Полная версия научной работы 377 КБ

МИКРОЦИРКУЛЯТОРНЫЕ И МОРФОЛОГИЧЕСКИЕ ИЗМЕНЕНИЯ СКЕЛЕТНОЙ
МУСКУЛАТУРЫ
КРЫС ПОСЛЕ ФАРМАКОТЕРАПИИ СИЛДЕНАФИЛОМ ПРИ
ИССЕЧЕНИИ СОСУДИСТО-НЕРВНОГО ПУЧКА НИЖНИХ КОНЕЧНОСТЕЙ
Лойко Е.А.
Курский государственный медицинский университет
Курск, Россия
MICROCIRCULATORY AND MORPHOLOGICAL CHANGES OF RAT SKELETAL
MUSCLE
AFTER
PHARMACOTHERAPY
SILDENAFIL
EXCISION
OF
THE
NEUROVASCULAR BUNDLE LOWER LIMB
Loyko E.A.
Kursk State Medical University
Kursk, Russia
Согласно проведенным исследованиям с целью определения разницы эффективности
фармакотерапии силденафилом при полном и неполном иссечении сосудисто-нервного
пучка нижних конечностей крыс выявлена следующая закономерность, что возможность
констатировать коррекцию ишемии дистантным прекондиционированием при неполном
иссечении сосудисто-нервного пучка нижних конечностей крыс увеличивает вероятность
работоспособности
мышц в 1,5 раза, что значительно выше, чем в исследованиях
проводившихся ранее (Покровский М.В., Колесник И.М., Ходов С.В. и др. Способ
фармакологической коррекции ишемии скелетной мышцы силденафилом, в том числе при lname-индуцированном дефиците оксида азота [Электронный ресурс] // Курск. – 2013 г.).
Были поставлены следующие задачи:
1) Оценить уровень микроциркуляции у животных.
2) Сравнить
результаты
морфологических
изменений
структуры
скелетной
мускулатуры крыс в эксперименте.
В качестве материалов для экспериментальных исследований был использован
препарат ингибитора ФДЭ-5 Силденафила цитрат («VIAGRA», Pfizer).
В качестве объектов исследования были выбраны половозрелые особи белых крысах
линии Wistar массой 250-300 г.
1
Рис 1. Крысы линии Wistar.
Экспериментальные животные были разделены по следующим критериям: 1)
ложнооперированные животные (n=10)-контрольная группа; 2) моделирование ишемии
мышц бедра путем иссечения бедренной артерии +силденафил (n=10)- экспереминатальная
группа №1; 3) моделирование ишемии мышц бедра путем иссечения сосудисто-нервного
пучка + силденафил (n=10)- экспереминатальная группа №2.
Под общей анестезий (хлоралгидрат 300 мг/кг веса внутрибрюшинно) с соблюдением
всех международных и отечественных норм гуманного обращения с животными, были
произведены операции: удаление участка бедренной артерии в первой серии эксперимента
и сосудисто-нервного( бедренные артерия и вена, седалищный нерв) пучка во второй.
Коррекцию
ишемии
мышц
проводили
у
животных
2-ой
и
3-й
групп
внутрижелудочным введением Силденафила цитрата в дозе 2,2 мг/кг на первые, третьи и
пятые сутки эксперимента.
Уровень микроциркуляции в мышцах голени определяли при помощи оборудования
производства
компании
Biopac
systems:
полиграфа
МР100
с
модулем
лазерной
допплеровской флоуметрии LDF100C и инвазивного игольчатого датчика TSD144 на 14 и 28
сутки. Регистрацию и обработку результатов лазерной допплеровской флоуметрии (ЛДФ)
производили
с
помощью
программы
AcqKnowledge
версии
3.8.1.,
значения
микроциркуляции выражали в перфузионных единицах (НЕ). Запись кривой уровня
микроциркуляции осуществли в пяти точках (середина длины мышцы, точки на 3-5 мм выше
и ниже, латеральное и медиальнее первой) в течение 30 секунд в каждой точке. Из
полученных пяти значений выводили среднее, которое вносили в протокол и принимали за
уровень микроциркуляции в мышцах голени у данного животного. Из 10 полученных
2
значений рассчитывали среднее, которое принимали за уровень микроциркуляции в данной
группе животных на данном сроке исследования.
Животные были выведены из эксперимента на 28 сутки путем передозировки наркоза.
В каждом случае произведена аутопсия с изъятием препарата мышцы бедра. На каждое
животное заводили документацию в виде протокола операции и протокола аутопсии.
Гистологический материал фиксировали в 10% забуферном нейтральном формалине в
течении 7 суток. По стандартной методике изготавливали парафиновые блоки и
микропрепараты. Полученные гистологические препараты окрашивали гематоксилином и
эозином. Микроскопирование препаратов бедренной мышци
производили по средствам
световой микроскопии с помощью микроскопа Livenhuk 320. Для морфометрической оценки
производили фотографирование препаратов с использованием цифровой насадки Livenhuk
c310 и программы Scope Tek ScopePhoto (версия х86,
3.1.268). По полученным
микрофотографиям при увеличении 4х20х6 наблюдали морфологические изменения
миоцитов, оценивали размеры ядер и
количество кровеносных сосудов в поле зрения.
Статистическую обработку полученных результатов проводили с применением методик
описательной и вариационной статистики.
Оценки уровня микроциркуляции у животных опытных групп проводились в два
этапа 14 и 28 дней после эксперимента, результаты которых представлены в гистограмме 1.
В группе ложнооперированных животных среднее значение уровня микроциркуляции
в мышцах правой голени на всех сроках не имеет достоверных отличий от показателей в
группе интактных животных(p>0,05).
В группе моделирования ишемии мышц бедра путем иссечения бедренной артерии с
коррекцией микроциркуляции Силденафилом на всех сроках достоверно стремится к
значению интактной мышце (р<0,05).
В группе моделирования ишемии мышц бедра путем иссечения сосудисто - нервного
пучка с коррекцией Силденафилом результаты ниже чем у предыдущей группы животных,
но так же достоверно стремится к значению интактной мышце (р<0,05).
3
1000
900
800
700
600
500
400
300
200
100
0
889,3
524 530
503
806
429,14
Ряд1
Ряд2
Гистограмма 1. Результаты оценки уровня микроциркуляции у животных
опытных групп.
В отношении результатом морфологических изменений структуры скелетной
мускулатуры грызунов в эксперименте , а именно размер миоцитов в условных единицах
(диаграмма 1) и количество кровеносных сосудов в препарате бедренной мышцы в поле
зрения (диаграмма 2), можно сказать, что при неполном иссечении сосудисто-нервного
пучка (2 группы)
наблюдается больший потенциал к быстрому восстановлению
работоспособности мышц бедра крысы, чем у остальных групп (p<0,05).
Диаграмма 1. Оценка размеров миоцитов бедренной мышцы в относительных
единицах.
4
Диаграмма 2. Количество кровеносных сосудов препарата мышцы бедра
в поле зрения.
Полученные результаты позволяют констатировать фармакологическую коррекцию
ишемии скелетной мышцы цитратом Силденафила как при полном, так и при неполном
иссечении сосудисто-нервного пучка.
Таким образом, разница эффективности фармакотерапии силденафилом при полном и
неполном иссечении сосудисто-нервного пучка нижних конечностей крыс заключается в
следующем:
1)
при
результаты
неполном
оценки
уровня
иссечении
микроциркуляции
пучка
сосудисто-нервного
крыс
в
1,5
НЕ
выше,
чем
у
ложнопрооперированных животных, и на 21 НЕ выше, чем у грызунов при полном
иссечении.
2)
размер миоцитов бедренной мышцы крыс ложнооперированных на 10, 73 условных
единиц меньше, чем у животных 2-ой группы, и на 6,67 условных единиц меньше, чем у 3
группы. Колличество кровеносных сосудов препарата мышцы бедра в поле зрения у 2-ой
группы крыс в 2 раза больше, чем 1-й и 3-й группах.
5