Материалы X Конгресса педиатров России И.А. Громов (специальная премия) Научный центр здоровья детей РАМН Цитокиновые рецепторы лимфоцитов крови при бронхиальной астме у детей ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ ОСОБЕННОСТЕЙ ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ К ЦИТОКИНАМ У ДЕТЕЙ С БРОНХИАЛЬНОЙ АСТМОЙ НАМИ ПРО: ВЕДЕНО ИССЛЕДОВАНИЕ МЕМБРАННЫХ РЕЦЕПТОРОВ ЛИМФОЦИТОВ КРОВИ К ИНТЕРФЕРОНУ (ИФН) γ, ИНТЕРЛЕЙКИНУ (ИЛ) 2, ИЛ 4, ИЛ 5, ИЛ 8 И ИЛ 10. ОБСЛЕДОВАНО 30 ДЕТЕЙ В ВОЗРАСТЕ ОТ 5 ДО 17 ЛЕТ С АТОПИЧЕСКОЙ БРОНХИАЛЬНОЙ АСТМОЙ (ЛЁГКОГО И СРЕДНЕТЯЖЁЛОГО ПЕРСИСТИРУЮЩЕГО ТЕЧЕНИЯ, В ПЕРИОДЕ РЕМИССИИ). ГРУППУ СРАВНЕНИЯ СОСТАВИЛИ 10 ДЕТЕЙ БЕЗ АТОПИЧЕСКИХ ЗАБОЛЕВАНИЙ. ИССЛЕДОВАНИЯ ПРОВЕДЕНЫ МЕТОДОМ ПРОТОЧНОЙ ЦИТО: ФЛЮОРОМЕТРИИ В ПРЯМОЙ РЕАКЦИИ С МОНОКЛОНАЛЬНЫМИ АНТИТЕЛАМИ К ПЕРЕЧИСЛЕННЫМ РЕЦЕПТОРАМ. УСТА: НОВЛЕНО, ЧТО У ДЕТЕЙ С БРОНХИАЛЬНОЙ АСТМОЙ ОТМЕЧАЛСЯ ПОВЫШЕННЫЙ УРОВЕНЬ ЭКСПРЕССИИ РЕЦЕПТОРОВ К ИЛ 2 (ЗА СЧЕТ ВЫСОКОАФФИННОЙ ЕДИНИЦЫ CD122), ИЛ 5; ОТМЕЧАЕТСЯ ТЕНДЕНЦИЯ К ПОВЫШЕНИЮ УРОВНЯ КЛЕ: ТОК С РЕЦЕПТОРАМИ К ИЛ 4 И ИЛ 8. В ТО ЖЕ ВРЕМЯ У ДАННОЙ ГРУППЫ ДЕТЕЙ ИМЕЕТСЯ СНИЖЕНИЕ УРОВНЯ ЭКСПРЕС: СИИ РЕЦЕПТОРА К ИФН γ И ОТМЕЧАЕТСЯ ТЕНДЕНЦИЯ К ПОНИЖЕНИЮ ЭКСПРЕССИИ РЕЦЕПТОРА К ИЛ 10 КЛЮЧЕВЫЕ СЛОВА: БРОНХИАЛЬНАЯ АСТМА, ДЕТИ, ИНТЕРФЕРОН γ, ИНТЕРЛЕЙКИНЫ. 64 Контактная информация: Громов Иван Александрович, врач:педиатр Консультативно: диагностического центра Научного центра здоровья детей РАМН Адрес: 119991, Москва, Ломоносовский проспект, дом 2/62, тел. (495) 967:14:20 Бронхиальная астма (БА) — одно из наиболее распространённых заболеваний в мире. В основе заболевания лежит хроническое аллергическое воспаление бронхов, сопровождающееся их гиперреактивностью и периодически возника: ющими приступами затруднённого дыхания или удушья в результате бронхиаль: ной обструкции, обусловленной бронхоконстрикцией, гиперсекрецией слизи, отёком стенки бронхов [1, 2]. В настоящее время важнейшая роль в регуляции иммунного ответа отводится растворимым медиаторам, которые называют в зависимости от клеток, их продуцирующих, лимфо: и монокинами (медиаторы лимфоцитарного или моноцитарного происхождения), интерлейкинами (медиа: торами, осуществляющими все взаимодействия между различными лейкоцита: ми) или цитокинами (любые растворимые медиаторы, независимо от их клеточ: ного источника) [3]. Особенности цитокинового статуса больных бронхиальной астмой обсуждаются в литературе достаточно широко, однако публикуемые данные в основном касаются определения концентрации цитокинов в перифе: рической крови, тогда как экспрессия мембранных рецепторов к цитокинам изучена мало [4, 5]. Для выявления особенностей чувствительности к цитокинам у детей с БА нами проведено исследование мембранных рецепторов к интерферону:γ (ИФНγ), интерлейкинам:2, 4, 5, 8, 10 (ИЛ 2, 4, 5, 8, 10) на мембране лимфоцитов крови. Обследовано 30 детей в возрасте от 5 до 17 лет с атопической БА (лёгкого и среднетяжёлого персистирующего течения, в период ремиссии). В качестве груп: пы сравнения обследованы 10 детей без атопических заболеваний. Исследования проведены методом проточной цитометрии в прямой реакции с моноклональными антителами к перечисленным рецепторам по общепринятой методике иммунного фенотипирования лимфоцитов, выделенных на градиенте плотности фиколл–верографина. Использовано оборудование и реактивы фирмы BD Biosciences, США: лазерный анализатор FASC Calibur, программа Cell Quest [6, 7]. I.A. Gromov Scientific Center of Children' s Health, Russian Academy of Medical Sciences, Moscow Cytokine receptors of blood lymphocytes in children with bronchial asthma BLOOD LYMPHOCYTE MEMBRANE RECEPTORS TO IFNγ, IL 2, IL 4, IL 5, IL 8 AND IL 10 HAVE BEEN INVESTIGATED TO ASSESS CYTOKINE SENSITIVITY VARIA: TIONS IN CHILDREN WITH ASTHMA. THIRTY CHILDREN AGED 5–17 WITH REMISSION OF ATOPIC BRONCHIAL ASTHMA RANGING FROM MILD TO MODE: RATE PERSISTENT FORMED THE STUDY GROUP. TEN CHILDREN WITHOUT ANY ATOPIC DISORDERS FORMED THE GROUP OF CONTROLS. THE FLOW CYTOME: TRY WITH DIRECT REACTION OF MONOCLONAL ANTIBODIES TO THE MENTION: ED ABOVE CYTOKINE RECEPTORS HAS BEEN USED. AN INCREASED EXPRES: SION OF IL 2 (DUE TO HIGH AFFINITY CD122 SUBUNIT) AND IL 5 RECEPTORS HAS BEEN REGISTERED IN CHILDREN WITH ASTHMA, AND SO A NUMBERS OF CELLS BEARING IL 4 AND IL 8 RECEPTORS THAT HAS TRENDED TO BE HIGHER. AT THE SAME TIME, THERE HAS BEEN A DECREASE OF IFNγ RECEPTOR EXPRES: SION AN A TREND TO LOWER EXPRESSION OF IL 10 RECEPTOR IN THESE CHILDREN. KEY WORDS: BRONCHIAL ASTHMA, CHILDREN, INTERFERONγ , INTER LEUKINS. Рис. 1. Экспрессия рецептора к ИФНγ у детей с БА показатели для рецептора к ИЛ 10 составили 20,8±2% и 27,2±3,9% соответственно; особенностью последнего рецептора является слабая интенсивность флюоресцент: ной метки, что создаёт ряд трудностей при проведении исследований. Полученные данные суммированы в табл. 1. Таким образом, на лимфоцитах крови детей с БА повыше: на экспрессия рецепторов к таким патогенетически важ: ным цитокинам, как ИЛ 2 (за счёт высокоаффинной едини: цы CD122), ИЛ 5; прослеживается тенденция к повышению количества клеток с рецепторами к ИЛ 4 и ИЛ 8. В то же время у данной группы детей понижена частота экспрес: сии рецептора к ИФНγ и отмечается тенденция к уменьше: нию экспрессии рецептора к ИЛ 10. Данные изменения, сохраняющиеся в период ремиссии, являются дополнительным доказательством оправданно: сти проведения длительной патогенетической терапии у детей с БА. Таблица 1. Экспрессия рецепторов к цитокинам у пациентов с БА и детей без признаков атопии Частота экспрессия рецепторов, % ИФНγγ CD25 CD122 ИЛ4 ИЛ5 ИЛ8 ИЛ10 Дети с бронхиальной астмой 61,8±1,8 9,08±0,3 21,6±1,5 5,3±0,8 9,6±1,3 29,9±2,1 20,8±2 Дети без атопических заболеваний 67±2,6 9,2±2,1 16,25±1,5 3,7±0,6 5,3±1,1 24,3±3,6 27,2±3,9 СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 1. Балаболкин И.И., Намазова Л.С., Ковальчук и др. // Иммунология. — 1994. — № 1. — С. 33–36. 2. Огородова Л.М., Кобякова О.С., Фрейдин М.Б. и др. Роль интерлейкина–5 в патогенезе бронхиальной астмы // Аллергология. — 1999. — № 4. — С. 32–36. 3. Студеникин М.Я., Балаболкин И.И., Баканов М.И. и др. // Аллергические болезни у детей. — М.: Медицина, 1998. — С. 70–78. 4. Janossy G., Contreras M., Navarrete C. Intracellular Cytokine Pro: file of Cord and Adult Blood Lymphocytes // Blood. — 1998. — V. 92, № 1 (July 1). — P. 11–18. 5. Shiota Y., Arikita H., Horita N. Intracellular Il:5 and T:lymphocyte subsets in atopic and nonatopic bronchial asthma // J Allergy Clin Immunol. — 2002. — V. 109 (2). — P. 294–298. 6. Winterrowd G.E., Chin J.E. Flow cytometric detection of antigen: specific cytokine responses in lung T cells in a murine model of pul: monary inflammation //J Immunol Methods. — 1999. — 226 (1–2). — P. 105–118. 7. Bonifase S., Koscher V., Mamessier E.. Assesment of T lymphocyte cytokine production in induced sputum from astmatics: a flow cytom: etry study // Clin Exp Allergy. — 2003. — V. 33. — P. 1238–1243. 65 ПЕДИАТРИЧЕСКАЯ ФАРМАКОЛОГИЯ/ №2/ 2006 Для исследования использовали венозную кровь, взятую в пробирку с ЭДТА (Becton Dickinson VACUTAINER Systems); лимфоциты выделяли с помощью центрифугиро: вания на градиенте плотности с фиколл–верографином при 1500 об/мин в течение 30 мин при температуре 4 °С. Выделенные лимфоциты отмывали раствором Cell Wash центрифугированием при 1200 об/мин при температуре 4 °С в течение 10 мин. Затем полученные лимфоциты метили моноклональными антителами (Simultest Imk Plus, Becton Dickinson). Клетки инкубировали в темноте при комнатной температуре в течение 15 мин, затем отмыва: ли центрифугированием с 2 мл Cell Wash и ресуспензиро: вали в 0,5 мл Cell Wash. Анализ образцов проводили на проточном цитометре. Для сбора данных использовали программу Simulset. Исследовали лимфоцитарное окно, согласно типичному расположению популяций лимфоци: тов, выявленному по светорассеянию и флюоресцентной метке LeukoGate (CD 45/14). Максимальный уровень экспрессии отмечен для рецепто: ра к ИФНγ — он выявлен на 61,8±1,8% клеток лимфоидно: го региона у больных и на 67±2,6% лимфоцитов детей группы сравнения (рис. 1) У детей с БА отмечено повышение экспрессии рецептора к ИЛ 2, в основном за счёт высокоаффинной единицы — CD122, количество лимфоцитов с этим рецептором составило 21,6±1,5%, что статистически значимо выше референтного уровня 16,25±1,5%. В то же время низко: аффинная единица рецептора к ИЛ 2 — CD25 у детей с БА была выявлена на 9,08±0,3% лимфоцитов, что статисти: чески значимо не отличается от референтного уровня 9,2±2,1%. Количество лимфоцитов, экспрессирующих рецептор к ИЛ 4, у детей с БА составило 5,3±0,8%, в то время как в группе сравнения этот показатель составил 3,7±0,6%. Экспрессия рецептора к ИЛ 5 составила 9,6±1,3% у больных, а в группе сравнения этот показа: тель равнялся 5,3±1,1%. Рецептор к ИЛ 8 экспрессировали 29,9±2,1% лимфоцитов больных, в группе сравнения — 24,3±3,6%, аналогичные