ÁÈÎÔÈÇÈÊÀ ÓÄÊ 577.113.6 Ï. Î. Âàðäåâàíÿí, À. Ï. Àíòîíÿí, Ã. Ñ. Ñàðêèñÿí, Ñ. Ã. Àðóòþíÿí Èññëåäîâàíèå âçàèìîäåéñòâèÿ áðîìèñòîãî ýòèäèÿ ñ ÄÍÊ â ïðèñóòñòâèè cis-DDP (Ïðåäñòàâëåíî ÷ë.-êîð. ÍÀÍ ÐÀ Ý.Ñ. Ãåâîðêÿíîì 6/VI 2008) Êëþ÷åâûå ñëîâà: êîìïëåêñû ÄÍÊ-cis-DDP-ÁÝ, òåìïåðàòóðà ïëàâëåíèÿ, øèðèíà èíòåðâàëà ïëàâëåíèÿ Îïðåäåëåíèå ñòàáèëèçèðóþùåãî èëè äåñòàáèëèçèðóþùåãî äåéñòâèÿ ðàçëè÷íûõ íèçêîìîëåêóëÿðíûõ ñîåäèíåíèé íà íàòèâíóþ (äâóõöåïî÷å÷íóþ) ñòðóêòóðó ÄÍÊ èìååò áîëüøîå çíà÷åíèå, ïîñêîëüêó ÄÍÊ ìîæåò ìåíÿòü ñâîþ ñòðóêòóðó è â íåêîòîðûõ ñëó÷àÿõ èç äâóõöåïî÷å÷íîãî (äö) ïåðåõîäèòü â îäíîöåïî÷å÷íîå (îö) ñîñòîÿíèå [1,2]. ÄÍÊ â êëåòêå îêðóæåíà ðàçëè÷íûìè ìîëåêóëàìè è â ïðîöåññå ðåàëèçàöèè áèîëîãè÷åñêèõ ôóíêöèé îáðàçóåò ñ ýòèìè ñîåäèíåíèÿìè ðàçëè÷íûå êîìïëåêñû [1-5]. Íèçêîìîëåêóëÿðíûå ñîåäèíåíèÿ ñ ÄÍÊ ñâÿçûâàþòñÿ êîâàëåíòíûì èëè íåêîâàëåíòíûì ñïîñîáàìè. Íåñìîòðÿ íà ðàçëè÷èÿ â ñïîñîáàõ ñâÿçûâàíèÿ ëèãàíäîâ, èíòåãðàëüíûé ðåçóëüòàò – ñòàáèëèçàöèÿ äö- èëè îö-ñòðóêòóðû ÄÍÊ ìîæåò áûòü ñõîæà.  ÷àñòíîñòè, êîâàëåíòíî ñâÿçûâàþùååñÿ ñîåäèíåíèå cis-äèõëîðäèàìèíïëàòèíà (cis-DDP), ÿâëÿþùååñÿ òàêæå ïðîòèâîîïóõîëåâûì ïðåïàðàòîì, ïðè íèçêèõ êîíöåíòðàöèÿõ ñòàáèëèçèðóåò äö-ñòðóêòóðó ÄÍÊ [6-10]. Àíàëîãè÷íîå âëèÿíèå èìååò íåêîâàëåíòíî ñâÿçûâàþùååñÿ ñîåäèíåíèå áðîìèñòûé ýòèäèé (ÁÝ) [5]. Èçâåñòíî, ÷òî ïðè íèçêèõ êîíöåíòðàöèÿõ cis-DDP îáðàçóåò êîâàëåíòíûå ñøèâêè ñ ãóàíèíîâûìè îñíîâàíèÿìè ÄÍÊ, óäàëåííûìè äðóã îò äðóãà íà íåñêîëüêî ñîò îñíîâàíèé âäîëü ìàêðîìîëåêóëû, ÷òî ìîæåò ïðèâîäèòü ê îáðàçîâàíèþ ïñåâäîêîëüöåâûõ ñòðóêòóð â ÄÍÊ [11]. Âîçìîæíî òàêæå îáðàçîâàíèå ñøèâîê ìåæäó îòäåëüíûìè ìîëåêóëàìè ÄÍÊ (ìåæìîëåêóëÿðíûå ñøèâêè) [7,8]. Ñëåäñòâèåì ýòîãî ÿâëÿåòñÿ ïîäàâëåíèå ðåïëèêàöèè è òðàíñêðèïöèè ÄÍÊ, ÷åì è îáóñëîâëåíà öèòîòîêñè÷íîñòü cis-DDP [11-13]. ÁÝ æå ïðè 2 3 6 íèçêèõ êîíöåíòðàöèÿõ èíòåðêàëèðóåò â ïëîñêîñòü ìåæäó ïàðàìè îñíîâàíèé ÄÍÊ, âñëåäñòâèå ÷åãî âîçíèêàåò äîïîëíèòåëüíîå ñòýêèíã-âçàèìîäåéñòâèå, ÷òî ïðèâîäèò ê ñòàáèëèçàöèè äö-ñòðóêòóðû. Ýòîò ëèãàíä ÿâëÿåòñÿ àíòèáàêòåðèàëüíûì, à òàêæå ìóòàãåííûì âåùåñòâîì (ò.å. îáëàäàåò îïðåäåëåííîé öèòîòîêñè÷íîñòüþ) [5]. Èçâåñòíûå â íàñòîÿùåå âðåìÿ èññëåäîâàíèÿ îòíîñÿòñÿ ê îòäåëüíîìó âçàèìîäåéñòâèþ òîãî èëè èíîãî ëèãàíäà ñ ÄÍÊ, â òî âðåìÿ êàê ñîâìåñòíîå ñâÿçûâàíèå ðàçëè÷íûõ ñîåäèíåíèé ñ ÄÍÊ ïðàêòè÷åñêè ìàëî èçó÷åíî. Ñ ýòîé òî÷êè çðåíèÿ îïðåäåëåííûé èíòåðåñ ïðåäñòàâëÿåò èññëåäîâàíèå ñîâìåñòíîãî ñâÿçûâàíèÿ cis-DDP è ÁÝ ñ ÄÍÊ. Öåëüþ äàííîé ðàáîòû ÿâèëîñü èññëåäîâàíèå ïëàâëåíèÿ êîìïëåêñîâ ÄÍÊ-cis-DDP-ÁÝ è îïðåäåëåíèå ïàðàìåòðîâ - òåìïåðàòóðû (Tm ) è øèðèíû èíòåðâàëà ïëàâëåíèÿ (¢ T ) äâîéíûõ êîìïëåêñîâ.  ðàáîòå áûëè èñïîëüçîâàíû ÄÍÊ òèìóñà òåëåíêà ôèðìû ”Sigma” (ÑØÀ), ÁÝ, ”Serva” (Ãåðìàíèÿ), cis-DDP (Sigma Chem. Comp., ÑØÀ), NaCl, NaClO4 (îñ. ÷). Âñå ïðåïàðàòû èñïîëüçîâàíû áåç äîïîëíèòåëüíîé î÷èñòêè. Êîíöåíòðàöèè ÄÍÊ è ÁÝ áûëè îïðåäåëåíû àáñîðáöèîííûì ìåòîäîì ñ èñïîëüçîâàíèåì ñëåäóþùèõ êîýôôèöèåíòîâ ýêñòèíêöèè: äëÿ ÄÍÊ òèìóñà òåëåíêà – "260 = 6 6 0 0 Ì¡1 ñì¡1 , äëÿ ÁÝ – "480 = 5 6 0 0 Ì¡1 ñì¡1 . Êîíöåíòðàöèþ cis-DDP ïîëó÷èëè ìåòîäîì âçâåøèâàíèÿ, ñ äàëüíåéøèì ïðèãîòîâëåíèåì êîíöåíòðèðîâàííîãî ðàñòâîðà. Ñîîòâåòñòâóþùèå ðàáî÷èå êîíöåíòðàöèè cis-DDP ïîëó÷èëè ðàçáàâëåíèåì èñõîäíîãî êîíöåíòðèðîâàííîãî ðàñòâîðà. Èññëåäîâàíèÿ ïðîâîäèëèñü â áóôåðå, ñîäåðæàùåì 1 0 ¡2 ìîëü NaClO4 + 1 0 ¡3 ìîëü NaCl, èîííàÿ ñèëà ñîñòàâëÿëà – ¹ = 0 :0 1 M Na+ , pH 6.9. Ñïåêòðîôîòîìåòðè÷åñêèå èçìåðåíèÿ ïðîâîäèëèñü íà ñïåêòðîôîòîìåòðå PYE Unicam-SP8-100 (Àíãëèÿ). Èñïîëüçîâàëè êâàðöåâûå êþâåòû äëèíîé îïòè÷åñêîãî ïóòè 1 ñì. Ïëàâëåíèå ÄÍÊ è ÄÍÊ-cis-DDP-ÁÝ êîìïëåêñîâ îñóùåñòâëÿëîñü àáñîðáöèîííûì ìåòîäîì ïðè äëèíå âîëíû ¸ = 2 6 0 íì. Çíà÷åíèÿ ïîãëîùåíèé îáðàçöîâ âûâîäèëèñü íà äèñïëåé êîìïüþòåðà ñ ïîìîùüþ ïðîãðàììû, îáðàáîòàííîé Â. Ýëáàêÿíîì â ñðåäå ïðîãðàììèðîâàíèÿ LabVIEW 7.0. Ïðè ïëàâëåíèè êîìïëåêñîâ íàãðåâ ðàñòâîðîâ, ïîìåùåííûõ â òåðìîñòàòèðîâàííûå êþâåòû ñ ãåðìåòè÷åñêè çàêðûòûìè òåôëîíîâûìè ïðîáêàìè, îñóùåñòâëÿëñÿ ñî ñêîðîñòüþ 0.25 ãðàä/ìèí ñ ïîìîùüþ ïðèáîðà SPX-876 Temperature Programme Controller (Àíãëèÿ). Òåìïåðàòóðà ðàñòâîðîâ îáðàçöîâ ìåíÿëàñü îò 45 äî 98o Ñ. Ïàðàìåòðû ïëàâëåíèÿ êîìïëåêñîâ – Tm è ¢ T îïðåäåëÿëèñü, êàê îïèñàíî â [3]. Ðàçìåð òî÷åê ñîîòâåòñòâóåò ñðåäíåìó çíà÷åíèþ 5-6 èçìåðåíèé. Îøèáêà ýêñïåðèìåíòîâ ñîñòàâëÿëà » 5 %. Èññëåäîâàíèÿ êîìïëåêñîâ ÁÝ ñ ÄÍÊ â øèðîêîì èíòåðâàëå èçìåíåíèÿ êîíöåíòðàöèè ëèãàíäà (0 < rb · 0 :4 ) âûÿâèëè, ÷òî ïðè çíà÷åíèÿõ rb · 0 :1 (rb = ÁÝ/ÄÍÊ) Tm è ¢ T êîìïëåêñîâ âîçðàñòàþò (ðèñ. 1). Ïðè äàëüíåéøåì 2 3 7 óâåëè÷åíèè êîíöåíòðàöèè ÁÝ Tm êîìïëåêñîâ ïðîäîëæàåò âîçðàñòàòü, â òî âðåìÿ êàê ¢ T , ïðîõîäÿ ÷åðåç ñëàáî âûðàæåííûé ìàêñèìóì (0 :1 < rb · 0 :1 5 ), óìåíüøàåòñÿ. Ïðè íèçêèõ êîíöåíòðàöèÿõ îñíîâíûì ñïîñîáîì ñâÿçûâàíèÿ ÁÝ ñ ÄÍÊ ÿâëÿåòñÿ èíòåðêàëÿöèÿ, ÷òî ïðèâîäèò ê ñòàáèëèçàöèè äö-ñòðóêòóðû ÄÍÊ è óâåëè÷åíèþ Tm . Âîçðàñòàíèå æå ¢ T êîìïëåêñîâ îáóñëîâëåíî òåì, ÷òî â õîäå ïëàâëåíèÿ ïðîèñõîäèò ïåðåðàñïðåäåëåíèå ñâÿçàííûõ ìîëåêóë ëèãàíäà ñ ðàñïëàâëåííûõ îö-ó÷àñòêîâ íà äö-ó÷àñòêè ÄÍÊ. Ïðè óâåëè÷åíèè êîíöåíòðàöèè ÁÝ ïåðåðàñïðåäåëåíèå ïðåêðàùàåòñÿ, âñëåäñòâèå ÷åãî ¢ T êîìïëåêñîâ âûõîäèò íà ïëàòî è ïðè áîëåå âûñîêèõ êîíöåíòðàöèÿõ ÁÝ íà÷èíàåò óìåíüøàòüñÿ. Ýòîò ôåíîìåí îáóñëîâëåí òåì, ÷òî ÁÝ ñ ÄÍÊ íà÷èíàåò ñâÿçûâàòüñÿ è äðóãèìè ñïîñîáàìè [5,14]. Ðèñ. 1. Êðèâûå çàâèñèìîñòè Tm (à) è ¢ T (á) îò rb êîìïëåêñîâ ÁÝ-ÄÍÊ, ãäå rb =ÁÝ/ÄÍÊ. ¹1 0 ¡2 Ì Na+ , pH=6,9. Ïðè ýòîì Tm êîìïëåêñîâ óìåíüøàåòñÿ â ðåçóëüòàòå äâóõ ïðîòèâîïîëîæíûõ ýôôåêòîâ: èíòåðêàëèðîâàííûå ìîëåêóëû ñòàáèëèçèðóþò, à ñâÿçàííûå äðóãèìè ñïîñîáàìè (ïîëóèíòåðêàëèðîâàííûå, à òàêæå ñâÿçàííûå ñ îöó÷àñòêàìè ÄÍÊ) ìîëåêóëû ÁÝ äåñòàáèëèçèðóþò äö-ñòðóêòóðó ÄÍÊ. Ïî äîñòèæåíèè ðàâíîâåñèÿ ýòèõ ýôôåêòîâ ¢ T êîìïëåêñîâ óìåíüøàåòñÿ, à âîçðàñòàíèå Tm ïðåêðàùàåòñÿ. Ïðè âûñîêèõ êîíöåíòðàöèÿõ äåñòàáèëèçèðóþùèé ýôôåêò ÁÝ íà äö-ÄÍÊ ïðåâàëèðóåò, âñëåäñòâèå ÷åãî Tm êîìïëåêñîâ óìåíüøàåòñÿ, à ¢ T ðåçêî âîçðàñòàåò, ïîñêîëüêó íà÷èíàåòñÿ ïåðåðàñïðåäåëåíèå ñâÿçàííûõ ìîëåêóë ÁÝ ñ äö-ó÷àñòêîâ ÄÍÊ íà îö-ó÷àñòêè. Ïðè íèçêèõ êîíöåíòðàöèÿõ Tm è ¢ T êîìïëåêñîâ cis-DDP – ÄÍÊ âîçðàñòàþò ïî ñðàâíåíèþ ñ ïàðàìåòðàìè ïëàâëåíèÿ ÷èñòîé ÄÍÊ, êàê ýòî âèäíî íà ðèñ. 1, ãäå ïðåäñòàâëåíû êðèâûå çàâèñèìîñòè Tm è ¢ T îò ¡ lg(C), ( ¡ lg(C) – îòðèöàòåëüíûé ëîãàðèôì îòíîøåíèÿ êîíöåíòðàöèé cisDDP/ÄÍÊ â ðàñòâîðå [11]).  ðàìêàõ ñóùåñòâóþùèõ òåîðèé îáúÿñíèòü 2 3 8 ýòî ÿâëåíèå íåâîçìîæíî. Áûëî âûñêàçàíî ïðåäïîëîæåíèå î âîçìîæíîñòè îáðàçîâàíèÿ ïñåâäîêîëüöåâûõ ñòðóêòóð â ÄÍÊ, ÷òî â äàëüíåéøåì ïîëó÷èëî îáîñíîâàíèå â ðàáîòå [12]. Íà îñíîâàíèè äàííûõ, ïîëó÷åííûõ äëÿ êîìïëåêñîâ ÄÍÊ ñ cis-DDP â øèðîêîì èíòåðâàëå èçìåíåíèÿ êîíöåíòðàöèè ïîñëåäíåãî, áûëî âûÿâëåíî, ÷òî ìåõàíèçìû âçàèìîäåéñòâèÿ ýòîãî ïðåïàðàòà ñ ÄÍÊ ðàçëè÷íû, ÷òî îòðàæàåòñÿ íà Tm è ¢ T êîìïëåêñîâ ñëåäóþùèì îáðàçîì (ðèñ. 2, à, á, ñïëîøíûå ëèíèè): 1) â èíòåðâàëå èçìåíåíèÿ êîíöåíòðàöèîííîãî ñîîòíîøåíèÿ 1 0 ¡9 · C · 1 0 ¡8 (ãäå C = cis-DDP/ÄÍÊ) Tm è ¢ T êîìïëåêñîâ çíà÷èòåëüíî óâåëè÷èâàþòñÿ ïî ñðàâíåíèþ ñ T0 è ¢ T0 ÷èñòîé ÄÍÊ.  ýòîì èíòåðâàëå èçìåíåíèÿ rb â ìîëåêóëå ÄÍÊ îáðàçóþòñÿ êîëüöåâûå ñòðóêòóðû; 2) â èíòåðâàëå èçìåíåíèÿ 1 0 ¡8 · C · 1 0 ¡5 Tm è ¢ T êîìïëåêñîâ ìîíîòîííî óìåíüøàþòñÿ, ïîñêîëüêó óâåëè÷åíèå ÷èñëà êîëüöåâûõ ñòðóêòóð ïðèâîäèò ê ðàçðûâó âîäîðîäíûõ ñâÿçåé è îáëåã÷åíèþ ïëàâëåíèÿ êîìïëåêñîâ.  èíòåðâàëå C > 1 0 ¡5 Tm êîìïëåêñîâ ðåçêî óìåíüøàåòñÿ, à ¢ T óâåëè÷èâàåòñÿ â ðåçóëüòàòå îáðàçîâàíèÿ îö- è äö-öåïî÷å÷íûõ (äö-) ðàçðûâîâ â ÄÍÊ ñ ïîñëåäóþùèì ôîðìèðîâàíèåì êîðîòêèõ ëèíåéíûõ ôðàãìåíòîâ ÄÍÊ. Ðèñ. 2. Êðèâûå çàâèñèìîñòè Tm (à) è ¢ T (á) îò ¡ lg(C) êîìïëåêñîâ ÁÝ ñ cis-DDP – ÄÍÊ. Ñïëîøíàÿ ëèíèÿ ñîîòâåòñòâóåò çàâèñèìîñòÿì Tm è ¢ T îò ¡ lg(C) êîìïëåêñîâ · C · 1 0 ¡5 . Òî÷êè ñîîòâåòñòâóþò êîìïëåêñàì ÁÝ ñ cis-DDP – ÄÍÊ â èíòåðâàëå èçìåíåíèÿ 0 · rb · 0 :4 . Èîííàÿ ñèëà ðàñòâîðà 1 0 ¡2 Ì Na+ , pH=6.9. cis-DDP – ÄÍÊ â èíòåðâàëå èçìåíåíèÿ C – 1 0 ¡9 Íà ðèñ. 2 ïðèâåäåíû òàêæå çàâèñèìîñòè Tm (à) è ¢ T (á) îò ¡lg(C) (C=cisDDP/ÄÍÊ) (òî÷êè íà ñîîòâåòñòâóþùèõ êðèâûõ) ïðè êîìïëåêñîîáðàçîâàíèè cis-DDP-ÄÍÊ ñ ÁÝ. Êîíöåíòðàöèîííîå ñîîòíîøåíèå ÁÝ/ÄÍÊ ìåíÿëîñü â èíòåðâàëå 0 · rb · 0 :4 . Ïðè ñîâìåñòíîì âçàèìîäåéñòâèè ïðè íèçêèõ êîíöåíòðàöèÿõ êàê cis-DDP, òàê è ÁÝ Tm è ¢ T êîìïëåêñîâ óâåëè÷èâàþòñÿ 2 3 9 íàìíîãî áîëüøå, ÷åì ïðè îòäåëüíîì ñâÿçûâàíèè, õîòÿ ýôôåêò óñèëåíèÿ íå ÿâëÿåòñÿ ïðîñòîé ñóììîé âîçäåéñòâèÿ ýòèõ âåùåñòâ â îòäåëüíîñòè íà ÄÍÊ. Íåîáõîäèìî îòìåòèòü, ÷òî äàííûå, ïîëó÷åííûå ïðè êîìïëåêñîîáðàçîâàíèè ÁÝ ñ cis-DDP – ÄÍÊ ïðàêòè÷åñêè íå îòëè÷àëèñü îò àíàëîãè÷íûõ äàííûõ, ïîëó÷åííûõ â ñëó÷àå, êîãäà ÁÝ – ÄÍÊ êîìïëåêñû èíêóáèðîâàëèñü â ïðèñóòñòâèè cis-DDP â òå÷åíèå 48 ÷. Ýòî îáóñëîâëåíî òåì, ÷òî cis-DDP êîâàëåíòíî ñâÿçûâàåòñÿ ñ ÄÍÊ è ïðè èíêóáàöèè ñâÿçàííûå ìîëåêóëû ÁÝ ïðàêòè÷åñêè íå ïðåïÿòñòâóþò ñïåöèôè÷åñêîìó ñâÿçûâàíèþ ìîëåêóë cis-DDP ñ ÄÍÊ. Êàê âèäíî èç ðèñ. 2, ïðè óâåëè÷åíèè rb Tm êîìïëåêñîâ íà÷èíàåò óìåíüøàòüñÿ â èíòåðâàëå èçìåíåíèÿ Ñ – 1 0 ¡8 · C · 1 0 ¡5 , ïðè ýòîì ïîíèæåíèå Tm òðîéíîé ñèñòåìû ÄÍÊ – cis-DDP – ÁÝ íàìíîãî áîëüøå, ÷åì â ñëó÷àå îòäåëüíûõ âçàèìîäåéñòâèé ýòèõ ëèãàíäîâ. Ýòî óêàçûâàåò íà òî, ÷òî ïîä âëèÿíèåì cis-DDP äåñòàáèëèçèðóþùåå âëèÿíèå ÁÝ íà äö-ÄÍÊ óñèëèâàåòñÿ. Íà ýòî óêàçûâàåò è òîò ôàêò, ÷òî ¢ T òðîéíîé ñèñòåìû ïðîäîëæàåò óâåëè÷èâàòüñÿ, íåñìîòðÿ íà òî, ÷òî ýòîò ïàðàìåòð ïðè îòäåëüíîì ñâÿçûâàíèè ÁÝ ïðîõîäèò ÷åðåç íå î÷åíü âûðàæåííûé ìàêñèìóì (ðèñ. 1, á) ïðè îòíîñèòåëüíî áîëüøèõ êîíöåíòðàöèÿõ è íà÷èíàåò óìåíüøàòüñÿ. Âåðîÿòíî, â èíòåðâàëå 1 0 ¡8 · C · 1 0 ¡5 ïðè êîìïëåêñîîáðàçîâàíèè cisDDP ñ ÄÍÊ âîäîðîäíûå ñâÿçè ðàçðûâàþòñÿ, íå èñêëþ÷àþòñÿ òàêæå îöðàçðûâû ñàõàðî-ôîñôàòíîãî îñòîâà ÄÍÊ, ÷òî ïðèâîäèò ê äåñòàáèëèçàöèè äö-ñòðóêòóðû ÄÍÊ. Âñëåäñòâèå ýòîãî ÁÝ ïðåäïî÷òèòåëüíî ñâÿçûâàåòñÿ ñ äåíàòóðèðîâàííîé ÄÍÊ (ïðåâàëèðóåò äåñòàáèëèçèðóþùåå âëèÿíèå) è èççà ïåðåðàñïðåäåëåíèÿ ìîëåêóë ÁÝ ñ äö- íà îö-ó÷àñòêè ¢ T êîìïëåêñîâ óâåëè÷èâàåòñÿ. Ïðè îòäåëüíîì ñâÿçûâàíèè cis-DDP ñ ÄÍÊ â ýòîì èíòåðâàëå èçìåíåíèÿ Ñ íà êðèâîé çàâèñèìîñòè ¢ T îò ¡ lg(C) îáíàðóæèâàåòñÿ ÿðêî âûðàæåííûé ìèíèìóì âñëåäñòâèå îáëåã÷åíèÿ ïåðåõîäà ñïèðàëü-êëóáîê êîìïëåêñîâ (ðèñ. 2, á, ñïëîøíàÿ ëèíèÿ). Ïðè äàëüíåéøåì óâåëè÷åíèè rb îáíàðóæèâàåòñÿ âîçðàñòàíèå Tm .  ýòîì èíòåðâàëå èçìåíåíèÿ ñîîòíîøåíèÿ cis-DDP/ÄÍÊ îáðàçóþòñÿ êîðîòêèå ëèíåéíûå ôðàãìåíòû, âñëåäñòâèå ÷åãî Tm êîìïëåêñîâ ïðè îòäåëüíîì âçàèìîäåéñòâèè cis-DDP ñ ÄÍÊ óìåíüøàåòñÿ. Ïîñêîëüêó ïðè ýòîì äö-ñòðóêòóðà ôðàãìåíòîâ ÄÍÊ âîññòàíàâëèâàåòñÿ, òî ìîëåêóëû ÁÝ íà÷èíàþò èíòåðêàëèðîâàòü â ýòè ñòðóêòóðû, ÷òî ïðèâîäèò ê ñòàáèëèçàöèè äö-ÄÍÊ è âîçðàñòàíèþ Tm òðîéíîé ñèñòåìû cis-DDP – ÄÍÊ – ÁÝ.  ýòèõ óñëîâèÿõ ¢ T òàêæå óâåëè÷èâàåòñÿ èç-çà âîçðàñòàíèÿ GC ãåòåðîãåííîñòè óêàçàííûõ ôðàãìåíòîâ, îäíàêî ýòîò ýôôåêò âûðàæåí íå ÿðêî. Òàêèì îáðàçîì, íà îñíîâàíèè ïîëó÷åííûõ äàííûõ ìîæíî çàêëþ÷èòü: ² ïðè íèçêèõ êîíöåíòðàöèÿõ cis-DDP è ÁÝ ïàðàìåòðû ïëàâëåíèÿ ÄÍÊ ìåíÿþòñÿ â îäíîì è òîì æå íàïðàâëåíèè, ïðè ýòîì íàáëþäàåòñÿ âçàèìíîå 2 4 0 óñèëåíèå ñòàáèëèçèðóþùåãî âëèÿíèÿ ýòèõ ñîåäèíåíèé íà äö-ñòðóêòóðó ÄÍÊ, ² ïðè îòíîñèòåëüíî âûñîêèõ çíà÷åíèÿõ rb íàáëþäàåòñÿ ïðîòèâîïîëîæíîå âëèÿíèå ýòèõ ñîåäèíåíèé íà Tm è ¢ T òðîéíîé ñèñòåìû ïðè ïåðåõîäå ñïèðàëü–êëóáîê ÄÍÊ, ² íåñìîòðÿ íà òî, ÷òî cis-DDP îáðàçóåò ñ ÄÍÊ íåîáðàòèìûå êîâàëåíòíûå ñâÿçè, îáðàòèìî ñâÿçûâàþùååñÿ ñîåäèíåíèå ÁÝ îïðåäåëåííûì îáðàçîì âëèÿåò íà ñòðóêòóðó êîìïëåêñîâ cis-DDP–ÄÍÊ, ² â îïðåäåëåííûõ óñëîâèÿõ ýòè ñîåäèíåíèÿ ìîãóò èìåòü ñèíåðãåòè÷åñêîå, à â äðóãèõ – àíòàãîíèñòè÷åñêîå âëèÿíèå ïðè ñîâìåñòíîì âçàèìîäåéñòâèè ñ ÄÍÊ. Åðåâàíñêèé ãîñóäàðñòâåííûé óíèâåðñèòåò Ï. Î. Âàðäåâàíÿí, À. Ï. Àíòîíÿí, Ã. Ñ. Ñàðêèñÿí, Ñ. Ã. Àðóòþíÿí Èññëåäîâàíèå âçàèìîäåéñòâèÿ áðîìèñòîãî ýòèäèÿ ñ ÄÍÊ â ïðèñóòñòâèè cis-DDP Èçó÷åíî ïëàâëåíèå êîìïëåêñîâ ÄÍÊ-cis-DDP ñ áðîìèñòûì ýòèäèåì â øèðîêîì èíòåðâàëå èçìåíåíèÿ êîíöåíòðàöèé îáîèõ ëèãàíäîâ. Ïîêàçàíî, ÷òî â ñëó÷àå íèçêèõ êîíöåíòðàöèé óêàçàííûõ ëèãàíäîâ è èõ ñîâìåñòíîì äåéñòâèè òåìïåðàòóðà ïëàâëåíèÿ êîìïëåêñîâ – Tm è èíòåðâàë ïëàâëåíèÿ – ¢ T âîçðàñòàþò â åùå áîëüøåé ìåðå, ÷åì ïðè èõ îòäåëüíîì ñâÿçûâàíèè, ïðè÷åì âåëè÷èíû Tm è ¢ T íå ÿâëÿþòñÿ àëãåáðàè÷åñêîé ñóììîé âåëè÷èí, ñîîòâåòñòâóþùèõ îòäåëüíîìó ñâÿçûâàíèþ. ä. Ð. ì³ñ¹¨³ÝÛ³Ý, ². ä. ²ÝïáÝÛ³Ý, ¶. ê. ê³ñ·ëÛ³Ý, ê. ¶. гñáõÃÛáõÝÛ³Ý ¸ÜÂ-Ç Ñ»ï µñáÙ³Ï³Ý ¿ÃǹÇáõÙÇ ÷á˳½¹»óáõÃÛ³Ý áõëáõÙݳëÇñáõÃÛáõÝÁ cis-¸¸ä-Ç ³éϳÛáõÃÛ³Ùµ àõëáõÙݳëÇñí»É ¿ ¸Ü – cis-¸¸ä-Ç Ñ»ï µñáÙ³Ï³Ý ¿ÃǹÇáõÙÇ ÏáÙåÉ»ùëÝ»ñÇ Ñ³ÉáõÙÁ »ñÏáõ ÉÇ·³Ý¹Ý»ñÇ ÏáÝó»Ýïñ³ódzݻñÇ ÷á÷áËáõÃÛ³Ý É³ÛÝ ÙÇç³Ï³ÛùáõÙ£ òáõÛó ¿ ïñí»É« áñ Ýßí³Í ÉÇ·³Ý¹Ý»ñÇ ó³Íñ ÏáÝó»Ýïñ³ódzݻñÇ »õ ѳٳï»Õ ÷á˳½¹»óáõÃÛ³Ý ¹»åùáõÙ ÏáÙåÉ»ùëÝ»ñÇ Ñ³ÉÙ³Ý ç»ñÙ³ëïÇ׳ÝÁª Tm -Á, »õ ѳÉÙ³Ý ÙÇç³Ï³ÛùÁª ¢ T -Ý, ³í»ÉÇ Ù»Í ã³÷áí »Ý ³×áõÙ« ù³Ý Ýñ³Ýó ³é³ÝÓÇÝ Ï³åÙ³Ý ¹»åùáõÙ« Áݹ áñáõÙ, Tm -Ç »õ ¢ T -Ç ³ñÅ»ùÝ»ñÁ ã»Ý Ý»ñϳ۳óÝáõÙ ³é³ÝÓÇÝ Ï³åÙ³Ý ¹»åùáõÙ ëï³óí³Í ѳٳå³ï³ëË³Ý Ù»ÍáõÃÛáõÝÝ»ñÇ Ñ³Ýñ³Ñ³ßí³Ï³Ý ·áõÙ³ñ£ 2 4 1 P. O. Vardevanyan, A. P. Antonyan, G. S. Sarkisyan, S. G. Haroutiunian Study of Ethidium Bromide Interaction with DNA in the Presence of cis-DDP The melting of Ethidium Bromide with DNA-cis-DDP complexes in a wide interval of change both ligands is carried out. It is revealed, that at the low concentration of both ligands at joint binding with DNA the melting temperature (Tm ) and width of melting interval (¢ T ) of complexes are increased much more, than at separate binding, however, sizes of Tm as well as ¢ T are not the algebraic sum of the appropriate values at separate binding. Ëèòåðàòóðà 1. Âàðäåâàíÿí Ï.Î., Àíòîíÿí À.Ï., Ïàðñàäàíÿí Ì.À., Äàâòÿí À.Ã., Êàðàïåòÿí À.Ò. - Áèîôèçèêà. 2003. Ò. 48. N 4. Ñ. 644-647. 2. Âåñåëêîâ À.Í., Áàðàíîâñêèé Ñ.Ô., Äûìàíò Ë.Í., Ïåòðåíêî Í.Â., Âåñåëêîâ Ä.À., Òàêåð À., Äýâèñ Ä.Á. - Ìîë. áèîë.1997. Ò. 31. N2. Ñ. 263-273. 3. Âàðäåâàíÿí Ï.Î., Àíòîíÿí À.Ï., Ìàíóêÿí Ã.À., Êàðàïåòÿí À.Ò., Ùåëêèíà À.Ê., Áîðèñîâà Î.Ô. - Ìîë. áèîë. 2000. Ò. 34. N2. Ñ. 310-315. 4. Áîðèñîâà Î.Ô., Ùåëêèíà À.À., Êàðàïåòÿí À.Ò., Ñóðîâàÿ À.Í. - Ìîë. áèîë. 1998. Ò. 32. Ñ. 855-862. 5. Vardevanyan P.O., Antonyan A.P., Parsadanyan M.A., Davtyan H.G., Karapetyan A.T. - Exp. and Mol. Medicine. 2003. V. 35. N6. P. 527-533. 6. Bongard N., Reedijk J. - J. Inorg. Biochem. 1991. V. 43. P. 428. 7. Eastman A. - Biochemistry. 1985. V. 24. P. 5027. 8. Cicarelli R.B., Solomon H.J., Varshavsky A., Lippard S.J. - Biochemistry. 1985. V. 24. P.7533. 9. Inagaki K., Kindani Y. - Inorg. Chem. Acta, 1985. V. 106. P. 187. 10. Millar O.P., Ho K.M., Aroney H.Y. - Biochemistry. 1988. V. 27. P. 8599. 11. Àðóòþíÿí Ñ.Ã., Ìàìàñàõëèñîâ Å.Ø., Ìîðîçîâ Â.Ô., Äàëÿí Å.Â., Õà÷èêÿí Ð.Ý., Âàðäåâàíÿí Ï.Î., Êàðàïåòÿí À.Ò., Îðèîëè Ï., Áðóíè Á. - Áèîôèçèêà. 1997. Ò. 42. Âûï. 2. Ñ. 372. Haroutiunian S.G., Dalyan Y.B., Morozov V.F., Mamasachlissov Eu.Sh., Shahinian M.S., Akhrem A.A., Lando D.Yu., Messori L., Orioli P. - Inorg.Chimica Acta. 12. 1998. V. 275-276, P. 510. 13. Coluccia M., Boccarelli A., Cermelli C., Portolani M., Natile G. - Metal-Based Drugs. 1995. V. 2. N5. P. 249 - 256. 14. Vardevanyan P.O., Antonyan A.P., Manukyan G.A., Karapetyan A.T. - Exp. and Mol. Medicine. 2001. V. 33. N4. P. 205-208. 2 4 2