К ВОПРОСУ О ПРОВЕДЕНИИ СКРИНИНГА НАРКОТИЧЕСКИХ И

АКТУАЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ СУДЕБНОЙ МЕДИЦИНЫ И ЭКСПЕРТНОЙ ПРАКТИКИ
тографии с использованием модуля VIDICAM, для визуа
лизации и документирования изображений со светового мик
роскопа // Актуальные вопросы судебной медицины и экс
пертной практики. – Барнаул ; Новосибирск ; Красноярск,
2013. – Вып. 19. – 352 с.
6. Саркисян Б.А., Шестко С.С. Особенности динамических
следов крови в зависимости от условий их образования //
Вестник судебной медицины. – 2014. – Т. 3, № 1. – С. 14–18.
К ВОПРОСУ О ПРОВЕДЕНИИ СКРИНИНГА
НАРКОТИЧЕСКИХ И СИЛЬНОДЕЙСТВУЮЩИХ
ВЕЩЕСТВ
Е.С. Стрельникова
г. ПетропавловскКамчатский
В современном химикотоксикологическом (су
дебнохимическом) анализе предпочтение отдается про
цедурам пробоподготовки, позволяющим изолировать
максимально широкий круг токсикологически значимых
веществ и их метаболитов, расходуя при этом минималь
ное количество опасных для здоровья растворителей, с
наибольшим выходом исследуемых веществ и наимень
шими затратами времени. В специальной литературе
опубликовано большое количество работ по изолирова
нию наркотических и сильнодействующих веществ из
тканей органов с использованием малых навесок (Носов
А.Д., 2012; Немихин В.В. с соавт., 2013). Основное вни
мание при этом акцентируется на крови и моче. Предме
том данной статьи является оптимизация пробоподго
товки из малых навесок биообъектов с последующим
проведением систематического скрининга при проведе
нии исследования на наличие неизвестных веществ кис
лого, основного и нейтрального характера.
Традиционно, в качестве скринингового, в судеб
нохимических отделениях использовался метод тонко
262
Лабораторные методы исследования
слойной хроматографии (ТСХ). Однако, метод ТСХ не
специфичен, требует затрат большого количества вре
мени и реактивов, охватывает недостаточно широкий
круг токсикологически значимых веществ. Особую по
пулярность в настоящее время приобретает системати
ческий токсикологический анализ, проводимый мето
дом газовой хроматографии (ГХ) на капиллярных колон
ках, который позволяет проводить скрининг легколету
чих наркотических и сильнодействующих веществ без
предварительной дериватизации. Скрининг методом ГХ
с массселективным детектированием (МСД) без дери
ватизации используют, в основном, для анализа извле
чений из крови и внутренних органов, так как в моче нар
котические и лекарственные вещества присутствуют в
форме полярных метаболитов, для анализа которых не
обходимо проведение дериватизации с преобразовани
ем полярных функциональных групп в неполярные. Все
вышеперечисленное обуславливает ограничения в при
менении метода. Современная высокоэффективная
жидкостная хроматография – один из эффективных ме
тодов разделения сложных смесей, в том числе извлече
ний из биологических объектов. В специальной литера
туре описаны варианты скрининга наркотических и
сильнодействующих веществ методом высокоэффектив
ной жидкостной хроматографии с УФдетектировани
ем, с проведением количественного определения. К ог
раничениям метода следует отнести наличие наркоти
ческих средств и лекарственных веществ, которые не
поглощают или слабо поглощают в УФ области спектра.
С учетом вышесказанного мы обобщили эти мето
дики и разработали схему скрининга с сочетанием мето
дов ГХ с МСД и высокоэффективной жидкостной хро
матографии с УФ детектированием, что позволяет ми
нимизировать ограничения каждого из методов.
Экспериментальная часть.
Оборудование:
–
токсикологический анализатор МАЭСТРО: газо
вый хроматограф Маэстро7820, оснащенный авто
263
АКТУАЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ СУДЕБНОЙ МЕДИЦИНЫ И ЭКСПЕРТНОЙ ПРАКТИКИ
матическим устройством для введения образца, си
стемой обратной продувки хроматографической
колонки с дополнительным модулем контроля по
токов, массспектрометрическим детектором
G3175A (ООО «Интерлаб»); колонка DB5MS Ultra
Inert 15 м х 0,25 мм х 0,25 мкм; программное обес
печение деконволюции (DRS) объединяет три
компонента: MSD Productivity Chemstation,
АMDIS, NIST MS Library. Выполняется идентифи
кация (по подвергнутым деконволюции полным
спектрам), по времени удерживания (RTL) и ко
личественная обработка данных. Токсикологичес
кая база данных, поставляемая с анализатором,
содержит более 700 соединений.
–
токсикологический анализатор на базе хроматог
рафа микроколоночного жидкостного «Альфах
ром» (ЗАО «Эконова») со спектрофотометричес
ким детектором, двухкомпонентным градиентным
насосом шприцевого типа, автоматического доза
тора, термостатируемой колонки с комплектом
программного обеспечения «Мультихром» (ЗАО
«Амперсенд»). Измерения выполняются методом
ВЭЖХ на колонке с обращенной фазой С18, тип
«БД2003» с УФдетектированием на 8 длинах
волн. Идентификация и количественный расчет
выполняются автоматически по объему удержива
ния, площади пика при 210 нм и величине углов
между векторами, представляющими спектр ис
следуемого вещества и спектры веществ базы дан
ных. Токсикологическая база данных, поставляе
мая с анализатором, содержит 500 соединений и
может быть дополнена оператором.
Подготовка проб: методика подготовки пробы
включает стадии извлечения полярным растворителем
(внутренние органы), гидролиза (щелочного и кислот
ного) и жидкостьжидкостной экстракции. Изолирова
ние полярным растворителем: 5 г печени гомогенизиру
264
Лабораторные методы исследования
ют, приливают 25 мл дистиллированной воды, 500 мкл
4н раствора серной кислоты и выдерживают в течение
часа на механическом встряхивателе. Полученное извле
чение фильтруют, при необходимости доводят водой до
25 мл. Кислотный гидролиз: к 3 мл мочи (сыворотки кро
ви, аликвоты извлечения из внутренних органов) при
ливают 300мкл концентрированной соляной кислоты,
герметично закрывают и выдерживают при 90° в тече
ние часа. Гидролизат охлаждают до комнатной темпера
туры, приливают 300 мкл 10% раствора аммиака. Жид
костьжидкостная экстракция: к 5 мл мочи (гидролиза
та мочи, сыворотки крови, аликвоты извлечения из внут
ренних органов) приливают 500 мкл 2н соляной кисло
ты, 3 мл экстрагента (этилацетат – дихлорметан 40:60),
экстрагируют 10 мин на орбатальном шейкере, центри
фугируют, органический слой отбирают, выпаривают
при комнатной температуре. К оставшейся моче добав
ляют 1,8 г солевого буфера (натрия карбонатнатрия гид
рокарбонатнатрия фосфат двухзамещенныйнатрия
хлоридмагния сульфат 10:15:10:55:5), 3 мл экстрагента
(гептан – изопропанол – дихлорметан – дихлорэтан
30:30:20:20), экстрагируют 10 мин на орбатальном шей
кере, центрифугируют, органический слой отбирают,
выпаривают при комнатной температуре. Остатки объе
диняют, реконструируя в 500 мкл метанола.
Полученные извлечения анализируется по следу
ющей схеме:
1)
скрининг ГХМС на анализаторе МАЭСТРО – из
влечения сыворотки крови без гидролиза, извле
чения из биологических тканей внутренних орга
нов без гидролиза;
2)
скрининг методом ВЭЖХ с использованием «Ме
тодики измерений массовой концентрации УФ
поглощающих веществ методом ВЭЖХ» – извле
чения мочи после кислотного гидролиза, извлече
ния сыворотки крови без гидролиза, извлечения из
биологических тканей внутренних органов без гид
265
АКТУАЛЬНЫЕ ВОПРОСЫ СУДЕБНОЙ МЕДИЦИНЫ И ЭКСПЕРТНОЙ ПРАКТИКИ
ролиза и после проведения кислотного гидролиза.
Для контроля проведения пробоподготовки и ка
чества идентификации используется контрольная сыво
ротка, подвергнутая пробоподготовке по вышеописан
ной схеме. Состав контрольной сыворотки:
Название
Концентрация (мкг/мл)
димедрол
1,0
диклофенак
5,0
амитриптиллин
1,0
прометазин
2,0
диазепам
2,5
папаверин
1,0
верапамил
1,0
Последовательность выполнения измерений при
скрининге включает контроль фона приборов – анализ
растворителя (метанол) в начале и в процессе анализа
между пробами; положительный контроль – анализ из
влечения контрольной сыворотки.
Результаты и обсуждение
Предложенным методом выход лекарственных ве
ществ составил от 35 до 93%. Результат исследования
Таблица 1. Сравнительные результаты исследование контрольной сыво
ротки
Состав
контрольной
сыворотки
Димедрол (n 6)
Диклофенак (n 6)
Амитриптиллин (n 6)
Прометазин 6)
Диазепам (n 6)
Папаверин (n 6)
Верапамил (n 6)
266
Введено
(мкг/мл)
Определено
МСД
1,0
5,0
1,0
2,0
2,5
1,0
1,0
0,93
4,45
0,59
1,22
1,55
0,52
0,75
%
выхода
93
89
59
61
62
52
75
ВЭЖХ
0,49
3,01
0,60
1,74
1,89
0,60
0,35
%
выхода
49
60
60
87
76
60
35
Лабораторные методы исследования
контрольной сыворотки методами ГХМС и ВЭЖХ пред
ставлен в таблице 1.
Пробоподготовка проста, применима для рутин
ных анализов, приводит к сокращению затрат рабочего
времени и расхода высокотоксичных реактивов. Метод
надежен, специфичен, чувствителен и обладает доста
точной воспроизводимостью. Применение сочетания
методов ГХМС и ВЭЖХ снижает число возможных лож
ноотрицательных результатов скрининга.
Литература
1. Немихин В.В., Баженова Л.А., Слащинин Г.А. Определение
ношпы методом высокоэффективной жидкостной хроматог
рафии с УФдетектором // Вестник судебной медицины. –
2013. – Т. 2, № 3. – С. 31–34.
2. Носов А.Д. Использование денситометрического метода при
проведении судебнохимических исследований (на примере
количественного определения морфина) // Вестник судеб
ной медицины. – 2012. – Т. 1, № 3. – С. 20–24.
К ВОПРОСУ О ВОЗМОЖНОСТЯХ
ПЛАНКТОНОСКОПИИ В ДИАГНОСТИКЕ
УТОПЛЕНИЯ
Н.В. Хлуднева, Ю.С. Исаев, К.С. Горбунов, В.И. Чикун
г. Красноярск
Наибольшую сложность в процессе расследовании,
как для отечественных, так и для зарубежных правоох
ранительных органов представляют происшествия, свя
занные с обнаружением трупа в открытых водоемах. Сле
дует особо подчеркнуть, что до настоящего времени в
медицинской криминалистике отсутствуют четкие
объективные критерии, позволяющие установить место
и время утопления, несмотря на то, что событие пре
ступления (время, место, способ и другие обстоятель
ства совершения преступления) является первостепен
267