ìÑä 615.37.035.038:578.245 РАЗРАБОТКА ОПТИМАЛЬНЫХ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ ТЕРАПЕВТИЧЕСКИХ СХЕМ ВВЕДЕНИЯ ИММОБИЛИЗИРОВАННОГО ИНТЕРФЕРОНА α-2b Шитикова О.Г.1, Шерстобоев Е.Ю.1, Масная Н.В.1, Данилец М.Г.1, Трофимова Е.С.1, Лигачева А.А.1, Мадонов П.Г.2, Киншт Д.Н.2, Ершов К.И.2, Шилова М.А.2 1 2 ÍÈÈ ôàðìàêîëîãèè èì. Å.Ä. Ãîëüäáåðãà, ã. Òîìñê ÇÀÎ «Ñèáèðñêèé öåíòð ôàðìàêîëîãèè è áèîòåõíîëîãèè», ã. Íîâîñèáèðñê РЕЗЮМЕ Â ðàìêàõ îáùåé ïðîãðàììû äîêëèíè÷åñêîãî èçó÷åíèÿ ïðîâåäåíà ðàçðàáîòêà îïòèìàëüíûõ ýêñïåðèìåíòàëüíûõ òåðàïåâòè÷åñêèõ ñõåì ââåäåíèÿ èììîáèëèçèðîâàííîãî èíòåðôåðîíà α-2b (ÇÀÎ «Ñèáèðñêèé öåíòð ôàðìàêîëîãèè è áèîòåõíîëîãèé», Íîâîñèáèðñê). Èññëåäóåìûé ïðåïàðàò ïðèìåíÿëñÿ âíóòðèæåëóäî÷íî êóðñîì â òå÷åíèå 3, 5 è 7 ñóò â òåðàïåâòè÷åñêîé äîçå (1,8 ⋅ 105 ÌÅ/êã). Ýêñïåðèìåíòàëüíàÿ îöåíêà èììóíîòðîïíûõ ñâîéñòâ èììîáèëèçèðîâàííîãî èíòåðôåðîíà α-2b ïðîâîäèëàñü â îïûòàõ in vivo íà àóòáðåäíûõ ìûøàõ-ñàìöàõ CD1 ñ èñïîëüçîâàíèåì ñëåäóþùèõ òåñòîâ: èññëåäîâàíèå âëèÿíèÿ ïðåïàðàòà íà ôàãîöèòàðíóþ àêòèâíîñòü ïåðèòîíåàëüíûõ íåéòðîôèëîâ (îöåíèâàëè îòíîñèòåëüíîå ÷èñëî ôàãîöèòîâ è êîëè÷åñòâî ïîãëîùåííûõ áàêòåðèé îäíèì ôàãîöèòîì); èçó÷åíèå âëèÿíèÿ ïðåïàðàòà íà ãóìîðàëüíûé èììóííûé îòâåò (îïðåäåëÿëè îáùåå êîëè÷åñòâî ñïëåíîöèòîâ, îòíîñèòåëüíîå è àáñîëþòíîå êîëè÷åñòâî àíòèòåëîîáðàçóþùèõ êëåòîê è èõ ôóíêöèîíàëüíóþ àêòèâíîñòü); îöåíêà âëèÿíèÿ èññëåäóåìîãî ïðåïàðàòà íà êëåòî÷íûé èììóííûé îòâåò ñ èñïîëüçîâàíèåì ðåàêöèè ãèïåð÷óâñòâèòåëüíîñòè çàìåäëåííîãî òèïà, èíäóöèðîâàííîé ýðèòðîöèòàìè áàðàíà. Íà îñíîâàíèè ïîëó÷åííûõ äàííûõ ñäåëàí âûâîä, ÷òî íàèáîëåå ýôôåêòèâíî ôàãîöèòîç íåéòðîôèëîâ è ãóìîðàëüíûé èììóííûé îòâåò óñèëèâàåò êóðñîâîå ââåäåíèå òåðàïåâòè÷åñêîé äîçû èììîáèëèçèðîâàííîãî èíòåðôåðîíà α-2b â òå÷åíèå 5 ñóò. Êëåòî÷íûé èììóííûé îòâåò (âëèÿíèå íà Ò-ýôôåêòîðû) çíà÷èìî ïîâûøàåòñÿ ïîñëå ñåìèêðàòíîãî ïðèìåíåíèÿ èññëåäóåìîãî ïðåïàðàòà. КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: ïåãèëèðîâàíèå, èììîáèëèçèðîâàííûé èíòåðôåðîí α-2b, àóòáðåäíûå ìûøè, ñõåìà ââåäåíèÿ. Введение  íàñòîÿùåå âðåìÿ ïðåïàðàòû èíòåðôåðîíà α-2b øèðîêî èñïîëüçóþòñÿ â ïðàêòèêå çäðàâîîõðàíåíèÿ äëÿ ëå÷åíèÿ ìíîãèõ âèðóñíûõ çàáîëåâàíèé, áîëüøîãî êðóãà îíêîëîãè÷åñêèõ áîëåçíåé è äëÿ ïðîôèëàêòèêè ãðèïïà è ÎÐÇ [1]. Êëèíè÷åñêàÿ çíà÷èìîñòü èíòåðôåðîíîâ (ÈÔÍ) îïðåäåëÿåòñÿ àíòèâèðóñíîé, èììóíîìîäóëèðóþùåé àêòèâíîñòüþ, à òàêæå ïðîòèâîîïóõîëåâûì ýôôåêòîì [2–4]. Íî, ê ñîæàëåíèþ, ïðè èíòåðôåðîíîòåðàïèè íàáëþäàåòñÿ ðÿä íåæåëàòåëüíûõ ýôôåêòîâ. Íàèáîëåå ÷àñòûìè ÿâëÿþòñÿ ãðèïïîïîäîáíûé ñèíäðîì, àðòðàëãèÿ, äèàðåÿ, äåïðåññèâíûå ñîñòîÿíèÿ, ãàëëþöèíàöèè, êîæíûå âûñûïàíèÿ, àëëåðãèÿ, çàáîëåâàíèÿ êðîâåòâîðíîé ñèñòåìû, âûïàäåíèå âîëîñ, íàáëþäàåìûå ó áîëüíûõ ïðè ïðèìåíåíèè âûñîêèõ äîç ÈÔÍ. Øèòèêîâà Îëüãà Ãåííàäüåâíà, òåë. 8-913-800-23-10; e-mail: Olya.lya@mail.ru 114 Ó 30% áîëüíûõ ïðè äëèòåëüíîì ïðèìåíåíèè áîëüøèõ äîç ÈÔÍ îáðàçîâûâàëèñü íåéòðàëèçóþùèå àíòèâèðóñíóþ àêòèâíîñòü ïðåïàðàòà àíòèòåëà, ÷òî ñîïðîâîæäàëîñü ðàçâèòèåì ðåçèñòåíòíîñòè ê èíòåðôåðîíîòåðàïèè [5, 6]. ßâëÿÿñü áåëêàìè, ÈÔÍ ëåãêî ðàçðóøàþòñÿ ôåðìåíòàìè â æåëóäî÷íî-êèøå÷íîì òðàêòå è ïðîòåàçàìè êðîâè, ÷òî ñíèæàåò èõ áèîäîñòóïíîñòü. Âñå ýòî îãðàíè÷èâàåò ïðèìåíåíèå ïðåïàðàòîâ ÈÔÍ, à ïðè îïàñíûõ ïîáî÷íûõ ÿâëåíèÿõ òðåáóåò îòìåíû, ÷òî ïðèâîäèò ê ñíèæåíèþ ýôôåêòèâíîñòè ïðîâîäèìîé òåðàïèè, è ñëóæèò ñòèìóëîì ê ðàçðàáîòêå íîâûõ ëåêàðñòâåííûõ ñðåäñòâ [7]. Îñíîâíàÿ öåëü ïðè ñîçäàíèè ïðåïàðàòîâ íà îñíîâå ÈÔÍ ñîñòîèò â ïîëó÷åíèè áîëåå áåçîïàñíîãî è êà÷åñòâåííîãî ëåêàðñòâà ñ óëó÷øåííûìè ôèçèêîõèìè÷åñêèìè è áèîëîãè÷åñêèìè ñâîéñòâàìè. Ñîâðåìåííàÿ òåõíîëîãèÿ èììîáèëèçàöèè àêòèâíîãî áåëêà ñ ïîëèýòèëåíãëèêîëåì ñ ïîìîùüþ ýëåêòðîííî-ëó÷åâîãî ñèíòåçà ìîäèôèöèðóåò ôàðìàêîêèíåòè÷åñêèå õàðàêòåðèñòèêè ñîåäèíåíèÿ, ïîçâîëÿÿ ñîçäàâàòü Бюллетень сибирской медицины, 2014, том 13, № 5, с. 114–121 Оригинальные статьи ëåêàðñòâåííûå ïðåïàðàòû ñ âûñîêîé òåðàïåâòè÷åñêîé àêòèâíîñòüþ è íèçêîé òîêñè÷íîñòüþ [8]. Ðåçóëüòàòîì òàêîé ìîäèôèêàöèè ÿâëÿåòñÿ âîçðàñòàíèå áèîäîñòóïíîñòè ÈÔÍ, ñíèæåíèå êîëåáàíèé óðîâíÿ àêòèâíîãî âåùåñòâà â êðîâè, áîëåå äëèòåëüíîå ñîõðàíåíèå ýôôåêòèâíîé êîíöåíòðàöèè â îðãàíàõ-ìèøåíÿõ, ÷òî è ïîâûøàåò ýôôåêòèâíîñòü èíòåðôåðîíîòåðàïèè [9]. Îäíàêî ïðîÿâëåíèå òîãî èëè èíîãî èììóíîòðîïíîãî ýôôåêòà â ñóùåñòâåííîé ìåðå çàâèñèò îò äîçîâûõ è âðåìåííûõ ïàðàìåòðîâ ïðèìåíåíèÿ ïðåïàðàòà. Ïîýòîìó çàäà÷åé äàííîãî èññëåäîâàíèÿ â ðàìêàõ îáùåé ïðîãðàììû äîêëèíè÷åñêîãî èçó÷åíèÿ ÿâëÿåòñÿ ðàçðàáîòêà îïòèìàëüíûõ ýêñïåðèìåíòàëüíûõ òåðàïåâòè÷åñêèå ñõåì ââåäåíèÿ èììîáèëèçèðîâàííîãî èíòåðôåðîíà α-2b. Материал и методы Èññëåäîâàíèå áûëî ïðîâåäåíî íà 210 àóòáðåäíûõ ìûøàõ-ñàìöàõ CD1 6–8-íåäåëüíîãî âîçðàñòà ñ ìàññîé òåëà 19–23 ã, ïîëó÷åííûõ èç îòäåëà ýêñïåðèìåíòàëüíûõ áèîëîãè÷åñêèõ ìîäåëåé ÍÈÈ ôàðìàêîëîãèè èì. Å.Ä. Ãîëüäáåðãà (ã. Òîìñê) (ñåðòèôèêàò èìååòñÿ). Æèâîòíûå ñîäåðæàëèñü â íåïîëíîé áàðüåðíîé ñèñòåìå â ñîîòâåòñòâèè ñ ïðàâèëàìè, ïðèíÿòûìè Åâðîïåéñêîé êîíâåíöèåé ïî çàùèòå ïîçâîíî÷íûõ æèâîòíûõ, èñïîëüçóåìûõ äëÿ ýêñïåðèìåíòàëüíûõ è èíûõ íàó÷íûõ öåëåé (Ñòðàñáóðã, 1986). Ýêñïåðèìåíòàëüíûå èññëåäîâàíèÿ âûïîëíåíû â ñîîòâåòñòâèè ñ ïðàâèëàìè ëàáîðàòîðíîé ïðàêòèêè (GLP), ïðèêàçîì ÌÇ ÐÔ ¹ 708í îò 23.08.2010 ã. «Îá óòâåðæäåíèè ïðàâèë ëàáîðàòîðíîé ïðàêòèêè».  ðàáîòå èñïîëüçîâàëè èììîáèëèçèðîâàííûé ñ ïîìîùüþ èîíèçèðóþùåãî èçëó÷åíèÿ íà ïîëèýòèëåíãëèêîëå ñ ìîëåêóëÿðíîé ìàññîé 1,5 êÄà èíòåðôåðîí α-2b – êîíúþãàò èíòåðôåðîíà α-2b ñ íèçêîìîëåêóëÿðíûì ïîëèýòèëåíãëèêîëåì (ÇÀÎ «Ñèáèðñêèé öåíòð ôàðìàêîëîãèè è áèîòåõíîëîãèè», Íîâîñèáèðñê). Äëÿ êîíúþãàöèè ñ ïîëèìåðîì èñïîëüçîâàí èíòåðôåðîí α-2b, ïîëó÷àåìûé ñ ïðåìèíåíèåì Escherichia coli â êà÷åñòâå ïðîäóöåíòà. Ýòî êèñëûé ãëèêîïðîòåèä ìîëåêóëÿðíîé ìàññîé 19 265 Äà, ñîñòîÿùèé èç 165 àìèíîêèñëîòíûõ îñòàòêîâ. Ïåðâè÷íàÿ ïîñëåäîâàòåëüíîñòü åãî èäåíòè÷íà íàòèâíîìó èíòåðôåðîíó α-2b, íî áåëîê íå ñîäåðæèò ñàéòà ãëèêîçèëèðîâàíèÿ. Ïðèìåíåíèå ïîëèýòèëåíãëèêîëÿ (ÏÝÃ) â êà÷åñòâå îñíîâû ïîçâîëÿåò çàùèòèòü áåëêîâóþ ìîëåêóëó ÈÔÍ îò äåéñòâèÿ ïðîòåîëèòè÷åñêèõ ôåðìåíòîâ è òåì ñàìûì îáåñïå÷èâàåò âîçìîæíîñòü åãî ïåðîðàëüíîãî ïðèìåíåíèÿ. Âûõîä ãîòîâîãî ïðîäóêòà ñîñòàâëÿåò 98%, àêòèâíîñòü ïðåïàðàòà íå ìåíåå 1 ⋅ 106 ÌÅ/ìë, ìîëåêóëÿðíàÿ ìàññà íå ìåíåå (19,5 ± 0,5) êÄà. Èññëåäóåìîå âåùåñòâî ââîäèëè æèâîòíûì âíóòðèæåëóäî÷íî êóðñîì â òå÷åíèå 3, 5 è 7 ñóò â òåðàïåâòè- ÷åñêîé äîçå 1,8 ⋅ 105 ÌÅ/êã, êîòîðàÿ áûëà ïåðåñ÷èòàíà, èñõîäÿ èç ñðåäíåé òåðàïåâòè÷åñêîé äîçû èíòåðôåðîíà àëüôà 2 äëÿ ÷åëîâåêà (1 000 000 ÌÅ), â îáúåìå 10 ìë/êã ôîñôàòíî-ñîëåâîãî áóôåðà (MP Biomedicals, ÑØÀ), êîíòðîëüíûå æèâîòíûå ïîëó÷àëè â ýêâèâàëåíòíîì îáúåìå ðàñòâîðèòåëü (ôîñôàòíî-ñîëåâîé áóôåð). Ïðè èçó÷åíèè âëèÿíèÿ ïðåïàðàòà íà ôàãîöèòàðíóþ àêòèâíîñòü ïåðèòîíåàëüíûõ íåéòðîôèëîâ â êà÷åñòâå ôîíà èñïîëüçîâàëè èíòàêòíûõ æèâîòíûõ ñîîòâåòñòâóþùåãî ïîëà è âîçðàñòà. Ïðè èññëåäîâàíèè âëèÿíèÿ ïðåïàðàòà íà ãóìîðàëüíûé èììóííûé îòâåò è èíòåíñèâíîñòü ðåàêöèè ãèïåð÷óâñòâèòåëüíîñòè çàìåäëåííîãî òèïà (ÃÇÒ) â êà÷åñòâå ôîíà èñïîëüçîâàëè ìûøåé, ïîëó÷èâøèõ àíòèãåí, íî áåç êóðñîâîãî ââåäåíèÿ ôîñôàòíî-ñîëåâîãî áóôåðà. Ôàãîöèòàðíàÿ àêòèâíîñòü ïåðèòîíåàëüíûõ íåéòðîôèëîâ îöåíèâàëàñü ÷åðåç 24 ÷ ïîñëå îêîí÷àíèÿ 3-, 5- è 7-äíåâíîãî êóðñà ââåäåíèÿ èììîáèëèçèðîâàííîãî èíòåðôåðîíà α-2b (èìÈÔÍ-α-2b) ïî ñïîñîáíîñòè ýòèõ êëåòîê ïîãëîùàòü ñóòî÷íóþ êóëüòóðó Staph. aureus, øòàìì 209 (ïîëó÷åíà ñ êàôåäðû ìèêðîáèîëîãèè ÑèáÃÌÓ), êîíöåíòðàöèÿ âçâåñè ìèêðîáîâ 20 ìëí/ìë. Äëÿ ýòîãî æèâîòíûì ââîäèëè âíóòðèáðþøèííî 3%-é ðàñòâîð ïåïòîíà (Sigma, ÑØÀ) è ÷åðåç 2 ÷ èõ óìåðùâëÿëè ñ ïîìîùüþ õëîðîôîðìà. Êëåòêè ïåðèòîíåàëüíîãî ýêññóäàòà âûäåëÿëè ïî îáùåïðèíÿòûì ìåòîäèêàì è äîâîäèëè äî êîíöåíòðàöèè 1–2 ìëí/ìë ïî íåéòðîôèëàì. Çàòåì â êóëüòóðó âíîñèëè áàêòåðèè Staph. aureus, îïñîíèçèðîâàííûõ ïóëîâîé ìûøèíîé ñûâîðîòêîé. Î ôàãîöèòàðíîé ôóíêöèè íåéòðîôèëîâ ñóäèëè ïî ïðîöåíòó íåéòðîôèëîâ, ïîãëîòèâøèõ ìèêðîáû (ôàãîöèòàðíûé èíäåêñ – ÔÈ), è ñðåäíåìó ÷èñëó ñòàôèëîêîêêîâ, ïîãëîùåííûõ îäíîé êëåòêîé (ôàãîöèòàðíîå ÷èñëî – Ô×) [10]. Âëèÿíèå èìÈÔÍ-α-2b íà ãóìîðàëüíûé èììóííûé îòâåò îöåíèâàëè ïî ñëåäóþùèì ïîêàçàòåëÿì: îáùåå êîëè÷åñòâî ñïëåíîöèòîâ, îòíîñèòåëüíîå (%) è àáñîëþòíîå (106/îðãàí) ÷èñëî àíòèòåëîîáðàçóþùèõ êëåòîê (ÀÎÊ) â ñåëåçåíêå è òèòð àíòèòåë â ñûâîðîòêå êðîâè íà 5-å ñóò ïîñëå èììóíèçàöèè ýðèòðîöèòàìè áàðàíà (ÇÀÎ «ÝÊÎëàá», Ðîññèÿ). Èììóíèçàöèþ æèâîòíûõ îñóùåñòâëÿëè âíóòðèáðþøèííî ïîñëå îêîí÷àíèÿ 3-, 5è 7-äíåâíîãî êóðñà ââåäåíèÿ èìÈÔÍ-α-2b ìèíèìàëüíîé äîçîé ýðèòðîöèòîâ áàðàíà (ÝÁ) – 5 ⋅ 106 íà ìûøü. Îïðåäåëåíèå ÀÎÊ îñóùåñòâëÿëè ìåòîäîì ëîêàëüíîãî ãåìîëèçà [11], îñíîâàííûì íà ñïîñîáíîñòè àíòèýðèòðîöèòàðíûõ àíòèòåë, ñåêðåòèðóåìûõ àíòèòåëîîáðàçóþùèìè êëåòêàìè èììóíèçèðîâàííûõ æèâîòíûõ, ëèçèðîâàòü â ïðèñóòñòâèè êîìïëåìåíòà ÝÁ (àíòèãåí). Óðîâåíü ñïåöèôè÷åñêèõ àíòèòåë, ñîäåðæàùèõñÿ â ñûâîðîòêå êðîâè èììóíèçèðîâàííûõ æèâîòíûõ, îïðåäåëÿëè ñ ïîìîùüþ ðåàêöèè ãåìàããëþòèíàöèè [12]. Òèòð àíòèòåë âûðàæàëè âåëè÷èíîé log2Ò. Бюллетень сибирской медицины, 2014, том 13, № 5, с. 114–121 115 Шитикова О.Г., Шерстобоев Е.Ю., Масная Н.В. и др. Разработка оптимальных экспериментальных терапевтических схем введения… Äëÿ îöåíêè âëèÿíèÿ ïðåïàðàòà íà êëåòî÷íûé èììóííûé îòâåò èñïîëüçîâàëè ðåàêöèþ ÃÇÒ. Äëÿ ýòîãî ìûøåé ïîäâåðãàëè ñåíñèáèëèçàöèè ïóòåì ïîäêîæíîãî ââåäåíèÿ 1 ⋅ 107 ÝÁ â îáúåìå 100 ìêë ïîñëå îêîí÷àíèÿ 3-, 5- è 7-äíåâíîãî êóðñà ââåäåíèÿ èìÈÔÍ-α-2b. Íà 5é äåíü ïîñëå ñåíñèáèëèçàöèè ïîä àïîíåâðîòè÷åñêóþ ïëàñòèíêó îäíîé èç çàäíèõ êîíå÷íîñòåé ââîäèëè ðàçðåøàþùóþ äîçó àíòèãåíà (1 ⋅ 108 â îáúåìå 20 ìêë).  êîíòðàëàòåðàëüíóþ ëàïó â êà÷åñòâå êîíòðîëÿ ââîäèëè ôèçèîëîãè÷åñêèé ðàñòâîð â òàêîì æå îáúåìå. Èíòåíñèâíîñòü ðåàêöèè îöåíèâàëè ÷åðåç 24 ÷ ïîñëå ââåäåíèÿ ðàçðåøàþùåé äîçû àíòèãåíà. Îïðåäåëÿëè èíäåêñ âîñïàëåíèÿ (ÈÂ) ïî ðàçíèöå ìàññû îïûòíîé (Î) è êîíòðîëüíîé (Ê) ëàï èíäèâèäóàëüíî äëÿ êàæäîãî æèâîòíîãî ïî ôîðìóëå: È = (Î – Ê) / Ê ⋅ 100%. Ïðè ââåäåíèè ïî ýòîé ñõåìå ïðåïàðàò â îñíîâíîì îêàçûâàåò âëèÿíèå íà ôîðìèðîâàíèå êëîíà àíòèãåíñïåöèôè÷åñêèõ Ò-ëèìôîöèòîâ [10]. Ñòàòèñòè÷åñêàÿ îáðàáîòêà ðåçóëüòàòîâ îñóùåñòâëÿëàñü ñ ïðèìåíåíèåì ïàêåòà ñòàòèñòè÷åñêèõ ïðîãðàìì Statistica 5.0 for Windows ñ ïðåäâàðèòåëüíîé îöåíêîé íîðìàëüíîñòè ðàñïðåäåëåíèÿ è èñïîëüçîâàíèåì t-êðèòåðèÿ Ñòüþäåíòà. Äëÿ âûáîðêè ïîä÷èíÿþùåéñÿ íîðìàëüíîìó ðàñïðåäåëåíèþ âû÷èñëÿëè ñðåäíåå çíà÷åíèå âåëè÷èíû ïðèçíàêà X è îøèáêó ñðåäíåé m [13]. Результаты Êóðñîâîå ââåäåíèå èìÈÔÍ-α-2b â òå÷åíèå 3, 5 è 7 ñóò ïðèâîäèëî ê äîñòîâåðíîìó ïîâûøåíèþ îòíîñèòåëüíîãî êîëè÷åñòâà ôàãîöèòèðóþùèõ íåéòðîôèëîâ (ÔÈ) â ïåðèòîíåàëüíîé ïîëîñòè ýêñïåðèìåíòàëüíûõ æèâîòíûõ ïî ñðàâíåíèþ ñ êîíòðîëüíûìè çíà÷åíèÿìè (òàáë. 1). Íàèáîëåå çíà÷èìîå óâåëè÷åíèå äîëè àêòèâíûõ ïåðèòîíåàëüíûõ íåéòðîôèëîâ íàáëþäàëîñü ïðè ïðèìåíåíèè 7-äíåâíîãî êóðñà, ïðè ýòîì ÔÈ áûë äîñòîâåðíî âûøå íå òîëüêî îòíîñèòåëüíî ïîêàçàòåëÿ â ñîîòâåòñòâóþùåé ãðóïïå êîíòðîëÿ, íî è ïî ñðàâíåíèþ ñ ãðóïïîé ìûøåé, ïîëó÷èâøèõ èññëåäóåìûé ïðåïàðàò òðåõêðàòíî, à òàêæå ñ ôîíîâîé ãðóïïîé. Ñðåäíåå êîëè÷åñòâî ïîãëîùåííûõ îäíîé êëåòêîé áàêòåðèé (Ô×) óâåëè÷èâàëîñü ïî ñðàâíåíèþ ñ êîíòðîëüíûìè ãðóïïàìè ó ìûøåé, ïîëó÷àâøèõ èìÈÔÍ-α-2b â òå÷åíèå 3 è 5 ñóò (òàáë. 1).  ýêñïåðèìåíòàëüíîé ãðóïïå ñ 5-äíåâíûì êóðñîâûì ââåäåíèåì èìÈÔÍ-α-2b ÷èñëî ïîãëîùåííûõ îäíîé êëåòêîé áàêòåðèé áûëî ñòàòèñòè÷åñêè çíà÷èìî âûøå, ÷åì â ãðóïïå æèâîòíûõ ñ ïðèìåíåíèåì èññëåäóåìîãî ïðåïàðàòà òðåõêðàòíî. Ó æèâîòíûõ ñ ïðèìåíåíèåì èìÈÔÍ-α-2b áîëåå äëèòåëüíûì êóðñîì îòìå÷àëîñü ñòàòèñòè÷åñêè çíà÷èìîå ñíèæåíèå ôàãîöèòàðíîé àêòèâíîñòè (Ô×) ïåðèòîíåàëüíûõ íåéòðîôèëîâ 116 ïî ñðàâíåíèþ ñ ãðóïïîé ìûøåé, ïîëó÷àâøèõ èçó÷àåìûé ïðåïàðàò â òå÷åíèå 5 ñóò, à òàêæå ñ ôîíîâîé ãðóïïîé, õîòÿ îòíîñèòåëüíî ïîêàçàòåëÿ â ñîîòâåòñòâóþùåé êîíòðîëüíîé ãðóïïå äîñòîâåðíûõ îòëè÷èé íå íàáëþäàëîñü. Òàáëèöà 1 éˆÂÌ͇ ‚ÎËflÌËfl 3-, 5- Ë 7-‰Ì‚ÌÓ„Ó ÍÛÒÓ‚Ó„Ó ‚‚‰ÂÌËfl ÎÂ͇ÒÚ‚ÂÌÌÓ„Ó Ò‰ÒÚ‚‡ ̇ ÓÒÌÓ‚Â ËÏÏÓ·ËÎËÁËÓ‚‡ÌÌÓ„Ó ËÌÚÂÙÂÓ̇ α-2b ‚ Ú‡Ô‚Ú˘ÂÒÍÓÈ ‰ÓÁ (1,8 ⋅ 105 åÖ/Í„) ̇ Ù‡„ÓˆËÚ‡ÌÛ˛ ‡ÍÚË‚ÌÓÒÚ¸ ÔÂËÚÓ̇θÌ˚ı ÌÂÈÚÓÙËÎÓ‚ ‡Ûڷ‰Ì˚ı Ï˚¯ÂÈ (X ± m, ð) Ãðóïïà ýêñïåðèìåíòàëüíûõ æèâîòíûõ Èññëåäóåìûé ïîêàçàòåëü ÔÈ, % Ô× Ãðóïïà 1 Ôîí (n = 10) 20,80 ± 1,06 2,38 ± 0,10 Ãðóïïà 2 Êîíòðîëü 3 ñóò (n = 10) 17,50 ± 0,95 p1–2 < 0,05 1,49 ± 0,08 p1–2 < 0,05 Ãðóïïà 3 èìÈÔÍ-α-2b 3 óò (n = 10) 22,60 ± 1,29 p2–3 < 0,01 2,19 ± 0,12 p2–3 < 0,001 Ãðóïïà 4 Êîíòðîëü 5 ñóò (n = 10) 20,10 ± 0,85 2,22 ± 0,08 Ãðóïïà 5 èìÈÔÍ-α-2b 5 ñóò (n = 10) 24,10 ± 1,50 p4–5 < 0,05 2,60 ± 0,07 p3–5 < 0,01 p4–5 < 0,01 Ãðóïïà 6 Êîíòðîëü 7 ñóò (n = 10) 18,10 ± 1,12 2,02 ± 0,08 p1–6 < 0,05 Ãðóïïà 7 èìÈÔÍ-α-2b 7 ñóò (n = 10) 27,50 ± 1,11 p1–7 < 0,05 p3–7 < 0,05 p6–7 < 0,001 1,91 ± 0,07 p1–7 < 0,05 p5–7 < 0,001 Ï ð è ì å ÷ à í è å. Çäåñü è â òàáë. 2, 3: p2–4 < 0,05 – ðàçëè÷èÿ ìåæäó ñîîòâåòñòâóþùèìè ãðóïïàìè äîñòîâåðíû; n – êîëè÷åñòâî æèâîòíûõ â ãðóïïå.  äàííîì èññëåäîâàíèè áûëî óñòàíîâëåíî, ÷òî êóðñîâîå ââåäåíèå èìÈÔÍ-α-2b â òå÷åíèå èññëåäóåìûõ ñðîêîâ íå ïðèâîäèëî ê èçìåíåíèþ êëåòî÷íîñòè ñåëåçåíêè ìûøåé (òàáë. 2). Îäíàêî ó ìûøåé, ïîëó÷àâøèõ èìÈÔÍ-α-2b â òå÷åíèå 5 è 7 ñóò, îòìå÷àëîñü ñòàòèñòè÷åñêè çíà÷èìîå ïîâûøåíèå îòíîñèòåëüíîãî è àáñîëþòíîãî êîëè÷åñòâà àíòèòåëîïðîäóöåíòîâ â ñåëåçåíêå ïî ñðàâíåíèþ ñ ñîîòâåòñòâóþùèìè ôîíîâûìè è êîíòðîëüíûìè çíà÷åíèÿìè (òàáë. 2). Òèòð ñûâîðîòî÷íûõ èììóíîãëîáóëèíîâ M, G è ñóììàðíûé òèòð ãåìàããëþòèíèíîâ áûë âûøå ïîñëå 5-äíåâíîãî êóðñîâîãî ïðèìåíåíèÿ èìÈÔÍ-α-2b êàê ïî ñðàâíåíèþ ñ êîíòðîëüíîé ãðóïïîé ñ ïðèìåíåíèåì ðàñòâîðèòåëÿ ïÿòèêðàòíî, òàê è ñ äàííûìè ôîíîâîé ãðóïïû (òàáë. 2). Ïðèìåíåíèå èññëåäóåìîãî ïðåïàðàòà 3-äíåâíûì êóðñîì ïîâûøàëî èíòåíñèâíîñòü ðåàêöèè ÃÇÒ ëèøü ïî ñðàâíåíèþ ñ ôîíîâîé ãðóïïîé ìûøåé (òàáë. 3). Êóðñîâîå ââåäåíèå èìÈÔÍ-α-2b â òå÷åíèå 5 ñóò íå âëèÿëî íà êëåòî÷íûé èììóííûé îòâåò. Ïðè ýòîì È â äàííîé ýêñïåðèìåíòàëüíîé ãðóïïå ñòàòèñòè÷åñêè çíà÷èìî ñíèæàëñÿ îòíîñèòåëüíî ïîêàçàòåëÿ â ãðóïïå ìûøåé, ïîëó÷àâøèõ èìÈÔÍ-α-2b â òå÷åíèå 3 ñóò. Бюллетень сибирской медицины, 2014, том 13, № 5, с. 114–121 Оригинальные статьи Òàáëèöà 2 éˆÂÌ͇ ‚ÎËflÌËfl 3-, 5- Ë 7-‰Ì‚ÌÓ„Ó ÍÛÒÓ‚Ó„Ó ‚‚‰ÂÌËfl ËÏÏÓ·ËÎËÁËÓ‚‡ÌÌÓ„Ó ËÌÚÂÙÂÓ̇ α-2b ‚ Ú‡Ô‚Ú˘ÂÒÍÓÈ ‰ÓÁ (1,8 ⋅ 105 åÖ/Í„) ̇ „ÛÏӇθÌ˚È ËÏÏÛÌÌ˚È ÓÚ‚ÂÚ ‡Ûڷ‰Ì˚ı Ï˚¯ÂÈ Ì‡ 5- ÒÛÚ ÔÓÒΠËÏÏÛÌËÁ‡ˆËË (X ± m, ð) Ãðóïïà ýêñïåðèìåíòàëüíûõ æèâîòíûõ Èññëåäóåìûé ïîêàçàòåëü ÎÊÑ, ⋅ 106 ÀÎÊ, % ÀÎÊ, ⋅ 106 IgM, log2T IgG, log2T IgM + IgG, log2T Ãðóïïà 1 Ôîí (n = 10) 219,10 ± 13,46 9,94 ± 0,35 22,45 ± 1,97 1,0 ± 0,21 4,80 ± 0,25 5,80 ± 0,36 Ãðóïïà 2 Êîíòðîëü 3 ñóò (n = 10) 215,50 ± 10,75 11,22 ± 0,36 p1–2 < 0,05 24,32 ± 1,65 1,10 ± 0,23 4,90 ± 0,18 6,00 ± 0,37 Ãðóïïà 3 èìÈÔÍ-α-2b 3 ñóò (n = 10) 221,30 ± 11,71 12,04 ± 0,44 p1–3 < 0,05 26,86 ± 1,96 1,20 ± 0,20 5,30 ± 0,30 6,50 ± 0,45 Ãðóïïà 4 Êîíòðîëü 5 ñóò (n = 10) 211,50 ± 10,37 11,38 ± 0,35 p1–4 < 0,05 24,33 ± 1,84 0,90 ± 0,23 4,80 ± 0,20 5,70 ± 0,30 Ãðóïïà 5 èìÈÔÍ-α-2b 5 ñóò (n = 10) 237,50 ± 11,46 12,56 ± 0,32 p1–5 < 0,05 p4–5 < 0,05 30,03 ± 1,92 p1–5 < 0,05 p4–5 < 0,05 2,10 ± 0,23 p1–5 < 0,05 p3–5 < 0,01 p4–5 < 0,01 5,80 ± 0,20 p1–5 < 0,05 p4–5 < 0,01 7,90 ± 0,38 p1–5 < 0,05 p3–5 < 0,05 p4–5 < 0,001 Ãðóïïà 6 Êîíòðîëü 7 ñóò (n = 10) 221,80 ± 10,44 11,68 ± 0,22 p1–6 < 0,05 25,98 ± 1,54 1,10 ± 0,18 5,0 ± 0,21 6,10 ± 0,35 Ãðóïïà 7 èìÈÔÍ-α-2b 7 ñóò (n = 10) 235,40 ± 12,89 13,28 ± 0,28 p1–6 < 0,05 p3–7 < 0,05 p6–7 < 0,001 31,39 ± 2,02 p1–6 < 0,05 p6–7 < 0,05 1,20 ± 0,20 p5–7 < 0,01 4,80 ± 0,25 p5–7 < 0,01 6,0 ± 0,42 p5–7 < 0,01 Ó ìûøåé, ïîëó÷èâøèõ èìÈÔÍ-α-2b â òå÷åíèå 7 ñóò, íàáëþäàëîñü ìàêñèìàëüíîå ïîâûøåíèå èíäåêñà ðåàêöèè ÃÇÒ. Èññëåäóåìûé ïîêàçàòåëü â äàííîé ýêñïåðèìåíòàëüíîé ãðóïïå áûë ñòàòèñòè÷åñêè çíà÷èìî âûøå çíà÷åíèé â ñîîòâåòñòâóþùåé êîíòðîëüíîé ãðóïïå, à òàêæå ôîíîâîé è ãðóïïå æèâîòíûõ ñ ââåäåíèåì èìÈÔÍ-α-2b â òå÷åíèå 5 ñóò (òàáë. 3). Òàáëèöà 3 éˆÂÌ͇ ‚ÎËflÌËfl 3-, 5- Ë 7-‰Ì‚ÌÓ„Ó ÍÛÒÓ‚Ó„Ó ‚‚‰ÂÌËfl ËÏÏÓ·ËÎËÁËÓ‚‡ÌÌÓ„Ó ËÌÚÂÙÂÓ̇ α-2b ‚ Ú‡Ô‚Ú˘ÂÒÍÓÈ ‰ÓÁ (1,8 ⋅ 105 åÖ/Í„) ̇ ËÌÚÂÌÒË‚ÌÓÒÚ¸ ‡͈ËË Éáí ‡Ûڷ‰Ì˚ı Ï˚¯ÂÈ (X ± m, ð) Ãðóïïà ýêñïåðèìåíòàëüíûõ æèâîòíûõ Èññëåäóåìûé ïîêàçàòåëü (ÈÂ) Ãðóïïà 1 Ôîí (n = 10) 10,13 ± 1,06 Ãðóïïà 2 Êîíòðîëü 3 ñóò (n = 10) 13,66 ± 1,40 Ãðóïïà 3 èìÈÔÍ-α-2b 3 ñóò (n = 10) 16,70 ± 1,90 p1–3 < 0,05 Ãðóïïà 4 Êîíòðîëü 5 ñóò (n = 10) 11,67 ± 0,92 Ãðóïïà 5 èìÈÔÍ-α-2b 5 ñóò (n = 10) 9,30 ± 1,15 p3–5 < 0,01 Ãðóïïà 6 Êîíòðîëü 7 ñóò (n = 10) 11,80 ± 1,0 Ãðóïïà 7 èìÈÔÍ-α-2b 7 ñóò (n = 10) 18,93 ± 1,75 p1–7 < 0,05 p5–7 < 0,001 p6–7 < 0,01 Обсуждение  ðåçóëüòàòå ïðîâåäåííîãî èññëåäîâàíèÿ áûëî óñòàíîâëåíî, ÷òî ìîäèôèöèðîâàííàÿ ôîðìà èìÈÔÍ-α-2b ñ ÏÝà îáëàäàåò èììóíîòðîïíûìè ñâîéñòâàìè. Ïåãèëèðîâàííàÿ ìîëåêóëà èíòåðôåðîíà êîìïëåêñíî âëèÿëà íà êëåòêè èììóííîé ñèñòåìû, ñòèìóëèðóÿ êëåòî÷íûé, ãóìîðàëüíûé èììóííûé îòâåò ìûøåé ëèíèè CBA/CaLac, à òàêæå ôàãîöèòàðíîå çâåíî èììóíèòåòà. Âàæíî îòìåòèòü, ÷òî èììóíîòðîïíàÿ àêòèâíîñòü èìÈÔÍ-α-2b íàáëþäàëàñü ïðè ïåðîðàëüíîì ïðèåìå. Íàèáîëåå âåðîÿòíîé ïðè÷èíîé ýôôåêòèâíîñòè èññëåäóåìîãî èìÈÔÍ-α-2b ÿâëÿåòñÿ èçìåíåíèå åãî ôàðìàêîêèíåòè÷åñêèõ ñâîéñòâ ïðè ïðèñîåäèíåíèè ìîëåêóëû ÏÝÃ. Ïðåäïîëîæèòåëüíî, ïåãèëèðîâàííàÿ ìîëåêóëà ÈÔÍ ñîõðàíÿåò áèîëîãè÷åñêóþ àêòèâíîñòü â æåëóäî÷íî-êèøå÷íîì òðàêòå è âñàñûâàåòñÿ â êðîâü, ðàñïðåäåëÿÿñü ïî îðãàíàì è òêàíÿì â îòëè÷èå îò íåñâÿçàííîãî ÈÔÍ, êîòîðûé ëåãêî ðàçðóøàåòñÿ ïðîòåàçàìè. Íåñìîòðÿ íà òî ÷òî ìåõàíèçì âñàñûâàíèÿ èìÈÔÍ-α-2b â æåëóäî÷íî-êèøå÷íîì òðàêòå äî êîíöà íå ÿñåí, èçâåñòíî, ÷òî ïðè ïåðîðàëüíîì ââåäåíèè ïåãèëèðîâàííûõ ïðåïàðàòîâ, ïîëó÷åííûõ ñ ïîìîùüþ ýëåêòðîííîëó÷åâîãî ñèíòåçà, áèîäîñòóïíîñòü ñîñòàâëÿåò 4,3%, ÷òî çíà÷èòåëüíî ïðåâûøàåò áèîäîñòóïíîñòü íàòèâíûõ áåëêîâ, êîòîðàÿ ñîñòàâëÿåò íå áîëåå 1% [8]. Ïåãèëèðîâàííûå ïðåïàðàòû àêòèâíî àäñîðáèðóþòñÿ ïî âñåé ïîâåðõíîñòè êèøå÷íîé âîðñèíû, â îòëè÷èå îò íàòèâíûõ áåëêîâ, êîòîðûå ïðîíèêàþò ëèøü íà àïèêàëüíóþ ïîâåðõíîñòü êèøå÷íûõ âîðñèí. Ýòî óêàçûâàåò íà áîëåå âûðàæåííóþ áèîäîñòóïíîñòü áåëêà êîíúþãàòà ñ íèçêîìîëåêóëÿðíûì ÏÝà [8, 9]. Òåõíîëîãèÿ ïåãèëèðîâàíèÿ çíà÷èòåëüíî óëó÷øàåò êèíåòèêó íàòèâíûõ áåëêîâûõ ñîåäèíåíèé. Ïðèñîåäèíåíèå ÏÝà ê ðåêîìáèíàíòíîìó ÈÔÍ ïðèâîäèò ê óâå- Бюллетень сибирской медицины, 2014, том 13, № 5, с. 114–121 117 Шитикова О.Г., Шерстобоев Е.Ю., Масная Н.В. и др. Разработка оптимальных экспериментальных терапевтических схем введения… ëè÷åíèþ ðàçìåðà ìîëåêóëû, â òîì ÷èñëå ðàäèóñà Ñòîêñà. Óâåëè÷åííûé ðàçìåð áåëêîâîé ìîëåêóëû ñïîñîáñòâóåò óäëèíåíèþ àäñîðáöèè è ïåðèîäà ïîëóâûâåäåíèÿ áåëêà èç îðãàíèçìà, òåì ñàìûì óâåëè÷èâàÿ ïåðèîä «ýôôåêòèâíîé» ïîëóæèçíè àêòèâíîãî ÈÔÍ [7, 14]. Äðóãèì âàæíûì ôàêòîðîì óäëèíåíèÿ âðåìåíè àêòèâíîé öèðêóëÿöèè ÏÝÃ-ìîäèôèöèðîâàííûõ ïåïòèäîâ ÿâëÿåòñÿ ñòðóêòóðà ÏÝÃ-öåïî÷åê. Èçâåñòíî, ÷òî ðàçâåòâëåííàÿ ìîëåêóëà ÏÝà çàìåäëÿåò ìåòàáîëèçì ïðåïàðàòà. Ñ ðàçâåòâëåííîé ñòðóêòóðîé öåïî÷åê ÏÝà ñâÿçàíà è çíà÷èòåëüíî ìåíüøàÿ èììóíîãåííîñòü ìîäèôèöèðîâàííûõ ïðåïàðàòîâ ïðè ñîõðàíåíèè èõ îñíîâíûõ ôàðìàêîëîãè÷åñêèõ ñâîéñòâ [14, 15]. Åùå îäíà èç âàæíåéøèõ îñîáåííîñòåé ìîäèôèöèðîâàííûõ ÏÝÃ-ìîëåêóë – âûñîêàÿ ãèäðîôèëüíîñòü, ôîðìèðóþùàÿñÿ çà ñ÷åò ñïîñîáíîñòè ìîëåêóëû ÏÝà ñâÿçûâàòü ìîëåêóëû âîäû [5, 14, 16]. Âåðîÿòíî, ýòî ñâîåîáðàçíîå «âîäíîå îáëàêî» çíà÷èòåëüíî ïîâûøàåò ðàñòâîðèìîñòü è áèîäîñòóïíîñòü èìÈÔÍ-α-2b, à òàêæå çàùèùàåò ìîëåêóëó îò íåéòðàëèçóþùèõ àíòèòåë è êîìïëåìåíòà [5]. Òàêèì îáðàçîì, èìÈÔÍ-α-2b ëó÷øå çàùèùåí îò îïñîíèçàöèè è àêòèâíîãî ôàãîöèòîçà êëåòêàìè ìàêðîîðãàíèçìà, ÷òî íåïîñðåäñòâåííî äàåò åìó ïðåèìóùåñòâî ïåðåä ïðåïàðàòàìè ñòàíäàðòíîãî ÈÔÍ. Êðîìå òîãî, ïîëàãàþò, ÷òî ïåãèëèðîâàíèå âûçûâàåò óìåíüøåíèå èììóíîãåííûõ è àíòèãåííûõ ñâîéñòâ ðåêîìáèíàíòíîãî ÈÔÍ è ìîæåò ñíèçèòü ðèñê àëëåðãè÷åñêèõ ðåàêöèé [14]. Èììóíîìîäóëèðóþùàÿ ñïîñîáíîñòü ÈÔÍ çàêëþ÷àåòñÿ â êîíòðîëå âçàèìîäåéñòâèÿ êëåòîê, ó÷àñòâóþùèõ â èììóííîì îòâåòå, ðåãóëèðóÿ ýêñïðåññèþ íà ìåìáðàíàõ êëåòîê ìîëåêóë ãëàâíîãî êîìïëåêñà ãèñòîñîâìåñòèìîñòè 1-ãî òèïà èëè â íåïîñðåäñòâåííîé àêòèâàöèè èììóíîêîìïåòåíòíûõ êëåòîê. ÈÔÍ 1-ãî òèïà ñòèìóëèðóþò ôóíêöèîíàëüíóþ àêòèâíîñòü ìàêðîôàãîâ, åñòåñòâåííûõ êèëëåðîâ, öèòîòîêñè÷åñêèõ Òëèìôîöèòîâ, ñïîñîáñòâóþò äèôôåðåíöèàöèè è ïðîëèôåðàöèè Â-ëèìôîöèòîâ. ÈÔÍ ïðèíèìàþò àêòèâíîå ó÷àñòèå â ïîäãîòîâêå è ðåãóëÿöèè ìåõàíèçìîâ ñïåöèôè÷åñêîãî èììóííîãî îòâåòà, ðåãóëèðóþò áàëàíñ Th1 è Th2 [3, 4, 17]. Èñõîäÿ èç ïîëó÷åííûõ ðåçóëüòàòîâ, èììóíîòðîïíàÿ àêòèâíîñòü ÈÔÍ, êîíúþãèðîâàííîãî ñ ÏÝà è ïðèìåíÿåìîãî ïåðîðàëüíî, íå óñòóïàåò ñâîáîäíîìó ÈÔÍ, ââîäèìîìó âíóòðèìûøå÷íî èëè ïîäêîæíî [3]. Òàê, êóðñîâîå ââåäåíèå èìÈÔÍ-α-2b â òå÷åíèå 3, 5 è 7 ñóò â òåðàïåâòè÷åñêîé äîçå ïðèâîäèëî ê ïîñòåïåííîìó ïîâûøåíèþ ôàãîöèòàðíîé àêòèâíîñòè íåéòðîôèëîâ ïåðèòîíåàëüíîé ïîëîñòè ýêñïåðèìåíòàëüíûõ æèâîòíûõ. Èññëåäóåìûé ïðåïàðàò, ïðèìåíÿåìûé êóðñîì â òå÷åíèå 5 ñóò, ñïîñîáñòâîâàë ñèìóëÿöèè ãóìîðàëüíîãî èììóííîãî îòâåòà ìûøåé çà ñ÷åò ïîâûøåíèÿ êîëè÷åñòâà ÀÎÊ â ñåëåçåíêå, òèòðà ñïåöèôè÷åñêèõ àíòèòåë 118 â ñûâîðîòêå êðîâè. Êëåòî÷íûé èììóííûé îòâåò (âëèÿíèå íà Ò-ýôôåêòîðû) çíà÷èìî ïîâûøàëñÿ ïîñëå 7-êðàòíîãî ïðèìåíåíèÿ ïåãèëèðîâàííîãî ïðåïàðàòà. Ýòî ìîæåò ñâèäåòåëüñòâîâàòü î ñîõðàíåííîé ñòðóêòóðå íàòèâíîãî ÈÔÍ â ïðîöåññå ýëåêòðîííî-ëó÷åâîãî ïåãèëèðîâàíèÿ. ÏÝà ìîæåò áûòü ñâÿçàí ñ ïðîòåèíîì â íåñêîëüêèõ ïîçèöèÿõ, îäíàêî èçâåñòíî, ÷òî ñîåäèíåíèå ñ áåëêîì â ìåñòå àòîìà àçîòà E-àìèíîãðóïïû ëèçèíà èëè â ìåñòå èìèäàçîëüíîé ãðóïïû ãèñòèäèíà óëó÷øàåò ïðîòèâîâèðóñíóþ àêòèâíîñòü èíòåðôåðîíà α-2b [14]. Òàêæå èçâåñòíî, ÷òî ðåöåïòîðñâÿçûâàþùàÿ è ïðîòèâîâèðóñíàÿ àêòèâíîñòè èíòåðôåðîíà α-2b ëîêàëèçîâàíû â N-êîíöåâîé ÷àñòè ìîëåêóëû, à àíòèïðîëèôåðàòèâíàÿ àêòèâíîñòü â Ñ-êîíöåâîé ïîñëåäîâàòåëüíîñòüþ ïîëèïåïòèäíîé öåïè [3]. Âåðîÿòíî, òåõíîëîãèÿ ýëåêòðîííî-ëó÷åâîãî ñèíòåçà ìîäèôèöèðóåò ôàðìàêîêèíåòè÷åñêèå õàðàêòåðèñòèêè èíòåðôåðîíà α-2b, íå èçìåíÿÿ êîíôîðìàöèîííóþ ñòðóêòóðó áåëêà, à èììîáèëèçîâàííûå ó÷àñòêè ÏÝà íå âëèÿþò íà ñâÿçûâàíèÿ ÈÔÍ ñ åãî ðåöåïòîðàìè. Òàêèì îáðàçîì, ñîâðåìåííàÿ òåõíîëîãèÿ ïåãèëèðîâàíèÿ ñ ïîìîùüþ ôèçè÷åñêîãî ñïîñîáà ñâÿçûâàíèÿ ïîçâîëÿåò óëó÷øèòü ðÿä ôàðìàêîäèíàìè÷åñêèõ è ôàðìàêîêèíåòè÷åñêèõ ñâîéñòâ ðåêîìáèíàíòíîãî èíòåðôåðîíà α-2b, ÷òî äàåò âîçìîæíîñòü çíà÷èòåëüíî ðàñøèðèòü îáëàñòü ïðèìåíåíèÿ ïðåïàðàòà â ïðàêòè÷åñêîé ìåäèöèíå. Заключение Ýêñïåðèìåíòàëüíîå èññëåäîâàíèå ïîêàçàëî, ÷òî íàèáîëåå ýôôåêòèâíî ôàãîöèòîç íåéòðîôèëîâ (îòíîñèòåëüíîå ÷èñëî ôàãîöèòîâ è êîëè÷åñòâî ïîãëîùåííûõ áàêòåðèé îäíèì ôàãîöèòîì) è ãóìîðàëüíûé èììóííûé îòâåò (êîëè÷åñòâî àíòèòåëîïðîäóöåíòîâ è èõ ôóíêöèîíàëüíàÿ àêòèâíîñòü) óñèëèâàåò êóðñîâîå ââåäåíèå òåðàïåâòè÷åñêîé äîçû èììîáèëèçèðîâàííîãî íà ïîëèýòèëåíãëèêîëå ñ ïîìîùüþ ôèçè÷åñêîãî ñïîñîáà ñâÿçûâàíèÿ èíòåðôåðîíà α-2b â òå÷åíèå 5 ñóò. Êëåòî÷íûé èììóííûé îòâåò (âëèÿíèå íà Ò-ýôôåêòîðû) çíà÷èìî ïîâûøàåòñÿ ïîñëå 7-êðàòíîãî ïðèìåíåíèÿ èññëåäóåìîãî ïðåïàðàòà. Ïîëó÷åííûå äàííûå ñâèäåòåëüñòâóþò î ïåðñïåêòèâíîñòè ýíòåðàëüíîãî ñïîñîáà íàçíà÷åíèÿ èììîáèëèçèðîâàííîãî èíòåðôåðîíà α-2b ñ ïîìîùüþ ýëåêòðîííî-ëó÷åâîãî ñèíòåçà, àëüòåðíàòèâíîãî ïàðåíòåðàëüíîìó ïðèìåíåíèþ. Ðàáîòà âûïîëíåíà ïðè ôèíàíñîâîé ïîääåðæêå Ìèíèñòåðñòâà îáðàçîâàíèÿ è íàóêè ÐÔ â ðàìêàõ Ôåäåðàëüíîé öåëåâîé ïðîãðàììû «Ðàçâèòèå ôàðìàöåâòè÷åñêîé è ìåäèöèíñêîé ïðîìûøëåííîñòè Ðîññèéñêîé Ôåäåðàöèè íà ïåðèîä äî 2020 ã. è äàëüíåéøóþ ïåðñïåêòèâó» (ãîñóäàðñòâåííûé êîíòðàêò ¹ 16.N08.12.1017 îò 14.05.12). Бюллетень сибирской медицины, 2014, том 13, № 5, с. 114–121 Оригинальные статьи Литература 1. Íàðîâëÿíñêèé À.Í., Åðøîâ Ô.È., Ãèíöáóðã À.Ë. Èíòåðôåðîíû: ïåðñïåêòèâíûå íàïðàâëåíèÿ èññëåäîâàíèé // Èììóíîëîãèÿ. 2013. ¹ 3. Ñ. 168–172 2. Caraglia M., Marra M., Pelaia G., Maselli R., Caputi M., Marsico S.A., Abbruzzese A. Alpha-interferon and its effects on signal transduction pathways // Journal of Cellular Physiology. 2005. V. 202. P. 323–335. 3. Åðøîâ Ô.È., Êèñåëåâ Î.È. Èíòåðôåðîíû è èõ èíäóêòîðû (îò ìîëåêóë äî ëåêàðñòâ). Ì.: ÃÝÎÒÀÐ-ÌÅÄ, 2005. 368 ñ. 4. Goodbourn S., Didcock L., Randall R.E. Interferons: cell signalling, immune modulation, antiviral response and virus countermeasures // Journal of General Virology. 2000. V. 81, ¹ 10. P. 2341–2364. 5. Êàðàáåëüñêèé À.Â., Ïàäêèíà Ì.Â. Ðåêîìáèíàíòíûå èíòåðôåðîíû-àëüôà ÷åëîâåêà ïðîëîíãèðîâàííîãî äåéñòâèÿ // Âåñòíèê ÑÏáÃÓ. 2007. Ñåð. 3. Âûï. 4. Ñ. 45–53. 6. Fried M.W. Side effects of therapy of hepatitis C and their management // Hepatology. 2002. V. 36. P. 237–244. 7. Grace M., Cutler D. Pegylating IFNs at His-34 improves the in vitro antiviral activity through the JAK/STAT pathway // Antiviral Chemistry & Chemotherapy. 2004. V. 15, ¹ 6. P. 287–297. 8. Ìàäîíîâ Ï.Ã., Åðøîâ Ê.È., Äóáðîâèí À.Â., Ìèðîøíèêîâ Ï.Í., Øèëîâà Ì.À., Êèíøò Ä.Í. Ýëåêòðîííî-ëó÷åâàÿ ìîäèôèêàöèÿ ïðåïàðàòîâ áåëêîâîé ïðèðîäû äëÿ óëó÷øåíèÿ èõ ôàðìàêîëîãè÷åñêèõ ñâîéñòâ // Ìåäèöèíà è îáðàçîâàíèå. 2013. ¹ 4. URL: http://ngmu.ru/cozo/mos/article/text_full.php?id=1115 9. Íàíîòåõíîëîãèè â ôàðìàêîëîãèè / À.Ì. Äûãàé, À.Â. Àðòàìîíîâ, À.À. Áåêàðåâ, Â.Â. Æäàíîâ, Ã.Í. Çþçüêîâ, Ï.Ã. Ìàäîíîâ, Â.Â. Óäóò. Ì.: Èçä-âî ÐÀÌÍ, 2011. 136 ñ. 10. Õàáðèåâ Ð.Ó. Ðóêîâîäñòâî ïî ýêñïåðèìåíòàëüíîìó (äîêëèíè÷åñêîìó) èçó÷åíèþ íîâûõ ôàðìàêîëîãè÷åñêèõ âåùåñòâ. Ì.: Ìåäèöèíà, 2005. 832 ñ. 11. Cunningham A.I. A method of increased sensitivity for detecting single antibody-forming cells // Nature. 1965. V. 207, ¹ 5001. P. 1106–1107. 12. Ãåìàããëþòèíàöèÿ è ðåàêöèè àíòèòåëîçàâèñèìîãî ãåìîëèçà. Àíòèòåëà. Ìåòîäû / ïîä ðåä. Ä. Êýòòè. Ì.: Ìèð, 1991. 328 ñ. 13. Òðóõà÷åâà Í.Â. Ìàòåìàòè÷åñêàÿ ñòàòèñòèêà â ìåäèêîáèîëîãè÷åñêèõ èññëåäîâàíèÿõ ñ ïðèìåíåíèåì ïàêåòà Statistica. Ì.: ÃÝÎÒÀÐ-Ìåäèà, 2012. 384 ñ. 14. Grace M., Cutler D., Bordens R. Ïåãèëèðîâàííûå èíòåðôåðîíû ïðè õðîíè÷åñêîì ãåïàòèòå C. // Ðåöåïò: íàó÷íîïðàêòè÷åñêèé æóðíàë äëÿ ôàðìàöåâòîâ è âðà÷åé. 2006. ¹ 6. Ñ. 118–128. 15. Foster G.R. Pegylated interferons for the treatment of chronic hepatitis C: pharmacological and clinical differences between peginterferon-α-2a and peginterferon-α-2b // Drugs. 2010. V. 70, ¹ 2. P. 147–165. 16. Thomas T., Foster G. Nanomedicines in The Treatment of Chronic Hepatitis C–Focus on Pegylated Interferon alpha2a // Int. J. Nanomedicine. 2007. V. 2, ¹ 1. P. 19–24. 17. Goodbourn S., Didcock L., Randall R.E. Interferons: Cell signalling, immune modulation, antiviral responses and virus countermeasures // J. Gen. Virol. 2000. V. 81. P. 2341– 2364. Ïîñòóïèëà â ðåäàêöèþ 02.06.2014 ã. Óòâåðæäåíà ê ïå÷àòè 09.10.2014 ã. òËÚËÍÓ‚‡ é.É. () – àñïèðàíò, ëàáîðàòîðèÿ èììóíîôàðìàêîëîãèè, ÍÈÈ ôàðìàêîëîãèè èì. Å.Ä. Ãîëüäáåðãà (ã. Òîìñê). òÂÒÚÓ·Ó‚ Ö.û. – ä-ð ìåä. íàóê, ëàáîðàòîðèÿ èììóíîôàðìàêîëîãèè, ÍÈÈ ôàðìàêîëîãèè èì. Å.Ä. Ãîëüäáåðãà (ã. Òîìñê). å‡Ò̇fl ç.Ç. – ä-ð ìåä. íàóê, ëàáîðàòîðèÿ èììóíîôàðìàêîëîãèè, ÍÈÈ ôàðìàêîëîãèè èì. Å.Ä. Ãîëüäáåðãà (ã. Òîìñê). чÌËΈ å.É. – ä-ð áèîë. íàóê, ëàáîðàòîðèÿ èììóíîôàðìàêîëîãèè, ÍÈÈ ôàðìàêîëîãèè èì. Å.Ä. Ãîëüäáåðãà (ã. Òîìñê). íÓÙËÏÓ‚‡ Ö.ë. – êàíä. ìåä. íàóê, ëàáîðàòîðèÿ èììóíîôàðìàêîëîãèè, ÍÈÈ ôàðìàêîëîãèè èì. Å.Ä. Ãîëüäáåðãà (ã. Òîìñê). ãË„‡˜Â‚‡ Ä.Ä. – êàíä. áèîë. íàóê, ëàáîðàòîðèÿ èììóíîôàðìàêîëîãèè, ÍÈÈ ôàðìàêîëîãèè èì. Å.Ä. Ãîëüäáåðãà (ã. Òîìñê). 凉ÓÌÓ‚ è.É. – ä-ð ìåä. íàóê, Ñèáèðñêèé öåíòð ôàðìàêîëîãèè è áèîòåõíîëîãèè (ã. Íîâîñèáèðñê). äËÌ¯Ú Ñ.ç. – êàíä. ìåä. íàóê, Ñèáèðñêèé öåíòð ôàðìàêîëîãèè è áèîòåõíîëîãèè (ã. Íîâîñèáèðñê). Ö¯Ó‚ ä.à. – êàíä. áèîë. íàóê, Ñèáèðñêèé öåíòð ôàðìàêîëîãèè è áèîòåõíîëîãèè (ã. Íîâîñèáèðñê). òËÎÓ‚‡ å.Ä., Ñèáèðñêèé öåíòð ôàðìàêîëîãèè è áèîòåõíîëîãèè (ã. Íîâîñèáèðñê). òËÚËÍÓ‚‡ é脇 ÉÂÌ̇‰¸Â‚̇, òåë. 8-913-800-23-10; e-mail: Olya.lya@mail.ru Бюллетень сибирской медицины, 2014, том 13, № 5, с. 114–121 119 Шитикова О.Г., Шерстобоев Е.Ю., Масная Н.В. и др. Разработка оптимальных экспериментальных терапевтических схем введения… AZVANIE DEVELOPMENT OF OPTIMAL EXPERIMENTAL THERAPEUTIC REGIMENS ADMINISTRATION OF IMMOBILIZED INTERFERON α-2b Shitikova O.G.1, Sherstoboev E.Yu.1, Masnaya N.V.1, Danilets M.G.1, Trofimova E.S.1, Ligacheva A.A.1, Madonov P.G.2, Kinsht D.N.2, Ershov K.I.2, Shilova M.A.2 1 2 Ye.D. Goldberg Research Institute of Pharmacology, Tomsk, Russian Federation Siberian Center for Pharmacology and Biotechnology, Novosibirsk, Russian Federation ABSTRACT The development of optimal experimental therapeutic schemes of immobilized interferon α-2b (production of JSC «Siberian Center for Pharmacology and Biotechnology», Novosibirsk) administration was conducted in the frame of the common program of pre-clinical study. The drug being studied was administered intragastrically for 3, 5 and 7 days in the therapeutic dose (1.8 ⋅ 105 IU/kg). Experimental evaluation of immunotropic properties of immobilized interferon α-2b was carried out at in vivo experiments in outbred CD1 male mice with using of following tests: the study of drug effect on the phagocytic activity of peritoneal leukocytes (the relative number of phagocytes and the number of bacteria which were assimilated by phagocytes were assessed); the study of drug effect on the humoral immune response (the total number of splenocytes, the relative and absolute number of antibody-forming cells and their functional activity were determined); estimation of drug effect on the cellular immune response with the using of delayed-type hypersensitivity test induced by sheep red blood cells. Based on these data we concluded that course administration of immobilized interferon α-2b in the therapeutic dose for 5 days increased phagocytosis of neutrophils and humoral immune response most effectively. Cell-mediated immune response was significantly increased after 7-fold administration of studied drug. KEY WORDS: pegylation, immobilized interferon α-2b, outbred mice, scheme of administration. Bulletin of Siberian Medicine, 2014, vol. 13, no. 5, pp. 114–121 References 1. Narovlyanskiy A.N., Ershov F.I., Gintsburg A.L. Interferons: perspective directions of research. Immunologiya – Immunology, 2013, vol 3, pp. 168–172 (in Russian). 2. Caraglia M., Marra M., Pelaia G., Maselli R., Caputi M., Marsico S. A., Abbruzzese A. Alpha-interferon and its effects on signal transduction pathways. Journal of Cellular Physiology, 2005, vol. 202, pp. 323–335. 3. Yershov F.I., Kiselev O.I. Interferons and their inducers (from molecules to medicines). Moscow, GEOTAR-MED Publ., 2005. (in Russian). 4. Goodbourn S., Didcock L., Randall R.E. Interferons: cell signalling, immune modulation, anti-viral response and virus countermeasures. Journal of General Virology, 2000, vol. 81, no. 10, pp. 2341–2364. 5. Karabelsky A.V., Padkina M.V. The recombinant interferon – a long-acting. Vestnik SPbGU, 2007, vol. 3, no. 4, pp. 45– 53 (in Russian). 6. Fried M.W. Side effects of therapy of hepatitis C and their management. Hepatology, 2002, vol. 36, pp. 237–244. 7. Grace M., Cutler D. Pegylating IFNs at His-34 improves the in vitro antiviral activity through the JAK/STAT pathway. Antiviral Chemistry & Chemotherapy, 2004, vol. 15, no. 6, pp. 287–297. 120 8. Madonov P.G., Yershov K.I., Dubrovin A.V., Miroshnikov P.N., Shilova M.A., Kinsht D.N. Electron beam modification of the protein drugs to improve their pharmacological properties. Medicine and education, 2013, no. 4. URL: http://ngmu.ru/cozo/mos/article/text_full.php?id=1115 (in Russian). 9. Dygay A.M., Artamonov A.V., Bekarev A.A., Zhdanov V.V., Zyuzkov G.N., Madonov P.G., Udut V.V. Nanotechnology in pharmacology. Moscow, RAMN Publ., 2011. 136 p. (in Russian). 10. Habriev R.U. Manual on experimental (preclinical) study of new pharmacological agents. Moscow, Medicine Publ., 2005. 832 p. (in Russian). 11. Cunningham A.I. A method of increased sensitivity for detecting single antibody-forming cells. Nature, 1965, vol. 207, no. 5001, pp. 1106–1107. 12. Hemagglutination reaction and antibody-dependent hemolysis. Antibodies. Methods. Ed. D. Ketti. Moscow, World Publ., 1991. 328 p. (in Russian). 13. Trukhacheva N.V Mathematical statistics in biomedical research using the package Statistica. Moscow, GEOTAR Media Publ., 2012. 384 p. (in Russian). 14. Grace M., Cutler D., Bordens R. Pegylated interferons in chronic hepatitis C. Recipe: scientific journal for pharmacists and physicians, 2006, no. 6, pp. 118–128 (in Russian). Бюллетень сибирской медицины, 2014, том 13, № 5, с. 114–121 Оригинальные статьи 15. Foster G.R. Pegylated interferons for the treatment of chronic hepatitis C: pharmacological and clinical differences between peginterferon-α-2a and peginterferon-α-2b. Drugs, 2010, vol. 70, no. 2, pp. 147–165. 16. Thomas T., Foster G. Nanomedicines in The Treatment of Chronic Hepatitis C–Focus on Pegylated Interferon alpha-2a. Int. J. Nanomedicine, 2007, vol. 2, no. 1, pp. 19–24. 17. Goodbourn S., Didcock L., Randall R.E. Interferons: Cell signalling, immune modulation, antiviral responses and virus countermeasures. J. Gen. Virol., 2000, vol. 81, pp. 2341–2364. Shitikova O.G. (), Ye.D. Goldberg Research Institute of Pharmacology, Tomsk, Russian Federation. Sherstoboev Ye.Yu., Ye.D. Goldberg Research Institute of Pharmacology, Tomsk, Russian Federation. Masnaya N.V., Ye.D. Goldberg Research Institute of Pharmacology, Tomsk, Russian Federation. Danilets M.G., Ye.D. Goldberg Research Institute of Pharmacology, Tomsk, Russian Federation. Trofimova Ye.S., Ye.D. Goldberg Research Institute of Pharmacology, Tomsk, Russian Federation. Ligacheva A.A., Ye.D. Goldberg Research Institute of Pharmacology, Tomsk, Russian Federation. Madonov P.G., Siberian Center for Pharmacology and Biotechnology, Novosibirsk, Russian Federation. Kinsht D.N., Siberian Center for Pharmacology and Biotechnology, Novosibirsk, Russian Federation. Yershov K.I., Siberian Center for Pharmacology and Biotechnology, Novosibirsk, Russian Federation. Shilova M.A., Siberian Center for Pharmacology and Biotechnology, Novosibirsk, Russian Federation. Shitikova Olga G., Ph. +7-913-800-23-10; e-mail: Olya.lya@mail.ru Бюллетень сибирской медицины, 2014, том 13, № 5, с. 114–121 121