• P Препарати та технології • ОПРЕДЕЛЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ ЦИТОКИНОВ В СМЫВАХ ИЗ ПОЛОСТИ НОСА У ДЕТЕЙ-АЛЛЕРГИКОВ ПОСЛЕ ПРИМЕНЕНИЯ Bacillus clausii: ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ по материалам: Pediatr. Allergy Immunol. — 2004. — V. 15. Напечатано в Великобритании, 2004) № 8 (54)/2008 РР 78 Гиоргио Ципранди (Giorgio Ciprandi)*, Мария Анджела Тоска (Maria Angela Tosca)*, Манлио Миланезе (Manlio Milanese)*, Джакомо Калиго (Giacomo Caligo)* и Витторио Рикка (Vittorio Ricca)** — P. 148—151. еспираторные инфекции у вано, смогло снизить частоту детей возникают очень чавозникновения респираторсто. Как уже было проденых инфекций и их тяжесть у монстрировано ранее, Bacillus детей, посещающих детские /*Отделение аллергических и ЛОР болезней, Отдел заболеваний головы clausii обладает иммуномодошкольные учреждения [1]. и шеи, госпиталь Сан-Марино, Генуя, Италия, дулирующими свойствами и Пробиотики представляют со**Ospedale Koelliker, Турин, Италия/ безопасен в применении. Цель бой микроорганизмы, оказыванастоящего исследования соющие положительное влияние стояла в выяснении того, мона здоровье «хозяина». Взаищим действием и влиять на профиль жет ли применение B. clausii модействие между пробиотиком цитокинов, выявляемых в полости у детей-аллергиков с рецидивируюи организмом «хозяина» является доноса у детей-аллергиков, страдающих щими респираторными заболеваниястаточно сложным и разноплановым. рецидивирующими респираторными ми модулировать профиль цитокинов. Происходит стимуляция иммунной инфекциями. Десять детей (средний возраст 4,4 системы путем активизации иммунногода), посещающих детго ответа, опосредованного ский сад, были включены Т-хелперами 1-го типа (Th1) в исследование по окони Т-регулирующими клеткаРеспираторные инфекции у детей чании учебного года (т.е. ми (Tr1), а также снижения возникают очень часто. Как уже было летом). Препарат, соактивности Т-хелперов 2-го держащий споры Bacillus типа (Th2) [2]. У детей, страпродемонстрировано ранее, Bacillus clausii clausii (Enterogermina®, 2 аллергией, отмечаобладает иммуномодулирующими свойствами дающих миллиарда спор в каждом ется поляризация иммуннои безопасен в применении. Цель настоящего флаконе), применялся в го ответа в сторону Th2, для дозе 2 флакона в сутки исследования состояла в выяснении того, может которой характерны высокие на протяжении 4 недель. уровни IL-4 и низкие уровни ли применение B. clausii у детей-аллергиков Определенный набор циIFN-γ [3]. Поэтому пробиос рецидивирующими респираторными токинов, в том числе интики вполне могут считаться терлейкинов (IL)-1, IL-3, важным терапевтическим дозаболеваниями модулировать профиль IL-4, IL-6, IL-8, IL-10, ILстижением в деле профилакцитокинов 12, интерферона (IFN)- γ, тики инфекций и атопии. трансформирующего факВ этом отношении Bacillus тора роста (TGF)-β и факclausii — это безопасный и тора некроза опухоли (TNF)-α, опречасто назначаемый пробиотик. В опуделялся методом иммуноферментного бликованном недавно обзоре были анализа в смывной жидкости из полопредставлены данные некоторых иссти носа до и после лечения. Лечение следований, указывающие на его роль с использованием Bacillus clausii приРеспираторные инфекции у детей в профилактике инфекций желудочновело к существенному снижению уроввозникают очень часто, а их периокишечного тракта у детей и модулироней IL-4 (p<0,01) и существенному дическое рецидивирование создает вании иммунного ответа [4]. увеличению уровней IFN-c (p<0,05), определенные сложности для врачейПоэтому наша цель состояла в IL-12 (p<0,001), TGF-β (p<0,05), а педиатров, преимущественно в плане изучении потенциального влияния также уровней IL-10 (p<0,05). Сущедиагностики, выбора стратегии лечеB. clausii на профиль цитокинов, в ственного влияния на другие цитокиния и профилактики. Поскольку протом числе IL-1, IL-3, IL-4, IL-6, IL-8, ны не отмечено. В заключение отмефилактика снижает потребность в леIL-10, IL-12, IFN- γ, TGF-β и TNF-α у тим, что в данном исследовании было чении, профилактическое применение детей-аллергиков, страдающих реципродемонстрировано, что B. clausii молока, содержащего пробиотики, дивирующими респираторными инможет обладать иммуномодулируюкак недавно было продемонстрирофекциями. Введение • Материалы и методы исследования Субъекты исследования Оценка проводилась среди десяти детей, посещающих детское учреждение. У каждого пациента проводился тщательный сбор клинического анамнеза, а также физикальное и аллергологическое обследование. Демографические данные представлены в таблице. Дизайн исследования • P Таблица Основные характеристики испытуемых Испытуемые Пол Возраст Аллергическое заболевание Сенсибилизация Тяжесть астмы Тип РИ Частота возникновения 1 Ж 4 A HDM 1 ВДП 7 2 М 3 A, Р HDM 1 ВДП 6 3 М 5 A HDM 1 ВДП 7 4 М 5 A, Р HDM 1 ВДП 6 5 Ж 4 A, Р HDM 1 ВДП 7 6 М 4 A, Р HDM 1 ВДП, НДП (2) 8 7 М 4 A HDM 1 ВДП 8 8 Ж 5 A, Р HDM 1 ВДП, НДП 7 9 Ж 5 A HDM 1 ВДП 8 10 М 6 A, Р HDM 1 ВДП 7 Примечание: A — астма; Р — ринит; HDM — клещи домашней пыли; тяжесть астмы определялась по классификациии GINA (Глобальная инициатива по лечению астмы); тип РИ, тип респираторной инфекции: ВДП, инфекции верхних дыхательных путей (ринофарингит, синусит, тонзиллит, аденоидит, средний отит); НДП, инфекции нижних дыхательных путей (трахеобронхит и пневмония); частота возникновения за последний год. после приема B. clausii. В любом случае исследование было слепым для исследователя, проводившего определение содержания цитокинов. Все дети перорально получали препарат, содержащий споры B. clausii (Enterogermina®; Sanofi-Synthelabo OTC, Милан, Италия) (2 миллиарда спор в каждом флаконе), в дозе 2 флакона в сутки на протяжении 4 недель. Исследование проводилось по окончании учебного гола, т.е. летом, поскольку в этот период частота возникновения респираторных инфекций в нашей зоне является очень низкой. Взятие смывов из полости носа проводилось у всех испытуемых до и непосредственно после применения B. clausii. Исследование было одобрено Экспертным советом медицинского учреждения. От родителей было получено устное информированное со№ 8 (54)/2008 Для оценки профиля цитокинов в исследование была включена группа из 10 детей с диагностированной аллергией, у которых периодически возникали рецидивы респираторных инфекций. Диагноз аллергии ставился на основании клинического анамнеза, физикального обследования, а также кожной пробы накалыванием (прик-теста) с обычным набором аллергенов, описанной в различных источниках [5]. Рецидивирование респираторных инфекций определялось произвольным образом как 6 случаев инфекции в год. В исследование не включались дети, на протяжении предшествующих 4 недель принимавшие антигистамины, а также кортикостероиды для назального, ингаляционного и перорального применения. Группа плацебо не была предусмотрена, так как основная цель исследования состояла в оценке иммунопатологических явлений, возникающих Препарати та технології 79 Рис. 1. Уровни цитокинов до и после лечения B. clausii. Baseline = исходный; After treatment = после лечения Рис. 2. Уровни цитокинов до и после лечения B. clausii. Baseline = исходный; After treatment = после лечения • P Препарати та технології • Помимо этого, отсутствуют какиеходные показатели — 0,76±0,43 СО и гласие на участие их детей в исслелибо данные о том, что в ходе исслесредние показатели после лечения — довании. дования проводилось изучение вегета1,36±0,81 СО). Под действием B. сlausii Смывы из носа существенно возросли уровни TGF-β Взятие смывов из полости носа ции спор B. сlausii, поэтому ее прямой (p<0,05; средние исходные показатепроводилось с использованием 5 мл иммуномодулирующий эффект не моли — 0,9±0,34 СО и средние показафизиологического раствора хлорида жет считаться достоверно установлентели после лечения — 1,33±0,51 СО), натрия в соответствии со стандартной ным. Наоборот, нами исследовались а также уровни IL-10 (p<0,05; средние методикой, описанной во многих исэффекты B. clausii на уровне органовисходные показатели — 1,45±0,75 СО точниках [5]. Во время проведения мамишеней, таких как верхние дыхаи средние показатели после лечения — нипуляции голова пациента была оттельные пути, у детей-аллергиков, 2,05±0,72 СО). клонена назад, при этом мягкое небо анамнез которых отягощен рецидиСоотношение Th2:Th1 (IL-4/IFN- γ) закрывало вход в глотку. Полученная вирующими респираторными инфекжидкость была сопоставимой у всех существенно сократилось с 2,92±1,71 циями. Концепция о рециркуляции субъектов исследования; ее собирали до лечения до 1,44±0,57 после лечеиммунокомпетентных клеток поддля определения уровней содержания ния (p=0,018). тверждает полученные данные, поцитокинов и хранили при скольку B. clausii приметемпературе -20°C. нялся перорально. Оценка содержания В любом случае, полуВ любом случае, полученные нами результаты цитокинов ченные нами результаты указывают на возможные механизмы, Содержание цитокиуказывают на возможные нов измерялось методом механизмы, с помощью кос помощью которых B. сlausii оказывает ELISA (твердофазного имторых B. сlausii оказывает модулирующее действие на функционирование модулирующее действие на муноферментного анализа) (R&D Systems, США). функционирование иммуниммунной системы При проведении аналиной системы. за использовали количеОднако для подтвержственную методику иммудения этой гипотезы обязаноферментного сэндвич-анализа. Эта B. clausii не оказывал существеннотельно необходимо проведение дополметодика широко описана в различго влияния на другие изучаемые цитонительных исследований с длительным ных публикациях [5]. кины (IL-1, IL-3, IL-6 и IL-8) (данные не применением препарата в больших Статистический анализ представлены). группах детей. Был проведен статистический анализ полученных данных с использованием многовариационного дисперсного анализа (M-ANOVA) и апостериорного 1. HATAKKA K, SAVILAHTI E, PONKA A, et al. Effect of long term consumption of probiotic milk сравнения с помощью теста Дункана. on infections in children attending day care centers: double blind, randomised trial // BMJ. — Соотношение Th2/Th1 рассчитыва2001. — 322. Р. 1—5. лось с помощью t-теста. Результаты, 2. ELSON CO, CONG Y. Understanding Immune-Microbial homeostasis in intestine // Immunol для которых значения p были меньше Res. — 2002. — 26. — Р. 87—94. 3. MURCH SH. Toll of allergy reduced by probiotics // Lancet. — 2001. — 357. — Р. 1057—9. 0,05, считались статистически досто4. CIPRANDI G, TOSCA MA. Probiotics in paediatric allergy: evidence and prospectives for верными. № 8 (54)/2008 Литература 80 5. Результаты и их обсуждение У детей, принимавших назначенный препарат, содержащий споры B. сlausii, какие-либо побочные явления не наблюдались. Ниже приведен профиль цитокинов до и после лечения B. clausii. После лечения уровни IL-4 значительно снизились (p<0,001; средние исходные показатели — 4,49±1,45 стандартного отклонения (СО) и средние показатели после лечения — 3,52±0,9 СО). При приеме Bacillus clausii значительно повысились уровни IFN-γ (p<0,05; средние исходные показатели — 1,81±0,79 СО и средние показатели после лечения — 2,65±0,69 СО) и IL-12 (p<0,001; средние ис- 6. 7. 8. 9. 10. 11. 12. 13. 14. 15. Bacillus clausiі // Ital. J. Paed. Allergy Immunol. — 2002. — 2. — Р. 49—57. RICCIO AM, TOSCA MA, COSENTINO C, et al. Cytokine pattern in allergic and non-allergic chronic rhinosinusitis in asthmatic children // Clin Exp Allergy. — 2002. — 32. — Р. 422—6. KALLIOMAKI M, KIRJAVAINEN P, EEROLA E, et al. Dis tinct patterns of neonatal gut microflora in infants in whom atopy was and was not developing. J Clin Allergy Immunol. — 2001. — 107. — Р. 129—34. MURCH SH. The immunologic basis for intestinal food allergy // Curr. Opin. Gastroenterol. — 2000. — 16. — Р. 552—7. LEVINGS MK, BACCHETTA R, SCHULZ U, RONCAROLO MG. The role of Il10 and TGF-b in the differentiation and effector function of T regulatory cells // Int. Arch. Allergy Immunol. — 2002. — 129. — Р. 263—76. NOVELLI A, ULIVELLI A, REALI EF, et al. Bacillus subtilis spores as a natural pro-host oral agent. Preliminary data in children // Chemioterapia. — 1984. — 3. — Р. 152—5. GALLI E, CORGIOLO M, FIORE L, et al. Valutazione di alcuni parametri immunologici in bambini con otite ricorrente trattati con spore di B subtilis // Clin Ter. — 1984. — 109. — Р. 329—34. FIORINI G, CIMMINIELLO C, CHIANESE R, et al. B. Subtilis selectively stimulates the synthesis of membrane bound and secreted IgA // Chemioterapia. — 1985. — 4. — Р. 310—2. GRASSO G, MIGLIACCIO P, TANGANELLI C, et al. Restorative effect of B. subtilis spores on interferon production in aged mice // Pharm Aging Proc. — 1994. — 717. — Р. 198—208. CARUSO A, FLAMMINIO G, FOLGHERA S, et al. Expression of activation markers on peripheral-blood lymphocytes following oral administration of B. subtilis spores // Int. J. Immunopharmacol. — 1993. — 15. — Р. 87—92. KAUR IP, CHOPRA K, SAINI A. Probiotics: potential pharmaceutical applications // Eur. J. Pharm Sci. — 2002. — 15. — Р. 1—9. Di LEO V, YANG P, BERIN MC, PERDUE MH. Factors regulating the effect of IL-4 on intestinal epithelial barrier function // Int. Arch. Allergy Immunol. — 2002. — 129. — Р. 219—27.