генотерапия больных диссеминированной

ГЕНОТЕРАПИЯ БОЛЬНЫХ ДИССЕМИНИРОВАННОЙ
МЕЛАНОМОЙ КОЖИ И МЕТАСТАТИЧЕСКИМ РАКОМ ПОЧКИ С
ПОМОЩЬЮ АУТОЛОГИЧНЫХ ОПУХОЛЕВЫХ КЛЕТОК,
МОДИФИЦИРОВАННЫХ ГЕНОМ TAG7
В.М. Моисеенко, И.А. Балдуева, А.Б. Данилова, А.О. Данилов, Н.В.
Тюкавина, С.С. Ларин1, С.Л. Киселев1, Р.В. Орлова, В.В. Анисимов, А.И.
Семёнова, Л.А. Щёкина, Г.И. Гафтон, В.А. Кочнев, А.С. Барчук, С.В.
Канаев, К.П. Хансон, Г.П. Георгиев1
НИИ. онкологии им. проф. Н.Н.Петрова, г. Санкт-Петербург
Институт биологии гена РАН, г. Москва1
Одним из эффективных способов генерации
специфического противоопухолевого иммунитета является создание вакцин на основе аутологачных модифицированных опухолевых клеток
[2,21, 26]. Модификация опухолевых клеток используется для усиления их иммуногенности, что
позволяет индуцировать клоногеннуго пролиферацию эффекторных клеток и/или усиливать
уже существующий противоопухолевый иммунный ответ. В качестве одного из наиболее перспективных молекулярно- биологических подходов к созданию противоопухолевых вакцин рассматривается введение в опухолевую клетку генов некоторых цитокинов (интерлейкины (ИЛ)2,7,12; гранулоцитарно-макрофагалъный колониестимулирующий фактор (ГМ-КСФ) и др.).
После блокады пролиферативяых способностей облучением такие модифицированные клетки могут в течение месяца существовать в организме, продуцируя цитокины, стимулирующие
противоопухолевый иммунитет [13]. Одним из
подобных агентов для вакцинотерапии опухолей
считается продукт недавно выделенного и клонированного гена tag 7 [14].
В экспериментах было показано, что белок Tag
7, первоначально полученный из клеток аденокарциномы молочной железы мыши, обладает
свойством подавлять рост опухоли, причем степень подавления роста опухоли коррелирует со
степенью экспрессии этого гена [13, 15]. Этот
протеин обладает выраженной гомологией с ка-
талитическим доменом лизоцима, слабой гомологией с членами семейства фактора некроза
опухолей и представляет собой секретируемый
белок, который выявляется в мембранной фракции клеток и в культуральной среде. Он обладает цитотоксичностью по отношению к целому ряду линий опухолевых клеток, причем гибель клеток осуществляется путем апоптоза [3,
13]. Экспериментальные данные дают также основания предполагать, что, помимо прямого
токсического действия, этот белок активирует
посредством АПК лимфоциты, которые атакуют и разрушают как модифицированные, так и
неизмененные опухолевые клетки [12]. Кроме
того, в противоопухолевое действие вовлечены
В-лимфоциты [13]. Таким образом, есть основания считать, что трансфекция аутологичных
опухолевых клеток геном tag? может быть использована для терапии злокачественных новообразований человека.
В ряде клинических исследований установлено, что наиболее эффективно применение методов вакцинотерапии у больных диссеминированной меланомой кожи и раком почки. При
этом результаты лечения сопоставимы с современной химио- и иммунотерапией [6, 25]. По
этой причине нами проведена оценка токсичности и эффективности вакцин на основе модифицированных геном tag? аутологичных опухолевых клеток у больных меланомой кожи и
раком почки.
СИБИРСКИЙ ОНКОЛОГИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ. 2004. №2-3 (10-11)
56
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Б исследование было включено 39 пациентов с гистологически верифицированным диагнозом диссеминированной меланомы кожи
(34 больных) и рака почки (5 больных), получавших лечение в НИИ онкологии им. проф.
Н.Н. Петрова за период с 2001 по 2003 г. Клиническую и иммунологическую оценку эффективности генотерапии провели у 28 пациентов
(24 больных меланомой кожи и 4 больных раком почки), из них 22 пациента получали паллиативную вакцинотерапию и б больных меланомой кожи — адъювантную вакцинотерапию
после полных циторедуктивных операций. Семь
пациентов отказались принимать участие в исследовании на начальных этапах, у 4 больных
выявлено быстрое прогрессирование заболевания до начала лечения.
Б табл. 1 представлена клиническая характеристика пациентов, получавших вакцинотерапию. Средний возраст больных составил 44,3 ±
12,3 года (от 21 до 71 года). Перед началом вакцинотерапии все пациенты подверглись хирургическому лечению. Полные циторедуктивные
операции выполнены 6 больным (21%), частичные — 22 больным (79%) в объеме лимфаденэктомии или иссечения транспортных метастазов.
Пять пациентов (18%) получили химиотерапию
дакарбазином, 3 (14%) - иммунотерапию интерфероном-а, 2 пациента (7%) получили химио- и
иммунотерапию и 1 больному (4%) ранее проводилась специфическая иммунотерапия аутологичной немодифицированной вакциной с БЦЖ.
На момент начала вакцинотерапии у 14 больных (64%) диагностированы висцеральные метастазы, невисцеральные поражения выявлены у
8 пациентов (36%). Все пациенты прошли комплексное обследование, включающее стандартные клинические, лабораторные, рентгенологические и ультразвуковые методы исследования.
Общее состояние больного оценивалось по 5балльной шкале ВОЗ (табл. 1).
В процессе вакцинотерапии осуществлялся
мониторинг состояния клеточного иммунитета
с оценкой относительного и абсолютного содержания основных субпопуляций Т-лимфоцитов (CD3, CD4, CDS), В-лимфоцитов (CD20),
НК-клеток (CD16), активированных Т- и В-лимфоцитов (CD25, CD30, CD38, CD71, CD95).
Для этого исследовали лимфоциты периферической крови с помощью соответствующих моноклональных антител ("Сорбент", Россия;
"DAKO", Дания) методом непрямой иммунофлюоресценции, уровень иммуноглобулинов
классов G, А, М в сыворотке крови больных методом радиальной иммунодиффузии, циркулирующие иммунные комплексы ~ методом
осаждения полиэтиленгликолем, фагоцитарную
активность нейтрофилов и моноцитов с частицами латекса с расчетом фагоцитарного индекса
и фагоцитарного числа, метаболическую активность нейтрофилов и моноцитов в НСТ-те-
СИБИРСКИЙ ОНКОЛОГИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ. 2004. №2-3 (10-11)
57
сте, функциональную активность Т-лимфоцитов по их ответу на митоген конковалин Л. Тесты проводили на базе городской больницы
№ 31 г, Санкт-Петербурга.
Технология приготовления вакцины на основе аутологичных генетически модифицированных опухолевых клеток предполагает дезагрегацию образцов опухоли, культивирование клеток, их трансфекцию, анализ экспрессии введенных генов с помощью иммуноблотинга и облучения клеток с целью девитализации.
Дезагрегация образцов опухоли. Использовался механический способ дезагрегации опухолевой ткани. Для этого опухолевые образцы
разделяли на фрагменты 2—3 мм, помещали на
стерильные ножи и подвертели диссоциации в
течение 0,5-1 мин. Затем клеточную суспензию
профильтровывали и осаждали центрифугированием при 1000 об/мин в течение 10 мин. Далее суспензировали в среде для культивирования и переносили в культуральную посуду.
Культивирование опухолевых клеток.
Полученные опухолевые клетки культивировали при 37°С, 5% СО2 и 98% влажности в пластиковых флаконах (Sarstedt, ФРГ). Для культивирования использовали питательную среду
DMEM/F12 (Биолог, РФ), содержащую 20%
сыворотки эмбрионов крупного рогатого скота (СЭКРС) (Биолог, РФ), 20% кондиционированной среды культуры фибробластов легких
эмбриона человека, трансферрин, инсулин, селен в стандартной дозе (Invitrogen, США).
Трансфекция опухолевых клеток. Для
проведения модификации геном tag? опухолевых клеток in vitro использовали метод трансфекции с помощью двух модификаций липосом. Рекомендации по проведению липофекции и
препараты липосом предоставлены разработчиками [24]. Для анализа экспрессии введенных
генов применяли генетические конструкции,
содержащие ген (3-галактоз ид азы и зеленого
флюоресцентного белка GFP, синтез продуктов
которых выявляли через 24-72 ч после трансфекдии. Эффективность трансфекции оценивали по соотношению окрашенных (трансфецированных) клеток общего количества клеток.
После определения оптимальных условий осуществляли трансфекцию клеток меланомы и
рака почки геном tag 7, максимальное значение
которой составило 30%, минимальное - 4%,
среднее значение - 12,0 ± 6,5%. Далее тестировали клеточные образцы больных на присутствие белка Tag 7 с помощью электрофореза в
ДНС-ПААГ [15] и иммуноблот-анализа [4].
Приготовление вакцины на основе аутологичных опухолевых клеток, модифицированных геном tag 7. Трансфецированные
опухолевые клетки каждого пациента, экспрессирующие белок Tag 7, подсчитывали Б камере
Горяева и замораживали в криосреде, содержащей 10% диметилсульфоксида, 40% СКРС, 50%
DMEM. В день вакцинации клетки в количестве 107 [10] размораживали, огмывали центрифугированием в трех порциях физиологического раствора, облучали на терапевтическом аппарате "Рокус-у" Сово 1,25 MeV при 2000 сГр
(мощность дозы 0,99 сГр/с) [7] с целью блокады
пролиферации опухолевых клеток.
Приготовленную вакцину вводили строго
внутрикожно паравертсбрально в 3 точки на расстоянии 3 см друг от друга. В 4-ю точку вводили нетрансфецированные опухолевые клетки.
Полный курс лечения состоял из 6 введений вакцины с интервалом 21 день.
РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
В зависимости от клинического состояния
больных, переносимости вакцинации, количества материала для вакцинации больные распределились следующим образом: шесть вакцинаций получили 13 больных (46%), 5 введений вакцины - 1 больной (4%), 4 введения - 4 больных
(14%), 3 введения — 4 больных (11%), 2 введения
- 3 больных (11%) и 1 введение аутологичной
вакцины - 3 пациента (11%). Преждевременное
завершение лечения было обусловлено прогрессированием заболевания у 14 больных (50%)
(табл. 2). Ни у одного из пациентов не отмечено
ухудшение самочувствия и побочных явлений
(лихорадки, регионарной лимфаденопатии,
изъязвлений в месте инъекций, аллергических
и аутоиммунных реакций, желудочно-кишечных
расстройств), связанных с введением вакцины.
Полный и частичный регресс (уменьшение
метастатических очагов менее чем на 50% (критерии ВОЗ, 1998) зарегистрирован не был, в
СИБИРСКИЙ ОНКОЛОГИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ. 2004. №2-3 (10-11)
60
В.М. МОИСЕЕНКО, ИЛ. БАЛДУЕВА, А.Б.ДАНИЛОВА, А.О.ДАНИЛОВ, Н.В. ТЮКАВИНА И ДР.
том числе и у больных, получивших максимальное (6) количество вакцинаций. Стабилизация
процесса наблюдалась у 7 (32%) пациентов (6
больных меланомой кожи и 1 больная раком
почки) (табл. 2). Средняя продолжительность
эффекта составила 6,8 мес. У 1 больного
меланомой кожи с метастазами в мягких тканях
эффект продолжается в течение 13 мес. У 1
больной раком почки зарегистрирован минимальный регресс метастазов в легких (регресс
<50%) продолжительностью 12 мес. У б больных с высоким риском развития рецидива после
полных циторедуктивных операций средняя
продолжительность безрецидивного периода составила 9,6 мес (от 4 до 21 мес) от начала вакцинотерапии. При анализе показателей выживаемости выявлено, что медиана выживаемости пациентов, получавших вакцинотерапию, составила 6,5
мес от начала лечения, средняя продолжительность
жизни 8,1 мес (95% CI 5,9-10,2 мес) (рис. 1).
В процессе лечения у 16 (57%) из 24 больных
(из них - 3 больных раком почки и 13 больных
меланомой кожи) через 48—72 ч после введения
вакцины в местах инъекции модифицированных
геном tag? аутологичных опухолевых клеток выявлена местная реакция в виде участков гиперемии, которая могла быть расценена как реакция
гиперчувствительносги замедленного типа (ГЗТ),
однако при этом специальных иммунодиагностических анализов не проводилось. Следует отметить, что у больных раком почки остаточные явления ГЗТ сохранялись более 20 дней. У ;
4 пациентов (19%) ГЗТ не определяли.
В некоторых исследованиях эффективности
противоопухолевой вакцинотерапии отмечено
наличие корреляции между интенсивностью ре-
СИБИРСКИЙ ОНКОЛОГИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ. 2004. Х°2-3 (10-11)
61
акции ГЗТ и продолжительностью жизни больного. Б частности, при изучении клинических
эффектов при вакцинации аутологичными опухолевыми клетками, применявшейся как адъювантное лечение для 43 пациентов с меланомой
кожи III ст., при размере участка гиперемии более
10 мм медиана выживаемости составила 17 мес,
в то время как для пациентов с отрицательной
или слабой реакцией — 9 мес [16].
При анализе результатов иммунологического обследования было установлено, что вакцинотерапия вызывает иммунный ответ на введение опухолевых клеток у 91,6% (22 из 24) первично иммунизированных пациентов. У больных меланомой кожи со стабилизацией процесса (п=12) и прогрессированием заболевания
(п—12) выявили иммунологически различный
ответ на проводимую вакцинотерапию (табл. 3).
До вакцинации у этих групп больных абсолютное содержание основных популяций и субпопуляций лимфоцитов в периферической крови находилось практически на одном уровне.
Через месяц после 1 -и вакцинации у всех обследованных больных наблюдали увеличение общего количества Т-лимфоцитов, преимущественно за счет увеличения числа Т-хелперов
(CD4 + ) и цитотоксических Т-лимфоцитов
(CD8+) (табл. 3). Б то же время имела место тенденция к снижению абсолютного содержания
В-лимфоцитов (CD204) и РЖ-клеток (CD16+).
После 2-й вакцинации у больных с прогрессированием заболевания содержание CD3 + и
СВ4 + -клеток достоверно уменьшилось по
сравнению с исходными значениями (1,01 ± 0,02
и 0,56 + 0,15, соответственно, р<0,05), а у
больных со стабилизацией процесса оставалось
ш более высоком уровне, чем данные параметры
до начала лечения (1,16 ± 0,11 и 0,71 + 0,05, со-
ответственно, р<0,05) (табл, 3). Абсолютное содержание цитотоксических Т-лимфоцитов достоверно не изменилось (CDS'), в то время как
содержание CD16+y больных с прогрессировасгием заболевания было ниже, чем у больных со
стабилизацией (р<0,05). Количество лимфоцитов, экспрессирующих на своей поверхности
рецепторы активации и антиген CD95, имело
тенденцию к увеличению в процессе вакцинотерапии у больных со стабилизацией процесса,
в то же время у больных с прогрессированием
заболевания оставалось на одном уровне или
снижалось (табл. 3). Функциональная активность
лимфоцитов, определяемая по их ответу на митогены конконовалин А (Кон А) и фитогемагглютинин (ФГА), после 2-й вакцинации была достоверно ниже у больных с прогрессированием
заболевания по сравнению с больными со стабилизацией процесса (41,8 ± 0,9 и 53,8 ± 4,5;
57,8 ± 4,2 и 67,1 ± 0,4, соответственно) (рис. 2).
СИБИРСКИЙ ОНКОЛОГИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ. 2004. №2-3 (10-И)
При выявлении прогрессировали^ заболевания пациентам прекращали вакцинотерапию
и переводили их на другой вид лечения. Пациенты, у которых развился клинический ответ на
проводимую вакцинотерапию, получили полный курс лечения, что дало возможность более
полно проанализировать иммунологические
параметры, которые через 1 мес после окончания вакцинотерапии возвращались к исходному уровню. Это указывает на необходимость
проведения повторных курсов вакцинации. Б
целом можно сказать, что у всех обследованных
пациентов с меланомой кожи развивался иммунологический ответ на проводимую вакцинотерапию, однако именно у тех больных, у которых после курса вакцинотерапии наблюдали
стабилизацию процесса, имела место более выраженная активация клеточного звена иммунной
системы. В том случае, когда проводимая вакцинотерапия не оказала существенного влияния на
опухолевый процесс, кратковременный подъем
СИБИРСКИЙ ОНКОЛОГИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ. 2004. Х°2-3 (10-И)
63
рассматриваемых параметров перед 2-й вакцинацией сменился падением показателей.
На данном этапе исследований из 4 больных
раком почки, получивших курс вакцинотерапии
генетически модифицированными опухолевыми
клетками, только у одной пациентки, 57 л., по
данным компьютерной томографии наблюдалась стабилизация (регресс <50%) размеров метастазов в легких после лечения, при этом диаметр наибольшего очага уменьшился с 13 до 7
мм. Сравнение содержания CD3+, CD4"1", CD8+,
CD16+ и CD20 ^лимфоцитов в периферической
крови этой больной и трех больных с прогрессией заболевания говорит о наличии аналогичных вышеописанным изменений иммунной системы в процессе вакцинотерапии (рис. 3 А, Б).
Тесты на определение функциональной активности лимфоцитов показали снижение относительного содержания лимфоцитов, реагирующих на Кон А у больных с прогрессирова-
нием заболевания, а у больной с клинически
выраженной стабилизацией опухолевого процесса относительное содержание CD3+ лимфоцитов, реагирующих на Кон А и ФГА, имело тенденцию к увеличению (рис. 4). У ряда пациентов мы не обнаружили корреляции между ответом иммунной системы и наличием клинических эффектов от проводимой вакцинотерапии.
В частности, у больного Г., 36 л., с диагнозом
рак почки с метастазами в левые надключичные,
правые бронхопульмональные, забрюшинные
лимфоузлы, плевру, печень наблюдали ярко
выраженную реакцию ГЗТ после каждого
введения вакцины, увеличение содержания
цитотоксических Т-лимфоцитов (CD8""),
активированных Т- и В-клеток (CD25+, CD304),
рост функциональной активности лимфоцитов
по их ответу на митоген Кон А. Однако клинически имело место бурное прогрессирование заболевания независимо от проводимого лечения.
Отсутствие объективных клинических эффектов от проводимой терапии (полный и частичный
регресс) может быть связано с рядом причин:
распространённостью опухолевого процесса, наличием метастатического поражения жизненно
важных органов (61,9%), ослабленным общим
статусом больных (на момент начала лечения
42,9% пациентов имели статус 2 в соответствии с
критериями ВОЗ), предшествующим лечением
(химио- или лучевой терапией). Кроме того, известно, что эффективность использования модифи-
цированных цитокином опухолевых клеток для
индукции противоопухолевого иммунитета зависит от количества продуцируемого цитокина [9].
Поэтому одной из причин отсутствия выраженных клинических эффектов от проводимой терапии может быть недостаточная эффективность
применявшегося липосомного метода трансфекции опухолевых клеток геном tag 7.
Очевидно, что иммунотерапия аутологичной
вакциной будет более эффективна у больных с
небольшой опухолевой массой, а также у больСИБИРСКИЙ ОНКОЛОГИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ. 2004. №2-3 (10-11)
64
В.М. МОИСЕЕНКО, И.А. БАЛДУЕВА, А.Б. ДАНИЛОВА, А. О. ДАНИЛОВ, Н.В. ТЮКАВИНА И ДР.
ных с высоким риском развития рецидива после
хирургического лечения. Учитывая наличие соответствующего иммунологического эффекта, именно эта группа больных должна быть объектом для
вакцинотерапии с помощью опухолевых клеток,
модифицированных геном tag/,
В настоящее время известны результаты клинических и иммунологических исследований I—
I! фазы вакцин, приготовленных на основе опухолевых клеток, модифицированных генами цитокинов, таких как ГМ—К.СФ, ИЛ-2, 7, 12, применяющихся для лечения больных меланомой
кожи и раком почки [19, 22, 23, 25]. Все виды
вакцин формировали у ряда больных реакцию
ГЗТ и вызывали активацию противоопухолевого клеточного и гуморального иммунитета, однако их клиническая эффективность не была
значительной. В частности, применение вакцины, модифицированной геном ГМ-КСФ для
лечения больных меланомой кожи, характеризовалось стабилизацией процесса продолжительностью от 20 до 36 мес у 3 из 33 пациентов
[20], в случае лечения рака почки у 1 из 16 больных зафиксирован частичный регресс множественных метастазов в легких [22] (табл. 4).
Таким образом, у больных диссеминированной меланомой кожи и метастатическим раком
почки вакцинотерапия аутологичными опухолевыми клетками, модифицированными геном tag
7, безопасна и не сопровождается клинически
значимыми побочными эффектами. При этом
направленность изменений иммунологических
и клинических параметров неоднозначна, но позволяет в целом говорить о тенденции к усилению антиген-специфического иммунного ответа. Предварительные результаты исследовании
в этом направлении создают предпосылки для
дальнейшего усовершенствования этого метода
активной специфической иммунотерапии.
СИБИРСКИЙ ОНКОЛОГИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ. 2004. №2-3 (10-И)
Трудоемкость приготовления таких вакцин
и их высокая стоимость приводят к тому, что
до настоящего времени этот перспективный
метод лечения не имеет широкого применения в
клинической практике. Однако нет сомнения,
что поиски новых подходов к созданию противоопухолевых вакцин дадут возможность более
широкого их использования для лечения больных злокачественными новообразованиями.
Выводы
1. Иммунотерапия больных диссеминированными солидными опухолями вакциной на основе
65
модифицированных геном tag/ опухолевых клеток нетоксична и хорошо переносится больными.
2. Введение генетически модифицированной
вашины сопровождается развитием реакции ги
перчувствительности замедленного типа у 47,6%
больных, иммунологическим ответом у 91,6%
и объективным регрессом метастазов и легких
(минимальный регресс <50%) у 1 из 28 пациен
тов с диссеминированньш опухолевым процес
сом.
3. Перспективным представляется проведения
югмунотерапии генетически модифицирован
ной вакциной у больных после радикального
лечения или циторедуктивных операций с
минимальным объемом опухолевой массы.
Литература
1. Ъуркпви Л.Л., Забшина Т.Н., Кадашдзе З.Г. Иммуноте
рапия: моннториш субпопуляций лимфоцитов // Мед.
иммунология. 2002. Т. 4, №2. С. 291.
2. Киселев О.И., Бендзко П.Г., Ш хольникова А~А. и др. Ви
русные и опухолевые антигены, их использование в консфуировани» противораковых вакцин // Мед. акад.
журнал. 2002. Т. 2, № 1. С. 19-32.
3. Кишев С.А.,Ларин С.С., ]_"мучев Н.В., Георгиев Г.П. Ген
tag? и гемотерапия рака // Генетика. 2000. Т. 36, № 11.
С 1431-1435.
4. Михашов Л.Т., Симирский В.Н. Методы иымунохимнческого анализа 1з биологии развития (практическое ру
ководство). М.: "Наука", 1991. 288 с.
5. Моисее ико В.М. Биотерапия солидных опухолей
// Вонр. онкол. 1998- Т. 44, № 1. С. 120-125.
6. Ыбшеенко В.М. Возможности вакцинотерапии меланомы кожи // Практ, онкол. 2001. № 4(8). С. 58-64.
?. berd D., Maguire Н.С., ЬАсСие P., Mastrangeto M.J.
Treatment of mecastatic melanoma with an autologous tumorcell vaccine: clinical and immunologic results in 64 patients //
J. Gin. Oncol. 1990. Vol. 8. P. 1858-1867.
8. ChaHgA-E.., Uf}., Bishop D.K- eta/. Immunogenetic therapy
ofhuman melanoma utilising autologous tumor cells transduced
to secrete granulocyte-macrophage colony-stimulating factor /
/ Hum. Gene Ther. 2000. Vol. 11, № 6. P. 839-850.
9. Dillmaa R.O., Xayak S.K., Barfh N.M. el a/. Clinical
experience with aurologous tumor cell lines for patient-specific
vaccine therapy in metastatic melanoma // Cancer Biother.
Radiopharm. 1998. Vol. 13, N° 3. P. 165-176.
10. Dillman R.O., Baile/L.D.. Berth N.M. et al. Irradiated
cells from aurologous tumor cell lines as patient-specific vaccine
therapy in 125 patients with metastatic cancer: induction of
ddayed-typc hypcrsensitivhy to autologous tumor is associated
with improved survival // Cancer Biother. Radiopharm. 2002.
Vol. 17. >» 1. P. 51-66.
11. Cancer: Principles & Practice of Oncology, 4l!l edit. /
Ed. V. DeVita et al. Philadelphia; J.B.Lippincott Сотр. 1993.
12. Georgiev G.P., KisekvS.L., Lttkamdhi E.M. Genes involved
in the control of tumor progression and their possible use for
gene therapy // Gene Ther. Mol -ВЫ. 1998. Vol. 1. P. 381-389.
13. GrefenT.F.tJafaE.M. Cancer vaccine// J. Qin. Oncol.
1999. Vol. 17, № 3.' P. 1047-1060.
14. Kise/evS.L., Kiistikova O.S., Korobko B.V. et al. Molecular
Cloning and Characterization of the mouse tag7 gene encoding
a novel cytokine // J. Biol. Chem. 1998. Vol. 273, №• 29.
P. 18633-18639.
15. LaefftH U.K. Cleavage of structural proteins during the
assembly of the head of ba.cteriophagc T4 // Nature. 1970.
Vol. 227. P. 680-685.
16. Lotem M., Peret% Т., Dri^e O. et al. Autologous cell
vaccine as a post operative adjuvant treatment for high-risk
melanoma patients (AJCC stages III and IV). The new American
Joint Committee on Cancer /./ Br. J. Cancer. 2002. Vol. 86, №
'lO. P. 1534-1539.
17. Mo/ier P., Sun Y., Dorbu T. et al. Vaccination with IL7 gene-modified autologous melanoma cells can enhance the
anti-melanoma lytic activity in peripheral blood of patients
with a good clinical performance status: a clinical phase I study.
Br. J. Oncol. 1998. Vol. 77, № 1. P. 1907-1916.
18. Palmer K., Moore J., ^LmradM. et aL Gene therapy with
autologous, interleukin-2—secreting tumor cells in patients with
malignant melanoma // Hum. Gene Ther. 1999. Vol. 10, № 8.
P. 1261-1268.
19. Rosenberg S.A. Cancer vaccines based on the
identification of genes encoding cancer regression antigens.
ImmunoL Today. 1997. Vol. 18. P. 175-182.
20. Rosenberg S.A. Progress in human tumor immunology
and immunotherapy. Nature. 2001. Vol. 86. P. 81-84.
21. Simons]Ж,]ф EM., Weber C.K., cl aL Bioactivity of
autologous irradiated renal cell carcinoma vaccines generated
by ex vivo granulocyte-macrophagc colony-stimulating factor
gene transfer. Салсег Res. 1997. Vol. 57. P. 1537-1546.
22. SoifJerK., Lynch Т., Mihm M. el al. Vaccination with
irradiated autologous melanoma cells engineered to secrete
human granulocyte-macrophage colony-stimulating factor
generates potent antituraor immunity in patients with
metastatic melanoma // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1998.
Vol. 95. P. 13141-13146.
23. Sun Y.tfargovskyK., Мд/lerP. eta!. Vaccination with !L12 gene-modified autologous melanoma cells: preclinical results
and first clinical phase I study // Gene Ther. 1998. Vol. 5,
№ 4- P. 481-490.
24. SuTovoy A., Fkchslsr L, Geumfy l~. et al. Simple and fast
microscale procedure for transfection and quantification of
reporter gene expression in eukaryodc cells // Adv. Exp. Med.
Biol. 1998. Vol. 451. P. 457^460.
25. Vile R-, Souberbielk В., Dalgkish A.G. Tumor vaccines
// Iramunotherapy in Cancer / Eds. Gore M., Riches P.
London, 1996. P. 157-191.
26. Xu M., Qui G., Jiang Z., Humphreys R.E. Genetic
modulation of tumor antigen presentation. Trends Biotechnol.
2000. Vol. 18, jVe 4. P. 167-172.
Поступила 30.04.04
СИБИРСКИЙ ОНКОЛОГИЧЕСКИЙ ЖУРНАЛ. 2004. №2-3 (10-11)