УДК 571.27 СВОЙСТВА АНТИТЕЛ К ДНК В КУЛЬТУРЕ КЛЕТОК

Электронный журнал «Структура и динамика молекулярных систем». №7,А, 2009 г
УДК 571.27
СВОЙСТВА АНТИТЕЛ К ДНК В КУЛЬТУРЕ КЛЕТОК
Сабирзянова А.З., Иванова В.В., Храмова А.Ю., Невзорова Т.А.
Казанский государственный университет им. В.И.Ульянова-Ленина
420008, Казань, ул. Кремлёвская, 18, КГУ, кафедра биохимии
E-mail: 111v_alsusa@inbox.ru, fairybloom@rambler.ru, serena_@list.ru, Tnevzorova@mail.ru
Показано, что антитела (АТ) к нативной ДНК (нДНК) здорового донора и больного системной красной волчанкой (СКВ) на стадии обострения in vitro оказывают сходное влияние на
клетки эукариот – снижают количество и потребление глюкозы клетками, активируют иммунокомпетентные клетки к продукции активных форм кислорода (АФК), способствуют повреждению клеточной ДНК. АТ к нДНК больного СКВ в период ремиссии значимого влияния на клетки эукариот in vitro не оказывают. В статье обсуждаются возможные причины генерации патологических антител класса IgG к нДНК и их биологическая роль.
Антитела к нативной ДНК, аутоиммунитет, системная красная волчанка, культура клеток эукариот.
1. Введение
На сегодняшний день аутоантитела (ААТ) к ДНК рассматриваются как естественный компонент иммунной системы, но увеличение их патологических
возможностей приводит к развитию тяжелых воспалительных реакций в организме – аутоиммунным процессам [1,2].
Системная красная волчанка (СКВ) – хроническое аутоиммунное заболевание соединительной ткани неизвестной этиологии [3,4]. Предположительно,
одной из причин развития СКВ является повышенное содержание в крови
больных ДНК-связывающих и ДНК-гидролизующих аутоантител класса IgG [57].
Недавние исследования показали, что антитела к ДНК способны проникать в различные клетки, вызывая при этом их морфологические и функциональные изменения [8-10].
Но до сих пор истинная роль как ДНК-связывающих, так и ДНКгидролизующих аутоантител в патогенезе СКВ и других аутоиммунных заболеваний (АИЗ) до конца не выяснена.
Целью работы явилось исследование влияния антител к нативной ДНК из
сывороток крови в норме и при аутоиммунной патологии СКВ на клетки человека in vitro.
2. Материалы и методы
2.1. Выделение антител класса IgG к нативной ДНК из крови человека
В работе использовали 2 сыворотки крови клинически здоровых лиц, 4
сыворотки больных СКВ в стадии обострения и 5 сывороток больных СКВ в
период ремиссии, полученные в стационарах г. Казани.
32
Электронный журнал «Структура и динамика молекулярных систем». №7,А, 2009 г
Все этапы очистки антител проводили по ранее разработанной методике
[11] при +4°С в холодильной камере MiniColdlab с использованием стерильных
буферных растворов, приготовленных на деионизованной воде. Положительно
и отрицательно заряженные фракции антител класса IgG получали методом ионообменной хроматографии на ДЭАЭ-целлюлозе. Антитела к нДНК выделяли
методом аффинной хроматографии на нДНК-целлюлозе микрокристаллической. Полученные фракции АТ собирали, концентрировали струей воздуха,
диализовали против 10 мМ трис-НС1-буфера, pH 7.5, с двукратной сменой в течение 72 часов при +4°С. Концентрацию белка после каждого этапа очистки
определяли методом Варбурга и Христиана [12].
2.2. Оценка ДНК-гидролизующей активности антител к нДНК
ДНК-гидролизующую активность полученных субфракций АТ к нДНК
оценивали по превращению суперскрученной плазмидной ДНК pBR-322 в
кольцевую и линейную формы [13].
Оценку результатов гидролиза плазмидной ДНК pBR-322 антителами
осуществляли методом электрофореза в агарозном геле [14].
2.3. Исследование влияния антител к нДНК на клетки эукариот
2.3.1. Выделение моноцитов и нейтрофилов из крови человека
Моноциты и нейтрофилы из крови здорового донора и больного СКВ выделяли на фиколл-верографине с небольшими модификациями [15,16].
2.3.2. Культивирование клеток в присутствии антител к нДНК
Для исследования влияния аутоантител к нДНК к клеткам (10
тыс.кл./лунку), разведенным полной средой RPMI-1640 рН 7.4, добавляли ААТ
до конечной концентрации 10 мкг/мл (использовали антитела клинически здорового человека, больных СКВ на стадии обострения и в период ремиссии).
Каждый опыт повторяли трижды. Моноциты инкубировали в 96-луночном
планшете (37ºС, 0.5% СО2) в течение 2 и 4 дней, нейтрофилы – 24 часа.
2.3.3. Определение общего количества клеток
После культивирования количество клеток подсчитывали в камере Горяева с трипановым синим.
33
Электронный журнал «Структура и динамика молекулярных систем». №7,А, 2009 г
2.3.4. Определение количества потребления глюкозы клетками
Концентрацию глюкозы в среде до и после инкубации клеток определяли
колориметрическим глюкозоксидазным методом, используя стандартный коммерческий набор реагентов.
2.3.5. Определение образования перекиси водорода моноцитами и нейтрофилами
Концентрацию перекиси водорода, выделяемой клетками после инкубации, определяли колориметрически с использованием фенолового красного и
пероксидазы хрена. Результаты выражали в пМ на одну клетку [17].
2.3.6. Оценка уровня повреждения ДНК клеток
2.3.6.1. Определение изменения молекулярной массы клеточной ДНК
Клетки лизировали 0,25% тритон Х-100 в 0.1н NaOH. ДНК очищали смесью хлороформ-изоамиловый спирт (24:1). Электрофорез ДНК клеток осуществляли согласно рекомендациям Т. Маниатиса [18] и Н.Н. Кузнецовой [14].
2.3.6.2. Оценка уровня повреждения ядерной ДНК методом флуоресцентной спектрофотометрии
Для оценки уровня повреждения ядерной ДНК моноцитов и нейтрофилов
измеряли интенсивность флуоресценции комплекса ДНК-ЭБ [19].
За 100% принимали интенсивность флуоресценции ДНК контроля – клеток, инкубированных без АТ к нДНК.
2.4. Статистическая обработка результатов
Из полученных результатов вычисляли медиану, 95 и 5 перцентили [20],
используя стандартный пакет Microsoft Excel. Графические файлы электрофореграмм обрабатывали, используя программу TotalLab 2.01.
3. Результаты исследований и их обсуждение
Антитела (АТ) класса IgG к нДНК обнаруживаются в крови клинически
здоровых людей, но их уровень значительно повышен при системной красной
волчанке (СКВ) – хроническом аутоиммунном заболевании соединительной
ткани неизвестной этиологии [21].
Данные литературы свидетельствуют о том, что популяция АТ класса IgG
к нДНК гетерогенна и это, вероятно, сказывается на противоречиях в характеристике и биологической роли ДНК-гидролизующих и ДНК-связывающих АТ
при СКВ [22, 23]. Поэтому для исследований из сывороток крови получали несколько субфракций антител к нДНК, различающихся по физико- и иммунохимическим свойствам.
34
Электронный журнал «Структура и динамика молекулярных систем». №7,А, 2009 г
В работе использовали сыворотки крови здоровых лиц, больных СКВ в активной стадии заболевания и в период ремиссии. Из каждой сыворотки крови
методом ионообменной хроматографии на ДЭАЭ-целлюлозе были получены 2
фракции антител, различающиеся по заряду – основные (фракция I) и кислые
(фракция II). Из каждой фракции методом аффинной хроматографии получали
по 2 субфракции, различающиеся по сродству к нДНК-целлюлозе – субфракции
а, элюированные 1М NaCl, и субфракции б, элюированные с сорбента буфером
Gly-HCl с рН 2.3.
В литературе существуют предположения, что в процессе развития и протекания патологического процесса при СКВ значительную роль могут играть
ДНК-гидролизующие аутоантитела класса IgG [6].
Оценку и сравнение ДНКазной активности выделенных ААТ класса IgG к
нДНК проводили, используя в качестве субстрата суперскрученную плазмидную ДНК pBR-322. Результаты гидролиза оценивали методом электрофореза в
горизонтальном агарозном геле (рис. 1). При внесении антителами одноцепочечных разрывов в нативную суперскрученную ДНК наблюдается переход молекулы в открытую кольцевую форму. Двуцепочечные разрывы плазмиды pBR322 приводят к образованию линейной формы молекулы ДНК. Изменение конформации плазмидной ДНК влияет на скорость движения молекулы в геле.
Рис. 1. Электрофоретический анализ продуктов гидролиза ДНК pBR-322
антителами к нДНК, выделенными из сывороток крови пациентов СКВ.
А – активная стадия заболевания, Б – СКВ в период ремиссии. 1. Плазмидная ДНК pBR-322
без инкубации, 2. ДНК pBR-322, инкубированная без антител, 3.- 4. – субфракция Iа, 7.- 8. –
субфракция IIа, 5.- 6. – субфракция Iб, 9. - 10. – субфракция IIб, r – кольцевая релаксированная форма, l – линейная форма, sc – кольцевая суперскрученная форма
Обнаружено, что АТ к ДНК, полученные из сыворотки крови больных
СКВ, вносят преимущественно одноцепочечные разрывы, так как появление
линейной формы ДНК не наблюдается. Из литературных данных известно, что
патологические антитела к нДНК могут вносить как одноцепочечные [24, 11],
так и двуцепочечные [25] разрывы в молекулу ДНК, что, вероятно, зависит от
вида, стадии заболевания и индивидуальных особенностей организма человека
[26, 24].
АТ к ДНК из сыворотки крови больных СКВ в период обострения проявляют высокую ДНКазную активность и практически полностью переводят нативную плазмидную ДНК в релаксированную форму (рис. 1А).
35
Электронный журнал «Структура и динамика молекулярных систем». №7,А, 2009 г
АТ к ДНК из сыворотки крови больных в состоянии ремиссии субфракций
а, элюированные 1M NaCl, обладают ДНК-гидролизующей активностью, внося
как одноцепочечные, так и двуцепочечные разрывы, что, вероятно, зависит от
пациента, а АТ к ДНК, элюированные буфером Gly-HCl с низким значением рН
2.3 проявляют более низкую ДНКазную активность по сравнению с субфракцией а того же пациента, либо вовсе ее теряют (рис. 1Б).
В целом у СКВ-антител к нДНК больных в период ремиссии ДНКазная активность ниже, чем на стадии обострения СКВ. Вероятно, во время ремиссии
СКВ изменяется фракционный состав и свойства ДНК-гидролизующих АТ, что
приводит к снижению их патологических возможностей.
Для исследования воздействия антител (АТ) к нДНК на клетки в качестве
моделей были выбраны моноциты и нейтрофилы крови человека, так как они
являются важным компонентом иммунной системы, и нарушение их функциональной активности часто приводят к развитию патологии. Моноциты (макрофаги) и нейтрофилы обеспечивают способность иммунной системы к своевременному ответу на генетически чужеродные объекты; осуществляют процесс
фагоцитоза и обезвреживание антигена, инициируя респираторный взрыв в
очаге инфекции. Кроме того, моноциты являются компонентами антигенпрезентирующей системы, а также защищают организм от «внутренней измены»,
элиминируя аутоагрессивные лимфоциты, старые, поврежденные и трансформированные клетки, тем самым предотвращая развитие онкологических и аутоиммунных заболеваний [27]
Перед инкубацией к клеткам эукариот были добавлены выделенные антитела к ДНК здорового донора, больных СКВ на стадии обострения и в период
ремиссии. Исследования проводили после культивирования клеток человека с
антителами к нДНК.
По истечении времени инкубации все образцы исследовались по нескольким показателям жизнедеятельности клеток:
общее количество и потребление клетками глюкозы за прошедшее время
инкубации являются показателями уровня пролиферации или клеточного апоптоза;
выделение моноцитами и нейтрофилами перекиси водорода – повышение
данного показателя свидетельствует об активации данных иммунокомпетентных клеток;
уровень и характер повреждения клеточной ДНК исследовали методами:
а: флуоресцентной спектрофотометрии
Образование разрывов в ДНК приводит к увеличению мест связывания ЭБ
с молекулой нуклеиновой кислоты и усилению интенсивности флуоресценции
комплекса ЭБ-ДНК. Таким образом, флуоресценция ЭБ изменяется при индукции фрагментации ДНК (либо однонитевых повреждений) [19].
б: электрофореза геномной ДНК в агарозном геле для определения молекулярной массы и характера повреждения клеточной ДНК.
36
Электронный журнал «Структура и динамика молекулярных систем». №7,А, 2009 г
Обнаружено, что в присутствии всех субфракций антител доноров снижается количество и соответственно потребление глюкозы из питательной среды
клетками эукариот по сравнению с контролем (рис. 2А, Б).
В присутствии антител клинически здорового человека моноциты и нейтрофилы вырабатывают избыточное количество перекиси водорода, что является свидетельством активации клеток иммунной системы. По высокой интенсивности флуоресценции комплекса ЭБ-ДНК в образцах, инкубированных с антителами донора, видно, что эти антитела способствуют повреждению клеточной ДНК (рис. 2В, Г).
Антитела больного СКВ на стадии обострения оказывают сходное с нормальными естественными антителами влияние на клетки человека, но их негативное воздействие более выражено.
Как и в случае нормальных при действии антител больного СКВ на стадии
обострения характерно усиленное выделение перекиси водорода иммунокомпетентными клетками и повышенный уровень повреждения клеточной ДНК (рис.
2В, Г).
Рис. 2. Показатели изменения жизнедеятельности клеток (моноцитов) после инкубации с антителами к нативной ДНК: А – количество клеток, Б – потребление клетками глюкозы, В –
выделение моноцитами и нейтрофилами перекиси водорода, Г – интенсивность флуоресценции ЭБ-ДНК, 1 – контроль, 2 – АТ к нДНК донора, 3 – СКВ-АТ к нДНК больного в период
обострения, 4 – СКВ АТ к нДНК больного в стадии ремиссии
При инкубации клеток с СКВ-антителами периода ремиссии наблюдается
тенденция к уменьшению количества клеток и потребления глюкозы, но в це37
Электронный журнал «Структура и динамика молекулярных систем». №7,А, 2009 г
лом по всем показателям жизнедеятельности клеток результаты не значимо отличаются от контроля (рис. 2).
Методом электрофореза в агарозном геле было обнаружено, что молекулярная масса выделенной ДНК моноцитов составляет 3.8 – 23,2 тыс. п. н
(рис.3). Поскольку в присутствии антител клинически здорового человека она
не изменяется, а повреждения в ДНК наблюдаются, вероятно, АТ донора способствуют образованию одноцепочечных разрывов в ДНК.
В присутствии СКВ-антител стадии обострения заметно образование более низкомолекулярных фрагментов ДНК (2.8 тыс. п. н.). Это свидетельствует о
том, что кроме внесения ДНК-гидролизующими антителами одноцепочечных
разрывов, содержащиеся в препаратах ДНК-связывающие АТ могут способствовать образованию двуцепочечных разрывов в молекуле нуклеиновой кислоты.
Полученные результаты снижения количества клеток и высокого уровня
повреждения геномной ДНК под влиянием патологических антител к нДНК
подтверждают литературные данные о наличии корреляции между цитотоксичностью и ДНК-гидролизующими свойствами аутоантител [10]. Вероятно, ДНКгидролизующие антитела, внося повреждения в ДНК, могут способствовать индукции клеточного апоптоза.
Рис. 3. Электрофоретический анализ ДНК моноцитов здорового человека
после инкубации с антителами к нативной ДНК при +37°С, 1. ДНК-маркеры, 2. контроль, 3.
АТ к нДНК донора – субфракция Iа, 4. АТ к нДНК донора – субфракция IIа, 5. СКВ-АТ к
нДНК больного в период обострения – субфракция Iа, 6. СКВ-АТ к нДНК больного в период
обострения – субфракция IIа, 7. СКВ-АТ к нДНК больного в стадии ремиссии
Из полученных данных можно сделать заключение – антитела из сывороток здорового донора и больного СКВ в активной стадии заболевания проявляют сходное действие на клетки. Вероятно, повышение уровня в крови антител к
ДНК может способствовать повреждению клеток иммунной системы и/или нарушению их функциональной активности, что в свою очередь способствует
38
Электронный журнал «Структура и динамика молекулярных систем». №7,А, 2009 г
чрезмерному синтезу патологических антител к ДНК и/или продукции антител
с новыми свойствами, например, с ДНК-гидролизующей активностью.
Аутоантитела к ДНК входят в пул антител, но в крови здоровых людей и
животных их содержание намного ниже, чем при патологии, и в норме они
обычно находятся в комплексе с другими заряженными биополимерами сыворотки или антиидиотипическими антителами [28, 29]. Видимо, поэтому в здоровом организме аутоантитела к нДНК не проявляют своих патологических
возможностей.
Полученные результаты негативного воздействия нормальных АТ к ДНК
на клетки могут быть обусловлены использованием свободных от иммунных
комплексов антител класса IgG к нДНК в концентрациях, одинаковых как для
здоровых людей, так и для пациентов СКВ.
Из полученных результатов сходного влияния на клетки антител к нДНК
здорового донора и больного СКВ в период обострения заболевания можно заключить, что патологические аутоантитела к нДНК могут происходить от натуральных аутоантител, но вопрос о причинах такого переключения на сегодняшний день остается открытым. Некоторые авторы предполагают, что нарушение
в системе идиотип-антиидиотипического ингибирования активности натуральных аутоантител – одна из возможных причин усиления активности ААТ и развития аутоиммунных процессов [29].
Предположительно, механизм воздействия нормальных и СКВ-антител на
ДНК может отличаться. Возможно, нормальные ДНК-связывающие антитела
взаимодействуют с молекулой ДНК и изменяют ее конформацию, открывая
сайты расщепления для активных форм кислорода, что может инициировать
начало патологического процесса. В то же время патологические ДНКгидролизующие антитела, проникая в клеточное ядро, повреждают геномную
ДНК, способствуя развитию заболевания. Вероятно, в результате действия как
ДНК-связывающих, так и ДНК-гидролизующих аутоантител в организме повышается уровень клеточного апоптоза [10].
Антитела из сыворотки крови больного СКВ в период ремиссии практически не оказывают разрушительного воздействия на клетки и их ДНК, что свидетельствует об эффективности гормонального лечения. Возможно, в период
ремиссии происходит изменение структуры и свойств патологических аутоантител к ДНК, в результате чего снижается их ДНК-гидролизующая активность,
и, вероятно, они утрачивают способность проникать в клетки.
Как показывают результаты, антитела к ДНК могут способствовать развитию и усилению патологического процесса.
Нарушение функций моноцитов и нейтрофилов, повышение уровня их
апоптоза приводит к усилению воспалительного процесса в результате повреждения тканей активными формами кислорода, снижению фагоцитоза, повышению содержания апоптотических телец и времени их циркуляции в кровотоке,
что и наблюдается при СКВ.
Рядом авторов показано, что нарушение фагоцитоза апоптотических телец
приводит к увеличению их количества в организме, что может являться соот39
Электронный журнал «Структура и динамика молекулярных систем». №7,А, 2009 г
ветствующим фактором развития СКВ [30,15]. Так как в процессе апоптоза клеток высвобождаются и/или иммобилизуются на поверхностной мембране значительные количества ядерных аутоантигенов (например, нуклеосом), накопление в организме апоптотических клеток может направлять иммунную систему к
продукции ААТ к нДНК, которые в свою очередь негативно влияют на клетки
организма [31].
Литература
1. Lacroix-Desmazes, S. Self-reactive antibodies (natural autoantibodies) in healthy individuals /
S. Lacroix-Desmazes, S.V. Kaveri, L. Mouthon, et al // J. Immunol. Metods. – 1998. – V.216. –
P. 117-137.
2. Насонов, Е.Л. Современные подходы к иммунологической диагностике аутоиммунных и
иммунокомплексных болезней / Е.Л. Насонов, В.В. Сура // Территориальный архив. –
1988. – №6. – С. 144-150.
3. Вершигора, А.Е. Общая иммунология / А.Е.Вершигора. – Киев: Высшая школа, 1990.736с.
4. Бернет, Г. Молекулярная иммунология / Г. Бернет – М.:Мир, 1971. – С. 203-227.
5. Pisetsky, D.S. Antibody responses to DNA in Normal Immunity and Aberrant Immunity / D.S.
Pisetsky // Clin. Diagn. Lab. Immunol. – 1998. – V.5. – №1. – Р. 1-6.
6. Nevinsky, G.A. Effect of different drugs оn the level of DNA-hydrolyzing polyclonal IgG
antibodies in sera of patients with Hashimoto's thyroiditis and nontoxic nodal goiter / G.A.
Nevinsky, А.А. Breuzov, A.G. Baranovskii, et. al. // Med. Sci. Monit. – 2001. – V.7. – №2. – С.
201-211.
7. Eilat, D. Anti-DNA autoantibodies: а puzzle of autoimmune phenomena / D. Eilat, У. Naparstek
// Immunology Today. – 1999. – V. 20. – №8. – Р. 339-342.
8. Koren, E. Murine and human antibodies to native DNA that cross-react with the A and D
SnRNP polypeptides cause direct injury of cultured kidney cells / E. Koren, M. Koscec, M.
Wolfson-Reichlin, et al. // J. Immunol. – 1995. – V. 154. – P. 4857-4867.
9. Reichlin, M. Characterization of anti-dsDNA antibodies: cross-reaction with SnRNP
polypeptides and cell-binding abilities / M. Reichlin, B. Hahn, E. Koren // The Immunologist. –
1995. – V.3. – №3. – P. 84-88.
10. Kozyr, A.V. Anti-DNA autoantibodies reveal toxicity to tumor cell lines/ A.V. Kozyr, L.P.
Sashchenco, A.V. Kolesnicov, et al. // Immunol. Lett. – 2002. – V.80. –P. 41-47.
11. Невзорова, Т.А. ДНК-гидролизующая активность антител к ДНК при системной красной
волчанке: Дис. … канд. биол. наук: 03.00.04: защищена 24.03.05: утв. 03.06.05 / Невзорова
Т.А. – Казань, 2005. – 170 с.
12. Дарбре А. Практическая химия белка / отв. ред. А. Дарбре – М.: Мир. 1989. – 621 с.
13. Невзорова, Т.А. Особенности ДНК-гидролизующей активности антител при системной
красной волчанке / Т.А. Невзорова, Д.А. Темников, В.Г. Винтер // Биохимия. – 2003. –
Т.68. - №12. – С. 1616 – 1623.
14. Кузнецова Н.Н., Методы генной инженерии / Н.Н. Кузнецова, В.Г. Винтер – М.: Биоинформсервис, 1997. – 180 c.
15. Yang, R. Autpreactive murine Th1 and Th2 cells kill syngeneic macrophages and induce
autoantibodies / R. Yang, M. Kaplan, D. Ray, et al. // Lupus. – 2001. – V.10. – P. 539-541.
16. Долгушин, И.И. Антимикробные эффекты секреторных продуктов нейтрофилов / И.И.
Долгушин // РАМН.. – 2001. –№23. – С.5.
17. Pirato, N. Fish oil alteres T-lymphocytes proliferation and macrophage responses in WALKER256 tumor-beeing rats / N. Pirato, S. Donatto, M. Piconcelly et al // Nutrition. – 2006. – V.22. –
p.425-432.
40
Электронный журнал «Структура и динамика молекулярных систем». №7,А, 2009 г
18. Маниатис Т., Фрич Э., Сэмбрук Дж. Молекулярное клонирование. Методы генетической
инженерии. / Т. Маниатис, Э. Фрич, Дж. Сэмбрук – М.: Мир, 1984. – 479 с.
19. Анисимов, А.Г. Обработка синхронизированных клеток К562 тетрафторалюминатом не
модулирует флуоресценцию бромистого этидия и 4,6-диамидино-2-фенилиндола при связывании с нуклеоидной ДНК / А.Г. Анисимов, И.А. Болотников // Цитология – 1999. –
Т.41. – №8. – С. 680-684.
20. Акберова, Н.И. Описательная статистика. Интервальные оценки / Н.И. Акберова – Казань: Издательство КГУ, 2004. – 40 с.
21. Невзорова, Т.А. Аутоантитела к ДНК при системной красной волчанке (Обзор) / Т.А.
Невзорова, В.Г. Винтер; Казан. ун-т. - Казань, 2000. - 28 с. - Библ. 56 назв. - Рус. - Деп. в
ВИНИТИ 13.10.00; № 2628-В00.
22. Barbas, S.M. Human autoantibody recognition of DNA / S.M. Barbas, H.J. Ditzel, E.M.
Saloneh, et al. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. – 1995. –V.92.–№7 – P.2529-2533
23. Foster M.H. Biology of Disease. Nephritogenic autoantibodies in systemic lupus erythematosus:
immunochemical properties. Mechanisms of immune deposition, and genetic origins / M.H.
Foster, B. Cizman, M.P. Madaio // Lab. Invest. – 1993. – V.69. – №5. – P. 494-507.
24. Шустер, А.М. Антиидиотипические и природные каталитически активные антитела /
А.М. Шустер, Г.Б. Гололобов, О.А. Квашук, А.Г. Габибов // Молекулярная биология. –
1991. – Т. 25. – №3. – С. 593-602.
25. Барановский, А.Г. ДНК- и РНК-гидролизующие антитела из крови больных различными
формами вирусного гепатита / А.Г. Барановский, В.Г. Матюшин, А.В Власов и др. // Биохимия. – 1997. – Т.62. – Вып. 12. – С. 1590-1599.
26. Генералов, И.И. Поликлональные каталитические антитела и их возможное биологическое значение / И.И. Генералов, Д.К. Новиков // Успехи соврем. биологии. – 1998. – Т.118.
– №2. – С. 178-193.
27. Ройт, А. Иммунология / А. Ройт, Дж. Бростофф – М.: Мир, 2000. – 592 с.
28. Сидорик, Л.Л. Белковый синтез и аутоиммунитет / Л.Л. Сидорик // Биополимеры и клетка. – 1992. – Т.8. – №426.
29. Леках, И.В. Гетерогенность и авидность аутоантител, реагирующих с ДНК / И.В. Леках,
Г.М. Ротт, А.М. Поверенный // Молекулярная биология. – 1991. – Т.25. – №5. – С. 13911399.
30. Walport, M.J. Lupus, DNase and defective disposal of cellular debris / M.J. Walport // Nature
Genetics. – 2000. – V.25. – P. 135-136.
31. Lorenz, H.-M. Role of apoptosis in autoimmunity / H.-M. Lorenz, M. Herrman, T. Wincler, et
al. // Apoptosis. – 2000. – V.5. – P. 443-449.
41
Электронный журнал «Структура и динамика молекулярных систем». №7,А, 2009 г
PROPERTIES OF ANTIBODIES TO DNA IN CELL CULTURE
Sabirzanova A.Z., Ivanova V.V., Chramova A. Yu., Nevzorova T.A.
Kazan State University V.I.Ulyanova-Lenin
420008, Kazan, Kremlevskaya st., 18, KSU, Department of Biochemistry
E-mail: 111v_alsusa@inbox.ru, fairybloom@rambler.ru, serena_@list.ru, Tnevzorova@mail.ru
Abstract
We have shown that antibodies (Ab) to native DNA (nDNA) of healthy donors and SLE patients at
the stage of exacerbation exhibit similar effects on eukaryotic cells in vitro; they reduce the number
of cells and reduce the glucose consumption by cells, activate immunocompetent cells to the production of reactive oxygen species (ROS), contribute to damage of cellular DNA. Ab to nDNA of
systemic lupus erythematosus (SLE) patients in period of remission do not have significant effect
on eukaryotic cells in vitro. The possible reasons for the generation of pathological AAb of IgG
class to nDNA and their biological role in the article are discussed.
Keywords
Antibodies to native DNA, autoimmunity, systemic lupus erythematosus, the culture of eukaryotic
cells.
Сведения об авторах
№№
Ф.И.О.
Должность и место работы
Телефон рабочий
E-mail
+7 (843) 233-78-52
111v_alsusa@inbox.ru
89179285520
1
Сабирзянова Алсу
Зуфаровна
Старший лаборант кафедры биохимии
КГУ
2.
Иванова Вилена
Витальевна
Студент V курса кафедры биохимии
КГУ
+7 (843) 233-78-52
fairybloom@rambler.ru
89600331043
3.
Храмова Алина
Юрьевна
Студент IV курса кафедры биохимии
КГУ
+7 (843) 233-78-52
serena_@lyst.ru
89046629547
4.
Невзорова Татьяна
Александровна
Доцент, кафедра биохимии КГУ
+7 (843)233-78-45
tnevzorova@mail.ru
89178589911
42