) пациентов
(таблица 5).
В контрольной группе пациентов (n=20)
IgEантитела к CoHSA методом ИФА выяв
лены не были; к раствору соли CoCl 2 по РДТК
сенсибилизация отмечена у 2 (10%) пациен
тов; по РАПЛ сенсибилизация лейкоцитов к
раствору соли CoCl 2 выявлена у 1 (5%) паци
ента (таблица 6).
Результаты диагностики аллергии к Au
HSA и CuCl 2 in vitro
В данную группу вошли пациенты с непере
носимостью изделий из сплавов золота по анам
незу и по данным объективного обследования, из
которых у 1(5%) пациента отмечена резкополо
жительная реакция, 7(35%) пациентов сильнопо
ложительные и 12(60%) пациентов положитель
ные реакции к раствору соли CuCl2 in vivo.
С использованием РДТК сенсибилизация к
раствору соли CuCl2 обнаружена у 11 (55%) па
циентов, а РАПЛ была положительна у 15 (75%)
пациентов (таблица 7).
В контрольной группе по РДТК и по РАПЛ
сенсибилизация к раствору соли CuCl2 выявле
на у 1 (5%) пациента (таблица 8).
Таблица 5. Результаты обследования пациентов с непереносимостью металлических изделий на наличие сенси
билизации к Co2+, определяемой в РАПЛ, РДТК и ИФА (n=20)
Методы диагностики
in vitro
Положительные
реакции n (%)
Отрицательные
реакции n (%)
ИФА
РДТК
РАПЛ
11 (55%)
14 (70%)
18 (90%)
9 (45%)
6 (30%)
2 (10%)
Таблица 6. Результаты обследования пациентов контрольной группы на наличие сенсибилизации к Co2+, опре
деляемой в РАПЛ, РДТК и ИФА (n=20)
Методы диагностики
in vitro
Положительные
реакции n (%)
Отрицательные
реакции n (%)
ИФА
РДТК
РАПЛ
0
2 (10%)
1 (5%)
20 (100%)
18 (90%)
19 (95%)
Таблица 7. Результаты обследования пациентов с непереносимостью металлических изделий на наличие сенси
билизации к раствору соли CuCl2, определяемой в РДТК и РАПЛ (n=20)
Методы диагностики
in vitro
Положительные
реакции n (%)
Отрицательные
реакции n (%)
РДТК
РАПЛ
11 (55%)
15 (75%)
9 (45%)
5 (25%)
Таблица 8. Результаты обследования пациентов контрольной группы на наличие сенсибилизации к раствору
соли CuCl2, определяемой в РАПЛ и РДТК (n=20)
Методы диагностики
in vitro
Положительные
реакции n (%)
Отрицательные
реакции n (%)
РДТК
РАПЛ
1 (5%)
1 (5%)
19 (95%)
19 (95%)
Иммунопатология, Аллергология, Инфектология 2012 N°2
85
Н.А. Карпук, И.Ю. Карпук
Методом ИФА IgEантитела к AuHSA
были выявлены у 1(5%) пациента, а в конт
рольной группе пациентов IgEантитела выяв
лены не были.
Обоснование применения комплексного
метода для диагностики аллергии на
металлы и его диагностические
возможности
Анализ полученных данных лабораторной
диагностики аллергии на металлы указывает на
необходимость определения в сыворотке крови
как IgEантител методами ИФА и/или РДТК, так
и определения сенсибилизации гранулоцитов па
циента к металлам в РАПЛ. Совокупность этих
методов обеспечивает высокую эффективность
диагностики аллергии на металлы.
Для обоснования этого нами было проана
лизировано соотношение положительных и от
рицательных реакций между ИФА, РДТК и
РАПЛ в опытной группе и рассчитаны диагно
стические коэффициенты.
Определение сенсибилизации лейкоцитов в
РАПЛ и выявление IgEантител методом ИФА
(РАПЛ/ ИФА) в группах пациентов с сенсиби
лизацией к Ni2+, Cr3+ у 20 (100%) пациентов, к
Co2+ – у 19 (95%) пациентов результаты лабо
раторной диагностики были положительными
(ИП) (таблица 9).
Обследование пациентов опытной группы
комплексным методом с использованием
РАПЛ и РДТК показало наличие сенсибилиза
ции к растворам солей NiCl2, CrCl3 и CuCl2 у 19
(95%) пациентов, а к CoCl2 у 20 (90%) пациен
тов данных групп.
В контрольной группе пациентов при обсле
довании комплексным методом (РАПЛ/ИФА)
отмечено по одному положительному резуль
тату с Ni2+ и Cr3+ (ЛП), а с Co2+ положительных
реакций не было (таблица 5.10).
Определение сенсибилизации к растворам со
лей металлов путем комплексной диагностики с
использованием РАПЛ и РДТК нами зарегистри
ровано по 2 (10%) положительные реакции к
NiCl2 и к CoCl2 и по 1(5%) к CrCl3 и CuCl2.
По результатам обследования пациен
тов опытной и контрольной групп были
рассчитаны диагностические коэффициен
ты для комплексного метода (РАПЛ/ИФА)
(таблица 11).
Из результатов, приведенных в таблице 1,
видно, что достигается высокая ДС, ДЧ и ДЭ
комплексного метода (ИФА/РАПЛ) по опреде
лению сенсибилизации к металлам. Для Ni2+ ди
агностические коэффициенты составили: ДС –
95%, ДЧ – 100% и ДЭ – 97,5%; для Cr3+: ДС –
95%, ДЧ – 100% и ДЭ – 97,5%; для с Co2+: ДС –
100%, ДЧ – 95% и ДЭ – 97,5%.
Диагностические коэффициенты комплекс
ного метода РДТК/РАПЛ оказались достаточно
высокими: для раствора соли NiCl2: ДС – 90%,
ДЧ – 100% и ДЭ – 95%; для раствора соли CrCl3:
ДС – 95%, ДЧ – 100% и ДЭ – 97,5%; для раство
ра соли CoCl2: ДС – 90%, ДЧ – 100% и ДЭ – 95%,
Таблица 9. Результаты обследования комплексным методом пациентов опытной группы (n=20)
Аллергены
«+» РАПЛ
/ИФА n(%)
«–» РАПЛ
/ИФА n(%)
«+» РАПЛ
/ РДТК n(%)
«–» РАПЛ
/РДТК n(%)
хлорид никеля (II)
хлорид хрома(III)
хлорид кобальта(II)
хлорид меди (II)
20 (100%)
20 (100%)
19 (95%)
–
0
0
1 (5%)
–
19 (95%)
19 (95%)
18 (90%)
19 (95%)
1 (5%)
1 (5%)
2 (10%)
1 (5%)
Таблица 5.10. Результаты обследования комплексным методом пациентов контрольной группы
Аллергены
«+» РАПЛ
/ИФА n(%)
«–» РАПЛ
/ИФА n(%)
«+» РАПЛ
/ РДТК n(%)
«–» РАПЛ
/РДТК n(%)
хлорид никеля (II)
хлорид хрома(III)
хлорид кобальта(II)
хлорид меди (II)
19 (95%)
19 (95%)
19 (95%)
–
1 (5%)
1 (5%)
1 (5%)
–
18 (90%)
19 (95%)
18 (90%)
19 (95%)
2 (10%)
1 (5%)
2 (10%)
1 (5%)
86
Immunopathology, Allergology, Infectology 2012 N°2
Аллергология: Комплексная диагностика аллергии на металлы in vitro у больных с непереносимостью металлов
для раствора соли CuCl2: ДС – 95%, ДЧ – 95% и
ДЭ – 95% (таблица 12).
Мы провели сравнение комплексного мето
да аллергодиагностики с клиникой заболева
ния, данными анамнеза, результатами аллерго
диагностики с использованием реакции аллер
гениндуцированного повреждения лейкоцитов.
Установлено достоверное повышение диаг
ностической чувствительности для комплек
сного метода по никелю в РДТК/РАПЛ на 12%
(р Fisher =0,03) и в ИФА/РАПЛ на 17%
(р Fisher=0,02) по сравнению с РАПЛ, по хрому
в РДТК/РАПЛ на 17,6% (р Fisher=0,03) и в ИФА/
РАПЛ на 22,6% (р Fisher=0,02) (р Fisher=0,02) по
сравнению с РАПЛ. При этом для кобальта и
меди статистически значимого повышения
отмечено не было, что вероятно связано либо
с меньшим количеством пациентов в груп
пах, обследованных РАПЛ, либо со сравни
тельно высокой ДЧ РАПЛ в отношении этих
катионов металлов.
Было отмечено статистически достоверное
повышение диагностической эффективности
комплексного метода ИФА/РАПЛ по сравне
нию с РАПЛ: для никеля на 10,61% (рFisher=0,03),
для хрома – на 10,6% (р Fisher=0,05) (рисунок
5.9). Для метода РДТК/РАПЛ мы отметили тен
денцию к увеличению ДЭ. Для кобальта и меди
повышения эффективности комплексного ме
тода отмечено не было.
Заслуживает внимания тот факт, что при
значительном повышении ДЧ и ДЭ статистичес
ки достоверного понижения диагностической
специфичности мы не наблюдали.
Комплексный метод диагностики аллергии к
металлам, включающий реакцию аллергенин
дуцированного повреждения лейкоцитов, реак
цию дегрануляции тучных клеток и иммуно
ферментного анализа, оказался эффективным
у пациентов с непереносимостью металличес
ких изделий.
Выводы
1. Комплексная диагностика аллергии на ме
таллы с использованием реакции аллергенин
дуцированного повреждения лейкоцитов и
иммуноферментного анализа позволяет до
стигнуть высокой диагностической эффек
тивности: по 97,5% с Ni2+, Cr3+ и Co2+.
2. Использование реакции аллергениндуциро
ванного повреждения лейкоцитов в комп
лексе с реакцией дегрануляции тучных кле
ток позволяет выявлять как сенсибилиза
цию лейкоцитов так и наличие свободных
IgEантител, является импортзамещающим
и обладает высокой диагностической эф
фективностью: с раствором соли NiCl2 соста
вила 92,5%, с раствором соли CrCl3 – 95%, с
раствором соли CoCl 2 – 90%, с раствором
соли CuCl2 – 95%.
Таблица 11. Расчет диагностических коэффициентов для растворов солей металлов в группах, обследованных
комплексным методом ИФА/РАПЛ
Аллергены
ИП
ЛП
ИО
ЛО
ДЧ,%
ДС,%
ДЭ,%
Ni2+
Cr 3+
Co 2+
20
20
20
1
1
1
19
19
19
0
0
0
100%
100%
95%
95%
95%
100%
97,5%
97,5%
97,5%
Таблица 12. Расчет диагностических коэффициентов для растворов солей металлов в группах, обследованных
комплексным методом РАПЛ/РДТК
Растворы
солей металлов
ИП
ЛП
ИО
ЛО
ДЧ,%
ДС,%
ДЭ,%
NiCl2
CrCl 3
CoCl 2
CuCl2
20
20
19
19
2
1
2
1
18
19
18
19
0
0
1
1
95%
95%
90%
95%
90%
95%
90%
95%
92,5%
95%
90%
95%
Иммунопатология, Аллергология, Инфектология 2012 N°2
87
Н.А. Карпук, И.Ю. Карпук
Литература
1. Материаловедение в стоматологии / М.М. Гернер, М.А.
Нападов Д.М. Каральник и др.; Под ред. А.И. Рыбакова. М.: Медицина. 1984. 424 с.
7. Merget R., van Kampen V., Braning T. Immediate type
allergies due to metal compounds: platinum salts //
Pneumologie. 2003. Vol.57, №10. P.606611.
2. Материаловедение в стоматологии / М.М. Гернер, М.А.
Нападов Д.М. Каральник и др.; Под ред. А.И. Рыбакова. М.: Медицина. 1984. 424 с.
8. Van Kampen V., Merget R., Bruning T. Immediate type
allergies due to metal nickel // Pneumologie. 2003. Vol.57,
№11. P.667670.
3. Клемпарская Н.Н., Глебова Л.Ф. Новые данные о меха
низме действия химических аллергенов // Гигиена и са
нитария. 1982. .№3 – С. 8182.
9. Лебедев, К. А. Непереносимость зубопротезных мате
риалов / К. А. Лебедев, А. В. Митронин, И. Д. Понякина. –
М.: Кн. дом «ЛИБРОКОМ», 2010. – 208 с.
4. Boneresorbing cytokines in serum of patients with aseptic
loosening of hip prostheses / D. Granchi, E. Verri, G. Ciapetti et
al. // J. Bone Joint Surg. Br. 1998. Vol.80. P.912917.
10. Новиков, Д. К. Лекарственная аллергия / Д. К. Новиков,
Ю. В. Сергеев, П. Д. Новиков; под ред. Д. К. Новикова. – М.:
Нац. акад. микологии. – 2001. – 313 с.
5. Holmstrup P. Reactions of the oral mucosa related to silver
amalgam: a review //J. Oral Pathol. Med. 1991. Vol.20. P.l7.
6. Manual of contact dermatitis. 2 ed. / Ed. S. Fregert Copenhagen: Munksgaard. 1981. 107 p.
11. Bolewska J, Holmstrup P, MollerMadsen B, et al. Amalgam
associated mercury accumulations in normal oral mucosa, oral
mucosa leasions of lichen planus and contact lesions associated
with amalgam. J Oral Pathol Med 1990;19:3942
Сведения об авторах:
Карпук Наталья Анатольевна – аспирант кафедры клинической иммунологии и аллергологии с курсом ФПК и ПК.
Карпук Иван Юрьевич – старший преподаватель кафедры общей стоматологии с курсом ортопедической стоматологии, к.м.н.
Контакты: 210029, Республика Беларусь, г. Витебск, ул. Правды, д. 66, кв. 112., тел. раб.: +375 212 22%53%80, тел. моб.: +375 29 711%97%36, e%mail:
ikarpuk@mail.ru, Карпук Наталья Анатольевна.
Полступила 13.03.2012 г.
88
Immunopathology, Allergology, Infectology 2012 N°2