Глюкоза Гексокиназная (Glucose Hexokinase Reagent Set)

Глюкоза Гексокиназная (Glucose Hexokinase Reagent Set)
Каталожный №
HTI-G240-100
HTI-G240-500
HTI-G240K-100
HTI-G240K-500
HTI-G7517-100
HTI-G7517-500
Reagent is stable for 21 days after opening.
Реагент стабилен 21 дней после вскрытия.
INTENDED USE
For the In Vitro quantitative determination of glucose in human serum or plasma.
Назначение
Набор предназначен для in vitro количественного определения общей
глюкозы в сыворотке и плазме человека.
Введение
Глюкоза – основной углевод, содержащийся в периферической крови.
Окисление глюкозы является основным источником клеточной энергии в
организме. Основной целью определения содержания глюкозы является
диагностика и лечение сахарного диабета. Повышенное содержание
глюкозы может быть связано с инсулинемией или инсулин-индуцированной
1
гипогликемией . Множество вторичных факторов также могут вызывать
повышенный уровень глюкозы в крови. К таким факторам относятся:
панкреатит, гипофизарная дисфункция или дисфункция щитовидной
железы, почечная недостаточность или заболевание печени.2
Энзиматический подход к определению содержания глюкозы основан на
использовании гексокиназной реакции, сопряженной с реакцией,
3
катализируемой глюкозо-6-фосфат дегидрогеназой.
Данный метод
предложен U.S. Center For Disease Control в качестве референсного метода
для определения глюкозы. и формирует состав реагента для определения
глюкозы.4
Принцип метода
ГК
Глюкоза + АТР --→ Г-6-Ф + АDP
Г6ФДГ
Г-6-Ф + NAD --→ 6-Фосфоглюконат + NADH
Гексокиназа (ГК) катализирует реакцию между глюкозой и
аденозинтрифосфатом (АТР) с
образованием глюкозо-6-фосфата и аденозиндифосфата (ADP). В
присутствии NAD фермент – глюкозо-6-фосфат дегидрогеназа (Г6ФДГ)
окисляет
глюкозо-6-фосфат
до
6-фосфоглюконата.
Увеличение
концентрации NADH прямо пропорционально концентрации глюкозы и
может быть измерено спектрофотометрически при 340 нм.
Реагент
Каждый набор содержит четыре емкости, содержащие 120 мл реагента
глюкозы (4х120 мл).
Инструкция вложена в набор.
Стандарт глюкозы (100 мг/дл= 5,55 мМоль/л)
Состав реагента
Аденозинтрифосфат: 3,8 ммоль/л
NAD+: 2,7 ммоль/л
Гексокиназа: 2000 Ед/л
Глюкозо-6-фосфат дегидрогеназа: 3000 Ед/л
Также инертные вещества для оптимальной работы системы.
Предостережения
1.
Только для in vitro диагностики.
2.
Реагент содержит азид натрия в качестве консерванта. Не
проглатывать. Избегать контакта с кожей и глазами.
3.
С образцами и контролями следует обращаться, как с
потенциально
опасными
веществами,
использовать
лабораторные инструкции по безопасности (NCCLS M29-T2).
Приготовление реагента
Реагент готов к использованию.
Хранение реагента
Закрытый реагент стабилен в течение всего срока годности, указанном на
этикетке упаковки, если хранится в соответствующих условиях: при 2-8ºС и
в защищенном от света месте. Реагент должен быть прозрачным и
бесцветным.
Открытый реагент стабилен в течение 21 дней при хранении в указанных
условиях.
Непригодный для анализа реагент
Реагент не использовать, если:
1.
Реагент имеет поглощение более 0,30 в ходе измерений против
воды при 340 нм.
2.
С использованием реагента не удается получить линейную
зависимость, а также воспроизвести величины для контрольных
образцов.
3.
В растворенном реагенте наблюдается появление мутности,
указывающей на загрязнение реагента.
Забор образца
1.
В качестве образца можно использовать как сыворотку, так и
плазму крови.
2.
Образцы сыворотки и плазмы без консервантов должны быть
отделены от клеток или кровяного сгустка в течение получаса
после забора.
3.
Глюкоза в отделенной от сгустка крови и негемолизированной
сыворотке стабильна до 8 часов при 25ºС и до 72 часов при
4ºС.5
4.
При заборе образца в пробирку с фторидом натрия гликолиз
ингибируется. Глюкоза в смеси фторида-оксалата натрия
INTRODUCTION
Glucose is the major carbohydrate present in the peripheral blood. The oxidation
of glucose is the major source of cellular energy in the body. Glucose
determinations are run primarily to aid in the diagnosis and treatment of diabetes
mellitus. Elevated glucose levels are mainly associated with insulinemia or
insulin-induced hypoglycemia.1 A number of secondary factors also can
contribute to elevated blood glucose levels. These include pancreatitis, pituitary
or thyroid dysfunction, renal failure and liver disease.2
An enzymatic approach for glucose determination involves hexokinase coupled
with glucose-6-phosphate dehydrogenase.3 A revision of this approach is
proposed by the U.S. Center For Disease Control as the reference method for
glucose and forms the basis of the reagent for glucose.4
PRINCIPLE
Glucose + ATP HK > G-6-P + ADP
G-6-P + NAD G6PDH > 6-Phosphogluconate + NADH
The enzymatic hexokinase (HK) catalyzes the reaction between glucose and
adenosine triphosphate (ATP) to form glucose-6-phosphate and adenosine
diphosphate (ADP). In the presence of NAD, the enzyme glucose-6-phosphate
dehydrogenase (G6PDH) oxidizes glucose-6-phosphate to 6-phosphogluconate.
The increase in NADH concentration is directly proportional to the glucose
concentration and can be measured spectrophotometrically at 34O nm.
REAGENT
Each kit contains Glucose Reagent
Instruction Insert.
Glucose standard (100 mg/dl)
REAGENT COMPOSITION
Adenosine triphosphate: 3.8 mmol/L
NAD+: 2.7 mmol/L
Hexokinase: 2000 IU/L
Glucose-6-phosphate dehydrogenase: 3000 IU/L
Also non-reactive chemicals for optimal system performance.
PRECAUTIONS
1. This reagent is for In Vitro diagnostic use only.
2. The reagent contains sodium azide as a preservative. Do not ingest. Avoid
skin and eye contact.
3. All specimens and controls should be handled as potentially infectious, use
safe laboratory procedures (NCCLS M29-T2).
REAGENT PREPARATION
The reagent is ready to use.
REAGENT STORAGE
Unopened Reagent is stable until the expiration date on its respective label,
when properly stored at 2 - 8°C and protected from light. Reagent should appear
clear and colorless.
Opened Reagent is stable for 21 days when properly stored at 2 - 8°C and
protected from light.
REAGENT DETERIORATION
Do not use if:
1. Reagent has an absorbance greater than 0.30 when measured against water
at 340 nm.
2. The reagent fails to recover stated control values or meet stated linearity.
3. The reagent develops turbidity, indicating contamination.
SPECIMEN COLLECTION
1. Either serum or plasma may be used.
2. Plasma or serum samples without preservatives should be separated from the
cells or clot within a half hour of being drawn.
3. Glucose in separated unhemolyzed serum is generally stable up to eight
hours at 25°C and up to 72 hours at 4°C.5
4. Glycolysis can be inhibited by collecting the specimen in sodium fluoride.
Glucose in a sodium fluoride-oxalate mixture is reported to be stable up to
24 hours at 25°C.5
G240-INS, Rev. 14.3
Page 1 of 3
Глюкоза Гексокиназная (Glucose Hexokinase Reagent Set)
Каталожный №
HTI-G240-100
HTI-G240-500
HTI-G240K-100
HTI-G240K-500
INTERFERING SUBSTANCES
Grossly lipemic or icteric sera may cause falsely elevated glucose values, and
may require the use of a serum blank. Young et al. give a complete list of drug
and other substances that may affect glucose values.6
MATERIALS PROVIDED
1. Glucose HK Reagent
2. Glucose standard (100 mg/dl)
MATERIALS REQUIRED BUT NOT PROVIDED
1. Accurate pipetting devices.
2. Timer.
3. Test tubes and rack.
4. Spectrophotometer capable of reading at 340 nm.
5. Heating block or water bath (37°C).
AUTOMATED PROCEDURE
Refer to specific instrument application instructions.
MANUAL PROCEDURE
1. Appropriately label tubes: reagent blank, standard, patient sample, etc.
2. Pipette 1.0 ml of the glucose reagent into all tubes and prewarm to 37°C.
3. Add 0.005 ml (5 µl) of sample to respective tubes. Mix well. Incubate all tubes
at 37°C for five minutes.
4. After incubation, zero the spectrophotometer with reagent blank at 340 nm.
5. Read and record the absorbance of all tubes.
•
MULTI-CALIBRATOR MAY BE USED TO REPLACE STANDARD.
LIMITATIONS
The procedure is linear to 500 mg/dl (27.8 mmol/L) Specimens above this limit
must be diluted 1:1 with saline, re-run and the result multiplied by two (2) to
compensate for the dilution.
CALIBRATION
An aqueous based standard is provided. The use of a serum-based calibrator is
recommended.
QUALITY CONTROL
It is recommended that both normal and abnormal quality control sera be used
routinely.
CALCULATIONS
Glucose results are expressed as mg/dl (mmol/L)
Abs. = absorbance at 340 nm
HTI-G7517-100
HTI-G7517-500
стабильна до 24 часов при 25ºС.5
Влияние других соединений
Выраженно липемичные и иктеричные сыворотки являются причиной
завышенных результатов измерения концентрации глюкозы, они требуют
наличия холостой пробы. Young и соавт. предложили полный список
лекарств и других веществ, влияющих на результаты определения
концентрации глюкозы.6
Поставляемые материалы
1.
Гексокиназный реагент глюкозы
2.
Стандарт глюкозы (100 мг/дл)
Необходимые, но не поставляемые материалы
1.
Автоматические пипетки
2.
Таймер
3.
Пробирки
4.
Спектрофотометр, измеряющий поглощение при 340 нм.
5.
Термостатируемый блок или водяная баня (37ºС)
Автоматический метод определения
Процедура проведения – см. инструкцию к анализатору.
Ручной метод определения
1.
Обозначить пробирки: холостая проба реагента, стандарт,
образец пациента и т.д.
2.
Внести 1,0 мл реагента глюкозы во все пробирки и
предварительно нагреть их до 37ºС.
3.
Внести 0,005 мл (5 мкл) образца в соответствующие пробирки.
Хорошо перемешать. Инкубировать все пробирки при 37ºС в
течение 5 минут.
4.
После инкубирования, обнулить спектрофотометр по холостой
пробе реагента при 340 нм.
5.
Измерить и зафиксировать поглощение во всех пробирках.
•
УНИВЕРСАЛЬНЫЙ КАЛИБРАТОР МОЖЕТ ИСПОЛЬЗОВАТЬСЯ
ВМЕСТО СТАНДАРТА.
Ограничения
Линейная зависимость измерений наблюдается для концентрации глюкозы
до 500 мг/дл (27,8 ммоль/л). Образцы с содержанием глюкозы более 500
мг/дл должны быть разведены 1:1 солевым раствором, измерения
проведены вновь, конечный результат необходимо умножить на 2 для
корректировки разведения.
Контроль качества
Рекомендуется использование в рутинной практике контрольных сывороток
с концентрацией глюкозы в норме и патологии для контроля качества
измерений.
Результаты
Содержание глюкозы выражено в мг/дл (ммоль/л)
Аbs. = Поглощение при 340 нм
А(пациент ) х Концентрация стандарта (мг/дл) = Концентрация глюкозы
А(стандарт)
(мг/дл)
Пример:
А (пациент) = 0,155
А (стандарт) = 0,164
0,155 х 100 = 93 мг/дл
0,165
Note: To convert the results into SI units (mmol/L), multiply the result (mg/dl) by
0.0556.
EXPECTED VALUES5
Normal range is reported to be 65-110 mg/dl. This range should serve only as a
guideline. It is recommended that each laboratory establish its own range of
expected values, since differences exist between instruments, laboratories, and
local populations. In a study of 50 samples, the expected values were found to
be 65 - 112 mg/dl.
PERFORMANCE CHARACTERISTICS
1. Linearity: 500 mg/dl.
2. Sensitivity: Based on an instrument resolution of 0.001 absorbance, this
procedure has a sensitivity of 0.30 mg/dl.
3. Comparison: Glucose (HK) was compared to a commercially available
glucose hexokinase method with the resulting linear regression equation of
2
Y = 0.999x + 0.44. Coefficient of correlation R = 0.999. Thirty-two patient
sera and controls ranging from 46 mg/dl to 376 mg/dl were assayed by the
two methods.
4. Precision:
G240-INS, Rev. 14.3
Примечание: Для перевода результатов в SI единицы (ммоль/л),
необходимо умножить результат (мг/дл) на 0,0556.
Ожидаемые значения5
Нормальный диапазон значений – 65-100 мг/дл. Данный диапазон значений
служит только в качестве руководства.
Рекомендуется наличие в каждой лаборатории собственных нормальных
уровней концентрации глюкозы, т.к. существуют различия между
приборами, лабораториями и локальными популяциями. При исследовании
50 образцов был получен диапазон значений 65-112 мг/дл. (3,61-6,22
мМоль/л).
Характеристики теста
1.
Линейность: 500 мг/дл (дои27,75 мМоль/л)
2.
Чувствительность:
Учитывая разрешающую способность прибора – 0,001,
чувствительность данного метода – 0,30 мг/дл.
3.
Сравнение: В результате сравнения результатов, полученных с
использованием данного реагента ГК и коммерческой ГК было
получено
регрессионное
уравнение:
у=0,999х+0,44.
Коэффициент корреляции R2 = 0,999. В ходе исследования были
проанализированы 32 сыворотки пациентов и контроли,
диапазон полученных значений от 46 мг/дл до 376 мг/дл.
4.
Точность:
Внутри серии
Сыворотка 1
Сыворотка 2
Среднее (мг/дл)
93
301
Стд. Отклонение (мг/дл)
1,58
2,59
Page 2 of 3
Глюкоза Гексокиназная (Glucose Hexokinase Reagent Set)
Каталожный №
HTI-G240-100
HTI-G240-500
HTI-G240K-100
HTI-G240K-500
C.V.(%)
HTI-G7517-100
HTI-G7517-500
1,70
0,90
От серии к серии
Сыворотка 1
Сыворотка 2
Среднее (мг/дл)
93
300
Стд. Отклонение (мг/дл)
1,12
2,91
C.V.(%)
1,20
1,00
REFERENCES
1. Cooper, G.R., CRC Crit. Rev. Clin. Lab. Sci. 4:101 (1973).
2. Henry, J.B., "Clinical Diagnosis and Management by Laboratory Method."
W.B. Saunders and Company, Philadelphia, PA, p. 153 (1979).
3. Barthelmai, W., and Czek, R., Klin. Wochenscht., 40:585 (1962).
4. A Proposed Method for Determining Glucose Using Hexokinase and Glucose6-phosphate Dehydrogenase, Public Health Service, Center for Disease
Control, (1976).
5. Tietz, N.W., Fundamentals of Clinical Chemistry, 2nd. Ed., W.B. Saunders
Co., Philadelphia, PA 243 (1976).
6. Young, D.S. et. al.: Clin. Chem. 21:5 (1975).
G240-INS, Rev. 14.3
Page 3 of 3