УДК А.С.Бекряшева 1,Калашникова Е.А2, Перова Н.В2, В.И.Севастьянов1,2 1 Московский физико-технический институт (государственный университет) 2 ФГУ “НИИ трансплантологии и искусственных органов Росздрава” РАЗРАБОТКА МЕТОДИКИ ВЫДЕЛЕНИЯ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК ИЗ ЖИРОВОЙ ТКАНИ ЧЕЛОВЕКА В последнее время во всем мире все большее внимание уделяется использованию стволовых клеток (СК) в терапии различных заболеваний [1]. Наиболее привлекательными для использования в клинической медицине кажутся эмбриональные СК, поскольку они наименее дифференцированы. Но использование этих клеток связано с высоким риском развития злокачественных опухолей, иммунных осложнений, реакции отторжения, высокой вероятностью инфицирования, этическими проблемами и запрещено во многих странах мира [2]. В отличие от эмбриональных, СК, выделяемые из различных источников постнатального происхождения или взрослого организма, обладают ограниченным потенциалом дифференцировки, но устраняют иммунологические и этические проблемы, поэтому являются более приемлемым для клинического использования материалом. Согласно современным данным, практически все известные тканевые системы организма содержат популяции СК [1]. Идеальный источник СК должен обеспечивать простую технологию выделения клеток, давать достаточный выход клеток, а при его заборе – минимально травмировать пациента. В 2001 году ученые впервые обнаружили в жировой ткани стволовые клетки [3]. Дальнейшие исследования показали, что эти клетки способны дифференцироваться в клетки адипогенной, хондрогенной, миогенной, остеогенной и нейрогенной линий [35]. К преимуществам этого источника СК относят малоинвазивный (в сравнении с биопсией костного мозга) способ получения и малую контаминированность другими видами клеток [5]. Таким образом, жировая ткань может выступать в качестве доступного источника СК. Однако большая часть публикаций касается получению СК из жировой ткани экспериментальных животных. Более того, даже в этих случаях нет детальных протоколов выделения СК. В связи с этим, основной целью данной работы являлось разработка технологии получения СК из адипоцитной ткани и аппробация протокола на жировой ткани человека. Источником СК были образцы сальника и подкожно-жировой клетчатки (операционный материал) пациента 40 лет, страдающим диабетом I типа ФГУ НИИТиИО Росздрава. Клетки культивировали в течение 1-9 пассажей. Было установлено, что за один пассаж популяция увеличивается в среднем в 2 раза, что хорошо согласуется с литературными данными [4, 5]. На четвертый день культивирования количество клеток было 3,68 млн. Полученные клетки были фенотипически гетерогенны, что может быть обусловлено наличием в культуре прогениторных клеток разных типов, что также отмечалось другими исследователями. На более поздних пассажах различия в морфологии СК исчезают [5]. Из подкожно-жировой клетчатки выход клеток был мал, и нам не удалось получить культуру СК. В результате данной работы был проведен сравнительный анализ методов выделения стволовых клеток из жировой ткани лабораторных животных и человека; разработан оригинальный протокол выделения стволовых клеток из жировой ткани человека; проведена апробация предложенной технологии выделения стволовых клеток из ткани сальника и подкожно-жировой клетчатки. Литература 1. М.А. Пальцев, А.А. Иванов, В.Н. Смирнов, Ю.А. Романов “Стволовые клетки в современной медицине: настоящее и будущее”, Молекулярная медицина. 2006, №2. С. 5-9. 2. В.С. Репин “Эмбриональная стволовая клетка (от фундаментальной биологии к медицине)”, Пат. физиол. и эксп. тер.- 2001; 2: С. 3-8. 3. Patricia A. Zuk, Min Zhu, Hiroshi Mizuno, Jerry Huang, William Futrell, Adam J. Katz, Prosper Benhaim, Peteer Lorenz, Marc H. Hedrik. “Maltilineage cells from human adipose tissue: implications for cell- based therapies”, Tissue engineering, 2001, Vol.7, pp. 211-228. 4. Patricia A. Zuk, Min Zhu, Peter Ashjian, Daniel A. De Ugarte, Jerry I. Huang, Hiroshi Mizuno, Zeni C/ Alfonso, John K. Fraser, Prosper Benhaim, and Marc H. Hedrik. “Human adipose tissue is a solurse of multipotent stem cells”, Molecular Biology of the Cell, 2002, Vol. 13, 4279-4295. 5. М.А. Лагарькова, А.В. Лякишева, Е.С. Филоненко, П.Ю. Волчков, К.В. Рубцова, Ю.В. Герасимов, Р.Х. Чайлахян, С.Л. Киселев “Характеристика мезенхимальных стволовых клеток костного мозга человека, выделенных методом иммуномагнитной селекции”, Клеточные технологии в биологии и медицине, 2006, №1, С. 3 – 7.