УЛЬТРАСТРУКТУРНОЕ ИЗУЧЕНИЕ ОВОЦИТОВ ТРАВЯНОГО ШРИМСА PANDALUS LATIROSTRIS В.И. Ковалева ГОУ ВПО «Владивостокский государственный медицинский университет», Владивосток, Россия Электронно-микроскопически изучены овоциты дальневосточной креветки – травяного шримса Pandalus latirostris. Установлено, что цитоплазматические органеллы накапливаются к началу вителлогенеза. В образовании эндогенного желтка принимают участие эндоплазматиче- ская сеть и аппарат Гольджи. Экзогенный желток поступает в овоцит через поры в желточной оболочке путем пиноцитоза. Ранее нами во вступивших в большой рост овоцитах выделено 4 стадии. Показано, что в овоци- тах на I и II стадиях в цитоплазме преобладает синтез РНК, в III – полисахаридов и жиров, в IV – кис- лых протеинов (Ковалева 1981, Ковалева 2009). В настоящей работе проведено электронно- микроскопическое исследование ооцитов травяного шримса. Самок травяного шримса отлавливали в проливе Старка и в заливе Японского моря. Гонады фиксировали жидкостью Буэна и заливали в парафин. Срезы окрашивали гематоксилином по Гендей- гайну. Для электронно- микроскопического исследования кусочки гонад фиксировали 2,5%-м раство- ром глутарового альдегида на 0,1 М фосфатном буфере и проводили по соответствующим методикам (Weibel,1969). Для морфометрического анализа случайным методом отбирали и фотографировали по 20 ово- цитов на стадиях превителлогенеза и вителлогенеза при увеличении 100000х. На каждой фотографии определяли объемные плотности митохондрий (V1), комплексов Гольджи (V2), глобул белкового желт- ка (V3), и липидных глобул (V4) путем подсчета 1/5 УЛЬТРАСТРУКТУРНОЕ ИЗУЧЕНИЕ ОВОЦИТОВ ТРАВЯНОГО ШРИМСА PANDALUS LATIROSTRIS числа узлов тестовой решетки, попавших на цито- плазму и регистрирующие структуры, и рассчитывали по формуле V=Pk/Pt (Weibel,1969г)t. Получен- ные данные обрабатывали статически. На протяжении полового цикла в гонадах креветки имеется резерв овогоний. Их цитоплазма бед- на органоидами, содержит крупное овальное ядро с четко контурируемой ядерной оболочкой и одним центрально расположенным ядрышком. Цитоплазма их содержит свободно расположенные и мем- ранно-связанные рибосомы, единичные митохондрии и вытянутые цистерны эндоплазматического ретикулума. Превителлогенные овоциты размером от 90 до 300 мкм. Ядро имеет поры, вакуолизированное ядрышко. Вблизи ядерной оболочки цитоплазма содержит плотный волокнисто-гранулированный ма- териал, в цитоплазме нарастает плотность рибосом и эндоплазматического ретикулума. По мере раз- вития эндоплазматического ретикулума от него отделяются мелкие гладко-контурные пузырьки, фор- мирующие элементы комплекса Гольджи (таблица, рисунок А). Митохондрии локализуются в ядерной зоне (рисунок Б). Они имеют овальную или вытянутую форму, обладают матриксом высокой элек- тронной плотности с большим числом поперечно расположенных крист. С увеличением овоцитов до 40 мкм перинуклеарное скопление митохондрий исчезает. К началу вителлогенеза овоцит достигает 400-500 мкм. Для этой стадии характерно накопление эндогенного желтка (рисунок В). Элементы желтка с первоначальным диаметром до 1 мкм состоят из гранул, аналогичных по форме и плотности таковым в цистернах эндоплазматического ретикулума. В цитоплазме увеличивается количество липидных глобул. На этой стадии эндоплазматическая мем- брана овоцита отделена от фолликулярных клеток узким межклеточным пространством. Постепенно плазматическая мембрана овоцита становится неровной, и на ее поверхности образуются микровор- синки. С увеличением овоцита до 600-700 мкм пространство между половой и фолликулярными клетками расширяется. Яйцевая оболочка, представленная слоем электронно-плотного материала, исчерчена канальцами, содержащими микроворсинки и отростки фолликулярных клеток. Ооцит дос- тигает размера 800 мкм. Количество пиноцитозных пузырьков возрастает; они поступают в цитоплаз- му, где, сливаясь, формируют электронно-плотные гранулы желтка. 2/5 УЛЬТРАСТРУКТУРНОЕ ИЗУЧЕНИЕ ОВОЦИТОВ ТРАВЯНОГО ШРИМСА PANDALUS LATIROSTRIS В конце вителлогенеза овоцит перегружен желточными и липидными образованиями, их нет только в перинуклеарной и кортикальной цитоплазме. Активно протекает эндоцитоз. Перед нерестом микроворсинки и отростки фолликулярных клеток исчезают. Фолликулярный эпителий дегенерирует. Дифференцировка половых клеток травяного шримса сопровождается изменением объемной плотности цитоплазматических органелл и включений. Средняя объемная плотность митохондрий и аппарата Гольджи в период превителлогенеза выше, чем в период вителлогенеза, а средняя объемная плотность глобул белков липидных включений, напротив, больше в период вителлоге- неза (см. таблицу). Вителлогенез в овоцитах десятиногих ракообразных подразделяют на первичный, или эндоген- ный, и вторичный, или экзогенный (Beams, Kessel, 1963). Первичный вителлогенез сопровождается накоплением плотного материала в многочисленных пузырьках эндоплазматического ретикулума. В начале гаметогенеза в овоцитах шримса гранулярный эндоплазматический ретикулум формируется в виде вытянутых цистерн. С началом превителлогенеза ретикулум расходится на пузырьки и цис- терны, которые заполняют цитоплазму. К началу синтеза желтка в цитоплазме содержится большое количество митохондрий, развиваются комплекс Гольджи и эндоплазматический ретикулум. В течение вторичного вителлогенеза происходит синтез желтка в цистернах эндоплазматического ре- тикулума. Кроме того, из межклеточного пространства в клетку поступает материал посредством пиноци- тоза. На поверхности овоцита формируются микроворсинки, в основании которых наблюдается активный пиноцитоз. Пиноцитозные пузырьки участвуют в накоплении желточного материала в овоцитах. Показано, что перед нерестом происходит редукция микроворсинок (Schejeide, Hanrely,1983). Те окаймленные пу- зырьки, которые содержат микроворсинки, вероятно, сливаются с эндоцитозными 3/5 УЛЬТРАСТРУКТУРНОЕ ИЗУЧЕНИЕ ОВОЦИТОВ ТРАВЯНОГО ШРИМСА PANDALUS LATIROSTRIS пузырьками, содержа- щими вителлогенин, и таким образом участвуют в формировании желточных включений. Во время виллогенеза в овоцитах креветки Pandalus latirostris заметно активизируется везикуляр- ный элемент аппарата, в полостях которого формируются гранулы эндогенного желтка, а отдельные пузырьки подходят к пиноцитозным вакуолям, содержащим экзогенный желточный материал, и сли- ваются с ними. Эти данные свидетельствуют о том, что у травяного шримса активное участие в син- тезе и формировании желточных гранул принимает комплекс Гольджи. Есть мнение, что у некоторых ракообразных эндогенные и экзогенные механизмы формирования желточного материала осуществляются одновременно (Dhainaut, De Leersnvder, 1976). Наши данние свидетельствуют в пользу этого предположения. Библиографический список 1. Ковалева В.И. Некоторые особенности экологии роста и продукционного процесса травяного шримса из залива Петра Великого / В.И Ковалева. Природа без границ, Владивосток, 2009. С. 144-146. 4/5 УЛЬТРАСТРУКТУРНОЕ ИЗУЧЕНИЕ ОВОЦИТОВ ТРАВЯНОГО ШРИМСА PANDALUS LATIROSTRIS 2. Ковалева В.И. Сезонное изменение репродуктивной биологии травяного шримса Pandalus latirostris // Науч. тр. Дальрыбвтуза. Владивосток, 2009. С. 40-44. 3. Beams H.W., Kessel R.G. 1963 Electron Microscope studies on developing crayfish oocytes, with special reference to the origin of yolk. J. Cell Biol., v. 18, p. 621-649. 4. Dhainaut A., De Leersnvder M. 1976a. Etude cytochimique et ultrastructurale de l’evolution ovocytaire du crabe Eriocher sinensis. 1. Ovogenese naturalle. Arch. Biol., v. 87, p. 261-282. 5. Schjeide O.A.., Harenly L. 1983 Resorption of microvilli by the maturing oocyte of the stick in- sect(Caratisium morosus).-Cytobios, v. 38, N 151-152, p. 167-176. 6. Weibel E.R. 1969. Stereological principles for morphomentry in electron microscopic cytology.- Int.Rev.Cytol., v. 26, p. 233-302. 5/5