1 ÓÄÊ 543.555: 57.086.8 Èìïóëüñíàÿ êîíäóêòîìåòðèÿ îäèíî÷íûõ êëåòîê æèâîòíûõ Â.À. Øèãèìàãà vash105@gmail.com Èíñòèòóò æèâîòíîâîäñòâà ÍÀÀÍ Óêðàèíû  áèîôèçèêå, ðåïðîäóêòèâíîé áèîëîãèè è ìåäèöèíå ïðèìåíÿþòñÿ ðàçëè÷íûå ìåòîäû, îñíîâàííûå íà ÿâëåíèè ýëåêòðîïîðàöèè ìåìáðàí æèâûõ êëåòîê â èìïóëüñíîì ýëåêòðè÷åñêîì ïîëå (ÈÝÏ) [1,2]. Âîçäåéñòâèå ïîëÿ ïðèâîäèò ê îáðàòèìîé ïåðôîðàöèè ìåìáðàíû èëè íåîáðàòèìîìó åå ðàçðûâó è ëèçèñó êëåòêè â çàâèñèìîñòè îò íàïðÿæåííîñòè ÈÝÏ. Ïðîöåññ è ðåçóëüòàò âçàèìîäåéñòâèÿ ìåìáðàíû è êëåòêè ñ ïîëåì ìîæíî íàáëþäàòü ïî èçìåíåíèþ èõ îáùåé ïðîâîäèìîñòè, êîòîðàÿ ÿâëÿåòñÿ îäíîâðåìåííî èíäèêàòîðîì è èíòåãðàëüíîé õàðàêòåðèñòèêîé ðàçâèòèÿ ýëåêòðîïîðàöèè ïðè ïîñòåïåííîì âîçðàñòàíèè íàïðÿæåííîñòè ïîëÿ âïëîòü äî ýëåêòðîïðîáîÿ ìåìáðàíû [3]. Äëÿ èññëåäîâàíèÿ êèíåòèêè ýëåêòðîïîðàöèè ðàçðàáîòàí ìåòîä èìïóëüñíîé êîíäóêòîìåòðèè îäèíî÷íûõ êëåòîê æèâîòíûõ â èçìåíÿþùåìñÿ ÈÝÏ [4]. Ìåòîä ïîçâîëÿåò îïðåäåëÿòü óäåëüíóþ ïðîâîäèìîñòü êëåòîê è æèäêèõ ñðåä â äèàïàçîíå 0,1-105 ìêÑì/ñì â ïîëå íàïðÿæåííîñòüþ 0-10 êÂ/ñì è íåêîòîðûå áèîôèçè÷åñêèå ïàðàìåòðû êëåòêè, íàïðèìåð, ýëåêòðè÷åñêóþ ïðî÷íîñòü ìåìáðàíû è åìêîñòü. Ñ ïîìîùüþ äàííîãî ìåòîäà îêàçàëîñü ëåãêî îáîñíîâàòü íåîáõîäèìûå ðåæèìû âîçäåéñòâèÿ íà êëåòêè ÈÝÏ äëÿ ðàçëè÷íûõ ïðèëîæåíèé [4,5]. Íà ðèñ.1 â êà÷åñòâå ïðèìåðà ïîêàçàíû çàâèñèìîñòè ïðîâîäèìîñòè îò íàïðÿæåííîñòè ÈÝÏ îîöèòà è 2-êëåòî÷íîãî ýìáðèîíà ìûøè â 0,3Ì ñàõàðîçå è ðàñïîëîæåíèå êëåòêè (2-êëåòî÷íûé ýìáðèîí ìûøè) ìåæäó ìèêðîýëåêòðîäàìè ïðè èçìåðåíèÿõ. Êðèâàÿ ïðîâîäèìîñòè îîöèòà èìååò ðåçêèé ïîäúåì ýòî íåîáðàòèìûé ýëåêòðîïðîáîé ìåìáðàíû êëåòêè ïðè íàïðÿæåííîñòè 2,7 êÂ/ñì. Êðèâàÿ ïðîâîäèìîñòè 2-êëåòî÷íîãî ýìáðèîíà ïîêàçûâàåò îáðàòèìûé ïðîáîé ìåñòà êîíòàêòà ìåìáðàí äâóõ áëàñòîìåðîâ ïðè íàïðÿæåííîñòè ïîëÿ îêîëî 1,1 êÂ/ñì (ðåæèì ýëåêòðîñëèÿíèÿ) è íåîáðàòèìûé ïðîáîé ïðè 2,8 êÂ/ñì. Íà îáåèõ êðèâûõ âèäíà ìíîãîêðàòíàÿ îáðàòèìàÿ ýëåêòðîïîðàöèÿ ìåìáðàí êëåòîê (êîëåáàíèÿ ïðîâîäèìîñòè). Ïðîâîäèìîñòè àïèðîãåííîé âîäû è 0,3 Ì ñàõàðîçû íà íåé, êàê äèýëåêòðè÷åñêèõ ñðåä, íå çàâèñÿò îò íàïðÿæåííîñòè ïîëÿ. Òàêèì îáðàçîì, èìïóëüñíàÿ êîíäóêòîìåòðèÿ ïîçâîëÿåò íàáëþäàòü è èçó÷àòü âåñü ïðîöåññ ýëåêòðîïîðàöèè ìåìáðàíû êëåòêè îò îáðàòèìîé ñòàäèè äî íåîáðàòèìîãî ýëåêòðîïðîáîÿ, ÷òî ìîæíî èñïîëüçîâàòü äëÿ îáîñíîâàíèÿ è ðàçðàáîòêè ðàçëè÷íûõ òåõíîëîãèé ýëåêòðîìàíèïóëÿöèè ñ êëåòêàìè æèâîòíûõ. 2 Ëèòåðàòóðà 1. Àíòîíîâ Â.Ô., ×åðíûø À.Ì., Ïàñå÷íèê Â.È., Âîçíåñåíñêèé Ñ.À., Êîçëîâà Å.Ê. Áèîôèçèêà: Ó÷. äëÿ ñòóä. ÂÓÇîâ. Ì.: ÂËÀÄÎÑ, 2000. 293ñ. 2. Pakhomov A.G., Miklavcic D., Markov M.S. Advanced Electroporation Techniques in Biology and Medicine. New York: CRC Press, 2010. 528ð. 3. Øèãèìàãà Â.À., Ìåãåëü Þ.Å. Ïðèìåíåíèå ìåòîäà èìïóëüñíîé êîíäóêòîìåòðèè äëÿ èññëåäîâàíèÿ ýëåêòðè÷åñêèõ õàðàêòåðèñòèê áèîëîãè÷åñêèõ êëåòîê // Ïðàöi Iíñòèòóòó åëåêòðîäèíàìiêè ÍÀÍ Óêðà¨íè. Êè¨â, 2012. Âèï. 31. Ñ.147-155. 4. Øèãèìàãà Â.À. Ìåòîä è àïïàðàòóðà èìïóëüñíîé êîíäóêòîìåòðèè îäèíî÷íûõ êëåòîê æèâîòíûõ è æèäêèõ ñðåä //Òðóäû VII ìåæäóíàð. í.òåõí. êîíô. ÁÔÔÕ-2011 ÑåâÍÒÓ ¾Àêòóàëüíûå âîïðîñû áèîôèçèêè è õèìèè¿. 2011. Ñ. 25-26. 5. Øèãèìàãà Â.À. Îïûò ðàçðàáîòêè àïïàðàòóðû è òåõíîëîãèè ýëåêòðîìàíèïóëÿöèè ñ êëåòêàìè æèâîòíûõ. Åëåêòðèôiêàöiÿ òà àâòîìàòèçàöiÿ ñiëüñüêîãî ãîñï-âà. Êè¨â, 2007. 1 . Ñ. 53-63.