Шаблон секции нашей конференции

реклама
Использование ПАВ в бумажной хроматографии для
разделения и определения биогенных аминов
Е.Ю.Бырина
Научный руководитель — к.х.н., доцент Ю.Ю. Петрова
Сургутский государственный университет, г. Сургут,
e-mail: famfour@mail.ru
Бумажная хроматография (БХ) является простым и удобным
методом разделения и идентификации многих биологически активных
соединений. Впервые ПАВ в планарной хроматографии применили в
1963 г в БХ. Значительно позже ПАВ стали использовать для
импрегнирования различных сорбентов в ТСХ  в составе
мицеллярных подвижных фаз.
Ранее
нами
была
разработана
методика
сорбционнокаталитического определения гистамина на фильтровальной бумаге по
его активирующему действию в реакции окисления гидрохинона
пероксидом водорода.
В данной работе использовали метод БХ, в котором
модифицировали подвижную фазу добавлением в нее малых
количеств ПАВ, додецилсульфоната натрия (ДДСNa) и цетил
триметиламмоний бромида (ЦТАБ), или неподвижную фазу путем
добавления растворов ПАВ в пятно на линию старта либо
импрегнирования ПАВ в хроматографическую бумагу (ХБ) с
использованием растворов парафина и окисленного атактического
полипропилена (ОАПП) в гексане трех марок низко (н)-, средне (ср)- и
высоко (в)-ОАПП.
В качестве модельной выбрали смесь, содержащую биогенный
гетероциклический амин гистамин (Hisam) и его предшественник
гистидин (His). В некоторых исследованиях в эту модельную смесь
добавляли адреналин и норадреналин. Подвижной фазой в БХ служила
смесь н-пропанол–NH3·H2O (7:3), обеспечивающая эффективное
разделение гистамина и гистидина ( 8,93). Для проявления пятен на
хроматограмме использовали 0,25 % раствор нингидрина в ацетоне.
Исследование влияния выбранных ПАВ показало, что
эффективность разделения гистамина и гистидина выше в случае
импрегнирования ПАВ в бумагу. При этом наибольшие факторы
разделения () достигнуты в случае импрегнирования ДДСNa с
парафином и ЦТАБ со ср-ОАПП.
Для оптимизации условий БХ в случае импрегнирования ПАВ в
бумагу изучили зависимость эффективности разделения от
концентрации парафина и ср-ОАПП в гексане. С увеличением
концентрации парафина с 0,05 % до 5 % эффективность разделения
увеличивается в 1,6 раз. Однако время хроматографирования в случае
5 % парафина значительно увеличивается. Поэтому, в качестве
оптимального выбрали 1 % раствор парафина. При этом время
хроматографирования составило 2–2,5 часа. В случае со ср-ОАПП с
увеличением его концентрации с 0,5 до 5 % эффективность разделения
растет, а затем при 10 % — уменьшается. В качестве оптимальной
концентрации для импрегнирования выбрали 5 % ср-ОАПП в гексане.
Для оптимизации концентрации ПАВ в растворе для
импрегнирования ХБ изучили зависимость Rf гистамина и гистидина
от концентрации ПАВ в интервале 0,02–1,00 мкмоль/см2. При этом
показано, что подвижность гистамина на бумагах с ДДСNa и ЦТАБ
повышается, а гистидина — повышается с ДДСNa и понижается с
ЦТАБ. Поэтому, эффективность разделения компонентов модельной
смеси выше на бумагах, импрегнированных ДДСNa (0,02–
0,75 мкмоль/см2).
Активирующий эффект гистамина в присутствии ДДСNa
увеличивается вплоть до концентрации 0,3 мкмоль\см2 ПАВ.
Увеличение концентрации ЦТАБ в растворе для импрегнирования
приводит к уменьшению активирующего эффекта гистамина. Поэтому,
импрегнирование ЦТАБом оказалось нецелесообразным.
Определение гистамина проводили непосредственно на ХБ,
импрегнированной ДДСNa, сорбционно-каталитическим методом
после БХ. Для оптимизации условий проведения индикаторной
реакции на ХБ после разделения методом БХ, была изучена
зависимость скорости реакции от рН в интервале от 5,0 до 7,5,
концентрации добавляемой Cu (II) от 1·10–4 до 60 мкг/мл и выбраны
pH 6,5 и 20 мкг/мл Cu (II). В оптимизированных условиях получена
градуировочная зависимость, которая позволяет определять гистамин
в интервале концентраций 1·10–12–5·10–11 М из 2 мкл анализируемого
раствора с сmin 8·10–13 М (сн 1·10–12 М, sr 0,08). Определению 10–11 М
гистамина не мешают 10–3 М 2, 2’–дипиридила, 10–2 М пиридина и
гистидина, а так же 10–3 М норадреналина и адреналина. При этом
показано, что импрегнирование ХБ ДДСNa не ухудшает селективность
определения.
Методика определения гистамина применена при анализе слюны. В
анализируемом образце слюны, разбавленной в 10 4 раз, найдено
(2,11 ± 0,53)·10–11 М гистамина по методу добавок и (2,34 ± 1,57)·10–
11
М гистамина по градуировочному графику при норме 2,20·10–13 М.
Скачать