Бактериоскопический метод исследования. Простые методы

МИКРОБИОЛОГИЯ, ВИРУСОЛОГИЯ, ИММУНОЛОГИЯ
Программа управляемой самостоятельной работы
для специальности
1 – 79 01 05 Медико-психологическое дело
Медико-психологический факультет
Кафедра микробиологии, вирусологии и иммунологии им. С.И.Гельберга
Курс – 2-3
Семестр - 4-5
Контролируемая самостоятельная работа – 12.6 часов
1
УЧЕБНО-МЕТОДИЧЕСКАЯ КАРТА
Номер
раздела,
Название раздела, темы, занятия; перечень
темы,
изучаемых вопросов
занятия
1.
ВВЕДЕНИЕ В ДИСЦИПЛИНУ. МЕТОДЫ
ИССЛЕДОВАНИЯ
1.1.
История развития микробиологии. Заслуги
Пастера и Коха. Развитие микробиологии в
Беларуси. Типы таксономии биологических
объектов. Признаки, лежащие в основе современной таксономии микроорганизмов и их
применение в бактериологии и вирусологии.
ОБЩАЯ МИКРОБИОЛОГИЯ
2.4.
Бактериофаг. Классификации бактериофагов.
Практическое применение бактериофагов.
2.9.
ИММУНОЛОГИЯ
3.1.
Система комплемента. Фагоцитоз. Функции
фагоцитов.
3.8.
МЕДИЦИНСКАЯ БАКТЕРИОЛОГИЯ С
ОСНОВАМИ
МЕДИЦИНСКОЙ
МИКОЛОГИИ
И
МЕДИЦИНСКОЙ
ПРОТОЗООЛОГИИ
4.8.
Общая классификация лептоспир. Лептоспироз и общая схема его микробиологической
диагностики. Классификация риккетсий и
риккетсиозов. Свойства риккетсий, характерные особенности риккетсиозов, их микробиологическая диагностика. Хламидии и хламидиозы. Микробиологическая диагностика
хламидиозов. Микоплазмы и микоплазменные
инфекции, их микробиологическая диагностика.
ОБЩАЯ И ЧАСТНАЯ МЕДИЦИНСКАЯ
ВИРУСОЛОГИЯ
5.4.
Поксвирусы. История разработки метода иммунопрофилактики натуральной оспы и глобальной эрадикации болезни. Аденовирусы.
Аденовирусные инфекции и их вирусологическая диагностика. Понятие о паповавирусах,
понятие о полиомавирусах. Парвовирусы и их
роль в патологии человека.
КЛИНИЧЕСКАЯ МИКРОБИОЛОГИЯ (2,1
ч.)
Клиническая
микробиология.
Условнопатогенные микроорганизмы. Оппортунистические инфекции и их микробиологическая
диагностика. Внутрибольничные инфекции и
их диагностика. Микробные заболевания
ЦНС. Бактериальные менингиты. Вирусные
менингиты и энцефалиты. Криптококковый
менингит. Абсцессы головного мозга и их ла-
Количество аудиторных часов
управляемая самостоятельная
работа студента
2,1
2,1
2,1
2,1
2,1
2,1
2,1
2,6
2,1
2,1
2,1
2
Номер
раздела,
темы,
занятия
Количество аудиторных часов
Название раздела, темы, занятия; перечень
изучаемых вопросов
бораторная диагностика. Сравнительно редкие формы микробных поражений ЦНС.
Всего часов КСР:
управляемая самостоятельная
работа студента
12,6
3
ТЕМА №1
МИКРОБИОЛОГИЯ КАК НАУКА
Бактериоскопический метод исследования. Простые методы окраски
Вопросы КСР:
1. История развития микробиологии. Заслуги Пастера и Коха.
2. Развитие микробиологии в Беларуси.
3. Типы таксономии биологических объектов.
4. Признаки, лежащие в основе современной таксономии микроорганизмов и их применение в бактериологии и вирусологии.
В истории микробиологии выделяют четыре периода.
А. Первый период называется описательный.
1. Он длился с конца XVII до середины ХХ в.
2. В этот период произошло открытие мира микроорганизмов и описание внешнего вида большинства бактерий.
3. Ключевой фигурой этого периода считается изобретатель микроскопа и первый человек, увидевший удивительный и таинственный мир микроорганизмов – А.Левенгук (Рис. 1.5-1).
Рис.1.5-1 А. Левенгук (1632-1723)
Б. Второй период развития микробиологии носит название физиологический (или, как его ещё называют по имени самого выдающегося микробиолога всех времён и народов – пастеровский).
1. Второй период охватывает время с середины XIX до начала ХХ в.
2. Этот период развития микробиологии характеризуется началом изучения жизнедеятельности (физиологии) бактериальной
клетки, открытием болезнетворных бактерий, началом научной микробиологии.
3. Развитие микробиологии в этот период практически полностью определяли два великих учёных, ставших основоположниками научной микробиологии – Л.Пастер (Рис. 1.5-2) и Р.Кох (Рис. 1.5-3). Их заслуги настолько значительны, что будет
справедливым рассмотреть их чуть ниже, выделив в самостоятельный раздел.
Рис. 1.5-2 Л.Пастер (1822-1895)
Рис.1.5-3 Р.Кох (1843-1910)
В. Третий период развития микробиологии называется иммунологический.
1. Он продолжался с начала до середины ХХ века.
2. Как следует из названия, третий период развития микробиологии характеризуется прежде всего открытием иммунитета
и началом развития иммунологии.
4
3. Из наиболее заслуженных учёных, работавших в этот период, необходимо упомянуть И.И.Мечникова, П.Эрлиха,
А.Флеминга, Домагка и Ивановского.
а. И.И.Мечников (Рис. 1.5-4) разработал клеточную теорию иммунитета.
б. П.Эрлих (Рис. 1.5-5) разработал гуморальную теорию иммунитета, он же является основоположником химиотерапии инфекционных заболеваний.
в. А.Флеминг (Рис. 1.5-6) открыл пенициллин.
г. Г.Домагк положил начало применению сульфаниламидов в медицинской практике.
д. Ивановский (рис. 1.5-7) открыл вирусы.
Г. Последний период развития микробиологии называется современным.
1. Начался он с середины ХХ в.
2. Характеризуется современный период развития микробиологии разработкой молекулярных методов исследования.
3. Из учёных этого периода необходимо упомянуть Львова, Портера, Эдельмана, Бернета, Галло, Монтанье, Пруссинера.
Рис. 1.5-5. П.Эрлих (1854-1915)
Рис. 1.5-4. И.И.Мечников (1845-1916)
Рис. 1.5-6. А.Флеминг (1881-1955)
Рис. 1.5-8. Львов
Рис. 1.5-9. Бернет
Рис. 1.5-7. Ивановский
Рис. 1.5-10. Прусинер
а. Львов (Рис. 1.5-8) открыл способность вирусов сохраняться в виде интегрированных в хромосому клетки-хозяина нуклеотидных последовательностей, которые были названы провирусом. Это открытие революционным образом изменило
представление о молекулярных механизмах взаимодействия вируса с инфицированной клеткой.
б. Работы Портера и Эдельмана позволили понять строение иммуноглобулинов (антител).
в. Бернет (Рис. 1.5-9) сформулировал клонально-селекционную теорию иммунитета, лежащую в основе современных
5
взглядов на функционирование иммунной системы.
г. Галло и Монтанье открыли вирус иммунодефицита человека (ВИЧ) – самый страшный из инфекционных агентов, с
которыми когда-либо сталкивалось человечество. В настоящее время пандемия ВИЧ-инфекции не контролируется всемирным здравоохранением и несёт реальную угрозу существования вида Homo sapiens.
д. Прусинер (Рис. 1.5-10) открыл прионы – инфекционные белки. Прионовые инфекции – губчатые энцефалопатии – абсолютно смертельные заболевания.
Основоположники научной микробиологии Л.Пастер и Р.Кох
Л.Пастер и Р.Кох – два величайших учёных, подобно двум атлантам, держат на своих плечах всё грандиозное здание современной научной микробиологии. Именно они – и прежде всего Л.Пастер – превратили интересное времяпрепровождение, которым
было до середины ХІХ века рассматривание в «трубу Левенгука» забавных микроскопических существ, в настоящую науку,
буквально перевернувшую всю систему взглядов на саму сущность жизни.
А. Л.Пастер был по своему образованию химиком, в микробиологию его привела логика научного поиска. Как химик, он занялся изучением брожения – как тогда полагали, химического процесса – и открыл его биологическую сущность: брожение
осуществляли микроорганизмы. Пастер занялся дальнейшим изучением живых микроскопических объектов, создав новую
науку – микробиологию и став в этой новой науке в непререкаемым авторитетом.
1. Л.Пастер доказал патогенность для человека стафилококка, пневмококка. В медицинской микробиологии принято считать первооткрывателем микроба не того, кто первым описал его, а того, кто доказал его роль как этиологического агента
того или иного заболевания. Поэтому Л.Пастера считают первооткрывателем этих бактерий. Кроме них Л.Пастер открыл
клостридии.
2. Л.Пастер первым разработал алгоритм приготовления живых (ослабленных) вакцин, назвав эти препараты в честь эмпирического открытия Дженнера, разработавшего оспопрививание (лат. vacca = корова). Пастер приготовил вакцины против
куриной холеры, сибирской язвы и бешенства. Последнюю вакцину он создал, даже не зная возбудителя болезни (вирусы
были открыты позднее). Таким образом, Л.Пастера смело можно назвать основоположником иммунологии.
3. Л.Пастеру принадлежит и множество других открытий.
а. Как уже упоминалось выше, Пастер открыл микробную природу брожения.
б. Кроме этого им была открыта микробная природа болезней шелковичных червей, а так же природа порчи (скисания) вина и пива. Эти открытия великого учёного принесли Франции огромную материальную выгоду.
в. Л.Пастер доказал невозможность самозарождения микроорганизмов.
г. Пастер изобрёл такие широко ныне применяемые способы стерилизации, как стерилизация сухим жаром и пастеризация.
Б. Р.Кох, в отличие от Л.Пастера, был врачом. После окончания университета он работал в глухом уголке Восточной Пруссии.
Чтобы развеять скуку мужа, жена подарила ему на день рождения микроскоп, который рассматривался в то время как игрушка. Так получилось, что этот подарок положил начало научной карьере Р.Коха, будущего лауреата Нобелевской премии
за открытие возбудителя самого страшного в то время заболевания – туберкулёза.
1. Р.Кох открыл возбудителей сибирской язвы, холеры («запятая Коха») и туберкулёза («палочка Коха»).
2. Р.Кох усовершенствовал правила, предложенные Генле, для доказательства этиологической роли данного микроба в развитии данного заболевания. Триада Генле-Коха гласит: чтобы данный микроб считался возбудителем данного заболевания необходимо:
 выделить данный микроб от больного (при этом от здорового он выделять не должен),
 получить чистую культуру данного микроба,
 при заражении ею лабораторного животного, у последнего должно развиться заболевание со схожей клинической
картиной.
В настоящее время все три положения триады Генле-Коха уже устарели, но в своё время (конец ХІХ – начало ХХ в.) это
были чёткие правила, следуя которым, микробиологи один за другим открывали возбудителей инфекционных заболеваний. Это было время информационного взрыва в микробиологии.
3. Р.Кох очень много сделал в области практической бактериологии.
а. Им были введены в бактериологическую практику плотные питательные среды.
б. Р.Кох предложил окрашивать микроорганизмы анилиновыми красителями.
в. Р.Кох оснастил микроскоп иммерсионным объективом, положив начало использованию иммерсионной микроскопии,
самого распространённого метода микроскопии в бактериологических лабораториях.
г. Р.Кох первым стал применять микрофотографию.
д. Р.Кох разработал метод стерилизации текучим паром. Прибор, применяемый для этой цели до сих пор, называется
«аппаратом Коха».
Развитие микробиологии в Беларуси
На территории Беларуси научные учреждения, в которых развивалась микробиологическая наука и учебные заведения, где
микробиология преподавалась как предмет, возникли в первой трети ХХ века, но впервые микроскоп как научный прибор применяли здесь еще с конца XVIII века.
А. В конце XVIII века в Гродно Жилибером (Рис. 1.7-1) была основана медицинская академия. В одной из своих статей Жилибер описывает свою попытку в отделяемом язвы найти с помощью микроскопа мельчайших организмов, которые могли
бы быть причиной заболевания. По описанию клинических симптомов можно сделать предположение, что у больного была
сибирская язва – Жилибер вполне мог увидеть в микроскоп возбудителя. И хотя сибиреязвенная бацилла была открыта значительно позже, именно попытку Жилибера можно назвать первым в истории Беларуси случаем использования микроскопа в
6
диагностике инфекционной болезни.
Б. Становление микробиологической науки в Беларуси связано с именем Эльберта (Рис. 1.7-2). Эльберт, чья научная деятельность продолжалась с 20-х по 60-е годы ХХ в., основал в Минске санитарно-бактериологический институт и первую кафедру
микробиологии. Эльберт много сделал для изучения клебсиелл, он является соавтором создания вакцины для профилактики
туляремии (вакцина Гайского-Эльберта).
В. Его ученик и соратник Гельберг (Рис. 1.7-3) основал кафедру микробиологии в Гродненском государственном медицинском
институте. Гельберг, чья научная деятельность протекала с 20-х по 90-е гг. ХХ в., заслужил мировое признание своими работами по изучению микобактерий. Кафедра микробиологии, вирусологии и иммунологии Гродненского государственного медицинского университета носит имя С.И.Гельберга.
Рис. 1.7-1. Жилибер
Рис.1.7-2. Эльберт
Рис. 1.7-4. Красильников
Рис. 1.7-3. Гельберг
Рис. 1.7-5. Титов
Рис. 1.7-6. Вотяков
Г. Красильников (Рис. 1.7-4), время деятельности которого пришлось на 40-е – 90-е гг. ХХ в. является ведущим белорусским
бактериологом, его работы по изучению клебсиелл, лептоспир, не потеряли своего значения и по сей день. Именно Красильников, по желанию Эльберта, принял из его рук кафедру микробиологии Минского медицинского института и возглавлял её
не одно десятилетие. Как в своё время Эльберт, так и Красильников, передал заведование кафедрой своему самому достойному ученику – Титову (рис. 1.7-5), ведущему белорусскому иммунологу, который сейчас, являясь членом Национальной
академии наук Беларуси, возглавляет не только кафедру микробиологии Белорусского медицинского университета, но и
Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии – центральное научное учреждение в области медицинской микробиологии нашей страны.
Д. Основоположником белорусской вирусологии является Вотяков (Рис. 1.7-6), работающий в Беларуси с 1950 г. Он внес значительный вклад в решение многих проблем общей и прикладной вирусологии и эпидемиологии, в выяснение механизмов
развития вирусных инфекций, их лечение химиопрепаратами. За 50 с лишним лет своей работы Вотяков создал белорусскую
школу вирусологов.
Иерархическая система таксонов, применяемых в бактериологии и вирусологии
Из-за принципиального отличия в строении и функционировании прокариот (бактерий) и вирусов, система таксонов, применяемых в их классификации, так же различна.
А. У бактерий таксоны располагаются в следующем нисходящем порядке: царство, отдел, порядок, семейство, род, вид, подвидовые категории.
1. Царство – самый крупный таксон, все бактерии объединены в царство Procaryota, названное так вследствие особенности
строения бактериальной клетки. Среди эукариот также есть микроорганизмы – это микроскопические грибки и простейшие.
2. По особенностям строения клеточной стенки прокариоты классифицируются на четыре отдела, три из которых
(Firmicutes, Gracilicutes и Tenericutes) объединяют эу(истинные)бактерии, а один (Mendosicutes) – так называемые архебактерии (малоизученные прокариоты, обитающие в экстремальных условиях). Медицинская микробиология не изучает
7
архебактерии, поскольку они не имеют медицинского значения.
3. Название порядка у бактерий всегда заканчивается на –ales. На порядки классифицируется большинство прокариот.
4. Название семейства у прокариот заканчивается на –ceae. Практически все прокариоты классифицированы на семейства.
5. Семейства подразделяются на роды. Из их числа лишь немногие, так называемые роды с неясным таксономическим положением, не классифицированы как относящиеся к тому или иному семейству.
6. Роды подразделяются на виды. Вид является основной таксономической единицей у всех форм клеточной жизни (т.е. не
только у про-, но и у эукариот).
7. Вследствие выраженной способности к изменчивости, виды бактерий отличаются крайней степенью гетерогенности. Поэтому в систематике прокариот используются так называемые подвидовые категории: вариант, штамм, клон.
а. Особи одного вида, отличающиеся друг от друга каким-либо признаком, классифицируются как различные варианты
(«-вары») этого вида. Раньше эти таксономические единицы назывались «-типами» и этот термин до сих пор встречается в научной литературе.
1. Морфовары отличаются друг от друга своими морфологическими признаками.
2. Биовары – биологическими признаками (например, культуральными).
3. Ферментовары отличаются друг от друга набором ферментов и, как следствие, биохимической активностью. Часто для их обозначения также используется термин «биовар».
4. Резистенсвары отличаются устойчивостью к антимикробным веществам, прежде всего к антибиотикам.
5. Фаговары отличаются чувствительностью к типовым фагам (вирусам бактерий),
6. Серовары отличаются друг от друга своим антигенным составом.
7. Эковары различны по среде своего обитания, т.е. тем экологическим нишам, которые занимают эти варианты.
8. Патовары отличаются друг от друга уровнем своей болезнетворности (патогенностью, вирулентностью)
б. Термин штамм используется для обозначения бактериальной культуры, выделенной из конкретного источника.
Например, две культуры кишечной палочки, выделенные из кишечника разных людей, могут быть абсолютно идентичны друг другу по всем своим свойствам, однако, тем не менее, они будут считаться двумя различными штаммами.
в. Потомство одной бактериальной клетки называется клоном. В генетике этот термин используется для обозначения
двух особей, идентичных по своему геному. В практической бактериологии клональной называется культура, выросшая из одной клетки, хотя уже после 5 – 7 делений, вследствие выраженной изменчивости, бактериальные клетки теряют генетическую идентичность.
Б. У вирусов таксоны располагаются в следующем нисходящем порядке: царство, подцарство, семейство, подсемейство, род,
название вируса, варианты вируса.
1. Вирусы, как неклеточная форма жизни выделяются в отдельное царство Vira.
2. В зависимости от типа нуклеиновой кислоты, а вирусная частица, в отличие от клетки содержит или ДНК или РНК, царство Vira подразделяется на два подцарства – ДНК- и РНК-геномных вирусов.
3. Подцарства содержат семейства. Это наиболее часто употребляемое название вирусных таксонов. Когда говорят «герпесвирус» или «аденовирус» имеют в виду именно семейство. Название семейства в латинском написании обязательно имеет окончание –viridae.
4. Некоторые семейства подразделяются на подсемейства. Название этого таксона заканчивается на –virinae.
5. Основной таксономической единицей в систематике вирусов является род (понятие «вид» в вирусологии не определено).
6. В роды входят отдельные вирусы. Например, в род Orthoparamyxovirus входят вирусы парагриппа, эпидемического паротита, ньюкастлской болезни.
7. Вирусы так же, как и бактерии, классифицируются на различные варианты. Чаще всего речь идёт об антигенных вариантах – в этом случае, как и у бактерий, употребляется термин «серовар» или «серотип».
ТЕМА №4
ФИЗИОЛОГИЯ ПРОКАРИОТ (ПРОДОЛЖЕНИЕ). БАКТЕРИОФАГИ
Вопросы КСР:
1. Бактериофаг.
2. Классификации бактериофагов.
3. Практическое применение бактериофагов.
БАКТЕРИОФАГИ
Бактериофагами (или просто фагами) называются вирусы, поражающие прокариотическую клетку. Традиционно они рассматриваются в курсе вирусологии. Они по своей структуре во многом отличаются от вирусов животных и человека, а, главное, поскольку в медицинской бактериологии они в основном используются с помощью культурального метода для идентификации
бактерий, мы рассмотрим их в курсе общей микробиологии и именно после разбора культурального метода диагностики. Кроме того, поскольку бактериофаги играют значительную роль в генетике бактерий, их логично рассматривать перед изложением
соответствующего раздела.
Открытие, номенклатура и структура бактериофагов
8
Бактериофаги были открыты вскоре после эпохального открытия Ивановского. Однако их структура и особенности взаимодействия с бактериальной клеткой прояснились лишь на переломе ХХ века.
А. Бактериофаги открыл д’Эрелль в 1917 году.
Б. Номенклатура фагов основана на видовом наименовании хозяина. Это значит, что название конкретного бактериофага – это
название того бактериального вида, который является основным хозяином данного фага, с добавлением буквенного, или
числового, или буквенно-числового обозначения (например: Escherichia coli λ, Escherichia coli Т2 и т.п.).
В. Структура бактериофага может быть в принципе описана как нуклеиновая кислота, окруженная белковой оболочкой. То
есть (как будет видно из курса вирусологии), это структура простого вируса. Как и у всех вирусов, в составе бактериофага
может быть только один тип нуклеиновой кислоты – или ДНК или РНК.
1. Нуклеиновая кислота бактериофага содержится в его головке – икосаэдральной структуре (схожей с формой простых вирусов – см. соответствующий раздел вирусологии), формирующей вокруг нуклеиновой кислоты белковую оболочку.
2. Кроме головки бактериофаг может иметь отросток – трубчатую белковую структуру, через которую нуклеиновая кислота
внедряется в клетку, к которой прикрепился бактериофаг.
3. В дополнение к этим двум основным структурным элементам бактериофаги могут иметь дополнительные структуры –
например, базальную пластинку, концевые нити и т.д. (Рис. 10.1-1 и 10.1-2).
Рис. 10.1-1. Бактериофаг Т2 (схема строения)
Рис. 10.1-2. Бактериофаг Т2 (электронная микроскопия – объемная фотография)
Морфологические типы бактериофагов
В зависимости от наличия и характера основных структурных компонентов – головки и отростка – бактериофаги подразделяются на морфологические типы, в пределах которых, в свою очередь, возможны различные варианты, что делает мир бактериофагов очень разнообразным (Рис. 10.2-1).
Рис. 10.2-1. Различные морфологические типы бактериофагов.
А. Бактериофаг может иметь только один из основных структурных компонентов. Такие бактериофаги иногда называют простыми.
1. Нитчатые бактериофаги не имеют головки и представлены только отростком – это I морфологический тип бактериофагов.
2. Бактериофаги, имеющие только головку, без отростка, составляют II морфологический тип.
Б. Бактериофаги, имеющие и головку и отросток, иногда называют сложными.
1. Отросток у бактериофагов может быть коротким и без чехла – такие бактериофаги относятся к III морфологическому
типу.
2. Отросток у бактериофагов может быть длинным и с чехлом.
а. Если отросток при этом не может сокращаться, то такие бактериофаги относятся к IV морфологическому типу.
б. Бактериофаги, обладающие сократительным отростком, относятся к V морфологическому типу.
Классификация бактериофагов по спектру действия
Чем большее количество видов и вариантов бактерий может поражать данный бактериофаг, тем шире его спектр действия.
9
А. Бактериофаги, поражающие несколько видов бактерий, называются полифагами. Такие фаги встречаются относительно
редко.
Б. Более многочисленны монофаги – такие бактериофаги могут поражать особей только одного вида (поэтому их часто называют видовыми бактериофагами).
В. Но наиболее многочисленны типовые бактериофаги – они поражают не всех особей данного вида, а только часть их. Именно в зависимости от чувствительности к таким бактериофагам выделяют внутри одного вида различные фаговары (или, в
более старом варианте термина, фаготипы).
Вирулентный, умеренный, дефектный бактериофаги
По особенностям взаимодействия с чувствительной клеткой выделяют вирулентный и умеренный бактериофаги. Кроме этого,
бактериофаг может полностью или частично заменять свой геном на участок генома бактериальной клетки – хозяина: такие
бактериофаги называются дефектными.
А. Вирулентный бактериофаг вызывает лизис клетки, в которой он реплицируется, с выходом многочисленного (до 200 фаговых корпускул) потомства.
Б. Умеренный бактериофаг вызывает лизогенизацию пораженной им бактериальной клетки – интегрируется в ее геном (превращается в профаг), репрессируется и реплицируется в его составе. Как результат, профаг присутствует во всех клетках,
образующихся в результате деления лизогенной клетки. Спустя определенное, иногда очень длительное, время может произойти дерепрессия профага (так называемая индукция фага), в результате чего умеренный бактериофаг, подобно вирулентному, вызовет лизис клетки с выходом большого числа фаговых корпускул.
1. Профаг может репрессироваться полностью. В этом случае фенотип лизогенной бактерии не меняется.
2. Некоторые профаги репрессируются не полностью – с определенного гена профага снимается информация, а, следовательно, лизогенная бактерия приобретает в результате лизогенизации дополнительный признак. Такое явление (изменение фенотипа бактерии в результате лизогенизации) называется фаговой конверсией.
В. Среди образующихся при лизисе клетки вирулентных или (при индукции профага) умеренных бактериофагов всегда присутствует некоторое количество фаговых корпускул, несущих, вместо полноценной нуклеиновой кислоты бактериофага, фрагмент нуклеиновой кислоты бактериальной клетки или нуклеиновую кислоту бактериофага, в которой небольшой участок
заменен на фрагмент нуклеиновой кислоты бактериальной клетки. Такие бактериофаги, вследствие дефекта своего генома,
уже никогда не смогут вызвать лизиса бактериальной клетки, которую они поразили. Такие бактериофаги и называются дефектными. Дефектные бактериофаги переносят участок генома от одной бактериальной клетки к другой. Этот процесс
называется трансдукцией (перенос генетического материала от донорской к реципиентной клетке с помощью дефектного
бактериофага), поэтому дефектные бактериофаги часто называют еще и трансдуцирующими.
1. Дефектные бактериофаги, «произошедшие» от вирулентных фагов, содержат в своем составе вместо нуклеиновой кислоты фага участок нуклеиновой кислоты «родительской» бактерии. Причем, в фаговый корпускул может быть включен любой – случайный – участок генома бактерии. Следовательно, такой фаг может передавать любой признак.
а. Участок нуклеиновой кислоты, внесенный таким дефектным фагом в бактериальную клетку, чаще всего не интегрируется в бактериальную хромосому и при делении клетки переходит в одну из вновь образованных особей. Понятно, что
спустя некоторое время бактерия, обладающая признаком, детерминированным фагом, просто потеряется среди массива особей, этим признаком не обладающими. По этой причине такая трансдукция называется абортивной.
б. Реже участок нуклеиновой кислоты, внесенный таким дефектным фагом в бактериальную клетку, интегрируется в бактериальную хромосому и, следовательно, присутствует у всех клеток данного клона. Такая трансдукция называется
общей.
2. Дефектные фаги, «произошедшие» от умеренных фагов содержат в своем составе строго определенный участок нуклеиновой кислоты «родительской» клетки и, следовательно, каждый конкретный фаг может передавать строго определенный признак. Такая трансдукция называется специализированной.
Взаимодействие бактериофага с бактериальной клеткой
Взаимодействия бактериофага с чувствительной клеткой аналогично взаимодействую вируса с чувствительной клеткой, которое будет разбираться в курсе вирусологии.
А. Бактериофаг адсорбируется на специальных, специфических для конкретного фага, рецепторах клеточной стенки бактериальной клетки. Если бактериальная клетка не имеет рецепторов для адсорбции конкретного бактериофага, то она к нему не
чувствительна. Сферопласты также теряют чувствительность к видовым и типовым фагам, поскольку с потерей клеточной
стенки теряют и локализованные на ней рецепторы для адсорбции соответствующих бактериофагов.
В. Следующая стадия – проникновение нуклеиновой кислоты бактериофага внутрь бактериальной клетки. Этот процесс в
вирусологии называется депротеинизацией, поскольку внутрь клетки проникает только нуклеиновая кислота вируса, вирус
как бы «раздевается», сбрасывая свою белковую оболочку.
Г. В дальнейшем происходит взаимодействие бактериофага с геномом пораженной клетки.
1. Вирулентные бактериофаги вызывают продуктивную инфекцию бактериальной клетки.
а. Происходит репликация фаговой нуклеиновой кислоты и синтез фаговых белков.
б. Затем происходит сборка фаговых частиц (без участия ферментов, по принципу самосборки).
в. Завершается процесс выходом зрелых фагов.
1. Клетка при этом может лизироваться (происходит своеобразный «взрыв» с выходом в окружающую среду фаговых
корпускул).
2. Некоторые нитчатые фаги способны выходить из бактериальной клетки не только не вызывая ее лизиса, но клетка при
10
этом даже не погибает.
2. Умеренные бактериофаги вызывают лизогенизацию бактериальной клетки.
1. Нуклеиновая кислота умеренного фага интегрируется в геном бактериальной клетки, превращаясь в профаг.
2. Транскрипция профага репрессируется фаговым репрессором, вследствие чего информация с него не снимается и он
реплицируется в составе генома лизогенной бактериальной клетки. Все клетки бактериальной культуры, ведущей
начало от такой клетки содержат профаг. Поэтому и культура в целом называется лизогенной.
3. В дальнейшем с профага какой-либо клетки или совокупности клеток лизогенной культуры может начаться процесс
снятия информации (такое явление называется индукция профага) и тогда разовьется продуктивная инфекция с лизисом клетки и выходом из нее зрелых корпускул умеренного бактериофага.
Практическое применение фагов
Бактериофаги в медицинской практике применяются в диагностике, лечении и профилактике инфекционных заболеваний.
А. В диагностике бактериофаг применяется при осуществлении культурального метода исследования для определения вида
выделенной чистой культуры, также для ее типирования. Изложенный ниже метод использования бактериофага с целью индикации наличия в патологическом материале определенного вида бактерий без выделения его в чистой культуре не получил
широкого распространения.
1. Реакция нарастания титра фага основана на способности видового бактериофага реплицироваться только в клетках бактерий «своего» вида. Осуществляется она по следующему принципу. К патологическому материалу добавляют определенное количество видового бактериофага, инкубируют его в термостате, а потом вновь определяют количество фага. Если
оно возросло, значит, бактериофаг «нашел» для репликации клетки «своего» вида, следовательно – в патологическом материале присутствуют бактерии искомого вида.
2. В процессе идентификации чистой культуры используют видовые и типовые бактериофаги.
а. Видовые бактериофаги используются для фагоиндикации. Выделенную чистую культуру засевают газоном на пластинчатый агар и капают на него каплю видового бактериофага. Если культура относится к искомому виду, то в месте нанесения капли роста не будет, в противном случае в месте нанесения капли фага будет наблюдаться бактериальный рост
(Рис. 10.6-1). Иногда после нанесения бактериофага чашку Петри с пластинчатым агаром наклоняют, давая капле стечь в
краю чашки (из-за чего этот метод называют «стекающая капля»).
Рис. 10.6-1. Метод фагоиндикации: в месте нанесения капли бактериофага φ-КХ-32 чувствительный к нему вид Klebsiella planticola не растет (справа внизу видно «стерильное пятно»), клебсиелла другого вида – K. oxytoca – к этому фагу не чувствительна.
б. Типовые бактериофаги используются для фаготипирования. Принцип метода заключается в следующем.
1. Типируемый штамм засевают газоном на пластинчатый агар.
2. Затем на засеянную поверхность капают капли типовых бактериофагов (каждую в свой квадрат, помеченный заранее, например, стеклографом на дне чашки Петри).
3. Чашку с посевом инкубируют в термостате.
4. Учитывают опыт, регистрируя «стерильные пятна» или «бляшки» – места отсутствия роста в месте нанесения капли
бактериофага, к которому чувствителен данный вариант бактерий (Рис. 10.6-2).
11
Рис. 10.6-2. Стерильные пятна, образованные типовыми бактериофагами
5. Фаговар (фаготип) обозначается путем перечисления типовых фагов, лизирующих данный вариант.
Б. Применение бактериофагов (как правило, видовых) для лечения обозначается термином фаготерапия. С целью лечения бактериофаги применяются местно (в виде орошения пораженной поверхности, вкалывания в локальный очаг патологического
процесса и т.п.), так как введение их парентеральным путем приводит к развитию иммунного ответа на чужеродный фаговый
белок. Если лечебный бактериофаг применяют перорально (для лечения кишечных инфекций), то лучше всего использовать
таблетированную форму препарата, покрытую кислотоустойчивой оболочкой, растворяющейся в щелочной среде кишечника
– бактериофаги очень чувствительный к низкому рН и быстро инактивируются в кислой среде желудка.
В. Фагопрофилактика – использование бактериофага (тоже, как правило, видового) для профилактики развития бактериальной инфекции. В настоящее время применяется для экстренной профилактики брюшного тифа и дизентерии (под экстренной
профилактикой понимается комплекс мероприятий для предотвращения развития болезни уже после совершившегося акта
инфицирования, т.е. попадания возбудителя в организм пациента).
ТЕМА №11
ИММУНОЛОГИЯ КАК НАУКА. ЕСТЕСТВЕННЫЙ ИММУНИТЕТ.
Вопросы КСР:
1. Система комплемента.
2. Фагоцитоз.
3. Функции фагоцитов.
СИСТЕМА КОМПЛЕМЕНТА
Общее понятие
Комплемент – сложный белковый комплекс сыворотки крови.
А. Система комплемента состоит из 30 белков (компонентов, или фракций, системы комплемента).
Б. Активируется система комплемента за счет каскадного процесса: продукт предыдущей реакции исполняет роль катализатора последующей реакции. Причем при активации фракции компонента происходит, у первых пяти компонентов, ее расщепление. Продукты этого расщепления и обозначаются как активные фракции системы комплемента.
1. Больший из фрагментов (обозначаемый буквой b), образовавшихся при расщеплении неактивной фракции, остается на
поверхности клетки – активация комплемента всегда происходит на поверхности микробной клетки, но не собственных
эукариотических клеток. Этот фрагмент приобретает свойства фермента и способность воздействовать на последующий
компонент, активируя его.
2. Меньший фрагмент (обозначается буквой a) является растворимым и «уходит» в жидкую фазу, т.е. в сыворотку крови.
В. Фракции системы комплемента обозначаются по-разному.
1. Девять – открытых первыми – белков системы комплемента обозначаются буквой С (от английского слова complement) с
соответствующей цифрой.
2. Остальные фракции системы комплемента обозначаются другими латинскими буквами или их сочетаниями.
Г. Значение комплемента для макроорганизма велико и разнообразно (подробнее – см. раздел 26.6).
1. Часть активных фракций системы комплемента являются протеазами.
2. Некоторые – связываются с комплексом антиген-антитело (иммунным комплексом).
3. Другие – активируют тучные клетки и, связанные с ними сосудистые реакции воспаления.
4. И, наконец, часть фракций комплемента осуществляет перфорацию оболочек бактериальных клеток.
Пути активации комплемента
Существуют три пути активации комплемента: классический, лектиновый и альтернативный.
А. Классический путь активации комплемента является основным. Участие в этом пути активации комплемента – главная
функция антител.
1. Активацию комплемента по классическому пути запускает иммунный комплекс: комплекс антигена с иммуноглобулином
12
(класса G – первых трех подклассов – или М). Место антитела может «занять» С-реактивный белок – такой комплекс также активирует комплемент по классическому пути.
Рис 26.2-2. Схема классического пути активации комплемента
2. Классический путь активации комплемента осуществляется следующим образом (рис 26.2-1).
а. Сначала активируется фракция С1: она собирается из трех субфракций (C1q, C1r, C1s) и превращается в фермент С1эстеразу (С1qrs).
б. С1-эстераза расщепляет фракцию С4.
в. Активная фракция С4b ковалентно связывается с поверхностью микробных клеток (но не с собственными эукариотическими клетками макроорганизма) с здесь присоединяет к себе фракцию С2.
г. Фракция С2 в комплексе с фракцией С4b расщепляется С1-эстеразой с образованием активной фракции С2b.
д. Активные фракции С4b и С2b в один комплекс – С4bС2b – обладающий ферментативной активностью. Это так называемая С3-конвертаза классического пути.
е. С3-конвертаза расщепляет фракцию С3, нарабатываю большие количества активной фракции С3b.
ж. Активная фракция С3b присоединяется к комплексу С4bС2b и превращает его в С5-конвертазу (С4bС2bС3b).
з. С5-конвертаза расщепляет фракцию С5.
и. Появившаяся в результате этого активная фракция С5b присоединяет фракцию С6.
к. Комплекс С5bС6 присоединяет фракцию С7.
л. Комплекс С5bС6С7 встраивается в фосфолипидный бислой мембраны микробной клетки.
м. К этому комплексу присоединяется белок С8.
н. Будучи вместе со всем комплексом в фосфолипидный бислой мембраны микробной клетки, белок С8 катализирует полимеризацию 10 – 16 молекул белка С9. Данный полимер формирует в мембране микробной клетки неспадающую пору диаметром около 10 нм (рис 26.2-2)., что приводит к лизису микроба (так как на его поверхности образуется множество таких пор – «деятельность» одной единицы С3-конвертазы приводит к появлению около 1000 пор). Комплекс
С5bС6С7С8С9, образующийся в результате активации комплемента, называется мемранатакующим комплексом (МАК).
Рис. 26.2-2. Схема образования МАК (слева) и результат активации комплемента – формирование
поры в фосфолипидном бислое микробной мембраны, приводящей к осмотическому лизису микробной клетки (справа)
Б. Лектиновый путь активации комплемента запускается комплексом нормального белка сыворотки крови – маннансвязывающего лектина (МСЛ) – с углеводами поверхностных структур микробных клеток (с остатками маннозы). Активизирующаяся в результате этого процесса МСЛ-ассоциированная сериновая протеаза действует аналогично С1-эстеразе классического
пути, по которому, собственно, и развиваются дальнейшие события, заканчивающиеся формированием МАК (рис. 26.2-3).
13
Рис 26.2-3. Схема лектинового пути активации комплемента
В. Альтернативный путь активации комплемента (рис. 26.2-4) начинается с ковалентного связывания активной фракции С3b
– которая всегда присутствует в сыворотке крови в результате постоянно протекающего здесь спонтанного расщепления
фракции С3 – с поверхностными молекулами не всех, но некоторых микроорганизмов.
Рис. 26.2-4. Схема альтернативного пути активации комплемента
1. Дальнейшие события развиваются следующим образом.
а. С3b связывает фактор В (который структурно и функционально гомологичен фактору С2), образуя комплекс С3bВ.
б. В связанном с С3b виде фактор В выступает в качестве сусбтрата для фактора D (сывороточной сериновой протеазы), которая расщепляет его с образованием активного комплекса С3bВb. Этот комплекс обладает ферментативной активностью, структурно и функционально гомологичен С3-конвертазе классического пути (С4bС2b) и называется С3конвертазой альтернативного пути.
в. Сама по себе С3-конвертаза альтернативного пути нестабильна. Чтобы альтернативный путь активации комплемента
успешно продолжался этот фермент стабилизируется фактором Р (пропердином).
г. То, что происходит дальше, аналогично классическому пути активации комплемента.
1. Нарабатывается много С3b и образуется комплекс С3bВbС3b, являющийся С5-конвертазой.
2. Активация С5 дает начало образованию мембранатакующего комплекса (см. разделы 26.2.А.2.и – 26.2.А.2.н).
2. Основное функциональное отличие альтернативного пути активации комплемента, по сравнению с классическим, заключается в быстроте ответа на патоген: так как не требуется время для накопления специфических антител и образования
иммунных комплексов.
Г. Важно понимать, что и классический и альтернативный пути активации комплемента действуют параллельно, еще и амплифицируя (т.е. усиливая) друг друга. Другими словами комплемент активируется не «или по классическому или по альтернативному», а «и по классическому и по альтернативному» путям активации. Это, еще и с добавлением лектинового пути
активации, – единый процесс (см. рис. 26.2-5), разные составляющие которого могут просто проявляться в разной степени.
14
26.2-4. Общая схема активации комплемента
26.2-5. Схема, иллюстрирующая взаимосвязь путей активации комплемента
Активаторы системы комплемента
В норме, в отсутствие во внутренней среде макроорганизма патогена, уровень спонтанной активности системы комплемента
невысок. Активаторами системы комплемента являются молекулярные комплексы, располагающиеся на поверхности микроорганизма, и запускающие процесс активации комплемента по тому или иному пути. О них уже упоминалось выше (см. раздел
26.2).
А. Активаторами классического пути активации комплемента выступают два комплекса.
1. Иммунный комплекс (комплекс антиген-антитело).
2. Комплекс антигена с С-реактивным белком.
Б. Активатором лектинового пути активации комплемента выступает комплекс нормального белка сыворотки крови – маннансвязывающего лектина (МСЛ) – с углеводами поверхностных структур микробных клеток (а именно – с остатками ман15
нозы).
В. Активаторами альтернативного пути активации комплемента выступают два комплекса.
1. Комплекс (в результате ковалентного связывания) активной фракции С3b – которая всегда присутствует в сыворотке
крови в результате постоянно протекающего здесь спонтанного расщепления фракции С3 – с поверхностными молекулами не всех, но некоторых микроорганизмов.
2. Агрегированные на поверхности микроба иммуноглобулины классов А и Е.
Функции системы комплемента
Система комплемента играет очень важную роль в защите макроорганизма от патогенов.
А. Система комплемента участвует в инактивации микроорганизмов, в т.ч. опосредует действие на микробы антител.
Б. Активные фракции системы комплемента активируют фагоцитоз.
В. Активные фракции системы комплемента принимают участие в формировании воспалительной реакции.
ФАГОЦИТОЗ
Общее понятие
Под фагоцитозом понимают внутриклеточную цитотоксичность (внутриклеточный киллинг) микроорганизмов и биодеградацию других частиц диаметром более 0,1 мкм. Осуществляют фагоцитоз главным образом нейтрофилы и макрофаги/моноциты,
хотя фагоцитирующей способностью обладают и другие клетки.
Стадии фагоцитоза
Выделяют четыре стадии фагоцитоза: хемотаксис, адгезия, эндоцитоз и биодеградация. В русскоязычной передаче эти стадии
можно описать как «четыре п»: приближение, прилипание, поглощение и переваривание.
Рис. 26.2-1. Фагоцит (макрофаг) в зоне скопления объектов фагоцитоза – палочковидных бактерий
А. Первая стадия фагоцитоза (хемотаксис) – целенаправленное движение фагоцита к объекту фагоцитоза (рис. 26.2-1).
1. С одной стороны, миграцию фагоцитов к объекту фагоцитоза усиливают специальные цитокины – -хемокины (их выделяют макрофаги, моноциты, лимфоциты, клетки эндотелия).
2. С другой стороны этот процесс обуславливают хемотаксические факторы (хемоаттрактанты), выделяемые объектами
фагоцитоза: компоненты бактериальной клетки, пептиды и т.п.
Б. Вторая стадия фагоцитоза – адгезия объекта фагоцитоза на поверхности фагоцита.
1. Осуществляется эта стадия двумя возможными механизмами.
а. Неммунный механизм осуществляется за счет неспецифической адсорбции объекта фагоцитоза на поверхности фагоцита. Это так называемый доиммунный, или первичный, фагоцитоз.
Рис. 26.2-2. Иммунный механизм осуществления второй стадии фагоцитоза
б. Иммунный механизм (рис. 26.2-2) осуществляется за счет расположенных на поверхности фагоцита рецепторов к Fc16
фрагменту антител (Fc-рецепторы). Адгезия, осуществляемая по этому механизму значительно более эффективная и активная, чем при первичном фагоцитозе.
1. За счет этих рецепторов фагоцит прикрепляет к своей поверхности антитела и использует их для «захвата» объекта
фагоцитоза (естественно, того, против которого эти антитела и выработались).
2. Этими рецепторами фагоцит может «хватать» объект фагоцита, к поверхности которого прикреплены специфические антитела.
2. Однако активация второй стадии фагоцитоза происходит не только по иммунному механизму. Точнее сказать, иммунный
механизм – это один из вариантов активации адгезии объекта фагоцитоза на поверхности фагоцита. В целом, этот процесс активируется за счет опсонизации, а вещества, ответственные за такую активизацию, называются опсонинами (рис.
26.2-3).
Рис. 26.2-3. Схема, иллюстрирующая понятия «опсонизация» и «опсонины» (объяснение в тексте)
а. Под опсонизацией (от лат. opsonin – усиливающий) понимают соединение объекта фагоцитоза (в частности, микроорганизма) с особым растворимым белком, обуславливающим более эффективные и адгезию объекта фагоцитоза на поверхности фагоцита и его дальнейшее поглощение. Такой белок имеет в своем составе две области.
1. Область А осуществляет связывание белка со специфическим к нему рецептором на поверхности микроба.
2. Область В осуществляет связывание этого белка с соответствующим рецептором на поверхности фагоцита.
б. Такие растворимые белки называются опсонинами. К ним можно отнести четыре вида белков человеческого организма.
1. С-реактивный белок.
2. Маннансвязывающий лектин.
3. Активную фракцию комплемента С3b.
4. Иммуноглобулины (антитела).
В. Третья стадия фагоцитоза – эндоцитоз – осуществляется в четыре последовательных этапа.
1. Сначала происходит инвагинация мембраны фагоцита в месте прикрепления объекта фагоцитоза.
2. Затем фагоцит обволакивает объект фагоцитоза большими псевдоподиями (рис. 26.2-4).
Рис. 26.2-4. Захватывание макрофагом бактерий
3. Образуется фагосома.
4. Фагосома сливается с лизосомами – образуется фаголизосома.
Г. На четвертой стадии фагоцитоза происходит резкая активация метаболизма фагоцита – активируются механизмы его внутриклеточного киллинга (внутриклеточной цитотоксичности).
17
Рис. 26.5-1. Последовательность событий при завершенном фагоцитозе
Виды фагоцитоза
Существует два вида фагоцитоза: завершенный и незавершенный.
А. При завершенном фагоцитозе осуществляются все четыре стадии, и объект фагоцитоза полностью уничтожается (рис. 26.51).
Б. При незавершенном фагоцитозе четвертая стадия или отсутствует или не завершается полным уничтожением объекта фагоцитоза.
1. Если четвертая стадия отсутствует, то микроб остается жизнеспособным.
2. Если четвертая стадия не завершается полным уничтожением объекта фагоцитоза, то происходит частичная деградация
антигена для его презентации (представления) лимфоцитам. Фагоцитирующая клетка в этом случае исполняет роль антигенпреставляющей клетки (АПК).
Функции фагоцитов
Фагоциты выполняют три основные функции.
А. Уничтожают посредством завершенного фагоцитоза микроорганизмы и другие объекты, от которых следует очистить внутреннюю среду макроорганизма.
Б. Распознают и представляют лимфоцитам антигены в ходе развития иммунного ответа.
В. Секретируют медиаторные молекулы системы иммунитета – цитокины (в частности, цитокины, синтезируемые макрофагами, называются монокинами).
1. Основной регуляторный монокин (оказывающий иммуномодулирующие действие) – интерлейкин-1 (ИЛ-1).
2. Эффекторные монокины принимают участие в процессе внутриклеточного киллинга.
ТЕМА №26
СПИРОХЕТЫ. РИККЕТСИИ. ХЛАМИДИИ. МИКОПЛАЗМЫ
Вопросы КСР:
1. Общая классификация лептоспир.
2. Лептоспироз и общая схема его микробиологической диагностики.
3. Классификация риккетсий и риккетсиозов.
4. Свойства риккетсий, характерные особенности риккетсиозов, их микробиологическая диагностика.
5. Хламидии и хламидиозы.
6. Микробиологическая диагностика хламидиозов.
18
7. Микоплазмы и микоплазменные инфекции, их микробиологическая диагностика.
LEPTOSPIRACEAE (СЕМЕЙСТВО)
ЛЕПТОСПИРЫ: ОБЩАЯ КЛАССИФИКАЦИЯ РОДА
LEPTOSPIRA
ВОДНЫЕ
(САПРОФИТИЧЕСКИЕ)
L.BIFLEXA
ПАТОГЕННЫЕ
L.INTERROGANS
Leptospira interrogans по форме – это тонкие, спиральные нити имеющие 15–20 первичных завитков и 2-3 вторичных, по форме напоминают буквы S или С. По Романовскому-Гимзе они окрашиваются в красный цвет. Слабо окрашиваются анилиновыми красителями. Хорошо видны при темнопольной и фазовоконтрасной микроскопии. Аэробы.
ЛЕПТОСПИРОЗ
Род Leptospira, вид Leptospira interrogans насчитывает более 200 сероваров. Он вызывает зоонозную инфекцию, связанную с поражением капилляров, печени, почек, ЦНС;
развитием кровоизлияний, желтухи и лихорадки.
Резервуаром являются крупный рогатый скот, свиньи, собаки, грызуны.
Путь передачи: водный, алиментарный, контактный.
Животные выделяют лептоспиры
с мочой
инфицирование объектов внешней среды:
 воды (чаще)
 почвы
 пищевых продуктов
контакт человека с инфицированными объектами
 слизистые
 повреждённая кожа
развитие лептоспироза
Микробиологическая диагностика лептоспироза
Проводится микроскопия исследуемого материала в тёмном поле. Выделение чистой
культуры из крови проводят на раннем этапе болезни, на позднем этапе выделение проводят из мочи, а из ликвора - при поражении ЦНС.
19
патологический материал
serum
микроскопия выделение биопроба
культуры
Ig
окончательный диагноз
РИККЕТСИИ
Риккетсиозы - группа трансмиссивных инфекционных заболеваний, передающихся в
основном при укусах насекомыми, которые вызываются внутриклеточными паразитами риккетсиями и характеризуются рядом общих патогенетических, клинических и иммунологических свойств.
Термин «риккетсия» предложил в 1916 г. бразильский ученый Роха-Лима для обозначения возбудителя лихорадки Скалистых Гор, открытого американским ученым Риккетсом, который погиб в г. Мехико от сыпного тифа при его изучении. От сыпного тифа
погиб и чешский микробиолог Prowazek. В честь этих ученых был назван возбудитель
сыпного тифа Rickettsia prowazeki.
КЛАССИФИКАЦИЯ РИККЕТСИЙ
Rickettsiales – порядок
Rickettsiaceae – семейство
Роды:
 Rickettsia
 Orientia
 Erlichiaceae – семейство
Род:
 Erlichia
Риккетсии - это мелкие, полиморфные грамотрицательные бактерии. Выделяют следующие морфологические типы:
тип a – коккобактерии (основной морфологический тип)
тип b – палочковидные двузернистые (1,0-1,5 мкм)
тип c – удлинённые ( или изогнутые) двузернистые (3-4) мкм, переходный к d
тип d – нитевидные многозернистые формы (~ мицелий из a- и b-клеток)
Окрашиваются по Романовскому-Гимзе в синий цвет, клетка тоже в синий цвет, а по
Здрадовскому - в красный цвет, клетка в синий. Это облигатные внутриклеточные паразиты, основная масса риккетсий располагаются в цитоплазме, а Rickettsia rickettsii - в ядре и
в цитоплазме. На искусственных питательных средах не растут. Культивируют риккетсии
на куриных эмбрионах или в тканевых культурах.
Классификация риккетсий и риккетсиозов
Группа сыпного тифа:
–Rickettsia prowazekii – эпидемический сыпной тиф. Источник – человек, переносчик головные и платяные вши.
–Rickettsia typhi – эндемический сыпной тиф. Источник – мелкие грызуны, передается контактным и фекально-оральным путем.
20
Группа клещевых пятнистых лихорадок:
–Rickettsia rickettsii. Наблюдается в США, Канаде, Бразилии, Колумбии. Около 15 видов
клещей - естественные носители возбудителя лихорадки Скалистых гор. Заражение человека наступает при укусе клеща. Около 10 видов животных - прокормителей клещей, в том
числе собаки.
–Rickettsia conorii. Основным источником марсельской лихорадки и хранителем риккетсий
является собачий клещ. Носителями риккетсий могут быть собаки, зайцы, шакалы. Характерна сезонность - с мая по октябрь. Возможно заражение человека и при втирании в кожу
раздавленных инфицированных клещей. Передачи инфекции от человека к человеку не
происходит. Марсельская лихорадка встречается в бассейнах Средиземного, Черного и
Каспийского морей.
–Rickettsia australis. Относится к зоонозам с природной очаговостью. Распространен в
штате Квинсленд в Австралии. Переносчиками являются клещи. Резервуаром инфекции в
природе являются прокормители клещей - рыжая крыса, опоссум, кенгуру и др. Передачи
инфекции от человека к человеку не наблюдается.
–Rickettsia sibirica. Природные очаги находятся в Приморском, Хабаровском и Красноярском краях, в ряде областей Сибири (Новосибирская, Читинская, Иркутская и др.), а также
в Казахстане, Туркмении, Армении, Монголии. Резервуаром риккетсий в природе являются около 30 видов различных грызунов (мыши, хомяки, бурундуки, суслики и пр.). Передача инфекции от грызуна к грызуну осуществляется иксодовыми клещами
–Rickettsia akari. Возбудитель везикулезного риккетсиоза. Заболевание наблюдался в некоторых городах США (Нью-Йорк, Бостон, Филадельфия и др.), в центральных районах Африки, в Донецкой области Украины, в Молдавии и Белоруссии, природные очаги выявлены
в Южной Корее. Везикулезный риккетсиоз относится к зоонозам с природной очаговостью. Резервуаром возбудителя являются крысы и домовые мыши, переносчиком - гамазовый клещ.
Группа цуцугамуши (тифа джунглей)
–Orientia tsutsugamushi. Источником инфекции являются личинки краснотелковых клещей
родов Leptotrombidium и Neofroinbicula, которые нападают на людей и животных для кровососания. Дополнительным резервуаром инфекции являются прокормители личинок клещей (мелкие грызуны, насекомоядные и др.). Заражение людей связано с пребыванием в
очагах, заселенных краснотелковыми клещами.
Патогенез
Риккетсиоз - острая инфекционная болезнь, характеризуется циклическим течением.
Попадая в кровь, риккетсии размножаются в эндотелии сосудов, поражают клетки крови,
гладкомышечные клетки. Болезнь характеризуется розеолезно-петехиальной сыпью, лихорадкой, поражением нервной системы, интоксикацией Риккетсии могут сохранятся в организме реконвалесцента в течение многих лет.
Микробиологическая диагностика
Основная микробиологическая диагностика – серологические реакции с целью выявления Ig в сыворотке крови: РИФ, РСК, РПГА, ИФА.
Проводят также бактериоскопическое исследование: мазки окрашивают по Романовскому-Гимзе, по Здрадовскому и др.
Биологический метод: кровь исследуемого вводят морским свинкам или белым мышам. У животных появляется лихорадка и развивается периорхит.
21
Специфическая профилактика: для риккетсиозов большое значение имеет борьба со
вшивостью, ранняя диагностика, изоляция и госпитализация больных. Необходима тщательная санитарная обработка больных и дезинсекция одежды больного. Для специфической профилактики использовалась инактивированная формалином вакцина.
ХЛАМИДИИ И ХЛАМИДИОЗЫ
Хламидии относятся к порядку Chlamydiales, семейству Chlamydiaceae, выделяют 2
рода: Chlamydia и Chlamydophila.
Имеют вид мелких грамотрицательных кокков. Хламидии имеют различающиеся
формы, которые обозначаются как элементарные и ретикулярные тельца.
Элементарные тельца - это экстрацеллюлярные (внеклеточные) транспортные
формы, высоко инфекционные. Их характеристики:
 мелкие (0,15 – 0,2 мкм)
 геном = ¼ генома E. coli
 полиморфизм, преимущественно – кокки
 метаболически малоактивны (адаптированы к внеклеточному существованию)
Ретикулярные тельца малоинфекционны и представляют собой внутриклеточные
репродуктивные формы:
 более крупные (до 1 мкм)
 развиваются из элементарных телец в течение 5 – 6 часов
 содержат большее количество рибосом и генофора
Хламидии подавляют фагосомо-лизосомальное слияние в клетке-хозяине.
Все они облигатные внутриклеточные паразиты, не синтезируют АТФ (энергетические паразиты). Размножаются только в живых клетках хозяина:
элементарные тельца проникают в клетку путем эндоцитоза
и превращаются в ретикулярные

ретикулярные тельца размножаются бинарным делением

конденсация ретикулярных телец

промежуточные тельца
(напоминают бычий глаз)

элементарные тельца

выход из клетки

гибель клетки
Хламидии: внутриклеточные включения (микроколонии)
 образуются в результате размножения ретикулярных телец внутри эндоцитозного
пузырька (при проникновении в клетку элементарного тельца)
22
 Chlamydia trachomatis
 крупные включения
 накапливается гликоген (можно выявить путем окраски раствором Люголя)
 Chlamydophila psittaci, Chlamydophila pneumoniae
 много мелких включений вокруг ядра клетки-хозяина
Хламидии: виды и серовары
C. trachomatis (серовары по белкам наружной мембраны – обозначаются заглавными буквами латинского алфавита):
 A – C  трахома
 D – K  урогенитальный хламидиоз
(негонококковые уретриты и слизисто-гнойные цервициты) ,
пневмония и конъюнктивит у
новорожденных (бленнорея с включениями)
 L1 – L3  паховый лимфогранулематоз (венерическая лимфогранулёма)
Трахома: источник инфекции и пути инфицирования
 источник инфекции – больной человек
 инфицирование – попадание возбудителя на конъюнктиву или прилегающие ткани
(преимущественно контактным путём
Урогенитальные хламидиозы: особенности патологического процесса:





поражение клеток в результате размножения в них хламидий
эндотоксинемия (при разрушении хламидий)
стимуляция выработки γ-интерферона при снижении уровня α-интерферона
аутоиммунные процессы в разных органах
возможность длительной персистенции в организме человека
Chlamydophila psittaci (8 сероваров)
 орнитоз
Chlamydophila pneumoniae (1 серовар)
 бронхопневмония
 атеросклеротическая бляшка
Возбудитель орнитоза: взаимодействие C. psittaci с организмом человека
ингаляция возбудителя

поглощение хламидий макрофагами

размножение их в печени
увеличение печени
у 1/3 – нарушение функции печени
23
размножение в селезёнке

кровь

 лёгкие
некротические гранулёмы
геморрагии
 лимфоузлы (персистенция  рецидивы)
 др. органы (с возможной летальностью):
 миокард
 перикард
 надпочечники
 головной мозг
Респираторная патология хламидийной природы
 Chlamydia trachomatis
пневмония новорождённых
пневмония у грудных детей с иммунодефицитом
пневмония у взрослых с иммунодефицитом
 Chlamydophila psittaci
орнитоз
 Chlamydophila pneumoniae (есть у 50% взрослых)
бронхопневмония
Микробиологическая диагностика хламидийных инфекций:
Орнитоз
кровь
(первые 2-3 недели)

белая мышь

желточный мешок
куриного эмбриона
обнаружение и идентификация возбудителя:
 РИФ
 ИФА
Орнитоз
serum

Ig
 РСК
 РТГА
24
 ИФА
кожно-аллергическая проба

ГЗТ
Паховый лимфогранулематоз
содержимое (пунктат) nodulus

мазок-отпечаток

культура клеток
обнаружение и идентификация возбудителя
 РИФ
 ИФА
Другие хламидиозы
патологический материал

мазок

включения (C. trachomatis) или возбудитель
 окраска
 РИФ
 ИФА
Большое значение имеет взятие материала для исследований и сроки доставки в лабораторию. Они должны быть минимальными. Делают мазок на стекле для микроскопии,
затем помещают в среду для транспортировки.
Наиболее старым методом является цитологический, при котором при микроскопии
выявляют характерные внутриплазматические включения полулунной формы. Используют
окраску по Романовскому-Гимзе и раствором Люголя. Использование при микроскопии
метода иммунофлюоресценции повышает чувствительность цитологического метода.
Наиболее достоверным подтверждением является выделение культуры хламидий. Культивирование их проводят на желточных мешках куриных эмбрионов или в культуре клеток.
Используют также обнаружение антигена хламидий в материале с помощью реакции
иммунофлюоресценции, также используют такие методы как РСК, РНГА, ИФА, аллергические реакции. Используется ПЦР для обнаружения ДНК хламидий.
МИКОПЛАЗМЫ И МИКОПЛАЗМЕННЫЕ ИНФЕКЦИИ
MOLLICUTES (КЛАСС) – «МЯГКОКОЖИЕ»
 MYCOPLASMATALES
25
 MYCOPLASMATACEAE
 MYCOPLASMA (10 ВИДОВ)
 M. PNEUMONIAE
 M. HOMINIS
 UREAPLASMA (5 ВИДОВ)
 U. UREALYTICUM
Микоплазмы относятся к отделу Tenericutes, классу Mollicutes (мягкокожие), семейству Mycoplasmataceae. Семейство включает 2 рода Mycoplasma и Ureaplasma, которые
имеют значение в патологии человек.
Mycoplasma pneumoniae поражает респираторный тракт.
Mycoplasma hominis вызывает полиорганную патологию.
Ureaplasma uralyticum поражает мочеполовую систему.
Микоплазмы: факторы патогенности
 мембранные паразиты
 выделяют слаботоксические продукты обмена (ионы аммония, Н2О2 и др.) – способствуют хронизации и медленному течению инфекционного процесса
 стимуляция пролиферации окружающих их клеток макроорганизма
 усиление ГЗТ  повреждение тканей
 повышение чувствительности клеток к вирусам
Микоплазмы представляют собой полиморфные микроорганизмы не имеющие клеточной стенки, окруженные цитоплазматической мембраной, содержащей стеролы. Из-за
отсутствия клеточной стенки могут приобретать различные формы: кокковидную, нитевидную, колбовидную. Обнаруживают их при фазовоконтрасной микроскопии.
Выращивают на специальных сложных по составу питательных средах, содержащих
стеролы (холестерин и др.) и предшественники нуклеиновых кислот. Микоплазмы образуют небольшие колонии с темным центром и более светлой периферией (форма, напоминающая яичницу-глазунью) диаметром до 1-1,5 мм.
Размножаются бинарным делением, образуя элементарные тельца.
Гибнут под действием дистиллированной воды; устойчивы к действию сульфаниламидов, пенициллину, стрептомицину и чувствительны к антибиотикам тетрациклиновой
группы.
Эпидемиология.
Источником инфекции является человек, больной микоплазмозом или здоровый носитель микоплазм. Передача инфекции может осуществляться воздушно-капельным и половым путями. При воздушно-капельном пути передачи воротами инфекции чаще служат
слизистые оболочки респираторного тракта. Внедрение возбудителя может происходить и
через слизистые оболочки мочеполовых органов (при половом пути передачи инфекции).
Микоплазмы внеклеточные патогены. К эпителию они прикрепляются посредством
белков–адгезинов.
M. pneumoniae
 субклиническая инфекция
26
 ОРЗ
 бронхопневмония
 иммунологические осложнения:
 гемолитическая анемия
 полирадикулит
 энцефалит
 менингит
 др. болезни ЦНС
 перикардит
 панкреатит
M. hominis
 патология мочеполовой системы
 патология беременности
 патология плода

Ureaplasma urealyticum
 бессимптомное носительство
 негонококковый уретрит
 простатит
 мочекаменная болезнь
 послеродовый сепсис
 патология плода и новорождённого
Микробиологическая диагностика
Для диагностики чаще используют серологические реакции: РСК, РИФ, РН – ингибирование роста.
Выявляют:
 нарастание титра Ig в парных сыворотках
 РСК
 РН (угнетение роста в присутствии специфической сыворотки)
др. серологические реакции
 Выделяют чистую культуру, используя сложные среды и вирусологические
методы культивирования.
 выявление Ag в патологич. материале
 ИФА
 РИФ
 выделение культуры (занимает от 1 до 2 недель) с последующей её идентификацией
– урогенитальные микоплазмы
 РИФ
 РН (угнетение роста)
 расщепление мочевины U. urealyticum
 ПЦР
27
ТЕМА №34
ДНК-ГЕНОМНЫЕ ВИРУСЫ
Вопросы КСР:
1. Поксвирусы.
2. История разработки метода иммунопрофилактики натуральной оспы и глобальной
эрадикации болезни.
3. Аденовирусы.
4. Аденовирусные инфекции и их вирусологическая диагностика.
5. Понятие о паповавирусах, понятие о полиомавирусах.
6. Парвовирусы и их роль в патологии человека.
Поксвирусы: культивирование
куриный
эмбрион
бляшки на
хорионаллантоисной
оболочке
Поксвирусы: особенности
репликации
культура клеток
ДНК
ЦПД
(очаговая
дегенерация)
цитоплазматические
включения в
околоядерной
зоне (тельца
Гварниери)
Вирус осповакцины:
теории происхождения
1. от вируса оспы коров
2. от вируса натуральной оспы
3. их рекомбинация
сверхранние
и РНК

«раздевающий» белок

завершение
депротеинизации
ранние
иРНК
поздние
иРНК


репликаза вирионные
белки

репликация ДНК
История разработки метода
иммунопрофилактики натуральной оспы и
глобальной эрадикации (ликвидации) болезни
• вариоляция
• 1798 г. – метод Дженнера (оспопрививание)
• 1967 г. – принятие ВОЗ плана полной
ликвидации на Земле натуральной оспы
• 1976 г. – концентрация запасов вируса
натуральной оспы в специальных
лабораториях
• 1977 г. – последний случай заболевания
• 1980-е гг. – отказ от массовой вакцинации
• рубеж XX-XXI вв. – опасность «возврата»
– биотерроризм
– размыв захоронений в зоне вечной мерзлоты
28
29
30
ТЕМА №36
МЕДЛЕННЫЕ ИНФЕКЦИИ. КЛИНИЧЕСКАЯ МИКРОБИОЛОГИЯ.
МИКРОБНЫЕ ЗАБОЛЕВАНИЯ ЦНС.
Вопросы КСР:
Клиническая микробиология.
Условно-патогенные микроорганизмы.
Оппортунистические инфекции и их микробиологическая диагностика.
Внутрибольничные инфекции и их диагностика.
Микробные заболевания ЦНС. Бактериальные менингиты.
Вирусные менингиты и энцефалиты. Криптококковый менингит.
Абсцессы головного мозга и их лабораторная диагностика.
8. Сравнительно редкие формы микробных поражений ЦНС.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
Клиническая микробиология
Раздел медицинской микробиологии, предметом изучения которого являются микробные заболевания, возникающие у больных в неинфекционных стационарах, а также – внутрибольничные (госпитальные, ятрогенные) или нозокомиальные (от греч.nosokomeo – ухаживать за больным) инфекции.
Задачи
Изучение этиологии, патогенеза, особенностей иммунитета этих заболеваний, разработка и реализация методов их лабораторной диагностики, специфической терапии и профилактики – основные задачи
клинической микробиологии.
Методы
Используются обычные методы медицинской микробиологии. Особенности:
1. Ведущий метод – культуральный.
2. При осуществлении культурального метода диагностики упор
делается на количественные исследования.
31
Объекты исследования
1. Условно-патогенные микроорганизмы.
2. Антропогенная система – больничные учреждения.
Условно-патогенные микроорганизмы:
отличительные особенности
Условно-патогенные
микроорганизмы: основные группы
1.
2.
3.
4.
5.
грамположительные кокки
энтеробактерии
псевдомонады
кандиды
пневмоцисты
экологические группы
1.
•
•
свободноживущие
сочлены микробиоценоза макроорганизма
реализация патогенности
2.
•
•
•
адаптация в биотопе
эндотоксин
ферменты-токсины
популяционные
3.
•
•
гетерогенность
изменчивость
особенности изучения (диагностики ВБИ)
4.
•
•
•
большое число штаммов
наиболее устойчивые к лекарствам, дезинфектантам и
антисептикам
в динамике болезни
Оппортунистические инфекции:
определение
• инфекции, вызываемые условнопатогенными микроорганизмами (часто
– микробными ассоциациями)
Оппортунистические инфекции:
микробиологическая диагностика
При диагностике необходимо обращать внимание на следующие особенности:
•
•
•
этиология инфекции
1. высокий титр возбудителя
2. высокая вирулентность
3. выделение из нехарактерного биотопа
иммунный статус пациента
эпидемиология инфекции:
4. источник
5. фактор передачи
32
Внутрибольничные инфекции:
определение
• инфекции, которые возникают у
пациентов вследствие оказания им
медицинской помощи
– в больничном стационаре
– в амбулаторно-поликлиническом
учреждении
– на дому
Внутрибольничные инфекции:
особенности иммунитета
• иммунодефицитное состояние
• даже в норме иммунный ответ на
условно-патогенные микроорганизмы ниже
• в течение ВБИ состояние
иммунодефицита усугубляется
(генерализация, хронизация процесса)
Внутрибольничные инфекции:
диагностика
• исследование
– больного
– медицинских работников
– больные – предполагаемые источники
возбудителя
– объекты больничной среды – предполагаемые
факторы передачи возбудителя
• ВБИ:
– выделение от больного больничного эковара
(даже без установления источника и факторов
передачи возбудителя)
– развитие инфекции после контакта с медицинским
персоналом в период времени не менее
минимального инкубационного периода (для
оппортунистических инфекций – 2-3 дня)
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ИНФЕКЦИОННЫХ ЗАБОЛЕВАНИЙ ЦНС
Органы ЦНС надёжно укрыты от внешней среды костным скелетом и оболочками, но любое воспаление в этих областях приводит к серьезным, часто необратимым повреждениям.
Гематоэнцефалический барьер с одной стороны препятствует проникновению микроорганизмов и их
токсинов, но, с другой стороны и многих антимикробных лечебных препаратов, поэтому инфекции ЦНС –
редкие, но в большинстве своем тяжелые, сопровождающиеся серьезными осложнениями болезни.
Смертность при них составляет около 10% (до появления антибиотиков достигала 70%).
Особенностью патогенеза инфекций ЦНС является то, что микроорганизм первоначально репродуцируется в периферических тканях и лишь затем проникает в ЦНС с кровотоком (чаще) или по периферическим нервам. В тех редких случаях, когда возбудитель непосредственно попадает в ЦНС, например, при
травмах, характер развивающихся поражений обычно носит неспецифический характер.
В зависимости от локализации поражений инфекции ЦНС выделяют следующие заболевания:
1.
Менингиты – в тех случаях, когда поражаются мозговые оболочки.
33
2.
Энцефалиты – инфекции, при которых поражается паренхима головного
мозга.
3.
Миелиты – заболевания, при которых поражается ткань спинного мозга.
БАКТЕРИАЛЬНЫЕ МЕНИНГИТЫ
Обычно острые, опасные для жизни инфекции. Смертность, даже на фоне адекватной антимикробной
терапии, может достигать 15%. Чаще регистрируются у детей. Среди бактериальных менингитов выделяют острый пиогенный менингит. Это острое воспаление мозговых оболочек, сопровождаемое образованием гноя, которое вызвано размножением пиогенных бактерий: нейсерии, пневмококки.
Менингококковый менингит
(возбудитель Neisseria meningitidis)
Патогенные менингококки – бактерии, являющиеся этиологическим агентом эпидемического менингита, в большинстве случаев принадлежат серогруппе А, В, С и Y. Наиболее высокую заболеваемость регистрируют у детей. Широко распространено бессимптомное бактерионосительство, сопровождающееся
выработкой антител к капсульному антигену. Менингит, вызванный бактериями Neisseria meningitidis это единственный тип менингита, который сопровождается эпидемическими вспышками.
Пневмококковый менингит
(возбудитель Streptococcus pneumoniae)
Этот вид менингита часто встречается как осложнение инфекций уха, у больных пневмонией, причем
у пожилых лиц пневмококк является самым распространенные возбудители бактериальных менингитов.
90% поражений вызывают 18 серотипов возбудителя (всего их более 80 – по капсульному антигену).
Заражение происходит, как правило, воздушно-капельным путем. Пневмонии, плевриты и бронхиты в
случае развития бактериемии тоже могут привести к проникновению патогенной микрофлоры в оболочки
головного мозга.
Менингиты, вызванные бактериями Hemophilus influenzae
Hemophilus influenzae типа b является довольно распространенным возбудителем менингитов.
Заболевания, вызванные этими бактериями, встречается повсеместно. Ежегодно регистрируют менингиты, вызванные H.influenzae, особенно у детей от 3 до 6 лет. Наиболее часто гнойные менингиты наблюдаются у детей в возрасте 6-12 мес.; по достижении 5-летнего возраста вероятность заболевания снижается.
Примерно 20% случаев бактериальных менингитов вызывают:
 Listeria monocytogenes
 энтеробактерии (эшерихии, клебсиеллы, сальмонеллы), Staphylococcus aureus
 Staphylococcus epidermidis
34
 Streptococcus pyogenes
 Mycobacterium tuberculosis
 ацинетобактерии
 бруцеллы
 лептоспиры
 микоплазмы
 бактероиды
 дифтероиды
 и др.
Клинические проявления болезни
Независимо от природы возбудителя клинические проявления менингитов относительно постоянны
(что придает особое значение диагностике при выборе тактики лечения по результатам лабораторного
выделения этиологического агента).
А. У взрослых бактериальные менингиты отличает довольно типичная клиническая картина:

повышение температуры тела;

головная боль;

ригидность затылочных мышц;

сонливость и спутанность сознания, повышенная чувствительность и
судороги, другие неврологические признаки;

развитие коматозного состояния (является неблагоприятным
прогностическим признаком).
Б. У новорожденных симптоматика бактериальных менингитов вариабельна, часто отмечают выбухание родничков как косвенный признак повышения внутричерепного давления.
Микробиологическая диагностика
Образцы следует забирать, соблюдая правила асептики.
Цель – выявление возбудителя и определение его чувствительности к антимикробным препаратам.
А. Бактериоскопический метод
liquor

мутный  исследование ad oculus  прозрачный


35
центрифугирование
мазок

осадок

мазок
Методы окраски:

по Граму

по Цилю-Нильсену

по Романовскому-Гимзе

по Бурри-Гинсу
По результатам микроскопии проводить индикацию возбудителя нельзя.
Б. Культуральный (бактериологический) метод.
Если ликвор был загрязнен при взятии пробы, то бактерии обычно не выявляют в мазке, а обнаружи-
вают лишь на следующий день.
При менингитах, вызванных туберкулезной палочкой и листериями, возбудитель вырастает лишь на
соответствующих средах.
ВИРУСНЫЕ МЕНИНГИТЫ И ЭНЦЕФАЛИТЫ
Вирусы проникают в ЦНС из кровотока. Нередко в качестве синонима вирусного поражения используется устаревший термин “асептический менингит” (указывающий на “стерильность” ликвора при исследовании обычными бактериологическими методами).
Термин "асептический" связан с тем, что из очага воспаления и СМЖ не выделяются бактерии. Энтеровирусы, как предполагается, проникают из горла и кишечника в кровь, приводя к виремии. С кровью
вирусы проникают в головной мозг, где и вызывают воспаление. Вспышки асептического менингита
обычно приходятся на летние месяцы, когда в разгаре сезон купаний, и водоемы загрязнены фекалиями.
Для вирусных менингитов характерны также поражения непосредственно головного мозга, в связи с
этим более корректным является термин вирусные менингоэнцефалиты (при этом менингиальные симптомы чаще доминируют над симптомами поражения паренхимы мозга).
Этиология
Основные возбудители:

энтеровирусы (Коксаки, ЕСНО, полиовирусы)

вирус эпидемического паротита.
Реже:

альфагерпесвирусы

цитомегаловирус
36

вирус бешенства

вирус краснухи

вирус оспы коров

арбовирусы (вызывающие энцефалиты) и др.
Эпидемиология
Заболевания характерны для молодого возраста (после 40 лет практически не встречаются). Пораже-
ния, вызванные энтеровирусами, чаще наблюдаются в летние месяцы и ранней осенью. Поражения, вызванные вирусом паротита, чаще встречаются в весенне-зимний период.
Вирусологическая диагностика
Выявление этиологического агента – эталонный метод диагностики, но в большинстве клинических
лабораторий не осуществим.
Обычно ограничиваются исследованием ликвора с определением давления (повышается) и цитоза (в
течение первых 48 ч преобладают нейтрофилы, позднее около 50% общего количества клеток составляют
мононуклеары).
КРИПТОКОККОВЫЙ МЕНИНГИТ
МЕНИНГИТЫ, ВЫЗВАННЫЕ ПАТОГЕННЫМИ ГРИБАМИ
Этиология
Большинство грибов, вызывающие системные и оппортунистические микозы, способно к диссеминированию и поражает ЦНС. Наиболее часто микозы ЦНС вызывают возбудители оппортунистических
инфекций у лиц с нарушениями иммунитета (особенно у пациентов с ВИЧ-инфекцией).
Изначальным тропизмом к тканям мозговых оболочек обладают (и, следовательно, являются основными возбудителями подобных поражений) Cryptococcus neoformans и Coccidioides immitis. Оба возбудителя проникают в ЦНС посредством гематогенного диссеминирования из первичного очага инфекции в
лёгких.
Cryptococcus neoformans
Криптококкоз или криптококковый менингит - болезнь, вызванная этими дрожжеподобными грибами, затрагивает и головной мозг. Грибы могут переноситься по воздуху, особенно в ветреные дни. При
попадании в организм человека возбудитель способен размножаться в легких, что приводит к лихорадке,
сильному кашлю и плевральным болям. У пожилых людей и лиц с иммунодеффицитом возбудитель может проникать из легких в кровь, откуда посредством гематогенного диссеминирования из первичного
очага разносится по организму. При проникновении в ЦНС (в оболочки головного мозга) вызывает менингит. До 80% криптококковых менингитов наблюдают у больных СПИДом. Причем болезнь без своевременного лечения может привести к смерти.
Эпидемиология
37
Cryptococcus neoformans – классический оппортунистический патоген, распространен повсеместно, у большей части населения (особенно городского) можно выявить антитела при полном отсутствии
соответствующей симптоматики. Более половины пациентов с криптококковым менингитом страдают
иммунодефицитами с нарушением клеточного иммунного ответ.
Микологическая диагностика
Часто главную роль в диагностике играет исключение других этиологических агентов менингит.
1. Микроскопический метод.
Применяется при диагностике криптококкового менингита.
Ликвор

мазок, окрашенный по Бурри-Гинсу

капсулированные грибковые клетки
2. Микологический (культуральный) метод.
Возбудитель криптококкового менингита достаточно легко выделить на соответствующих средах и
определить его физиологические и биохимические свойства.
3. Серологический метод.
Криптококковый менингит – обнаружение в ликворе капсульного антигена с помощью реакции латекс-агглютинации.
АБСЦЕССЫ ГОЛОВНОГО МОЗГА
Обычно являются следствием хронической мозговой гипоксии, хронического остеомиелита костей
черепа, септической эмболии из других очагов инфекции, например легких.
Реже встречаются случаи прямого обсеменения мозговой ткани при травмах или хирургических вмешательствах.
Этиология
Наиболее часто – анаэробные и капнофильные стрептококки, бактероиды.
У новорожденных и ослабленных пациентов пожилого возраста – анаэробные штаммы кишечной палочки.
Посттравматические абсцессы наиболее часто вызывают стафилококки и стрептококки.
Микробиологическая диагностика
38
Метод включает микроскопию мазков гнойного отделяемого, окрашенных по Граму, и посев материала на среды для культивирования аэробных и анаэробных бактерий.
СХЕМА БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКОГО ИССЛЕДОВАНИЯ ПРИ
ИНФЕКЦИОННЫХ ПОРАЖЕНИЯХ ЦНС
Патологический материал
мазок
засев на простые и сложные питательные
среды
засев на свернутую сыворотку
определение чувствительности
идентификация
к антибиотикам
Наиболее эффективный метод выявления абсцессов мозга – магниторезонансная и компьютерная томография, а определения локализации воспалительных изменений тканей мозга – радиоизотопное сканирование.
ИНФЕКЦИИ ЦНС РАЗЛИЧНОЙ ЭТИОЛОГИИ
Составляют сравнительно редкие формы поражений ЦНС и носят, как правило, вторичный характер
с локализацией первичного очага в других органах. В любом случае подобные поражения всегда представляют серьёзную опасность для жизни больного.
Болезнь Потта
(туберкулез позвоночника)
Вызывается гематогенной диссеминацией туберкулезной палочки из первичного очага инфекции либо реактивацией скрытого очага.
Возбудитель колонизирует тело позвонка и разрушает межпозвоночные диски. В результате формируются параспинальные и эпидуральные абсцессы, вызывающие компрессию спинного мозга и, иногда,
параплегию.
Клинически неотличимо от бластомикоза позвоночника. Дифференциальная диагностика возможна
лишь при выделении возбудителя из биоптата.
Нейросифилис
Выделяют три основные формы поражений – менинговаскулярный нейросифилис и сухотку спинного мозга (возможны их сочетания).
39
Поражения ЦНС наблюдают у 8% пациентов с первичным сифилисом, у 2% пациентов с вторичным
сифилисом, но наиболее характерны они для третичного сифилиса.
Поздние проявления нейросифилиса возникают через много лет после первичной инфекции и проявляются смешанной симптоматикой трёх основных форм.
В связи с широким использованием пенициллина возросла частота атипичных проявлений нейросифилиса. Атипичную симптоматику наблюдают у 2/3 всех пациентов с поражением ЦНС. У 1/3 пациентов
с первичным и вторичным сифилисом выявляют нарушения состава ликвора, что свидетельствует о бессимптомном течении нейросифилиса.
ЗИГМИКОЗ
Этиология
Различные представители родов класса Zygomycetes (в том числе - род Mucor).
Патогенез
Как правило, возбудитель колонизирует носовую полость, откуда непосредственно проникает в ткань
мозга, вызывая поражения ЦНС.
Поражения головного мозга чаще наблюдаются у лиц, страдающих сахарным диабетом.
Микробиологическая диагностика
Ранняя диагностика затруднена. К моменту установления диагноза прогноз чаще неблагоприятный.
Косвенным доказательством зигомикоза является постоянное выделение микроорганизмов из пораженных органов.
В биоптатах пораженных тканей выявляют беспорядочно ветвящиеся гифы.
АСПЕРГИЛЛОМА ГОЛОВНОГО МОЗГА
Аспергиллoма головного мозга
Этиология
Возбудителем может быть любой из 100 представителей рода Aspergillus. Наиболее часто – A. fumigatis, A. niger, A. flavus.
Патогенез
Аспергиллома (или инвазивный аспергиллёз) головного мозга – это, как правило, вторичное проявление диссеминированного заболевания. Инфекции ЦНС проявляются образованием очагов геморрагического некроза и, реже, развитием менингита. В некоторых случаях поражения обусловлены заносом возбудителя при проведении хирургических вмешательств или внутривенных вливаний контаминированных
растворов.
Микробиологическая диагностика
40
Дифференциальная диагностика аспергиллёза мозга и других неврологических заболеваний затруднена либо невозможна.
ИНВАЗИИ
ПОРАЖЕНИЯ И АБСЦЕССЫ ЦНС, ВЫЗВАННЫЕ ПАРАЗИТАМИ
Наблюдаются при малярии, токсоплазмозе, амебиазе и др.
Некоторые виды амеб могут вызывать первичные менингоэнцефалиты (уровень летальности в этом
случае – до 100% в течение 48-72 ч).
Простейшие рода Plasmodium вызывают тяжелое инфекционное заболевание, малярию. Злокачественная малярия, которую вызывает Plasmodium falciparum , может сопровождаться острыми мозговыми проявлениями, которые вызваны поражением плазмодиями большого количества эритроцитов, легко
агрегирующих и блокирующих капилляры.
Toxoplasma gondii - возбудитель токсоплазмоза, в тяжелых случаях может вызвать менингоэнцефалит. У 50% больных развивается энцефалит, который дает около 90% всех летальных исходов при токсоплазмозе.
Амебиаз (энтамебиоз) - инфекция, вызванная амебами Entamoeba histolytica, также может сопровождаться поражениями ЦНС.
Диагностика
Паразитов выявляют в мазках, приготовленных из периферической крови (малярийный плазмодий),
мазках СМЖ (неглерии и акантоамебы).
При токсоплазмозе исследуют кровь, СМЖ, трупный и биопсийный материал. T.gondii выявляют в
тканях мозга с применением электронной микроскопии, либо иммунофлюоресцентных методов.
Наибольшую ценность для диагностики имеет биопроба: введение крови лиц, подозрительных на наличие
токсоплазм белым мышам с последующей микроскопией образцов тканей зараженных животных. Наиболее доступный метод диагностики - кожная проба с токсоплазмином.
Часто применяют выявление неврологической симптоматики в сочетании с признаками диссеминированной инфекции и выделением возбудителя из очага поражения.
ИФОРМАЦИОННО-МЕТОДИЧЕСКИЕ МАТЕРИАЛЫ
а) Основная учебная литература:
1. Учебники:
1.1. Борисов, Л.Б. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология: Учебник /
Л.Б. Борисов [и др.] – М.: Медицина, 2002. – 736 с.
41
1.2. Воробьев, А.А. Микробиология: Учебник / А.А. Воробьев [и др.] – М., 1998. – 336 с.
2. Учебно-методические пособия:
2.1.
2.2.
2.3.
2.4.
2.5.
2.6.
Борисов, Л.Б. Руководство к лабораторным занятиям по микробиологии / Под ред.
Л.Б. Борисова, 1994. – 256 с.
Воробьев, А.А. Атлас по медицинской микробиологии, вирусологии и иммунологии:
Учебное пособие для студентов медицинских вузов/А.А. Воробьев, А.С. Быков – М.:
Медицинское информационное агентство, 2003. – 236 с.
Горецкая, М.В. Общая иммунология в схемах и таблицах: учебное пособие/ М.В. Горецкая, А.И. Жмакин. – Гродно: ГрГМУ, 2008 – 140 с.
Жмакин, А.И. Общая микробиология: учебное пособие/ А.И. Жмакин, М.В. Горецкая, В.М. Шейбак. – Гродно: ГрГМУ, 2009 – 160 с.
Островцова С.А. Инфекционные заболевания ЦНС: учебно-методическое пособие/
С.А. Островцова, А.И. Жмакин. – Гродно: ГрГМУ, 2002 – 29 с.
Островцова, С.А. Клиническая микробиология: учебно-методическое пособие/ С.А.
Островцова, А.И. Жмакин. – Гродно: ГрГМУ, 2002 – 26 с.
б) 3. Дополнительная учебная литература:
3.1. Жмакин, А.И. Бактериология в схемах и рисунках: пособие / А.И. Жмакин, М.В. Горецкая. – Гродно: ГрГМУ, 2006 – 180 с.
3.2. Жмакин, А.И. Вирусология в схемах и рисунках: учеб. пособие / А.И. Жмакин, С.А.
Островцова, М.В. Горецкая. – Гродно: ГрГМУ, 2006 – 122 с.
3.3. Ройт, А. Иммунология. / А. Ройт, Дж. Бростофф, Д. Мейл. Пер. с англ. – М.: Мир, 2000.
– 592 с.
3.4. Тотолян, А.А. Клетки иммунной системы. / А.А. Тотолян, И.С. Фрейдлин. СПб.:
Наука, 2000. – 231 с.
3.5. Ярилин, А.А. Основы иммунологии: Учебник. / А.А. Ярилин – М.: Медицина, 1999. –
608 с.
42