Двойная реакция Арбузова и развитие методологии синтеза

На правах рукописи
РАГУЛИН Валерий Владимирович
Двойная реакция Арбузова
и развитие методологии синтеза фосфоизостеров аминокислот и пептидов
02.00.03 – Органическая химия
Автореферат диссертации на соискание ученой степени
доктора химических наук
Черноголовка, 2014
2
Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении науки
Институте физиологически активных веществ Российской академии наук (ИФАВ РАН)
Официальные оппоненты:
доктор химических наук, профессор,
Гололобов Юрий
член-корреспондент НАН Украины,
Григорьевич
главный научный сотрудник Института
элементоорганических соединений Российской академии
наук им. А. Н. Несмеянова (ИНЭОС РАН)
доктор химических наук, профессор кафедры органической
Грачев Михаил
химии Химического факультета Московского
Константинович
государственного педагогического университета
доктор химических наук, профессор кафедры органической
Вацадзе Сергей
химии Химического факультета Московского
Зурабович
государственного университета им. М. В. Ломоносова
Ведущая организация: Санкт-Петербургский государственный технологический институт
(технический университет).
Защита диссертации состоится «25 » марта 2014 г. в 14 часов на заседании диссертационного
совета Д 002.102.01 при Федеральном государственном бюджетном учреждении науки Институте
физиологически активных веществ Российской академии наук по адресу: 142432, Московская обл.,
Ногинский р-н, г. Черноголовка, Северный проезд, д.1
С диссертацией и авторефератом можно ознакомиться в библиотеке и на сайте ИФАВ РАН
(www.ipac.ac.ru) .
Автореферат разослан «___» ________ 2014 года.
Ученый секретарь диссертационного совета,
кандидат химических наук
С.В. Афанасьева
3
Общая характеристика работы
Актуальность работы. Одной из основных задач современного органического синтеза является
разработка методов получения физиологически активных веществ (ФАВ). Структурная
модификация природных соединений – один из подходов к поиску новых ФАВ. Замена
карбоксильной группы в молекуле аминокислоты фосфонатным P(O)(OH)2 или фосфинатным
P(O)(OH)CH2 фрагментом позволяет сконструировать молекулы фосфоновых или фосфиновых
аналогов природных аминокислот. Для построения молекул фосфиновых кислотых псевдопептидов (пептидных изостеров) может быть использован другой прием, заключающийся в замене
пептидной связи C(O)NH негидролизуемым фосфинатным фрагментом P(O)(OH)CH2. Результат
такого замещения представляет собой удобную имитацию переходного состояния гидролиза
пептидной связи с тетракоординированным углеродным атомом и стабильную модель состояния
субстрата в биологических процессах с участием по крайней мере двух классов гидролитических
ферментов – металлопротеиназ и аспарагиновых кислых протеиназ.
В этой связи задача разработки новых удобных методов образования фосфор-углеродных
связей является основной в развитии методологии синтеза фосфорильных изостеров аминокислот
и пептидов. Целевыми объектами настоящего исследования были выбраны фосфорильные аналоги
пептидов – фосфиновые кислотные псевдо-пептиды, а также фосфорсодержащие
аминокарбоновые кислоты, ω-фосфорильные аналоги и гомологи моноаминодикарбоновых
кислот – глутаминовой и аспарагиновой кислот.
Значительное внимание в процессе создания новой фосфор-углеродной связи вызывает
использование силиловых эфиров фосфористой и гипофосфористой кислот, которое позволяет
осуществить формирование соответственно одной и двух новых фосфор-углеродных связей.
Цель работы заключается в разработке новых подходов к формированию двух фосфоруглеродных связей из гипофосфитов, а также в их использовании для развития методологии
синтеза фосфорильных структурных изостеров аминокислот и пептидов.
Научная новизна работы.
Найдена двойная реакция Арбузова генерированных in situ силиловых эфиров
трехвалентного фосфора из гипофосфитов с образованием двух симметричных фосфоруглеродных связей.
Разработана общая методология образования двух несимметричных фосфор-углеродных
связей путем присоединения генерированного in situ бис(триметилсилил)гипофосфита к
различным непредельным соединениям с последующим взаимодействием образовавшегося
силилфосфонита in situ с электрофилами по типу реакций Арбузова, Абрамова, МихаэляПудовика, Кабачника-Филдса.
Впервые предложена общая one-pot процедура синтеза циклических фосфиновых кислот.
Разработана новая методология синтеза псевдо-пептидов, заключающаяся в
первоначальном присоединении гипофосфита к α-замещенному акрилату с образованием первой
Р-С связи с последующим формированием аминокислотной функции и образованием второй Р-С
связи псевдо-пептида.
4
Впервые обнаружены дегидрогалогенирующие свойства триалкилортоформиатов и
предложен новый общий способ получения различных винилфосфорильных соединений.
Разработана
общая
процедура
синтеза
псевдо-γ-глутамилпептидов,
псевдо-γаминобутаноилпептидов и других фосфиновых аналогов γ-аминомасляной кислоты (ГАМК).
Впервые обнаружены, выделены и идентифицированы в качестве интермедиатов реакции
амидоалкилирования гидрофосфорильных соединений N,N´-алкилиденбискарбаматы, исследовано
взаимодействие гидрофосфорильных соединений с предварительно синтезированными
бискарбаматами в среде уксусного ангидрида и других растворителях, изучено влияние строения
бискарбаматов и фосфорной компоненты, а также кислотного катализа на протекание данной
двухкомпонентной реакции.
Предложена новая процедура амидоалкилирования гидрофосфорильных соединений в
уксусном ангидриде при комнатной температуре.
Предложен
новый
механизм
трехкомпонентной
реакции
амидоалкилирования
гидрофосфорильных
соединений,
включающей
стадию
образования
N,N`алкилиденбисалкилкарбаматов. Показано, что формирование фосфор-углеродной связи, протекает
по типу реакции Арбузова с участием N-(алкилоксикарбонил)иминиевого катиона и P-OAc
производного трехвалентного фосфора, генерированных in situ из бискарбамата и исходного
гидрофосфорильного соединения соответственно.
В соответствии с новым механизмом реакции предложена новая идеология генерирования
реакционных интермедиатов, образующих Р-С связь, добавлением трифторуксусного ангидрида к
смеси фосфонистой кислоты и бискарбамата в органическом растворителе, на этой основе
разработан новый подход к синтезу труднодоступных фосфоизостеров аминокислот и пептидов из
ацеталей малостабильных альдегидов.
Разработан общий метод синтеза ω-галогеналкилфосфорильных соединений и предложена
общая процедура синтеза фосфорсодержащих аминокарбоновых (ФА) кислот.
Разработана альтернативная процедура синтеза ФА кислот, которая заключается в
присоединении аминокислотной функции к углеводородному фрагменту с последующим
фосфорилированием образующихся полупродуктов.
Предложена общая процедура синтеза α-замещенных ω-фосфорилированных аналогов
глутаминовой
кислоты
и
соответствующих
гомологов
алкилированием
ωгалогеналкилфосфорильными соединениями шиффовых оснований эфиров аминокислот или их
присоединением к винилфосфорильным соединениям.
Развитие one-pot процедуры образования двух фосфор-углеродных связей позволило
разработать синтез новых фосфорных аналогов аминокислот, в том числе фосфиновых бис(ωамино-ω-карбоновых) кислот.
Практическая значимость работы.
На основании разработанной методологии синтеза фосфиновых кислот из гипофосфитов
стал доступным широкий ряд фосфиновых структурных изостеров аминокислот и пептидов с
практически полезными свойствами, являющихся лигандами глутаматных рецепторов и
ингибиторами ферментов.
5
Разработаны новая процедура синтеза природной фосфиновой аминокарбоновой кислоты –
фосфинотрицина, обладающей рядом практически полезных свойств, и общий метод синтеза
фосфорильных
аналогов
глутаминовой
кислоты.
Разработан
синтез
офосфонометилфенилаланина, проявившего свойства антагониста NMDA рецепторов и
противосудорожные свойства.
Запатентованы способ получения ω-галогеналкилфосфонатов, ключевых полупродуктов
синтеза фосфорсодержащих аминокарбоновых кислот, получены патенты на способ получения
псевдо-γ-глутамилпептидов и на ферментативный синтез энантиомеров некоторых псевдопептидов.
Личный вклад автора. Диссертация представляет собой результаты исследований,
выполненных лично автором или при его непосредственном участии. Автору принадлежат
постановка задач, выбор стратегии исследования и ее обоснование, планирование и проведение
эксперимента, анализ полученных экспериментальных данных и обобщение результатов,
подготовка публикаций и апробация материалов работы.
Апробация работы. Основные результаты исследования были доложены на Всесоюзном
семинаре “Химия физиологически активных веществ” (Черноголовка, 1989), Всесоюзном
совещании "Глутаматные рецепторы" (Mосква, 1987), ХIV Менделеевском съезде по общей и
прикладной химии, Москва, 1989), межреспубликанской научно-практической конференции
«Cинтез, фармакология и клинические аспекты новых психотропных и сердечно-сосудистых
веществ» (Волгоград, 1989), V Московской конференции по органической химии и технологии
(1990), Симпозиуме по органической химии (С.-Петербург, 1995), конференции "Химия
фосфорорганических соединений и перспективы ее развития на пороге 21 века" памяти академика
М.И.Кабачника (Москва, 1998), международных конференциях по химии соединений фосфора
(Казань, 1996, 2005), (С.-Петербург, 2002, 2008) и международной конференции “Основные
тенденции развития химии в начале XXI века”(С.-Петербург, 2009), на XIX Менделеевском съезде
по общей и прикладной химии (Волгоград, 2011).
Публикации. Основное содержание работы изложено в 46 публикациях, включая 3 патента
и 43 оригинальные статьи в российских и международных изданиях, рекомендованных ВАК.
Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 339 страницах машинописного
текста, состоит из введения, литературного обзора, обсуждения результатов, экспериментальной
части, выводов, списка цитированной литературы, содержит 24 таблицы, 14 рисунков, 55 схем.
Список цитируемой литературы включает 315 публикаций.
Основное содержание работы
1. Метод синтеза фосфиновых кислот
1.1. Двойная реакция Арбузова
Одним из общих методов образования фосфор-углеродной связи является реакция Арбузова.
Ее классический вариант обычно предполагает необходимость предварительного синтеза
соответствующих эфиров фосфористой или фосфонистой кислот и выделение алкилгалогенида в
качестве побочного продукта реакции. В случае близкой реакционной способности исходного
электрофила и выделяющегося алкилгалогенида происходит образование смеси продуктов. Кроме
6
того, для получения свободной фосфоновой или фосфиновой кислоты из образующегося в
результате реакции фосфоната или фосфината необходима стадия гидролиза, вследствие чего этим
способом нельзя получить функционально замещенные фосфиновые кислоты, содержащие
гидролитически лабильные группы.
Применение процедуры, включающей силилирование гидрофосфорильных соединений с
образованием фосфорилирующего агента in situ в реакционной массе и последующее
взаимодействие его с соответствующим электрофилом, позволяет разрешить эти проблемы.
Алкоголиз силиловых эфиров протекает в мягких условиях с сохранением многих гидролитически
неустойчивых функциональных групп, что позволяет применить его для синтеза
фосфорсодержащих аминокарбоновых кислот различного строения.
Разработка методологии синтеза новых фосфиновых аналогов аминокислот и, особенно,
фосфиновых кислых аналогов пептидов предполагает необходимость образования в процессе
реакции двух фосфор-углеродных связей.
Использование гипофосфитов в качестве исходных соединений позволяет формировать две
фосфор-углеродных связи в одном реакционном сосуде в результате двух последовательных
реакций, протекающих по типу реакции Арбузова или Михаэля-Пудовика с образованием
фосфиновых кислот симметричного строения. Дальнейшее развитие этого подхода с разделением
стадий образования первой и второй фосфор-углеродных связей и с использованием большого
ряда разноименных электрофилов привело к получению функционально замещенных фосфиновых
кислот несимметричного строения и разработке методов синтеза фосфиновых кислых псевдопептидов различного строения.
Данный подход использует бис(триметилсилил)гипофосфит in situ в качестве ключевого
интермедиата, который, как было показано ранее (Воронков M.Г. с соавт., 1970) образуется
взаимодействием гипофосфита аммония и гексаметилдисилазана (схема 1). Предложена “one-pot”
процедура,
предусматривающая
проведение
реакций
образования
бис(триметилсилил)гипофосфита (БСГ) и его участия в дальнейших превращениях без выделения
промежуточных продуктов.
Схема 1
H2POONH4
(Me3 Si) 2 NH
- NH3
OSiMe3
(Me3 Si)2NH
R
- NH3
R
- Me3 SiX
1.1
O
RX
P
R
OSiMe3
O
RX
HP(OSiMe3)2
- Me3 SiX
1.3
P
R
1.4
P
H
OSiMe 3
1.2
EtOH/H2O
OSiMe3
R
O
P
R
OH
1-7
30-70%
X = I, Br, Cl
R = C3 H7 (1), C4 H9 (2), C5 H11 (3), C8 H17 (4), C10 H21 (5), C12 H25 (6), CH2=CHCH2 (7)
Учитывая высокую склонность БСГ к гидролизу и окислению влагой и кислородом воздуха,
его способность к самовоспламенению под действием кислорода, все стадии синтеза были
проведены в одном реакционном сосуде, без выделения неустойчивых промежуточных
силилфосфонитов, что является основным достоинством предлагаемого метода.
7
Синтез фосфиновых кислот симметричного и несимметричного строения осуществляли на
основе гипофосфита аммония, при необходимости заменяя его на смесь гипофосфита калия и
аммония хлорида. В втором случае выход БСГ снижается (65% против 89%). Использование
гипофосфита натрия менее эффективно, так как он существует в виде гидрата.
Интермедиат синтеза БСГ 1.1 (схема 1), способен последовательно взаимодействовать с
двумя галогеналканами по типу реакции Арбузова с образованием двух фосфор-углеродных
связей, приводящей к диалкилфосфиновым кислотам 1-7. На ключевой стадии используется
свойство гидрофосфорильных соединений под воздействием силилирующих агентов образовывать
силиловые эфиры производных трехвалентного фосфора. Гидрофосфорильные соединения 1.2,
содержащие одну фосфор-углеродную связь, превращаются в силиловые эфиры фосфонистых
кислот 1.3, способных вступать в реакцию Арбузова, приводящую к диалкилфосфиновым
кислотам 1-7 после алкоголиза соответствующих силиловых эфиров 1.4
1.2. Синтез циклических фосфиновых кислот
Предлагаемый нами метод синтеза фосфиновых кислот на основе гипофосфитов позволяет,
используя в качестве галогенпроизводных α,ω-дигалогеналканы 2.1, получить циклические
фосфиновые кислоты 8-12 в соответствии с приведенной ниже схемой (схема 2).
Схема 2
По аналогии с разд. 1.1.,
последовательно форми+ X -A -X
HP(OSiMe 3 )2
БСГ
2.1
руются две фосфоруглеродные связи через
H
O
Me 3 SiO
- Me 3 SiCl
(Me3 Si) 2 NH
P
P
промежуточное силилироваMe 3 SiO
Me 3 SiO
A
A
ние гидрофосфорильной
X
X
формы 2.2. которая
2.3
2.2
EtOH
образуется в результате
O
O
- Me 3 SiCl
A
A
P
P
первой реакции Арбузова с
HO
Me 3 SiO
участием БСГ in situ и
8 - 12
2.4
молекулы α,ω-дигалогенX = Br ; Cl
A= (CH2 )4 (8); (CH2 )5 (9); CH2 CH2 OCH2 CH2 (10 ); o-CH2 C6 H4 CH2 (11) ; CH2 CH=CHCH2 (12)
алкана.
ω-Галогеналкилфосфонит 2.3 содержит два реакционных центра – нуклеофильный атом
трехвалентного фосфора, генерированный in situ в условиях реакции, и электрофильный ωуглеродный атом при атоме галогена. Это создает благоприятные условия для протекания
внутримолекулярной реакции Арбузова: атака неподеленной электронной пары атома фосфора по
электрофильному ω-углеродному атому приводит к выделению триметилсилилгалогенида. В
результате образуется вторая фосфор-углеродная связь в соответствующем силиловом эфире
циклического фосфината 2.4. Размер цикла определяется длиной углеводородной цепочки А.
Этим способом получены пяти- и шестичленные циклические фосфиновые кислоты 8-12.
Для предотвращения межмолекулярных реакций использовали разбавление реакционной смеси
абсолютным толуолом или ксилолом. Для более напряженных пятичленных циклических
фосфиновых кислот характерно смещение сигнала атома фосфора в спектре ЯМР 31Р в область 7584 м.д., в то время как в шестичленных циклах он наблюдался при 40-60 м.д.
8
Таблица 1. Циклические фосфиновые кислоты
Исходный
α,ω-дигалогеналкан
N°
Фосфиновая
кислота
P
P
83.7
36
128-129
(ацетон)
51.3
31
100-101
(ацетон)
43.3
39
155-156
(ацетонспирт, 8:3)
60.5
11
86-88
(эфир)
75.4
O
Br
P
O
OH
Br
O
Cl
11
P
OH
Cl
O
Br
12
50-51
(эфир)
OH
Br
O
43
O
Br
10
δ 31Р (СDCl3),
δ, м.д.
OH
Br
9
Т.пл.,°С
O
Br
8
Выход,%
P
Br
OH
1.3. Функционально замещенные галогеналканы в двойной реакции Арбузова
Описанная выше процедура синтеза диалкилфосфиновых кислот была распространена на
функционально
замещенные
галогеналканы
-
ω-галогеналкилфосфорильные
соединения,
галогенметилароматические производные, галогенацетаты и ω-галогеналкилацетамидомалоновые
эфиры.
При
введении
в
реакцию
диэтил
2-бромэтилфосфоната
и
2бромэтилдифенилфосфиноксида образуются соответствующие фосфиновые кислоты 13,15, в
молекулах которых атомы фосфора соединены двумя метиленовыми фрагментами, что приводит к
характерному расщеплению сигналов ядер фосфора в спектре ЯМР 31Р. В спектрах наблюдаются
два сигнала различной интенсивности - дублеты в области 30.8 м.д. (для фосфонатного фрагмента)
с КССВ 3JP-P 69.0 Гц и 35.0 м.д. (для фосфиноксидного) с КССВ 3JP-P 51.3 Гц, отвечающие двум
крайним атомам фосфора соответственно фосфонатной или фосфиноксидной природы.
Схема 3
1
HP(OSiMe 3 )2
H
Me 3 SiO
2
A R
P
O
R
P
OSiMe 3
O
1
A
A
R
Me 3 SiO
P
R
O
3
P
A
A
R
OSiMe 3
R
A
OH
13-21
O
EtO
O
O
P
O
P
OEt
P
OEt
OEt
13
OEt
Ph
P
Ph
O
A
P
O
A
OH
14-16 (n=1-3)
P
Ph
Ph
P
HO
O
C(O)OEt(OH)
O
C(O)OEt(OH)
Ar
P
Ar
17 (OEt), 18 (OH)
OH
19-21
1. X-A-R, 2. (Me3 Si) 2 NH, 3. EtOH/H 2 O
X = Br, Cl; A = (CH 2 )n, n = 1 (14), 2 (15), 3 (16), R = P(O)Ph 2 ; n = 2, R = P(O)OEt) 2 (13 )
n = 1 , R = COOEt (17), CO OH (18 ), Ar = Ph ( 19 ), p-CF3 O-C 6 H4 (20 ), m-MeC(O)-C 6 H4 (21)
Кроме того, в спектрах трифосфорильных соединений 13, 15 содержатся триплеты в области
54.5 м.д. и 48.5 м.д. центральных атомов фосфора симметричных фосфиновых кислот,
содержащих фосфонатные и фосфиноксидные фрагменты, соответственно. При увеличении числа
метиленовых фрагментов спектр ЯМР 31Р 14, 16 представляет собой два синглета с соотношением
интенсивностей 2:1.
9
1.4. Двойное присоединение по Михаэлю-Пудовику. Акрилаты и винилфосфорильные
соединения в качестве непредельного компонента в синтезе фосфиновых кислот
Схема 4
O
OAlk
O
AlkO
1
O
R
1
Me3SiO
P
OAlk
R
OSiMe3
OSiMe3
R
P
O
HO
P
O
R
2
R
OSiMe3
P
OSiMe3
O
R
P
O
O
4.3
R`
R
OAlk
4.1
HP(OSiMe3)2
3
O
R`
2
R`
OSiMe3
P
O
O
P
3
HO
P
R`
R`
4.2
P
AlkO
22-26
P
O
OSiMe3
R`
R`
O
P
R`
13,15
4.4
1 - CH2=C(R)C(O)Alk , 2 - CH2=CHP(O)R`2,
3 - EtOH
R = H (22), Me (23), i-Bu (24), CH2C(O)OMe (25), CH2CH2C(O)OEt (26), R` = OEt (13), Ph (15)
Генерированный in situ БСГ
присоединяется по активированной двойной углеродуглеродной связи акрилата или
винилфосфо-рильного
соединения с образова-ниием
силилфосфонитов 4.1 и 4.2,
которые способны in situ
присоединяться ко второй
молекуле непредельного
соединения с образованием
соответствующих фосфиновых
кислот.
В качестве α,β-непредельных карбоновых и винилфосфорильных соединений были изучены
метилакрилат,
метили
этил
α-замещенные
акрилаты,
винилфосфонат
и
дифенилвинилфосфиноксид. После алкоголиза соответствующих силиловых эфиров фосфиновых
кислот 4.3 и 4.4. образуются соответствующие дикарбоновые (22-26) или трифосфорильные
(13,15) соединения симметричного строения.
1.5. Синтез фосфиновых кислот несимметричного строения. Двойное присоединение по
Михаэлю-Пудовику к разноименным непредельным соединениям.
Методология двойного постадийного присоединения БСГ in situ и промежуточных
соответствующих бистриметилсилилфосфонитов 5.1, 5.2, 5.3 и 5.4 по Михаэлю-Пудовику с
использованием разноименных непредельных соединений позволяет получить фосфиновые
кислоты несимметричного строения в соответствии со схемой 5.
Схема 5
В качестве непредельного
Ph
O
O
30
компонента были исследованы
O
O
Ph P
OSiMe
27
P
OMe 1, 5
P
P
HO
метилакрилат, дифенилвинилPh
OH
O
OSiMe
O
P
фосфиноксид, диэтилвинил(5.2)
Ph
1, 5
MeO
Ph
2, 5
2
фосфонат, которые с хорошими
Ph
Ph
OSiMe
3
1
3
выходами в определенных
O
HP(OSiMe )
P
O
OSiMe
P
Me SiO
P
Me SiO
условиях образуют продукты
БСГ
OMe
OSiMe
Ph
4
1:1 и 1:2 присоединения. В
(5.1)
(5.3)
4, 5
2, 5
O
Ph
случае стирола получается
P
O
EtO
O
OSiMe
Ph
P
только продукт 1:1
O
1, 5
P
O
P
EtO
P
HO
EtO P
OSiMe
присоединения – фосфонит (5.3)
OH
OMe
OEt
Ph
даже в избытке непредельного
28
29
O
(5.4)
компонента.
1 - CH =CHCOOMe, 2 - Ph P(O)CH=CH , 3 - PhCH=CH , 4 - (EtO) P(O)CH=CH , 5 - EtOH/H O
3
3
3
3 2
3
3
3
3
3
3
2
2
2
2
2
2
2
10
Отсутствие продукта двойного присоединения стирола позволяет исключить механизм 1,2присоединения силилфосфонита (6.1) ко второй молекуле акрилата или винилфосфорильного
соединения. По-видимому, происходит присоединение атома фосфора к β-углеродному атому
непредельного компонента и триметилсилильной группы – к атому кислорода группы С=О или
Р=О алкена с промежуточным образованием силилового эфира соответствующего енола (6.2) или
илида (6.3).
Найдены мягкие условия региоселективного 1:1
Схема 6
присоединения бис(триметилсилил)гипофосфита к
OSiMe
O
O
акрилатам и винилфосфорильным соединениям.
OAlk
OAlk
P
OSiMe
Последующее 1,4-присоединение образовавшихся
(6.2)
P
бис(триметилсилил) фосфонитов 5.1, 5.2 и 5.4 (схема 5) к
O
O
(6.1)
OSiMe
α,β-непредельным соединениям (обычно без выделения
P
P
R
P
R
R
из реакционной среды) позволяет получить фосфиновые
(6.3)
R
кислоты несимметричного строения 27- 30 (схема 5).
3
3
3
1.6. Образование фосфор-углеродных связей в фосфиновых кислотах несимметричного
строения путем последовательного осуществления реакций разного типа
Мы предлагаем общую стратегию синтеза с первоначальным присоединении
бис(триметилсилил)гипофосфита к активированным алкенам по Михаэлю-Пудовику с
образованием силиловых эфиров фосфонистых кислот, которые способны вступать в различные
реакции, характерные для производных трехвалентного фосфора, например, реакции Арбузова,
Абрамова, Кабачника-Филдса, Михаэля, Пудовика и другие реакции. В качестве непредельных
соединений
были
исследованы
стирол,
эфиры
α,β-непредельных
карбоновых
кислот,
винилфосфонат и Шиффа основания.
1.6.1. Акрилаты в качестве непредельного компонента синтеза
Использование
в
качестве
непредельного
компонента
реакционноспособных
α,β-
непредельных карбоксильных соединений позволяет получить различные фосфиновые
карбоновые кислоты несимметричного строения. Бис(триметилсилил)гипофосфит (БСГ) in situ
присоединяется по активированной двойной углерод-углеродной связи акрилата с образованием
фосфонитов, которые далее алкилируют галогенпроизводными по типу реакции Арбузова,
Алкоголиз полученных силилфосфинатов дает целевые фосфиновые карбоновые кислоты.
Образование ключевого интермедиата синтеза фосфонита (31) (R=H) (продукта
присоединения БСГ к метилакрилату) проходит экзотермически и подтверждено методами
спектроскопии 1Н и 31Р ЯМР. Его превращения могут пойти по двум различным направлениям. В
условиях получения БСГ (100÷120°С) и в избытке акрилата основным результатом реакции
является продукт присоединения двух молекул акрилата по типу реакций Михаэля-Пудовика –
симметричная фосфиновая кислота (39).
В более мягких условиях ( температура не выше 20-40°С) и при относительном недостатке
метилакрилата можно избежать или свести к минимуму образование побочного продукта
симметричного строения. В этом случае можно направить взаимодействие фосфонита 31 с
галогеналканами по схеме реакции Арбузова с образованием различных фосфиновых кислот
11
несимметричного строения. Процесс проводили в one-pot варианте – без
промежуточных продуктов.
выделения
Схема 7
CH(R)=CHC(O)OMe
HP(OSiMe 3 )2
OSiMe 3
R
MeO
P
OSiMe 3
БСГ
O
31 (R=H)
R'X
O
P
R
R`
O
HCl
OSiMe 3
R=H,
R`=Me
O
O
Me
P
O
MeO
OH
OSiMe 3
O
O
OMe
P
HO
OMe
39`
33
32 (R=H, R`=Me)
1. EtOH/H2 O
2. CH(OEt)3
EtOH/H2 O
O
R
MeO
CH2 =CHC(O)OMe
R=H
R = H, COOMe
O
P
O
R`
MeO
P
OH
OMe
OEt
O
O
34-38, 40
39
R=H: R'=Me ( 32,33) , Bn (34), (CH 2 )2 P(O)Ph2 (35), (CH 2 )3 N-Phth (36), (CH 2 )5 C(NHAc)(COOEt) 2 (40);
R=C(O)OMe : R`=Bn ( 37), R`=Oct (38);
X = I, Br, Cl
При взаимодействии диметилового эфира малеиновой кислоты с БСГ не было обнаружено
образования симметричного продукта присоединения двух молекул алкена даже при 100÷120°С.
Возможной причиной является меньшая реакционная способность этого непредельного
соединения, обусловленная `большим пространственным экранированием двойной связи
диметилового эфира малеиновой кислоты по сравнению с метилакрилатом.
При использовании в качестве галогеналкана метилиодида в ходе реакции образуется
триметилиодсилан, который способен частично дезалкилировать метилоксикарбонильную группу
в силилфосфинате. Алкоголиз и последующий кислотный гидролиз образующегося продукта дают
целевую кислоту MeР(О)(ОН)СН2СН2СООН (33).
Схема 8
В случае активированных
1. o-(ClCH ) C H
хлоралканов и функциоO
O
OSiMe
2. EtOH (H O)
O
O
O
P
нально замещенных
OSiMe
OMe
P
P
MeO
OMe
OH
OH
бромалканов реакции идут
31
однозначно, не
1. Br(CH ) C(NHAc)(COOEt) ;
42
2. EtOH (H O)
осложняются побочными
O
процессами и приводят к
O
O
O
O
COOEt
OH
HCl
различным фосфиновым
HO
P (CH )
COOEt
MeO
P (CH )
NH
NHAc
OH
OH
кислотам несимметричного
40
41
строения.
Применение 5-бромамилацетамидомалонового эфира позволяет получить фосфиновую
кислоту 40, в результате кислотного гидролиза которой образуется новый тип фосфиновых
2 2
3
6
4
2
3
2 5
2
2
2 5
2 5
2
аминокарбоновых
кислот
41.
Введение
в
реакцию
α,ω-дигалогеналканов
приводит
к
12
потенциальным фосфорсодержащим комплексообразователям – подандам 42, что показано на
примере о-ксилилендихлорида.
1.6.2. Винилфосфонат в качестве непредельного компонента синтеза
Схема 9
O
O
OSiMe3
(EtO)2P
O
HP(OSiMe3)2
EtO
P
OSiMe3
P
EtO
9-16%
OEt
БСГ
OSiMe3
(EtO)2P
O
P
P
O
OSiMe3
P
OEt
OEt
OEt
9.1
9.2
a) Br-(CH2)3NPhth
- Me3 SiBr
b) EtOH
a) EtOH
b) CH(OEt)3
с) CH(OEt)3
NH2
NPhth
O
HO
OEt
OEt
O
P
P
OH
HCl
EtO
OH
O
P
P
O
EtO
P
P
O
45
O
P
OEt
OEt
OEt
OEt
43
O
13
Ключевой интермедиат синтеза бис(триметилсилил) фосфоноэтилфосфонит 9.1 был
алкилирован по типу реакции Арбузова. Для образования второй фосфор-углеродной связи
использовали N-(3-бромпропил)фталимид. Мягкие условия присоединения БСГ к диэтиловому
эфиру винилфосфоновой кислоты позволяют исключить или свести к минимуму образование
продукта двойного присоединения по Михаэлю-Пудовику и получить бис(триметилсилиловый)
эфир β-(диэтоксифосфинил)этилфосфонистой кислоты (9.1). Это интермедиат далее был
использован в синтезе новых бисфосфорильных аналогов γ-аминомасляной кислоты (ГАМК) (43)
(схема 9) и глутаминовой кислоты (44) (схема 10).
Наряду с целевым продуктом реакции - γ-(фталилимино)пропилфосфинатом 45 (схема 9),
был выделен бис[β-(диэтоксифосфинил)этил]фосфинат 13 симметричного строения. Последний
является продуктом присоединения второй молекулы винилфосфоната к промежуточному
силилфосфоноэтилфосфониту 9.1 через стадию образования силилфосфината 9.2. Кислотный
гидролиз γ-(фталилимино)пропилфосфината 45 дает бисфосфорильный аналог ГАМК 43.
Схема 10
O SiMe3
O
O
- Me3SiBr
P
EtO P
O
a) Br-(CH2)2Br
O SiMe3
EtO P
b) EtOH
O
CH(OEt)3
P
Br
OH
O
EtO P
OEt
OEt
46
AcNHCH(COOEt)2
HO
COOEt
O
O
HO
O
P
P
OH
OEt
HCl
NH2
EtO
O
P
P
O
OEt
OH
44
OEt
OEt
10.2
10.1
P
NHAc
COOEt
Синтез бисфосфорильного аналога глутаминовой кислоты 44 (схема
10) был осуществлен
взаимодействием ключевого интермедиата
фосфоноэтилфосфонита
10.1 in situ с избытком
дибромэтана.
10.3
После алкоголиза образуется 2-(диэтоксифосфинил)этил-2-бромэтилфосфиновая кислота 10.2
(зарегистрировано с помощью спектроскопии 1Н и 31Р ЯМР), которую без выделения
13
обрабатывали
избытком
триэтилортоформиата.
Протекающие
одновременно
процессы
дегидробромирования и этерификации кислоты 10.2 приводят к триэтиловому эфиру β(фосфоно)этилвинилфосфиновой кислоты 46. Присоединение аминокислотной функции с
последующим кислотным гидролизом продукта реакции 10.3 и ионообменной хроматографией
похволяет получить целевую аминокислоту 44 – бисфосфорильный аналог глутаминовой кислоты.
1.6.3. Стирол в качестве непредельного компонента синтеза.
Реакция Арбузова на втором этапе синтеза
Стирол, в отличие от акрилатов и винилфосфорильных соединений, образует с БСГ только
продукт 1:1 присоединения даже при высоких температурах и избытке по отношению к
фосфорному компоненту. По этой причине данный алкен наиболее активно использовался нами
при изучении предлагаемого метода. В качестве галогеналканов для образования второй фосфоруглеродной связи были исследованы метилиодид, бензилхлорид, хлорацетат, алкилбромиды, ωбромалкилфосфиноксиды.
При одновременном смешивании и кипячении стирола, гипофосфита аммония и
гексаметилдисилазана в течение 3-4 часов смеси с высоким выходом (87%) образуется
бис(триметилсилиловый) эфир фенетилфосфонистой кислоты 47. Это показано методом
спектроскопии ЯМР 31Р и 1Н спектроскопии, а также экспериментом с выделением фосфонита 47 в
индивидуальном виде. При использовании смеси гипофосфита калия и хлорида аммония выход
соединения 47 снижается до 75%.
Схема 11
O
PhCH=CH2
HP(OSiMe 3 ) 2
БСГ
a) RX
R
PhCH2 CH2 P(OSiMe 3 )2
b) EtOH (H2 O)
47
P
Ph
OH
48-55
X = Cl, Br, I
R = Me (48) , C7 H18 (49) , C11 H25 (50 ), CH2 Ph (51 ), CH2 COOMe (52 ), CH2 P(O)Ph 2 (53 ), (CH2 )2 P(O)Ph 2 (54 ), (CH2 )3 P(O)Ph 2 (55 )
Синтез целевых фосфиновых кислот осуществляли в одном реакционном сосуде без
выделения промежуточных соединений. Использование в качестве галогенпроизводных α,ωдигалогеналканов позволяет получить α,ω-алкилен-бисфосфиновые кислоты 56-59:
Схема 12
O
1. Br-(CH 2 )n-Br; 2. EtOH(H2 O)
PhCH 2 CH2 P(OSiMe 3 )2
47
P
n=1-4
Ph
OH
O
(CH2)n
Ph
P
OH
n = 1 (56), 2 (57), 3 (58), 4 (59)
Фосфонит 47 способен окисляться, поэтому в некоторых случаях в спектре ЯМР 31Р
реакционной массы присутствует примесный (3÷5%) сигнал в области 25.0 м.д., соответствующий
бис(триметилсилиловому) эфиру фенетилфосфоновой кислоты. Этот побочный продукт легко
отделяется при выделении целевых фосфиновых кислот 48-59.
1.6.3.1. Синтез ω-аминоалкилфосфиновых кислот
Для образования второй фосфор-углеродной связи по реакции Арбузова были использованы
также ω-функционально замещенные галогеналканы. Их взаимодействие с фосфонитом 47 in situ
позволило синтезировать новые функционально замещенные фосфиновые кислоты 60-65.
14
Схема 13
OSiMe 3
P
OSiMe 3
Ph
P
Ph
b) EtOH
(CH2)n
OH
O
HCl
N
использовании
(CH2)n NH2
P
Ph
OH
O
n=2-4
60-62
47
При
O
O
a)Br-(CH2 )n-NPhth
63-65
N-(ω-бромалкил)фталимидов
образуются
ω-(N-
фталилимино)алкилфенетилфосфиновые кислоты 60-62, гидролиз которых дает соответствующие
ω-аминоалкилфосфиновые кислоты 63-65 (схема 13).
1.6.4. Реакция Абрамова на втором этапе синтеза. α-Гидроксиалкилфосфиновые кислоты
Методология синтеза фосфиновых кислот несимметричного строения получила дальнейшее
развитие с использованием карбонильных соединений, которые реагируют с силилфосфонитами,
образующимися в результате присоединения БСГ in situ к алкенам. Это превращение позволило
получить ряд новых α-гидроксиалкилфосфиновых кислот 67-76 (схема 14).
Схема 14
CH2 = X
HP(OSiMe 3) 2
a) RR` - C(O)
HX
OSiMe 3
P
b) EtOH(H2 O)
OSiMe 3
БСГ
HX
O
OH
P
R
OH R`
67-76
X=CHPh (47), CHC(O)OEt (66)
X = CHC(O)OEt;
R = Ph, R`= H (67), R = R`= Me (68), R = Ph, R`= Me (69), R = R`= Ph (70), R = p-MeOC 6 H4 , R`= H (71), R = p-Me2 N-C6 H4 , R`= H (72)
X = CHPh;
R = R`= Me (73), R = CHMe 2 , R`= H (74), R = Ph, R`= H (75), R = p-MeO-C 6 H4 , R`= H (76 )
Фосфониты HX-CH2P(OSiMe3)2 (47,66), продукты присоединения БСГ in situ к молекуле
активированного алкена (СH2=X), способны в свою очередь in situ присоединяться по С=O связи
альдегида
или
кетона
по
типу
реакции
Абрамова.
В
результате
образуются
α-
гидроксиалкилфосфиновые кислоты (67-76) после алкоголиза соответствующих силиловых
эфиров (схема 14). В качестве непредельного компонента синтеза были исследованы этилакрилат
и стирол, в качестве карбонильной компонента – ацетон, изомасляный альдегид, бензальдегид, п(метокси)бензальдегид, п-(диметиламино)бензальдегид, ацетофенон, бензофенон.
Схема 15
Новые α-гидроксиалкилфосфиновые
Me OH
O
O
кислоты 67-76 – относительно
Me
P
+
H P
Me
Me
термически нестабильные
XH
OH O
OH XH
кристаллические вещества.
бP ~ 25 - 28 м.д.
X = CHC(O)OEt (68), CHPh (73)
Фосфиновые кислоты 68 и 73, содержащие 1-гидрокси-1-метилэтильный фрагмент (т.е.
полученные из ацетона), наиболее неустойчивы и диссоциируют на исходные соединения, что
подтверждает обратимый характер реакции Абрамова.
1.6.5. Синтез α-аминоалкилфосфиновых кислот.
Основания Шиффа в качестве непредельного компонента
Однореакторный путь формирования двух несимметричных фосфор-углеродных связей
путем постадийного присоединения промежуточных силиловых эфиров трехвалентного фосфора к
разным алкенам по типу реакции Михаэля-Пудовика стал основой процедуры синтеза αаминоалкилфосфиновых кислот.
15
Бис(триметилсилил)фосфоHCOONH
нит, образующийся в
P
Pd/C
N
OH
OSiMe
Ph
результате присоединения
H
R-CH=N-Z
Ph
Z = CH Ph
P
77-81
O
Ph
NH
бис(триметилсилил)гипофо
OSiMe
Z = CHPh
P
47
сфита in situ к стиролу (47)
R
OH
HBr
83-87
PhCH=CH
Ph
(схема 16) или αH
O
Ph
N
замещенному акрилату
P
Ph
HP(OSiMe )
R
OH
(17.1) (схема 17), in situ
БСГ
16.1
82 (R=i-Pr)
присоединяется к
R = H ( 83), Me (84) , i-Pr (85), i-Bu (86) , Ph (87)
шиффовым основаниям.
Последние были предварительно получены из бензиламина, дифенилметиламина (схема 16)
или тритиламина (схема 17) и соответствующих альдегидов.
Схема 16
O
Ph
R
4
3
2
2
3
2
2
3 2
Схема 17
O
O
R`
HP(OSiMe 3)2
O
R`
OSiMe 3
БСГ
CH2=NTr
OSiMe 3
17.2
17.1
O
1N HCl / EtOH
NH2
HCl / H2 O
O
R`
OH
P
EtO
OH
HO
N SiMe 3
P
OSiMe 3
O
Ph3C
O
EtO
P
AlkO
AlkO
R`
NH2
свободным α-аминоалкил-
P
O
R
фосфиновым кислотам 83-90
(схемы 16, 17).
17.3
88-90
Снятие N-защитных групп
путем гидрогенолиза или
кислотного гидролиза, а
также удаление эфирных
функций кислотным
гидролизом приводит к
R = H (88), i-Bu (89), CH2 CH2 C(O)OH (90); R`= H, i-Bu, CH 2 CH2 C(O)OEt
Процедура синтеза псевдо-глицил-пептидов, α-аминометилфосфиновых кислот, включает
использование N-тритилметанимина, недостаточно устойчивого в условиях присоединения
силиловых эфиров трехвалентного фосфора. Поэтому для синтеза аминометилфенетилфосфиновой кислоты 83 мы заменили его на иминиевые тримеры – 1,3,5-трис(Z)гексагидро-s-триазины 18.3, содержащие устойчивые бензильный или дифенилметильный
заметители при атомах азота (схема 18).
Схема 18
O S iMe 3
NZ
1/3
+
ZN
NZ
(18.3)
Ph(CH 2 ) 2 -P
O S iMe 3
(47)
EtOH/H 2 O
O
Ph(CH 2 ) 2 -P
OH
O
HCOONH 4 , Pd/C
NHZ
(18.1 ) или ( 18.2 )
Ph(CH 2 ) 2 -P
или HCl (HBr)
Z = CH 2 Ph, CHPh
OH
2
NH 2
(83)
1.7. Реакция Кабачника-Филдса при образовании второй фосфор-углеродной связи.
1.7.1. Силилфосфониты в трехкомпонентной реакции Кабачника-Филдса
Альтернативный подход к синтезу α-аминоалкилфосфиновых кислот - трехкомпонентный
вариант реакции Кабачника – Филдса с участием силилфосфонитов HXCH2P(OSiMe3)2,
генерируемых in situ с последовательным введением в реакционную среду аминного компонента и
карбонильного соединения.
16
Удовлетворительные выходы
фосфиновых кислот (91-94) были
OH
R
a. PhCH NH HX
HX
OSiMe
CH =X
b.
RCH(O)
P
P
HP(OSiMe )
получены для бензиламина в
N
OSiMe
O
c.EtOH(H O)
БСГ
H
качестве аминного компонента
Ph
19.1
91-94
реакции, а для получения
X = CHC(O)OEt (91), CHC(O)OH (92), C(i-Bu)C(O)OEt (93), CHPh (94)
R: i-Pr, i-Bu, Ph
свободных аминокислот
требуется гидрогенолиз.
Ввести в реакцию дифенилметиламин или тритиламин, как амины с более удобными для
последующего удаления защитными группами, в данных условиях не удалось.
Cхема 19
2
3
2
2
3 2
3
2
1.7.2. Фосфонистые кислоты в амидной версии реакции Кабачника-Филдса.
Трехкомпонентная реакция с участием фосфонистых кислот и ацетамида в качестве
аминного компонента в среде уксусного ангидрида привела к α-аминофосфиновым кислотам (9597) (схема 20) с умеренными выходами только при использовании ароматических альдегидов.
Безуспешными были попытки ввести в реакцию алифатические альдегиды, а также фталимид,
бензамид, трифторацетамид.
Схема 20
O
HP(OS iMe 3 ) 2
R`
БСГ
Al k O
R`
O
P
Alk O
O
OH
HO
Ph
P
NH 2
HCl / H 2 O
O
R`
O
P
20.1
H
OH
R`
O
Al k O
Ph
P
R
OH
95-97
O
Alk O
OSiMe 3
20.2
O
H2 O(H + )
OS iMe 3
AcNH 2 ;
PhCH(O)
NHAc
20.3
R = Me ( 95 ), i-Bu (96) , CH 2 COOH (97); R`= Me, i-Bu,
CH 2 COO M e
Полученные результаты позволяют сделать вывод о необходимости поиска простой и
эффективной процедуры введения в молекулу α-аминофосфорильной функции. Особый интерес
представляет синтез N-защищенных α-аминофосфиновых соединений на основе фосфонистых
кислот, содержащих структурный изостер природной аминокислоты, - короткий путь к
фосфиновым кислым аналогам α,α`-дипептидов.
2. Развитие методологии синтеза фосфорсодержащих аминокарбоновых кислот.
2.1. Первоначальное фосфорилирование с последующим присоединением аминокислотной
функции
Замена карбоксильной {C(O)OH} группы в молекуле аминокислоты фосфонатным
{P(O)(OH)2} фрагментом является наиболее распространенным приемом для построения молекул
фосфоновых аналогов природных аминокислот. Этот подход позволяет получить большое число
α-аминофосфоновых кислот, проявляющих разнообразную физиологическую активность. Замена
ω-карбоксильной функции фосфонатным или фосфинатным фрагментом в молекуле
моноаминодикарбоновых кислот приводит к необычному типу фосфорсодержащих
аминокарбоновых кислот (ФА).
17
O
O
X
A
X
R
O
X
P
R`
A
P
OH
OAlk
R=Alk, AlkO
OH
A
NH2
ФА-кислоты, R`=Alk, OH
Такие аминокислоты проявляют высокие противоэпилептические, противосудорожные и
другие свойства, определяющие процессы передачи и переработки информации в центральной
нервной системе. Это обстоятельство обусловило необходимость разработки методов синтеза ωфосфорильных аналогов и гомологов аспарагиновой и глутаминовой кислот.
Проблема синтеза ω-галогеналкилфосфорильных соединений была основной в развитии
методологии синтеза фосфорсодержащих аминокарбоновых (ФА) кислот, которая заключается в
первоначальном фосфорилировании углеводородного фрагмента (А) с последующим
присоединением аминокислотной функции и гидролизом продуктов алкилирования.
Алкилирование ацетамидомалонового эфира 2-бромэтилфосфонатом протекает довольно легко и
приводит после кислотного гидролиза к 2-амино-4-фосфономасляной кислоте (АР4).
Схема 21
Введение в процедуру
O
O
X
X
алкилирования ацетамидоRO P A
Ph P A
малонового эфира 3OR
Ph
98-103, 105-107(R=Et)
(RO)2 POEt
Ph2 POY
111-115
бромпропилфосфоната и его
110(R=Ph)
n=2-6
гомологов представляло
- EtX
-Me3 SiX или EtX
- EtX
X
X
A
заметные трудности как при
P(OEt)3
2R` 2 POY
O
O
n>2
O
O
синтезе ω-галогеналкил
- 2XY
- 2EtX
P
R`
P A P R`
A
EtO
фосфонатов, так и при
R`
R`
108, 116
A:CH CH=CHCH (104)
использовании их в качестве
o-CH C H CH (109)
алкилирующих агентов (схемы
X = Br, Cl; R = Et, Ph; Y = Et, SiMe3 ; R`= EtO, Ph
A : (CH2 )n, n = 2-6; o-CH2 C6 H4 CH2 , p-CH2 C6 H4 CH2 ; CH2 CH=CHCH2 ; CH2 CH2 OCH2 CH2
21,22). Как показали наши
исследования, эфиры ω-галогеналкилфосфоновых кислот, содержащие атом галогена в положении 3 или 4 относительно
фосфорильного фрагмента, способны в соответствующих условиях образовывать циклические
пяти- и шестичленные 1,2-оксафосфорильные соединения Это процесс значительно ухудшает
результаты алкилирования С-Н кислот ω-галогеналкилфосфонатами и снижает общий выход
целевой фосфорсодержащей аминокарбоновой кислоты.
2
2
2
Схема 22
EtO
O
Br
P
t o C; Br
EtO
_
O
EtO
- EtBr
P
O
O
EtO
Br
- Br
P
-
98
116
OEt
EtO
O
to C; Cl
P
Cl
O
107
- EtCl
O
O _
EtO
P
EtO
O
Cl
P
O
- Cl
108
6
4
2
Оказалось, что 3-бромпропилфосфонат 98 и охлорметилбензилфосфонат 107 достаточно
легко подвергаются внутримолекулярной
циклизации с образованием соответствующих
1,2-оксафосфолана 116 и 1,2-оксафосфоринана
108 (схема 22). К этому времени был известен
синтез 3-бромпропилфосфоната нагреванием
триэтилфосфита с 20-кратным избытком α,ωдигалогеналкана (K.Matoba и соавт., 1984).
18
2.2. Общий метод синтеза ω-галогеналкилфосфорильных соединений.
Модификация углеводородного фрагмента молекулы ФА
Предложенный нами простой и общий метод синтеза ω-галогеналкилфосфорильных
соединений заключается в постепенном добавления соответствующего эфира трехвалентного
фосфора к предварительно нагретому до кипения α,ω-дигалогеналкану. В этом случае создается
эффективный избыток дигалогеналкана по отношению к фосфорному компоненту в условиях,
необходимых для образования связи P-C, и побочной реакции циклизации не происходит. Таким
способом с хорошими и удовлетворительными выходами были получены ωгалогеналкилфосфорильные соединения 98-103, 105-107, 110, 111-115 (схема 21). Метод дает
возможность синтеза продуктов с различной природой спейсера А, что позволяет проводить
структурные модификации “канонической” молекулы ФА-кислоты путем алкилирования
ацетамидомалонового эфира с последующим кислотным гидролизом образующихся ωфосфоноалкилацетамидомалоновых эфиров 117-122, 133 (схема 23).
Схема 23
X
A
O
P(OEt)3
EtO
X
P
X
A
OEt
AcNHCH(COOEt)2
K2CO3 ( Cs 2CO3 )
COOEt
O
COOEt
A
P
EtO
OEt
98-103, 105-107
HCl
O
O
HO
NHAc
P
A
OH
OH NH2
123-131
117-122
X = Br, Cl;
A : (CH2)n, n = 3 (98,99,117,123), 4 (100,118,124), 5 (101,119,125), 6 (102,120,126), 10 (121,127)
CH2CH=CHCH2 (103,131), o-CH 2C6H4CH2 (107), p-CH 2C6H4CH2 (106,122,128), CH2CH2OCH2CH2 (105,129)
Получен ряд фосфоновых аминокарбоновых кислот, содержащих углеводородные цепочки
различной длины, а также эфирный, ароматический или непредельный фрагменты (123-131)
(схема 23). Необходимо отметить, что непредельный аналог АР5 - 2-амино-5-фосфоно-4пентеновая кислота (130, АР5-ен) был синтезирован из аллилфосфоната 24.1, последовательность
превращений включала стадии бромирования, дегидробромирования и другие реакции в
представленные на схеме 24, так как использование общего метода синтеза ωгалогеналкилфосфонатов в этом случае невозможно.
Схема 24
OEt
Br
EtO
EtO
Br 2
P
O
24.1
O
EtO
K2 CO3
P
OEt
134
Br
EtO
P
OEt
AcNHCH(COOEt)2
O
EtO
O
Br
132
O
HCl
P
133
COOEt
EtOOC
NHAc
HO
HO
P
OH
O
NH2
130, AP5-ен
Синтез другого непредельного аналога - 2-амино-6-фосфоно-4-гексеновой кислоты (131,
АР6-ен) осуществлен с использованием общего метода синтеза ω-галогеналкилфосфонатов и
дальнейшей процедурой синтеза аминокислот в соответствии со схемой 23.
2.3. Методология синтеза ФА кислот с “обратным построением” целевой молекулы
Нами предложена альтернативнfz методологиz синтеза ФА, которая устраняет
необходимость синтеза ω-галогеналкилфосфонатов и заключается в обратном порядке
построения целевой молекулы – в первоначальном присоединении аминокислотной функции к
углеводородному фрагменту (А) с образованием ω-галогеналкилацетамидомалоновых эфиров 136-
19
143,
последующем
их
фосфорилированием
и
гидролизом
фосфорилалкилацетамидомалоновых эфиров (117-122, 149) (схема 25).
промежуточных
ω-
Схема 25
C(O)OEt
X
X
A
X
1
O
NHAc
A
1
C(O)OEt
136-143
P
AcHN
NHAc
A
O
RO
OH
3
NHAc
A
RO
C(O)OEt C(O)OEt
25.1
C(O)OEt
2
P
C(O)OEt
NH2
OH
HO
123-127, 129, 131
117-122, 149 (R=Me)
C(O)OEt C(O)OEt
25.2 144-148
A
O
1 - AcNHCH(COOEt) 2 ; 2 - (EtO) 2 PHO/K 2 CO 3 или (EtO) 3 P или (MeO) 3 P; 3 - HCl
X = Br, Cl; A : (CH 2 )n, n = 3 (117,123 ), 4 (118,136,124,144 ), 5 (137,119,125,145 ), 6 ( 138,120,126,146), 10 (140,121,127 )
CH 2 CH 2 OCH 2 CH 2 (141,129 ), o-CH 2 C6 H 4 CH 2 (142,147 ), CH 2 CH=CHCH 2 (143,148,149,131 )
Ключевые полупродукты - эфиры 136-143 - были получены взаимодействием избытка α,ωдигалогеналканов с ацетамидомалоновым эфиром.
Как развитие идеологии “обратного построения” целевой молекулы мы совместили
процессы фосфорилирования и образования фосфорилирующего агента в одном реакционном
сосуде. Так нагревание смеси фосфористой кислоты и ω-галогеналкилацетамидомалонового эфира
(136-143) в гексаметилдисилазане, генерирование in situ фосфорилирующего агента –
{трис(триметилсилил)фосфита} 26.1, - и его взаимодействие с эфирами 136-143 приводит с
хорошими выходами к силилфосфонатам 26.2.
Схема 26
Me3 SiO
O
P
Me3 SiO
A
C(O)OEt
EtOH
HO
O
P
A
HO
NHAc
26.3
A
X
NHAc
C(O)OEt
136-143
150-153
Et2 NH
P(OSiMe3)3
26.1
O
A
EtO(O)C
OHxHNEt2
NHAc
158-161
CH(OMe)3
MeO
EtO(O)C
P
C(O)OEt
C(O)OEt
C(O)OEt
26.2
C(O)OEt
NHAc
OH
O
P
MeO
A
154-157
O
HO
NH2
P
HCl
HO
A
OH
NHAc
C(O)OEt
C(O)OEt
O
124-129, 131,
162, 163
X = Br , Cl ;
A = (CH2 )n , n = 4(136,150,158,124), 5(137,151,154,159,125), 6(138,152,160,126), 7(139,155,162), 10(140,153,161,127),
CH2 CH2 OCH2 CH2 (141,156,129), o-CH2 C6 H4 CH2 (142,157,163), CH2 CH=CHCH2 (143,131)
При
алкоголизе
последних
образуются
соответствующие
ωфосфоноалкилацетамидомалоновые эфиры, которые были выделены в виде фосфоновых кислот
150-153, диметиловых эфиров 154-157, а также диэтиламмониевых солей 158-161. Последующий
гидролиз кислот 150-153 или эфиров 154-157 дает целевые фосфоновые аминокарбоновые
кислоты 124-127, 129,162,163.
2. 4. ω-Фосфиноксидные аналоги моноаминодикарбоновых кислот.
Модификация фосфорсодержащего фрагмента молекулы ФА, синтез фосфиноксидов в
методологии “прямого” и ”обратного” построения целевой молекулы аминокислоты.
20
В ряду фосфорсодержащих аминокарбоновых кислот (ФА) наиболее известны фосфоновые и
фосфиновые аналоги и гомологи глутаминовой кислоты - 2-амино-4-фосфономасляная (АР4), 2амино-5-фосфоновалериановая (АР5) и 2-амино-7-фосфоногептановая (АР7) кислоты,
обладающие
психотропными
свойствами,
а
также
производные
2-амино-4метилфосфиномасляной кислоты (фосфинотрицина), известной своими высокими гербицидными
свойствами. ФА кислоты фосфиноксидного типа в литературе не описаны.
Настоящая глава посвящена дальнейшему развитию методологии синтеза ФА кислот на
примере соединений фосфиноксидного типа. Синтезированы аминокислоты общей формулы
Рh2P(O)-(CH2)n-CH(NH2)COOH (164-168), представленные на схеме 27.
В соответствии с раннее предложенной методологией “прямого” и “обратного” построения
молекулы ФА кислоты, фосфиноксиды-аминокислоты 164-168 были получены двумя способами.
Первый способ заключается в фосфорилировании α,ω-дигалогеналканов с образованием ωбромалкилфосфиноксидов 111-114, алкилировании последними ацетамидомалонового эфира и
последующем кислотном гидролизе продуктов алкилирования 169-173.
Другой метод использует “обратный” порядок построения целевых молекул 164-168 :
присоединение к углеводородной цепочке аминокислотной функции в виде ацетамидомалонового
фрагмента с образованием ω-бромалкилацетамидомалоновых эфиров 136-138, фосфорилирование
последних и гидролиз продуктов реакции – фосфиноксидов-эфиров 169-173.
Схема 27
В качестве фосфорилирующего
O
1
агента выступала
Ph
P (CH )n Br
Br-(CH )n-Br
Ph
дифенилфосфинистая кислота.
2
2
2
O
Br (CH2)n
111-114
n=2-5
2 или 3
OEt
O
O
4 или 5
Ph
NH OEt
O
P (CH2)n
Ph
O
Нагревание смеси ω-бромалкилOEt
O
NH OEt
O
136-138
(n = 4 - 6)
O
Ph
P
169-173
(n = 2 - 6)
O
OH
6,7
(CH2)n
NH2
Ph
164-168
(n = 2 - 6)
1) Ph 2 POSiMe 3 ; 2) Na +C- (NHAc)(COOEt) 2 ; 3) AcNHCH(COOEt) 2 / K 2 CO 3 или Cs 2 CO 3 ;
4) Ph 2 PHO / K 2 CO 3 ; 5) Ph 2 PHO + Me 3 Si) 2 NH ; 6) HCl ; 7) Dowex 50W(H + )
ацетамидомалоновых эфиров
136-138 и Ph2PHO в кипящем
гексаметилдисилазане приводит с
хорошими выходами к
фосфиноксид-α-аминокислотам
166-168. Особенностью метода
является предложенный нами
прием совмещения поцессов
фосфорилирования и образования фосфорилирующего агента (Ph2POSiMe3) в одном реакционном
сосуде.
2.5. Двойная реакция Арбузова.
Бис(ω-амино-ω-карбоновые) фосфиновые кислоты симметричного строения
Дальнейшее развитие методологии совмещения процессов образования фосфорилирующего
агента и фосфорилирования в одном реакционном сосуде и методологии формирования двух
фосфор-углеродных связей из гипофосфитов позволяет осуществить one-pot процедуру двойной
перегруппировки Арбузова с использованием 2 экв. ω-галогеналкилацетамидомалоновых
эфиров 136-138,141,142. В соответствии с разработанной нами процедурой формирования двух
фосфор-углеродных
связей,
представленной
в
первой
части
работы,
21
бис(триметилсилил)гипофосфит (БСГ) in situ вводили в реакцию Арбузова c молекулой ωгалогеналкилацетамидомалонового эфира. Промежуточное гидрофосфорильное соединение (см.
главу 1) в присутствии гексаметилдисилазана образует силилфосфонит 28.1.
Схема 28
O
1,2
HP(OSiMe3 )2
БСГ
OSiMe 3
EtO(O)C
EtO(O)C
A
A C(NHAc)(COOEt)2
O
A C(NHAc)(COOEt)2
HO
HO
174,177,178
P
NHAc
28.1
1,3
P
OSiMe 3
4
A
5
O
EtO P A C(NHAc)(COOEt)2
H2N
HO
P
O
A
179-183
NH2
OH
O
A C(NHAc)(COOEt)2
175,176
1 - X-A-C(NHAc)(COOEt) 2 ; 2 - Me 3 Si)2 NH; 3 - EtOH; 4 - CH(OEt) 3 ; 5 - HCl(H 2 O)
X = Br, Cl;
A = (CH 2 )4 (174, 179) ; (CH2 )5 (175, 180) ; (CH2 )6 (176, 181) ; CH2 CH2 OCH2 CH2 (177, 182) ; o-CH 2 C6 H4 CH2 (178, 183)
Взаимодействие последнего in situ со второй молекулой галогенида 136-138, 141, 142 по
реакции Арбузова приводит к образованию второй фосфор-углеродной связи.
Фосфорсодержащие продукты симметричного строения выделяли хроматографией на
силикагеле в виде кислот (174,177,178) или соответствующих этиловых эфиров (175,176),
полученных при обработке ″сырого″ продукта избытком триэтилортоформиата. Фосфиновые
кислоты (174,177,178) и эфиры (175,176) подвергали кислотному гидролизу с последующей
ионообменной хроматографией на катионите. В результате были выделены новые
бисаминокарбоновые кислоты симметричного строения, содержащие в центре молекулы
гидроксифосфорильную функцию. Новые фосфиновые бис(ω-амино-ω-карбоновые) кислоты 179183 представляют собой кристаллические вещества, плавящиеся с разложением.
2.6. Синтез фосфиновых ω-амино-ω-карбоновых кислот несимметричного строения на
основе one-pot формирования двух фосфор-углеродных связей
Фосфиновые и фосфоновые аналоги глутаминовой кислоты ингибируют глутаминсинтетазу,
проявляют гербицидную активность, а также являются лигандами N-метил-D-аспартатных
рецепторов и обладают противосудорожными свойствами. Проницаемость кислот через гематоэнцефалический барьер является, очевидно, одним из основных факторов, определяющих их
физиологическую активность. С этой точки зрения фосфиновые аминокарбоновые кислоты,
содержащие липофильный фенетильный фрагмент при атоме фосфора, представляют интерес.
С помощью процедуры one-pot формирования двух фосфор-углеродных связей можно
сконструировать молекулу фосфиновой ω-амино-ω-карбоновой кислоты несимметричного
строения с использованием стирола в качестве непредельного компонента и бромидов 136-138,141
в этом случае вторая фосфор-углеродная связь формируется в результате реакции Арбузова.
Последовательность
стадий
включала
взаимодействие
гипофосфита
аммония,
гексаметилдисилазана и стирола, и последующее добавление ω-бромалкилацетамидомалоновых
эфиров 136-138,141 {без выделения промежуточных бис(триметилсилил)фенетилфосфонита 47 и
силиловых эфиров 28.1}. Алкоголиз силиловых эфиров 28.1 приводит к фосфиновым кислотам
184-186, которые превращали в метиловые эфиры 187-189 взаимодействием с
триметилортоформиатом, так как последние удобно выделять хроматографией на силикагеле.
22
Схема 29
PhCH2 CH2 P(OSiMe 3)2
P
Ph
136-138,141
47
COOEt
O
Br-A-C(NHAc)(COOEt)2
COOEt
A
OSiMe 3 NHAc
28.1
EtOH/H2 O
COOEt
O
P A
Ph
OMe
COOEt
P A
Ph
NHAc
OH
COOEt
NHAc
184-186
187-189
O
H2 N
HCl
COOEt
O
HC(OMe)3
Ph
O
P
HCl
OH
A
OH
190-193
A = (CH 2 )4 (136,184,190), (CH 2 )5 (137,185,187,191), (CH 2 )6 (138,186,188,192),
CH2 CH2 OCH 2 CH2 (141,189,193)
Целевые фосфиновые ω-амино-ω-карбоновые кислоты 190-193 получали кислотным
гидролизом фосфиновых кислот или их эфиров.
2. 7. Синтез аналогов глутаминовой кислоты
2.7.1. Триалкилортоформиаты как дегидрогалогенирующие реагенты.
Синтез винилфосфорильных соединений
Винилфосфорильные соединения, структурные изостеры акриловых производных – удобные
объекты для введения аминокислотной функции и синтеза фосфорильных аналогов глутаминовой
кислоты. В этой связи актуальным является поиск удобных методов получения
винилфосфорильных соединений. Нами впервые обнаружены дегидрогалогенирующие свойства
триэтилортоформиата.
При попытке этерификации фосфиновых кислот 29.1, содержащих β-бромэтильный
заместитель (схема 29) при нагревании β-бромэтилалкилфосфиновой кислоты в избытке
триэтилортоформиата одновременно с этерификацией кислотной Р-ОН группы происходит
дегидробромирование с образованием соответствующего винилфосфорильного соединения. В
спектре ЯМР 31Р реакционной массы наблюдается смещение сигнала δр при 40-50 м.д. в область δр
30-40 м.д.; а в спектре ЯМР 1Н исчезают мультиплеты в области 1.95-2.65 и 3.15-3.75 м.д.,
соответствующие двум метиленовым группам β-бромэтильного заместителя, и появляются
сигналы в области 5.95-6.50 м.д., соответствующие протонам винильного фрагмента.
Схема 30
1. (Me 3 Si) 2 NH,
2. BrCH 2 CH2 Br
RP(OH) 2
O
X
Br
O
3. EtOH
Y
P
194`, 195`
4. CH(OEt)3
29.1
197,199,201
R`
EtO
OH
OSiMe 3
29.2
Br
P
P
O
194, 195, 196, 198, 200
R = OH,Alk; X = OSiMe 3 (194`), Me (195`); Y = Ph (197), н- C8 H17 (199), Ph CH2 CH2 (201)
R`= OEt (194) , Me (195) , Ph (196 ), н-C8 H17 (198) , PhCH2 CH2 (200)
В ходе реакции мы отбирали низко кипящую фракцию на выходе из обратного
холодильника. В спектре ЯМР 1Н этой фракции в области от 1 до 2 м.д. присутствуют триплеты
23
трех метильных групп, приписываемые этилбромиду (≈1.8 м.д.), этилформиату (≈1.1 м.д.) и
этанолу (≈1.2 м.д.). В области 3.1 -3.9 м.д. – наблюдаются также сигналы метиленовых групп
этилбромида и этанола, и квадруплет δ~4.2 м.д., которые можно отнести к СH2O-фрагменту
этилформиата, в этом же интервале (3.5-4.2 м.д.) находится сигнал гидроксильного протона
этанола; синглет с δ~8.0 м.д. соответствует протону этилформиата. Реакцию дегидробромирования
можно представить следующим уравнением:
R R `P( O )
C H 2- C H 2 B r
+
C H ( O E t) 3
R R `P( O )
+ EtBr + HC(O)OEt + EtOH
CH =C H2
В процессе получения β-бромэтилфосфорильных производных в качестве побочных
продуктов образуются соответствующие 1,2-этиленбисфосфорильные соединения, для
предотвращения этого процесса используют трех-пятикратный избыток дибромэтана. На данной
стадии может происходить частичное дегидробромирование, возможно, под действием
гексаметилдисилазана, который формально является вторичным амином. Чтобы исключить
участие в реакции гексаметилдисилазана была изучена дегидробромирующая способность
триэтилортоформиата на модельных соединениях - диэтил-β-бромэтилфосфонате и дифенил-βбромэтилфосфиноксиде. Оказалось, что в этих случаях винилфосфорильные соединения
получаются с выходом 75-86%. Диэтилвинилфосфонат образуется также при нагревании диэтилβ-бром-этилфосфоната
с
триметилортоформиатом.
При
взаимодействии
дифенил-β-
хлорэтилфосфиноксида с триэтилортоформиатом наблюдается аналогичный процесс
дегидрохлорирования, однако в этом случае для образования винилфосфиноксида требуется
большее время (∼12 часов) по сравнению с бромпроизводными, для которых было достаточно
выдерживание в течение ∼2 часов в аналогичных условиях.
Таким образом, триметил- и триэтилортоформиаты могут быть использованы в качестве
дегидрогалогенирующих агентов при синтезе винилфосфоpильных производных. Это особенно
удобно при получении винилфосфинатов и винилфосфонатов, так как реакции
дегидрогалогенирования и этерификации протекают в одном реакционном сосуде.
2.7.2. Синтез фосфинотрицина и других фосфорильных аналогов глутаминовой кислоты
Известно, что 2-амино-4-(метилфосфино)масляная кислота (фосфинотрицин), фосфиновая
кислота природного происхождения, обладает рядом практически полезных свойств.
Схема 31
O
1.BrCH2 CH2 Br
(Me3 Si) 2 NH
RP(OH)2
RP(OSiMe 3 )2
31.1
31.2
2. EtOH
R
Br
CH(OEt)3
P
OH
31.3
R
EtO
P
O
NHAc
AcNHCH(COOEt)2
O
R
194-196, 198, 200
C(O)OEt
P
C(O)OEt
OEt
31.4;
NH2
O
HCl
R
P
OH
OH
O
44, 203, 205, 209
204,206
R = EtO (194), (OH) (209), Me ( 195, 203, 204 ) , Ph (196, 205, 206 )
Разработан новый удобный метод синтеза фосфинотрицина и других фосфорильных
аналогов глутаминовой кислоты с использованием в качестве исходных соединений гипофосфита
аммония, алкилфосфонистых и фосфористой кислот 31.1. Силилирование гидрофосфорильных
24
соединений 31.1 и последующее взаимодействие образующихся силиловых эфиров
трехвалентного фосфора 31.2 in situ с избытком дибромэтана приводит, как было показано выше, к
соответствующим силилфосфинатам, алкоголиз которых дает 2-бромэтил-алкилфосфиновые
кислоты 31.3 (схема 31). Обработка последних избытком триэтилортоформиата в качестве
дегидрогалогенирующего агента, приводит к ключевым полупродуктам синтеза - эфирам
винилфосфиновых кислот 194-196, 198, 200. Присоединение к последним ацетамидомалонового
эфира по Михаэлю ведет к фосфинатам 31.4. Некоторые фосфинаты (204, 206) были выделены и
охарактеризованы, однако в большинстве случаев их без выделения подвергали кислотному
гидролизу. Последующая хроматографическая очистка на катионите давала целевые
аминокислоты - фосфорильные аналоги глутаминовой кислоты (44, 203, 205, 209).
Дегидробромирование 2-галогенэтилфосфорильных соединений с использованием
триалкилортоформиатов было совмещено с one-pot процессом образования двух несимметричных
фосфор-углеродных связей из гипофосфитов, описанным выше (схема 32). Стирол, акрилат и
винилфосфонат были использованы в качестве непредельного компонента для формирования
первой связи P-C с последующим взаимодействием образовавшихся силилфосфонитов с избытком
дибромэтана по схеме перегруппировки Арбузова.
Схема 32
X-CH=CH2
X-CH2 CH2 P(OSiMe 3 )2
HP(OSiMe 3 )2
БСГ
32.1
а) BrCH 2 CH2 Br,
б) EtOH
O
X
P
OH
47 (X=Ph)
Br
201, 46a
CH(OEt)3
O
OH
O
P
Y
OH
44, 207, 286
NH2
NHAc
O
HCl
P
X
C(O)OEt
AcNHCH(COOEt)2
O
P
C(O)OEt
OEt
208 (X=Ph)
OEt
X
46, 200, 281
X = Ph (200,201,208), C(O)OEt (281), P(O)(OEt) 2 (46,46a )
Y = Ph (207 ), C(O)OH ( 286 ), P(O)(OH) 2 (44)
Дальнейшие превращения проводились по приведенной выше схеме. Так, обработка
промежуточной 2-бромэтилфосфиновой кислоты избытком триэтилортоформиата приводила
соответствующим винилфосфинатам, содержащим 2-(диэтоксифосфинил)этил- (46), 2(этоксикарбонил)этил- (281) и фенетильный (200) заместители (схема 32). Использование
винилфосфоната в качестве непредельного компонента синтеза фосфиновых кислот
несимметричного строения было описано в разделе 1.6.2 , этилакрилата и других α-замещенных
акрилатов будет рассмотрено в разделе 3.6, посвященному синтезу структурных изостеров
пептидов - фосфиновых кислых псевдо-γ-глутамилпептидов.
Введение в реакцию стирола в качестве непредельного компонента синтеза и образующегося
силилфенетилфосфонита 47 in situ в обсуждаемую процедуру с сочетанием с последующeй
аналогичной последовательностью превращений приводит к новому аналогу фосфинотрицина аминокислоте 207. Это соединение содержит липофильный фенетильный заместитель при атоме
фосфора и образуется после кислотного гидролиза фосфината 208 – продукта присоединения по
Михаэлю ацетамидомалонового эфира к винилфенетилфосфинату 200 (схема 32).
25
2.8. Модификация аминокислотного фрагмента молекулы фосфорсодержащей
аминокарбоновой кислоты. Синтез α-алкилированных аминокислот.
2.8.1. Присоединение шиффовых оснований эфиров аминокислот к винилфосфорильным
соединениям
Методология синтеза фосфорсодержащих аминокарбоновых кислот, представленная выше,
позволяет провести достаточно широкую модификацию фосфорсодержащего фрагмента и
углеводородной цепочки “канонической” молекулы. Модификацией аминокислотного фрагмента
молекулы ФА получены новые α-замещенные фосфорсодержащие аминокарбоновые кислоты 210224 (схемы 33, 34) потенциальные лиганды ионотропных или метаботропных глутаматных и
NMDA рецепторов.
Это превращение может рассматриваться как дальнейщее развитие метода синтеза
фосфорильных аналогов глутаминовой кислоты, представленного в предыдущей главе. Его
особенность заключается в том, что к винилфосфорильным соединениям по Михаэлю
присоединяется основание Шиффа 33.1, предварительно полученное из эфира соответствующей
аминокислоты (схема 33). С использованием данного подхода можно вводить необходимый
заместитель в α-положение аминокарбонового фрагмента исходной ФА-молекулы.
Схема 33
H
O
Z
OAlk
N
Ph
(X`)(Y`)P(O)CH=CH 2
33.2
Z
O
N
OAlk
O
X`
P
Y`
33.1
Ph
33.3
2N HCl
Z
O
X
P
NH2
X`
OH
P
O
Ph
P
Z
O
OH
OAlk
O
O
Z
P
NH2
OH
210 (Me), 211 (i-Pr), 212 (Ph)
HO
P
O
Ph
OH
OH
NH2
213, 214 (OEt)
HO
NH2
O
O
Me
P
33.4
Z=Me, Alk=Et
X`=Y`=Ph (214)
X`=HOOCCH 2 CH 2 , Y`=OH (216)
210-220
O
O
Y`
Y
Ph
Z
O
8N HCl
O
NH2
OH
215 (Me), 217 (i-Pr), 218 (CH
Z
O
NH2
OH
OH
2 Ph)
219 (Me), 220 (i-Pr)
X = OH; Y = OH, PhCH 2 CH 2 , HO(O)CCH 2 CH 2 ; Z = Me, i-Pr, Ph, CH 2 Ph;
X`= OEt; Y` = OEt, PhCH 2 CH 2 , EtO(O)CCH 2 CH 2 ; Alk = Me, Et;
X = Y = X`= Y`=Ph, Z = Me
Соединения 33.1 получали из аланина, валина, фенилглицина и фенилаланина и вводили в
реакцию с диэтиловым эфиром винилфосфоновой кислоты, этиловыми эфирами 2(этоксикарбонил)этил(винил)фосфиновой кислоты и фенетилвинилфосфиновой кислоты (33.2) в
среде тетрагидрофурана в присутствии карбонатов калия и(или) цезия (схема 33).
2.8.2 Алкилирование шиффовых оснований эфиров аминокислот ω-бромалкилфосфонатами
Другое направление модификации аминокислотного фрагмента молекулы ФА-кислоты
заключается
в
алкилировании
шиффовых
оснований
аминокислот
(34.1)
ω-
бромалкилфосфонатами 34.2 (n=2-5) (метод синтеза разработан и описан в разделе 2.2 (схема 21).
Алкилированные
основания
Шиффа,
α-алкил-α-бензилиденамино-ω-
(диалкилоксифосфинил)алкилкарбоновые эфиры (34.3), без выделения подвергали кислотному
гидролизу.
26
Схема 34
H
O
R
O
EtO
EtO
OAlk
N
Ph
R
O
P-(CH2)n-Br
EtO
K2CO 3 ( Cs 2CO 3 )
34.3
O
8N HCl
HO
R
O
NH2
OH
(CH2)n
P
OAlk
N
OEt
34.2, n = 2-5
O
(CH2)n
P
OH
210-212, 221-224
Ph
34.1
210. R = Me (Me-AP4), n = 2; 211. R = i-Pr (Pr i -AP4), n = 2; 212. R = Ph, n=2 (Ph-AP4), 221. R = CH 2 Ph, n = 2 (Bn-AP4),
222. R = CH 2 Ph, n = 3 (Bn-AP5), 223. R = Me, n = 4 (Me-AP6), 224. R = Me, n=5 (Me-AP7)
В результате последующей хроматографии на катионите получали ФА-кислоты (210-212,
221-224). Таким образом, использование разработанной методологии позволяет модифицировать
углеводородный, фосфорсодержащий и аминокислотный фрагменты фосфорсодержащей
аминокарбоновой кислоты.
3. Новая методология синтеза псевдо-пептидов.
Замена пептидной {C(O)NH} связи в молекуле дипептида фосфинатным {P(O)CH2}
фрагментом является перспективным подходом к дизайну молекул фосфиновых псевдо-пептидов
– потенциальных ингибиторов природных ферментов. Как уже было отмечено выше, основой
предложенной нами методологии синтеза псевдо-пептидов является получение функционально
замещенных фосфиновых кислот из гипофосфитов с образованием двух фосфор-углеродных
связей несимметричного расположения.
Б
HO
R
O
R
A
HN
OH
P
H2 N
R*
O
R*
O
(I)
N
H
H
N
O
(II)
I. Фосфиновый кислый
псевдо-{ψ(P(O)(OH)CH2}- α,α`дипептид
II. Пептидный фрагмент
Рис.10
Известный подход к конструированию молекул фосфиновых аналогов (I) дипептидов (II)
(рис.10) включает два основных этапа: синтез N-защищенного аминоалкилфосфонистого
компонента псевдо-пептида – фосфонистого аналога аминокислоты (А) и его последующее
присоединение к α-замещенному акрилату с образованием псевдо-пептидного фрагмента (Б)
[Ciba-Geigy, 1989].
Построение α-аминоалкилфосфорильного фрагмента пептида обычно состоит из четырех- и
более стадий, поскольку необходимы введение и снятие защитных групп при атомах азота и
фосфора. Кроме того, реакция присоединения силилового эфира аминоалкилфосфонистой
компоненты к акрилатам имеет свои ограничения, особенно при получении сложных
аминоалкилфосфиновых синтонов или даже оказывается безуспешной.
Предложенная нами новая методология синтеза предполагает обратный порядок
построения
целевой
молекулы:
первоначальное
присоединение
гипофосфита
к
соответствующим акрилатам с образованием фосфонистых кислот, содержащих структурный
27
изостер аминокислоты и последующее присоединение аминокислотной функции, в результате
которого формируется молекула псевдо-пептида.
3. 1. Синтез фосфонистых кислот, содержащих структурный изостер аминокислоты.
С использованием методики присоединения бис(триметилсилил)гипофосфита in situ к
акрилатам нами получены фосфонистые кислоты (225-229), содержащие структурный изостер
соответствующей аминокарбоновой кислоты (схема 35.
Схема 35
OSiMe3
1
H2POOX
AlkO
2
OH
P
HP(OSiMe3)2
O
R
O
БСГ
35.1
H
P
AlkO
3
OSiMe3
O
225a
R
225-229
1 - (Me 3Si)2NH or (Me 3Si)2NH + NH 4Cl; 2 - AlkO(O)C-C(R)=CH2; 3 - EtOH(H2O)
X = NH4 or K; R = H (225,225a ), Me ( 226), i-Bu (227), CH2COOMe ( 228), CH2CH2COOEt (229);
Alk = Me, Et
Мягкие условия синтеза исключают или сводят к минимуму образование продуктов
двойного присоединения. Фосфонистые кислоты (225-229) или их силиловые эфиры 35.1
{бис(триметилсилиловый) эфир 2-(этоксикарбонил)-этилфосфонистой кислоты 225а был выделен
и охарактеризован} были использованы in situ для получения соответствующих фосфиновых
кислых аналогов пептидов - псевдо-α,α´-дипептидов, псевдо-γ-аминобутаноилпептидов и псевдоγ-глутамилпептидов.
3.2. Амидоалкилирование гидрофосфорильных соединений.
Схема 36
(Б)
(Б)
R
O
NH2
+
R*
OAlk
O
O
H
O
OAlk
R*
H
N
O
R
OH
O
P
P
O
OH
- H2 O
225-229
36.1
(А)
Для синтеза фосфиновых аналогов α,α´-дипептидов 36.1 необходима удобная процедура
введения в молекулу α-аминофосфорильной функции А с участием различных альдегидов. В этом
случае можно осуществить амидоалкилирование фосфонистых кислот 225-229, содержащих
структурный изостер соответствующей аминокислоты (фрагмент Б) (схема 36).
Схема 37
X
Ac 2 O или
Ac2 O / AcCl
RCH(O) + AlkOC(O)NH2
N
H
37.2
N
H
O
P
Y
AlkO
или Ac2 O (H+)
O
R
O
37.1
H
OAlk
X
- AlkOC(O)NH2
O
R
O
P
Y
N
H
OAlk
230-254
Нами найдены мягкие условия для взаимодействия метил-, этилкарбамата в качестве
амидного компонента и альдегидов с различными гидрофосфорильными соединениями 37.1 в
уксусном ангидриде при комнатной температуре. В результате трехкомпонентной реакции
образуются
N-метилоксикарбонили
N-этилоксикарбонил-α-аминоалкилфосфорильные
соединения 230-240 (таблица 2) с хорошими и удовлетворительными выходами (схема 37).
28
Кислотный
катализ
{добавление
трифторуксусной
кислоты
(TFA)
или
птолуолсульфокислоты (TSA)} положительно влияет на протекание трехкомпонентной реакции в
уксусном ангидриде. Для амидоалкилирования P(O)H-соединений также эффективной средой
является смесь уксусного ангидрида и ацетилхлорида (4:1).
Таблица 2. N-Метилоксикарбонил- и N-этилоксикарбонил-α-аминофосфорильные соединения 230-240
N
X
Y
R
Alk
Выход, %
a
230
OМе
OMe
Ph
Et
231
OBu
OBu
Ph
Et
232
Me
OH
Ph
Et
233
Me
OH
Ph
Me
234
Me
OH
i-Bu
Et
235
Me
OH
i-Pr
Me
70; в67; г63
в
71; г53
a
а
a
236
Me
OH
i-Bu
Me
237
HOCH2
OH
Ph
Et
59; б73; в77; г52
79; г61
33; б38; в48; г28
a
a
32; в51
a
a
31
54
б
57; 65; в71
238
EtOC(O)CH2CH2
OH
Ph
Et
239
EtOC(O)CH2CH2
OH
i-Bu
Me
a
32
Et
a
54
240
Et
Et
Ph
Примечание. Здесь и в таблице 3 даны выходы: а) при катализе TFA(10% mol), б) TSA(2% mol), в) в
AcCl/Ac2O 1:4), г) в Ac2O, д) выход свободной аминокислоты, е) в реакции метилфосфонистой кислоты с
соответствующим N,N´-алкилиден-бис(бензилкарбаматом), ж) с использованием диэтилацеталя уксусного
альдегида.
Аминокислоты, содержащие N-бензилоксикарбонильную (Cbz) защитную группу более
предпочтительны для осуществления дальнейшего пептидного синтеза. По этой причине нами
использован бензилкарбамат и на его основе синтезирован ряд новых N-Cbz-защищенных αаминоалкилфосфорильных соединений 241-254 (таблица 3).
Таблица 3. N-Бензилоксикарбонил-α-аминоалкилфосфорильные соединения 241-254
N
X
Y
R
Выход, %
241
ОMe
ОMe
Ph
а
242
Me
OH
Me
а,ж
243
Me
OH
Et
в
244
Me
OH
i-Pr
в
245
Me
OH
i-Bu
б
46, в53, г33, е41, б,е59
246
Me
OH
Ph
б
69, в76, г61, е63, а,е69
247
PhCH2CH2
OH
Et
в
248
PhCH2CH2
OH
i-Pr
в
248
PhCH2CH2
OH
i-Bu
а
250
HOCH2
OH
i-Bu
а,д
Ph
а,д
251
HOCH2
OH
252
EtOOCCH(Me)CH2
OH
Me
253
EtOOCCH(Me)CH2
OH
Ph
254
Et
Et
Ph
63, б73, в69, г56
27, в67, е51, а,е62
61, г31
57, г30
59, г35
63, г29
31, в68
33
42
а
а
33, в57
54, б63, в69, г43
а
51, в67, г41
29
Попытки в этих условиях ввести в реакцию фталимид, ацетамид, трифторацетамид оказались
безуспешными
или
малоэффективными.
Мягкие
условия
амидоалкилирования
гидрофосфорильных соединений 37.1 с участием алкилкарбаматов позволили впервые
обнаружить,
выделить
и
охарактеризовать
интермедиаты
реакции
–
N,N´алкилиденбискарбаматы 37.2 (схема 37).
Прервав ход трехкомпонентной реакции на ранней стадии и анализируя выделенные
продукты, мы обнаружили наличие в реакционной массе смеси N-алкилоксикарбонил-αаминоалкилфосфорильного соединения (230-254) и соответствующего бискарбамата (255-263),
соотношение которых зависели от реакционной способности реагентов и времени взаимодействия.
С помощью хроматографии на силикагеле были разделены эти соединения и интермедиаты
охарактеризованы в индивидуальном виде методами ЯМР 1H,13С и 31P спектроскопии.
Схема 38
R
R'
N
H
38.1
O
R
H
N
R`
H
N
Me
RCH(O) + R*C(O)NH2
AcOH / AcCl / Ac 2 O
O
O
O
O
R``
38.2
R=i-Bu, R`=OEt (255); Bn (261)
R=Ph, R`=OMe (256), OEt (257), OBn (262)
R`=OBn, R=Me (258), Et (259), i-Pr (260), 2-Me-Bu (263)
Эти данные довольно неожиданны, поскольку ранее более вероятными интермедиатами
трехкомпонентной реакции считались ацетаты 38.2 (схема 38). Действительно, такие
интермедиаты выглядят более предпочтительными, если механизм реакции включает стадию
нуклеофильной атаки атома фосфора P(O)H-соединения на электрофильный углеродный центр 1(ациламино)алкилацетата 38.2, содержащего хорошую уходящую ацетилокси-группу. Полученные
нами результаты являются хорошим обоснованием для изучения двухкомпонентной реакции
гидрофосфорильных соединений 39.1 с бискарбаматами 39.2.
Мы нашли, что предварительно синтезированные бискарбаматы 255-263 способны
реагировать с гидрофосфорильными соединениями 39.1 в уксусном ангидриде или в смеси
ацетилхлорида и уксусного ангидрида (1:4) при комнатной температуре с образованием целевых
α-амидоалкилфосфорильных соединений 39.3 (схема 39).
Схема 39
R
AlkO
O
N
H
39.2
H
N
X
OAlk
O
O
P
+
Y
H
39.1
Ac 2 O +
O
O
H+
или Ac2 O/AcCl
O
R
Ac 2 O или
X
+
P
N
H
Y
OAlk
H2 N
OAlk
39.3
R = Me, i-Bu, Ph; X = Me, OMe, Y= OH, OMe
Отметим, что в среде бензола или толуола, этанола, диоксана, тетрагидрофурана
взаимодействия бискарбаматов с гидрофосфорильными соединениями не происходит.
Взаимодействие бискарбамата с P(O)H-компонентом в среде уксусного ангидрида является
кислотнокатализируемым процессом, в отличие от раннее опубликованных отрицательных
данных для трехкомпонентного варианта реакции. Реакция бискарбаматов c гидрофосфорильными
соединениями в среде уксусного ангидрида протекает удовлетворительно на холоду без катализа,
30
лучше с добавлением кислого катализатора (TFA или TSA), и заметно лучше реакция проходит в
смеси уксусного ангидрида и ацетилхлорида, а также в среде ацетилхлорида, но в последнем
случае
происходит
заметное
дезалкилирование
алкилоксифосфорильного
и
алкилоксикарбонильного фрагментов. Добавление трифторуксусной кислоты (TFA), птолуолсульфокислоты (TSA) к смеси реагентов в уксусном ангидриде, а также проведение
двухкомпонентного варианта реакции в смеси ацетилхлорида и уксусного ангидрида (1:4)
приводят к заметному увеличению скорости реакции и выходов продуктов реакции.
Взаимодействие N,N´-изоамилиденбис(этилкарбамата) 255 и метилфосфонистой
кислоты было исследовано с использованием метода спектроскопии 31P ЯМР (рис.11 и 12).
Схема 40
O
O
O
HN
+
H
N
P
Ac 2 O +
H+
H
O
H
N
O
O
P
O
+
O
H2 N
OH
OH
O
O
255
234
31
( Доля продукта в смеси P)
1,0
Рис. 11. Зависимость доли продукта 234 в
реакционной смеси {соотношения интегральных
интенсивностей сигналов 31P продукта 234 и
суммы сигналов 31P продукта и
метилфосфонистой кислоты в спектре 31P ЯМР
смеси} от продолжительности реакции (часы) и
кислого катализа в уксусном ангидриде): (1) - птолуолсульфокислота (2 мол.%), (2) –
трифторуксусная кислота (10 мол.%), (3) – в
отсутствие катализатора
0,8
0,6
1
2
3
0,4
0,2
0,0
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
Время реакции, ч
Полученные
результаты
позволяют
заключить,
что
амидоалкилирование
гидрофосфорильных соединений представляет собой многостадийный процесс. Стадией,
определяющей скорость реакции, вероятно, является протонирование атомов кислорода (С=O) или
азота амидного фрагмента интермедиата – бисалкилкарбамата 41.1, с последующим выделением
молекулы алкилкарбамата 41.2 и образованием промежуточного реакционноспособного N(алкилоксикарбонил)иминиевого катиона (соли) 41.3 (схема 41).
Схема 41
OAlk
O
N
H
H
N
OAlk
O
Ac2 O или AcCl
+H+ из P-H компоненты
O
R
41.1
H
OAlk
+
C
R
Z =OAc или Cl
N
H
NH2
+
O
OAlk
Z41.3
41.2
Бискарбаматы 42.1 взаимодействуют с гидрофосфорильными соединениями 42.2
(метилфосфонистой кислотой или диметилфосфитом) в уксусном ангидриде на холоду и в
отсутствие кислотного катализатора. Однако, в уксусной кислоте образования соответствующих
α-амидоалкилфосфорильных соединений 42.3 в этих условиях не происходит (схема 41). Следует
отметить, что в обоих случаях кислотный катализ обусловлен уксусной кислотой, которая
31
используется в качестве реакционной среды, или образуется в процессе взаимодействия P(О)Hкомпонента с уксусным ангидридом.
Схема 42
XYPH(O) 42.2
AlkO
H
N
42.3
AcOH, 15-20 oС,
3 дня
AlkO
O
N
H
O
R
O
XYPH(O) 42.2
X
Ac 2O, 15-20 oС,
5-15 ч
42.1
R
O
P
Y
42.3
N
H
OAlk
R = i-Bu, Ph; X = Me, MeO; Y = MeO, OH
Отсутствие реакции в среде уксусной кислоты и ее замедление в смеси уксусного ангидрида
и уксусной кислоты наглядно подтверждается взаимодействием N,N`-изоамилиденбис(этилкарбамата) 255 с метилфосфонистой кислотой (рис.12).
1,0
31
( Доля продукта в смеси P)
0,9
0,8
0,7
0,6
1
2
3
0,5
0,4
0,3
0,2
0,1
0,0
0
20
40
60
80
100
120
140
160
Рис. 12. Зависимость доли продукта 234 в
реакционной смеси {соотношения интегральных
интенсивностей сигналов 31P продукта 234 и суммы
сигналов 31P продукта и метилфосфонистой
кислоты в спектре 31P ЯМР реакционной смеси} от
продолжительности реакции (часы) при разбавлении
толуолом в соотношении (1:1) в: (1) уксусном
ангидриде, (2) смеси уксусного ангидрида и
уксусной кислоты и (3) в уксусной кислоте.
Врем я реакции, ч
Полученные данные могут свидетельствовать о следующем:
1) исходный Р(О)Н-компонент и интермедиат (бискарбамат) непосредственно не участвуют
в формировании фосфор-углеродной связи,
2) относительно слабая уксусная кислота способна обеспечить образование промежуточного
ацилиминиевого катиона 41.3 в соответствии со схемой 41,
3) взаимодействие исходного Р(О)Н-компонента и генерируемого in situ ацилиминиевого
иона также не приводит к образованию фосфор-углеродной связи,
4) исходный фосфорный компонент в уксусном ангидриде, вероятно, превращается в более
реакционноспособное соединение по отношению к ацилиминиевому катиону.
Результаты исследования позволяют предположить, что соединением, непосредственно
взаимодействующим с ацилиминиевым катионом 41.3, является P-OAc-производное
трехвалентного фосфора 43.1 (схема 43). Вероятно, в среде ацетилхлорида гидрофосфорильные
соединения 43.2 превращаются в соответствующие хлориды трехвалентного фосфора 43.3 через
стадию образования соединений 43.1 (схема 43).
Схема 43
P-OAc-Форма 43.1, вероятно, является
+ AcCl
Me
X
промежуточной между формами P(О)H и P-Cl,
X
O + Ac2O (или AcCl)
P
O
X
P Cl
участвующими в равновесном процессе,
Y
H
O P
Y
- Ac2 O
- HOAc (или HCl)
43.2
43.3
который протекает в системе AcOH-Ac2OY
43.1
AcCl (схема 43).
32
Увеличение содержания ацетилхлорида в смеси сдвигает равновесие в сторону образования
хлоридов трехвалентного фосфора 43.3, а содержания уксусной кислоты - к образованию
гидрофосфорильной формы 43.2. Возможно, уксусный ангидрид является более мягким и
удобным растворителем-реагентом для образования Р-ОАс-производных 43.1 (схема 43). Мы
обнаружили два сигнала атомов фосфора в области, характерной для соединений трехвалентного
фосфора, в спектрах ЯМР 31Р растворов метилфосфонистой кислоты в ацетилхлориде и
метилдихлорфосфина в уксусном ангидриде. Сигнал в области δР 198 м.д. соответствует атому
фосфора MePCl2. По-видимому, второй сигнал в области δР 185 м.д. соответствует одному из двух
формально возможных P-OAc-производных MeP(H)(O)OH – {MeP(OAc)Cl или MeP(OAc)2},
образование последнего в избытке уксусного ангидрида представляется более вероятным.
С целью подтверждения генерирования in situ POAc-производных трехвалентного фосфора в
условиях амидоалкилирования гидрофосфорильных соединений мы провели моделирование
предполагаемой стадии образования фосфор-углеродной связи. В условиях, благоприятных и
неблагоприятных для генерирования ацилиминиевого иона 44.1 из алкилиденбискарбамата 44.2, в
реакцию вводили диэтилацетилфосфит 44.3. Последний использовали как предварительно
синтезированный (схема 44), так и образующийся in situ из тетраэтилпирофосфита (схема 45).
Схема 44
OBn
H
N
44.3
Ph
C
Ac2 O
NH
O
(+H+)
- H2 NC(O)OBn
OBn
EtO
+
O
44.4
Ac2O
Ph
44.2
H3C
OBn
H
N
P
O
H
O
EtO
O
O
44.3
CH3
O
134.6 м.д.
44.1
OEt
EtO
P
+
O
O
O
H
N
OBn
Ph
O
EtO
O
-
CH3
CH3
O
- Ac2O
H
N
P
OEt
44.4
O
OBn
Ph
21.7 м.д.
Полученные результаты подтверждают необходимость кислотного катализа (АсОН или TFA,
~10 мол. %) для генерирования ацилиминиевого иона 44.1 и образования целевого фосфоната 44.4
(δР~21.7 м.д.). Ацетилфосфит 44.3 (δР~134.6 м.д.) и бискарбамат 44.2 в уксусном ангидриде не
образуют фосфонат 44.4 в отсутствие катализа (схема 44).
Схема 45
EtO
P
EtO
а) 1 экв. AcOH
O
EtO
OEt
129.7 м.д.
EtO
P
45a
134.6 м.д.
(X=Me)
катион (соль) 44.1
X
O
O
O
O
9.1 м.д.
OEt
б) или TFA
P
катион (соль) 44.1
P
OEt
EtO
H
O
45б
138.0 м.д.
(X=CF3 )
- Ac 2 O
или AcOC(O)CF 3
EtO
Ph
P
OBn
N
H
OEt H
44.4
21.7 м.д.
Использование тетраэтилпирофосфита в качестве источника диэтилацетилфосфита 45а или
диэтилтрифторацетилфосфита 45б также подтверждает образование N-Cbz-α-аминофосфоната
44.4, поскольку диэтилфосфит (δР~9.1 м.д.) не расходовался в процессе реакции (схема 45).
Ацилоксипроизводные трехвалентного фосфора 46.1 (схема 46) могут быть более
реакционноспособными соединениями по отношению к ацилиминиевым катионам 46.2 в
сравнении с исходными Р(О)Н-производными. Они содержат нуклеофильный атом фосфора и
33
электрофильный углеродный атом AcO-группы и, следовательно, могут легко превращаться по
типу реакции Арбузова (схема 46).
Нуклеофильный атом трехвалентного фосфора молекулы 46.1 атакует положительно
заряженный атом углерода иминиевого катиона 46.2 с последующим формированием фосфоруглеродной связи. Затем быстро протекает атака аниона (Z) на электрофильный углеродный атом
AcO-фрагмента промежуточного фосфониевого интермедиата 46.3, которая приводит к целевому
α-амидофосфорильному соединению 46.4 (схема 46).
Таким образом, результаты наших исследований позволяют предложить новую версию
механизма трехкомпонентной реакции амидоалкилирования гидрофосфорильных соединений в
уксусном ангидриде. Этот многостадийный процесс включает стадию образования N,N`алкилиден-бискарбаматов и превращение, протекающее по типу реакции Арбузова, с участием
генерированных in situ P-OAc-производного трехвалентного фосфора (46.1) и N(алкилоксикарбонил)иминиевого катиона (46.2) (схема 46).
Схема 46
H
X
R
Y
OAlk
C
P
Y
O
H
N
+
X
O
O
46.1
X
N
H
P
- AcZ
R
O
R
OAlk
+
O
O
46.2
H
Z
+
O
OAlk
N
H
P
Y
O
46.4
Z = Cl, OAc
-
H
46.3
Новая методика амидоалкилирования гидрофосфорильных соединений в смеси уксусного
ангидрида и ацетилхлорида в мягких условиях может применяться с использованием как
ароматических, так и для менее реакционноспособных алифатических альдегидов. В результате
получаются N-защищенные α-аминофосфорильные соединения 230-254 с сохранением эфирных
алкоксифосфорильных и алкоксикарбоксильных фрагментов целевой молекулы. Следовательно,
данную процедуру можно рекомендовать для синтеза широкого ряда фосфиновых кислых псевдоα,α`-дипептидов.
3.3. Реакция Арбузова N-алкоксикарбонилиминиевых ионов и ацилфосфонитов,
генерированных in situ трифторуксусным ангидридом
Новая идеология генерирования реакционных интермедиатов, образующих Р-С связь,
позволила разработать метод синтеза N-защищенных α-аминоалкилфосфиновых кислот (схема 47)
с добавлением трифторуксусного ангидрида (TFAА) к смеси гидрофосфорильного соединения
47.1 и N,N`-алкилиденбискарбамата 47.2 в растворе хлористого метилена или толуола на холоду с
последующей водной обработкой.
Схема 47
O
O
H
+
F3 C
O
CF3
O
O
P
X
H
N
+
OH
AlkO
R
47.1
47.2
O
OAlk
1) r.t., CH 2 Cl 2 or MePh;
2) H2 O
N
H
255-263
X = Me, EtOC(O)CH2 CH2 , EtOC(O)CH(Me)CH2 ;
R = Me, Et, i-Pr, i-Bu, CH(Me)CH 2 Me, Ph ; Alk = Et, CH2 Ph
O
X
H
N
P
OH
O
OAlk
R
232, 234, 238, 242-246, 252,
264-269
Данная процедура позволяет получить N-алкилоксикарбонил-α-aминоалкилфосфиновые
кислоты 232, 234, 238, 242-246, 252, синтезированные нами ранее и описанные в разделе 3.2, а
также новые N-защищенные аминофосфиновые кислоты 264-269 с хорошими и
34
удовлетворительными выходами (таблица 4). В качестве гидрофосфорильного компонента были
исследованы
метилфосфонистая
кислота
и
фосфонистые
кислоты
2(этилоксикарбонил)этилфосфонистая и 2-(этилоксикарбонил)пропилфосфонистая кислоты
(таблица 4), содержащие структурный изостер глицина и аланина.
Порядок добавления трифторуксусного ангидрида к раствору смеси фосфонистой кислоты
48.1 и N,N`-алкилиденбисалкилкарбамата 48.2 в хлористом метилене или толуоле при комнатной
температуре определяет первоначальное генерирование PIII-OAc-производного трехвалентного
фосфора 48.3 in situ в результате взаимодействия фосфонистой кислоты 48.1 и TFAА (стадия А,
схема 48) с выделением трифторуксусной кислоты. Последняя инициирует последующее
генерирование N-алкилоксикарбонилиминиевого катиона (соли) 48.4 in situ из N,N`алкилиденбис(алкилкарбамата) 48.2 (стадия Б, схема 48).
Схема 48
CF3
O
A)
X
H + 2 CF3
P
O
OH
O
48.1
O
CF3
O
- [2TFA]
CF3
O
X
P
O
O
OAlk
Б)
O
N
H
OAlk
H
N
O
+
C
- AlkOC(O)NH2
R
R
В)
_ O
O
CF3
CF3
O
O
OAlk
H
+
P
X
N
H
48.4
CF3
O
OAlk
H
+ [TFA]
48.2
O
48.3
O
C
O
R
O
CF3
CF3
48.3
H
N
O
X
O
P
48.7
O
X
N
H
P
H
O
CF3
48.4
48.6
N
H
R
O
X
- TFAA
O
H
N
P
O
- TFAA
O
_
O
+ TFA
OAlk
+
O
O
_
OAlk
R
O
CF3
O
O
CF3
O
OAlk
R
48.5:
232, 234, 238, 242-246, 252, 264-269
Образование целевых α-aминоалкилфосфиновых кислот (48.5: 232, 238, 252, 264269) в среде органического растворителя
подтверждает предложенный нами механизм.
Атом фосфора
бис(трифторацетил)фосфонита 48.3,
имеющий неподеленную электронную пару,
атакует положительно заряженный
углеродный атом N-(бензилоксикарбонил)иминиевого катиона 48.4, в результате
формируется связь Р-С (стадия В, схема 48).
Атака аниона CF3COO- на электрофильный
атом углерода ацильного фрагмента
фосфониевого катиона 48.6 приводит к
образованию целевого фосфината и
регенерации молекулы ТFAA.
Таким образом, процесс формирования новой фосфор-углеродной связи протекает по схеме
реакции Арбузова и приводит к эфирам фосфиновых кислот 46.7, которые являются смешанными
ангидридами соответствующей фосфиновой и трифторуксусной кислот. В отличие от
классической реакции Арбузова нуклеофильная атака атома фосфора в данном случае направлена
на катион, а не на электрофильный атом углерода нейтрального соединения. Вероятно, атака
аниона CF3COO- ацильного фрагмента происходит сразу же после образования связи Р-С.
Оказалось, что оптимальным является эквимолярное соотношение реагентов – фосфонистой
кислоты (48.1), N,N`-алкилиденбис(алкилкарбамата) (48.2) и TFAA (таблица 21). Это соотношение
может служить косвенным подтверждением того, что трифторуксусный ангидрид выступает в
качестве не только катализатора реакции, но и реагента.
35
В соответствии с предложенным механизмом реакции, он должен входить в состав
образующихся продуктов, что было установлено с помощью спектроскопии ЯМР. Эти результаты
находятся в согласии с полученными ранее данными и свидетельствуют о кислотнокатализируемом характере реакции.
Taблица 4. N-Защищенные-α-aминоалкилфосфиновые кислоты 232, 234, 238, 242-246, 252, 264-269
N
232
234
238
242
243
244
245
246
252
264
265
266
267
268
269
X
Me
Me
EtOOСCH2CH2
Me
Me
Me
Me
Me
EtOOСCH(Me)CH2
Me
EtOОCCH2CH2
EtOОCCH2CH2
EtOOСCH2CH2
EtOOСCH(Me)CH2
EtOOСCH(Me)CH2
R
Ph
i-Bu
Ph
Me
Et
i-Pr
i-Bu
Ph
Me
CH(Me)CH2Me
i-Pr
i-Bu
Ph
i-Bu
CH(Me)CH2Me
Alk
Et
Et
Et
Bn
Bn
Bn
Bn
Bn
Bn
Bn
Bn
Bn
Bn
Bn
Bn
а
Выход, %
57.6
62.3, б17.0, в42.3
59.4
67.1
58.7, б14.1, г31.7
51.8, б15.3
64.2
61.7
37.5
50.3
51.5
49.4
55.8
28.3, д50.3
30.7, д48.5
Примечание: а1.0 мол.эквивалент TFAA; б0.5 мол.эквивалента TFAA; в0.8 мол.эквивалент TFAA; г1.5
эквивалента; дФосфонистая кислота предварительно соупарена с уксусным ангидридом
3.4. Новый подход к синтезу некоторых труднодоступных фосфиновых кислых аналогов
аминокислот и пептидов.
Попытки ввести в трехкомпонентную реакцию амидоалкилирования гидрофосфорильных
соединений некоторые малостабильные альдегиды и ацетали альдегидов были безуспешны или
малоэффективны. В качестве стабильных синтетических эквивалентов таких альдегидов для
реакции
с
гидрофосфорильными
соединениями
можно
рассматривать
N,N`алкилиденбискарбаматы. В соответствии с предложенным нами механизмом при добавлении
трифторуксусного ангидрида к смеси бискарбамата и Р(O)Н-компонента в эквимолярном
соотношении в органическом растворителе генерируются иминиевый катион и РIII-ОС(O)CF3
производное трехвалентного фосфора, образующие целевую связь Р-С продукта.
Этот подход позволяет синтезировать ряд труднодоступных фосфорильных аналогов
аминокислот и пептидов. В качестве исходных соединений для синтеза алкилиденбискарбаматов
258, 255, 270, 271 и β-(N-бензилоксикарбонил) аминоакрилата 272 могут выступать ацетали
альдегидов (cхема 49).
Взаимодействие карбаматов и β-аминоакрилата с гидрофосфорильными соединениями
протекает в органической среде с генерированием in situ высокореакционноспособных
интермедиатов. Добавление 1 экв. трифторуксусного ангидрида к смеси реагентов приводит к
образованию по схеме реакции Арбузова смешанных РIV-OC(O)CF3 ангидридов, водная обработка
которых дает целевые продукты 234, 242, 273-275. В качестве исходных соединений были
исследованы ацетали уксусного, изовалерианового, бензилоксиуксусного (49.1, R=CH2OBn),
фенилуксусного (49.1, R=Bn) и этилоксикарбонилуксусного (49.2, R= CH2C(O)OEt) альдегидов.
36
Схема 49
OMe
AlkOC(O)NH2
R
NHC(O)OAlk
R
TFA
OMe
NHC(O)OAlk
(49.1)
a) Me-PH(O)OH,
{CF3C(O)}2O
255, 258, 270, 271
H
N
O
Me
P
б) H2 O
O
OAlk
OH
R
234, 242, 273-275
NHCbz
EtOOC
272
- TFA
EtO
OEt
CBzNH2
EtOOC
NHCbz
TFA
COOEt
NHCbz
EtOOC
TFA
- CbzNH2
+
C
CF3 COO-
49.3
49.2
H
NHCbz
49.4
Alk = Et, Bn; R = Me, i-Bu, CH
OBn, Bn, CH2 C(O)OEt
2
Интерес к использованию трех последних
реагентов обусловлен тем, что образующиеся из
N
R
Alk
Выход, %
них фосфиновые псевдо-пептиды или
фосфорильные аналоги соответствующей
i-Bu
Et
55
234
аминокислоты представляют собой изостеры
Me
Bn
53
242
серинового, фенилаланинового и аспарагинового
CH2OBn
Bn
53
273
фрагментов, соответственно. В качестве
Bn
Et
51
274
гидрофосфорильного компонента была изучена
CH2C(O)OEt
Bn
68
275
метилфосфонистая кислота.
В реакцию были введены альдегиды, генерированные in situ из ацеталей в условиях
кислотного катализа, который необходим также и для последующего взаимодействия альдегида с
алкилкарбаматом с целью выхода к N,N`-алкилиденбискарбаматам (258, 255, 270, 271).
Присутствие трифторуксусной кислоты облегчает протекание процесса.
Ацетали уксусного, изовалерианового, фенилуксусного и бензилоксиуксусного альдегида,
как и ожидалось, реагируют в уксусном ангидриде с 2 экв. алкилкарбамата в присутствии
трифторуксусной кислоты с образованием соответствующего N,N`-алкилиденбискарбамата (258,
255, 270, 271). Однако, попытка синтезировать аналогичный бискарбамат с участием
диэтилацеталя этилоксикарбонилуксусного альдегида и 2 экв. бензилкарбамата в присутствии 2.5
экв. TFA в уксусном ангидриде неожиданно привела к этиловому эфиру β-(Nбензилоксикарбонил)аминоакриловой кислоты 273 (схема 49). По-видимому, первоначально
образуется бискарбамат 49.3, который в условиях кислотного катализа превращается в N-Cbz-βаминоакрилат 272 с выделением молекулы бензилкарбамата и образованием промежуточного N(бензилоксикарбонил)-иминиевого катиона (соли) 49.4. Превращению последнего в акрилат 272
способствует наличие электроноакцепторной сложноэфирной группы. Этот результат также
может служить подтверждением предложенного нами механизма кислотно катализируемого
образования N-алкилоксикарбонилиминиевых ионов из N,N`-алкилиденбискарбаматов при
амидоалкилировании гидрофосфорильных соединений.
Taблица 5. N-Алкилоксикарбонил-αаминоалкилметилфосфиновые кислоты
37
Бискарбаматы 258, 255, 270, 271 вступают в реакцию с метилфосфонистой кислотой и
трифторуксусным ангидридом в толуоле или хлористом метилене. В соответствии с описанным
выше механизмом, генерируемые реакционноспособные интермедиаты взаимодействуют по схеме
реакции Арбузова с образованием N-алкилоксикарбонил-α-аминофосфиновых кислот (242, 234,
273, 274). β-N-Cbz-Аминоакрилат 272 реагирует c метилфосфонистой кислотой и
трифторуксусным ангидридом в толуоле на холоду.
При последующей обработке водой выделяется соответствующая N-Cbz-защищенная αаминофосфиновая кислота 275 с хорошим выходом, что подтверждает генерирование in situ в
условиях
реакции
соответствующих
бис(трифторацетил)метилфосфонита
и
N(бензилоксикарбонил)иминиевого иона.
Таким образом, предложен общий метод синтеза N-алкилоксикарбонил-α-аминофосфиновых
кислот, в том числе соединений, содержащих структурный изостерный фрагмент серина,
фенилаланина и аспарагиновой кислоты. Этот подход позволяет получить ряд труднодоступных
фосфорильных аналогов аминокислот и фосфиновых кислых псевдо-пептидов из ацеталей
малостабильных альдегидов.
3.5. Развитие методологии синтеза псевдо-γ-аминобутаноилпептидов
(фосфиновых аналогов пептидов γ-аминомасляной кислоты)
Ключевыми интермедиатами служили силиловые эфиры фосфонистых кислот 50.1,
содержащих структурный изостер соответствующей аминокарбоновой кислоты. Эти соединения
получаются in situ (схема 50) и взаимодействуют по типу реакции Арбузова с молекулой N-(3бромпропил)фталимида и образованием второй фосфор-углеродной связи.
Этот подход позволяет синтезировать фосфиновые кислые псевдо-γ-аминобутаноилпептиды
А – псевдо-пептиды γ-аминомасляной кислоты – аналоги пептидов ГАМК (Б), в молекуле которых
одна пептидная связь замещена негидролизуемым метиленфосфорильным фрагментом (Рис.13).
Такие соединения представляют интерес как эффективные лиганды ГАМК рецепторов.
NH2
OH
HO
R
O
N
H
P
HO
O
O
NH2
R
Б
A
O
Рис 13
С использованием α-замещенных акрилатов были получены псевдо-пептиды 276-280.
Например, введение в реакцию этилакрилата в качестве непредельного компонента дает псевдо-γаминобутаноилглицин {γ-Abu-ψ(PO2CH2)Gly} 276, применение этилметакрилата приводит к
псевдо-γ-аминобутаноилаланину
{γ-Abu-ψ(PO2CH2)Ala}
277,
использование
этил-αизобутилакрилата позволяет получить псевдо-γ-аминобутаноилвалин {γ-Abu-ψ(PO2CH2)Val} 278,
а диметилового эфира итаконовой кислоты - псевдо-γ-аминобутаноиласпартат {γ-Abuψ(PO2CH2)Asp} 279 (схема 50).
Силилфосфониты 50.1 in situ взаимодействуют с N-(3-бромпропил)фталимидом по типу
реакции
Арбузова
с
образованием
2-замещенных-2-(алкоксикарбонил)этил-3-
38
(фталилимино)пропилфосфиновых кислот 50.3, которые могут быть выделены в индивидуальном
виде, например, кислота 280.
Схема 50
OAl k
(Me 3 S i) 2 NH
H 2 P O ONH 4
HP(OS iMe 3 ) 2
R`
БСГ
P
O
O
R
50.1
HO
O
HCl
O
(CH 2 ) 3
P
NH 2
OS iMe 3
OAl k
50.2
a)Br-(CH 2 ) 3 -NPhth
O
OS iMe 3
R`
R`
O
O
Al k O
P
OH
OH
276-279
50.3
R = H (276) , Me ( 277 ), i-Bu (278) , CH 2 C(O)OH ( 279) ;
b) EtOH
(CH 2 ) 3
N
O
280 (R`=H, Alk=Et)
R`= H, Me, i Bu,
CH 2 COOMe
Al k = Me, Et
Последующий гидролиз приводит к соответствующим 2-замещенным 2-(гидроксикарбонил)
этил-3-аминопропилфосфиновым кислотам – псевдо-γ-аминобутаноилпептидам 276-279.
3. 6. Методология синтеза псевдо-γ-глутамилпептидов.
3.6.1. Метод синтеза винилфосфиновых кислот, содержащих структурный изостер
аминокислоты
Метод синтеза фосфиновых кислот на основе гипофосфитов с участием α-замещенных
акрилатов (для образования первой связи Р-С) и избытка дибромэтана (для образования второй
связи Р-С) был использован для получения эфиров винилфосфиновых кислот. Обработка
образующихся in situ 2-бромэтилфосфиновых кислот 51.2 избытком триэтилортоформиата дает
ряд эфиров винилфосфиновых кислот, содержащих структурные изостеры соответствующих
аминокислот. Эти винилфосфинаты были использованы в качестве исходных соединений для
присоединения аминокислотной функции и образования ряда псевдо-γ-глутамилпептидов с
хорошими выходами.
Схема 51
H2POONH4
1
OSiMe3
HP
OSiMe3
БСГ
O
R
OSiMe3
AlkO
R`
O
2
P
3,4
O
AlkO
Br
P
OSiMe3
51.2
51.1
R
O
5
OEt
P
AlkO
OH
281-285
O
1. (Me 3Si)2NH; 2. EtO(O)C-C(R)=CH 2; 3. BrCH 2CH2Br (-Me 3SiBr); 4. EtOH; 5. CH(OEt) 3;
R`: H (281), Me(282), i-Bu(283), CH 2C(O)OMe(284), CH 2CH2C(O)OEt(285)
Конструирование
псевдо-γ-глутамилпептидов
в
соответствии
с
этой
процедурой
представляет собой двухстадийный процесс (схема 51, 52). На первой стадии осуществляется onepot формирование обеих фосфор-углеродных связей. В результате образуются винилфосфинаты
281-285, содержащие β-R`-замещенный β-(алкоксикарбонил)этильный фрагмент – структурный
изостер соответствующей аминокислоты в молекуле будущего псевдо-пептида (схема 52).
39
3.6.2 Синтез псевдо-γ-глутамилпептидов.
Схема 52
O
R`
O
OEt
P
AlkO
O
1
AlkO
O
O
C(O)OEt
R`
P
NHAc
O
2
OH
OH
C(O)OEt
HO
OEt
281-285
O
P
NH2
R
286-290
52.1
1. AcNHCH(COOEt)2 /K2 CO 3 ; 2. HCl,reflux; Dowex
50W(H +)
R`= H (281), Me (282), i-Bu (283), CH 2 C(O)OMe (284), CH 2 CH2 C(O)OEt (285);
R=H (286), Me (287), i-Bu (288), CH 2 C(O)OH (289), CH 2 CH2 C(O)OH (290)
Присоединение ацетамидомалонового эфира по Михаэлю к винилфосфинатам 281-285 в
тетрагидрофуране приводит к соответствующим 2-R`-замещенным 2-алкоксикарбонил-этил-3-(Nацетил)-амино-3,3–бис(этоксикарбонил)пропилфосфинатам 52.1. Последние без выделения
превращают в целевые псевдо-пептиды путем кислотного гидролиза и последующей
ионообменной хроматографии на катионите. 2-Замещенные 2-гидроксикарбонил-этил-3-амино-3(гидроксикарбонил)пропилфосфиновые
кислоты
286-290
(псевдо-γ-глутамилпептиды)
были
выделены с выходом 50-71% и охарактеризованы спектральными методами.
Таким образом, разработан общий метод синтеза псевдо-γ-глутамилпептидов из аммоний
гипофосфита аммония, представляющий собой двухстадийный процесс с образованием βзамещенных β-(алкоксикарбонил)этилвинилфосфинатов на первой стадии и присоединением
аминокислотной функции на второй.
4. Методы синтеза энантиомеров фосфорсодержащих аминокарбоновых кислот и
фосфиновых псевдо-пептидов
4.1. Асимметрический синтез энантиомеров фосфорсодержащих аминокарбоновых кислот
Для синтеза энантиомерных ω-фосфоно-α-аминокарбоновых кислот нами был использован
разработанный ранее метод стереоселективного введения алкильного радикала в метиленовую
группу глицина (Белоконем Ю.Н. с сотр., 1985).
Глицин взаимодействием с (N-бензил-S- или -R-пролил)аминобензофеноном (53.1) был
превращен в соответствующее шиффово основание (схема 53). Последнее в присутствии
никелевых солей образует стабильный никелевый комплекс (53.2), содержащий S- или Rпролиновый фрагмент и метиленовую группу, активность которой повышена. Алкилирование
активированного глицинового метиленового фрагмента S-пролинового никелевого комплекса
(53.2) диэтил-ω-бромалкилфосфонатами 53.3 в присутствии щелочи приводит к образованию
смеси диастереомерных комплексов 291-297 S,S- и S,R-конфигурации. Соответственно, при
алкилировании хирального комплекса 53.2 (R)-конфигурации получается смесь R,R- и R,Sдиастереомеров. В обоих случаях соотношение диастереомеров S,S)/S,R и R,R/R,S составляет
~95/5. Разложением алкилированных комплексов 291-297 в 2N HCl получены этиловые эфиры
фосфорсодержащих аминокислот 298-304 с энантиомерной чистотой 95-97%, что определено
методом лигандообменной хроматографии. Хиральные индуцирующие реагенты S- и R- (N-
40
бензил-пролил)-о-аминобензофеноны (53.1) могут быть регенерированы при разложении
комплексов 291-297 с выходом 93-97%.
Схема 53
EtO
Ph
O
Ph
N
N
H2N
O
NH
O
O
Ni
H
N
N
O
2+
O
O
Ni
Ph
EtO
P
O
A
53.3
X
H
Ph
53.1
53.2
Ph
N
O
Ni
O
2N HCl,
r.t.
O
EtO
EtO
N
N
H
P
8N HCl,
reflux
O
A
H
O
NH2
O
A
Ph
P(O)(OEt)2
291-297
298-304
O
O
P
O
A
H
O
NH2
O
305-311
A = (CH 2 )n, n = 1 - 4, CH 2 OCH2 , o-C 6 H4 ; X = Br, Cl
Свободные ω-фосфоно-α-аминокарбоновые кислоты 305-311 образуются при кислотном
гидролизе этиловых эфиров 298-304 без заметной рацемизации с выделением энантиомерно
чистых аминокислот из водного спирта. Фосфоновые аминокарбоновые кислоты 306, 307, 299-311
получены в виде S-энантиомеров, 2-амино-5-фосфоновалериановая кислота (АР5) выделена в виде
R-энантиомера 303, а в случае 2-амино-7-фосфоногептановой кислоты (АР7) получены оба
оптических антипода S-энантиомер 307 и R-энантиомер 308.
4.2. Ферментативный метод синтеза энантиомеров аминокислот и псевдо-пептидов
4.2.1. Синтез энантиомеров фосфорсодержащих аминокарбоновых кислот
Стереоселективность многих биологических мишеней часто непредсказуема, поэтому для
изучения физиологической активности новых аминокислотных и пептидных производных обычно
необходимо наличие обоих оптических антиподов. Для разделения рацемических смесей
аминокислот использование ферментов наиболее предпочтительно, так как позволяюет выделить
оба энантиомера. С помощью ферментативного катализа можно синтезировать не только
энантиомерные фосфорсодержащие аминокарбоновые кислоты, но и α-аминофосфиновые
кислоты, а также энантиомеры псевдо-пептидов.
Нами предложен метод синтеза энантиомеров фосфорсодержащих аминокарбоновых кислот,
включающий ферментативный стереоселективный гидролиз N-ацилированных производных
аминокислот. На ключевой стадии в качестве биокатализатора была использована
пенициллинамидаза (PcAm) в иммобилизованной форме, обладающая высокой (~103-104) S/Rстереоселективностью гидролиза амидной связи в молекуле N-фенилацетилированных
производных аминокислот. В качестве объектов исследования были выбраны 2-амино-4фосфономасляная (АР4) (209) (n=2), 2-амино-5-фосфоновалериановая (АР5) (123) (n=3) и 2-амино7-фосфоногептановая (АР7) (125) (n=5) кислоты (схема 54), обладающие нейропротекторными
свойствами. R,S-N-Фенилацетилированные производные аминокислот (312-314) были получены в
41
условиях реакции Шоттена-Баумана взаимодействием фенилацетилхлорида с R,S-аминокислотами
(209, 123, 125).
Схема 54
O
HO
O
O
HO
OH
(CH2)n
P
Cl
Ph
H
HO
(CH2)n
O
(CH2)n
O
N
H
OH
R,S - 312-314
n = 2, 3, 5
R,S - 209 (n=2),
123 (n=3), 125 (n=5)
P
P
HO
NH2
OH
O
O
O
HCl
NH2
HO
H
OH
OH
HO
O
R - 316 (n=2), 305 (n=3), 308 (n=5)
O
(CH2)n
P
NH
PcAm
Dowex H+
OH
Ph
O
HO
P
OH
O
H
O
NH2
OH
(CH2)n
S - 315 (n=2), 317 (n=3), 307 (n=5)
Ph
54.1 R - N-PhAc-ФА
Стадию ферментативного гидролиза рацемических N-фенилацетил производных
аминокислот 312-314 контролировали методом ВЭЖХ, реакцию останавливали после
превращения половины исходного количества амидного производного в свободную
аминокислоту. Образующиеся S-энантиомеры аминокислот S-315 (n=2), S-317 (n=3), S-307 (n=5) с
помощью ионообменной хроматографии на катионите отделяли от негидролизованной R-формы
N-фенилацетилированной аминокислоты 54.1. Кислотный гидролиз последней без заметной
рацемизации приводит к R-форме, что позволило выделить энантиомеры – R-316 (n=2), R-305
(n=3), R-308 (n=5). Обе оптические формы аминокислот характеризовались более высокой (≥99%)
энантиомерной чистотой по сравнению с продуктами асимметрического синтеза.
2.2. Исследование предложенной процедуры ферментативного синтеза энантиомеров
аминокислот
С целью исследования границ применимости ферментативного синтеза энантиомерных
аминокислот, мы использовали иммобилизованную пенициллинамидазу в качестве
биокатализатора стереоселективного гидролиза N-фенилацетилированных производных
различного строения.
2.2.1. Cинтез энантиомеров 2-метил-2-амино-4-фосфономасляной кислоты МАР4.
Известно, что α-алкилированные α-аминокислоты обладают свойствами лигандов
метаботропных глутаматных рецепторов (MGluR). α-Метил-γ-фосфоновый аналог глутаминовой
кислоты – 2-метил-2-амино-4-фосфономасляная кислота (MAP4) (210) является агонистом одного
из типов MGluR.
Нами впервые предложен ферментативный синтез R- и S-энантиомеров МАР4 (схема 55) по
аналогии с разработанным нами методом ферментативного синтеза энантиомеров ФА-кислот.
Попытка ацилирования аминокислоты 210 с использованием классической процедуры ШоттенаБаумана оказалась неудачной. В отличие от α-незамещенных α-аминокислот потребовалось
предварительное
силилирование
аминокислоты
210.
Последующее
взаимодействие
42
силилированного производного 55.1 in situ с фенилацетилхлоридом приводило к целевой (Nфенилацетил)аминокислоте 318 после алкоголиза и удаления силильных групп.
Данный эксперимент представляет собой первый пример использования пенициллинамидазы
(PcAm) для разделения α-замещенных α-аминокислот на энантиомеры.
Схема 55
Me
O
HO
P
NH2
O
O
OH
Me 3 SiO
1
NHSiMe 3
P
OSiMe 3
O
O
OH
55.1
R,S - 210
HO
2
Me
OSiMe 3
R,S - 318
Me
P
NH2
OH
O
HO
[L]25 D
S - 319
+12.3 0 (C1, 6N HCl)
O
O
HO
HO
Me
P
4
NH2
OH
P
HO
D
O
Me
O
NH
OH
OH
Ph
[L]25
O
HO
3
Ph
N
H
OH
O
HO
O
Me
P
O
R - 320
- 12.1 0 (C1, 6N HCl)
55.2
1. (Me 3 Si) 2 NH; 2. а). PhCH 2 C(O)Cl, б). EtOH (H2 O); 3. PcAm, pH 7.5; Dowex (H +); 4. HCl, reflux
Ферментативный гидролиз N-фенилацетил-2-метил-2-амино-4-фосфономасляной кислоты
R,S-318 протекал заметно дольше, чем гидролиз незамещенного аналога R,S-312 (схема 54) в тех
же условиях (рН 7.5, температура 25-35°С). Несмотря на значительное время ферментативного
гидролиза амидной связи, положительным результатом является сохранение высокой
энантиоселективности пенициллинамидазы.
Гидролизованная S-319 и N-фенилацетилированная R-55.2 формы были разделены с
использованием ионообменной хроматографии. Кислотный гидролиз соединения R-55.2 дал
целевой энантиомер R-320 без заметной рацемизации. Сравнение абсолютной величины
оптического вращения R- и S-форм, а также сравнение оптических, физико-химических и
аналитических характеристик обоих антиподов с литературными данными подтверждает высокую
оптическую чистоту полученных энантиомеров.
2.2.2. Ферментативный синтез энантиомеров фосфинового аналога фенилглицина.
Следующим объектом исследования возможности ферментативного метода синтеза
энантиомеров
стал
фосфиновый
кислый
аналог
фенилглицина
-
α-амино-бензил-
гидроксиметилфосфиновая
кислота
251а,
полученная
амидоалкилированием
гидроксиметилфосфонистой кислоты (см. предыдущую главу). Выбор этого соединения
обусловлен интересом к ферментативному гидролизу амидной связи при α-аминофосфиновой
кислой функции, характерной для фосфиновых кислых аналогов наиболее распространенного
типа пептидов – α,α`-дипептидов, а также часто наблюдаемой склонности фенилглициновых
производных к рацемизации, обусловленной подвижностью бензильного протона.
43
R- и S-энантиомеры фосфинового аналога фенилглицина были получены с использованием
пенициллинамидазы (PcAm) в качестве биокатализатора гидролиза N-фенилацетилпроизводного
321. Последний был получен ацилированием аминокислоты 251а фенилацетилхлоридом в
соответствии с классической реакцией Шоттена-Баумана (схема 56). Образовавшийся в результате
ферментативного гидролиза S-энантиомер 322 был отделен от негидролизованной R-(Nфенилацетил)аминокислоты 323 методом ионообменной хроматографии.
Схема 56.
O
HO
NH2
P
P
Ph
OH
R,S-251a
Ph OH
H
HO
OH
1) PcAm,
2) Dowex 50WX (H + )
NH2 O
S - 322
[L]25546 -8.3o (C 1.0, H2O)
H
O
OH Ph
R,S-321
P
OH
Ph
Ph
H
N
O
PhCH2C(O)Cl
H
Ph
OH
HCl
P
OH
OH
P
NH O
Ph
NH2 O
O
R -323
[L]25546 -19.3o (C 1.0, EtOH)
R - 324
[L]25546 +8.2o (C 1.0, H2O)
Обычно не выделяемая в индивидуальном виде R-N-ацилированная форма, в этом
эксперименте была получена в виде белого кристаллического вещества, очищена, и
охарактеризована. Кислотный гидролиз соединения R-323 протекал без заметной рацемизации и
дал оптический антипод R-324.
2.2.3. Синтез энантиомеров псевдо-γ-глутамилглицина
Осуществлен ферментативный синтез энантиомеров псевдо-γ-глутамилглицина (схема 57).
Рацемический псевдо-γ-глутамилпептид 286 N-ацилировали c хлорангидридом фенилуксусной
кислоты и получили 2-(гидроксикарбонил)этил-3-(N-фенилацетил)амино-3-гидроксикарбонил)
пропилфосфиновой кислоты R,S-325 в соответствии с классической процедурой Шоттена-Баумана
(схема 57).
Схема 57
O
O
O
P
NH2
PhCH2 C(O)Cl
OH
HO
O
OH
O
HO
OH
O
N
H
P
O
Ph
OH
R,S - 325
R,S - 286
1. PcAm, pH 7.5
2. Dowex(H+)
O
O
H
P
HCl
NH2
OH
HO
O
R - 327
[L]25 D -20.8 0 (C 1, 6N HCl)
OH
O
[ R - 326 ]
O
P
H
OH
NH2
O
OH
52.1
HO
S - 326
[L]25 D +20.5 0 (C 1, 6N HCl)
44
После стадии ферментативного гидролиза использовали хроматографию на катионите, что
позволило разделить S-энантиомер псевдо-γ-глутамилпептида 326 и негидролизованную R-форму
N-фенилацетил-аминокислоты 326 (52.1). Последнюю без выделения гидролизовали
солянокислым раствором с образованием R-энантиомера псевдо-пептида 327.
Таким образом, использование пенициллинамидазы на ключевой стадии ферментативного
стереоселективного гидролиза позволило разделить рацемические смеси аминофосфиновых и
аминофосфоновых кислот различного строения, что позволяют рекомендовать данную процедуру
для синтеза энантиомеров широкого ряда фосфорсодержащих аминокислот и фосфиновых псевдопептидов.
Выводы
1. Найдена двойная реакция Арбузова для гипофосфитов.
2. Предложена и реализована новая методология последовательного формирования двух фосфоруглеродных связей путем последовательного присоединения генерированных in situ производных
трехвалентного фосфора к алкенам по типу реакции Михаэля-Пудовика, а также первоначального
присоединения гипофосфита к алкену с последующим взаимодействием образовавшегося
фосфонита с соответствующими электрофилами по типу реакции Арбузова, Абрамова, КабачникаФилдса, Михаэля-Пудовика.
3. Разработан общий метод синтеза циклических фосфиновых кислот и метод синтеза
диалкилфосфиновых кислот симметричного и несимметричного строения.
4. Разработан общий метод синтеза ω-галогеналкилфосфорильных соединений и общая
процедура синтеза фосфорсодержащих аминокарбоновых кислот.
5. Обнаружены дегидрогалогенирующие свойства триалкилортоформиатов и разработан новый
общий способ получения винилфосфорильных соединений, что позволило предложить общий
метод синтеза фосфинотрицина и других фосфорильных аналогов глутаминовой кислоты.
6. Разработаны новые подходы к синтезу фосфорсодержащих аминокарбоновых кислот и новая
методология синтеза фосфиновых псевдо-пептидов.
7. Обнаружены, выделены и охарактеризованы N,N´-алкилиденбискарбаматы в качестве
стабильных интермедиатов реакции амидоалкилирования гидрофосфорильных соединений.
8. Предложен новый механизм амидного варианта реакции Кабачника-Филдса, включающий
стадию образования связи Р-С по типу реакции Арбузова генерированных in situ N(алкилоксикарбонил)иминиевого катиона и P-OAc производного трехвалентного фосфора.
9. Показана перспективность амидоалкилирования гидрофосфорильных соединений в
органических растворителях, что позволяет в мягких условиях синтезировать ряд N-защищенных
псевдо-α,α`-дипептидов, труднодоступных другими методами синтеза.
10. Разработаны
общие
методы
синтеза
псевдо-γ-глутамилпептидов
и
псевдо-γ-
аминобутаноилпептидов.
11. С использованием ферментативного катализа получен ряд энантиомеров фосфоизостеров
аминокислот и пептидов.
45
Основное содержание диссертации изложено в следующих публикациях:
1. В.В.Рагулин, Е.Н.Цветков. Простой способ получения диалкилфосфиновых кислот. // Изв. АН
СССР, сер. хим. 1988. Вып.11. С.2652.
2. В.В.Рагулин, В.В.Григорьев, В.А.Неманова, Е.Н.Цветков. Исследование противосудорожной
активности антагонистов глутаматных рецепторов. // Хим.-фарм. журн. 1988. Т.22. N3. С.275277.
3. В.В.Григорьев, В.В.Рагулин. Действие фосфорсодержащих аминокарбоновых кислот на
нервно-мышечную передачу мясной мухи. // Нейрофизиология. 1988. Т.20. N2. С.256-259.
4. В.В.Рагулин, В.В.Григорьев, Е.Н.Цветков. Способ получения ω-галогеналкилфосфонатов. //
Авторское свидетельство СССР N1410489. Б.И.1990. N34. РЖХим.1991. 3Н169П. Приоритет от
17.11.86 г. Патент N1410489. Россия.
5. В.В.Рагулин, М.Е.Бофанова, Е.Н.Цветков. Фосфорсодержащие аминокарбоновые кислоты.
Сообщение I. Способ получения соединений фосфонатного типа. // Изв. АН СССР, сер. хим.
1989. Вып. 11. С.2590-2595.
6. В.В.Рагулин, В.В.Григорьев, В.А.Неманова, Е.Н.Цветков Фосфорсодержащие
аминокарбоновые кислоты. Сообщение III. Соединения с о-ксилиленовым фрагментом. //
Хим.-фарм. журн. 1991. N 3. С. 50-52.
7. V.V.Ragulin, M.E.Bofanova, E.N.Tsvetkov. Phosphorus - containing aminocarboxylic acids. IV. A
convenient method of phosphonic acids synthesis. // Phosphorus, Sulfur and Silicon. 1991. V. 62. N 1.
P. 237-241.
8. В.В.Григорьев, В.В.Рагулин, В.А.Неманова. Видовые различия в действии конкурентных
антагонистов NMDA рецепторов в нейронах гиппокампа мышей и крыс. // Доклады РАН. 1992.
Т.326, N4, С.742-745.
9. V.V.Ragulin, N.R.Kurdyumova, E.N.Tsvetkov. Phosphorus - containing aminocarboxylic acids. V.
Method for the synthesis of phosphinic acids. // Phosphorus, Sulfur and Silicon. 1994. V. 88. N 2. P.
271-274.
10. В.В.Рагулин, Н.Р.Курдюмова, Е.Н.Цветков. Синтез ациклических и циклических
диалкилфосфиновых кислот на основе гипофосфита аммония. // Ж. общ. химии. 1994. Т.64.
Вып.3. С.419-422.
11. Е.Н.Цветков, В.И.Евреинов, В.Е.Баулин, В.В.Рагулин, Н.А.Бондаренко, З.Н.Вострокнутова,
З.В.Сафронова. Фосфорсодержащие поданды. XIII. Лиганды с литий-натриевой
избирательностью в ряду бис[о-(2-дифенилфосфинилэтил)фениловых] эфиров
олигоэтиленгликолей и их аналогов. // Ж. общ. химии. 1995. Т.65. Вып.9. С.1421-1431.
12. Н.Р.Курдюмова, В.В.Рагулин, Е.Н.Цветков. Синтез винилфосфорильных производных.
Триэтилортоформиат как новый дегидрогалогенирующий реагент. // Ж. общ. химии. 1996.
Т.66. Вып.5. С.769-771.
13. Л.Ф.Рожко, В.В.Рагулин, Е.Н.Цветков. Фосфорсодержащие аминокарбоновые кислоты.
Сообщение VI. Улучшенный метод синтеза 2-амино-5-фосфонопентановой кислоты. // Ж. общ.
химии. 1996. Т.66. Вып.7. С. 1093-1095.
46
14. И.Г.Андронова, В.И.Малеев, В.В.Рагулин, М.М.Ильин, Е.Н.Цветков, Ю.Н.Белоконь.
Фосфорсодержащие аминокарбоновые кислоты. Сообщение VII. Асимметрический синтез
фосфоновых аминокарбоновых кислот. // Ж. общ. химии. 1996. Т.66. Вып.7. С.1096-1099.
15. Н.Р.Курдюмова, В.В.Рагулин, Е.Н.Цветков. Синтез фосфиновых кислот на основе
гипофосфита калия. // Ж. общ. химии. 1996. Т.66. Вып.8. С. 1402-1403.
16. C.В.Куликов, В.В.Григорьев, В.В.Рагулин. Фосфорсодержащие аминокарбоновые кислоты.
VIII. Синтез и исследование пептидов на основе 2-амино-5-фосфоновалериановой кислоты. //
Хим.-фарм. журн. 1997. Вып.7. С.32-34.
17. N.R.Kurdyumova, V.V.Ragulin, E.N.Tsvetkov. Synthesis of Phosphinothricine and Other
Phosphorylic Analogues of Glutamic Acid. // Mendeleev Commun. 1997. N 2. P. 69-70.
18. Н.Р.Курдюмова, Л.Ф.Рожко, В.В.Рагулин, Е.Н.Цветков. Метод синтеза фосфиновых кислот на
основе гипофосфитов. I. Акрилаты в качестве непредельной компоненты. // Ж. общ. химии.
1997. Т.67. Вып.12. С. 1965-1969.
19. Н.Р.Курдюмова, Л.Ф.Рожко, В.В.Рагулин, Е.Н.Цветков. Метод синтеза фосфиновых кислот на
основе гипофосфитов. II. Cтирол в качестве непредельной компоненты. // Ж. общ. химии. 1997.
Т.67. Вып.12. С. 1970-1973.
20. Л.Ф.Рожко, В.В.Рагулин, Е.Н.Цветков Фосфорсодержащие аминокарбоновые кислоты.
Сообщение IX. Фосфиноксиды. // Ж. общ. химии. 1997. Т.67. Вып.12. С. 1974-1976.
21. Н.Р.Курдюмова, В.В.Рагулин, Е.Н.Цветков. Фосфорсодержащие аминокарбоновые кислоты.
Сообщение Х. Синтез фосфиновых диаминокислот. // Ж. общ. химии. 1999. Т.69. Вып.7. С.
1122-1125.
22. Н.Р.Курдюмова, В.В.Рагулин. Фосфорсодержащие аминокарбоновые кислоты. Сообщение ХI.
Синтез 2-амино-4-{(фосфоноэтил)фосфино}масляной кислоты. // Ж. общ. химии. 1999. Т.69.
Вып.7. С. 1126-1128.
23. Л.Ф.Рожко, В.В.Рагулин. Фосфорсодержащие аминокарбоновые кислоты. Сообщение ХII.
Синтез ненасыщенных аналогов. // Ж. общ. химии. 1999. Т.69. Вып.7. С. 1129-1133.
24. Л.Ф.Рожко, С.Г.Клочков, В.В.Рагулин, Е.Н.Цветков Фосфорсодержащие аминокарбоновые
кислоты. Сообщение ХIII. Ферментативный синтез энантиомеров фосфоновых
аминокарбоновых кислот. // Ж. общ. химии. 1999. Т.69. Вып.7. С. 1134-1137.
25. И.В.Саратовских, В.В.Калашников, В.В.Рагулин. Синтез α-замещенных фосфорсодержащих
аминокарбоновых кислот. // Ж. общ. химии. 1999. Т.69. Вып.7. С. 1218-1220.
26. V.V.Ragulin, L.F.Rozhko, I.V.Saratovskikh, N.S.Zefirov. Simple synthesis of 2(hydroxycarbonyl)ethyl-3-amino-3-(hydroxycarbonyl)propyl phosphinic acid and related compounds.
Patent of Japan В2000-18568. January 27.2000; Chem. Abs. 2001, AN 2001:552806.
27. V.V.Ragulin, L.F.Rozhko, I.V.Saratovskikh, N.S.Zefirov. Enzymatic method for the synthesis of
enantiomers of 2-(hydroxycarbonyl)ethyl-3-amino-3-(hydroxycarbonyl)propyl phosphinic acid
(pseudo-γ-glutamylglycine) and derivatives. Patent of Japan B2000-18581 January 27.2000, Chem.
Abs. 2001, AN 2001:574226.
28. В.В.Рагулин. Синтез фосфинового аналога глутамилглицина. // Ж. общ. химии. 2001. Т.71.
Вып. 11. С. 1928-1929.
47
29. В.В.Рагулин. “One-pot” синтез α-аминофосфиновых кислот. // Ж. общ. химии. 2004. Т. 74. Вып.
1. С. 154-156.
30. Л.Ф.Рожко, В.В.Рагулин. Метод синтеза фосфиновых кислот на основе гипофосфитов. III.
Синтез α-гидроксифосфиновых кислот. // Ж. общ. химии. 2004. Т.74. Вып. 7. С. 1177-1181.
31. В.В.Рагулин. Метод синтеза фосфиновых кислот на основе гипофосфитов. IV. Синтез псевдоγ-глутамилглицина и его энантиомеров. // Ж. общ. химии. 2004. Т.74. Вып. 8. С. 1273-1278.
32. В.В.Рагулин. Ферментативный синтез энантиомеров 2-метил-2-амино-4-фосфономасляной
кислоты. // Ж. общ. химии. 2004. Т.74. Вып. 8. С. 1400-1402.
33. А.Н.Туранов, В.К.Карандашев, В.В.Рагулин. Экcтракционные свойства
бис(дифенилфосфинилэтил)фосфиновой кислоты в азотнокислых средах. // Радиохимия. 2005.
Т.47, вып.3. С. 252-256.
34. Л.Ф.Рожко, В.В.Рагулин. α-Гидрокси-α-аминофосфиновые кислоты. I. Синтез нового аналога
фенилглицина и его энантиомеров. // Ж. общ. химии. 2005. Т.75. Вып. 4. С. 571-574.
35. И.В.Саратовских, В.В.Рагулин. Фосфорсодержащие аминокарбоновые кислоты. Сообщение
ХIV. Синтез α-замещенных аналогов глутаминовой кислоты. // Ж. общ. химии. 2005. Т.75.
Вып.7. С. 1140-1147.
36. L.F.Rozhko, V.V.Ragulin. Method for the synthesis of phosphinic acids from hypophosphites. V. The
synthesis of pseudo - α, α`-dipeptides. // Amino Acids. 2005. V. 29. pp. 139-143.
37. В.В.Рагулин. Метод синтеза фосфиновых кислот на основе гипофосфитов. VI. Общий метод
синтеза псевдо-γ-глутамилпептидов. // Ж. общ. химии. 2007. Т.77. Вып. 5. С. 763-768.
38. В.В.Рагулин. Метод синтеза фосфиновых кислот на основе гипофосфитов. VII. Cинтез псевдоγ-аминобутаноилпептидов и других фосфиновых аналогов ГАМК. // Ж. общ. химии. 2008.
Т.78. Вып. 9. С. 1422-1427.
39. А.Н.Туранов, В.К.Карандашев, В.В.Рагулин. Экстракция редкоземельных элементов из
азотнокислых растворов дифенилфосфинилметил-2-фенилэтилфосфиновой кислотой. Ж.
неорг. химии. 2009. Т.54, вып. 3. С.535-542.
40. M.E.Dmitriev, V.V.Ragulin. New opinions on the amidoalkylation of hydrophosphorylic compounds.
// Tetrahedron Lett. 2010. V. 51. N. 19. P. 2613-2616.
41. М.Э.Дмитриев, В.В.Рагулин. Метод синтеза фосфиновых кислот на основе гипофосфитов. VIII.
Синтез α-аминоалкил-фенетилфосфиновых кислот. // Ж. общ. химии. 2010. Т.81. Вып. 9.
С.1446-1451.
42. М.Э.Дмитриев, А.Россинец, В.В.Рагулин. Амидоалкилирование гидрофосфорильных
соединений. // Ж. общ. химии. 2011. Т.81. Вып. 6. С.898-910.
43. М.Э.Дмитриев, В.В.Рагулин. Ацетали и N,N`-алкилиденбискарбаматы в синтезе Nзащищенных α-аминофосфиновых кислот. // Ж. общ. химии. 2012. Т.82. Вып. 11. С. 1919-1922.
44. В.В.Рагулин. ω-Галогеналкилфосфорильные соединения, синтез, свойства. // Ж. общ. химии.
2012. Т.82. Вып. 12. С.1973-1981.
45. M.E.Dmitriev, V.V.Ragulin. Arbuzov-type reaction of acylphosphonites and N-alkoxycarbonylimine
cations generated in situ with trifluoroacetic anhydride. // Tetrahedron Lett. 2012. V. 53. N. 13.
P.1634-1636.
48
46. М.Э.Дмитриев, В.В.Рагулин. Ацилоксипроизводные трехвалентного фосфора в реакции
амидоалкилирования гидрофосфорильных соединений. // Ж. общ. химии. 2013. Т.83. Вып. 10.
С.1681-1687.
Тезисы коференций:
47. В.В.Рагулин, В.А.Неманова, В.В.Григорьев, Е.Н.Цветков. Исследование противосудорожной
активности фосфорсодержащих аминокарбоновых кислот как антагонистов глутаматных
рецепторов. // Тезисы Всесоюзного совещания "Глутаматные рецепторы", M., 1987, С.131.
48. В.В.Рагулин. Синтез диалкилфосфиновых кислот. // Тезисы Всесоюзной конференции по
химии и химической технологии. М.,1989, С.231.
49. В.В.Рагулин, В.В.Григорьев, Е.Н.Цветков. Фосфорсодержащие аминокарбоновые кислоты.
Методы синтеза, физиологическая активность. // // Тезисы докладов Всесоюзного семинара
"Химия физиологически активных соединений." Черноголовка, 1989 г., С.201.
50. В.В.Рагулин, В.В.Григорьев, Е.Н.Цветков. Фосфорсодержащие аминокарбоновые кислоты новый класс противосудорожных веществ. // Тезисы докладов ХIV Менделеевского съезда по
общей и прикладной химии. 1989г., М.,"Наука", Т.1. С. 476.
51. В.В.Григорьев, В.А.Неманова, В.В.Рагулин, Е.Н.Цветков. Фосфорсодержащие
аминокарбоновые кислоты - новый класс противосудорожных соединений, методы синтеза,
физиологическая активность. // Тезисы докладов межреспубликанской научно-практической
конференции «Cинтез, фармакология и клинические аспекты новых психотропных и сердечнососудистых веществ» Волгоград, 1989. C.21-22.
52. В.В.Рагулин. Метод синтеза фосфиновых кислот. // Тезисы докладов V Московской
конференции по органической химии и технологии, М., 1990 г., ч.II., С.179.
53. V.V.Grigoriev, V.V.Ragulin, S.O.Bachurin. The action of glycine and antagonists on NMDA
responses in the rat cortical neurons. // Proc. of 13th Congress of ISN, Sydney, 1991, Р.143.
54. V.V.Grigoriev, V.V.Ragulin, S.O.Bachurin. Influence of glycine and AP7 on NMDA responses in the
rat cortical neurons. // Proc. of Int. Conf. "Receptors of the mediatory aminoacids: structure, function
and drug design.", London, 1990, P.196.
55. V.A.Nemanova, V.V.Ragulin, V.V.Grigoriev, Bachurin S.O. Different influence of competitive
antagonists (AP5 and AP7) on NMDA responses in the rat and mice hippocampal neurons. // Proc. of
III Int. Congr. of comparative physiology and biochemistry, Tokyo, 1991, 169.
56. Н.Р.Курдюмова, В.В.Рагулин, Е.Н.Цветков. Синтез фосфиновых кислот. // Тезисы Симпозиума
по органической химии. С.-Петербург, 1995, С.132-133.
57. N.R.Kurdyumova, V.V.Grigoriev, V.V.Ragulin, E.N.Tsvetkov. Synthesis of phosphinic
aminocarboxylic acids. // Proc. Of XI Intern. Conf. on Chemistry of Phosphorus Compounds (ICCPCXI), Kazan, Russia, 1996, P.182.
58. Н.Р.Курдюмова, В.В.Рагулин. Синтез ω-аминоалкилфосфиновых кислот. // Труды
конференции "Химия фосфорорганических соединений и перспективы ее развития на пороге
21 века" памяти академика М.И.Кабачника, Москва, 1998, С.134.
49
59. V.V.Ragulin. Methods for synthesis of phosphorylic analogues of amino acids and peptides. // Proc.
Of XIII Intern. Conf. on Chemistry of Phosphorus Compounds (ICCPC-XIII), S.-Petersburg, Russia,
2002, P.261.
60. V.V. Ragulin. A novel synthetic route to pseudo-α,α-dipeptides. // Proc. Of XIV Intern. Conf. on
Chemistry of Phosphorus Compounds (ICCPC-XIV), Kazan, Russia, 2005, P.120.
61. M.E.Dmitriev, V.V.Ragulin. Synthesis of phosphinic pseudo- α,α`-dipeptides. // Book of Abstracts of
XV International Conference on Chemistry of Phosphorus Compounds (ICCPC-XV), S.-Petersburg,
Russia, 2008. P.125 (engl.) стр.358 (русс.)
62. M.E.Dmitriev, V.V.Ragulin. Acrylates in the synthesis of phosphinic acid pseudo-peptides. Proc. of
Intern.Conf. on Organic Chemistry “Chemistry of Compounds with Multiple-Carbon Bonds”, S.Petersburg, Russia, 2008. P.193-194.
63. M.E.Dmitriev, V.V.Ragulin. Synthesis of α-aminophosphinic pseudo-peptides. Dmitriev M.E.,
Ragulin V.V. Proc. of Intern.Conf. “Organic Chemistry for Medicine”, Chernogolovka, 2008. P.7980.
64. M.E.Dmitriev, V.V.Ragulin. Synthesis of pseudo-peptides by amidoalkylation of phosphonous acids
containing isostere of amino acid. // Международная конференция по химии “Основные
тенденции развития химии в начале XXI века”, 21-24 апреля 2009, Санкт-Петербург. С. 352.
65. M.E.Dmitriev, V.V.Ragulin. Methodology for the synthesis of phosphinic peptides. XIX
Менделеевский съезд по общей и прикладной химии. Волгоград. 2011. Т.1. С.188.
Автор считает своим долгом почтить память проф. Е.Н.Цветкова и выразить искреннюю
признательность за поддержку, оказанную им на первом этапе исследования. Автор выражает
глубокую благодарность своим соавторам, старшим и младшим коллегам, в разное время
принимавшим участие в работе: академику Н.С.Зефирову, член-корр. РАН С.О.Бачурину, проф.
Ю.Н.Белоконю,
Н.Р.Курдюмовой,
Л.Ф.Рожко,
д.х.н.
В.И.Малееву,
И.Г.Андроновой,
И.В.Саратовских,
спектроскопии
института
автор
к.ф.-м.н.
д.б.н.
В.В.Григорьеву,
М.Е.Бофановой,
благодарен
к.б.н.
С.Г.Клочкову,
М.Э.Дмитриеву,
сотрудникам
В.О.Завельскому,
к.х.н.
В.В.Калашникову,
лаборатории
[А.Н.Пушину],
прикладной
В.И.Шестову,
И.П.Калашниковой, сотрудникам аналитической группы к.х.н. Е.В.Смолиной и Г.Д.Шишко,
сотрудникам лаборатории элементоорганических биоизостеров.