Îðèãèíàëüíûå èññëåäîâàíèÿ ÏÎËÈÌÎÐÔÈÇÌ ÃÅÍΠEGF È VEGF Ó ÁÎËÜÍÛÕ ÐÀÊÎÌ ËÅÃÊÎÃÎ È ßÈ×ÍÈÊΠÍ.Í. ×àêîâà1, Å.Ï. Ìèõàëåíêî1, Å.Í. Øëîìà2, Ý.Â. Êðóïíîâà1, Þ.Å. Äåìèä÷èê2, Í.Â. ×åáîòàðåâà1, À.À. Æèëêî3 1 Èíñòèòóò ãåíåòèêè è öèòîëîãèè ÍÀÍ Áåëàðóñè, ã. Ìèíñê Áåëîðóññêèé ãîñóäàðñòâåííûé ìåäèöèíñêèé óíèâåðñèòåò, ã. Ìèíñê 3 Ìèíñêèé ãîðîäñêîé êëèíè÷åñêèé îíêîëîãè÷åñêèé äèñïàíñåð, ã. Ìèíñê 2 Êëþ÷åâûå ñëîâà: ðàê ëåãêîãî, ðàê ÿè÷íèêîâ, ãåíû EGF è VEGF. Öåëüþ äàííîé ðàáîòû áûëî èçó÷åíèå ïîëèìîðôèçìà G+405Ñ â ãåíå VEGF è ïîëèìîðôèçìà À+61G â ãåíå EGF ó áîëüíûõ ðàêîì ëåãêîãî è ÿè÷íèêîâ. Îáíàðóæåíà àññîöèàöèÿ èçó÷àåìûõ ïîëèìîðôèçìîâ è êëèíè÷åñêèõ õàðàêòåðèñòèê îïóõîëåé. EGF AND VEGF GENE POLYMORPHISMS IN LUNG AND OVARIAN CARCINOMAS N.N. Chakova, E.P. Mikhalenko, E.N. Shloma, E.V. Krupnova, Yu.E. Demidchik, N.V. Chebotareva, A.A. Zhilko Key words: lung cancer, ovarian carcinomas, EGF and VEGF genes. The aim of the study was to investigate polymorphism G+405C in VEGF gene and polymorphism A+61G in EGF gene for lung cancer and ovarian carcinomas patients. The impact of mentioned polymorphisms on clinical characteristics of tumors was revealed. ÂÂÅÄÅÍÈÅ Å æåãîäíî â ìèðå äèàãíîñòèðóåòñÿ áîëåå 10 ìèëëèîíîâ áîëüíûõ ïåðâè÷íûìè çëîêà÷åñòâåííûìè íîâîîáðàçîâàíèÿìè [1]. Ðàê ÿè÷íèêîâ è êàðöèíîìû ëåãêîãî ïðåäñòàâëÿþò ñîáîé íàèáîëåå ÷àñòûå è â áîëüøèíñòâå ñëó÷àåâ òðóäíîèçëå÷èìûå îïóõîëåâûå çàáîëåâàíèÿ [2–6]. Íåñìîòðÿ íà óñîâåðøåíñòâîâàíèå óæå èìåþùèõñÿ è âíåäðåíèå íîâûõ ìåòîäîâ äèàãíîñòèêè, â 60–80 % ñëó÷àåâ ýòè çàáîëåâàíèÿ âûÿâëÿþòñÿ â III–IV ñòàäèè [7, 8], ÷òî â ñâîþ î÷åðåäü, íåãàòèâíî ñêàçûâàåòñÿ íà ïðîãíîçå.  íàñòîÿùåå âðåìÿ îãðîìíîå ÷èñëî ôóíäàìåíòàëüíûõ èññëåäîâàíèé ñôîêóñèðîâàíî íà ïîèñêå ãåíåòè÷åñêèõ ìàðêåðîâ ïðåäðàñïîëîæåííîñòè ê âîçíèêíîâåíèþ êàðöèíîì äëÿ îñóùåñòâëåíèÿ ðàííåé äèàãíîñòèêè, ñ îäíîé ñòîðîíû, è âûÿâëåíèè ôàêòîðîâ, ïîçâîëÿþùèõ ïðîãíîçèðîâàòü ðàçâèòèå çàáîëåâàíèÿ è îïòèìèçèðîâàòü ìåòîäû ëå÷åíèÿ [9–11]. 44 Ê íàñòîÿùåìó ìîìåíòó íàêîïëåíî ìíîæåñòâî äàííûõ, ïîäòâåðæäàþùèõ ó÷àñòèå ôàêòîðîâ ðîñòà, â ÷àñòíîñòè VEGF (ôàêòîð ðîñòà ýíäîòåëèÿ ñîñóäîâ) è EGF (ýïèäåðìàëüíûé ôàêòîð ðîñòà), îòâåòñòâåííûõ çà ìèòîãåííóþ àêòèâíîñòü êëåòîê, â ðàçâèòèè è ïðîãðåññèðîâàíèè çëîêà÷åñòâåííûõ íîâîîáðàçîâàíèé è, ñëåäîâàòåëüíî, ÿâëÿþùèõñÿ ïåðñïåêòèâíûìè ìèøåíÿìè ïðè èñïîëüçîâàíèè òàðãåòíîé òåðàïèè. Çàðóáåæíûìè èññëåäîâàòåëÿìè îáíàðóæåíû ôóíêöèîíàëüíî çíà÷èìûå ïîëèìîðôèçì G+405Ñ â ãåíå VEGF [12] è ïîëèìîðôèçì À+61G â ãåíå EGF [13]. EGF ïðåäñòàâëÿåò ñîáîé îäèí èç ëèãàíäîâ ðåöåïòîðà ýïèäåðìàëüíîãî ôàêòîðà ðîñòà (EGFR), ýêñïðåññèðóþùåãîñÿ íà ïîâåðõíîñòè êàê íîðìàëüíûõ, òàê è òðàíñôîðìèðîâàííûõ ýïèòåëèàëüíûõ êëåòîê è ÿâëÿþùåãîñÿ ðåøàþùèì òðàíñìåìáðàííûì òèðîçèí-êèíàçíûì ðåöåïòîðîì â ðåãóëÿöèè êëåòî÷íîãî ðîñòà è äèôôåðåíöèðîâêè. EGF/EGFR âçàèìîäåéñòâèå — ôóíêöèîíàëüíî Îíêîëîãè÷åñêèé æóðíàë, Ò.3, ¹1 (9), 2009 âàæíûé àóòîêðèííûé ïóòü, êîòîðûé ÿâëÿåòñÿ ïðîìîòîðîì ðàçâèòèÿ îïóõîëè. Ïîâûøåííàÿ ýêñïðåññèÿ EGF óñèëèâàåò èíâàçèþ è ìåòàñòàçèðîâàíèå îïóõîëè, çàïóñêàÿ öåëûé êàñêàä âíóòðèêëåòî÷íûõ ïðîöåññîâ, èíèöèèðóþùèõ êëåòî÷íóþ ïðîëèôåðàöèþ è ðÿä äðóãèõ áèîëîãè÷åñêèõ ýôôåêòîâ, îòâåòñòâåííûõ çà îïóõîëåâóþ ïðîãðåññèþ: àäãåçèþ è èíâàçèþ òðàíñôîðìèðîâàííûõ êëåòîê, âêëþ÷åíèå àíòèàïîïòîòè÷åñêèõ ìåõàíèçìîâ [14, 15]. EGF ìîæåò òàêæå èíäóöèðîâàòü ïðîöåññû îïóõîëåâîãî àíãèîãåíåçà çà ñ÷åò ãèïåðýêñïðåññèè VEGF [16, 17], êîòîðûé ïðåäñòàâëÿåò ñîáîé ãëèêîïðîòåèí è ÿâëÿåòñÿ îäíèì èç ñàìûõ âàæíûõ ñòèìóëÿòîðîâ àíãèîãåíåçà â ðàçíîîáðàçíûõ ïî õàðàêòåðèñòèêàì çäîðîâûõ è ïîðàæåííûõ ðàêîì òêàíÿõ [18]. Ñâîè ôóíêöèè VEGF âûïîëíÿåò ÷åðåç òèðîçèí-êèíàçíûå ðåöåïòîðû, ðàñïîëîæåííûå â ìåìáðàíå ýíäîòåëèàëüíûõ êëåòîê. Öåëüþ äàííîé ðàáîòû áûëî èçó÷åíèå âëèÿíèÿ ïîëèìîðôèçìà ãåíîâ EGF è VEGF íà ðèñê âîçíèêíîâåíèÿ è ðàçâèòèÿ ðàêà ëåãêîãî è ÿè÷íèêîâ. ÌÀÒÅÐÈÀËÛ È ÌÅÒÎÄÛ Â èññëåäîâàíèå âêëþ÷åíî 79 áîëüíûõ ÐË è 36 áîëüíûõ Ðß, ïðîõîäèâøèõ ëå÷åíèå â Ìèíñêîì ãîðîäñêîì êëèíè÷åñêîì îíêîëîãè÷åñêîì äèñïàíñåðå. Ïî ðåçóëüòàòàì ãèñòîëîãè÷åñêîãî èññëåäîâàíèÿ ó 49 (62,0 %) áîëüíûõ ÐË óñòàíîâëåí ïëîñêîêëåòî÷íûé ÐË, ó 23 (29,1 %) — àäåíîêàðöèíîìà, â 7 (8,9 %) ñëó÷àÿõ — ìåëêîêëåòî÷íûé ÐË. Âñå ñëó÷àè çàáîëåâàíèé ÐË áûëè êëàññèôèöèðîâàíû ïî ñèñòåìå TNM â ñîîòâåòñòâèè ñ òðåáîâàíèÿìè Ìåæäóíàðîäíîãî Ïðîòèâîðàêîâîãî Ñîþçà (UICC, âåðñèÿ 2002 ãîäà). Ðàñïðåäåëåíèå áîëüíûõ ïî ñòàäèÿì áûëî ñëåäóþùèì: I ñòàäèÿ — 44 (55,6 %) ïàöèåíòà, II ñòàäèÿ — 6 (7,7 %), III ñòàäèÿ — 20 (25,3 %) è IV ñòàäèÿ — 9 (11,4 %). Ïðåîáëàäàþùèì ãèñòîëîãè÷åñêèì âàðèàíòîì Ðß áûë ñåðîçíûé òèï, óñòàíîâëåííûé â 23 (63,9 %) ñëó÷àÿõ, ìóöèíîçíàÿ àäåíîêàðöèíîìà âûÿâëåíà ó 3 (8,3 %) áîëüíûõ, ýíäîìåòðèîèäíàÿ — ó 6 (16,7 %), ñâåòëîêëåòî÷íûé ðàê — ó 2 (5,6 %), äðóãèå âèäû — ó 2 (5,6 %) ïàöèåíòîê. Ïðè îöåíêå ñòåïåíè ðàñïðîñòðàíåíèÿ îïóõîëè ïî êëàññèôèêàöèè FIGO, â 28 (77,8 %) íàáëþäåíèÿõ âûÿâëåíà III è IV ñòàäèÿ çàáîëåâàíèÿ. Ñîïóòñòâóþùèå çàáîëåâàíèÿ äèàãíîñòèðîâàíû ó áîëüøèíñòâà îíêîëîãè÷åñêèõ áîëüíûõ. Ó âñåõ áîëüíûõ ÷àùå âñåãî âñòðå÷àëèñü áîëåçíè ñåðäå÷íî-ñîñóäèñòîé ñèñòåìû, íà âòîðîì ìåñòå ó ïàöèåíòîê ñ Ðß áûëè çàáîëåâàíèÿ æåëóäî÷íî-êèøå÷íîãî òðàêòà, à ó áîëüíûõ ÐË — çàáîëåâàíèÿ îðãàíîâ äûõàíèÿ. Êîíòðîëüíàÿ ãðóïïà áûëà ïðåäñòàâëåíà âûáîðêîé èç 124 ÷åëîâåê áåç îíêîëîãè÷åñêèõ çàáîëåâàíèé (49 ìóæ÷èí è 75 æåíùèí), ïðîæèâàþùèõ â ã. Ìèíñêå. Äëÿ ýëèìèíàöèè âëèÿíèÿ ôàêòîðîâ, çàâåäîìî èçìåíÿþùèõ âåðîÿòíîñòü ðàçâèòèÿ çàáîëåâàíèÿ, ïðè ôîðìèðîâàíèè êîíòðîëüíûõ ãðóïï áûë èñïîëüçîâàí ìåòîä íàïðàâëåííîãî ïîäáîðà ñ ó÷åòîì âîçðàñòà, ïîëà, ñòàòóñà êóðåíèÿ, ïðîôåññèîíàëüíîé ïðèíàäëåæíîñòè. Èññëåäîâàíèå ïîëèìîðôèçìà ãåíîâ EGF (À+61G) è VEGF (G+405Ñ) ïðîâîäèëîñü ìåòîäîì ÏÖÐ-ÏÄÐÔ àíàëèçà. Âûäåëåíèå òîòàëüíîé ÄÍÊ èç ëåéêîöèòîâ ïåðèôåðè÷åñêîé êðîâè âûïîëíÿëè ìåòîäîì Mathew [19]. Äëÿ àìïëèôèêàöèè ãåíà EGF èñïîëüçîâàëè ïðàéìåðû è óñëîâèÿ ÏÖÐ, ïðåäëîæåííûå Shahbazi et al [13]. Ïîëó÷åííûå ôðàãìåíòû àìïëèôèêàöèè äëèíîé 242 ï.í. îáðàáàòûâàëè ýíäîíóêëåàçîé AluI. Ãåíîòèïû, âûÿâëÿåìûå â õîäå àíàëèçà ãåíà EGF, èäåíòèôèöèðîâàëè ïî äëèíå ïîëó÷åííûõ â õîäå ðåñòðèêöèè ôðàãìåíòîâ: GG (193 ï.í.), GA (193 ï.í.+102 ï.í.+ 91 ï.í.), AA (102 ï.í.+ 91 ï.í.) (ðèñ. 1). Ïðàéìåðû äëÿ àìïëèôèêàöèè VEGF âçÿòû èç ðàáîòû Lee et al. [20], óñëîâèÿ ÏÖÐ ïîäáèðàëèñü ýêñïåðèìåíòàëüíî. Äëÿ îïðåäåëåíèÿ G+405Ñ ïîëèìîðôèçìà àìïëèôèöèðîâàííûå ôðàãìåíòû Ðèñóíîê 1 – Ýëåêòðîôîðåãðàììà ôðàãìåíòîâ àìïëèôèêàöèè ïîëèìîðôíûõ àëëåëåé ãåíà EGF: 1 — äî ðåñòðèêöèè; 2, 3, 4 — ïîñëå îáðàáîòêè ðåñòðèêòàçîé AluI 45 Îðèãèíàëüíûå èññëåäîâàíèÿ äëèíîé 273 ï.í. ïîäâåðãàëè ðåñòðèêöèîííîìó ðàñùåïëåíèþ ýíäîíóêëåàçîé BsmFI. Ïðîäóêòû ðåñòðèêöèè ôðàêöèîíèðîâàëè â 2,2 % àãàðîçíîì ãåëå ñ áðîìèñòûì ýòèäèåì è âèçóàëèðîâàëè â ÓÔ-ñâåòå. Ãåíîòèïû VEGF èäåíòèôèöèðîâàëè ïî äëèíå ïîëó÷åííûõ â õîäå ðåñòðèêöèè ôðàãìåíòîâ: GG (166 ï.í. + 107 ï.í.), GC (273 ï.í. + +166 ï.í.+ 107 ï.í.), CC (273 ï.í.) (ðèñ. 2). Ðèñóíîê 2 – Ýëåêòðîôîðåãðàììà ôðàãìåíòîâ àìïëèôèêàöèè ïîëèìîðôíûõ àëëåëåé ãåíà VEGF: 1 — äî ðåñòðèêöèè; 2, 3, 4 — ïîñëå îáðàáîòêè ðåñòðèêòàçîé BsmFI Ñòàòèñòè÷åñêàÿ îáðàáîòêà ìàòåðèàëà ïðîâîäèëàñü ñ èñïîëüçîâàíèåì ïàêåòà ïðèêëàäíûõ ïðîãðàìì «Statistica for Windows 6.0». ÐÅÇÓËÜÒÀÒÛ Ðåçóëüòàòû ãåíîòèïèðîâàíèÿ EGF ó áîëüíûõ ñ ðàçëè÷íûìè ãèñòîëîãè÷åñêèìè âàðèàíòàìè ÐË ïðåäñòàâëåíû â òàáë. 1. Àíàëèç äàííûõ ïîêàçàë îòñóòñòâèå äîñòîâåðíûõ ðàçëè÷èé ïî ÷àñòîòå âñòðå÷àåìîñòè ãåíîòèïîâ ìåæäó ãðóïïîé áîëüíûõ ÐË è êîíòðîëåì. Îäíàêî áûëî îáíàðóæåíî, ÷òî êîëè÷åñòâî íîñèòåëåé ãåíîòèïà ÀÀ â ãðóïïå áîëüíûõ (17,7 %) â 1,7 ðàçà íèæå, ÷åì â êîíòðîëüíîé ãðóïïå (29,0 %), à ó áîëüíûõ ïëîñêîêëåòî÷íûì ÐË ýòîò ãåíîòèï âñòðå÷àëñÿ åùå ðåæå (12,2 %), ïðè ýòîì îòëè÷èå îò êîíòðîëÿ áûëî äîñòîâåðíûì ( 2 = 5,91, ð<0,05). Èíòåðåñíûå äàííûå áûëè âûÿâëåíû ó áîëüíûõ àäåíîêàðöèíîìîé: ãåíîòèï ÀÀ âñòðå÷àëñÿ ñ òîé æå ÷àñòîòîé, ÷òî è â êîíòðîëå, à âîò ïðîöåíò íîñèòåëåé ãåíîòèïà GG (17,6 %) áûë ñíèæåí â 1,5 ðàçà ïî ñðàâíåíèþ ñ êîíòðîëåì (27,4 %). Ïîëó÷åííûå äàííûå, âåðîÿòíî, óêàçûâàþò íà òî, ÷òî ôîðìèðîâàíèå îïðåäåëåííîãî ãèñòîëîãè÷åñêîãî òèïà îïóõîëè, â ÷àñòíîñòè ïëîñêîêëåòî÷íîãî ðàêà ëåãêîãî èëè àäåíîêàðöèíîìû, â êàêîé-òî ìåðå îáóñëîâëåíî ãåíîòèïîì EGF. Äåéñòâèòåëüíî, ñðåäè íîñèòåëåé ãåíîòèïà GG ïëîñêîêëåòî÷íàÿ ôîðìà ÐË áûëà âûÿâëåíà ó 81 % ïàöèåíòîâ, â ãðóïïå áîëüíûõ ñ ãåíîòèïîì GÀ òàêîé ãèñòîëîãè÷åñêèé òèï îáíàðóæèâàëñÿ ó 68 %, è òîëüêî ó 56 % áîëüíûõ ñ ãåíîòèïîì ÀÀ áûëà äèàãíîñòèðîâàíà ýòà ôîðìà ÐË (ðèñ. 3). Ìîæíî ïðåäïîëîæèòü, ÷òî âåðîÿòíîñòü çàáîëåòü êàêîé-ëèáî ôîðìîé èç äâóõ íàõîäèòñÿ â çàâèñèìîñòè îò ãåíîòèïà: ó áîëüíûõ ñ ãåíîòèïîì GG âåðîÿòíîñòü âîçíèêíîâåíèÿ ïëîñêîêëåòî÷íîé ôîðìû ðàêà â 4 ðàçà âûøå, ÷åì àäåíîêàðöèíîìû ( 2 = 13,05, ð = 0,0003), ïðè ãåíîòèïå GA âåðîÿòíîñòü çàáîëåòü ïëîñêîêëåòî÷íûì Òàáëèöà 1 Ðàñïðåäåëåíèå ÷àñòîò ãåíîòèïîâ è àëëåëåé ãåíà EGF ó áîëüíûõ ÐË Ïðèìå÷àíèå: * — ð < 0.05, ð — óðîâåíü çíà÷èìîñòè ðàçëè÷èé ïî êðèòåðèþ ñ êîíòðîëüíîé ãðóïïîé 46 2 â ñðàâíåíèè Îíêîëîãè÷åñêèé æóðíàë, Ò.3, ¹1 (9), 2009 Ðèñóíîê 3 – Âëèÿíèå ãåíîòèïà íà âåðîÿòíîñòü ðàçâèòèÿ ãèñòîëîãè÷åñêîé ôîðìû ÐË ðàêîì ëåãêîãî èëè àäåíîêàðöèíîìîé ñîîòâåòñòâóåò ïðîïîðöèè 2:1 ( 2 = 7,93, ð = 0,048), ïðè íàëè÷èè ãåíîòèïà ÀÀ âîçìîæíîñòü çàáîëåòü òîé èëè èíîé ôîðìîé ñòàíîâèòñÿ ðàâíîâåðîÿòíîé ( 2 = 0,08, ð = 0,7). Îäíàêî îáíàðóæåííûå òåíäåíöèè íîñÿò âñå æå ïðåäâàðèòåëüíûé õàðàêòåð, è òðåáóþò áîëåå òùàòåëüíîé ïðîâåðêè. Îöåíêà çàâèñèìîñòè ðàçìåðà îïóõîëè îò ãåíîòèïà ïîêàçàëà, ÷òî â öåëîì â ãðóïïå áîëüíûõ ÐË ñ ðàçìåðîì îïóõîëè ìåíåå 3 ñì (èíäåêñ Ò1 ïî êëàññèôèêàöèè ÒNM) ÷àñòîòà íîñèòåëåé ãåíîòèïà ÀÀ (25 %) áûëà â 2 ðàçà âûøå, ÷åì ó ïàöèåíòîâ ñ ðàçìåðîì îïóõîëè áîëåå 3 ñì (12 %) (ðèñ. 4). Ðèñóíîê 4 – ×àñòîòà ðàñïðåäåëåíèÿ ãåíîòèïîâ ó áîëüíûõ ÐË ñ ðàçëè÷íûì ðàçìåðîì îïóõîëè Ïîëó÷åííûå íàìè äàííûå ñâèäåòåëüñòâóþò î âëèÿíèè ïîëèìîðôèçìà À+61G ãåíà EGF íà ïðåäðàñïîëîæåííîñòü ê âîçíèêíîâåíèþ ÐË, è íåêîòîðûå êëèíè÷åñêèå õàðàêòåðèñòèêè îïóõîëè è ñîãëàñóþòñÿ ñ ðåçóëüòàòàìè äðóãèõ èññëåäîâàòåëåé. Èç ëèòåðàòóðíûõ èñòî÷íèêîâ èçâåñòíî, ÷òî ìîíîíóêëåàðíûå êëåòêè ñ ãåíîòèïîì ÀÀ in vitro ïðîäóöèðóþò äîñòîâåðíî ìåíüøèé óðîâåíü ýïèäåðìàëüíîãî ôàêòîðà ðîñòà, ÷åì êëåòêè, èìåþùèå àëëåëü G [13]. Ïîêàçàíî òàêæå, ÷òî ïðè ðÿäå îïóõîëåé ýïèòåëèàëüíîé ïðèðîäû, â ÷àñòíîñòè ïðè ðàêå ïå÷åíè è êèøå÷íèêà, ïàöèåíòû ñ ãåíîòèïîì ÀÀ èìåëè ìåíüøèé óðîâåíü ýêñïðåññèè EGF â òêàíÿõ ïî ñðàâíåíèþ ñ ïàöèåíòàìè, èìåþùèìè ãåíîòèïû GG è GA [21, 22]. Ìåíüøèé óðîâåíü ýêñïðåññèè EGF ïðè íàëè÷èè ãåíîòèïà ÀÀ, ïî-âèäèìîìó, è îáåñïå÷èâàåò ïðîòåêòèâíîå äåéñòâèè äàííîãî ãåíîòèïà â ïðåäðàñïîëîæåííîñòè ê âîçíèêíîâåíèþ ÐË è â îòíîøåíèè ïðîãíîçà ðàçâèòèÿ çàáîëåâàíèÿ.  íàñòîÿùèé ìîìåíò íàìè íà÷àòî èçó÷åíèå ãåíåòè÷åñêîãî ïîëèìîðôèçìà EGF ó áîëüíûõ Ðß. Äàííûå ðåçóëüòàòîâ ãåíîòèïèðîâàíèÿ EGF â ýòîé ãðóïïå ïàöèåíòîâ ïðåäñòàâëåíû â òàáë. 2. ×àñòîòà ãåíîòèïîâ ðàñïðåäåëèëàñü ñëåäóþùèì îáðàçîì: GG — 25,0 %, GA — 63,9 %, ÀÀ — 11,1 %. Êîëè÷åñòâî íîñèòåëåé ãåíîòèïîâ GG è GA ó áîëüíûõ çëîêà÷åñòâåííîé êàðöèíîìîé ÿè÷íèêîâ (88,9 %) áûëà íåñêîëüêî âûøå, ÷åì â êîíòðîëüíîé ãðóïïå (74,7 %), à ÷àñòîòà âñòðå÷àåìîñòè íîñèòåëåé áëàãîïðèÿòíîãî ãåíîòèïà ÀÀ â ãðóïïå áîëüíûõ áûëà â 2,2 ðàçà íèæå ïî ñðàâíåíèþ ñ êîíòðîëüíîé. Ïðè ýòîì ó áîëüíûõ ñ III–IV ñòàäèåé çàáîëåâàíèÿ ãåíîòèï GG âñòðå÷àëñÿ â 2 ðàçà ÷àùå, ÷åì ó áîëüíûõ íà ðàííèõ ñòàäèÿõ ðàçâèòèÿ îïóõîëè. Òàêèì îáðàçîì, ïðè ñðàâíåíèå ÷àñòîòû âñòðå÷àåìîñòè ãåíîòèïîâ ó áîëüíûõ Ðß ñ êîíòðîëüíîé ãðóïïîé, áûëè îáíàðóæåíû òå æå òåíäåíöèè, ÷òî è ó áîëüíûõ ÐË. Îäíèì èç îñíîâíûõ ôàêòîðîâ âûæèâàíèÿ è ðàñïðîñòðàíåíèÿ îïóõîëåâûõ êëåòîê ÿâëÿåòñÿ àíãèîãåíåç. Êëþ÷åâóþ ðîëü â ôîðìèðîâàíèè Òàáëèöà 2 Ðàñïðåäåëåíèå ÷àñòîò ãåíîòèïîâ è àëëåëåé ãåíà EGF ó áîëüíûõ Ðß 47 Îðèãèíàëüíûå èññëåäîâàíèÿ íîâîé ñîñóäèñòîé ñåòè ïðè ðàçâèòèè îïóõîëè èãðàåò ñåìåéñòâî ýíäîòåëèàëüíûõ ôàêòîðîâ ðîñòà ñîñóäîâ — VEGF [18]. Ïîÿâëåíèå íîâûõ ñîñóäîâ ñïîñîáñòâóåò ïðîãðåññèðîâàíèþ çàáîëåâàíèÿ, óâåëè÷èâàÿ òåìïû ðîñòà îïóõîëè è åå ñïîñîáíîñòü ê ìåòàñòàçèðîâàíèþ. Îöåíêà àíãèîãåíåçà îïóõîëè ÿâëÿåòñÿ âàæíîé äëÿ ïðîãíîçèðîâàíèÿ òå÷åíèÿ áîëåçíè è íàçíà÷åíèÿ õèìèîòåðàïèè ïðè ìíîãèõ çëîêà÷åñòâåííûõ îïóõîëÿõ. Àíàëèç äàííûõ ïî ãåíîòèïèðîâàíèþ VEGF (ïîçèöèÿ G+405Ñ) ó áîëüíûõ ðàêîì ëåãêîãî, ïðåäñòàâëåííûé â òàáë. 3, íå âûÿâèë ðàçëè÷èé â ðàñïðåäåëåíèè ÷àñòîòû âñòðå÷àåìîñòè ãåíîòèïîâ GG/GÑ/ÑÑ ãåíà VEGF ìåæäó ãðóïïîé ïàöèåíòîâ (0,31:0,56:0,13) è êîíòðîëåì (0,31:0,53:0,16). Îäíàêî ñóùåñòâîâàëè çàìåòíûå ðàçëè÷èÿ â ðàñïðåäåëåíèè ãåíîòèïîâ ìåæäó ãðóïïàìè áîëüíûõ ïëîñêîêëåòî÷íûì ðàêîì ëåãêîãî è àäåíîêàðöèíîìîé: ñðåäè áîëüíûõ ñ àäåíîêàðöèíîìîé ãåíîòèï GG âñòðå÷àëñÿ â 2 ðàçà ÷àùå, ÷åì ó ïàöèåíòîâ ñ ïëîñêîêëåòî÷íûì ÐË, à íîñèòåëåé ãåíîòèïà ÑÑ ó áîëüíûõ àäåíîêàðöèíîìîé â íàøåé ãðóïïå îáñëåäîâàííûõ ïàöèåíòîâ íå áûëî îáíàðóæåíî. Áûëî òàêæå ïîêàçàíî, ÷òî ãåíîòèï ÑÑ âñòðå÷àåòñÿ â 2 ðàçà ÷àùå ó áîëüíûõ ÐË ñ íàëè÷èåì ìåòàñòàçîâ (N1-3) ïî ñðàâíåíèþ ñ ïàöèåíòàìè, èìåþùèõ îïóõîëè áåç ìåòàñòàçîâ (N0). Äàííûå ìîëåêóëÿðíîãî àíàëèçà ãåíà VEGF ó áîëüíûõ Ðß ïðåäñòàâëåíû â òàáë. 4. Ðàñïðåäåëåíèå ÷àñòîò âñòðå÷àåìîñòè ãåíîòèïîâ GG/GÑ/ÑÑ ãåíà VEGF áûëî ñëåäóþùèì: â ãðóïïå ïàöèåíòîâ — 0,45:0,52:0,03, â êîíòðîëå — 0,31:0,58:0,11. Áûëî âûÿâëåíî, ÷òî ÷àñòîòà âñòðå÷àåìîñòè íîñèòåëåé ãåíîòèïà ÑC ó áîëüíûõ çëîêà÷åñòâåííîé êàðöèíîìîé ÿè÷íèêîâ (3 %) áûëà íèæå, ÷åì â êîíòðîëüíîé ãðóïïå (11,0 %), à ÷àñòîòà âñòðå÷àåìîñòè íîñèòåëåé ãåíîòèïà GG â ãðóïïå áîëüíûõ áûëà â 1,5 ðàçà âûøå ïî ñðàâíåíèþ ñ Òàáëèöà 3 Ðàñïðåäåëåíèå ÷àñòîò ãåíîòèïîâ è àëëåëåé ãåíà VEGF ó áîëüíûõ ÐË Òàáëèöà 4 Ðàñïðåäåëåíèå ÷àñòîò ãåíîòèïîâ è àëëåëåé ãåíà VEGF ó áîëüíûõ Ðß 48 Îíêîëîãè÷åñêèé æóðíàë, Ò.3, ¹1 (9), 2009 êîíòðîëüíîé. Ïðè ýòîì ó áîëüíûõ ñ III–IV ñòàäèåé çàáîëåâàíèÿ ãåíîòèï GG âñòðå÷àëñÿ â 4 ðàçà ÷àùå, ÷åì ó áîëüíûõ ñ I–II ñòàäèÿìè ðàçâèòèÿ îïóõîëè. Îáíàðóæåííûå òåíäåíöèè íîñÿò ïðåäâàðèòåëüíûé õàðàêòåð â ñâÿçè ñ íåäîñòàòî÷íûì êîëè÷åñòâîì îáñëåäîâàííûõ áîëüíûõ, îäíàêî îíè íå ïðîòèâîðå÷àò ðåçóëüòàòàì äðóãèõ èññëåäîâàòåëåé [23–27]. Ðåçóëüòàòû íåñêîëüêèõ ðàáîò âûÿâèëè îòñóòñòâèå àññîöèàöèè ïîëèìîðôèçìà â ïîçèöèè +405 ãåíà VEGF ñ âîçíèêíîâåíèåì íåêîòîðûõ âàðèàíòîâ ðàêà, âêëþ÷àÿ ÐË [23] è Ðß [25], îäíàêî ïîêàçàëè åãî âëèÿíèå íà ñòåïåíü äèôôåðåíöèðîâêè îïóõîëè ó áîëüíûõ ìåëàíîìîé [26], ðàêîì ïðîñòàòû [27], ðàêîì ìîëî÷íîé æåëåçû [24], à òàêæå íà âûæèâàåìîñòü ó áîëüíûõ ÐË è Ðß. Îáíàðóæåííîå âëèÿíèå ïîëèìîðôèçìà â îáëàñòè +405 íà ðàçâèòèå îïóõîëåâîãî ïðîöåññà ìîæåò áûòü îáóñëîâëåíî ðàçëè÷èÿìè â ýêñïðåññèè VEGF ó èíäèâèäîâ ñ ðàçíûìè ãåíîòèïàìè. Watson et al. [12] â ñâîèõ èññëåäîâàíèÿõ ïîêàçàë, ÷òî íàèáîëüøèé óðîâåíü ýêñïðåññèè áåëêà VEGF áûë â ìîíîíóêëåàðíûõ êëåòêàõ ïåðèôåðè÷åñêîé êðîâè ñ ãåíîòèïîì GG, ïðîìåæóòî÷íûé óðîâåíü — â êëåòêàõ ñ ãåíîòèïîì GÑ è íàèìåíüøèé — â êëåòêàõ ñ ãåíîòèïîì ÑÑ. Èìåþòñÿ òàêæå ñâåäåíèÿ, ÷òî ïîâûøåííûé óðîâåíü ýêñïðåññèè VEGF ÷àùå íàáëþäàåòñÿ ó áîëüíûõ ñ îïóõîëÿìè âûñîêîé ñòåïåíè çëîêà÷åñòâåííîñòè. Òàêèì îáðàçîì, ïðîâåäåííîå èññëåäîâàíèå ïîäòâåðæäàåò ôóíêöèîíàëüíóþ çíà÷èìîñòü ïîëèìîðôèçìîâ G+405Ñ â ãåíå VEGF è À+61G â ãåíå EGF â îòíîøåíèè ïðîãíîçà ðàçâèòèÿ ÐË è Ðß.  äàëüíåéøåì ïëàíèðóåòñÿ èçó÷åíèå óðîâíÿ ýêñïðåññèè VEGF â òêàíÿõ áîëüíûõ ðàêîì ÿè÷íèêà äëÿ îïòèìèçàöèè ëå÷åíèè, ò.ê. VEGF ñ÷èòàåòñÿ âàæíîé òåðàïåâòè÷åñêîé ìèøåíüþ ïðîòèâîîïóõîëåâîé òåðàïèè [18]. Ñïèñîê èñïîëüçîâàííûõ èñòî÷íèêîâ 1. Ýïèäåìèîëîãèÿ çëîêà÷åñòâåííûõ íîâîîáðàçîâàíèé â Áåëàðóñè / È.Â. Çàëóöêèé [è äð.] — Ìèíñê: Çîðíû âåðàñåíü, 2006. — 207ñ. 2. Äàâûäîâ, Ì.È. Ñìåðòíîñòü íàñåëåíèÿ Ðîññèè è ñòðàí ÑÍà îò çëîêà÷åñòâåííûõ íîâîîáðàçîâàíèé â 2005 ã. / Ì.È. Äàâûäîâ, Å.Ì. Àêñåëü // Âåñòíèê ðîññèéñêîãî îíêîëîãè÷åñêîãî öåíòðà èìåíè Í.Í. Áëîõèíà ÐÀÌÍ. — 2007. — òîì 18, ¹ 2 (ïðèë. 1). — Ñ. 90–136. 3. Up-Regulated Expression of Cytoplasmic Clusterin in Human Ovarian Carcinoma / Dan Xie [et al] // Cancer. — 2005. — Vol. 103, ¹ 2. — P. 277–283. 4. Podratz, K. Advanced Ovarian Cancer: Surgical Management / Ê. Podratz, G. Aletti, W. Cliby // International congress «Ovarian cancer», Krakow, 18–21 June 2008 / Jagellonian University Faculty of Medicine; À. Basta. — Krakow, 2008. — Ð. 7–8. 5. Ethnic Differences in Survival among Women with Ovarian Carcinoma / Jill S. Barnholtz-Sloan [et al] // Cancer. — 2002. — Vol. 94, ¹ 7. — P. 1886–1893. 6. Êëèíè÷åñêàÿ îíêîëîãèÿ: ñïðàâ. ïîñîáèå / Ñ.Ç. Ôðàäêèí [è äð.]; ïîä ðåä. Ñ.Ç. Ôðàäêèíà, È.Â. Çàëóöêîãî. — Ìèíñê: Áåëàðóñü, 2003. — 784 ñ. 7. Îïóõîëè æåíñêîé ðåïðîäóêòèâíîé ñèñòåìû / Â.Â. Áàðèíîâ [è äð.]; ïîä îáù. ðåä. Ì.È. Äàâûäîâà, Â.Ï.Ëåòÿãèíà, Â.Â. Êóçíåöîâà. — Ì.: ÎÎÎ «Ìåäèöèíñêîå èíôîðìàöèîííîå àãåíòñòâî», 2007. — 376 ñ. 8. Äàâûäîâ, Ì.È. Çàáîëåâàåìîñòü çëîêà÷åñòâåííûìè íîâîîáðàçîâàíèÿìè íàñåëåíèÿ Ðîññèè è ñòðàí ÑÍà â 2005 ã. / Ì.È. Äàâûäîâ, Å.Ì. Àêñåëü // Âåñòíèê ðîññèéñêîãî îíêîëîãè÷åñêîãî öåíòðà èìåíè Í.Í. Áëîõèíà ÐÀÌÍ. — 2007. — òîì 18, ¹ 2 (ïðèë. 1). — Ñ. 52–89. 9. Áàõèäçå, Å.Â. Çíà÷åíèå ìåòîäîâ èññëåäîâàíèé ãåíîìà äëÿ äèàãíîñòèêè è òåðàïèè ðàêà ÿè÷íèêà / Å.Â. Áàõèäçå, À.Â. Ìàëåê // Âîïðîñû îíêîëîãèè . — 2005. — Òîì 51, ¹ 2. — Ñ. 173–181. 10. Ìàëåê, À.Â. Ïîèñê ãåíîâ-ìèøåíèé äëÿ äèàãíîñòèêè è òåðàïèè ðàêà ÿè÷íèêà / À.Â. Ìàëåê, Å.Â. Áàõèäçå // Âîïðîñû îíêîëîãèè. — 2005. — Òîì 51, ¹ 2. — Ñ. 182–186. 11. Îçîëèíÿ, Ë.À. Ïåðñïåêòèâû ðàííåé äèàãíîñòèêè ðàêà ýíäîìåòðèÿ è ÿè÷íèêîâ / Ë.À. Îçîëèíÿ // Ðîññèéñêèé âåñòíèê àêóøåðà-ãèíåêîëîãà. — 2005. — Òîì 5, ¹ 1. — Ñ. 32–35. 12. Identification of polymorphism within the vascular endothelial growth factor (VEGF) gene: correlation with variation in VEGF protein production / C.J. Watson [et al] // Cytokine. — 2000. — Vol. 12. — P. 1232–1235. 13. Association between functional polymorphism in EGF gene and malignant melanoma / M. Shahbazi [et al] // Lancet. — 2002. — Vol. 359. — P. 397–401. 14. Bridges, A.J. The rationale and strategy used to develop a series of highly potent, irreversible, inhibitors of the epidermal growth factor receptor family of tyrosine kinases / A.J. Bridges // Curr. Med. Chem. — 1999. — Vol. 6. — P. 825–843. 15. Epidermal growth factor-related peptides and their receptors in human malignancies / D.S. Salomon [et al] // Crit. Rev. Oncol. Hematol. — 1995. — Vol. 19. — P. 183–232. 16. Woodburn, J.R. The epidermal growth factor receptor and its inhibition in cancer therapy / J.R. Woodburn // Pharmacol. Ther. — 1999. — Vol. 82. — P. 241–250. 17.Expression of growth factors, growth-inhibiting factors and their receptors in invasive breast cancer: correlation with proliferation and angiogenesis / J.S. de Jong [et al] // Jour. Patholog. — 1998. — Vol. 184. — P. 53–57. 49 Îðèãèíàëüíûå èññëåäîâàíèÿ 18. Ferrara, N. The biology of VEGF and its receptors / N. Ferrara, H.P. Gerber, J. Le Couter // Nat. Med. — 2003. — Vol. 9. — P. 669–676. 19. Mathew, C.C. The isolation of high molecular weight eucaryotic DNA / C.C. Mathew // in Walker JMNJ (ed): Methods in Molecular Biology, Clifton: Human Press, 1984. — Vol. 2. — P. 31–34. 20. Vascular Endothelial Growth Factor Gene Polymorphisms and Risk of Primary Lung Cancer / S.J. Lee [et al] // Canc. Epid. Biom. and Prev. — Vol. 14. — P. 571–575. 21. Epidermal Growth Factor Gene Functional Polymorphism and the Risk of Hepatocellular Carcinoma in Patients With Cirrhosis / K.K. Tanabe [et al] // JAMA. — 2008. — Vol. 299, N 1 — P. 53–60. 22. Epidermal growth factor (EGF) A61G polymorphism and EGF gene expression in normal colon tissue from patients with colorectal cancer / K.L. Spindler [et al] // Acta Oncol. — 2007 — Vol. 46, N 8. — P. 1113–1117. 50 23. VEGF polymorphisms and survival in earlystage non-small-cell lung cancer / R.S. Heist [et al] // J. Clin. Oncol. — 2008. — Vol. 26, N 6. — P. 856–862. 24. Vascular endothelial growth factor polymorphisms in relation to breast cancerdevelopment and prognosis / Q. Jin [et al] // Clin. Cancer Res. — 2005. — Vol. 11, N 10. — P. 3647–3653. 25. Vascular Endothelial Growth Factor Gene Polymorphisms Are Associated with Prognosis in Ovarian Cancer / L.A. Hefler [et al] // Clin. Cancer Res. — 2007. — Vol. 13. — P. 898–901. 26. Influence of vascular endothelial growth factor single nucleotide polymorphismson tumour development in cutaneous malignant melanoma / W.M. Howell [et al] // Genes. Immun. — 2002. — Vol. 3, N 4. P. 229–232. 27. Association of VEGF genetic polymorphisms with prostate carcinoma risk and clinical outcome / S. Sfar [et al] // Cytokine. — 2006. — Vol. 35, N 1 — 2. — P. 21–28.