структура и динамика тубулинового цитоскелета колхицин
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198 Структура и динамика молекулярных систем, 2007 г., Выпуск №1 ɍȾɄ 581.19 ɋɌɊɍɄɌɍɊȺ ɂ ȾɂɇȺɆɂɄȺ ɌɍȻɍɅɂɇɈȼɈȽɈ ɐɂɌɈɋɄȿɅȿɌȺ ɄɈɅɏɂɐɂɇ-ɊȿɁɂɋɌȿɇɌɇɈȽɈ ɄȺɅɅɍɋȺ FAGOPYRUM TATARICUM Ɇɭɯɢɬɨɜ Ⱥ.Ɋ.1, Nick P.2 1 2 Ʉɚɡɚɧɫɤɢɣ ɢɧɫɬɢɬɭɬ ɛɢɨɯɢɦɢɢ ɢ ɛɢɨɮɢɡɢɤɢ Ʉɇɐ ɊȺɇ, Institute of Botany I, Karlsruhe University, Germany Ʌɢɧɢɢ ɤɥɟɬɨɤ, ɭɫɬɨɣɱɢɜɵɟ ɤ ɞɟɣɫɬɜɢɸ ɚɧɬɢɬɭɛɭɥɢɧɨɜɵɯ ɚɝɟɧɬɨɜ, ɩɪɟɞɫɬɚɜɥɹɸɬ ɢɧɬɟɪɟɫ ɤɚɤ ɞɥɹ ɢɫɫɥɟɞɨɜɚɧɢɹ ɮɭɧɤɰɢɣ ɢ ɞɢɧɚɦɢɤɢ ɤɨɦɩɨɧɟɧɬɨɜ ɰɢɬɨɫɤɟɥɟɬɚ ɜ ɪɚɫɬɟɧɢɢ, ɬɚɤ ɢ ɞɥɹ ɢɡɭɱɟɧɢɹ ɦɟɯɚɧɢɡɦɨɜ, ɨɛɟɫɩɟɱɢɜɚɸɳɢɯ ɭɫɬɨɣɱɢɜɨɫɬɶ ɪɚɫɬɟɧɢɣ ɤ ɝɟɪɛɢɰɢɞɚɦ. Ʉ ɧɚɫɬɨɹɳɟɦɭ ɜɪɟɦɟɧɢ ɜɵɹɜɥɟɧɨ ɧɟɫɤɨɥɶɤɨ ɨɫɧɨɜɧɵɯ ɦɟɯɚɧɢɡɦɨɜ, ɨɛɟɫɩɟɱɢɜɚɸɳɢɯ ɪɟɡɢɫɬɟɧɬɧɨɫɬɶ ɤɥɟɬɨɤ ɤ ɢɧɝɢɛɢɬɨɪɚɦ ɬɭɛɭɥɢɧɨɜɨɝɨ ɰɢɬɨɫɤɟɥɟɬɚ. ɉɨɤɚɡɚɧɨ, ɱɬɨ ɪɚɡɥɢɱɧɨɝɨ ɪɨɞɚ ɚɦɢɧɨɤɢɫɥɨɬɧɵɟ ɡɚɦɟɧɵ ɦɨɝɭɬ ɩɪɢɜɨɞɢɬɶ ɤ ɫɧɢɠɟɧɢɸ ɫɪɨɞɫɬɜɚ ɬɭɛɭɥɢɧɚ ɤ ɦɨɥɟɤɭɥɚɦ ɢɧɝɢɛɢɬɨɪɚ [1]. Ⱦɪɭɝɢɟ ɦɟɯɚɧɢɡɦɵ ɭɫɬɨɣɱɢɜɨɫɬɢ - ɷɤɫɩɪɟɫɫɢɹ ɜɵɫɨɤɨɷɮɮɟɤɬɢɜɧɵɯ MAP (Microtubule associated proteins), ɩɨɫɬɬɪɚɧɫɥɹɰɢɨɧɧɚɹ ɦɨɞɢɮɢɤɚɰɢɹ ɬɭɛɭɥɢɧɚ [2] ɢ ɫɜɟɪɯɷɤɫɩɪɟɫɫɢɹ ɢɧɝɢɛɢɪɭɟɦɨɝɨ ɤɨɦɩɨɧɟɧɬɚ. Ɉɞɧɚɤɨ ɜ ɩɨɫɥɟɞɧɟɟ ɜɪɟɦɹ ɩɨɹɜɥɹɟɬɫɹ ɜɫɟ ɛɨɥɶɲɟ ɪɚɛɨɬ, ɞɟɦɨɧɫɬɪɢɪɭɸɳɢɯ, ɱɬɨ ɧɟɪɟɞɤɨ ɞɢɧɚɦɢɤɚ ɦɢɤɪɨɬɪɭɛɨɱɟɤ (ɆɌ) ɦɨɠɟɬ ɢɦɟɬɶ ɛɨɥɶɲɟɟ ɡɧɚɱɟɧɢɟ ɜ ɨɛɟɫɩɟɱɟɧɢɢ ɭɫɬɨɣɱɢɜɨɫɬɢ ɤɥɟɬɨɤ ɤ ɚɧɬɢɬɭɛɭɥɢɧɚɦ, ɱɟɦ ɫɪɨɞɫɬɜɨ ɬɭɛɭɥɢɧɚ ɤ ɢɧɝɢɛɢɬɨɪɭ [3]. Ɇɭɬɚɰɢɢ ɩɨ ɝɟɧɚɦ ɬɭɛɭɥɢɧɨɜɨɝɨ ɰɢɬɨɫɤɟɥɟɬɚ ɦɨɝɭɬ ɩɪɢɞɚɜɚɬɶ ɦɢɤɪɨɬɪɭɛɨɱɤɚɦ ɩɨɜɵɲɟɧɧɭɸ ɫɬɚɛɢɥɶɧɨɫɬɶ ɜ ɫɥɭɱɚɟ ɪɟɡɢɫɬɟɧɬɧɨɫɬɢ ɤ ɚɝɟɧɬɚɦ, ɢɧɝɢɛɢɪɭɸɳɢɦ ɩɨɥɢɦɟɪɢɡɚɰɢɸ ɆɌ [1, 4], ɢ, ɧɚɨɛɨɪɨɬ, ɩɨɧɢɠɟɧɧɭɸ ɫɬɚɛɢɥɶɧɨɫɬɶ, ɜ ɫɥɭɱɚɟ ɚɝɟɧɬɨɜ, ɫɩɨɫɨɛɫɬɜɭɸɳɢɯ ɚɧɨɦɚɥɶɧɨ ɜɵɫɨɤɨɣ ɫɤɨɪɨɫɬɢ ɩɨɥɢɦɟɪɢɡɚɰɢɢ ɆɌ, ɬɚɤɢɯ ɤɚɤ ɬɚɤɫɨɥ. ɉɨɤɚɡɚɧɨ, ɱɬɨ ɰɢɬɨɫɤɟɥɟɬɧɵɟ ɦɭɬɚɧɬɵ ɜ ɪɹɞɟ ɫɥɭɱɚɟɜ, ɞɚɠɟ ɨɤɚɡɵɜɚɸɬɫɹ ɡɚɜɢɫɢɦɵɦɢ ɨɬ ɩɪɢɫɭɬɫɬɜɢɹ ɢɧɝɢɛɢɬɨɪɨɜ ɰɢɬɨɫɤɟɥɟɬɚ ɜ ɫɪɟɞɟ [5]. Ɋɚɧɟɟ ɧɚɦɢ ɛɵɥɚ ɩɨɥɭɱɟɧɚ ɤɨɥɯɢɰɢɧ-ɪɟɡɢɫɬɟɧɬɧɚɹ ɥɢɧɢɹ ɤɚɥɥɭɫɚ CR4 [6]. ɉɪɨɜɟɞɺɧɧɵɟ ɧɚɦɢ ɪɚɧɟɟ ɢɫɫɥɟɞɨɜɚɧɢɹ ɩɨɤɚɡɚɥɢ, ɱɬɨ ɭɫɬɨɣɱɢɜɵɣ ɤ ɤɨɥɯɢɰɢɧɭ ɤɚɥɥɭɫ ɩɨɞɨɛɟɧ ɩɨ ɦɨɪɮɨɥɨɝɢɢ ɢ ɬɤɚɧɟɜɨɦɭ ɫɨɫɬɚɜɭ ɱɭɜɫɬɜɢɬɟɥɶɧɨɦɭ ɤ ɤɨɥɯɢɰɢɧɭ ɧɟɦɨɪɮɨɝɟɧɧɨɦɭ ɤɚɥɥɭɫɭ (NC) ɝɪɟɱɢɯɢ ɬɚɬɚɪɫɤɨɣ, ɨɞɧɚɤɨ ɨɬɥɢɱɚɟɬɫɹ ɨɬ ɧɟɝɨ ɩɨ ɪɹɞɭ ɩɪɢɡɧɚɤɨɜ. ɇɚ ɫɪɟɞɟ ɫ ɤɨɥɯɢɰɢɧɨɦ CR4 ɯɚɪɚɤɬɟɪɢɡɭɟɬɫɹ ɦɟɧɶɲɟɣ ɩɪɨɞɨɥɠɢɬɟɥɶɧɨɫɬɶɸ ɩɚɫɫɚɠɚ ɢ ɛɨɥɶɲɢɦ ɩɪɢɪɨɫɬɨɦ ɛɢɨɦɚɫɫɵ, ɩɨ ɫɪɚɜɧɟɧɢɸ ɫ NC. Ʉɪɨɦɟ ɬɨɝɨ, ɧɚ ɫɪɟɞɟ ɫ ɤɨɥɯɢɰɢɧɨɦ CR4 ɪɚɫɬɟɬ ɫ ɛɨɥɶɲɟɣ ɫɤɨɪɨɫɬɶɸ, ɱɟɦ ɧɚ ɫɪɟɞɟ ɛɟɡ ɷɬɨɝɨ ɢɧɝɢɛɢɬɨɪɚ. ɉɥɨɢɞɧɨɫɬɶ Раздел 1 199 ɤɥɟɬɨɤ ɤɚɥɥɭɫɚ CR4 ɜɚɪɶɢɪɭɟɬ ɜ ɦɟɧɟɟ ɲɢɪɨɤɢɯ ɩɪɟɞɟɥɚɯ, ɱɟɦ ɭ NC (25 n ɩɪɨɬɢɜ 2-8 n). ɑɚɫɬɨɬɚ ɯɪɨɦɨɫɨɦɧɵɯ ɚɛɟɪɪɚɰɢɣ ɜ ɤɥɟɬɤɚɯ CR4 ɫɨɫɬɚɜɥɹɟɬ 80%, ɩɪɨɬɢɜ 5-30 % ɭ NC [6]. ɐɟɥɶɸ ɧɚɲɟɣ ɪɚɛɨɬɵ ɛɵɥɨ ɢɫɫɥɟɞɨɜɚɬɶ ɨɫɨɛɟɧɧɨɫɬɢ ɫɬɪɭɤɬɭɪɵ ɢ ɞɢɧɚɦɢɤɢ ɬɭɛɭɥɢɧɨɜɨɝɨ ɰɢɬɨɫɤɟɥɟɬɚ ɤɨɥɯɢɰɢɧ-ɪɟɡɢɫɬɟɧɬɧɨɣ ɥɢɧɢɢ ɤɥɟɬɨɤ CR4 ɤɚɥɥɭɫɚ F. tataricum. Ɇɚɬɟɪɢɚɥɵ ɢ ɦɟɬɨɞɵ ȼ ɤɚɱɟɫɬɜɟ ɨɛɴɟɤɬɚ ɢɫɫɥɟɞɨɜɚɧɢɹ ɦɵ ɢɫɩɨɥɶɡɨɜɚɥɢ ɤɨɥɯɢɰɢɧɪɟɡɢɫɬɟɧɬɧɭɸ (CR4) ɢ ɧɟɦɨɪɮɨɝɟɧɧɭɸ (NC) ɤɚɥɥɭɫɧɵɟ ɤɭɥɶɬɭɪɵ Fagopyrum tataricum (L.) Gaertn. [7]. Ⱦɥɹ ɢɦɦɭɧɨɰɢɬɨɯɢɦɢɱɟɫɤɢɯ ɢɫɫɥɟɞɨɜɚɧɢɣ ɫɬɪɭɤɬɭɪɵ ɬɭɛɭɥɢɧɨɜɨɝɨ ɰɢɬɨɫɤɟɥɟɬɚ ɤɭɫɨɱɤɢ ɤɚɥɥɭɫɨɜ ɮɢɤɫɢɪɨɜɚɥɢ ɢ ɨɛɪɚɛɚɬɵɜɚɥɢ ɫɨɝɥɚɫɧɨ [8]. Ɇɨɧɨɤɥɨɧɚɥɶɧɵɟ ɩɟɪɜɢɱɧɵɟ ɚɧɬɢɬɟɥɚ ɤ Įɬɭɛɭɥɢɧɭ ɩɪɢɦɟɧɹɥɢ ɜ ɪɚɡɜɟɞɟɧɢɢ 1:100, ɜɬɨɪɢɱɧɵɟ ɚɧɬɢɬɟɥɚ , ɤɨɧɴɸɝɢɪɨɜɚɧɧɵɟ ɫ ɮɥɭɨɪɟɫɰɟɢɧɢɡɨɬɢɨɰɢɚɧɚɬɨɦ (FITC) (Sigma, Ƚɟɪɦɚɧɢɹ) - ɜ ɪɚɡɜɟɞɟɧɢɢ 1:40. Ⱦɥɹ ɨɤɪɚɫɤɢ ɹɞɟɪ ɩɪɢɦɟɧɹɥɢ ɤɪɚɫɢɬɟɥɶ Hoechst 33258. ȼɢɡɭɚɥɶɧɵɣ ɚɧɚɥɢɡ ɫɬɪɭɤɬɭɪɵ ɰɢɬɨɫɤɟɥɟɬɚ ɩɪɨɜɨɞɢɥɢ ɫ ɢɫɩɨɥɶɡɨɜɚɧɢɟɦ ɮɥɭɨɪɟɫɰɟɧɬɧɨɝɨ ɦɢɤɪɨɫɤɨɩɚ Axioplan (Carl Zeiss, Ƚɟɪɦɚɧɢɹ) ɢ ɥɚɡɟɪɧɨɝɨ ɫɤɚɧɢɪɭɸɳɟɝɨ ɤɨɧɮɨɤɚɥɶɧɨɝɨ ɦɢɤɪɨɫɤɨɩɚ Leika DM RBE (Ƚɟɪɦɚɧɢɹ). ɗɥɟɤɬɪɨɮɨɪɟɬɢɱɟɫɤɨɟ ɪɚɡɞɟɥɟɧɢɟ ɛɟɥɤɨɜ ɨɫɭɳɟɫɬɜɥɹɥɢ ɩɨ ɦɟɬɨɞɭ Laemmli. Ƚɟɥɢ ɨɤɪɚɲɢɜɚɥɢ Ʉɭɦɚɫɫɢ ɝɨɥɭɛɵɦ R-250. Ⱦɥɹ ɩɪɨɜɟɞɟɧɢɹ ɢɦɦɭɧɨɛɥɨɬɬɢɧɝɚ ɛɟɥɤɢ ɩɟɪɟɧɨɫɢɥɢ ɧɚ ɦɟɦɛɪɚɧɵ PVDF ɫ ɩɨɦɨɳɶɸ ɛɥɨɬɬɟɪɚ BioRad. Ɇɨɧɨɤɥɨɧɚɥɶɧɵɟ ɩɟɪɜɢɱɧɵɟ ɚɧɬɢɬɟɥɚ ɤ Įɬɭɛɭɥɢɧɭ ɢɫɩɨɥɶɡɨɜɚɥɢ ɜ ɪɚɡɜɟɞɟɧɢɢ 1:150. Ⱥɧɬɢɬɟɥɚ ɤ ɬɢɪɨɡɢɧɢɥɢɪɨɜɚɧɧɨɦɭ ɢ ɚɰɟɬɢɥɢɪɨɜɚɧɧɨɦɭ Į-ɬɭɛɭɥɢɧɭ ɩɪɢɦɟɧɹɥɢ ɜ ɪɚɡɜɟɞɟɧɢɹɯ 1:300 ɢ 1:200, ɫɨɨɬɜɟɬɫɬɜɟɧɧɨ. ɉɨɥɢɤɥɨɧɚɥɶɧɵɟ ɜɬɨɪɢɱɧɵɟ ɚɧɬɢɬɟɥɚ, ɤɨɧɴɸɝɢɪɨɜɚɧɧɵɟ ɫɨ ɳɟɥɨɱɧɨɣ ɮɨɫɮɚɬɚɡɨɣ (Sigma, Ƚɟɪɦɚɧɢɹ), ɢɫɩɨɥɶɡɨɜɚɥɢ ɜ ɪɚɡɜɟɞɟɧɢɢ 1:5000. Ɋɟɡɭɥɶɬɚɬɵ ɢ ɢɯ ɨɛɫɭɠɞɟɧɢɟ ɂɡɜɟɫɬɧɨ, ɱɬɨ ɬɭɛɭɥɢɧ ɜ ɤɥɟɬɤɚɯ ɩɨɞɜɟɪɝɚɟɬɫɹ ɪɚɡɥɢɱɧɵɦ ɩɨɫɬɬɪɚɧɫɥɹɰɢɨɧɧɵɦ ɦɨɞɢɮɢɤɚɰɢɹɦ, ɜɥɢɹɸɳɢɦ ɧɚ ɫɜɨɣɫɬɜɚ ɩɨɥɢɦɟɪɢɡɨɜɚɧɧɵɯ ɢɡ ɧɟɝɨ ɦɢɤɪɨɬɪɭɛɨɱɟɤ [9]. ȼ ɫɜɨɸ ɨɱɟɪɟɞɶ ɧɚɥɢɱɢɟ ɧɟɤɨɬɨɪɵɯ ɢɡ ɷɬɢɯ ɦɨɞɢɮɢɤɚɰɢɣ ɦɨɠɟɬ ɫɥɭɠɢɬɶ ɦɚɪɤɟɪɨɦ ɫɬɚɛɢɥɶɧɨɫɬɢ ɆɌ [3]. ɇɚɩɪɢɦɟɪ, ɜɵɫɨɤɚɹ ɫɬɟɩɟɧɶ ɚɰɟɬɢɥɢɪɨɜɚɧɢɹ ɬɭɛɭɥɢɧɚ ɹɜɥɹɟɬɫɹ ɩɪɢɡɧɚɤɨɦ ɆɌ c ɨɬɧɨɫɢɬɟɥɶɧɨ ɜɵɫɨɤɢɦ ɜɪɟɦɟɧɟɦ ɠɢɡɧɢ [4]. Ɍɢɪɨɡɢɧɢɥɢɪɨɜɚɧɢɟ, ɧɚɨɛɨɪɨɬ, ɹɜɥɹɟɬɫɹ ɩɪɢɡɧɚɤɨɦ ɦɟɧɟɟ ɫɬɚɛɢɥɶɧɵɯ ɢ ɛɨɥɟɟ ɞɢɧɚɦɢɱɧɵɯ ɦɢɤɪɨɬɪɭɛɨɱɟɤ [3]. ɉɨɤɚɡɚɧɨ, ɱɬɨ ɭɫɬɨɣɱɢɜɵɟ ɤ ɞɟɩɨɥɢɦɟɪɢɡɭɸɳɢɦ ɆɌ ɜɟɳɟɫɬɜɚɦ ɥɢɧɢɢ ɤɥɟɬɨɤ ɢɦɟɸɬ ɛɨɥɶɲɟ ɚɰɟɬɢɥɢɪɨɜɚɧɧɨɝɨ ɢ ɦɟɧɶɲɟ ɬɢɪɨɡɢɧɢɥɢɪɨɜɚɧɧɨɝɨ ɬɭɛɭɥɢɧɚ, 200 Структура и динамика молекулярных систем, 2007 г., Выпуск №1 ɱɟɦ ɱɭɜɫɬɜɢɬɟɥɶɧɵɟ ɥɢɧɢɢ [1, 4]. Ɇɵ ɩɪɨɜɟɥɢ ɢɫɫɥɟɞɨɜɚɧɢɟ ɬɢɪɨɡɢɧɢɥɢɪɨɜɚɧɢɹ ɢ ɚɰɟɬɢɥɢɪɨɜɚɧɢɹ ɬɭɛɭɥɢɧɚ ɜ ɥɢɧɢɹɯ ɤɥɟɬɨɤ CR4 ɢ NC. Ʉɚɤ ɩɨɤɚɡɚɥɢ ɧɚɲɢ ɢɫɫɥɟɞɨɜɚɧɢɹ, ɦɟɠɞɭ ɤɚɥɥɭɫɧɵɦɢ ɥɢɧɢɹɦɢ CR4 ɢ NC ɧɟɬ ɫɭɳɟɫɬɜɟɧɧɵɯ ɪɚɡɥɢɱɢɣ ɩɨ ɨɛɳɟɦɭ ɤɨɥɢɱɟɫɬɜɭ ɫɢɧɬɟɡɢɪɭɟɦɨɝɨ Į-ɬɭɛɭɥɢɧɚ (ɪɢɫ. 1 Ⱥ). ɇɟɬ ɢɯ ɢ ɦɟɠɞɭ ɜɚɪɢɚɧɬɚɦɢ ɧɚ ɫɪɟɞɟ ɫ ɤɨɥɯɢɰɢɧɨɦ ɢ ɛɟɡ ɤɨɥɯɢɰɢɧɚ. Ɍɚɤɢɦ ɨɛɪɚɡɨɦ, ɭɫɬɨɣɱɢɜɨɫɬɶ ɤɚɥɥɭɫɚ ɥɢɧɢɢ CR4 ɤ ɤɨɥɯɢɰɢɧɭ ɧɟ ɫɜɹɡɚɧɚ ɫ ɩɨɜɵɲɟɧɧɵɦ ɫɨɞɟɪɠɚɧɢɟɦ ɬɭɛɭɥɢɧɚ ɜ ɧɟɦ, ɚ ɦɨɠɟɬ ɨɛɴɹɫɧɹɬɶɫɹ ɤɚɱɟɫɬɜɟɧɧɵɦɢ ɫɜɨɣɫɬɜɚɦɢ ɫɚɦɨɝɨ ɬɭɛɭɥɢɧɚ ɜ ɤɥɟɬɤɚɯ CR4. Ɉɞɧɚɤɨ ɧɚ ɫɪɟɞɟ ɛɟɡ ɤɨɥɯɢɰɢɧɚ ɤɥɟɬɤɢ CR4 ɫɨɞɟɪɠɚɬ ɛɨɥɶɲɟ ɚɰɟɬɢɥɢɪɨɜɚɧɧɨɝɨ ɢ ɦɟɧɶɲɟ ɬɢɪɨɡɢɧɢɥɢɪɨɜɚɧɧɨɝɨ Į-ɬɭɛɭɥɢɧɚ, ɱɟɦ NC. ȼ ɧɟɦɨɪɮɨɝɟɧɧɨɦ ɤɚɥɥɭɫɟ ɧɟ ɩɪɨɢɫɯɨɞɢɬ ɫɭɳɟɫɬɜɟɧɧɨɝɨ ɢɡɦɟɧɟɧɢɹ ɤɨɥɢɱɟɫɬɜɚ ɦɨɞɢɮɢɰɢɪɨɜɚɧɧɨɝɨ Į-ɬɭɛɭɥɢɧɚ ɩɪɢ ɩɟɪɟɦɟɳɟɧɢɢ ɟɝɨ ɧɚ ɫɪɟɞɭ ɫ ɤɨɥɯɢɰɢɧɨɦ. ȼ ɬɨ ɠɟ ɜɪɟɦɹ, ɧɚ ɫɪɟɞɟ ɫ ɤɨɥɯɢɰɢɧɨɦ ɜ ɤɥɟɬɤɚɯ ɭɫɬɨɣɱɢɜɨɝɨ ɤ ɤɨɥɯɢɰɢɧɭ ɤɚɥɥɭɫɚ ɩɪɨɢɫɯɨɞɢɬ ɫɧɢɠɟɧɢɟ ɤɨɥɢɱɟɫɬɜɚ ɚɰɟɬɢɥɢɪɨɜɚɧɧɨɝɨ ɬɭɛɭɥɢɧɚ ɢ, ɧɚɨɛɨɪɨɬ, ɭɜɟɥɢɱɟɧɢɟ ɤɨɥɢɱɟɫɬɜɚ ɬɢɪɨɡɢɧɢɥɢɪɨɜɚɧɧɨɝɨ ɬɭɛɭɥɢɧɚ (ɪɢɫ. 1 Ȼ, ȼ). ɗɬɨ ɫɜɢɞɟɬɟɥɶɫɬɜɭɟɬ ɜ ɩɨɥɶɡɭ ɩɪɟɞɩɨɥɨɠɟɧɢɹ ɨ ɦɟɧɶɲɟɣ ɞɢɧɚɦɢɤɟ ɦɢɤɪɨɬɪɭɛɨɱɟɤ ɤɚɥɥɭɫɚ CR4 ɧɚ ɫɪɟɞɟ ɛɟɡ ɤɨɥɯɢɰɢɧɚ ɢ ɟɟ ɧɨɪɦɚɥɢɡɚɰɢɢ ɧɚ ɫɪɟɞɟ ɫ ɷɬɢɦ ɢɧɝɢɛɢɬɨɪɨɦ. ɗɬɚ ɝɢɩɨɬɟɡɚ ɩɨɡɜɨɥɹɟɬ ɩɨɧɹɬɶ, ɩɨɱɟɦɭ ɧɚ ɫɪɟɞɟ ɫ ɤɨɥɯɢɰɢɧɨɦ (1 ɦɆ) ɤɚɥɥɭɫ ɥɢɧɢɢ CR4 ɞɚɟɬ ɛɨɥɶɲɢɣ ɩɪɢɪɨɫɬ ɛɢɨɦɚɫɫɵ, ɱɟɦ ɧɚ ɫɪɟɞɟ ɛɟɡ ɤɨɥɯɢɰɢɧɚ (ɤɚɤ ɛɵɥɨ ɩɨɤɚɡɚɧɨ ɧɚɦɢ ɪɚɧɟɟ [6]). ɉɨɤɚɡɚɧɨ, ɱɬɨ ɦɭɬɚɧɬɧɵɟ ɤɥɟɬɤɢ Chlamydomonas, ɭɫɬɨɣɱɢɜɨɫɬɶ ɤɨɬɨɪɵɯ ɤ ɨɪɢɡɚɥɢɧɭ ɢ ɤɨɥɯɢɰɢɧɭ ɹɜɥɹɟɬɫɹ ɫɥɟɞɫɬɜɢɟɦ ɛɨɥɶɲɟɣ ɫɬɚɛɢɥɶɧɨɫɬɢ ɢɯ ɆɌ, ɩɨ ɫɪɚɜɧɟɧɢɸ ɫ ɱɭɜɫɬɜɢɬɟɥɶɧɵɦɢ ɤɥɟɬɤɚɦɢ [1], ɩɪɨɹɜɥɹɸɬ ɩɨɜɵɲɟɧɧɭɸ ɱɭɜɫɬɜɢɬɟɥɶɧɨɫɬɶ ɤ ɆɌ-ɫɬɚɛɢɥɢɡɢɪɭɸɳɟɦɭ ɚɝɟɧɬɭ - ɬɚɤɫɨɥɭ. ɋ ɞɪɭɝɨɣ ɫɬɨɪɨɧɵ ɢɡɜɟɫɬɧɵ ɥɢɧɢɢ ɤɥɟɬɨɤ ɡɚɜɢɫɢɦɵɟ ɨɬ ɩɪɢɫɭɬɫɬɜɢɹ ɢɧɝɢɛɢɬɨɪɨɜ ɆɌ ɜ ɫɪɟɞɟ ɤɭɥɶɬɢɜɢɪɨɜɚɧɢɹ [5]. Ⱦɢɧɚɦɢɤɚ ɆɌ ɜ ɤɥɟɬɤɚɯ ɬɚɤɢɯ ɥɢɧɢɣ ɛɵɥɚ ɫɞɜɢɧɭɬɚ ɜ ɫɬɨɪɨɧɭ ɩɨɥɢɦɟɪɢɡɚɰɢɢ, ɥɢɛɨ ɞɟɩɨɥɢɦɟɪɢɡɚɰɢɢ ɆɌ. Ɍɚɤ ɛɵɥɨ ɩɨɤɚɡɚɧɨ [5], ɱɬɨ ɬɚɤɫɨɥ-ɪɟɡɢɫɬɟɧɬɧɵɟ ɥɢɧɢɢ ɤɥɟɬɨɤ ɤɚɪɰɢɧɨɦɵ ɱɟɥɨɜɟɤɚ Ⱥ549-Ɍ12 ɢ Ɍ24 ɦɨɝɭɬ ɩɪɨɥɢɮɟɪɢɪɨɜɚɬɶ ɬɨɥɶɤɨ ɜ ɩɪɢɫɭɬɫɬɜɢɢ ɧɢɡɤɢɯ ɤɨɧɰɟɧɬɪɚɰɢɣ ɬɚɤɫɨɥɚ ɜ ɫɪɟɞɟ ɤɭɥɶɬɢɜɢɪɨɜɚɧɢɹ. Ɍɚɤɫɨɥ ɫɞɜɢɝɚɟɬ ɞɢɧɚɦɢɤɭ ɆɌ ɜ ɫɬɨɪɨɧɭ ɩɨɥɢɦɟɪɢɡɚɰɢɢ ɢ ɩɨɡɜɨɥɹɟɬ ɮɟɧɨɤɨɩɢɪɨɜɚɬɶ ɧɨɪɦɭ ɜ ɬɚɤɫɨɥ-ɪɟɡɢɫɬɟɧɬɧɵɯ ɤɥɟɬɨɱɧɵɯ ɥɢɧɢɹɯ ɫ ɚɧɨɦɚɥɶɧɨ ɜɵɫɨɤɨɣ ɞɢɧɚɦɢɤɨɣ ɦɢɤɪɨɬɪɭɛɨɱɟɤ. ȼ ɧɚɲɟɦ ɫɥɭɱɚɟ ɫɢɬɭɚɰɢɹ, ɩɨ-ɜɢɞɢɦɨɦɭ, ɨɛɪɚɬɧɚɹ ɤɨɥɯɢɰɢɧ, ɫɦɟɳɚɹ ɞɢɧɚɦɢɤɭ ɆɌ ɜ ɫɬɨɪɨɧɭ ɞɟɩɨɥɢɦɟɪɢɡɚɰɢɢ, ɞɚɟɬ ɜɨɡɦɨɠɧɨɫɬɶ ɮɟɧɨɤɨɩɢɪɨɜɚɬɶ ɧɨɪɦɭ ɤɥɟɬɤɚɦ CR4, ɞɢɧɚɦɢɤɚ ɆɌ ɜ ɤɨɬɨɪɨɦ, ɩɨ-ɜɢɞɢɦɨɦɭ, Раздел 1 5 kDa 250 Ⱥ M 1 2 3 4 M 1 23 4 250 98 64 64 50 50 3 4 250 M 1 98 64 98 64 50 50 30 30 250 98 64 50 30 M 1 2 4 3 30 250 M 1 2 ȼ kDa 98 30 Ȼ 201 M1 2 3 4 M 1 23 4 250 M 1 3 4 2 3 4 0 98 64 50 30 Ɋɢɫ. 1. ɂɦɦɭɧɨɛɥɨɬɬɢɧɝ ɫ ɚɧɬɢɬɟɥɚɦɢ ɤ Į-ɬɭɛɭɥɢɧɭ (Ⱥ), ɚɰɟɬɢɥɢɪɨɜɚɧɧɨɦɭ Įɬɭɛɭɥɢɧɭ (Ȼ) ɢ ɬɢɪɨɡɢɧɢɥɢɪɨɜɚɧɧɨɦɭ Į-ɬɭɛɭɥɢɧɭ (ȼ) ɪɚɫɬɜɨɪɢɦɵɯ ɛɟɥɤɨɜ ɭɫɬɨɣɱɢɜɨɝɨ (CR4) ɢ ɱɭɜɫɬɜɢɬɟɥɶɧɨɝɨ (NC) ɤ ɤɨɥɯɢɰɢɧɭ ɤɚɥɥɭɫɨɜ. ȼ ɩɪɚɜɨɣ ɱɚɫɬɢ ɪɢɫɭɧɤɚ ɩɪɢɜɟɞɟɧɵ ɮɨɬɨ ɝɟɥɟɣ, ɨɤɪɚɲɟɧɧɵɯ Ʉɭɦɚɫɫɢ ɝɨɥɭɛɵɦ. Ɇ ɦɚɪɤɟɪ ɦɨɥɟɤɭɥɹɪɧɨɣ ɦɚɫɫɵ, 1 - CR4 ɧɚ ɫɪɟɞɟ ɛɟɡ ɤɨɥɯɢɰɢɧɚ, 2 - CR4 ɧɚ ɫɪɟɞɟ ɫ 1 ɦɆ ɤɨɥɯɢɰɢɧɚ, 3 - NC ɧɚ ɫɪɟɞɟ ɛɟɡ ɤɨɥɯɢɰɢɧɚ, 4 - NC ɧɚ ɫɪɟɞɟ ɫ 1 ɦɆ ɤɨɥɯɢɰɢɧɚ. 202 Структура и динамика молекулярных систем, 2007 г., Выпуск №1 ɧɢɠɟ (ɫɞɜɢɧɭɬɚ ɜ ɫɬɨɪɨɧɭ ɩɨɥɢɦɟɪɢɡɚɰɢɢ), ɱɟɦ ɜ ɤɨɥɯɢɰɢɧɱɭɜɫɬɜɢɬɟɥɶɧɵɯ ɥɢɧɢɹɯ. Ɉɬɫɭɬɫɬɜɢɟ ɠɟ ɜ ɫɪɟɞɟ ɤɨɥɯɢɰɢɧɚ ɜɵɩɨɥɧɹɟɬ ɜ ɷɬɨɦ ɫɥɭɱɚɟ ɪɨɥɶ ɫɜɨɟɨɛɪɚɡɧɨɝɨ «ɆɌ-ɫɬɚɛɢɥɢɡɢɪɭɸɳɟɝɨ ɚɝɟɧɬɚ» ɢ ɜɵɡɵɜɚɟɬ ɩɨɞɚɜɥɟɧɢɟ ɮɭɧɤɰɢɣ ɰɢɬɨɫɤɟɥɟɬɚ. Ȼ Ⱥ 50 ɦɤɦ ȼ 50 ɦɤɦ 50 Ƚ 50 ɦɤɦ Ɋɢɫ. 2. ɋɬɪɭɤɬɭɪɚ ɬɭɛɭɥɢɧɨɜɨɝɨ ɰɢɬɨɫɤɟɥɟɬɚ ɤɚɥɥɭɫɨɜ CR4 (Ⱥ, Ȼ) ɢ NC (ȼ,Ƚ) ɧɚ ɫɪɟɞɟ ɛɟɡ ɤɨɥɯɢɰɢɧɚ (Ⱥ, ȼ) ɢ ɫ ɤɨɥɯɢɰɢɧɨɦ (Ȼ, Ƚ). Ɏɨɬɨɝɪɚɮɢɢ ɫɞɟɥɚɧɵ ɫ ɩɨɦɨɳɶɸ ɥɚɡɟɪɧɨɝɨ ɤɨɧɮɨɤɚɥɶɧɨɝɨ ɦɢɤɪɨɫɤɨɩɚ Leika. ɋɬɪɟɥɤɨɣ ɩɨɤɚɡɚɧɨ ɨɞɧɨ ɢɡ ɦɧɨɝɨɱɢɫɥɟɧɧɵɯ ɦɢɤɪɨɹɞɟɪ ɜ ɤɥɟɬɤɚɯ NC ɧɚ ɫɪɟɞɟ ɫ ɤɨɥɯɢɰɢɧɨɦ. ɇɚ ɪɚɡɥɢɱɢɹ ɜ ɞɢɧɚɦɢɤɟ ɆɌ ɦɨɝɭɬ ɬɚɤɠɟ ɭɤɚɡɵɜɚɬɶ ɫɬɪɭɤɬɭɪɧɵɟ ɨɬɥɢɱɢɹ ɫɟɬɟɣ ɆɌ-ɰɢɬɨɫɤɟɥɟɬɚ ɜ ɤɥɟɬɤɚɯ ɱɭɜɫɬɜɢɬɟɥɶɧɵɯ ɢ ɭɫɬɨɣɱɢɜɵɯ ɤ ɢɧɝɢɛɢɬɨɪɚɦ ɥɢɧɢɣ ɤɥɟɬɨɤ, ɤɚɤ ɷɬɨ ɩɨɤɚɡɚɧɨ ɞɥɹ ɥɢɧɢɣ ɤɥɟɬɨɤ ɭɫɬɨɣɱɢɜɵɯ ɤ ɬɚɤɫɨɥɭ ɢ ɤɨɥɰɟɦɢɞɭ [10]. Ɇɵ ɢɫɫɥɟɞɨɜɚɥɢ ɫɬɪɭɤɬɭɪɧɵɟ Раздел 1 203 ɨɫɨɛɟɧɧɨɫɬɢ ɰɢɬɨɫɤɟɥɟɬɚ ɤɚɥɥɭɫɨɜ ɥɢɧɢɣ CR4 ɢ NC ɧɚ ɨɛɵɱɧɨɣ ɫɪɟɞɟ ɩɨɞɞɟɪɠɚɧɢɹ ɢ ɧɚ ɫɪɟɞɟ ɫ 1 ɦɆ ɤɨɥɯɢɰɢɧɚ. Ʉɚɤ ɩɨɤɚɡɚɥɢ ɧɚɲɢ ɢɫɫɥɟɞɨɜɚɧɢɹ, ɫɬɪɭɤɬɭɪɚ ɆɌ-ɰɢɬɨɫɤɟɥɟɬɚ ɤɚɥɥɭɫɚ CR4 ɢɦɟɟɬ ɨɬɥɢɱɢɹ ɨɬ ɬɚɤɨɜɨɣ NC ɢ ɡɚɜɢɫɢɬ ɨɬ ɩɪɢɫɭɬɫɬɜɢɹ ɤɨɥɯɢɰɢɧɚ ɜ ɫɪɟɞɟ. Ɍɚɤ, ɧɚ ɫɪɟɞɟ ɛɟɡ ɤɨɥɯɢɰɢɧɚ ɬɭɛɭɥɢɧɨɜɵɣ ɰɢɬɨɫɤɟɥɟɬ ɤɥɟɬɨɤ ɤɚɥɥɭɫɚ CR4 ɢɦɟɟɬ ɛɨɥɟɟ ɯɚɨɬɢɱɧɭɸ ɫɬɪɭɤɬɭɪɭ, ɱɟɦ ɬɚɤɨɜɨɣ ɤɥɟɬɨɤ NC. ɆɌ ɤɥɟɬɨɤ ɤɚɥɥɭɫɚ CR4 ɫɨɛɪɚɧɵ ɜ ɬɨɥɫɬɵɟ ɩɭɱɤɢ, ɚ ɫɟɬɶ ɤɨɪɬɢɤɚɥɶɧɵɯ ɆɌ ɢɦɟɟɬ ɭɡɥɨɜɚɬɭɸ ɫɬɪɭɤɬɭɪɭ (ɪɢɫ. 2 Ⱥ). ɆɌ ɧɟɦɨɪɮɨɝɟɧɧɨɝɨ ɤɚɥɥɭɫɚ ɫɨɛɪɚɧɵ ɜ ɛɨɥɟɟ ɬɨɧɤɢɟ ɩɭɱɤɢ ɢ ɧɚ ɫɬɚɞɢɢ ɪɨɫɬɚ ɤɥɟɬɤɢ ɪɚɫɬɹɠɟɧɢɟɦ ɢɦɟɸɬ ɩɚɪɚɥɥɟɥɶɧɭɸ ɨɪɢɟɧɬɚɰɢɸ. ɉɪɢ ɷɬɨɦ ɫɟɬɶ ɤɨɪɬɢɤɚɥɶɧɵɯ ɦɢɤɪɨɬɪɭɛɨɱɟɤ ɧɟ ɫɨɞɟɪɠɢɬ ɭɡɥɨɜ (ɪɢɫ. 2 ȼ). ɇɚ ɫɪɟɞɟ ɫ ɤɨɥɯɢɰɢɧɨɦ ɦɵ ɧɚɛɥɸɞɚɥɢ ɫɨɜɟɪɲɟɧɧɨ ɢɧɭɸ ɤɚɪɬɢɧɭ: ɜ ɤɥɟɬɤɚɯ NC ɦɢɤɪɨɬɪɭɛɨɱɤɢ ɢɫɱɟɡɥɢ ɩɨɥɧɨɫɬɶɸ, ɨɛɪɚɡɨɜɚɥɨɫɶ ɦɧɨɠɟɫɬɜɨ ɦɢɤɪɨɹɞɟɪ (ɪɢɫ. 2 Ƚ), ɬɨɝɞɚ ɤɚɤ ɫɬɪɭɤɬɭɪɚ ɫɟɬɢ ɤɨɪɬɢɤɚɥɶɧɵɯ ɆɌ ɤɨɥɯɢɰɢɧ-ɪɟɡɢɫɬɟɧɬɧɨɝɨ ɤɚɥɥɭɫɚ ɢɡɦɟɧɢɥɚɫɶ ɢ ɫɬɚɥɚ ɩɨɞɨɛɧɨɣ ɬɚɤɨɜɨɣ ɭ NC ɧɚ ɫɪɟɞɟ ɛɟɡ ɤɨɥɯɢɰɢɧɚ (ɪɢɫ. 2 Ȼ). ɗɬɢ ɪɟɡɭɥɶɬɚɬɵ ɩɨɞɬɜɟɪɠɞɚɸɬ ɩɪɟɞɩɨɥɨɠɟɧɢɟ ɨ ɬɨɦ, ɱɬɨ ɤɨɥɯɢɰɢɧ ɢɝɪɚɟɬ ɪɨɥɶ ɮɚɤɬɨɪɚ, ɫɞɜɢɝɚɸɳɟɝɨ ɞɢɧɚɦɢɤɭ ɆɌ ɤɚɥɥɭɫɚ CR4 ɜ ɫɬɨɪɨɧɭ ɛɨɥɟɟ ɚɤɬɢɜɧɨɝɨ ɨɛɨɪɨɬɚ (ɞɟɩɨɥɢɦɟɪɢɡɚɰɢɢ). ȼ ɪɟɡɭɥɶɬɚɬɟ ɧɚ ɫɪɟɞɟ ɫ ɢɧɝɢɛɢɬɨɪɨɦ ɞɟɮɟɤɬɵ ɞɢɧɚɦɢɤɢ ɦɢɤɪɨɬɪɭɛɨɱɟɤ ɜ ɤɚɥɥɭɫɟ CR4 ɨɤɚɡɵɜɚɸɬɫɹ ɤɨɦɩɟɧɫɢɪɨɜɚɧɧɵɦɢ, ɢ ɩɪɨɢɫɯɨɞɢɬ ɮɟɧɨɤɨɩɢɪɨɜɚɧɢɟ ɧɨɪɦɚɥɶɧɨɣ ɫɬɪɭɤɬɭɪɵ ɰɢɬɨɫɤɟɥɟɬɚ. Ɍɚɤɢɦ ɨɛɪɚɡɨɦ, ɦɨɠɧɨ ɡɚɤɥɸɱɢɬɶ, ɱɬɨ ɩɨɥɭɱɟɧɧɚɹ ɧɚɦɢ ɭɫɬɨɣɱɢɜɚɹ ɤ ɤɨɥɯɢɰɢɧɭ ɥɢɧɢɹ ɤɚɥɥɭɫɚ CR4 ɢɦɟɟɬ ɫɧɢɠɟɧɧɭɸ, ɩɨ ɫɪɚɜɧɟɧɢɸ ɫ ɞɢɤɢɦ ɬɢɩɨɦ (NC), ɞɢɧɚɦɢɤɭ ɦɢɤɪɨɬɪɭɛɨɱɟɤ. ɅɂɌȿɊȺɌɍɊȺ 1. Schibler, M.J., and Huang, B. (1991) J. Cell Biol., 113, 605-614. 2. Billger, M., Stromberg, E., and Wallin, M. (1991) J. of Cell Biol., 113, 331-338. 3. Wiesler, B., Wang, Q.Y., and Nick, P. (2002) Plant J, 32 (6), 1023-1032. 4. Poruchynsky, M. S., Kim, J. H., Nogales, E., Annable, T., Loganzo, F., Greenberger, L. M., Sackett, D. L., and Fojo, T. (2004) Biochemistry, 43, 1394413954. 5. Gonçalves, A., Braguer, D., Kamath, K., Martello, L., Briand, C., Horwitz, S., Wilson, R., and Jordan, M.A. (2001) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 98, 11737-11741. 6. Ɇɭɯɢɬɨɜ Ⱥ.Ɋ., ȼɚɥɢɟɜɚ Ⱥ.ɂ., Ɋɭɦɹɧɰɟɜɚ ɇ.ɂ. "ȼɟɫɬɧɢɤ Ȼɚɲɤɢɪɫɤɨɝɨ ɝɨɫɭɧɢɜɟɪɫɢɬɟɬɚ", 2001. ʋ 2, ɫ. 152-154. 7. Ɇɭɯɢɬɨɜ Ⱥ. Ɋ., Ɋɭɦɹɧɰɟɜɚ ɇ. ɂ. (2002) ɐɢɬɨɥɨɝɢɹ, 44, 623-631. 8. Ahad, A., Wolf, J., and Nick, P. (2003) Transgenic Research, 12, 615-629. 9. 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