1.Фагоциты

Методическая разработка
по подготовке и работе на лабораторном занятии №1
для студентов фармацевтического факультета (специальность - клиническая фармация)..
Тема: Организация бактериологической лаборатории. Микроскопические методы исследования.
Микроскопия биологических препаратов с иммерсионной системой микроскопа.
1.1. Актуальность темы. Микробиология – общемедицинская дисциплина, и, потому, необходима врачу
любой специальности. Микробы являются возбудителями не только инфекционных болезней, а также
многих неинфекционных и их осложнений. Врач на протяжении своей профессиональной деятельности
неоднократно сталкивается с ними. Для того, чтобы правильно поставить диагноз болезни, необходимо
хорошо знать морфологию микробов, уметь различать их под микроскопом. Каждый врач должен
безупречно владеть методом микроскопии, знать строение микроскопа и правила работы с ним.
1.2. Цель изучения темы.
В системе микробиологической диагностической службы лечебных и диагностических учреждений
здравоохранения бактериологическая лаборатория является самой важной структурной частью.
1.2.1. Цель общая:
Усвоить основные требования и правила работы в микробиологической лаборатории, изучить технику
микроскопирования при исследовании морфологии микроорганизмов.
1.2.2. Цель конкретная:
1. Придерживаться правил поведения и техники безопасности при работе в микробиологической
лаборатории.
2. Проводить микроскопию препаратов, используя иммерсионную систему.
3. Определить форму и расположение микроорганизмов в поле зрения.
4. Определить систематическое положение основных групп микроорганизмов.
1.3. Обеспечение исходного уровня знаний-умений:
1. Знать строение оптического микроскопа, принцип его работы.
2. Иметь понятие о преломлении света, оптически однородных и неоднородных средах, показателе
преломления среды.
3. Уметь объяснить ход лучей в оптическом микроскопе с сухой и иммерсионной системами, границы
разрешающей способности микроскопа (кафедра биофизики).
4. Уметь пользоваться световым микроскопом (кафедры биологии и гистологии).
5. Объяснить систематическое положение основных групп микроорганизмов. Понятия об эукариотах и
прокариотах (кафедра биологии).
1.4. Содержание обучения:
1. Микробиологическая лаборатория, оснащение, режим работы, правила поведения.
2. Систематика микроорганизмов.
3. Микроскопы, микроскопический метод исследования.
4. Определение величины и формы микроорганизмов, как этапы микроскопического метода
исследования.
1.4.1. Граф логической структуры содержания.
Микробиологическая лаборатория → исследуемый материал → микроскопическое исследование →
определение ориентировочного возбудителя.
1.4.2. Перечень теоретических вопросов.
1. Назначение микробиологической лаборатории, оснащение, режим работы в ней.
2. Правила работы в микробиологической лаборатории.
3. Типы современных микроскопов. Техника микроскопии иммерсионной системой биологического
светового микроскопа.
4. Возможности использования оптического микроскопа при изучении морфологии основных групп
микроорганизмов.
1
1.4.3. Источника учебной информации.
Литература теоретическая основная:
К.Д. Пяткин, Ю.С. Кривошеин. Микробиология. М. Медицина, 1980, стр.4-23.
В. Д. Тимаков и соавт. Микробиология. М. Медицина 1993. стор. 5-20
Крок-1. Загальна лікарська підготовка. Київ, Медицина 2004
А.А. Воробьев и соавт. Микробиология. М. Медицина, 1994, стр.6-16.
Л.Б. Борисов и соавт. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология. М. Медицина, 1994, стр.
6-24.
Г.К. Палій і співавт. Мікробіологія, вірусологія, імунологія, інфекційні хвороби.
Литература теоретическая дополнительная:
А.А. Воробьев. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология. М., МИА, 2004, стр.17-28.
А.И. Коротяев, С.А. Бабичев. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология. С.Петербург.
Спецлит., 2002, стр.7-18.
В.И. Покровский. Медицинская микробиология. ГЭОТАР-МЕД, М., 2002, стр. 7-19
И.Л. Дикий и соавт. Микробиология. Харьков, изд. Укр ФА, 1999, стр. 7-16.
А.М. Королюк, В.Б. Сбойчаков. Медицинская микробиология. С.Петербург, 1999, стр. 5-21.
В.И. Покровский, О.К. Поздеев. Медицинская микробиология. ГЭОТАР Медицина, Москва, 1998, стр. 114.
З.Н. Кочемасова и соавт. Санитарная микробиология и вирусология. М., Медицина, 1987, стр. 5-15
Литература практическая основная:
Л.Б. Борисов и др. Руководство к практическим занятиям по микробиологии. М., 1984, стр. 5-19.
Литература практическая дополнительная:
М.Н. Лебедева. Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии. М., Медицина,
1973, стр. 12-22.
В.В. Тец Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии, вирусологии и
иммунологии. М., Медицина, 2002, стр. 8-16.
Л.Г. Бранцевич и соавт. Микробиология. Практикум. К., Вища школа, 1987, стр. 3-10.
Ф.К. Черкес. Руководство к практическим занятиям по микробиологическим исследованиям. М.,
Медицина, 1980, стр. 3-14.
К.Д. Пяткин и соавт. Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии. М.,
Медицина, 1969, стр. 8-17.
1.5. Ориентировочная основа действия.
Исследуемый материал (мазок) → микроскопическое исследование → выявление микроорганизмов →
ориентировочное определение возбудителя за морфологическими признаками
1.7. Короткие методические указания для работы студентов на лабораторном занятии.
Записать правила работы в бактериологической лаборатории. Ознакомиться с формой ведения
протокола. Придерживаясь правил работы с иммерсионным микроскопом, промикроскопировать
демонстрационный мазок. Зарисовать в протоколе. Сделать выводы.
1.7.1. Методика проведения занятия.
- Провести контроль исходного уровня знаний-умений.
- Ознакомить студентов с формой ведения протокола занятия, провести инструктаж и записать в
протокольной тетради правила работы в микробиологической лаборатории. Расписаться в журнале об
инструктаже студентов относительно режима и правил работы в микробиологической лаборатории.
- Промикроскопировать окрашенные препараты микроорганизмов, используя сухую и иммерсионную
системы. Исследовать возможности иммерсионного микроскопа.
- Зарисовать исследуемые объекты в протоколе.
- Сделать выводы.
Автор: доцент, кандидат медицинских наук Мруг Валентина Максимовна
Методическая разработка
2
по подготовке и работе на лабораторном занятии №2
для студентов фармацевтического факультета (специальность - клиническая фармация)..
Тема: Морфология бактерий. Изготовление препаратов из бактериальных культур. Простой
метод окраски.
1.1. Актуальность темы. В микробиологической диагностике инфекционных болезней одним из первых
используют микроскопическое исследование материала от больного. Выявление в нем микроорганизмов
и изучение их морфологии разрешает ориентировочно определить возбудителя и в дальнейшем
провести четкую идентификацию с помощью других методов микробиологической диагностики.
Морфологические признаки бактерий можно изучать с помощью микроскопического метода
диагностики, то есть метода, который включает в себя работу по приготовлению мазка из
патологического материала или культуры микроба и его окраску, с последующим микроскопическим
исследованием. Возможно изучение морфологии возбудителя и в нативном состоянии, но в
большинстве случаев используют окрашенные или контрастированные препараты.
1.2. Цель изучения темы.
Уметь провести микроскопическое исследование культур бактерий.
1.2.1. Цель общая.
Уметь использовать морфологические свойства бактерий для дифференциации их в микроскопической
диагностике инфекционных заболеваний.
1.2.2. Цель конкретная:
1. Уметь приготовить мазки-препараты из бактериальных культур, зафиксировать их.
2. Уметь покрасить препарат простым способом.
3. Уметь распознать основные формы бактерий, морфологические группы.
1.3. Обеспечение исходного уровня знаний-умений:
1. Уметь определить требования к препаратам для микроскопического исследования (кафедра
гистологии).
2. Уметь выбрать способ микроскопии, исходя из величины исследуемого объекта (занятие №1).
3. Уметь использовать иммерсионную систему светового микроскопа (занятие №1).
1.4. Содержание обучения:
1. Изучение основных форм бактерий.
2. Изготовление препаратов из культуры бактерий на плотной среде.
3. Окрашивание простым методом.
4. Выявление бактерий в препарате микроскопическим методом.
5. Определение морфологических форм.
1.4.1. Граф логической структуры содержания.
Мир бактерий → деление на морфологические группы → изучение морфологии бактерий
микроскопическим методом.
1.4.2. Перечень теоретических вопросов.
1. Основные морфологические группы бактерий. Формы и размеры клеток, их расположение в поле
зрения.
2. Правила работы в микробиологической лаборатории.
3. Этапы приготовления мазка-препарата из бактериальных культур.
4. Классификация красок, которые используются в микробиологической практике.
5. Простые методы окраски микробиологических препаратов.
1.4.3. Источника учебной информации.
Литература теоретическая основная:
К.Д. Пяткин, Ю.С. Кривошеин. Микробиология. М. Медицина, 1980, стр.23-38.
А.А. Воробьев и соавт. Микробиология. М. Медицина, 1994, стр. 16-18, 26-30
3
В.Д. Тимаков и соавт. Микробиология. М., Медицина, 1993, стр. 21-28
Крок-1. Загальна лікарська підготовка. Київ, Медицина, 2005
Л.Б. Борисов и соавт. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология. М. Медицина, 1994, стр.
25-31
Г.К. Палій і співавт. Мікробіологія, вірусологія, імунологія, інфекційні хвороби.
Литература теоретическая дополнительная:
А.А. Воробьев. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология. М., МИА, 2004, стр. 29-35
А.И. Коротяев, С.А. Бабичев. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология. С.Петербург.
Спецлит., 2002, стр. 18-33
В.И. Покровский. Медицинская микробиология. ГЭОТАР-МЕД, М., 2002, стр. 28-31, 47-54.
И.Л. Дикий и соавт. Микробиология. Харьков, изд. Укр ФА, 1999, стр. 18-19, 26-27
В.И. Покровский, О.К. Поздеев. Медицинская микробиология. ГЭОТАР Медицина, Москва, 1998, стр.
17
Литература практическая основная:
Л.Б. Борисов и др. Руководство к практическим занятиям по микробиологии. М., 1984, стр. 20-24
Литература практическая дополнительная:
М.Н. Лебедева. Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии. М., Медицина,
1973, стр. 22-36
В.В. Тец Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии, вирусологии и
иммунологии. М., Медицина, 2002, стр. 16-22
Л.Г. Бранцевич и соавт. Микробиология. Практикум. К., Вища школа, 1987, стр. 77-98
Ф.К. Черкес. Руководство к практическим занятиям по микробиологическим исследованиям. М.,
Медицина, 1980, стр. 14-23
К.Д. Пяткин и соавт. Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии. М.,
Медицина, 1969, стр. 17-25
1.5. Ориентировочная основа действия.
Культура бактерий → изготовление и фиксация мазка → окрашивание мазка простым методом →
микроскопическое исследование мазка с использованием иммерсионной системы → выявление
бактерий по морфологии → изучение формы, расположения бактерий → определение морфологических
групп в препаратах.
1.7. Краткие методические указания для работы студентов на лабораторном занятии.
Используя технику изготовления препаратов из агаровой культуры, приготовить мазки из культуры
стафилококка и кишечной палочки, зафиксировать их в пламени горелки и покрасить простым
способом. Для окрашивания мазков стафилококка использовать генцианвиолет по Синеву, кишечной
палочки – фуксин Пфейффера. С помощью иммерсионной системы промикроскопировать мазки,
микроскопическую картинку зарисовать в протокольной тетради. Дать морфологическую
характеристику культурам. После завершения работы привести рабочее место в порядок и завершить
изучение морфологии бактерий исследованием разных морфологических групп в демонстрационных
препаратах. Зарисовать микроскопическую картинку, сделать выводы.
1.7.1. Методика проведения занятия.
- Инструктаж студентов по технике безопасности при работе с газовой горелкой с отметкой в
соответствующем журнале.
- Контроль исходного уровня знаний.
- Контроль знаний изучаемой темы.
- Самостоятельная работа студентов по освоению методик приготовления мазка и окрашивания простым
способом.
- Микроскопическое исследование приготовленных и демонстрационных мазков. Изучения морфологии
бактерий и дифференциации их на морфологические группы.
- Оформление протокола.
Автор: доцент, кандидат медицинских наук Мруг Валентина Максимовна
Методическая разработка
4
по подготовке и работе на лабораторном занятии №3
для студентов фармацевтического факультета (специальность - клиническая фармация)..
Тема: Строение и химический состав бактериальной клетки. L-формы бактерий. Окрашивание
препаратов по методу Грама.
1.1. Актуальность темы.
Клеточная стенка у разных групп микроорганизмов характеризуется разным макромолекулярным
строением, разновидностью химического состава и биологических свойств. Таким образом, основным
компонентом клеточной стенки большинства водорослей является целлюлоза, мицелиальных грибов –
хитин, дрожжевых – мананы и глюканы, бактерий – пептидогликаны. Химический состав и структура
клеточных стенок определяют окрашивание бактерий по Граму.
Впервые этот метод был предложен Х. Грамом в 1884 г. для выявления бактерий в гистологических
срезах. На сегодня этот метод широко используется в микробиологии для идентификации бактерий по
тинкториальным свойствам. По отношению к окрашиванию по Граму все бактерии делятся на две
группы: грампозитивные и грамнегативные.
1.2. Цели изучения темы.
При микроскопической диагностике многих заболеваний микробной природы придется использовать
сложные методы окрашивания, в частности, метод Грама. Для того, чтобы правильно оценить
полученные результаты, необходимо не только научиться правильно красить препараты, но и хорошо
понимать принцип сложного метода окрашивания, его механизм.
1.2.1. Цель общая.
Уметь дифференцировать бактерии, окрашенные по Граму, по тинкториальным свойствам на
грампозитивные и грамнегативные.
1.2.2. Цель конкретная:
- Знать особенности структуры прокариотической клетки сравнительно с эукариотической.
- Знать особенности строения и химического состава клеточной стенки бактерий и их L-форм.
- Знать отличия структуры и химического состава клеточной стенки у грампозитивных и
грамнегативных бактерий.
- Уметь покрасить мазки по Граму и объяснить его механизм.
- Уметь распознать грампозитивные и грамнегативные бактерии по цвету.
1.3. Обеспечение исходного уровня знаний-умений:
- Знать общую систему строения эукариотической клетки (кафедры биологии и гистологии).
- Уметь объяснить механизм дифференциальной окраски клетки (кафедры гистологии и биохимии).
- Знать основные морфологические формы бактерий (занятие № 2).
- Уметь приготовить мазок из культур бактерий (занятие № 2).
- Уметь пользоваться иммерсионной системой микроскопа (занятие № 1).
- Знать правила работы с инфекционным материалом (занятие № 2).
1.4. Содержание обучения:
- Ультраструктура бактерий, как представителей прокариотических клеток.
- Строение клеточной стенки бактерий, химический состав.
- Сложный метод окрашивания по Граму.
- Тинкториальные свойства бактерий. Дифференциация по методу Грама.
1.4.1. Граф логической структуры по содержанию.
Исследуемый инфекционный материал → изготовление мазка → окрашивание по Граму →
микроскопия мазка → выявление грампозитивных и грамнегативных бактерий.
1.4.2. Перечень теоретических вопросов.
- Ультраструктура бактериальной клетки, функция основных органелл.
- Строение, химический состав клеточной стенки. L-формы бактерий,
предопределяют их образование.
факторы,
которые
5
- Отличия строения и химического состава клеточной стенки у грампозитивных и грамнегативных
бактерий. Механизм окрашивания по Грамму, критерий дифференциации бактерий на грампозитивные и
грамнегативные.
1.4.3. Источники учебной информации.
Литература теоретическая основная:
К.Д. Пяткин, Ю.С. Кривошеин. Микробиология. М. Медицина, 1980, стр.31-32.
В. Д. Тимаков и соавт. Микробиология. М. Медицина 1993. стр. 28-40
Крок-1. Загальна лікарська підготовка. Київ, Медицина 2004
А.А. Воробьев и соавт. Микробиология. М. Медицина, 1994, стр.19-26.
Л.Б. Борисов и соавт. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология. М. Медицина, 1994, стр.
31-39.
Г.К. Палій і співавт. Мікробіологія, вірусологія, імунологія, інфекційні хвороби.
Литература теоретическая дополнительная:
А.А. Воробьев. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология. М., МИА, 2004, стр.35-41.
А.И. Коротяев, С.А. Бабичев. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология. С.Петербург.
Спецлит., 2002, стр.33-45.
В.И. Покровский. Медицинская микробиология. ГЭОТАР-МЕД, М., 2002, стр. 50-53.
И.Л. Дикий и соавт. Микробиология. Харьков, изд. Укр ФА, 1999, стр. 19-29.
А.М. Королюк, В.Б. Сбойчаков. Медицинская микробиология. С.Петербург, 1999, стр. 21-24.
В.И. Покровский, О.К. Поздеев. Медицинская микробиология. ГЭОТАР Медицина, Москва, 1998, стр.
17-26.
Литература практическая основная:
Л.Б. Борисов и др. Руководство к практическим занятиям по микробиологии. М., 1984, сир. 24-26.
Литература практическая дополнительная:
М.Н. Лебедева. Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии. М., Медицина,
1973, стр. 37-39.
В.В. Тец Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии, вирусологии и
иммунологии. М., Медицина, 2002, стр. 23-24.
Л.Г. Бранцевич и соавт. Микробиология. Практикум. К., Вища школа, 1987, стр. 108-117.
Ф.К. Черкес. Руководство к практическим занятиям по микробиологическим исследованиям. М.,
Медицина, 1980, стр. 24-25.
К.Д. Пяткин и соавт. Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии. М.,
Медицина, 1969, стр. 25-27.
1.5. Ориентировочная основа действий.
Смесь культуры стафилококка и кишечной палочки в физрастворе → изготовление мазка → фиксация
мазка → окрашивание по Граму в модификации Синёва (вместо раствора используют предварительно
пропитанные генцианвиолетом лоскутки фильтровальной бумаги, которые кладут на мазок и увлажняют
водой до выделения красителя) → высушивание мазка → микроскопия иммерсионной системой →
выявление грампозитивных клеток (фиолетового цвета) стафилококка и грамнегативных клеток
(розового цвета) кишечной палочки → зарисовывание результатов микроскопии → выводы
относительно тинкториальных свойств бактерий исследуемых по методу Грама.
1.7. Короткие методические указания для работы студентов на лабораторном занятии.
Для изучения тинкториальных свойств бактерий по методу Грама используют смесь Гр+ и Гр– бактерий,
представленных взвесью стафилококка и кишечной палочки в физрастворе. Придерживаясь правил
работы с живыми культурами и техники изготовления мазка из жидкого материала, изготовить
препарат, зафиксировать и покрасить по методу Грама. Окрашенный мазок высушить,
промикроскопировать, определить тинкториальные свойства стафилококка и кишечной палочки по
цвету, который они приобретают при окрашивании по Граму. Ход исследований записать в протокол,
микроскопическую картину зарисовать, сделать выводы в протокольной тетради. Убрать рабочее место.
1.7.1. Методика проведения занятия.
- Определение актуальности темы, которая изучается на занятии.
- Контроль исходного уровня знаний.
- Контроль знаний по изучаемой теме.
6
- Самостоятельная практическая работа, оформление протокола.
- Объявление результатов контроля знаний, подведение итогов.
Автор: доцент, кандидат медицинских наук Мруг Валентина Максимовна
Методическая разработка
по подготовке и работе на лабораторном занятии №4
для студентов фармацевтического факультета (специальность - клиническая фармация)..
Тема: Кислотоустойчивые бактерии. Споры бактерий. Методы их выявления. Окрашивание
препаратов по методу Циля-Нильсена.
1.1. Актуальность темы.
Кислотоустойчивые и спорообразующие бактерии достаточно распространены в природе. Благодаря
физико-химическим свойствам оболочки клетки или споры, они являются достаточно стойкими по
отношению к повреждающему действию различных факторов окружающей среды. Среди этих бактерий
есть патогенные для человека виды. Обнаружение в патологическом материале микроорганизмов со
свойствами кислотоустойчивых бактерий с помощью специального метода окрашивания, каковым
является метод Циля-Нильсена, помогает своевременно провести диагностику заболеваний, вызванных
патогенными видами.
Спорообразование также является важным критерием для идентификации возбудителей сибирской язвы,
ботулизма, столбняка, газовой раневой инфекции. Особенностью этих возбудителей является то, что их
споры имеют характерные размер, форму и расположение относительно центра вегетативной части.
Изучение методов выявления у бактерий кислотоустойчивости и спорообразования дает возможность
своевременно диагностировать заболевания, вызванные патогенными видами микроорганизмов с
такими свойствами.
1.2. Цели изучения темы.
Врачу любой специальности необходимо знать какие из бактерий способны противостоять факторам
окружающей среды и благодаря каким свойствам. Кислотоустойчивость и спорообразование у бактерий
являются факторами защиты . Такими свойствами наделены микобактерии – возбудители туберкулеза и
лепры (им присущая кислотоустойчивость). Споры являются своеобразной формой сохранения вида
возбудителя в неблагоприятных для него условиях. Споры формируются в определенных участках
клетки, имеют характерные размеры, кислотоустойчивость. Умение обнаружить кислотоустойчивые
бактерии и споры у возбудителей сибирской язвы, столбняка, ботулизма, газовой анаэробной инфекции
должно быть обязательным для врача.
1.2.1. Цель общая.
Уметь использовать метод окраски по Цилю-Нильсену для спор и дифференциации кислотоустойчивых
бактерий.
1.2.2. Цель конкретная:
1. Уметь объяснить морфологическую и функциональную ультраструктуру бактериальной клетки.
2. Уметь мазки по методу Циля-Нильсена.
3. Уметь дифференцировать кислотоустойчивые бактерии от некислотоустойчивых в препарате,
окрашенном по Цилю-Нильсену.
4. Уметь обнаруживать споры в препарате, окрашенном по Цилю-Нильсену, определять место их
расположения в клетке, размеры (сравнивая с поперечным размером вегетативной формы).
1.3. Обеспечение исходного уровня знаний-умений:
1. Знать основные морфологические формы бактерий (занятие №2)
2. Уметь объяснить функцию основных ультраструктурных элементов клетки (кафедры биологии и
гистологии)
3. Знать функцию клеточной стенки у бактерий (занятие № 3).
4. Уметь объяснить механизм дифференциальной окраски бактериальных клеток (занятие №3)
5. Уметь приготовить мазок из агаровых культур бактерий (занятие № 2).
7
6. Знать правила работы с инфекционным материалом (занятие № 2).
1.4. Содержание :
1. Ультраструктура и химический состав прокариотической клетки.
2. Кислотоустойчивость бактерий.
3. Споры у бактерий.
4. Метод окрашивания по Цилю-Нильсену, его значение для кислотоустойчивых бактерий и спор.
1.4.1. Граф логической структуры по содержанию.
Мазок исследуемого материала, который содержит кислотоустойчивые бактерии → окрашивание по
Цилю-Нильсену → микроскопия мазка → выявление кислотоустойчивых бактерий, дифференциация с
некислотоустойчивыми элементами.
Исследуемый материал, который содержит споры бактерий → изготовление мазка → окрашивание по
Цилю-Нильсену → микроскопия мазка → спор.
1.4.2. Перечень теоретических вопросов.
1. Особенности химического состава кислотоустойчивых бактерий.
2. Спорообразование у бактерий, физико-химические свойства спор, их биологическое значение.
3. Метод окраски по Цилю-Нильсену – техника и назначение.
1.4.3. Источники учебной информации.
Литература теоретическая основная:
К.Д. Пяткин, Ю.С. Кривошеин. Микробиология. М. Медицина, 1980, стр.36-38.
В. Д. Тимаков и соавт. Микробиология. М. Медицина 1993. стр. 38-40
Крок-1. Загальна лікарська підготовка. Київ, Медицина 2005
А.А. Воробьев и соавт. Микробиология. М. Медицина, 1994, стр.24-26.
Л.Б. Борисов и соавт. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология. М. Медицина, 1994, стр.
38-39.
Г.К. Палій і співавт. Мікробіологія, вірусологія, імунологія, інфекційні хвороби.
Литература теоретическая дополнительная:
А.А. Воробьев. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология. М., МИА, 2004, стр. 40-41
А.И. Коротяев, С.А. Бабичев. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология. С.Петербург.
Спецлит., 2002, стр. 43-46
В.И. Покровский. Медицинская микробиология. ГЭОТАР-МЕД, М., 2002, стр. 78-79
И.Л. Дикий и соавт. Микробиология. Харьков, изд. Укр ФА, 1999, стр. 24-25
А.М. Королюк, В.Б. Сбойчаков. Медицинская микробиология. С.Петербург, 1999, стр. 24-25
Литература практическая основная:
Л.Б. Борисов и др. Руководство к практическим занятиям по микробиологии. М., 1984, стр. 26
Литература практическая дополнительная:
М.Н. Лебедева. Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии. М., Медицина,
1973, стр. 39
В.В. Тец Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии, вирусологии и
иммунологии. М., Медицина, 2002, стр. 24-25
Л.Г. Бранцевич и соавт. Микробиология. Практикум. К., Вища школа, 1987, стр. 124-129
Ф.К. Черкес. Руководство к практическим занятиям по микробиологическим исследованиям. М.,
Медицина, 1980, стр. 27.
К.Д. Пяткин и соавт. Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии. М.,
Медицина, 1969, стр. 34-35.
1.5. Ориентировочная основа действия.
Споровая культура аэробных бацилл на плотной питательной среде → приготовление мазка → фиксация
→ окрашивание по Цилю-Нильсену → микроскопия иммерсионной системой → выявление спор,
окрашенных в розовый цвет, представленных круглыми структурами → ние в протоколе.
Демонстрационный мазок мокроты больного туберкулезом легких, окрашенным по Цилю-Нильсену →
микроскопия иммерсионной системой → выявление кислотоустойчивых бактерий туберкулеза, которые
имеют ярко-розовый цвет → дифференциация с некислотоустойчивыми элементами мокроты → в
протоколе.
8
Сделать выводы о тинкториальных свойствах кислотоустойчивых бактерий и спор, окрашенных по
методу Циля-Нильсена.
1.7. Короткие методические указания для работы студентов на лабораторном занятии.
Из агаровой культуры спорообразующих бацилл-сапрофитов приготовить мазок, зафиксировать и
покрасить по методу Циля-Нильсена. Мазок промикроскопировать,
споры красного цвета.
Отдифференцировать от вегетативных форм по цвету. Препарат зарисовать. В демонстрационном мазке
мокроты больного открытой легочной формой туберкулеза, окрашенного по Цилю-Нильсену, бактерии
возбудителя, дать морфологическую характеристику с точки зрения тинкториальных свойств. Препарат
зарисовать. Сделать выводы, оформить протокол.
1.7.1. Методика проведения занятия.
- Обоснование актуальности темы, которая изучается на занятии.
- Контроль исходного уровня знаний-умений.
- Контроль знаний по изучаемой теме.
- Самостоятельная практическая работа для усвоения знаний-умений, оформление протокола.
- Объявление результатов контроля знаний-умений, подведение итогов. Задание на следующее занятие
Автор: доцент, кандидат медицинских наук Мруг Валентина Максимовна
Методическая разработка
по подготовке и работе на лабораторном занятии №5-6
для студентов фармацевтического факультета (специальность - клиническая фармация)..
Тема: Капсула у бактерий. Жгутики. Внутриклеточные включения. Способы их выявления.
1.1. Актуальность темы.
Знание строения бактериальной клетки имеет большое значение в практике врача, поскольку
особенности течения некоторых болезней обусловлены структурой возбудителя. Например,
капсулообразование у таких микроорганизмов как пневмококк и клебсиелла, обусловливает угнетение
фагоцитоза, хронизацию воспалительного процесса, длительное течение заболеваний, вызванных ими.
В лабораторной диагностике знание структуры бактерий определяет сущность микроскопического
метода исследования.
Капсулообразование считают приспособительной функцией бактерий. Она может образовываться у
некоторых бактерий только в организме человека или животного, у других – как в организме, так и вне
его. В зависимости от особенностей бактерий, химический состав бактериальной капсулы может быть .
Выявление капсулы является одним из весомых критериев идентификации микроорганизмов.
Бактерии, по способности передвигаться разделяются на подвижных и неподвижных. Их способность к
активному движению обусловлена наличием особенных поверхностных придатков – жгутиков.
Обнаруживают наличие этих анатомических структур определением подвижности бактерий,
применением особенных методов обработки их протравами, адсорбцией особенных веществ и
красителей на поверхности клетки бактерии и с помощью электронной микроскопии.
В цитоплазме бактериальной клетки накапливаются
вещества, сложные соединения, которые
используются ею в процессе жизнедеятельности. Наибольшими являются гранулы волятина,
липопротеидные тельца, гликоген, капли пигмента, серы и тому подобное. Иногда размеры включений
настолько большие, что определяются как морфологическая особенность и используются в качестве
критерия видового или родового признака микроба.
1.2. Цель изучения темы.
Морфологические особенности используются при идентификации бактерий. Изучение методов
выявления капсулы, жгутиков и внутриклеточных включений позволяет широко и эффективно
распознать принадлежность выделенного возбудителя к тому или другому виду и, тем самым,
своевременно диагностировать инфекционную болезнь.
1.2.1. Цель общая.
Уметь использовать морфологические свойства бактерий для их идентификации.
9
1.2.2. Цель конкретная:
1. Усвоить метод выявления капсулы по Бурри-Гинсу.
2. Усвоить метод выявления зерен волютина по Нейссеру.
3. Усвоить технику приготовления препаратов «висячая»
микроскопическое исследование
и
«раздавленная»
капля
и
их
1.3. Обеспечение исходного уровня знаний-умений:
1. Уметь приготовить мазок из агаровой культуры
2. Уметь сложными методами
3. Уметь микроскопировать сухим объективом биологического микроскопа
4. Уметь микроскопировать иммерсионным объективом биологического микроскопа
5. Знать принципы темнопольной микроскопии живых микроскопических объектов при использовании
темнопольного и фазово-контрастного микроскопов.
1.4. Содержание :
1. Ультраструктура бактерий
2. Капсула у бактерий, ее химический состав, методы выявления
3. Жгутики у бактерий, их строение, методы подвижности
4. Внутриклеточные включения у бактерий, методы
1.4.1. Граф логической структуры по содержанию.
Исследуемая культура бактерий → приготовление мазка → окрашивание по Бурри-Гинсу →
микроскопия мазка → капсулы
Исследуемая культура бактерий → приготовление препаратов «висячая капля» или «раздавленная
капля» → микроскопия препарата → подвижности бактерий
Исследуемый материал, окрашенный по Нейссеру → микроскопия мазка → выявление зерен волютина
1.4.2. Перечень теоретических вопросов.
1. Капсула и ее биологическая роль для бактериальной клетки. Химический состав капсулы.
2. Внутриклеточные включения. Биологическая роль в жизнедеятельности бактерий. Методы выявления.
3. Органы движения бактерий. Строение жгутика. Виды подвижных бактерий.
4. Методы подвижности бактерий.
5. Метод контрастирования капсулы по Бурри-Гинсу.
1.4.3. Источники учебной информации.
Литература теоретическая основная:
К.Д. Пяткин, Ю.С. Кривошеин. Микробиология. М. Медицина, 1980, стр. 28-30, 32-36.
А.А. Воробьев и соавт. Микробиология. М. Медицина, 1994, стр. 23-26
В. Д. Тимаков и соавт. Микробиология. М. Медицина 1993. стр. 28-31, 38-40
Крок-1. Загальна лікарська підготовка. Київ, Медицина 2004
Л.Б. Борисов и соавт. Медицинская микробиология, вирусология, иммунология. М. Медицина, 1994, стр.
35-37, 38-39.
Г.К. Палій і співавт. Мікробіологія, вірусологія, імунологія, інфекційні хвороби.
Литература теоретическая дополнительная:
А.А. Воробьев. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология. М., МИА, 2004, стр. 39-41.
А.И. Коротяев, С.А. Бабичев. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология. С.Петербург.
Спецлит., 2002, стр. 40-45.
В.И. Покровский. Медицинская микробиология. ГЭОТАР-МЕД, М., 2002, стр. 47-50, 54.
И.Л. Дикий и соавт. Микробиология. Харьков, изд. Укр ФА, 1999, стр. 21-22, 24-25.
А.М. Королюк, В.Б. Сбойчаков. Медицинская микробиология. С.Петербург, 1999, стр. 24-26.
В.И. Покровский, О.К. Поздеев. Медицинская микробиология. ГЭОТАР Медицина, Москва, 1998, стр.
17-19.
Литература практическая основная:
Л.Б. Борисов и др. Руководство к практическим занятиям по микробиологии. М., 1984, стр. 26-27.
Литература практическая дополнительная:
10
М.Н. Лебедева. Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии. М., Медицина,
1973, стр. 40-42, 43, 44-45.
В.В. Тец Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии, вирусологии и
иммунологии. М., Медицина, 2002, стр. 20, 25-26.
Л.Г. Бранцевич и соавт. Микробиология. Практикум. К., Вища школа, 1987, стр. 109-110, 112-115, 121124.
Ф.К. Черкес. Руководство к практическим занятиям по микробиологическим исследованиям. М.,
Медицина, 1980, стр. 27-30.
К.Д. Пяткин и соавт. Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии. М.,
Медицина, 1969, стр. 29, 30-34.
1.5. Ориентировочная основа действия.
Агаровая культура клебсиелл → приготовление мазка по методу Бурри (смешивают культуру с тушью,
широко, как мазок крови, растирают шлифовальным стеклом) → высушивают → красят разведенным
фуксином 2 мин. по методу Бурри-Гинса → промывают → высушивают → микроскопируют →
обнаруживают на черном тушевом фоне розовые бактерии, окруженные бесцветной капсулой.
Бульонная культура B. subtilis → приготовление препаратов «висячая капля» (культуру наносят петлей
на покровное стекло, сверху накрывают специальным стеклом с лункой, края которой смазывают
вазелином) или «раздавленная капля» (культуру петлей наносят на предметное стекло, сверху
накрывают покровным стеклом, вытесняя пузырьки воздуха) → микроскопируют со стороны
покровного стекла, при опущенном конденсоре, сухим объективом х40 → наблюдают передвижение
бактерий серого цвета в поле зрения.
Демонстрационный мазок, с культурой бактерий, которые содержат волютиновые зерна, окрашенный по
Нейссеру → микроскопия → выявление темносиних зерен волютина на фоне желтой цитоплазмы
клеток.
Препараты
→ делают выводы относительно особенностей выявления капсулы, жгутиков и
волютиновых включений → приводят примеры возбудителей, которые имеют их.
1.7. Короткие методические указания для работы студентов на лабораторном занятии.
Используя технику приготовления мазка по методу Бурри, приготовить мазки из агаровой культуры
клебсиелл, покрасить разведенным фуксином 2-3 минуты, промыть и высушить. При микроскопии
обнаружить капсулу, результат исследования зарисовать в протокол.
Освоить технику изготовления из бульонной культуры B. subtilis препарата «раздавленная капля»,
технику микроскопии в затемненном поле зрения, подвижность бактерий в жидкой среде.
Усвоить культуральный способ определения подвижности бактерий и их дифференциацию с
неподвижными на примере посевов уколом в столбик полужидкого агара культур ешерихий и
клебсиелл. Отметить в протокольной тетради.
Промикроскопировать демонстрационные препараты из культуры возбудителя дифтерии, окрашенного
по Нейссеру. зерна волютина, микроскопическую картину зарисовать в протокол. Сделать выводы.
Убрать рабочее место.
1.7.1. Методика проведения занятия.
- Определение актуальности темы, которая изучается на занятии.
- Контроль исходного уровня знаний.
- Контроль знаний изучаемой темы.
- Самостоятельная практическая работа, оформление протокола.
- Объявление результатов контроля знаний, подведение итогов.
Автор: доцент, кандидат медицинских наук Мруг Валентина Максимовна
Методическая разработка
по подготовке и работе на лабораторном занятии №7-8
для студентов фармацевтического факультета (специальность - клиническая фармация).
11
Тема: Морфология, особенности строения и способы выявления спирохет, риккетсий, хламидий,
микоплазм, актиномицетов.
1.1. Актуальность темы состоит в необходимости получения знаний по морфологии основных групп
патогенных микроорганизмов для правильного проведения микроскопического метода диагностики
инфекционных болезней.
1.2. Цели изучения темы:
1.2.1. Цель общая: уметь использовать морфологические особенности микроорганизмов для их
идентификации.
1.2.2. Цель конкретная: усвоить методы изучения морфологии спирохет, актиномицетов, микоплазм,
риккетсий, хламидий, простейших и грибов.
1.3. Обеспечение исходного уровня знаний-умений:
1. Основные анатомические структуры, которые входят в состав бактериальной клетки.
2. Основные компоненты клеточной стенки бактерий.
3. Методы изучения структур клеточной стенки бактерий.
1.3.1. Тесты исходного уровня знаний-умений:
Для структуры клеточной стенки бактерий характерны все нижеуказанные свойства. Кроме:
A. Клеточная стенка грамотрицательных бактерий более чувствительна к действию лизоцима, чем стенка
грамотрицательных бактерий.
B. Включает в себя полимер – пептидогликан.
C. Строение включает в себя свойство воспринимать окрашивание по Граму.
D. Представляет уникальную пластическую систему.
E. Содержит d-изомеры аминокислот.
Правильный ответ: А.
1.4. Содержание обучения.
1.4.1. Граф логические структуры содержания.
Материал для исследования трепонем: пунктат лимфатических узлов, отделяемое твердого шанкра.
Микроскопическое исследование – готовят препарат „висящую” каплю и изучают в темном поле зрения.
Изучают морфологию трепонем окрашивание по методу Бурри, Морозова.
Материал для исследования лептоспир и боррелий: кровь, моча. Микроскопическое исследование –
готовят препарат для микроскопии в темном поле. Изучают морфологию лептоспир и боррелий по
методу Романовского-Гимзе, Бурри, Морозова.
Материал для исследования риккетсий – кровь больного. Микроскопическое исследование – готовят
препарат из культур тканей или из зараженного кровью больного куриного эмбриона, окрашивают по
методу Здрадовского.
Материал для исследования хламидийных инфекций – мокрота, мазки-отпечатки из коньюктивы
глаз, биоптат с влагалища. Микроскопическое исследование – изготовление препаратов, окрашивание
по методу Романовского-Гимзе.
Материал для исследования заболеваний, вызванных актиномицетами – мокрота, гной.
Микроскопическое исследование – исследование неокрашеных и окрашеных по методу Грама
препаратов для определения друз.
Материал для исследования патогенных простейших, которые относятся к классу жгутиковых –
мазки-отпечатки из гранулем, пунктат из костного мозга, кровь, кал. Микроскопическое исследование –
изготовление препаратов из исследуемого материала и окраска по Романовскому-Гимзе, Граму.
Материал для исследование простейших, которые относятся к классу саркодовых – кал.
Микроскопическое исследование кала проводят для выявления в нем цист или зерен гликогена,
окрашивание проводят метиленовым синим, раствором Люголя.
Материал для исследования патогенных простейших, которые относятся к классу ресничковых –
свежий кал. Микроскопическое исследование – нефиксированые препараты из кала для определения
трофозоитов.
Материал для исследования патогенных простейших, которые относятся к классу споровики – кровь,
спинномозговая жидкость, плевральный эксудат. Микроскопическое исследование – изготовление
препаратов из исследуемого материала и окраска по методу Романовского-Гимзе.
Материал для исследования дрожжеподобных грибов – мокрота, гной, моча. Микроскопическое
исследование – изготовление препаратов и окраска по методу Грама.
12
Материал для исследования дейтеромицетов – пораженные волосы, ногти, чешуйки кожи.
Микроскопичесское исследование – взятый материал помещают на предметное стекло в каплю 10-20%
раствора КОН или NaOH, накрывают покрывным стеклом и изучают под микроскопом.
1.4.2. Перечень практических вопросов.
1. Морфология спирохет. Методы изучения.
2. Морфология риккетсий. Методы изучения.
3. Морфология хламидий. Методы изучения.
4. Морфология микоплазм. Методы изучения.
5. Морфология актиномицетов. Методы изучения.
6. Морфология простейших, которые относятся к классам: жгутиковых, саркодовых, споровиков,
ресничковых. Методы изучения.
7. Морфология дрожжеподобных грибов и дейтеромицетов. Методы изучения.
1.4.3. Источники учебной информации.
Основные:
1. К.Д. Пяткин, Ю.С.Кривошеин. – Микробиология. – М. – М.,1980. – С. 354, 358-359, 364-365, 368-369,
374-375, 386-387, 390, 453, 449, 464, 467, 471, 476, 486.
2. К.Д. Пяткин, Ю.С.Кривошеин. – Микробиология. – М., 1981 – С. 359, 364-365, 374-375, 386-387, 390,
354-355, 464, 465, 467, 470, 471, 476-477, 481, 486, 453, 451-452.
3. А.И. Коротяев, С.А. Бабичев. – Медицинская микробиология, иммунология и вирусология. – СанктПетербург., 2002 – С. 448-449, 464, 473, 477, 481, 485, 488, 496, 503-504, 512, 514, 517, 520, 521, 522.
4. И.Л. Дикий, И.Д. Холупяк, Н.Е. Шевелева, М.Ю. Стегний. – Микробиология. – Харьков, 1999 – С.
29,32,34,39.
5. И.Л. Дикий, И.Д. Холупяк. – Руководство к лабораторным занятиям. – К., 2004, С. 68-744.
6. Л.Б. Борисов. – Руководство к практическим занятиям по микробиологии. – М.,1984 – С.28-29, 30, 217,
224, 249-252.
7. М.Н. Лебедева. – Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии. – М., 1973 –
С. 49, 54.
8. Ю.С. Кривошеин. – Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии. – М., 1980
– С. 169, 171-172, 177-178, 180-181,187,257, 259, 284-308.
Дополнительные:
1.
Словарь по микробиологии, вирусологии, иммунологии и инфекционным заболеваниям. Под ред.
Проф. Г.К.Палия. – К., 2004. – С. 152-291.
1.5. Ориентовачная основа действия (ООД).
Изготовление мазков из исследуемого материала и окрашивание их адекватными методами.
1.5.1. Окраска готовых мазков риккетсий по методу Здрадовского.
1.5.2. Микроскопирование и зарисовывание морфологии риккетсий.
1.5.3. Микроскопирование и зарисовывание спирохет в препаратах „толстая” капля окрашивание по
Романовскому-Гимзе.
1.5.4. Микроскопирование и зарисовывание лептоспир в препаратах по Морозову.
1.5.5. Микроскопирование и зарисовывание трепонем по Бурри.
1.5.6. Микроскопирование и зарисовывание хламидий в препаратах клеток епителия, инорицированых
ними, окрашеных по Романовскому-Гымзе.
1.5.7. Микроскопирование и зарисовывание малярийного плазмодия по Романовскому-Гимзе.
1.5.8. Микроскопирование и зарисовывание лейшманий по Романовскому-Гимзе.
1.5.9. Микроскопирование и зарисовывание цист лямблий раствором Люголя.
1.5.10. Микроскопирование и зарисовывание кандид по Граму.
1.7. Короткие методические указания для работы студентов на лабораторном занятии.
1.7.1. Методика проведения занятий.
Спирохеты – это извитые подвижные бактерии, характер движения и особенности формы дают
возможность легко отличить их от других бактерий. Применяя разные лабораторные приемы, их легко
обнаружить в нативном материале, который оказывает содействие установлению микробиологического
диагноза.
Актиномицеты – это также бактерии с особой морфологией. Длинные, ветвистые клетки этих
бактерий напоминают мицелий грибов. Правильное изготовление препарата из исследуемого материала,
окраска и знание морфологических особенностей актиномицетов даст возможность определить
принадлежность выявленного возбудителя к указанной таксономической группе.
13
Риккетсии и хламидии принадлежат к особым биологическим разновидностям бактерий внутриклеточных паразитов, размножение которых происходит в живых клетках эпителиального
происхождения. Знание морфологических особенностей на разных этапах развития и методов их
изучение дает возможность правильно установить микробиологический диагноз заболевания,
вызванного ними.
Микоплазмы, будучи бактериями, лишенными клеточной стенки, имеют большую склонность к
полиморфизму. Поэтому, морфологические признаки не является ведущим признаком в идентификации
этих микроорганизмов. Однако, знание этой особенности микоплазм помогает в правильной
диагностике инфекций микоплазменной природы.
Простейшие - одноклеточные эукариоты, более высокоорганизованные, чем бактерии. Они имеют
цитоплазму, дифференцированное ядро, разную по оптическим свойствам оболочку и примитивные
органоиды. Выделяют 4 класса простейших: жгутиковые, саркодовые, споровики и ресничковые.
Морфологические признаки представителей простейших являются типичными, окраска препаратов идет
по методу Романовского-Гимзе, цитоплазма приобретает голубой, ядро - ярко-красный цвета.
Патогенные грибы отнесены к организмам-эукариотам, которые не имеют хлорофилла. Основным
структурным компонентом клеток является мицелий, построенный из разветвленных бесцветных нитей
(гиф). Знание морфологических особенностей разных видов грибов дает возможность установить
микробиологический диагноз заболеваний, вызванных грибами.
1.8. Приложение (набор тестов исходного уровня обучающих целевых задач, ответа на них, графы,
алгоритмы).
Автор: доцент, к.м.н. Кордон Ю.В.
Методическая разработка
по подготовке и работе на лабораторном занятии №9
для студентов фармацевтического факультета (специальность - клиническая фармация)..
Тема: Морфология и ультраструктура микроскопических грибов. Методы их выявления.
Методическая разработка
по подготовке и работе на лабораторном занятии №10
для студентов фармацевтического факультета (специальность - клиническая фармация)..
Тема: Морфология и ультраструктура простейших. Методы их выявления.
Методическая разработка
по подготовке и работе на лабораторном занятии №11
для студентов фармацевтического факультета (специальность - клиническая фармация)..
Тема: Физиология микроорганизмов. Питание бактерий. Выделение чистой культуры аэробов (І этап).
1.1. Актуальность темы состоит в необходимости получения знаний в исследовательских приемах
патологического материала, выделенного от больного, для проведения бактериологического метода
диагностики инфекционных заболеваний.
1.2. Цели изучения темы:
1.2.1.Цель общая - уметь проводить посевы бактерий на разные питательные среды и выделять чистую
культуру из смеси бактерий.
1.2.2. Цель конкретная:
1.Выучить питательные среды и ингредиенты, которые использованы для их изготовления.
2.Усвоить технику посева микроорганизмов.
3.Ознакомиться с прибором, который используется для культивирования бактерий.
4.Усвоить методы выделения чистых культур аэробов.
1.3. Обеспечение исходного уровня знаний-умений:
1.Уметь готовить микроскопические препараты.
2. Уметь окрашивать препараты по методу Грама.
3.Уметь микроскопировать микропрепараты с помощью иммерсионного объектива.
1.3.1. Тесты исходного уровня знаний-умений.
14
Описать методику изготовления сложной питательной среды для культивирования бактерий, которые
требуют для своего роста и питания животный белок.
Ответ: Сложные питательные среды содержат сыворотку крови, кровь, асцитическую жидкость и тому
подобное. Методика их изготовления состоит в добавлении к МПА, МПБ стерильных компонентов
(кровь, сыворотку, желчь, асцетическую жидкость).
1.4. Содержание обучения.
1.4.1. Граф логические структуры содержания.
Питательные среды делятся по консистенции: твердые - основной средой является мясо-пептонный
агар. Жидкие, которые не содержат агара - мясо-пептонный бульон; полужидкие среды - это среды,
которые содержат небольшое количество агара - до 2%.
Питательные среды делятся по назначению: универсальные среды, на которых может расти
большинство микроорганизмов - МПА, МПБ; елективные среды - состав этих сред создается для роста
конкретного микроорганизма, например, для выделения коринебактерий дифтерии это среды с
телуритом.
Из исследуемого материала делают мазки, окрашивают по методу Грама. После определения
микроорганизмов (по морфологии), которые находятся в исследуемом материале, проводят посев его на
твердую питательную среду для получения изолированных колоний. Чашки Петри с посевами
помещают на 18-24 часа в термостат.
1.4.2. Перечень теоретических вопросов.
1.Метаболизм бактерий, как способ получения питательного материала и энергии.
2.Механизм питания бактерий.
3.Классификация бактерий за типом питания и характером использования энергии.
4.Принципы культивирования бактерий.
5.Питательные среды, техника их изготовления и классификация. Требования к питательным средам.
1.4.3.Источник учебной информации.
Основной:
1. К.Д. Пяткин, Ю.С.Кривошеин. - Микробиология. - Г. - М. - 1980 - С. 42, 47-51.
2. К.Д. Пяткин, Ю.С.Кривошеин. - Микробиология. - Г., 1981 - С. 47-51, 70-74.
3. А.И. Коротяев, С.А. Бабичев. - Медицинская микробиология, иммунология и вирусология. - СанктПетербург., 2002 - С. 46-53, 72-73.
4. И.Л. Дикий, И.Д. Холупяк, Н.Э. Шевелева, М.Ю. Стегний. - Микробиология. - Харьков, 1999 - С. 50-56.
5. И.Л. Дикий, И.Д. Холупяк. - Руководство к лабораторным занятиям. - К., 2004, С. 85-95.
6. Л.Б. Борисов. - Руководство к практическим занятиям по микробиологии. - Г.,1984- С.42-52.
7. М.Н. Лебедева. - Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии. - Г., 1973 - С.
67-85, 87.
8. Ю.С. Кривошеин. - Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии. - Г., 1980 С. 25-26.
Дополнительный:
1. Словарь по микробиологии, вирусологии, иммунологии и инфекционным заболеваниям. Под ред. Проф.
Г.К.Палия. – К., 2004. – С. 152-291.
1.5.Ориентировочная основа действия (ОДД).
1.5.1. Изготовление мазка из исследуемого материала, окрашивание его по методу Грама.
1.5.2. Посев исследуемого материала с помощью бактериальной петли на пластинчатый агар.
1.5.3. Изучение принципа работы термостата.
1.5.4. Изучение в демонстрации различных питательных сред и принципов их изготовления.
1.5.5. Изучение в демонстрационном опыте посева на питательные среды с помощью шпателя по методу
Дрыгальского.
1.7. Короткие методические указания для работы студентов на лабораторном занятии:
1.7.1. Методика проведения занятия.
В лабораторной диагностике инфекционных болезней важную, а иногда и основную роль отводят
бактериологическому исследовательскому приему. Этот метод разрешает выделить возбудителя в
чистом виде, выучить всесторонне его биологические свойства, доказать его этиологическую роль в
инфекционном процессе.
15
Чистая культура, или потомство одной клетки, может быть получена путем механического
разделения микроорганизмов, которые помещаются в инфекционном материале на поверхности твердой
среды.
Накопить и выделить культуру возбудителя можно используя разные по субстрату питательные
среды, создавая для развития микроорганизмов условия выращивания.
1.8. Приложение (набор тестов исходного уровня обучающих целевых задач, ответы на них,
графы, алгоритмы).
Автор: доцент, к.м.н. Кордон Ю.В.
Методическая разработка
по подготовке и работе на лабораторном занятии №12
для студентов фармацевтического факультета (специальность - клиническая фармация).
Тема: Физиология микроорганизмов. Размножение бактерий. Выделение чистой культуры
аэробов (2 этап).
1.1. Актуальность темы заключается в умении проводить посевы на разные питательные среды и
выделения чистой культуры из смеси бактерий.
1.2. Цели изучения темы.
1.2.1. Цель общая: Студенты должны обосновать бактериологический метод исследования материала,
полученного от больного инфекционной болезнью.
1.2.2. Цель конкретная: Студент должен уметь провести идентификацию микроорганизмов по
культуральным свойствам.
1.3. Обеспечение исходного уровня знаний - умений.
1. Усвоить технику посева микроорганизмов.
2. Ознакомиться с приборами, которые применяются для выращивания бактерий.
3. Усвоить методы выделения чистых культур аэробов.
1.3.1. Тесты на исходный уровень знаний - умений.
Какие культуральные признаки изучают с помощью стереомикроскопа?
А. Размеры колоний.
B. Характер поверхности.
C. Форма поверхности.
D. Структуру.
E. Способность к емульгации в физрастворе.
Ответ: (D).
1.4. Содержание учебы.
1.4.1. Граф логической структуры содержания.
Визуальное изучение результатов посева исследуемого материала на пластинчатый агар. Визуально и с
помощью стереомикроскопа или малого увеличения светового микроскопа изучаются и описываются
свойства изолированных колоний по следующим признакам.
По поверхности – гладкая (S - формы), шероховатая (R - формы), исчерченная, бугристая. Края ровные, зазубренные, волоконные, бахромчатые. Форма - круглая, розеткообразная, звездообразная,
древовидная. Величина - большие (4 - 5мм), средние (2 - 4мм), мелкие (1 - 2мм), карликовые (меньше
1мм). По консистенции; густотой; цветом; окрашенные и бесцветные; влажные, сухие, слизистые;
плоские, выпуклые, куполообразные, вдавленные.
Колонию, в которой предположительно находится возбудитель, отмечают карандашом по
стеклу, готовят из нее микропрепарат. Высушенный и зафиксированный препарат красят по методу
Грама, микроскопируют и зарисовывают. Фиксируют в протоколе морфологию и тинкториальные
свойства возбудителя.
Остаток подозрительной колонии высевают на скошенный агар для получения чистой культуры
и ее последующего исследования.
1.4.2. Перечень теоретических вопросов.
1. Механизм размножения бактерий.
2. Факторы роста и размножения бактерий.
16
Скорость и фазы размножения бактерий. Понятие "колония", "культура" .
Этапы выделения чистых культур бактерий.
Культуральные свойства бактерий, методы изучения.
Значение выделения чистых культур бактерий при бактериологическом методе диагностики
инфекционных болезней.
1.4.3. Источники учебной информации.
Литература.
Основная:
1. К.Д. Пяткин, Ю.С.Кривошеин. - Микробиология. - Г. - М. - 1980 - С. 66-73.
2. К.Д. Пяткин, Ю.С.Кривошеин. - Микробиология. - Г., 1981 - С. 47-52, 63-71.
3. А.И. Коротяев, С.А. Бабичев. - Медицинская микробиология, иммунология и вирусология. - СанктПетербург., 2002 - С. 72-83.
4. И.Л. Дикий, И.Д. Холупяк, Н.Э. Шевелева, М.Ю. Стегний. - Микробиология. - Харьков, 1999 - С. 58-60.
5. И.Л. Дикий, И.Д. Холупяк. - Руководство к лабораторным занятиям. - К., 2004, С. 99-105.
6. Л.Б. Борисов. - Руководство к практическим занятиям по микробиологии. - Г.,1984- С.47-54.
7. М.Н. Лебедева. - Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии. - Г., 1973 - С.
83-89.
8. Ю.С. Кривошеин. - Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии. - Г., 1980 С. 25-29.
Дополнительная:
1. Словарь по микробиологии, вирусологии, иммунологии и инфекционным заболеваниям. Под ред. Проф.
Г.К.Палия. – К., 2004. – С. 152-291.
3.
4.
5.
6.
1.5.Ориентировочная основа действия (ООД).
1.5.1. Изучение результатов высева исследуемого материала на пластинчатый агар.
1.5.2. Визуальное изучение изолированных колоний, которые выросли на пластинчатом агаре.
1.5.3. Изучение и описание с помощью стереомикроскопа или малого увеличения светового микроскопа
изолированных колоний.
1.5.4. Из колонии, в которой предположительно находится возбудитель, готовят микропрепарат, красят
по методу Грама.
1.5.5. Фиксируют в протоколе морфологию и тинкториальные свойства возбудителя.
1.5.6. Остаток подозрительной колонии высевают на скошенный агар для получения чистой культуры.
1.7. Короткие методические указания для работы студентов на лабораторном занятии.
1.7.1. Методы проведения занятия.
В методике выделения чистой культуры микроорганизмов необходимо уметь макро- и
микроскопически изучать культуральные свойства бактерий.
Овладеть методикой пересева изученной колонии на скошенный агар.
Автор: доцент, к.м.н. Кордон Ю.В.
Методическая разработка
по подготовке и работе на лабораторном занятии №13
для студентов фармацевтического факультета (специальность - клиническая фармация).
1.1.
1.2.
1.2.1.
1.2.2.
1.3.
1.
2.
Тема: Физиология микроорганизмов. Ферментативная активность бактерий. Выделение чистой
культуры аэробов (3 этап).
Актуальность темы заключается в умении идентифицировать выделенную чистую культуру бактерий с
помощью определения ее биохимической активности.
Цели изучения темы.
Цель общая: Овладеть методами биохимической идентификации бактерий.
Цель конкретная: Ознакомиться с сахаролитическимими, амилолитическими и гемолитическими
свойствами микроорганизмов в демонстрационных опытах.
Обеспечение исходного уровня знаний - умений.
Уметь определить чистоту выделенной колонии.
Усвоить методы определения ферментативной активности бактерий.
17
3. Усвоить методы экспресс - идентификации бактерий по биохимическим свойствам.
1.3.1. Тесты на исходный уровень знаний - умений.
Какие признаки положены в основу определения чистоты выделенной культуры?
А. Чувствительность к антибиотикам.
B. Биологические свойства.
C. Культуральные свойства.
D. Антигенное строение.
E. Чувствительность к бактериофагам.
Ответ: С.
1.4. Содержание обучения.
1.4.1. Граф логические структуры содержания.
Микроскопически и визуально проверяется чистота выделенной культуры, микроскопическую
картину зарисовывают.
При подтверждении чистоты культуры выделенного микроорганизма, проводится посев его на
среды короткого «пестрого» ряда Гисса, который содержит лактозу, глюкозу, маннит, мальтозу,
сахарозу, МПБ с индикаторными бумажками для выявления индола и сероводорода.
В демонстрационном опыте студенты изучают биохимические свойства бактерий с помощью
системы индикаторных бумажек (СИБ).
1.4.2. Перечень теоретических вопросов.
1. Биохимическая активность бактерий.
2. Классификация ферментов бактерий.
3. Питательные среды, которые используются для биохимической идентификации бактерий.
4. Методы изучения биохимических свойств бактерий.
5. Значение изучения биохимической активности бактерий для идентификации.
6. Использование ферментов бактерий в медицинской практике и промышленности.
1.4.3. Источники учебной информации.
Литература основная:
1. К.Д.Пяткин, Ю.С.Кривошеин. Микробиология.- М., 1981. - с.51 - 59.
2.
К.Д.Пяткин, Ю.С.Кривошеин. Микробиология.- М., 1980. - с.51 - 59.
3. А.И.Коротяев, С.А.Бабичев. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология.,- Санкт Петербург. 2002. - с.54 - 55.
4. И.Л.Дикий, И.Ю.Холупяк, Н.Е.Шевелева, Микробиология.,- Харьков., 1999. - с.56 - 57.
5. И.Л.Дикий. Микробиология. Руководство к лабораторным занятиям.,- Харьков., 2004. - с.106 - 113.
6. Л.В.Борисов. Руководство к практическим занятиям по микробиологии. – М., 1980. – с. 46 – 47, 52 –
56.
7. М.Н.Лебедева . Руководство к практическим занятиям по микробиологии- М., 1973. – с. 92-95.
8. Ю.С. Кривошеин. Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии - М., 1986.
- с.26- 29.
Дополнительная:
1.Словарь по микробиологии, вирусологии, иммунологии и инфекционным заболеваниям. Под. ред. проф.
Г.К. Палий . К. 2004,- С. 152-291.
1.5.Ориентировочная основа действия (ООД).
1.5.1. Макроскопически и микроскопически проверить чистоту выделенной колонии, микроскопическую
картину зарисовать.
1.5.2. Изучение биохимических свойств выделенного микроорганизма. Высевают культуру на среды
короткого «пестрого» ряда Гисса для определения сахаролитических свойств.
1.5.3. В демонстрационных тестах учесть гемолитические, протеолитические свойства бактерий.
1.5.4. В демонстрационном опыте изучить биохимические свойства микроорганизмов с помощью СИБ
(системы индикаторных бумажек).
1.7. Короткие методические указания для работы студентов на лабораторном занятии.
1.7.1. Методы проведения занятия.
В методике идентификации чистой культуры микроорганизмов необходимо овладеть методикой
проверки чистоты культуры.
Овладеть методом пересевания чистой культуры на среды короткого «пестрого» ряда Гисса,
которые содержат лактозу, глюкозу, маннит, мальтозу, сахарозу.
Автор: доцент, к.м.н. Кордон Ю.В.
18
Методическая разработка
по подготовке и работе на лабораторном занятии №14
для студентов фармацевтического факультета (специальность - клиническая фармация).
Тема: Физиология микроорганизмов. Дыхание бактерий. Способы культивирования и выделения
чистой культуры анаэробов.
1.1. Актуальность темы заключается в необходимости получения знаний в методах выделения чистых
культур патогенных анаэробных бактерий.
1.2. Цели изучения темы.
1.2.1. Цель общая: Завершить этапы бактериологического метода по идентификации анаеробних бактерий.
1.2.2. Цель конкретная: Усвоить методы культивирования и выделения чистых культур анаэробных
микроорганизмов.
1. Выучить методы культивирования анаэробов.
2.Ознакомиться с аппаратурой, которая применяется для культивирования анаэробов.
3. Усвоить методы выделения чистых культур анаэробов.
1.3. Обеспечение исходного уровня знаний - умений.
1. Знать типы дыхания микроорганизмов.
2. Уметь засевать микроорганизмы в разные питательные среды.
1.3.1. Тесты на исходный уровень знаний - умений.
Какие субстраты введены в короткий "пестрый" ряд Гисса?
А. Желатина.
B. Лакмусовое молоко.
C. Маннит.
D. МПБ с индикаторными бумажками на индол и сероводород.
E. Фруктоза.
Ответ: С.
1.4. Содержание обучения.
1.4.1. Граф логические структуры содержания.
Изучение морфологии и тинкториальних свойств споровых форм микроорганизмов путем
микроскопии окрашенного по методу Грама препарата.
Ознакомление с питательными средами для культивирования анаэробов (Китта - Тароцци,
Вильсон - Блера, полужидкий сахарный агар высоким столбиком).
Ознакомление с аппаратурой для выращивания анаэробных микроорганизмов.
1.4.2. Перечень теоретических вопросов.
1. Классификация микрорганизмов по типу дыхания.
2. Сущность процесса дыхания у микроорганизмов.
3. Принципы культивирования анаэробов.
4. Этапы выделения чистых культур споровых и неспоровых анаэробов.
1.4.3. Источники учебной информации.
Литература основная:
1.
К.Д.Пяткин, Ю.С.Кривошеин. Микробиология.- М., 1980. - с.59 - 64.
2.
К.Д.Пяткин, Ю.С.Кривошеин. Микробиология.- М., 1981. - с.59 - 64.
3.
А.И.Коротяев, С.А.Бабичев. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология.,- Санкт
- Петербург. 2002. - с.66 - 72.
4.
И.Л.Дикий, И.Ю.Холупяк, Н.Е.Шевелева, Микробиология.,- Харьков., 1999. - с.57 - 58.
5.
И.Л.Дикий. Микробиология. Руководство к лабораторным занятиям.,- К., 2004. - с.113 - 122.
6.
Л.В.Борисов. Руководство к практическим занятиям по микробиологии. – М., 1980. – с. 52 – 56.
7.
М.Н.Лебедева. Руководство к практическим занятиям по микробиологии- М., 1973. – с. 92-95.
8.
Ю.С. Кривошеин. Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии - М.,
1986. - с.29- 31.
Дополнительная:
1. Словарь по микробиологии, вирусологии, иммунологии и инфекционным заболеваниям. Под ред. Проф.
Г.К.Палия. – К., 2004. – С. 152-291.
1.5.Ориентировочная основа действия (ООД).
19
1.5.1. Изучение морфологии и тинкториальних свойств споровых форм микроорганизмов путем
окрашивания по методу Грама.
1.5.2. Изучение питательных сред для культивирования анаэробных микроорганизмов.
1.5.3. Изучение роста анаэробных микроорганизмов на среде Китта - Тароцци, молоке.
1.5.4. Ознакомиться с работой анаеростата.
1.5.5. Ознакомиться с химическими и биологическими методами культивирования анаэробных
микроорганизмов.
1.7. Короткие методические указания для работы студентов на лабораторном занятии.
1.7.1. Методика проведения занятия.
Уметь выделить чистую культуру анаэробов из смеси микроорганизмов.
Овладеть методами культивирования и идентификации анаэробных микроорганизмов
Ознакомиться с питательными средами и демонстрационными аппаратами для культивирования
анаэробов.
Автор: доцент, к.м.н. Кордон Ю.В.
Методическая разработка
по подготовке и работе на лабораторном занятии №15
для студентов фармацевтического факультета (специальность - клиническая фармация)..
ТЕМА:
Генетика
микроорганизмов.
Трансдукция. Трансформация. Конъюгация.
1.1.
1.2.
1.2.1.
1.2.2.
Основы
генной
инженерии.
Актуальность темы: Рост инфекций обусловлен в значительной степени стойкими к лекарствам
формами бактерий, которые образовались под действием разных факторов.
Цель изучения темы:
Цель общая: Усвоить методы изучения генетической и адаптационной изменчивости микроорганизмов.
Цель конкретная: Изучить формы проявления изменчивости микроорганизмов.
1.3. Обеспечение исходного уровня знаний-умений.
1. Определение понятий: “ген”, “геном”, “генотип”, “фенотип”.
2. Внехромосомний генетический материал (транспозони, плазмиди).
3. Виды модификаций.
1.3.1. Задание.
Пример. Что является материальной основой изменчивости, которая определяет генетические
свойства всех организмов:
1. ДНК;
4. липиды;
2. РНК;
5. гаптени.
3. полисахариды;
Ответ: материальной основой изменчивости, определяющей генетические свойства всех организмов есть
ДНК.
о
о
о
о
о
о
о
о
о
о
о
1.4. Содержание обучения.
1.4.1. Графологической структуры содержания занятия:
Определение морфологии инволюционных форм микроорганизмов.
Изучение с помощью стериомикроскопа S-, R-, M-, D-форм колоний микроорганизмов.
Учет опыта трансдукции.
Учет опыта трансформаций.
Определение резистентности стафилококка к антибиотикам методом стандартных дисков.
Ознакомление с биопрепаратами полученными методом генной инженерии (интерфероны,
ронколейкин).
1.4.2. Перечень теоретических вопросов:
Формы проявления изменчивости микроорганизмов.
Организация генетического аппарата бактерии.
Генетические рекомбинации бактерий: трансформация, трансдукция, кон”югация.
Плазмиди и их характеристики (R-, F-, Col, Tain).
Фенотипическая изменчивость. Значение в микробиологической диагностике инфекционных
20
о
о
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
1.
2.
заболеваний. L-формы бактерий.
Роль мутаций, рекомбинаций, селекции в изменчивости стойких к лекарствам форм бактерий.
Генная инженерия, практическое использование в медицинской микробиологии.
1.4.3. Источники учебной информации:
Основные:
К.Д.Пяткін, Ю.С.Кривошеїн Микробиология К.1982 (укр) с.96-115.
К.Д.Пяткін, Ю.С.Кривошеїн Микробиология М.1980 (росс) с.109-134.
В.Д.Тимаков Микробиология Г. 1983 (росс) с.94-124.
А.И.Коротлев, С.А.Бабич Медицинская микробиология, иммунология и вирусология Санки – Петерб
2002 (росс).
И.Л.Дикий, И.Ю.Холуняк, Н.С.Шевелева, М.Ю.Стегний, Микробиология Харк. 1999(росс), с. 68-76.
Микробиология, Руководство к лабораторным занятиям. Харк. 2002.
О.І.Климнюк, І.О.Ситник, М.С.Творчо, В.П.Широбоков, Практическая микробиология, Терн. 2004 с.111113.
Л.Б.Борисов, Руководство к практическим занятиям по микробиологии Г. 1984 (росс) с.68-75.
М.Н.Лебедева, Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии Г. 1973 (росс), с.
156-161.
Ю.С.Кривошеин, Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии Г. 1986 (росс).
Дополнительные:
Словарь по микробиологии, вирусологии, иммунологии и инфецийним заболеваниям. Заг. ред. проф.
Г.К.Палій, К, 2004.
Гайдаш І.С., Флегонтові В.В., Медицинская вирусология, Луганск 2002 с.59-70.
1.5. Ориентировочная основа действия (ООД).
Изменчивость микроорганизмов деференцируют на ненаследственную (модификационную),
предопределенную неоднородностью условий развития особей одного генотипа, и наследственную, что
создается мутациями и генетическими рекомбинациями.
Ненаследственная изменчивость микроорганизмов возникает под воздействием факторов
окружающей среды и не действует на генетический аппарат – это модификации.
Под воздействием любых факторов внешней среды микроорганизмы могут изменять
морфологические признаки (действие пеницилину вызывает образование L-форм), культуральные
(недостаток кальция в питательной среде влечет образование слизистых колоний у бацилл сибирской
язвы).
Наследственная изменчивость наступает у бактерий при изменении генетических структур. В
реализации генетической информации посредником между ДНК и белком является РНК.
Наследственная изменчивость у бактерий проявляется в виде мутаций и рекомбинаций. Как мутагенные
факторы используют ультрафиолетовое, рентгеновское, Y-излучение, быстрые нейтроны, етиленамин,
диетилсульфат. В результате действия мутагенов получены самые производительные штамы
микроорганизмов, которые применяются в производстве антибиотиков. Метод генетических
рекомбинаций патогенных и непатогенных видов бактерий дает возможность получить высокоиммуногенные вакцинные штаммы.
С помощью генной инженерии появилась возможность приготовления интерферонов,
ронколейкинов и др.
1.6. Система обучающих заданий.
Пример. Установлено, что передача генетической информации происходит в одном направлении:
ДНК – РНК – белок. Существуют другие направления передачи генетической информации:
A. РНК – ДНК – белок;
B. РНК – ДНК – полисахарид;
C. ДНК – РНК – полисахарид;
D. ДНК – липиды – РНК;
E. липиды – ДНК – РНК.
Ответ: A.
1.7.1. Короткие методические указания для работы студентов на лабораторном занятии.
С агаровой культуры, где растут инволюционные формы бактерий приготовить мазок,
зафиксировать, окрасить по методу Грама. Промикроскопировать. Зарисовать.
21
Изучить под стериомикроскопом различные формы колоний микроорганизмов, растущих на
классическом агаре.
Провести учет опыта трансформации и трансдукции. Изучить препараты.
Автор: доцент, доктор мед. наук С.А. Иванова
Методическая разработка
по подготовке и работе на лабораторном занятии для студентов №16
медицинского факультета
Тема: Влияние физических и химических факторов на микроорганизмы. Методы стерилизации.
Актуальность темы. Разнообразные физические и химические факторы способствуют
жизнедеятельности опасных для здоровья человека микроорганизмов или, наоборот, ее подавляют. На
знаниях характера влияния на микроорганизмы химических и физических факторов окружающей среды
основывается вся система мероприятий борьбы с биологическими патогенами.
1.1.
Цели изучения темы.
Цель общая. Овладеть знаниями о влиянии физических и химических факторов на
жизнеспособность опасных для здоровья человека микроорганизмов.
1.2.1. Цель конкретная. Усвоить методы обеззараживания объектов окружающей среды.
1.2.
1.2.1.
1.3.
1)
2)
3)
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
Исходный уровень знаний.
Оптимальные условия для роста и размножения патогенных микроорганизмов.
Влияние на биологические объекты давления, температурного фактора,
концентрации
водородных ионов и электролитов, ионизирующего и УФ облучения, разнообразных химических
веществ.
Способы выживания микроорганизмов в экстремальных условиях окружающей среды.
1.4.2. Перечень теоретических вопросов.
1.4.2.1. Действие физических (температура, давление, лучевая энергия) и химических факторов на
жизнедеятельность микроорганизмов.
1.4.2.2. Определение понятий асептики и антисептики. Дезинфекция и ее место в системе
противомикробных мероприятий.
1.4.2.3. Методы асептики и антисептики.
1.4.2.4. Стерилизация и ее способы.
1.4.2.5. Химические стерильянты, антисептики и дезинфектанты. Классификация по химической
структуре и механизму их действия.
1.4.3. Источники учебной информации.
1.4.3.1. Литература основная.
К.Д. Пяткин, Ю.С. Кривошеин. Микробиология К. 1982 (укр)
К.Д. Пяткин, Ю.С. Кривошеин. Микробиология М. 1980 (рус)
В.Д. Тимаков. Микробиология М. 1983 (рус)
А.И. Коротяев, С.А. Бабич. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология СанктПетербург. 2002 (рус)
И.Л. Дикий, И.Ю. Холупяк, Н.С. Шевелева, М.Ю. Стегний, Микробиология Харьк. 1999 (рус)
Микробиология. Руководство к лабораторным занятиям. Харьк. 2002
О.І. Климнюк І.О. Ситник, М.С. Творко, В.П. Широбоков, Практическаямикробиология. Терн.
2004.
Л.Б. Борисов, Руководство к практическим занятиям по микробиологии М. 1984 (рус)
М.Н. Лебедева. Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии М. 1973
(рус)
Ю.С. Кривошеин. Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии М. 1986
(рус)
22
1.4.
1.4.1. Граф логической структуры смысла.
Влияние на микроорганизмы внешних факторов
Физических
Давление
Атмосферний
Температура
Осмотический
Низкая
Кислоты, щелочи
рН
Высокая
Виживают
Химических
 4,0
Окислители
 10,0
ПАВ
Фенолы
Спирты
Галогенсодержащие
Соли тяжелых
металов
Альдегиды
Губительное влияние
Практическое использование в медицине
Антисептика
Асептика
Дезинфекция
Стерилизация
Очаговая
Профилактическая
Методы
Механическая
Физическая
Химическая
23
1.4.3.2. Дополнительная
Словарь по микробиологии, вирусологии и иммунологии, инфекционным заболеваниям.
Общ. ред, проф., Г.К. Палий. К. 2004.
2.
Гайдаш И.С., Флегонтова В.В. Медицинская вирусология. Луганск. 2002.
3.
Вашков В.И. Средства и методы стерилизации, применяемые в медицине. М.: Медицина.
– 1973.
4.
Жизнь микробов в экстремальных условиях // Под ред. Д Кашнера. – М.: Мир. – 1981.
1.5.
Ориентировочная основа действия.
1.
Исследование
эфективности
способов
обеззараживания
Исследование эфективности
обеззараживания кипячением
тест-обьектов,
инфицированых
вегетативними и споровими
формами бактерий
Исследование
эфективности
обеззараживания обьектов
химическим способом
Подбор
эфективной
концентрации
вещества
Метод серийных
последовательных
розведений препарата в
жидкой питательной
среде
Подбор эфективной
экспозиции
обеззараживання
Метод искусственно
инфицированых
тест-обьектов
1.7. Короткие методические указания для работы студентов на лабораторном занятии.
1.7.1. Методика проведения занятия
1.7.1.1. Изучение действия температуры кипения на вегетативные и споровые формы
микроорганизмов. Изготовляют суспензию суточной культуры кишечной палочки и, отдельно,
суспензию недельной культуры антракоидов. Пробирки с суспензиями прогревают на кипящей
водяной бане на протяжении 3 мин. Выполняют посевы из обеих пробирок на МПА и помещают в
термостат. После 24 час. инкубации оценивают эффективность обеззараживания кипячением.
1.7.1.2. Исследование эффективности обеззараживающего действия химических антисептиков.
Искусственно контаминируют 7 марлевых тест-обьектов путем погружения во взвесь суточной
культуры кишечной палочки на 1-3 мин. Контаминированные тест-обьекты по одному погружают
на 5 мин. в 0,01% и 0,1% растворы хлорамина, карболовой кислоты, декаметоксина и 0,9%
раствор хлорида натрия (контроль). По завершении экспозиции обеззараживания каждые тестобьект переносят в отдельную пробирку с МПБ. Посевы 24 часа инкубируют в термостате.
Оценивают
эффективность
обеззараживающего
действия
каждого
раствора
по
наличию/отсутствию роста.
Автор: профессор, д.м.н. В.П. Ковальчук
МЕТОДИЧЕСКАЯ РАЗРАБОТКА
по подготовке и работе на лабораторном занятии №17
для студентов фармацевтического факультета (специальность - клиническая фармация).
Тема: Антимикробные химиотерапевтические средства. Антибиотики. Методы определения
чувствительности бактерий к антимикробным препаратам.
1.1.
Актуальность темы. Поиск эффективных средств борьбы с возбудителями
инфекционных болезней является самой актуальной задачей медицинской микробиологии.
Современный арсенал средств этиотропного лечения инфекционных болезней исчисляется
сотнями препаратов с разными механизмами и спектром противомикробного действия,
определенными особенностями лечебной эффективности, без знания которых невозможно
предоставить квалифицированную медицинскую помощь. Актуальность темы обостряется
непрерывной адаптацией микроорганизмов к внешним влияниям в борьбе за сохранение видов.
1.2.
Цели изучения темы.
24
Цель общая. Овладеть знаниями принципов этиотропного лечения
заболеваний
микробного происхождения.
1.2.2.
Ознакомиться с современным арсеналом противомикробных лекарственных средств.
Освоить методики определения чувствительности бактерий к противомикробным средствам.
1.3.
Обеспечение исходного уровня знаний-умений.
А. Влияние на микроорганизмы разнообразных химических факторов.
Б. Основные типы взаимоотношений микроорганизмов в природе.
В. Механизмы конкурентных взаимоотношений микроорганизмов в природе.
1.4. Смысл обучения.
1.4.1. Граф логической структуры содержания.
1.2.1.
Химиотерапевтические
средства
Антибиотики
Синтетические химические
соединения
Классификация по химической
структуре
Классификация по механизму
действия
Спектр протимикробного действия
Методы определения
чуствительности микроорганизмов
Методы преодоления резистентности
микроорганизмов и принципи
рациональной химиотерапии
1.4.2. Перечень теоретических вопросов.
1.4.2.1.
Определение
химиотерапии,
химиопрофилактики,
химиотерапевтических
средств
химиотерапевтического индекса.
1.4.2.2. Основные группы химиотерапевтических средств по химической структуре.
1.4.2.3. Антибиотики, классификация по химической структуре и механизму противомикробного действия.
1.4.2.4.
Механизм
формирования
и
распространения
резистентности
микроорганизмов
химиотерапевтическим средствам, пути ее преодоления.
1.4.3. Источники учебной информации.
и
к
25
Основные:
1.
К.Д. Пяткин, Ю.С. Кривошеин. Микробиология К. 1982 (укр.).
2.
К.Д. Пяткин, Ю.С. Кривошеин. Микробиология К. 1980 (рус.).
3.
В.Д. Тимаков. Микробиология Г. 1983 (рус.).
4.
А.И. Коротяев, С.А. Бабич. Медицинская микробиология, імунологіяи вирусология,
Санкт-Петербург, 2002 (рус.).
5.
И.Л. Дикий, И.Ю. Холупяк, Н.С. Шевелева, М.Ю. Стегний. Микробиология, Харк.,
1999 (рус.).
6.
Микробиология. Руководство к лабораторным занятиям. Харьк. 2002
7.
О.И. Климнюк, И.О. Ситник, М.С. Творко, В.П. Широбоков. Практическая
микробиология. Терн., 2004
8.
Л.Б. Борисов. Руководство к практическим по микробиологии, М. 1984 (рус.).
9.
М.Н. Лебедева. Руководство к практическим занятиям по медицинской
микробиологии, М. 1973 (рус.).
10.
Ю.С. Кривошеин. Руководство к практическим занятиям по медицинской
микробиологии, М. 1986 (рус.).
Дополнительные:
1.
Словарь по микробиологии, вирусологии, иммунологии и инфекционным
заболеваниям. Общ. ред., проф., Палий, К, 2004
1.5. Ориентировочная основа действия (ООД).
1.6.
Определение
чуствительности культуры
микроорганизмов к
антибиотикам методом
бумажных дисков.
Измерение зон задержки
роста вокруг стандартных
бумажных дисков
Определение
чуствительности культуры
микроорганизмов к
химиотерапевтическому
средству методом серийных
разведений
Расчет минимальных
бактериологических и
бактерицидных
концентраций препарата
Прогнозирование
возможного
клинического
эффекта
1.7. Короткие методические указания для работы студентов на лабораторном занятии.
1.7.1. Методика проведения занятия.
1.7.1.1. Тестовый контроль исходного уровня знаний и усвоения темы.
1.7.1.2. Обсуждение теоретических вопросов.
1.7.1.3. Освоение метода определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам с помощью
стандартных бумажных дисков. На предварительно подготовленных чашках с МПА, засеянными
культурами микроорганизмами, с размещенными на них бумажными дисками с антибиотиками
проводят измерение зон задержки роста бактерий.
1.7.1.4. Освоение метода последовательных серийных двукратных разведений препарата в жидкой
питательной среде. Пользуясь предварительно подготовленными и засеянными тест-культурами
микроорганизмов штативами с пробирками высчитывают минимальную бактериостатическую
концентрацию исследуемого препарата. С помощью демонстрационных чашек с высевами
пробирок в штативе, в которых визуально незаметен рост, высчитывают минимальную
концентрацию препарата.
1.7.1.5. Оформление протокола лабораторного занятия и подведения итогов.
Автор: профессор, д.м.н. В.П. Ковальчук
Методическая разработка
по подготовке и работе на лабораторном занятии №18
для студентов фармацевтического факультета (специальность - клиническая фармация).
26
Тема: Инфекция. Факторы патогенности микроорганизмов, их определение. Биологический
метод исследования.
1.1. Актуальность темы: учение об инфекции играет важную роль, так как дает
возможность понять, чем обусловлена способность некоторых микроорганизмов вызывать
развитие инфекционного процесса. Существующие знания разрешают разрабатывать препараты
для лечения и профилактики инфекционных болезней, вызванных этими микроорганизмами, а
также совершенствовать диагностические методы их исследования. Знание особенностей развития
и хода инфекционного процесса разрешает грамотно влиять на него, облегчая его ход.
1.2. Цели изучения темы:
1.2.1. Цель общая: Ознакомиться с основными понятиями „инфекция”, „инфекционный
процесс”, „инфекционная болезнь”. Ознакомиться с основными факторами вирулентности
микроорганизмов.
1.2.2. Цель конкретная:
1. Выучить основные факторы патогенности микроорганизмов. Усвоить методы их
лабораторного определения:
а) ферментов патогенности
б) токсинов и др.
2.
Выучить
возможность
использования
в
микробиологической
практике
экспериментального
(биологического)
метода
диагностики.
Овладеть
методикой
внутрибрюшинного заражения экспериментальных животных.
3. Усвоить методику вскрытия и микробиологического исследования трупа лабораторного
животного, которое погибло от экспериментальной инфекции.
1.3. Обеспечение исходного уровня знаний-умений.
1. Формы симбиоза микро- и макроорганизмов.
2. Паразитизм, его характеристика, виды.
3. Специальные питательные среды, их назначение.
4. Капсула бактерий, функции. Метод выявления.
5. Клеточная стенка бактерий, функции. Метод выявления.
6. Пили (фимбрии) бактерий, их биологическая роль.
1.4. Содержание обучения.
1.4.1. Граф логической структуры содержания:
Инфекция
Инфекционный процесс
Инфекционная болезнь
это активное проникновение патогенного
микроорганизма в макроорганизм, следствием
чего является развитие инфекционного
процесса.
это совокупность физиологических, адаптационноприспособительных и патологических
процессов в организме, которые возникают
вследствие заражения.
это крайняя степень инфекционного процесса,
когда вследствие преобладания патологических
реакций над компенсаторными, возникает
нарушение гомеостаза организма человека,
который проявляется характерными
клиническими признаками, биохимическими,
гистологическими и иммунологическими
изменениями.
27
Факторы патогенности микроорганизмов
Свойства патогенного микроорганизма
Факторы патогенности
пили адгезии
капсула
пептидогликан
тейхоевые кислоты
жирные кислоты
А и М белки
Адгезивность и колонизация






Инвазивность
 жгутиками
ферментами инвазии и агрессии
- гиалуронидаза
-лецитиназа
-ДНК-аза и РНК-аза
-фибринолизин
-плазмокоагулаза
-коллагеназа
-гемолизин
Экзо- и эндотоксины
Токсичность
Характеристика микробных токсинов
Экзотоксини
 представленный белком
 имеет специфическое действие на
определенные клетки
 действует в малых концентрациях
 переходит в анатоксин
 термолабильный
Эндотоксини








представленный липополисахаридом
имеет неспецифичное действие
вызывает пирогенную реакцию организма
вызывает эндотоксический шок
повышает проницаемость капилляров
действует в больших концентрациях
не переходит в анатоксин
термостабильный
Механизмы и пути передачи инфекции
Механизмы
Пути
Аэрогенний
Фекально-оральний
Контактный (прямой, через предметы)
Трансмиссивный
Вертикальный
воздушно-капельный
воздушно-пылевой
 алиментарный
 водный




слизистые оболочки
поврежденная кожа
неповрежденная кожа
половой
 укус кровососных насекомых
 парентеральный
через плаценту
28
Признак
По источнику:
По проявлениям:
По количеству возбудителей:
По продолжительности:
Виды и формы инфекции
Виды инфекций
 антропонозные
 зоонозные
 сапронозные
 манифестные
 инапаратнтые
 моноинфекция
 вторичная (оппортунистическая)
 смешаная (микст-инфекция)




острая (до 3 месяцев)
затяжная (до 6 месяцев)
хроническая (>6 месяцев)
персистирующая (года, десятилетия)
По способности вызывать повторные проявления:  реинфекция (тем же возбудителем после
выздоровления)
 суперинфекция (тем же возбудителем к
выздоровлению)
 рецидив (активация инфекции к
выздоровлению)
По происхождению:
По локализации:
По распространению:




экзогенная
эндогенная (аутоинфекция)
местная
генерализованая (бактериемия, вирусемия,
токсинемия, септицемия, септикопиемия,
токсико-септичний шок)




спорадичные
эндемические
эпидемические
пандемические
1.4.2. Перечень теоретических вопросов:
1. Определение понятия „инфекция”, „инфекционный процесс”, „инфекционное» болезнь.
2. Понятие патогенности и вирулентности микроорганизмов.
3. Генетические аспекты патогенности и вирулентности. Единицы вирулентности
микроорганизмов.
4. Факторы вирулентности микроорганизмов.
5. Токсины микроорганизмов, их характеристика и получение.
6. Распространение микроорганизмов и их токсинов в организме человека.
7. Динамика инфекционного заболевания. Этапы.
8. Формы инфекции.
9. Экспериментальный метод диагностики инфекционных болезней. Лабораторные
животные, их использование в диагностике.
1.4.3. Источника учебной информации
29
Основная
1. К.Д. Пяткин, Ю.С.Кривошеин. Микробиология. Г. 1980. -с.135-158.
2. В.Д.Тимаков. Микробиология. Г. 1983 - с.145-156.
3. А.И. Коротяев, С.А.Бабич. Медицинская микробиология, иммунология и
вирусология. Санкт-Петербург, 2002, с- 124-132.
5. И.Л.Дикий, И.Ю.Холупяк. Микробиология. Харьков, 1999. - с.77-85.
6. И.Л.Дикий. Микробиология. Руководство к лабораторным занятиям. Харьков
2002. с.168-176.
7. М.Н. Лебедева. Руководство к практическим занятиям по медицинской
микробиологии. Г. 1973. с. 118-125.
10. Ю.С. Кривошеин. Руководство к практическим занятиям по медицинской
микробиологии. Г.1986. с. 69-79
11. Лекции
Дополнительная
Словарь по микробиологии, вирусологии, иммунологии и инфекционным заболеванием.
Общ. ред., проф. Палия Г.К, К. 2004.
1.5. Ориентировочная основа действия (ОДД)
Этапы экспериментального (биологического) метода диагностики инфекционных
болезни.
1.
Подготовка животных к заражению. Включает такие этапы:
Отбор лабораторного животного
Маркирование
Фиксация.
2. Заражение. При внутрибрюшинном введении материала животных фиксируют головой вниз
для перемещения кишечника к диафрагме. Поверхность разреза обрабатывают дезинфицирующим
раствором.
3. Разрез внешних покровов начинают из продольного разреза кожи от нижней челюсти к лобку.
Кожу отсепарируют. Делают надрезы по направлению к конечностям. Отмечают состояние
подкожной клетчатки и лимфатических узлов. При наличии в них изменений готовят мазкиотпечатки и осуществляют посев на питательные среды.
4. Разрез грудной полости. Всю область разреза обрабатывают дезинфицирующим раствором.
Пинцетом захватывают мечевидний отросток, после чего делают продольные разрезы. Исследуют
состояние органов грудной клетки. (отмечают наличие эксудата, делают посев крови в среду и
мазки-отпечатки из легочной ткани.
5. Разрез брюшной полости. Поднимают пинцетом брюшную стенку, ножницами осуществляют
продольные разрезы от диафрагмы до лобка и 2 поперечных разреза. После этого отворачивают
мышечные лоскуты и исследуют состояние органов брюшной полости. Обращают внимание на
размер, цвет, консистенцию селезенки, печени, надпочечников.
6. После завершения работы трупп животных и инструменты опускают в дезраствор.
Определение экзотоксинов и экзоферментов
Гиалуронидаза
Гидролизует гиалуроновую кислоту, которая
перестает образовывать сгусток при добавлении
уксусной кислоты. Для определения этого
30
фермента в пробирку с субстратом вносят
суточную культуру бактерий, инкубируют 15
мин при 370С. Потом прибавляют 2-3 капли
концентрированной уксусной кислоты. В
пробах, где содержится гиалуронидаза, не
происходит образование сгустка
Определяют при посеве исследуемой культуры
в стерильную цитратную плазму. Посевы
инкубируют при 370С на протяжении 2-5 ч. В
результате происходит образование белков
плазмы, тогда как в контроле она не изменяет
своей консистенции.
Изучают путем посева исследуемой культуры
„бляшками” в чашки Петри с кровяным агаром.
Чашки инкубируют в термостате на протяжении
суток. При положительном результате вокруг
посева образуются прозрачные зоны гемолиза.
Обнаруживают при посеве на агар с лецитином.
Вокруг колоний бактерий, которые выделяют
фермент, образуется зона помутнения с
перламутровым блеском.
Для выявления некоторых бактериальных
токсинов используют культуры клеток, где они
проявляют цитопатическое действие (ЦПД).
Бактериальные
токсины
различают
по
характеру ЦПД, которое может сопровождается
изменением
формы,
размеров
клетки,
появлением
вакуолей
в
цитоплазме,
нарушением целостности клеточного монослоя.
Плазмокоагулаза
Гемолизин
Лецитиназа
Цитотоксины
1.7. Короткие методические указания для работы студентов на лабораторном занятии.
1.7.1. Методика проведения занятия.
1. Провести вскрытие трупа белой мыши, которая погибла от экспериментальной
инфекции: отсепарировать кожу, отметить изменения в подкожной клетчатке, сделать разрез
грудной и брюшной полостей.
2. Сделать посев крови из сердца, кусочков внутренних органов в сахарный МПБ.
3. Сделать мазки-отпечатки из органов, окрасить по Грамму, промикроскопировать.
4. Выучить действие ферментов патогенности бактерий (гемолизы, лецитиназа,
плазмокоагулаза) в демонстрационном опыте.
5. Оформить протокол, сделать выводы.
Автор: доцент, к.м.н.
З.Н.Прокопчук
Методическая разработка
по подготовке и работе на лабораторном занятии №19
для студентов фармацевтического факультета (специальность - клиническая фармация).
Тема: Видовой иммунитет. Исследование факторов неспецифической
организма человека.
резистентности
1.1. Актуальность темы: Сегодня известно, что в процессе эволюции у теплокровных
сформировалась целая система противодействия генетически чужеродным веществам (антигенам),
которые проникают в макроорганизм, или при определенных условиях, возникают в нем.
Поэтому, есть довольно актуальным и необходимым изучение механизмов защиты организма
31
человека от антигенов. Это разрешает достигать значительных результатов в снижении
численности инфекционных заболеваний, сохранении и поддержании здоровья населения
планеты.
1.2. Цели изучения темы:
1.2.1. Цель общая: Ознакомиться с понятием „иммунитет”. Выучить основные виды и
формы иммунитета. Ознакомиться с особенностями видового иммунитета и факторами защиты,
которые его обуславливают.
1.2.2. Цель конкретная:
1. Выучить основные анатомо-физиологические факторы защиты.
2. Овладеть методикой определения титра комплемента по 100% гемолизу. Ознакомиться с
составом и особенностями получения гемолитической (индикаторной) системы.
3. Овладеть методикой определения активности лизоцима в биологических жидкостях
(слюна, слезы и др).
4. Выучить этапы фагоцитоза, как одного из основных механизмов защиты организма
человека. Освоить методику определения уровня фагоцитарной активности (определение
фагоцитарного числа и фагоцитарного индекса).
1.3. Обеспечение исходного уровня знаний-умений.
1. Кожа. Структура. Функции.
2. Соединительная ткань. Структура. Функции.
3. Клетки ретикуло-эндотелиальной системы
4. Фагоцитирующие клетки, их разновидности, функции.
5. Нормальная микрофлора организма человека, ее функции.
1.4. Содержание обучения.
1.4.1. Граф логической структуры содержания:
Иммунитет – целостная система защитно-адаптационных механизмов, с помощью которых организм
распознает и уничтожает все чужеродное, что попадает или возникает в нем.
Виды иммунитета:
Видовой
Врожденный
Плацентарный
Приобретенный
Естественный:
Искусственный:
Активный
Активный
Пассивный
Пассивный
Неспецифичные факторы защиты
Анатомо-физиологические
Клеточные
Гуморальные
1.Белки системы комплемента
(С)
2.Белки системы пропердина (Р)
3.Цитокины
► провоспалительные (выделяют
лимфоциты) – ИЛ-1,ИЛ-6, ИЛлимфатических узлов
-мигрирующие (моноциты)
8, фактор некроза опухолей,
Выделительная функция почек-фиксированные (кл. Купфера,
интерфероны: α-интерфероны
Нормальная микрофлора
альвеолярные гистиоциты, кл.
(лейкоциты), β-интерфероны
организма человека
микроглии, остеокласты
(фибробласты), γ-интерфероны
Лихорадка
и т.п.)
(лимфоциты).
Воспаление
Микрофаги
► противовоспалительные –
-нейтрофилы
► ИЛ-4, ИЛ-10, ИЛ-13,
► Кожа
1.Фагоциты
► Слизистые оболочки (верхние Функции:
дыхательные пути, ЖКТ,
► защитная
мочеполовая система,
► презентующая
конъюнктива глазу)
► секреторная
► Барьерная функция
Макрофаги
►
►
►
►
32
трансформирующий ростовой
фактор.
4.Лизоцим (фагоциты)
5.Лактоферин (лейкоциты)
6.Трансферин (гепатоциты)
7.Фибронектин (макрофаги,
фибробласты)
8.Низкомолекулярные вещества и
ионы - ионы галогенов, ионы
водорода, жирные кислоты,
фактор активации тромбоцитов
-эозинофилы
2.NK-клетки (нормальные
киллеры)
1.4.2. Перечень теоретических вопросов:
1. Понятие об иммунитете.
2. Виды иммунитета.
3. Неспецифичные факторы защиты.
4. Анатомо-физиологические факторы неспецифичной защиты.
5. Клеточные факторы неспецифичной защиты. Виды фагоцитирующих клеток.
6. Фагоцитоз, его роль в иммунитете. Этапы фагоцитоза.
7. Неспецифичные гуморальные факторы защиты: комплемент, лизоцим, лизины и др.
1.4.3. Источники учебной информации
Основная
1. К.Д. Пяткин, Ю.С.Кривошеин. Микробиология. Г. 1980. -с.163-169.
2. В.Д.Тимаков. Микробиология. Г. 1983 - с.171-175.
3. А.И. Коротяев, С.А.Бабич. Медицинская микробиология, иммунология и
вирусология. Санкт-Петербург, 2002, с. - 152-163.
4. И.Л.Дикий, И.Ю.Холупяк. Микробиология. Харьков, 1999. - с.86-89.
5. И.Л.Дикий. Микробиология. Руководство к лабораторным занятиям. Харьков
2002. с.163-167.
6.
М.Н. Лебедева. Руководство к практическим занятиям по медицинской
микробиологии. Г. 1973. с. 128.
7. Ю.С. Кривошеин. Руководство к практическим занятиям по медицинской
микробиологии. Г.1986. с. 48
11. Лекции
Дополнительная
Словарь по микробиологии, вирусологии, иммунологии и инфекционным заболеванием.
Общ.. ред. проф. Палий Г.К., К. 2004.
1.5. Ориентировочная основа действия (ОДД)
Схема определения титра комплемента по 100% гемолизу
Пробирки
Компоненты
Исследуемая
Сыворотка (1:10)
Физиологический
Раствор
Гемолитическая
система
Эритроциты барана
Гемолитическая
Сыворотка
Контроль
1
2
3
4
5
6
7
8
0,1
0,2
0,3
0,4
0,5
0,6
0,7
0,8
0,8
0,9
0,8
0,7
0,6
0,5
0,4
0,3
0,2
0,2
1,5
0,5
0,5
0,5
0,5
0,5
0,5
0,5
0,5
0,5
0,5
33
Схема определения действия лизоцима
Пробирки
Компоненты
Раствор яичного белка (1:25)
1
2
1
-
1
1
-
1
Взвесь культуры Micrococcus lysodeicticus
Физиологический раствор
Методика определения фагоцитарной активности
1)
2)
3)
Метод основан на поглощении (фагоцитировании) микроорганизмов лейкоцитами при их
контакте в оптимальных условиях с суточной культурой исследуемого микроба.
В пробирке смешивают гепарин, исследуемую кровь и взвесь E. coli. Инкубируют 30 мин
при 370С. Из смеси готовят мазки-препараты, фиксируют метанолом и красят по РомановськиомуГимзе.
Результаты учитывают, определяя:
активность фагоцитоза - фагоцитарный индекс - число фагоцитирующих клеток,
относительно общего числа нейтрофилов;
интенсивность фагоцитоза - фагоцитарное число - среднее число
микроорганизмов, поглощенная одним нейтрофильным лейкоцитом;
завершенность фагоцитоза - индекс переваривания - отношение числа погибших
микробных клеток к жизнеспособным в мазке-препарате.
Короткие методические указания для работы студентов на лабораторном занятии.
1.7.1. Методика проведения занятия.
1. Определить в демонстрационном опыте активность лизоцима яичного белка,
поставленного по методике описанной выше.
2. Определить титр комплемента в сыворотке крови здорового человека.
3. В демонстрационных мазках-препаратах определить показатели активности фагоцитоза:
а) фагоцитарный индекс;
б) фагоцитарное число.
4. Оформить протокол, сделать выводы.
Автор: доцент, к.м.н.
З.М.Прокопчук
Методическая разработка
по подготовке и работе на лабораторном занятии №20
для студентов фармацевтического факультета (специальность - клиническая фармация)..
34
Тема: Приобретенный иммунитет. Антигены. Антитела. Серологические реакции. Реакция
агглютинации.
1.1.
Актуальность темы.
Обусловлена широким использованием реакции агглютинаци в диагностике инфекционных
заболеваний.
1.2. Цели изучения темы.
1.2.1. Цель общая.
Понять биологическую суть иммунитета как механизма, поддерживающего антигенный статус
организма.
1.2.2. Цель конкретная.
Студент должен уметь ставить и оценивать результаты ориентирочной и развернутой реакции
агглютинации.
1.3. Обеспечение исходного уровня знаний-умений:
1. Иммунная система, ее строение.
2. Неспецифические и специфические факторы резистентности организма.
3. Механизмы иммунитета.
1.3. Тесты на исходному уровеню знаний-умений:
1.3.1. Какие органы иммунной системы относятся к центральным:
A – вилочковая железа
B – костный мозг
C – селезенка
D – лимфатические узлы
E – печень
Правильный ответ: А, B
1.4. Содержание занятия.
Реакция агглютинации (РА) является иммунологической реакцией, которая роявляется в
склеивании и выпадении в осадок корпускулярних антигенов (бактерии, эритроциты). Характер и
скорость проходжения реакции зависит от антигенного строения бактерий. Мелкозернистая Оагглютинацию дают бактерии, лишенные жгутиков. При наличии жгутиков (Н-агглютинация)
проявляется в оброзовании крупнохлопчатого осадка, РА достаточно специфичная и
чувствительная. Она широко применяется в практике серологической диагностики инфекционных
болезней для идентификации выделенного возбудителя с применением известных стандартных
видовых, типовых агглютинирующих сывороток, а также для выявления в сыворотке больных
агглютининов с помощью известных бактерий (диагностикумов).
В практике диагностики инфекционных болезней применяют также непрямую (писсивную)
гемагглютинацию-РНГА (РПГА), включающуюся в использовании эритроцитов, поверхности
которых адсорируется антиген.
1.4.1. Граф логической структуры содержания.
Использование РА в диагностике инфекционных заболеваний:
1. Идентификация возбудителя.
Исследуемый материал – выделенная чистая культура бактерий.
Постановка РА бактерий на стекле со специфическим агглютинирующими видовыми и типовыми
сыворотками.
Конечный результат через 10-15 мин.
2. Определение титра антител в сыворотке больного.
Исследуемый материал – сыворотка крови больного.
Постановка развернутой РА с сывороткой больного в разведениях 1:50-1:1600 со специфическими
диагностикумами.
35
Конечный результат через 18-20 час.
1.4.2. Перечень теоретических вопросов:
1. Определение понятия „иммунитет”.
2. Антигены, общая характеристика, детерминантные группы.
3. Антигенная структура бактериальной клетки.
4. Антитела, общая характеристика, химическихая природа.
5. Классы иммуноглобулинов, строение и функции.
6. Серологические реакции и феномены, лежащие в их основе.
7. Реакция агглютинаци (РА), ее механизм.
8. Агглютиногены, агглютинины, их свойства.
9. Реакция пассивной гемагглютинации (РПГА), ее механизмы.
10. Методические варианты, техника постановки, диагностическое значение РА и РПГА.
1.4.3. Источники учебной информации.
Основная литература:
К.Д.Пяткін, Ю.С.Кривошеїн. Мікробіологія, 1982, с.145-157, 172-177
К.Д.Пяткин, Ю.С.Кривошеин. Микробиология, 1980, с.169-181, 195-197
В.Д.Тимаков. Микробиология, 1983, с.180-184, 188-192, 218-222
А.И.Коротяев, С.А.Бабич. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология, СанктПетергбург, 2002, с.151-161, 163-171, 176-181, 229-232
О.І.Клименюк, І.О.Ситник, М.С.Творко, В.П.Широбоків. Практична мікробіологія, 2004, с.126-136
И.Л.Дикий, И.Ю.Халупяк, Н.Е.Шевелева, М.Ю.Стогний. Микробиология, Харьков, 1999, с.85-86,
89-93, 94-96, 112-114
Л.Б.Борисов. Руководство к практическим занятиям по микробиологии, М., 1984, с.107-112
М.Н.Лебедева. Руководство к практическим занятиям по медицин ской микробиологии, М., 1973,
с.136-143
Дополнительная литература:
Словник по мікробіології, вірусології, імунології та інфекційним захворюванням. Заг. ред. проф.
Палій, К., 2004.
1.5. Ориентировочная основа действий (ООД)
Использование РА в диагностике инфекционных болезней:
Исследуемый материал
Чистая культура возбудителя
Сыворотка крови больного
РА на стекле со специфическими
видовыми, типовыми,
агглютинирующими сыворотками
Развернутая РА с разведениями
сыворотки больного 1:50-1:1600 со
специфическими диагностикумами
Конечный результат
через 10-15 мин.
Конечный результат
через 18-20 час.
1.6. Система обучающих заданий.
1.6.1. Укажите компоненты, необходимые для постановки развернутой реакции агглютинации:
A – сыворотки крови больного
36
B – физиологический раствор
C – чистая культура бактерий
D – известная иммунная неадсорбированная сыворотка
E – взвесь эритроцитов
F – диагностикум
G – комплемент
Правильный ответ: А, B, F
1.7. Методичкие указания для работы студентов на лабораторном занятии.
1.7.1. Методика проведения занятия.
Реакция агглютинации (РА) широко используется в лабораторной диагностике инфекционных
заболеваний. Ее применяют как для идентификации возбудителя с помощью диагностических
агглютинирующих сывороток, так и для определения антител в сыворотке крови больного по
известным антигенам (диагностикумам).
С целью идентификации бактерий ставят ориентировочную реакцию агглютинации на стекле. Для
этого в каплю диагностической агглютинирующей сыворотки вносят петлей выделенную
культуру и перемешивают. Сопроводжается РА контролем – в каплю физраствора добавляют
выделенную бактериальную культуру. Наблюдают за появлением зерен агглютината в опыте, в
контроле – помутнения.
Для выявления антител в сыворотке больного к ее разведениям (1:50-1:1600) добавляют известный
диагностикум и помещают в термостат (37оС) на 18-24 часа. Затем определяют титр антител по
появлению зерен или хлопьев агглютината в разведениях сыворотки, в контроле диагностикума –
равномерное помутнение, в контроле сыворотки – жидкость прозрачная.
Наиболее специфическая реакция пассивной гемагглютинации (РПГА) широко применяется для
выявления специфических антител в сыворотке крови больного при вирусных и других
инфекционных заболеваниях. Для этого используют стандартный эритроцитарный диагностикум,
добавляемый к разведениям сыворотке больного в лунки планшета. Инкубируют в термостате
(37оС) и производят первичный учет через 2 часа, окончательный – через 18-20 часа.
Положительная РПГА выражается в появлении на дне лунок крыхлого осадка в виде зонтика,
отрицательная – осадок в виде компактного диска с ровными краями.
Порядок выполнения лабораторной работы:
1. Поставить и учесть результат ориентировочной реакции агглютинации на стекле с целью
идентификации выделенной культуры бактерий.
2.
Поставить развернутую реакцию агглютинации с целью серологической диагностики
инфекционного заболевания.
3. Учесть реакцию пассивной гемагглютинации в демонстрационном опыте.
4. Ознакомиться с биопрепаратами для РА и РПГА.
Автор: ассистент, к.м.н. Колодий С.А.
Методическая разработка
по подготовке и работе на лабораторном занятии №21
для студентов фармацевтического факультета (специальность - клиническая фармация)..
Тема: Серологические реакции. Реакция преципитации.
1.2.
Актуальность темы.
Обусловлена высокой чувстивительностью реакции преципитации и широким испотльзованием ее
в медицине и биологии.
1.2. Цели изучения темы.
1.2.1. Цель общая.
37
Освоить принцип и назначение реакции преципитации.
1.2.2. Цель конкретная.
Овладеть техникой постановки реакции кольцепреципитации и уметь использовать ее для
диагностики инфекционных болезней.
1.3. Обеспечение исходного уровня знаний-умений:
1. Полноценные и неполноценные антигены (гаптены, полугаптены).
2. Корпускулярные и растворимые антигены.
3. Принцип взаимодействия антигенов и антител.
1.3. Тесты на исходный уровень знаний-умений:
1.3.1. Назовите основные свойства и признаки полноценного антигена:
A – белок
B – углеводы
C – является низкомолекулярным соединением
D – не растворим в жидкостях организма
E – вызывает образование антител в организме
F – не способен вступать в реакцию со специфическими антителами
G – растворим в жидкостях организма
H – имеет коллоидную структуру
Правильный ответ: A, E, G, H
1.4. Содержание занятия.
Реакция преципитации (РП) состоит в осаждении (преципитации) антигена (преципитиногена),
находящегося в дисперстном коллоидном состоянии под воздействием специфических антител
(преципитинов) в растворе электролита. РП применяется для диагностики инфекционных
заболеваний (сибирская язва, туляремия), в судебно-медицинской экспертизе для определения
видовой принадлежности белка (кровь, сперма) и в санитарной практике для определения
фальсификации продуктов. РП обладает высокой специфичностью и чувствительностью.
Преципитигеногеном могут быть белки животного, растительного и микробного происхождения,
фильтраты культур бактерий или тканей, пораженных ими. РП ставят в различных модификациях:
кольцепреципитации, в геле, для тонких иммунологических исследований применяется
иммуноэлектрофорез, основанный на разделении антигенного комплекса в электрическом поле в
присутствии специфических иммунных сывороток.
1.4.1. Граф логической структуры РП.
Материал для исследования: коллоидный растворимый антиген, экстрагированный из
патологического материала РП ставится в узких пробирках со специфической преципитирующей
сывороткой путем наслаивания.
Конечный результат через 1-2 мин.
1.4.2. Перечень теоретических вопросов:
1. Гаптены, их свойства.
2. Характеристика преципитиногенов и преципитинов.
3. Механизм взаимодействия преципитиногенов и преципитинов, их получение и использование.
4. Методические варианты РП: кольцепреципитации, РП в геле, иммуноэлектрофорез (РИЭФ).
5. Практическое использование РП в медицине и биологии.
1.4.3. Источники учебной информации.
Основная литература:
К.Д.Пяткін, Ю.С.Кривошеїн. Мікробіологія, 1992, с.177-178
К.Д.Пяткин, Ю.С.Кривошеин. Микробиология, 1980, с.197-200
В.Д.Тимаков. Микробиология, 1983, с.220-221
А.И.Коротяев, С.А.Бабич. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология, СанктПетергбург, 2002, с.232-233
38
И.Л.Дикий, И.Ю.Халупяк, Н.Е.Шевелева, М.Ю.Стегний. Микробиология, Харьков, 1999, с.114115
О.І.Клименюк, І.О.Ситник, М.С.Творко, В.П.Широбоків. Практична мікробіологія, 2004, с.137-141
Л.Б.Борисов. Руководство к практическим занятиям по микробиологии, М., 1984, с.112-118
М.Н.Лебедева. Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии, М., 1973,
с.102-106
Ю.С.Кривошеин. Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии и
диагностике инфекционных болезней, 1986, с.31-32
Дополнительная литература:
Словник по мікробіології, вірусології, імунології та інфекційним захворюванням. Заг. ред. проф.
Палій Г.К., 2004, с.107
1.5. Ориентировочная основа действий (ООД)
Использование РП в диагностике инфекционных заболеваний, санитарии, судмедэкспертизе:
Исследуемый материал
Экстракт из возбудителей, вытяжка из
инфицированных органов, стенномозговая жидкость больных, смыв
кровяных пятен, пищевые продукты
Культуры возбудителей,
продуцирующие экзотоксин
РП кольцепреципитации с
специфическими сывовотками
РП в геле, иммуноэлекрофорез
Конечный результат
через 5-10 мин.
Конечный результат
через 18-20 час.
1.6. Система обучающих заданий.
1.6.1. Укажите основные свойства и признаки преципитиногена:
A – являются гаптеном
B – являются микробной клеткой
C – является полноценным антигеном
D – является экзотоксином
E – является экстрактом бактерій
Правильный ответ: A, D, E
1.7. Методические указания для работы студентов на лабораторном занятии.
1.7.1. Методика проведения занятия.
Реакция преципитации (РП) высокоспецифичная и чувствительна. Используют для выявления
антигенов в исследуемом материале. РП применяют в микробиологии, санитарии и гигиене,
судебной медицине для выявления антигенов в исследуемом материале. В микробиологии РП
наиболее часто проводится с прозрачными коллоидными растворимыми антигенами,
экстраперованными из патологического материала, чистых культур бактерий. В реакции
используют диагностические преципитирующие сыворотки. Варианты постановки РП:
кольцепреципитации, в геле (агаре), иммуноэлектрофорез (ИЭФ).
При постановке РП кольцепреципитации используют диагностические преципитирующие
сыворотки, к которым осторожно по стенке пробирки наслаивают исследуемый раствор антигена.
Учет реакции проводится через 1-2 мин. Положительный результат выражается в появлении
преципитации в виде белого кольца на границе между сывороткой и исследуемым антигеном.
39
РП в геле ставят используя лунки, вырезанные в агаре: в центральную вносят диагностическую
сыворотку, в периферические – исследуемый материал. Положительный результат проявляется в
виде тонких мутных линий.
Иммуноэлектрофорез проводится в 2 этапа: I – электрофоретическое разделение исследуемого
материала в агаре; II – иммунологический анализ. В агаре вырезают траншеи, в которые вносят
иммунную сыворотку, содержащую антитела к исследуемым антигеном, в лунки – исследуемый
материал. В случае положительной реакции формируется преципитат в виде тонких дуг.
Порядок выполнения лабораторной работы:
1. Поставить реакцию кольцепреципитации для выявления термопреципитиногена возбудителя в
исследуемом материале с помощью известной диагностической сыворотки.
2. Познакомиться с методикой постановки и результатами РП в геле в демонстрационном опыте.
Автор: ассистент, к.м.н. Колодий С.А.
Методическая разработка
по подготовке и работе на лабораторном занятии №22
для студентов фармацевтического факультета (специальность - клиническая фармация)..
Тема: Серологические реакции. Реакция связывания комплемента.
1.3.
Актуальность темы.
Реакция связывания комплемента (РСК), являясь высоко специфической, широко используется в
диагностике спирохетозов, риккетсиозов, микоплазмозов, вирусных и других инфекционных
заболеваний.
1.2. Цели изучения темы.
1.2.1. Цель общая.
Уметь использовать РСК для диагностики инфекционных заболеваний.
1.2.2. Цель конкретная.
1. Освоить механизм РСК.
2. Овладеть техникой постановки и учетом РСК для серодиагностики инфекционных заболеваний.
1.3. Обеспечение исходного уровня знаний-умений:
1. Принцип и механизмы реакций иммунитета.
2. Специфические реакции организма на антиген.
3. Иммунохимические основы взаимодействия антител с антигенами.
1.3. Тесты на исходный уровень знаний-умений:
1.3.1. Взаимодействие антител с антигенами характеризуются:
A – быстрым соединением детерминантных групп
B – медленным соединением детерминантных групп
C – обратимостью реакции и легкостью элюции
D – необратимостью реакции и трудностью элюции
E – виделением небольшого количества энергии
Правильный ответ: В, C, E
1.4. Содержание занятия.
Реакция связывания комплемента (РСК) состоит их 2 систем: антиген + антитело + комплемент (І
система), взвесь эритроцитов + гемолитическая система (ІІ система). Протекает в 2 фазы: Іспецифическая – обусловливает связывание комплемента в случае соответствия антител и
антигена, при несоответствии – антиген остается свободным. При введении в опыт II
индикаторной системы гемолиз произойдет только при наличии свободного комплемента (реакция
40
отрицательная). В случае, если комплемента адсорбировался на системе антиген-антитело,
гемолизе не будет (реакция положительная).
РСК высоко чувствительна и специфична, применяют в диагностике бактериальных,
риккетсиозных, вирусных и микоплазменных заболеваний.
1.4.1. Граф логической структуры РСК.
Материал для исследования: сыворотка крови больного.
Постановка РСК с сывороткой крови больного и специфическим диагностикумом, используя
индикаторную гемолитическую систему.
1.4.2. Перечень теоретических вопросов:
1. Характеристика антигенов в РСК.
2. Характеристика комплементсвязывающих антител.
3. Природа комплемента.
4. Участие комплемента в реакциях иммунитета.
5. Гемолитическая система, ее роль в РСК.
6. Механизм, техника постановки и учет результатов РСК.
7. Практическое использование РСК.
1.4.3. Источники учебной информации.
Основная литература:
К.Д.Пяткін, Ю.С.Кривошеїн. Мікробіологія, 1992, с.180
К.Д.Пяткин, Ю.С.Кривошеин. Микробиология, 1980, с.173-181, 200-202
В.Д.Тимаков. Микробиология, 1983, с. 188-189, 200-202
А.И.Коротяев, С.А.Бабич. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология, СанктПетергбург, 2002, с.234-235
И.Л.Дикий, И.Ю.Халупяк, Н.Е.Шевелева, М.Ю.Стегний. Микробиология, Харьков, 1999, с.116
О.І.Клименюк, І.О.Ситник, М.С.Творко, В.П.Широбоків. Практична мікробіологія, 2004, с.141-145
Л.Б.Борисов. Руководство к практическим занятиям по микробиологии, М., 1984, с.118-122
М.Н.Лебедева. Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии, М., 1973,
с.143-152
Ю.С.Кривошеин. Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии и
диагностике инфекционных болезней, 1986, с.47-55
Дополнительная литература:
Словник по мікробіології, вірусології, імунології та інфекційним захворюванням. Заг. ред. проф.
Палій Г.К., 2004, с.105-106, 248
1.5. Ориентировочная основа действий (ООД)
Использование РСК в диагностике инфекционных заболеваний:
Материал для исследования
Сыворотка крови
Метод исследования
41
Серологический
РСК
Конечный результат
через 18-24 час.
1.6. Система обучающих заданий.
1.6.1. Укажите ингредиенты, необходимые для постановки РСК:
A – дистилированная вода
B – физиологический раствор
C – комплемент
D – сыворотка крови больного
E – чистая культура возбудителя
F – токсины бактерий
G – гемолитическая система
H – диагностикум
Правильный ответ: В, C, D, G, H
1.7. Короткие методические указания для работы студентов на лабораторном занятии.
1.7.1. Методика проведения занятия.
Постановка РСК с целью выявления антител в сыворотке больного с помощью оттитрованных
антигена и компонента в рабочих дозах. Опыт сопровождается 2 контролями – сыворотки
(физраствор, сыворотка, комплемент) и антигена (физраствор, антиген, комплемент).
Одновременно готовится индикаторная система. Обе системы выдерживаются в термостате
40минут, после чего к основному опыту и контролям добавляется индикаторная система.
Повторно реакция выдерживается в термостате до появления гемолиза в контролях. РСК считается
положительной при задержке гемолиза в опытной пробирке.
Автор: ассистент, к.м.н. Колодий С.А.
Методическая разработка
по подготовке и работе на лабораторном занятии №23
для студентов фармацевтического факультета (специальность - клиническая фармация)..
Тема: Реакции с использоанием меченых антигенов и антител.
1.4.
Актуальность темы.
Широкое использование иммунофлюоресцентного, радиоиммунного и иммуноферментного
методов обусловлена высокой чувствительностью, возможностью выявления широкого круга
биологических веществ.
1.2. Цели изучения темы.
1.2.1. Цель общая.
Освоть принципы, механизмы и назначение иммунофлюоресцентного, радиоиммунного и
иммуноферментного методов в диагностике.
1.2.2. Цель конкретная.
42
Оволадеть техникой постановки иммуноферментного метода (ИФА). Уметь интерпретировать
результаты иммунофлюоресцентного прямого и непрямого метода, а также ИФА.
1.3. Обеспечение исходного уровня знаний-умений:
1. Корпускулярные и растворимые антигены.
2. Принципы серологической диагностики инфекционных заболеваний.
3. Серологическая идентификация возбудителей, как один из основных методов исследования
микроорганизмов.
1.3. Тесты на исходный уровень знаний-умений:
1.3.1. Назовите специфические и неспецифические факторы гуморального иммунитета:
A – эритрин
B – С-реактивный белок
C – тромбоцитоактивирующий фактор
D – интерлейкины
E – гаммаглобулины
F – лейкоциты
G – простогландины
Правильный ответ A, B, C, D, E, G.
1.4. Содержание занятия.
Реакции, в которых участвуют меченые антигены или антитела (иммунофлюоресценции,
радиоиммунный и иммуноферментный методы) по своей чувствительности превосходят все
серологические реакции.
Реакция иммунофлюоресценции Кунса (РИФ) позволяет обнаружить микробные антигены в
патологическом материале с помощью меченых флюорохромами диагностических сывороток. При
наличии специфических антигенов диагностической сыворотки в люминисцентном микроскопе
выявляют свечение (прямой метод).
В непрямом методе вначале антиген связывают с обычным антителом, а затем этот комплекс
обрабатывают меченым антиглобулином, который соединяется с ним. Образующийся комплекс
легко обнаруживают по свечению в люминисцентном микроскопе.
В радиоиммунном методе (РИМ) используют очищенные и концентрированные антигены и
антитела, меченные радиоизотопом. РИМ применяется для выявления как антигенов, так и
антител. Для выявления антител к исследуемой сыворотке добавляют определенное количество
меченого антигена. Для выявления антигена к исследуемому материалу добавляют
специфическую диагностическую сыворотку, а затем – гомологичный меченый антиген. Если
меченый антиген остается свободным – реакция положительная.
Иммуноферментный метод (ИФМ) используется выявления антигенов и антител с применением
твердофазных носителей (полистероловые и поливиниловые пластины). Для выявления антител
используют пластины, на дне которых находятся фиксированные антигены и добавляют
исследуемую сыворотку. Затем (после промывки буфером) обрабатывают антисывороткой
(антиглобуменом), меченой ферментом. Для выявления фермента используют Н2О2 и индикатора.
ИФМ находит широкое применение при вирусных инфекционных заболеваниях.
1.4.1. Граф логической структуры реакции иммунофлюоресценции (РИФ).
Исследуемый материал: патологический материал, содержащий бактериальные или вирусные
антигены.
Постановка
прямой
РИФ
(метод
Кунса)
с
диагностическими
специфическими
флюоресцирующими сыворотками.
Постановка
непрямой
РИФ
сопровождается
использованием
флюоресцирующей
антиглобулиновой сыворотки, содержащей антитела только против кроличьих глобулинов.
2. Граф логической структуры иммуноферментного метода (ИФМ).
Постановка ИФМ с целью выявления антигенов или антител с использованием пластиковых
(полистироловых) панелей с адсорбиванными на дне лунок антител или антигенев.
43
1.4.2. Перечень теоретических вопросов:
1. Иммунофлюоресцентный метод, феномены, лежащие в его основе.
2. Методические варианты реакции иммунофлюоресценции (РИФ): прямой и непрямой методы
Кунса.
3. Техника постановки и диагностическое использование РИФ.
4. Радиоиммунологический анализ (РИА), его принцип и назначение.
5. Иммуноферментный анализ (ИФА). Твердофазный иммуноферментный метод. Его принцип и
механизм взаимодействия ингредиентов.
6. Иммуноблотинг. Этапы иследования.
7. Использование ИФА и иммуноблотинга в диагностике инфекционных заболеваний.
1.4.3. Источники учебной информации.
Основная литература:
К.Д.Пяткін, Ю.С.Кривошеїн. Мікробіологія, 1982, с.182
К.Д.Пяткин, Ю.С.Кривошеин. Микробиология, 1980, с.204
В.Д.Тимаков. Микробиология, 1983, с.223-225
А.И.Коротяев, С.А.Бабич. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология, СанктПетергбург, 2002, с.233
И.Л.Дикий, И.Ю.Халупяк, Н.Е.Шевелева, М.Ю.Стегний. Микробиология, Харьков, 1999, с.116118
О.І.Клименюк, І.О.Ситник, М.С.Творко, В.П.Широбоків. Практична мікробіологія, Тернопіль,
2004, с.145-146
Л.Б.Борисов. Руководство к практическим занятиям по микробиологии, М., 1984, с.112-115
Ю.С.Кривошеин. Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии и
диагностике инфекционных болезней, 1986
Дополнительная литература:
Словник по мікробіології, вірусології, імунології та інфекційним захворюванням. Заг. ред. проф.
Палій Г.К., 2004, с.59-60, 119
Посібник з медичної вірусології. Заг. ред. В.М.Гиріна, К., 1995, с.99-110
1.5. Ориентировочная основа действий (ООД)
1. Использование ИФМ для обнаружения антигенов и антител:
Выявление антител
Антиген (АГ) + Антитела (АТ)
(сыворотка больного)
АГ + АТ
+ Антиглобулиновая сыворотка с ферментом (АГСФ)
АГ + АТ + АГСФ
+ Н2О2 + ортофенилдиамин (ОФД)
окончательный ответ
Выявление антигенов
Антитела (АТ) + Антиген (АГ)
(исследуемый материал)
+ Антиглобулиновая сыворткатка с ферментом (АГСФ)
44
АТ + АГ
АТ + АГ + АГСФ
+ Н2О2 + ортофенилдиамин (ОФД)
окнчательный ответ
2. Использование иммунофлюоресценции в диагностике инфекционных заболеваний:
Прямой метод (метод Кунса)
Антиген
(АГ)
+
Антитела (АТ)
(специфические
флюоресцирующие)
АГ + АТ
Светящийся
комплекс
Непрямой метод
Антигены (АГ) + Антитела (АТ)
АГ + АТ
+ Антиглобулиновая сыворотка (АГС)
АГ + АТ + АГС
+ Светящийся комплекс
1.6. Система обучающиих заданий.
1.6.1. Широкое распространение в вирусологических исследованиях получил ИФА. С какой
целью в диагностике вирусных инфекций используется ИФА:
A – для выявления специфических антигенов
B – для выявления специфических антител
C – для определения титра антител
D – для выделения вируса
E – для определения агрегированных иммунной сывороткой вирионов
Прывильный ответ А, В
1.7. Короткие методические указания для работы студентов на лабораторном занятии.
1.7.1. Методика проведения занятия.
Ознайомится с принципом постановки метода иммунноферметного анализа с целью выявления
специфических антител в сыворотке крови больного. В лунки планшета с адсорбированным на дне
антигеном вносят по 1 капле исследуемой сыворотки и помещают в термостат (37оС). Затем
промывают буферным раствором и вносят по 1 капле меченые ферментом (пероксидазой хрена)
антивидовые (антиглобулиновые сыворотки. Планшеты помещают в термостат (37оС). Промывают
лунки буферным раствором и вносят по 1 капле перекись водорода и ортофенилдиамин (ОФД).
Помещают в термостот до появления желтого окрашивания в лунке с контрольной позитивной
сывороткой.
Автор: ассистент, к.м.н. Колодий С.А.
45
Методическая разработка
по подготовке и работе на лабораторном занятии №25
для студентов фармацевтического факультета (специальность - клиническая фармация).
Тема: Специфическая профилактика и терапия инфекционных заболеваний. Вакцины и
анатоксины.
1.1. Актуальность темы: иммунопрофилактика и иммунотерапия находят широкое
применение в разных сферах медицины. В первую очередь в профилактике и лечении
инфекционных болезней, аллергий, иммунопатологических состояний, в онкологии,
трансплантологии, при первичных и вторичных иммунодефицитах. Иногда это единственный или
основной способ, среди других медицинских влияний, для предупреждения и лечение болезней.
Для этого используют существующие и разрабатывают новые, современные препараты, которые
объединяют в группу - иммунобиологических. Одними из них являются вакцины и анатоксины,
применение которых направлено на создание искусственного активного иммунитета.
1.2. Цели изучения темы:
1.2.1. Цель общая: ознакомиться с основными группами вакцинных препаратов и
возможностями их применения с целью профилактики и лечение инфекционных болезней.
1.2.2. Цель конкретная:
1. Выучить основные группы вакцин, способы их получения, примеры и практическое
применение.
2. Овладеть методикой изготовления инактивированной нагреванием аутовакцины.
3. Ознакомиться с существующим в Украине календарем прививок, перечнем вакцинных
препаратов, сроками вакцинаций и ревакцинаций.
1.3. Обеспечение исходного уровня знаний-умений.
1. Иммунитет, виды и формы иммунитета.
2. Антигены, структура, функции. Антигенное строение микроорганизмов.
3. Антитела, структура, функции.
4. Классы иммуноглобулинов.
5. Виды иммунного ответа. Первичный, вторичный иммунный ответ.
1.4. Содержание обучения.
1.4.1. Граф логической структуры содержания:
Виды вакцин
Виды вакцин
Примеры
Живые
БЦЖ, чумная, туляремийная, СТИ,
бруцеллезная, полиомиелитнач, коревая,
паротитная, гриппозная, риккетсиозная
Атенуированные
Дивергентные
Генно-инженерные (рекомбинантные,
векторные)
Убитые
Корпускулярные
Аутовакцины
• натуральная оспа
• гриппозная
•
•
•
•
коклюшная
лептоспирозная
против клещевого энцефалита
гонорейная
46
Химические
Классические
•
•
•
•
•
Современные
ДНК-вакцины
рибосомальные
липосомальные
полипепидные
антиидиотипические
Анатоксины
•
•
•
•
•
TABte
сипнотифозная
холерная
менингококковая
сальмонелезная
шигелезная
•
•
•
•
столбнячный
ботулинический
дифтерийный
дизентерийный (из токсина Шига)
КАЛЕНДАРЬ ПРОФИЛАКТИЧЕСКИХ ПРИВИВОК В УКРАИНЕ
(приказ МЗО Украины № 276 от 31.10.2000 г.)
Возраст
1 день
3 день
Гепатита В
Туберкулеза
1 месяц
3 месяца
Гепатита В
4 месяца
5 месяцев
6 месяцев
12-15 месяцев
18 месяцев
3 года
6 лет
7 лет
11 лет
14 лет
15 лет
18 лет
Взрослые
Прививка против
Дифтерии,
столбняка
Гепатита В
Дифтерии,
столбняка
коклюша, Полиомиелита
Дифтерии,
столбняка
коклюша, Полиомиелита
коклюша, Полиомиелита
Кори,
краснухи,
паротита
Дифтерии, столбняка
Полиомиелита
Кори, краснухи, паротита
Полиомиелита
Дифтерии, столбняка
Полиомиелита
Кори, краснухи, паротита
Туберкулеза
Дифтерии, столбняка
Кори, краснухи, паротита
(при
отсутствии
вакцинации в 6 лет)
Туберкулеза
Дифтерии, столбняка
Полиомиелита
Краснухи (девушки),
паротита (ребята)
Дифтерии, столбняка
Гепатита В
Дифтерии, столбняка
1.4.2. Перечень теоретических вопросов:
1. Понятие о вакцинах, профилактике и вакцинотерапии инфекционных болезней.
2. Характеристика вакцинных препаратов:
47
а) живые вакцины. Разновидности, способы получения, примеры;
б) убитые вакцины. Разновидности, способы получения, примеры;
в) химические вакцины, способы получения, примеры. Современные химические вакцины,
особенности их получения;
г) анатоксины, получения, примеры.
3. Вакцинотерапия хронических заболеваний. Аутовакцины.
4. Этапы изготовления инактивованной нагреванием аутовакцины.
5. Календарь прививок, перечень вакцинных препаратов, которые входят в его состав.
1.4.3. Источники учебной информации
Основная
1. К.Д. Пяткин, Ю.С.Кривошеин. Микробиология. Г. 1980. -с. 212-214.
2. В.Д.Тимаков. Микробиология. Г. 1983 - с.225-228.
3. А.И. Коротяев, С.А.Бабич. Медицинская микробиология, иммунология и
вирусология. Санкт-Петербург, 2002, с- 224-225.
4. И.Л.Дикий, И.Ю.Холупяк. Микробиология. Харьков, 1999. - с.183-191.
5. И.Л.Дикий. Микробиология. Руководство к лабораторным занятиям. Харьков
2002. с.224-231.
6. М.Н. Лебедева. Руководство к практическим занятиям по медицинской
микробиологии. Г. 1973. с. 152.
11. Лекции
Дополнительная
Словарь по микробиологии, вирусологии, иммунологии и инфекционным заболеванием.
Общ. ред., проф. Палия Г.К., К. 2004.
Ориентировочная основа действия (ОДД)
Этапы приготовления инактивированной нагреванием аутовакцины
1. Накопление биомассы культуры микроорганизма.
2. Проверка чистоты культуры (микроскопия).
3. Приготовление маточной взвеси культуры в физиологическом растворе.
4. Инактивация микробной взвеси.
5. Контроль стерильности вакцины.
6. Титрование (стандартизация) вакцины.
7. Консервирование вакцины.
8. Исследование безвредности.
9. Разливание вакцины в ампулы.
10. Составление исходных данных.
1.7.1. Методика проведения занятия.
1. Изготовить инактивированную нагреванием аутовакцину:
1.1. С целью проверки чистоты приготовить мазки-препараты из культуры, выделенной
из организма больного с хронической стафилококковой инфекцией, окрасить их по методу
Грамма.
48
1.2. Приготовить смыв из биомассы путем добавления физиологического раствора.
1.3. Перенести 1 мл маточной взвеси в стерильную пробирку для дальнейшей инактивации.
1.4. Прогреть суспензию бактерий на водяной бане на протяжении 1 ч при 80 0С.
1.5. Проверить инактивированную вакцину на стерильность. Осуществить посев суспензии
в стерильную питательную среду. Посевы поместить в термостат, выдерживают 24 ч при 370 С.
2. Ознакомиться с набором вакцинных препаратов и особенностями их применения.
Результаты записать в таблицу.
Препарат
Группа
(классификация)
Назначение
Способ введения
Вакцины
3. Ознакомиться с календарем прививок и перечнем вакцинных препаратов, которые
используют для иммунизации.
4. Оформить протокол, сделать выводы.
Автор: доцент, к.м.н.
З. М. Прокопчук
Методическая разработка
по подготовке и работе на лабораторном занятии №26
для студентов фармацевтического факультета (специальность - клиническая фармация).
Тема: Специфическая профилактика и терапия инфекционных заболеваний. Сыворотки и
иммуноглобулины.
1.1. Актуальность темы: Антитела принадлежат к основным иммунореагентам, которые
принимают участие в большинстве иммунологических реакций, которые определяют состояние
иммунитета организма. На основе антител создано много иммунобиологических препаратов,
которые применяют для профилактики и лечения инфекционных болезней, а также их
диагностики. Поиск новых современных сывороточных препаратов постоянно продолжается.
Поэтому их изучение остается довольно актуальным вопросом.
1.2. Цели изучения темы:
1.2.1. Цель общая: Ознакомиться с сыворотками и иммуноглобулинами, а также с
принципами их применения для профилактики и лечения инфекционных болезней.
1.2.2. Цель конкретная:
1. Выучить основные группы сывороточных препаратов.
2. Ознакомиться с принципами получения сывороток и иммуноглобулинов.
3. Ознакомиться с практическим применением сывороточных препаратов.
4. Ознакомиться с использованием сывороток в диагностической практике.
1.3. Обеспечение исходного уровня знаний-умений.
1.Искусственный пассивный иммунитет. Характеристика. Препараты, которые
используются для его создания.
2. Антитела, структура, функции.
3. Реакции гиперчувствительности (немедленного и замедленного типа). Механизмы.
4. Первичный и вторичный иммунный ответ.
49
Граф логической структуры содержания.
Виды сывороточных препаратов
Иммунные сыворотки
Иммуноглобулины
это препараты сыворотки крови, которые
получают путем иммунизации животных или
человека и используются для создания
пассивного антитоксического,
антибактериального или антивирусного
иммунитета
Это биологические препараты, которые
получают из иммунных сывороток, путем
очищения от балластных фракций белков
Классификация сывороточных препаратов
Признак
Примеры
• диагностические (агглютинирующие,
По назначению:
преципитирующие, гемолитические)
• лечебно-профилактические
По происхождению:
• гетерологические (животные)
• гомологические (человеческие)
• биотехнологические (гибридомы)
По механизму действия:
• антитоксические (противостолбнячная,
противодифтерийная)
• антибактериальные (противосибиреязвенная,
•
•
•
•
противочумная)
антивирусные (противоэнцефалитная,
противооспенная)
антиопухолевые
антилифоцитарные
антиаллергические
Способы получения сывороточных препаратов
Вид сывороточного препарата
Способ получения
Гомологические
•
получают из сыворотки крови доноров,
волонтеров, реконвалесцентов
Гетерологические
•
получают путем гипериммунизации животных
вакцинными препаратами
Биотехнологические
•
•
(моноклональные) получают из искусственно
созданных клеток продуцентов гибридом,
которые образованы путем скрещивая Влимфоцитов и миеломных клеток
50
Современные сывороточные препараты
•
•
•
•
•
•
Иммуноглобулин G
Биоглобулин
Вейноглобулин (бимолекула Ig G)
Гаммавенин (Ig G без Fc-фрагменту)
Интраглобулин (Ig G, покрытый (-протолактамом)
Сандоглобулин (Ig G, стойкий к рH 4,0)
Схема введения сывороточных препаратов по методу Безредко
1. Вводят внутрикожно в сгибательную поверхность предплечья 0,1 мл сыворотки,
разбавленной 1:100. Учет результатов проводят через 20 мин. Проба считается отрицательной,
если диаметр отека (гиперемии) в месте инъекции меньше 1 см. Проба положительная, если
диаметр равняется 1 см и больше.
2. В случае отрицательной кожной пробы неразведенную сыворотку в количестве 0,1 мл
вводят подкожно в участок средней трети плеча. При отсутствии местной или общей реакции
через 30-60 мин внутримышечно вводят
необходимую дозу сыворотки, подогретую до
температуры 360С.
1.4.2. Перечень теоретических вопросов:
1. Сывороточные препараты, назначение.
2. Классификация сывороток по механизму действия, способом получения, по назначению.
3. Принципы получения сывороточных препаратов. Гомологические и гетерологические
сыворотки.
4. Современные методы получения сывороточных препаратов. Понятие о гибридомах.
5. Иммуноглобулины. Классификация. Назначение.
6. Современные иммуноглобулины, их применение в медицинской практике.
7. Способы введения сывороточных препаратов. Побочные реакции.
1.4.3. Источники учебной информации
Основная
1. К.Д. Пяткин, Ю.С.Кривошеин. Микробиология. Г. 1980. -с.215-217.
2. В.Д.Тимаков. Микробиология. Г. 1983 - с.229-230.
3. А.И. Коротяев, С.А.Бабич. Медицинская микробиология, иммунология и
вирусология. Санкт-Петербург, 2002, с. - 224-227.
4. И.Л.Дикий, И.Ю.Холупяк. Микробиология. Харьков, 1999. - с.192-195.
5. И.Л.Дикий. Микробиология. Руководство к лабораторным занятиям. Харьков
2002. с.224-231.
6. М.Н. Лебедева. Руководство к практическим занятиям по медицинской
микробиологии. Г. 1973. с. 130.
11. Лекции.
Дополнительная
Словарь по микробиологии, вирусологии, иммунологии и инфекционным заболеванием.
Общ. ред. проф. Палия Г.К., К. 2004.
Ориентировочная основа действия (ОДД)
Этапы приготовления инактивированной нагреванием аутовакцины
1. Накопление биомассы культуры микроорганизма.
2. Проверка чистоты культуры (микроскопия).
51
3. Приготовление маточной взвеси культуры в физиологическом растворе.
4. Инактивация микробной взвеси.
5. Контроль стерильности вакцины.
6. Титрование (стандартизация) вакцины.
7. Консервирование вакцины.
8. Исследование безвредности.
9. Разливание вакцины в ампулы.
10. Составление исходных данных.
1.7.Короткие методические указания для работы студентов на лабораторном занятии.
1.7.1. Методика проведения занятия.
1. Продолжить изготовление инактивованной нагреванием стафилококковой аутовакцины.
Проверить вакцину на стерильность после 24-х часовой инкубации. При условии отсутствия
видимых признаков роста, исследования продолжают.
2. Провести стандартизацию вакцины с помощью оптического стандарта мутности. Для
этого мерно прибавить пипеткой физиологический раствор, постоянно сравнивая его со
стандартом. Полученные данные записать в таблицу. Определить титр вакцины.
Количество вакцины (мл)
Количество добавленного физиологического
раствора (мл)
Общее количество раствора (мл)
Титр вакцины равняется_________________ бактерий/мл.
3. Провести консервирование вакцины 0,5 % карболовым раствором. Прибавить 0,5% раствор
карболовой кислоты к стандартизированной вакцине в соотношении 1:10.
К вакцине добавлено_________ мл карболовой кислоты.
4. Разлить вакцину шприцем в стерильные ампулы по 1 мл и запаять над огнем газовой горелки,
составить этикетные данные.
Место изготовления вакцины:
Название вакцины:
Вид вакцины:
Титр вакцины:
Дата изготовления:
Срок годности:
4. Ознакомиться с коллекцией сывороточных препаратов, выучить их виды и назначение.
Полученные данные занести в таблицу.
Препарат
Группа
Назначение
Способ введения
(классификация)
Сыворотки
52
Иммуноглобулины
Автор: доцент, к.м.н. З.М.Прокопчук
МЕТОДИЧЕСКАЯ РАЗРАБОТКА
ПО ПОДГОТОВКЕ И РАБОТЕ НА ЛАБОРАТОРНОМ ЗАНЯТИИ №27-28
ДЛЯ СТУДЕНТОВ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКОГО ФАКУЛЬТЕТА (СПЕЦИАЛЬНОСТЬ КЛИНИЧЕСКАЯ ФАРМАЦИЯ).
Тема: Практические навыки. Метод Грама. Определение чувствительности бактерий к
ХТС. Учет серологических реакций.
1. Актуальность темы. Согласно образовательно-квалификационным характеристикам (ОКХ) и
образовательно-профессиональным программам (ОПП) подготовки специалистов квалификации
«Врач» каждый студент медицинского факультета при изучении курса медицинской
микробиологии должен овладеть определенными навыками, которые необходимы в диагностике
инфекционных заболеваний и при назначении этиотропной терапии.
2. Цели изучаемой темы.
2.1. Цель общая. Уметь проводить микроскопическую и серологическую диагностику
инфекционных
заболеваний.
Проводить
рациональный
выбор
антимикробных
химиотерпевтических препаратов для лечения заболеваний микробной этимологии.
2.2. Цель конкретная.
1. Уметь приготовить мазок из смеси грамположительных и грамотрицательных бактерий,
покрасить по методу Грама, определить их морфологические и тинкториальные свойства.
2. Уметь провести постановку и учет результатов основных серологических реакций,
используемых в серологической диагностике инфекционных заболеваний.
3. Уметь провести исследование чувствительности микроорганизмов к химиотерапевтическим
средствам. Оценить результаты. Дать рекомендации относительно выбора химиотерапевтического
средства для лечения инфекционного заболевания, вызванного возбудителем, чувствительность
которого изучали.
3. Краткие методические указания для работы студентов на лабораторном занятии.
3.1. Методика проведения занятия.
Задание №1.
Используя в качестве исследуемого материала смесь грамположительных и
грамотрицательных бактерий приготовить мазок, покрасить по Граму, определить тикториальные
и морфологические свойства бактерий в исследуемой смеси. Результат исследования зарисовать и
описать в протоколе.
Критерий оценки задания № 1.
За правильное приготовление мазка, его окраску, микроскопирование и оценку результатов
микроскопического исследования ставится максимально 3 балла.
При нарушении правил приготовления мазка, его окраски или микроскопического
исследования сниматься соответственно по 1 баллу. В этих случаях задание может бить оценено в
2, 1, 0 баллов.
Задание № 2.
Провести учет результатов серологических реакций агглютинации, непрямой
гемагглютинации, связывания комплемента и иммуноферментного анализа в демонстрационных
опытах.
Назвать ингредиенты, используемые при их постановке. Указать как выглядит
положительный и отрицательный результат определенного вида реации.
53
Ответы описать в протоколе.
Критерий оценки задания № 2.
Правильный учет результатов серологической реакции, указанной в задании, с указанием
ингредиентов, необходимых для ее постановки оценивается в 1 балл.
При невыполнении какого-либо пункта задания оно оценивается в 0 баллов.
Задание № 3.
Используя методики стандартных бумажных дисков и последовательных серийных
разведений, провести учет результатов чувствительности бактерий к химиотерапевтическим
средствам. Дать рекомендации по выбору препарата для этиотропного лечения заболевания
вызванного возбудителем, чувствительность которого определяли в демонстрационном опыте.
Ответ обосновать.
При использовании метода стандартных бумажных дисков в протоколе необходимо указать
критерии оценки чувствительности микроорганизмов к химиотерапевтическим средствам этим
методом.
При использовании метода последовательных серийных разведений в протоколе необходимо
указать что принимается за МБсК и МБцК и как их определяют.
Критерии оценки задания № 3.
За правильно выполненное задание по определению чувствительности микроорганизмов к
химиотерапевтическим средствам в демонстрационном опыте, рекомендации относительно
выбора лечебного препарата для этиотропного лечения ставится 1 балл.
При невыполнении какого-либо пункта задания оно оценивается в 0 баллов.
Шкала оценки занятия в целом
Традиционная оценка
Колличество баллов
5
5
4
4
3
3
2
0
Автор: профессор, д.м.н.
Палий Г.К.
Методическая разработка
по подготовке и работе на лабораторном занятии №30
для студентов фармацевтического факультета (специальность - клиническая фармация).
Тема: Патогенные риккетсии. Биологические свойства. Методы лабораторной діагностики
риккетсиозов. Серологическая діагностика эпидемического сыпного тифа и Ку-лихорадки
.
1.Актуальность темы. Риккетсии – обширная группа мелких полиморфных грамотрицательных
бактерий, являющихся паразитами членистоногих, различных животних и человека; риккетсиозы
заболевания, вызываемые ими.
2.1.
2.2.
2.Цель изучения темы.
Цель общая. Ознакомиться с серологическими реакциями в диагностике риккетсиозных
инфекций.
Цель конкретная. Знать дифференциальные признаки серологических реакций, которые
используют для типирования риккетсий в исследуемом материале.
3. Обеспечение исходного уровня знаний-умений:
1.Иммунитет. Факторы специфической иммунной защиты.
2.Полноценные и неполноценные антигены.
3.Принципы взаимодействия антигенов и антител.
4.Иммунодианостические реакции.
3.1. Задачи на исходный уровень знаний-умений:
От больного с острой кишечной инфекцией выделен вирус, который отнесен к роду
энтеровирусов. Для определения серотипа вируса применяют диагностические сыворотки. Какие
антитела должны содержать эти сыворотки?
А. К белкам суперкапсидной оболочки.
В. К белкам капсида *
С. К неструктурным белкам вируса.
54
Д. К вирусным ферментам
Е. К вирусным гемаглютининам
3.2.Знать систематическое положение риккетсий среди представителей микромира.
3.3.Знать принципы микроскопии, что позволяет выучить морфологию риккетсий.
3.4.Знать отличия в ультраструктуре риккетсий, вирусов и бактерий.
4.Содержание обучения.
4.1.Графлогической структуры содержания.
Выявление антител – РНГА, ИФА, РИА, РА Вейгля --- выявление генетического материала
риккетсий– ПЛР.
4.2.Перечень теоретических вопросов:
Источники учебной информации.
К.Д.Пяткин, Ю.С.Кривошеин. Микробиология, К., 1980.- С.406
А.А.Воробьев. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология. М., 2004.- С. 261.
А.И.Коротяев, С.А.Бабичев. Медицинская микробиология, имунология и вирусология.
С.Петербург, 2002.- С.239
Л.Б.Борисов. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология.М., 2001 С.68.
И.Л.Дикий и соавт. Микробиология, Харьков,2004.- С.93
Л.Б.Борисов. Руководство к практическим занятиямм по микробиологии, М. 1986.- С.126.
Литература дополнительная:
Микробиология, вирусология, иммунология, инфекционные болезни. Словарь / За ред. Г.К.Палий,
В.Г.Палий. Киев: Здоровье, 2004. С.83,88.
Сборник задач для подготовки к тестовому экзамену по естественно научным дисциплинам „Крок
-1. Общая врачебная подготовка” /Кол. авторов; За ред. В.Ф.Москаленка и пел.- К.:
Медицина,2004.
5.Ориентировочная основа действия.
Выявление антител – РНГА, ИФА, РИА, РА Вейгля.
Выявление генетического материала риккетсий – ПЦР.
6.Система целевых обучающих задач.
В лабораторию доставлена кровь больного сыпным тифом. Какую из перечислених
серологических реакций следует применить?
А. РеакциюАсколи
В. Преципитации
С. Агглютинации Вейгля●
Д. Связывания комплемента
Е. Реакцию Васермана
7.Краткие методические указания для работы студентов на лабораторном занятии.
7.1.Методика проведения занятия:
- Усвоить макроскопическую реакцию агглютинации Вейгля. Во время проведения
реакции используют корпускулярный риккетсиозный антиген (500 млн клеток/мл). Сыворотку
больного разводят от 1:40 до 1:1280 в объеме 0,25 мл и в каждую пробирку добавляют по 0,25 мл
антигена. При этом необходимо учесть, что после внесения антигена разведения сыворотки
удваивается. Учет результатов проводим, через 2 часа после того, как пробирки проинкубировали
в термостате. Диагностический титр равняется 1:40 – 1:80 и больше почти в 100% больных
сыпным тифом уже на 4-5 день болезни.
- Ознакомиться с принципом постановки ИФА с целью выявления специфических
антигенов в сыворотке кровь и больного. На занятии в качестве твердофазного носителя
используют планшетки с адсорбируемыми на дне ячеек антителами. В лунки вносят по 1 капле
исследуемой сыворотки и вмещают в термостат при темп. С
37. Промывают луночки буферным
раствором и вносят меченые ферментом (пероксидазою хрена) антитела против этого антигена
(прямой вариант). Планшетки вмещают в термостат при темп. 37С. Промывают луночки
буферным раствором, вносят по одной капле перекиси водорода и ортофенилдиамина (ОФД).
Планшетки вмещают термостат к появлению желтой расцветки в контроле. Количество
присоединенного к фазе энзима отвечает количеству антигенов. При наличии в исследуемой
сыворотке антигенов вируса в лунках изменяется цвет жидкости на желтый или желтовато –
коричневый (результат положительный). В лунках с сывороткой, которая не содержит антигенов
вирусов, цвет жидкости не изменяется (результат отрицательный).
55
Зарисовать схему реакции.
- Познакомиться с принципом постановки реакции гибридизации нуклеиновых кислот.
Целью метода является выявление в исследуемом материале участков ДНК, характерных для
данного возбудителя. Для этого используют их гибридизацию с диагностическими ДНК –
зондами. ДНК – зонды – это однониточные фрагменты ДНК (комплементарные к специфическим
участкам ДНК возбудителя), меченые радионуклидами, ферментами или флюорохромами.
Схемы реакции зарисовать.
- Провести учет результатов реакции связывания комплемента, результаты зарисовать.
Разведение сыворотки
1:5
1:10
1:20
1:40
1:80
1:160
- Провести учет результатов реакции пассивной гемагглютинации, результаты зарисовать.
Разведение сыворотки:
1:5
1:10
1:20
1:40
1:80
1:160
Начало заболевания:
Через 10 дней:
Автор: асистент Рымша Е.В.
Методическая разработка
по подготовке к лабораторному занятию №31
для студентов фармацевтического факультета (специальность - клиническая фармация).
Тема: Патогенные хламидии. Биологические свойства. Методы лабораторной диагностики
хламидиозов. Этиотропная терапия и профилактика заболеваний.
Методическая разработка
по подготовке к лабораторному занятию №32-33
для студентов фармацевтического факультета (специальность - клиническая фармация).
Тема: Патогенные кокки. Стафилококки. Стрептококки. Морфология и биологические
свойства. Микробиологическая диагностика заболеваний.
1.1.Актуальность темы. Гнойно-воспалительные заболевания относятся к наиболее
распространенным. Ежегодно ими болеют десятки миллионов людей. Больше всего гнойных
56
1.
2.
3.
1.
2.
3.
процессов предопределяют патогенные кокки.
1.2. Цель изучения темы.
Общая. Выучить основные свойства патогенных кокков и основы патогенеза гнойновоспалительных заболеваний, обусловленных патогенными кокками, методы микробиологической
диагностики стафилококковых и стрептококковых инфекций.
Конкретная.
Выучить факторы патогенности стафилококков.
Овладеть методами лабораторной диагностики стафилококковых инфекций.
Овладеть методами лабораторной диагностики стрептококковых инфекций.
1.3. Обеспечение исходного уровня знаний - умений.
Ультраструктура бактериальной клетки.
Морфология шаровидных бактерий.
Строение клеточной стенки грамположительных бактерий.
1.3.1.Тести на исходный уровень знаний - умений.
Классификация кокков по морфологии основана на:
А. Размерах кокков.
В. Количеству и расположению жгутиков.
С. Спорообразованию.
Д. Делению в разных плоскостях.
Е. Отношению к окрашиванию по Граму.
Ответ: Д.
1.4. Содержание обучения.
1.4.1.Графологическая структура содержания.
Графологическая структура микробиологического исследования стафилококковой
инфекции.
Материал для исследования: гной, экссудат, мокрота, слизистые выделения из зева, носа и
др.
Микроскопическое исследование
- мазок, окрашенный по Граму
Ответ.
Бактериологическое исследование
- посев на ЖСА, кровяной агар,
- характер роста,
- наличие гемолиза,
- лецитиназная активность на ЖСА,
- посев на скошенный агар,
- посев на развернутый ряд Гисса,
- фаготипирование,
- определение плазмокоагулазы,
- определение чувствительности к антибиотикам.
Ответ.
Графологическая структура микробиологического исследования стрептококковой
инфекции.
Материал для исследования: гной, экссудат, мокрота, слизистые выделения из зева, носа и
др.
Микроскопическое исследование:
- мазок, окрашенный по Граму.
Ответ.
Бактериологическое исследование:
- посев на кровяной или сахарный агар,
- характер роста колоний,
- наличие гемолиза,
- мазок, окрашенный по Граму,
- посев на кровяной или сахарный агар,
- определение серогруппы,
- определение чувствительности к антибиотикам.
Серологическое исследование
57
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
- определение О-стрептолизина в сыворотке крови
Ответ.
1.4.2.Перечень теоретических вопросов.
Морфология, классификация, антигенное строение стафилококков.
Культуральные, биохимические свойства, токсинообразование стафилококков.
Экология, резистентность стафилококков.
Морфология, классификация, антигенное строение стрептококков.
Культуральные, биохимические свойства, токсинобразование стрептококков.
Факторы и ферменты патогенности стафилококков и стрептококков.
Значение стафилококков в возникновении инфекций
и внутрибольничных заболеваний.
Стафилококковое носительство.
Роль стрептококков в возникновении гнойно-воспалительных процессов, скарлатине и
ревматизме.
Стрептококки пневмонии, основные свойства. Особенности микробиологической диагностики
заболевания.
Методы микробиологической диагностики стафилококковых инфекций.
Методы микробиологической диагностики стрептококковых инфекций.
Специфическая профилактика и лечение заболеваний, вызванных пиогенными кокками.
1.4.3.Источники учебной информации.
Основные:
К.Д. Пяткин, Ю.С. Кривошеин. - Микробиология. - К., 1992 (укр..) - с. 243 - 255.
К.Д. Пяткин, Ю.С. Кривошеин. - Микробиология. - Г. 1980 (рус.). - с. 227-244.
В.Д. Тимаков, В.С. Левашов. - Микробиология. - Г. 1983 (рус.). - с.253 - 266.
А.И. Коротяев, С.А. Бабичев - Медицинская микробиология и вирусология. - СанктПетербург, 2002 (рус.). - с. 330-341.
И. Л. Дикий, И.Д. Холупяк. - Микробиология. - Харьков, 1999 (рус.). - с. 214-220.
В.И. Покровский. - Медицинская микробиология._М., 1998 (рус.). - с. 183-206.
О.И.Климнюк, И.О. Ситник. - Практическая микробиология. - Терн. 2004 (укр..). - с. 172183.
Л.П. Борисов. - Руководство к практическим занятиям по микробиологии. - М. 1984 (рус.).
- с. 131-141, 152-153.
М.Н Лебедева. - Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии. М. 1973 (рус.). с. 158-176.
Ю.С. Кривошеин. - Руководство к практическим занятиям по медицинской
микробиологии. - К. 1986 (рус.). - с. 86-92.
Дополнительные:
Словарь по микробиологии, вирусологии, иммунологии и инфекционным заболеваниям. Заг. ред.
проф.. Г.К. Палий, К. 2004. с. 7-146.
1.5.Ориентировочная основа действия (ООД).
Изготовление и окрашивание препаратов стафилококка.
Микроскопия готовых препаратов стрептококков.
Изучение культуральных свойств стафилококков и стрептококков.
Изучение метода фаготипирования стафилококков.
Определение чувствительности стафилококков и стрептококков к антибиотикам.
Оформление протокола.
1.6.Система обучающих заданий.
1) Определить признаки патогенности стафилококков:
1) наличие гемолиза; 2) выделение энтеротоксина; 3) выделение лейкоцидина 4) выделение
фибринолизина 5) выделение некротоксина; 6) выделение амилазы; 7) выделение липазы.
Ответ:1, 2, 3, 4, 5.
2) В хирургическом отделении возникло подозрение на наличие внутрибольничной
стафилококковой инфекции, источником которой является медицинский персонал. На какую
среду следует высеять материал с носоглотки работников отделения для выявления носительства
патогенных стафилококков?
А. Среда Ресселя.
В. Жосчно-солевой агар.
58
С. Мясо-пептонный бульон.
Д. Кровяной агар.
Е. Среда Эндо.
Ответ:В.
1.7. Короткие методические указания для работы студентов на лабораторном занятии.
1.7.1. Методика проведения занятия.
1. Изготовить, окрасить по Граму и посмотреть под микроскопом препараты культуры
стафилококка.
2. Посмотреть под микроскопом и зарисовать готовые препараты культур стрептококков.
3. Провести микроскопическое исследование гнойного выделения.
4. Выучить рост стафилококков и стрептококков на питательных средах (кровяной агар,
глюкозный МПБ) и выявить наличие пигмента у стафилококков на молочно-солевом агаре.
5. Провести фаготипирование стафилококков в демонстрационном опыте.
6. Определить чувствительность стрептококков и стафилококков к антибиотикам методом
стандартных дисков.
7. Внести в протокол схему бактериологической диагностики стафилококковых и стрептококковых инфекций.
Автор: доцент, к.б.н. Макац Е.Ф.
Методическая разработка
для работы на лабораторном занятии №34
для студентов фармацевтического факультета (специальность - клиническая фармация).
Тема: Патогенные кокки. Менингококки. Гонококки. Морфология и биологические
свойства. Микробиологическая диагностика заболеваний.
1.1 Актуальность темы.
Заболевания, обусловленные патогенными нейсериями, достаточно широко распространены среди
населения. В последние годы увеличиваются случаи заболевания эпидемическим менингитом
(особенно среди детей), а гонококковая инфекция сопровождает человечество в течение всей его
истории. Поэтому знания о природе этих заболеваний, их выявлении и диагностики крайне
необходимы практическим врачам.
1.2 Цели изучения темы.
Цель общая. Изучить свойства патогенных нейсерий и основы патогенеза менингококковых и
гонококковых инфекций. Усвоить микробиологическую диагностику инфекционных заболеваний,
обусловленных нейсериями.
Цель конкретная.
1.Изучить морфологические и культуральные свойства менингококков и гонококков.
2. Овладеть методами микробиологической диагностики менингококковой инфекции.
3. Овладеть методами лабораторной диагностики гонореи и бленореи младенцев.
4. Выучить особенности диагностики хронической гонореи.
1.3 Обеспечение исходного уровня знаний - умений.
1. Морфология шаровидных бактерий.
2. Строение клеточной стенки грамотрицательных бактерий.
3. Специальные питательные среды.
1.3.1 Тесты на исходный уровень знаний - умений.
Нейсерии имеют следующие морфологические и тинкториальные свойства:
А. Грамотрицательные парные палочки.
В. Грамположительные парные палочки.
С. * Грамотрицательные парные кокки.
D. Грамположительные парные кокки.
Е. Грамотрицательные извилистые бактерии.
1.3.2 Тесты на исходный уровень знаний - умений.
1). Реакция иммунофлюорисценции широко используется для экспресс-диагностики многих
бактериальных и вирусных инфекций. Выберите условие, без которого невозможно определить
результат реакции.
59
А. *Наличие люминесцентного микроскопа.
В. Наличие электронного микроскопа.
С. Наличие иммерсионного микроскопа.
D. Выделенной чистой культуры возбудителя.
Е. Сыворотки больного.
1.4. Графологическая структура содержания.
1.4.1. Графологическая структура микробиологической диагностики менингококковой инфекции.
Материал для исследования: спинномозговая жидкость, слизь из носоглотки, кровь.
Бактериоскопическое исследование: окраска мазков по Граму, изготовление и
окрашивание толстой капли крови.
Ответ.
Бактериологическое исследование
- посев на сывороточный агар,
- посев на шоколадный агар,
- характер роста колоний,
- проба на оксидазу и каталазу,
- определение серогруппы с диагностическими сыворотками,
- определение чувствительности к антибиотикам,
Ответ.
Серологический метод
- выявление в сыворотке антител в реакциях РНГА и ИФА.
Ответ.
1.4.2. Графологическая структура микробиологического исследования гонококковой инфекции.
Материал для исследования: гнойные выделения из уретры, моча, сыворотка.
Бактериоскопический метод
- мазок, окрашенный по Граму и метиленовым синим,
- реакция иммунофлуоресценции,
Ответ.
Бактериологический метод
- посев на кровяной агар, сывороточный агар, асцитный,
- изучение культуральных свойств,
- дифференциация гонококков от других видов рода Neisseria,
- определение чувствительности к антибиотикам
Ответ.
Серологический метод
- выявление антител в сыворотке крови в реакциях Борде-Жангу (РСК), РНГА, РИФ
Ответ.
1.4.3. Перечень теоретических вопросов.
1. Морфология, культуральные свойства, антигенное строение менингококков.
2. Микробиологическая диагностика заболеваний, вызванных ими. Обследование
бактерионосительство.
3. Гонококки, их свойства.
4. Методы лабораторной диагностики острой и хронической гонореи.
5. Профилактика и лечение заболеваний обусловленных нейсериями.
на
1.4.4. Источники учебной информации.
Основные:
1) К. Д. Пяткин, Ю.С. Кривошеин. - Микробиология. - К. 1992 (укр). - с. 196 - 201.
2) К.Д. Пяткин, Ю.С. Кривошеин. - Микробиология. - Г. 1980 (рус). - с. 244 - 249.
3) В.Д. Тимаков, В.С. Левашев. - Микробиология. - Г. 1983 (рус). - с. 266 - 272.
4) А.И. Коротяев, С.А. Бабичев. - Медицинская микробиология, иммунология и вирусология. Санкт - Петербург. 2002 (рус). - с. 342 - 346.
5) И.Л. Дикий, И.Д. Холупяк. - Микробиология. - Харьков. 1999 (рус). - с. 238 - 243.
6) В.И. Покровский. - Медицинская микробиология. - Г. 1998 (рус). - с. 275 - 291.
7) О.И. Климнюк, И.О. Ситник. - Практическая микробиология. - Терн., 2004 (укр). с. 183 - 190.
60
8) Л.Б. Борисов. - Руководство к практическим занятиям по микробиологии. - Г. 1984 (рус). - с. 157
- 160, 222.
9) М.Н. Лебедева. - Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии, - Г.
1973 (рус). - с. 176 - 179.
10) Ю.С. Кривошеин. - Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии. Г. 1986 (рус). - с. 92 - 07.
Дополнительные:
1) Г.К. Палий. - Словарь по микробиологии, вирусологии, иммунологии и инфекционным
заболеваниям. - 2004 (укр). - с. 7 - 146.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
1)
2)
3)
4)
5)
6)
1.5. Ориентировочная основа действия (ОДД)
Микроскопия готовых препаратов менингококка.
Микроскопия демонстрационных препаратов гнойных выделений из уретры больного
гонореей.
Постановка реакции преципитации со спинномозговой жидкостью больного.
Определение чувствительности менингококков и гонококков к антибиотикам.
Учет РСК с сывороткой крови больного.
Ознакомление со схемой микробиологической диагностики заболеваний.
Оформление протокола.
1.6. Система обучающих заданий.
1. Укажите питательные среды для культивирования менингококков:
1. МПБ.
2. МПА.
3. Кровяной агар.
4. Сахарный агар.
5. *Сывороточный агар.
6. * Сывороточный бульон.
7. Среда Китт-Тароцци.
8.* Асцит-агар.
9. Среда Бучина.
1.7. Короткие методические указания для работы студентов на лабораторном занятии.
1.7.1. Методика проведения
Просмотреть под микроскопом и нарисовать препараты из культур менингококка.
Просмотреть под микроскопом и нарисовать препараты с гнойных выделений уретры
больного.
Поставить реакцию преципитации спинномозговой жидкостью больного с
преципитирующими сыворотками А и В. Через 5 минут провести учет результатов. Определить
серогруппу.
Провести учет РСК с сывороткой крови больного гонореей.
Определить чувствительность менингококков к антибиотикам методом стандартных
дисков (при этом измерение зон задержки роста производить миллиметровой линейкой).
Внести в протокол схему диагностики заболеваний, вызванных патогенными
грамотрицательными кокками.
Автор: доцент, к.б.н. Макац Є.Ф.
Методическая разработка
по подготовке к лабораторному занятию №35
для студентов фармацевтического факультета (специальность - клиническая фармация).
Тема: Патогенные этеробактерии. Эшерихии. Морфология и биологические
свойства. Микробиологическая диагностика эшерихиозов.
1.1.Актуальность темы. Возбудители кишечных инфекций очень распространены во внешней
среде. Они загрязняют ее, пищевые продукты, воду. Среди них наиболее опасные энтеропатогенные кишечные палочки и возбудители бактериальной дизентерии. Болеют кишечными
61
инфекциями преимущественно дети разного возраста и поэтому диагностика этих заболеваний
имеет большое значение в работе практических врачей.
1.2. Цель изучения темы.
Общая. Выучить основные общие свойства представителей семьи энтеробактерий. Усвоить
биологические свойства кишечной палочки. Овладеть основами патогенеза колиэнтерита у
младенцев. Выучить микробиологическую диагностику колиэнтерита.
Конкретная :
1.Изучить морфологию, культуральные и биохимические свойства кишечной палочки.
2.Освоить бактериологический метод исследования при колиэнтеритах младенцев.
3.Освоить методы профилактики и лечения кишечных инфекций.
1.3.Обеспечение исходного уровня знаний-умений :
1.Морфология и тинкториальные свойства палочковидных бактерий.
2.Строение клеточной стенки грамотрицательных бактерий.
3.Дифференциально-диагностические среды.
1.3.1.Тесты на исходный уровень знаний-умений :
Бактерии характеризуются:
А. Палочковидной формой.
B. Обязательным наличием жгутиков.
C. Размерами от 1 до 10 мкм.
D. Размерами от 1 до 10 нм.
E. Спорообразованием во внешней среде .
Ответ: A,C.
1.4. Графологическая структура содержания.
1.4.1. Графологическая структура микробиологического исследования при колиэнтеритах:
1.Материал для исследования: испражнение больного ребенка.
2.Посев на среду Эндо.
3.Характер и цвет колоний.
4.Мазок,окрашивание по Граму.
5.Реакция агглютинации на стекле с ОВ-сыворотками.
6.Пересев агглютинабельных колоний на скошенный МПА.
7.Реакция агглютинации с типоспецифическими сыворотками.
8.Розвернутая реакция агглютинации.
9.Посев на "пестрый ряд".
Ответ.
1.4.3. Перечень теоретических вопросов.
1.Общая характеристика семейства энтеробактерий.
2.Морфология, культуральные и биохимические свойства эшерихий.
3.Антигенная структура эшерихий.
4.Дифференциация условно-патогенних и патогенных эшерихий.
5.Значение кишечной палочки в патологии человека.
6.Микробиологеская диагностика эшерихиозов.
1.4.4. Источники учебной информации.
Основные.
1. К.Д. Пяткин, Ю.С. Кривошеин Микробиология К.1982 (укр) - 211-216
2. К.Д. Пяткин, Ю.С. Кривошеин Микробиологая М. 1980 (русс) 255-259,270-273
3. В.Д. Тимаков Микробиология М. 1983 (русс) 273-279,286-288
4. А.И. Коротяев С.А. Бабич Медицинская микробиология, иммунология и вирусология
Санкт – Петерб. 2002 (русс), 373-377,389-384
5. И.Л. Дикий, И.Ю. Холупяк. Н.С. Шевелева, М.Ю. Стегний, Микробиология Харк.224-227,23223 6
6. Микробиология . Руководство к лабораторным занятиям. Харк 2002
7. О.И. Климнюк, И.О, Ситник, М.С. Творчко, В.П. Широбоков, Практическая микробиология,
Терн, 2004 190-194,209-212
8. Л.Б. Борисов, Руководство к практическим занятиям по микробиологии М. 1984 (русс),176-181
9. М.Н. Лебедева, Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии \ 1973
(русс) 182-186,195-200
62
1.
2.
3.
4.
5.
10. Ю.С. Кривошеин Руководство к практическим занятиям по медицинской микробиологии К.
1986 (русс), 97-98,107-109
Дополнительные
1. Словарь по микробиологии, вирусологии, иммунологии и инфекционным заболеваниям. Общ.
ред, проф. Г.К. Палий, К, 2004,7-146
1.5.Ориентировочная основа действия (ОДД).
Изготовление мазков из культуры кишечной палочки, окраска по Граму, микроскопия.
Изготовление, состав и назначение дифференциально-диагностических сред.
Изучение колоний эшерихий визуально и под стереомикроскопом на средах Эндо, Плоскирева,
Левина.
Учет ферментативных свойств эшерихий на углеводном ряду Гисса.
Оформление протокола.
1.6.Система обучающих заданий.
1.6.1. При гнилостных дисбактериозах с повышенным рН испражнений, следует назначать
биологические препараты изменяющие рН в кислую сторону и имеющие антагонистическое
действие. Какие микроорганизмы подходят для такой цели?
А. Клебсиеллы.
B. Азотобактер.
C. Энтеробактер.
D. Бифидумбактерии.
E. Протеи.
Ответ:D
1.7.Краткие методические указания для работы студентов на лабораторном занятии.
1.7.1.Методика проведение занятия.
1.Приготовить мазок с культуры кишечной палочки, окрасить по Граму, посмотреть под
микроскопом, зарисовать в протоколы.
2.Изучить состав и назначение дифференциально-диагностических сред Эндо, Левина,
Плоскирева.
3.Рассмотреть колонии эшерихий визуально и под стереомикроскопом на средах Эндо,
Плоскирева, Левина. Соответствующие характеристики внести в протокол.
4.Учесть ферментативные свойства эшерихий в тест-системе СИБ и углеводном ряду Гисса.
Обратить внимание на расщепление лактозы, глюкозы, маннита, мальтозы, образование индола,
сероводорода.
5.С целью бактериологической диагностики колиэнтерита высеять испражнения больного
ребенка на среду Эндо. Поместить в термостат.
Автор: доцент, к.б.н. Макац Е.Ф.
63