011233 Изобретение относится к применению вируса для получения лекарственного препарата для вакци- нации или лечения животного, включая человека, в неонатальном или пренатальном периоде,...
реклама
011233 Изобретение относится к применению вируса для получения лекарственного препарата для вакцинации или лечения животного, включая человека, в неонатальном или пренатальном периоде, где вирус способен инфицировать клетки животного, включая человека, в неонатальном или пренатальном периоде, но не способен к репликации в инфекционное потомство вируса у животного, включая человека, в неонатальном или пренатальном периоде. Предпочтительно вирус представляет собой модифицированный осповакцинный вирус Анкара. В частности, изобретение относится к вакцинации новорожденных против инфекций, вызываемых вирусами, относящимися к той же самой группе вирусов, что и вирус, используемый для вакцинации. Кроме того, изобретение относится к вакцинации новорожденных против антигенов, выбранных из чужеродных антигенов и опухолевых антигенов, где опухолевый антиген и/или чужеродный антиген отличаются от антигенов, связанных с вирусом. Дополнительно изобретение относится к применению вирусов, указанных выше, для повышения концентрации факторов, которые активируют дендритные клетки или их клетки-предшественники, и/или повышения количества дендритных клеток или их клетокпредшественников, и/или повышения продукции и/или клеточного содержания интерферона (IFN) или IL-12. Предпосылки изобретения В природном окружении животных и людей находится большое количество различных инфекционных агентов, таких как вирусы, бактерии или грибы. Многие из этих инфекционных агентов могут вызывать заболевания у инфицированных хозяев. В нормальных условиях инфицированный хозяин выздоравливает от заболевания, вызванного инфекционным агентом, после определенного периода времени. Данное выздоровление происходит в результате функционирования иммунной системы животного или человека. Иммунная система является частью организма человека или животного, которая ответственна за элиминацию инфекционного агента. Иммунный ответ подразделяется на специфическую и неспецифическую (врожденную) реакцию, хотя обе тесно взаимодействуют. Неспецифическая иммунная реакция представляет собой опосредованную защиту против широкого ряда различных чужеродных веществ и инфекционных агентов. Во врожденной иммунной реакции, направленной против вирусов, интерферон (IFN)-α и IFN-β являются абсолютно необходимыми для контроля первоначальной репликации вирусов и активации природных киллерных клеток (NK) для непосредственного уничтожения зараженных клеток. Внутриклеточные бактериальные или паразитарные патогены вызывают выработку IL-12, который повышает продукцию IFN-γ в NK-клетках и/или некоторых субпопуляциях Т-клеток. Затем NK-клетки, активированные IFN-γ, могут уничтожать внутриклеточные патогены. Кроме того, IFN-γ также активирует макрофаги и способствует уничтожению ими внедрившихся патогенов. Безусловно, наиболее богатым источником IFN-α/β на клетку являются дендритные клетки (DC), специализированная клеточная популяция, стратегически распределенная в организме. Плазматические DC или CD11c+ CD8+ DC представляют наиболее эффективные продуценты IFNα/β. CD8+ DC, зараженные внутриклеточными патогенами, не относящимися к вирусам, представляют собой ключевые клетки, способные секретировать IL-12, необходимый на ранних стадиях иммунной защиты. Специфический иммунный ответ может быть индуцирован против определенного чужеродного вещества (антигена) после лаг-фазы, когда организм заражается данным веществом впервые. Инициация специфического иммунного ответа также координируется DC. Имеет место постоянное движение данных клеток от периферии к вторичным лимфоидным органам, лимфатическим узлам или селезенке, где рециркулируют наивные Т- и В-клетки. Антиген, который переносится DC к данным органам, способствует активации наивных Т- или В-клеток с их превращением в эффекторные Т- или В-клетки. Для этого DC не только переносят антиген, но пластичность распознавания антигена позволяет активироваться различным генам в DC, и таким образом происходит примирование Т-клеток. Специфический иммунный ответ является высокоэффективным и ответственен за то, что индивидуум, выздоровевший от специфической инфекции, становится защищенным против специфической инфекции. Таким образом, в результате вторичной инфекции, вызванной тем же или очень близким инфекционным агентом, возникают значительно более слабые симптомы или они отсутствуют вовсе, поскольку уже имеется "предсуществующий специфический иммунитет" к данному агенту. Подобный иммунитет и иммунологическая память соответственно сохраняются в течение длительного периода времени, в некоторых случаях в течение всей жизни. Следовательно, индукцию иммунологической памяти можно использовать для вакцинации, т.е. защиты индивидуума против инфекции, вызываемой специфическим патогеном. Для вакцинации иммунную систему стимулируют вакциной, которая сама по себе является менее опасной, чем патогенный агент, против которого индуцируется иммунный ответ. Вакцина включает или экспрессирует эпитопы, которые обнаруживаются или экспрессируются агентом, против которого проводят вакцинацию. Таким образом, организм иммунизируют против агента, содержащего эпитоп, который является частью вакцины. -1- 011233 Типичные вакцины представляют собой аттенуированные или инактивированные вирусы (например, вакцины против полиомиелита или натуральной оспы), рекомбинантные белки (например, рекомбинантный S-белок вируса гепатита В), инактивированные тепловой обработкой бактериальные токсины (токсин Clostridium tetani) или полисахариды капсиды бактерий (Streptococcus pneumoniae). Поскольку инфекционные заболевания могут приводить к очень тяжелым критическим состояниям, у новорожденных и грудных детей существует потребность в как можно более ранней вакцинации детей или новорожденных животных. Примерами состояний, против которых желательна вакцинация, являются инфекции, вызываемые поксвирусами, включая натуральную оспу. Однако попытки эффективной вакцинации новорожденных сдерживаются тем, что иммунная система новорожденных млекопитающих является незрелой. Полагают, что иммунная система новорожденных детей и животных-млекопитающих созревает постепенно в течение определенного периода времени. У людей созревание происходит в течение первого года жизни. Данное обстоятельство является причиной того, что новорожденные остаются подверженными различным инфекциям в течение первого года жизни (Gans et al., J. Am. Med. Assoc. (1998) 280, 527-532). Конкретнее, у новорожденных имеется пониженная функция В-клеток, недостаточность в первичном представлении антигена дендритными клетками и ограниченная пролиферация Тклеток (Gans et al., J. Am. Med. Assoc. (1998) 280, 527-532). Сразу же после рождения количество Тклеток в селезенке в 1000 раз ниже, чем у взрослых. Для достижения, по меньшей мере, слабой иммунизации было предложено использовать либо реплицирующиеся вирусы, либо композиции, содержащие адъювант для иммунизации. Однако при использовании реплицирующихся вирусов всегда имеется риск того, что незрелая иммунная система может подавляться под действием вирусной инфекции или живых вирусных вакцин, поскольку для элиминации вирусов необходимы Т-клетки (Hassett et al., J. Virol. (1997) 71, 7881-7888). Поскольку у новорожденных имеется пониженная продукция цитокинов Th-1 хелперными Т-клетками, ответ у новорожденных в основном осуществляют Th-2. Следовательно, цитотоксические Т-клетки не обновляются, и не достигается элиминация вирусов. Ситуация у животных-млекопитающих очень схожа с ситуацией у людей, т.е. иммунная система после рождения является незрелой. У новорожденных мышей число CD4+ Т-клеток в селезенке составляет 80000, и количество CD8+ Т-клеток в 1000 раз ниже, чем в селезенке взрослых особей. Кроме того, у данных мышей имеется незрелая система продукции интерферона (IFN). Следовательно, новорожденные мыши неспособны эффективно контролировать распространение внутриклеточных патогенов с помощью IFN в месте инфекции. Кроме того, низкое количество и, возможно, неадекватная активация иммунных клеток также ограничены для того, чтобы быстро справиться с быстро распространяющимися патогенами или реплицирующимися вирусами, использованными для вакцинации. За счет риска, связанного с применением живых вирусных вакцин, не рекомендуется вакцинировать новорожденных животных, включая людей, реплицирующимися вирусами. Например, не рекомендуется вакцинировать новорожденных против натуральной оспы вакцинными штаммами вируса, которые применялись до ликвидации оспы, такими как штаммы Elstee, Copenhagen и NYCBH. Согласно последним рекомендациям в США детей младше 12 месяцев не вакцинируют промышленно доступными вакцинами против натуральной оспы. Вакцинация новорожденных композициями, содержащими адъювант, имеет тот недостаток, что при этом в организм поступают многочисленные вредные вещества. Таким образом, вакцинацию детей проводят только в неотложных случаях, например в случае гепатита В. В заключение необходимо отметить, что иммунная система является незрелой при рождении. Поскольку вакцинация реплицирующимися компетентными вирусами или композициями, содержащими адъювант, имеет существенные недостатки, новорожденных не вакцинируют до 2-месячного возраста в Германии (Empfehlung der Ständigen Impfkommission STICO, 2001) или 6-недельного возраста в США (ACIP "Recommended Childhood Immunization Schedule, United States"). Замедленное развитие иммунной системы частично компенсируется переносом материнских антител от матери к плоду во время беременности или новорожденным во время кормления грудью. Однако по различным причинам не все новорожденные находятся на грудном вскармливании. Таким образом, имеет место очень критический период примерно 6-8 недель у детей, во время которого новорожденный, имеющий незрелую и таким образом не полностью функциональную иммунную систему, не получает материнские антитела, и во время которого вакцинация, как правило, не является эффективной или очень опасной. Ситуация очень схожа с животными-млекопитающими, в частности экономически важными животными, такими как коровы, или домашними животными, такими как кошки и собаки. Для снижения затрат количество молока, которое получает теленок от матери, часто является очень низким. Вместо этого теленок получает смесь порошкового молока, стартера и особого концентрированного корма, иногда, уже в первую неделю после рождения. В результате теленок не получает необходимого количества материнских антител, и в итоге незрелая иммунная система является очень чувствительной к инфекциям. Кроме того, фермеры, которые разводят телят, и те, кто затем выращивают для производства мяса, часто являются разными лицами. В возрасте 4-6 недель телят из различных ферм, занимающихся разведением, объединяют и переправляют на другие фермы для продукции мяса. В этот период уровень материнских -2- 011233 антител является низким, и иммунная система еще полностью не сформировалась, а животные подвергаются воздействию новых инфекционных агентов в стрессовых условиях. Все это повышает риск для инфекций, которые можно профилактировать вакцинацией. Аналогичную ситуацию можно найти при разведении котят или щенят, где имеется высокое давление инфекции. Цель изобретения Целью настоящего изобретения является обеспечение средств вакцинации новорожденных детей и животных соответственно против чужеродных антигенов и антигенов, связанных с заболеваниями у людей и животных соответственно. Конкретнее, целью настоящего изобретения является обеспечение средств для ускоренного созревания иммунной системы у новорожденных животных и детей. Дополнительной целью настоящего изобретения является обеспечение средств вакцинации новорожденных животных, включая людей, против инфекций, вызываемых поксвирусами, в частности, против натуральной оспы. Подробное описание изобретения По настоящему изобретению неожиданно было установлено, что возможно безопасно и эффективно вакцинировать и/или лечить животных в неонатальном или пренатальном периоде, включая людей, вирусами, которые способны инфицировать клетки животного в неонатальном или пренатальном периоде, включая человека, но не могут реплицироваться в указанных клетках в инфекционное потомство вируса. В частности, было показано, что вирусы, используемые по настоящему изобретению, такие как MVA, в частности, MVA-BN и его производные (см. ниже), можно вводить новорожденным без проявления негативного действия. Вакцинация животного вирусом приводит к развитию специфического иммунного ответа против вируса, используемого для вакцинации и/или общей вакцинации против чужеродных антигенов и опухолевых антигенов, как поясняется подробно ниже. Кроме того, вирусы, используемые по настоящему изобретению, приводят к индукции и/или усилению созревания иммунной системы, что связано с увеличением количества дендритных клеток и факторов, таких как интерфероны. Вакцинация вирусами, используемыми по настоящему изобретению, возможна даже, если композиция, которую вводят животному, не содержит адъювант. В заключение, вирусы, которые используются по настоящему изобретению, (i) вызывают высокий иммунный ответ у новорожденных, (ii) их можно вводить без необходимости в адъюванте, и (iii) они не несут риск подавления организма. По настоящему изобретению защитное действие проявляется по меньшей мере в течение 5 суток, предпочтительно по меньшей мере в течение 7, 14 и 28 суток после первой вакцинации. Вирусы, которые "способны инфицировать клетки", представляют собой вирусы, имеющие на поверхности вируса структуры, способные взаимодействовать с клетками хозяина в такой степени, что вирус или, по меньшей мере, вирусный геном включается в клетку-хозяин. Несмотря на то, что вирусы, используемые по настоящему изобретению, способны инфицировать клетку-хозяин, они не способны реплицироваться в инфекционное потомство вирусов в зараженных клетках. В контексте настоящего изобретения термин "вирус, не способный к репликации в инфекционное потомство вируса в указанных клетках", относится к вирусам, геном которых, по меньшей мере, частично транскрибируется и транслируется в вирусные белки и даже реплицируется, однако не упаковывается в инфекционные вирусные частицы. Таким образом, вирусы, используемые по настоящему изобретению, представляют вирусы, приводящие к прерывающимся инфекциям у хозяина. Прерывающиеся инфекции могут иметь место по двум причинам: по первой альтернативе клетка может быть восприимчивой к инфекции, но она не может быть приемлемой для размножения вируса, например, в результате того, что в указанной клетке экспрессируются и/или имеются в вирусном геноме не все необходимые вирусные гены для размножения вируса. Примером данного типа вируса по настоящему изобретению в человеческих клетках является модифицированный осповакцинный вирус Анкара (MVA), который подробно описывается ниже. Согласно второй альтернативе прерывающаяся инфекция может быть результатом инфицирования клеток дефектными вирусами, у которых отсутствует полный комплект вирусных генов. Примером подобного вируса по настоящему изобретению для человеческих клеток является DISC-HSV1 (дефектный, с одним циклом деления герпесвирус), т.е. герпесвирус, который ограничен одним циклом инфекции (Dilloo et al., Blood 1997, 89: 119-127). У данного вируса отсутствует ген незаменимого гликопротеина Н (gH), но он может расти с высоким титром в комплементарной клеточной линии, экспрессирующей gH. В комплементарных клеточных линиях, подходящих для роста герпесвируса, его рост сведен к одному циклу репликации, приводя к высвобождению неинфекционного вируса. Термин "неспособный к репликации" предпочтительно относится к вирусам, которые совсем не реплицируются в клетках вакцинированного животного. Однако в объеме настоящего изобретения находятся такие вирусы, которые проявляют незначительную остаточную активность репликации, которая контролируется незрелой иммунной системой новорожденного. Вирус по настоящему изобретению может быть любым вирусом, который способен инфицировать клетки животного, но не способен реплицироваться в инфекционное потомство вируса в указанных клетках. Очевидно понятно, что вирус, который способен инфицировать клетки у первого вида животных, но не способен к репликации в инфекционное потомство вируса в указанных клетках, может вести себя -3- 011233 иначе у другого вида животных. Например, для людей MVA-BN и его производные (см. ниже) представляют вирусы, которые способны инфицировать клетки человека, но не способны к репликации в инфекционное потомство вируса в клетках человека. Те же вирусы могут реплицироваться у кур, т.е. у кур MVA-BN может не представлять собой вирус, который не способен реплицироваться в инфекционное потомство вируса в клетках кур. Специалистам в данной области известно, какой вирус следует выбрать для конкретного вида животных. Тест, с помощью которого можно определить, насколько вирус способен или не способен реплицироваться у животного в неонатальном или пренатальном периоде, раскрывается в заявке WO 02/42480, и для его постановки используется штамм мышей AGR129. Данные, полученные на этой модели мышей, применимы для людей. Таким образом, термин "не способный к репликации в инфекционное потомство вируса" в том смысле, в котором он используется в настоящей заявке, относится к термину "отсутствие репликации в условиях in vivo", использованному для мышей в заявке WO 02/42480. Более детально данный тест представлен ниже. Вирусы по настоящему изобретению предпочтительно способны к репликации по меньшей мере в одном типе клеток по меньшей мере у одного вида животных. Таким образом, возможно амплифицировать вирус перед введением животному, которое подвергается вакцинации и/или лечению. В качестве примера можно привести MVA-BN, который можно амплифицировать в клетках CEF, но он представляет вирус, который не способен к репликации в инфекционное потомство вируса у человека в неонатальном или пренатальном периоде. В данном контексте следует отметить, что химически или физически инактивированные вирусы не обладают всеми свойствами данного предпочтительного воплощения, поскольку инактивированные вирусы способны инфицировать клетки животного, включая человека, в неонатальном или пренатальном периоде и не способны реплицироваться в инфекционное потомство вирусов у животного, включая человека, в неонатальном или пренатальном периоде, но данные вирусы не способны реплицироваться по меньшей мере в одном типе клеток по меньшей мере у одного вида животных. Предпочтительно вирус представляет собой ДНК-содержащий вирус. Более предпочтительно для клеток млекопитающих, в частности, человеческих клеток, когда ДНК-содержащий вирус выбран из вирусов DISC-Hepes и модифицированного осповакцинного вируса Анкара (MVA). Модифицированный осповакцинный вирус Анкара (MVA) относится к вакцинному вирусу, члену рода Orthopoxvirus семейства Poxviridae. MVA был получен в результате 516 последовательных пассажей на фибробластах куриных эмбрионов штамма Анкара осповакцинного вируса (CVA) (см. обзор Mayr A. et al., Infection 3, 6-14 [1975]). В результате данных длительных пассажей полученный вирус MVA представляет продукт делеции размером 31 т.п.о. из его геномной последовательности и, следовательно, описан как ограниченный птичьими клетками в качестве клеток-хозяев (Meyer H. et al., J. Gen. Virol. 72, 1031-1038 [1991]). Было показано на различных моделях на животных, что полученный MVA является в высокой степени авирулентным (Mayr A. & Danner К. [1978] Dev. Biol. Stand. 41:225-34). Кроме того, данный штамм MVA тестировали в клинических испытаниях в качестве вакцины для иммунизации против натуральной оспы человека (Mayr et al., Zbl. Bakt. Hyg. I, Abt. Org. В 167, 375-390 [1987], Stickl et al., Dtsch. med. Wschr. 99, 2386-2392 [1974]). В данных исследованиях участвовало более 120000 людей, включая пациентов группы риска, и было доказано, что по сравнению с базовыми вакцинами, MVA обладал пониженной вирулентностью или инфекционностью и в то же время сохранял высокую иммуногенность. Предпочтительными штаммами по настоящему изобретению являются MVA 575, находящийся в Европейской коллекции культивируемых клеток животных (ЕСАСС) под депозитным номером V00120707, и MVA-BN, находящийся в той же организации под депозитным номером V000083008, и их производные. Если предполагается вакцинировать/лечить людей, то MVA-BN и его производные являются особенно предпочтительными. Свойства особенно предпочтительных штаммов MVA, предпочтительно наиболее предпочтительных штаммов для людей, таких как MVA-BN и его производных, можно обобщить следующим образом: (i) способность к репродуктивной репликации в фибробластах куриных эмбрионов (CEF) и в клетках линии ВНК, но отсутствие способности к репродуктивной репликации в человеческой клеточной линии HaCat, (ii) отсутствие репликации in vivo, (iii) индукция более высокой иммуногенности по сравнению с известным штаммом MVA 575 (ЕСАСС V00120707) на модели летального инфицирования и/или (iv) индукция, по меньшей мере, такого же иммунитета в схемах примирования вакцинным вирусом/бустинга вакцинным вирусом по сравнению со схемами ДНК-примирования/бустинга вакцинным вирусом. Предпочтительные штаммы MVA по настоящему изобретению обладают свойством (ii) отсутствия репликации в организме, который подвергается вакцинации или лечению, и/или в соответствующей тестсистеме, как поясняется ниже, и предпочтительно одним дополнительным из вышеуказанных свойств, более предпочтительно двумя дополнительными из вышеуказанных свойств. Наиболее предпочтительными являются штаммы MV7A, обладающие всеми вышеуказанными свойствами. Примером штамма MVA, обладающего всеми вышеуказанными свойствами у людей, является MVA-BN. Предпочтительные -4- 011233 производные MVA-BN являются производными, обладающими в дополнение к признаку (ii) по меньшей мере одним из вышеуказанных свойств, более предпочтительно по меньшей мере двумя из вышеуказанных свойств. Наиболее предпочтительными являются производные MVA-BN, обладающие всеми вышеуказанными свойствами. Подробная информация, касающаяся тестов, использованных для определения того, обладает ли штамм MVA одним или более из вышеуказанных признаков (i)-(iv), имеется в заявке WO 02/42480. В данной публикации также раскрывается, как можно получить вирусы, имеющие желаемые свойства. В частности, в заявке WO 02/42480 приводится подробное определение признаков MVA-BN и производного MVA-BN и подробно раскрываются биологические тесты, которые используются для определения того, насколько штамм MVA является MVA-BN или его производным. Другими словами, в заявке WO 02/42480 раскрываются признаки MVA-BN, описание биологических тестов, позволяющих оценить, насколько штамм MVA является MVA-BN или его производным, и способы, позволяющие получить MVABN или его производные. Ниже кратко приводится, как специалист в данной области может получить штаммы MVA, обладающие одним или более из вышеуказанных признаков, и как он может тестировать, обладает ли данный штамм MVA одним или более из вышеуказанных свойств и является, таким образом, наиболее предпочтительным вирусом по настоящему изобретению. Последующее краткое описание не следует понимать, как ограничение релевантности заявки WO 02/42480 для настоящей заявки к последующей информации. Вместо этого заявка WO 02/42480 включена здесь полностью для сведения. Термин "не способный к репродуктивной репликации" в клеточной линии HaCat (Boukamp et al., 1988, J. Biol. 106 (3): 761-71) используется в настоящей заявке аналогично тому, как определено в заявке WO 02/42480. Таким образом, вирус, который "не способен к репродуктивной репликации" в клеточной линии HaCat, представляет собой вирус, который показывает индекс амплификации, равный менее 1 в человеческой клеточной линии HaCat. Предпочтительно, чтобы индекс амплификации вируса, используемого в качестве вектора по изобретению, составлял 0,8 или менее в человеческой клеточной линии HaCat. "Индекс амплификации" вируса представляет соотношение вируса, полученного из зараженных клеток (выход), к количеству, первоначально использованному для заражения клеток (вход), ("индекс амплификации"). Индекс, равный "1", между выходом и входом определяет состояние амплификации, когда количество вируса, полученного из зараженных клеток, является таким же, как исходное количество, использованное для заражения клеток. Термин "производные" вирусов, находящихся на хранении под номером ЕСАСС V00083008, предпочтительно относится к вирусам, проявляющим в основном ту же способность к репликации, что и находящийся на хранении штамм, но имеющим различия в отношении одной или более частей его генома. Вирусы, обладающие такой же "способностью к репликации", что и находящиеся на хранении вирусы, представляют собой вирусы, которые реплицируются с аналогичными индексами амплификации, что и находящийся на хранении штамм в клетках CEF и клеточных линиях ВНК, HeLa, HaCat и 143В, и которые показывают аналогичную репликацию в условиях in vivo, определенную на модели трансгенных мышей AGR129 (см. ниже). Термин "отсутствие способности к репликации in vivo" используется в настоящей заявке аналогично тому, как определено в заявке WO 02/42480. Таким образом, указанный термин относится к вирусам, которые не реплицируются у людей и на модели на мышах, как поясняется в заявке WO 02/42480. Мыши, использованные в заявке WO 02/42480, не способны к продукции зрелых В- и Т-клеток (мыши AGR129). В частности, MVA-BN и его производные не приводят к гибели мышей AGR129 в течение периода времени по меньшей мере 45 суток, более предпочтительно в течение по меньшей мере 60 суток, наиболее предпочтительно в течение 90 суток после заражения мышей 107 БОЕ вируса, введенного внутрибрюшинно. Предпочтительно вирусы, которые показывают "отсутствие способности к репликации in vivo", дополнительно характеризуются тем, что вирус невозможно выделить из органов и тканей мышей AGR129 в течение 45 суток, предпочтительно 60 суток и наиболее предпочтительно 90 суток после заражения мышей 107 БОЕ вируса, введенного внутрибрюшинно. Вместо мышей AGR129 можно использовать любой другой штамм мышей, неспособный продуцировать зрелые В- и Т-клетки, и в результате для него характерен высокий иммунодефицит и высокая чувствительность к реплицирующемуся вирусу. Подробности опыта по летальному инфицированию, использованному для определения того, обладает ли штамм MVA "более высокой иммуногенностью по сравнению с известным штаммом MVA 575", поясняются в заявке WO 02/42480. На подобной модели летального инфицирования невакцинированные мыши погибают после заражения реплицирующимися компетентными вакцинными штаммами, такими как штамм Western Reserve L929 ТК+ или IHD-J. Заражение реплицирующимися компетентными вакцинными вирусами относится к "инфицированию" в контексте описания модели летального инфицирования. Через 4 суток после заражения мыши, как правило, погибают, и титр вируса в яичниках определяют обычными методами бляшкообразования в клетках VERO. Титр вируса определяют для невакцинированных мышей и мышей, вакцинированных MVA-BN и его производными. Конкретнее, MVA-BN и его производные характеризуются тем, что в данном тесте после вакцинации 102 TCID50/мл вируса титры вируса в яичниках снижаются по меньшей мере на 70%, предпочтительно по меньшей мере на 80%, более предпочтительно по меньшей мере на 90% по сравнению с невакцинированными мышами. -5- 011233 В предпочтительном воплощении вирусы по настоящему изобретению, такие как MVA, в частности, MVA-BN и его производные, пригодны для примирования/бустинга. Вирусы, в частности, штаммы MVA, которые наиболее предпочтительно применяются в настоящем изобретении, такие как MVA-BN и его производные, а также соответствующие рекомбинантные вирусы, содержащие гетерологичные последовательности, можно использовать для эффективного первого примирования и затем бустинга у животных, не подвергнутых ранее иммунизации, а также животных с ранее возникшим иммунитетом к поксвирусам. Таким образом, наиболее предпочтительный вирус по настоящему изобретению стимулирует, по меньшей мере, такой же иммунитет в схемах примирования вакцинным вирусом/бустинга вакцинным вирусом по сравнению со схемами ДНК-примирования/бустинга вакцинным вирусом. Вакцинный вирус, в частности, штамм MVA, рассматривается как индуцирующий, по меньшей мере, такой же иммунитет в схемах примирования вакцинным вирусом/бустинга вакцинным вирусом по сравнению со схемами ДНК-примирования/бустинга вакцинным вирусом, если ответ CTL, определенный в одном из "тестов 1" и "тесте 2", раскрытых в заявке WO 02/42480, предпочтительно в обоих тестах, является, по меньшей мере, в основном аналогичным при схемах примирования вакцинным вирусом/бустинга вакцинным вирусом по сравнению со схемами ДНК-примирования/бустинга вакцинным вирусом. Более предпочтительно, когда ответ CTL после примирования вакцинным вирусом/бустинга вакцинным вирусом выше по меньшей мере в одном из тестов по сравнению с ДНКпримированием/бустингом вакцинным вирусом. Наиболее предпочтительно, когда ответ CTL выше в обоих тестах. Вирус, использованный по настоящему изобретению, может быть нерекомбинантным вирусом, таким как MVA, т.е. вирусом, который не содержит гетерологичные нуклеотидные последовательности. Примером нерекомбинантного вакцинного вируса является MVA-BN и его производные. Альтернативно, вирус может быть рекомбинантным вирусом, таким как рекомбинантный MVA, который содержит дополнительные нуклеотидные последовательности, которые являются гетерологичными для вируса. Термин "гетерологичный" в том смысле, в котором он используется в настоящей заявке, относится к любой комбинации нуклеиновокислотных последовательностей, которые обычно отсутствуют у вирусов в природе, подобный вирус также называется "рекомбинантным вирусом". Гетерологичная нуклеиновокислотная последовательность предпочтительно выбрана из последовательностей, кодирующих по меньшей мере один антиген, антигенный эпитоп, полезные белки и/или терапевтическое соединение. Термин "полезные белки" в том смысле, в котором он используется в настоящей заявке, относится к любым белкам, которые полезны для защиты животного против антигена, выбранного из опухолевого антигена и чужеродного антигена, где опухолевый антиген и чужеродный антиген отличаются от антигенов, связанных с вирусом. Альтернативно и конкретнее, "полезные белки" являются активными в увеличении концентрации факторов, которые активируют дендритные клетки и/или являются активными в увеличении числа дендритных клеток, и/или являются активными в повышении продукции и/или клеточного содержания интерферона (IFN) или IL-12. Так, примерами подобных полезных белков являются интерфероны, такие как IFN-альфа или IFN-бета, IL-12, Flt-3-L и/или GM-CSF. Антигенные эпитопы могут представлять любые эпитопы, против которых целесообразно стимулировать иммунный ответ. Примерами антигенных эпитопов являются эпитопы из Plasmodium falciparum, Mycobacteria, вируса гриппа, из вирусов, выбранных из семейств флавивирусов, парамиксовирусов, вирусов гепатита, вирусов иммунодефицита человека или из вирусов, вызывающих геморрагическую лихорадку, таких как гантавирусы или филовирусы, т.е. вирус Эбола и Марбурга. Так, если, например, для вакцинации новорожденных по настоящему изобретению используется рекомбинантный MVA, экспрессирующий гетерологичные эпитопы, то результатом данного лечения является не только общая вакцинация за счет ускоренного созревания иммунной системы, но также специфическая вакцинация против гетерологичного эпитопа, экспрессированного гетерологичным MVA. "Терапевтическое соединение", кодированное гетерологичной нуклеиновой кислотой в рекомбинантном вирусе, может представлять собой, например, терапевтическую нуклеиновую кислоту, такую как антисмысловая нуклеиновая кислота или пептид, или белок с желаемой биологической активностью. Вставку гетерологичной нуклеиновокислотной последовательности предпочтительно проводят в заменимую область генома вируса. Альтернативно, гетерологичную нуклеиновокислотную последовательность вставляют в имеющийся в естественных условиях сайт делеции в геноме вируса (для MVA раскрытый в патенте РСТ/ЕР96/02926). Способы вставки гетерологичных последовательностей в геном вируса, такого как геном поксвирусов, известны специалистам в данной области. Настоящее изобретение также обеспечивает фармацевтическую композицию и вакцину, содержащие вирус по настоящему изобретению, такой как MVA, например, для стимуляции иммунного ответа в организме животного, включая человека. Как правило, фармацевтическая композиция может содержать один или более фармацевтически приемлемых и/или разрешенных для применения носителей, добавок, антибиотиков, консервантов, адъювантов, разбавителей и/или стабилизаторов. Подобными вспомогательными веществами может быть -6- 011233 вода, физиологический раствор, глицерин, этанол, увлажнители или эмульгаторы, рН-забуферивающие вещества или тому подобное. Как правило, подходящие носители являются крупными, медленно метаболизирующимися молекулами, такими как белки, полисахариды, полимолочные кислоты, полигликолевые кислоты, полимерные аминокислоты, сополимеры аминокислот, липидные агрегаты или тому подобное. Для получения вакцин вирус или его рекомбинанты превращают в физиологически приемлемую форму. Подобные способы хорошо известны специалистам в данной области. Для MVA и других поксвирусов вакцину можно получить, основываясь на опыте получения вакцин на основе поксвирусов, используемых для вакцинации против натуральной оспы (как описано Stickl H. et al. [1974] Dtsch. med. Wschr. 99, 2386-2392). Например, очищенный вирус хранят при -80°С при титре 5×108 TCID50/мл примерно в 10 мМ Трис-буфере, 140 мМ NaCl, pH 7,4. Для получения доз вакцины, например, 101-108 частиц вируса, такого как MVA, лиофилизуют в 100 мл забуференного фосфатом физиологического раствора (PBS) в присутствии 2% пептона и 1% человеческого альбумина в ампуле, предпочтительно стеклянной ампуле. Альтернативно, дозы вакцины можно получить стадийным высушиванием, замораживанием вируса в композиции. Данная композиция может содержать дополнительные добавки, такие как маннит, декстран, сахар, глицин, лактоза или поливинилпирролидон или другие добавки, такие как антиоксиданты или инертный газ, стабилизаторы или рекомбинантные белки (например, человеческий сывороточный альбумин), подходящие для введения in vivo. Затем стеклянную ампулу запаивают, и ее можно хранить при температуре в пределах от 4°С до комнатной в течение нескольких месяцев. Однако ампулу предпочтительно хранят при температуре ниже -20°С, пока не возникает необходимость в ее использовании. Для вакцинации или лечения лиофилизат можно растворить в 0,1-0,5 мл водного раствора, предпочтительно физиологического раствора или Трис-буфера и вводить либо системно, либо местно, например парентерально, внутримышечно или любым другим путем для введения, известным специалисту в данной области. Специалистам в данной области известным образом можно оптимизировать способ введения, дозу и кратность введения. Вирус по настоящему изобретению, в частности, MVA, можно вводить пероральным, интраназальным, внутримышечным, внутривенным, внутрибрюшинным, внутрикожным, внутриматочным и/или подкожным путем. Небольшим животным прививку для иммунизации предпочтительно проводить парентерально или интраназально, в то время как более крупным животным или людям подкожное, внутримышечное и пероральное введение является предпочтительным. MVA предпочтительно вводят в дозе в пределах от 101 TCID50 (инфекционная доза для тканевой культуры) до 109 TCID50. Как указывалось выше, вирус по настоящему изобретению, в частности, MVA, такой как MVA-BN и его производные, можно вводить в терапевтически эффективном количестве при первой иммунизации ("примирование") и второй иммунизации ("бустинг"). В контексте настоящего изобретения термин "животное" включает также людей. В более общем смысле животное представляет позвоночное, предпочтительно млекопитающее, включая человека. Конкретными примерами животных являются домашние животные, такие как собаки, кошки, экономически важные животные, такие как телята, крупный рогатый скот, овцы, козы, лошади, свиньи и другие животные, такие как мыши, крысы. Для данных видов животных и людей MVA и DISC-HSV являются особенно предпочтительными вирусами. Изобретение можно также использовать для экономически важных птиц, таких как индейки, утки, гуси и куры, если используемые вирусы способны инфицировать клетки птиц, но не способны реплицироваться в инфекционное потомство вируса в указанных клетках. Термин "домашние животные" в том смысле, в котором он используется в настоящем описании, предпочтительно относится к домашним животным-млекопитающим, более предпочтительно собакам, кошкам, телятам, крупному рогатому скоту, овцам, козам, свиньям, лошадям, оленям. Согласно первой альтернативе вирусы по настоящему изобретению, в частности, MVA-BN и его производные, можно использовать в качестве специфических вакцин, т.е. для стимуляции иммунного ответа, который защищает вакцинированных новорожденных животных против заболеваний, вызываемых вирулентным вирусом, относящимся к той же группе, семейству или роду вирусов, что и вирус, который применяется для вакцинации. В качестве примера MVA, определенного выше, в частности, MVABN и его производные, можно использовать для вакцинации новорожденных детей против инфекций, вызываемых поксвирусами, в частности, натуральной оспы. MVA, в частности, MVA-BN и его производные, можно также использовать для вакцинации позвоночных животных против инфекций, вызываемых поксвирусами, имеющих ветеринарное значение. Согласно данной первой альтернативе вирус, используемый для вакцинации, может быть нерекомбинантным вирусом, таким как MVA-BN или его производные, или рекомбинантным вирусом, несущим гены в геноме вируса, которые в природе не обнаруживаются в указанном геноме. Предпочтительно рекомбинантный вирус содержит дополнительные гены, которые оказывают помощь в стимуляции иммунного ответа. Примерами данного вида генов являются гены цитокинов и гены интерферона. Согласно второй, но связанной альтернативе, новорожденных вакцинируют рекомбинантным вирусом, содержащим гетерологичную нуклеиновокислотную последовательность, определенную выше, для -7- 011233 стимуляции иммунного ответа против аминокислотной последовательности, экспрессированной из гетерологичной нуклеиновокислотной последовательности. В качестве примера, нуклеиновокислотная последовательность может кодировать антиген или антигенный эпитоп, определенные выше. Примерами рекомбинантного вируса по настоящему изобретению является рекомбинантный MVA, в частности, рекомбинантный MVA-BN или его производное, содержащие гетерологичную нуклеиновую кислоту, кодирующую антигены из (i) вирусов, иных чем MVA, таких как ВИЧ-1, ВИЧ-2, Denguevirus, вирус лихорадки Западного Нила, вирус японского энцефалита, вирус кори, (ii) опухолевых антигенов, (iii) бактерий, (iv) грибов. Если антиген, экспрессированный из рекомбинантного вируса, представляет собой, например, антиген ВИЧ, то возможно использовать рекомбинантный вирус для стимуляции иммунного ответа у вакцинированных новорожденных против ВИЧ и профилактики СПИДа. В более широком смысле рекомбинантный вирус, экспрессирующий антиген или антигенный эпитоп, используется для стимуляции иммунного ответа против агента, из которого получена гетерологичная последовательность, и/или против агента, который содержит антиген или антигенный эпитоп. Согласно третьей альтернативе неожиданно было установлено, что вирусы, способные инфицировать клетки животного, включая человека, в неонатальном или пренатальном периоде, но не способные реплицироваться в инфекционное потомство вируса у животного, включая человека, в неонатальном или пренатальном периоде можно использовать для получения лекарственного препарата для защиты животного, в частности, новорожденного животного, включая человека, против антигена, выбранного из опухолевого антигена и чужеродного антигена, где опухолевый антиген и/или чужеродный антиген отличаются от антигенов, связанных с вирусом. Согласно данной третьей альтернативе новорожденные, вакцинированные вирусами по настоящему изобретению, в частности, MVA, таким как MVA-BN и его производные, защищены от заражения чужеродными антигенами, такими как инфекционные агенты. Таким образом, вирусы по настоящему изобретению, в частности, MVA, являются общей вакциной для новорожденных, т.е. при вакцинации новорожденных вирусами по настоящему изобретению, в частности, MVA, иммунная система новорожденных становится более компетентной для того, чтобы справиться с чужеродными антигенами, такими как вирусы. В разделе примеров в качестве примера приводится вакцинация MVA и последующее заражение герпес-вирусом типа 1. Таким образом, если вирус по настоящему изобретению, в частности, MVA, используется для вакцинации новорожденных, то вакцинированные животные в большей степени защищены против чужеродных антигенов по сравнению с невакцинированными животными в критический период жизни до достижения функциональности и зрелости иммунной системы. По настоящему изобретению "опухолевый антиген и/или чужеродный антиген отличаются от антигенов, связанных с вирусом". Данный термин следует понимать в том смысле, что согласно данному воплощению изобретение не предназначается, главным образом, для применения вируса, такого как MVA, для индукции иммунного ответа против самого вируса. Вместо этого вирус используется для стимуляции иммунного ответа или, по меньшей мере, общей иммунной стимуляции, которая защищает хозяина от чужеродных антигенов и опухолевых антигенов соответственно, которые не связаны с вирусом. Термин "антигены, связанные с вирусом" относится к эпитопам и антигенам вирусной частицы и антигенам и эпитопам на поверхности клетки, зараженной вирусом, которые возникают в результате экспрессии вирусного генома. В контексте данного воплощения термин "чужеродные антигены" относится к любым антигенам и эпитопам, которые в естественных условиях не являются частью или компонентом организма животного. Чужеродные антигены особенно представляют антигены и эпитопы из инфекционных агентов и токсинов. Типичными инфекционными агентами являются вирусы, такие как герпесвирусы, ретровирусы, рабиесвирусы, рабдовирусы, аденовирусы; бактерии, такие как Salmonella, Mycoplasm, Meningicoccus, Hemophilus; прионы или грибы. Изобретение представляет интерес не только для вакцинации животных против чужеродных антигенов, но в альтернативном воплощении оно также пригодно для вакцинации против опухолевых антигенов. "Опухолевые антигены" представляют антигены, связанные с некоторыми опухолевыми заболеваниями. Чаще всего опухолевые антигены представляют антигены, кодированные геномом хозяина, у которого развивается опухоль. Таким образом, в строгом смысле опухолевые антигены не являются чужеродными антигенами. Однако опухолевые антигены обнаруживаются в больших количествах именно в опухолях, в то время как количество опухолевых антигенов в нормальных тканях значительно ниже, и чаще всего опухолевые антигены не обнаруживаются вовсе в нормальной ткани. Примеры опухолевых антигенов известны специалистам в данной области и включают, например, антигены MAGE. MVA эффективен против данных опухолевых антигенов, поскольку вакцинация животных приводит к активации и/или ускоренному созреванию иммунной системы, которая затем может привести к гибели опухолевых клеток. Термин "защита против антигена" относится к развитию иммунного ответа, который направлен против чужеродного или опухолевого антигена. Если чужеродный антиген является инфекционным агентом, то хозяин защищен против указанного агента, т.е. у хозяина развивается иммунный ответ против указанного антигена. Следовательно, заражение инфекционным агентом приводит к развитию менее -8- 011233 тяжелого заболевания, или заболевание не развивается вовсе. Термин "защита" не следует понимать в том смысле, что всегда будет иметь место 100% защита против чужеродного или опухолевого антигена. Вместо этого, термин "защита" в том смысле, в котором он используется в настоящей заявке, относится к полезному действию, которое помогает животному справиться соответственно с чужеродным антигеном и опухолевым антигеном. По настоящему изобретению подобное защитное действие проявляется в течение по меньшей мере 5 суток, предпочтительно по меньшей мере в течение 7, 14 или 28 суток после первой вакцинации. Другими словами, вакцинированное или подвергнутое лечению животное защищено, например, против чужеродного антигена, если животное контактирует с указанным антигеном соответственно через 5, 7, 14 и 28 суток. В контексте настоящего изобретения эффект вакцинации новорожденных вирусом по настоящему изобретению, в частности, MVA, можно объяснить индукцией или усилением созревания иммунной системы и/или активацией иммунной системы. В контексте настоящего изобретения термин "индукция или усиление созревания иммунной системы" относится, кроме того, к ускоренному увеличению количества дендритных клеток или их предшественников у вакцинированных особей по сравнению с контрольными. Термины "ускорение созревания" иммунной системы и "усиление созревания" иммунной системы используются в данном описании взаимозаменяемо. "Активация иммунной системы" характеризуется экспрессией на поверхности клеток молекул и гормонов, которые облегчают взаимодействие клеток/с клетками, или передвижение, и/или секрецию указанных молекул и гормонов клетками. Специфические рецепторы воспринимают данные сигналы и реагируют на них. Маркерами активации являются, кроме того, Flt3-L, IL-12, IFN-альфа, MHC-II и CD8, и, в частности, CD8альфа (см. ниже). Ускоренное развитие/созревание иммунной системы коррелирует с увеличением концентрации факторов, активирующих или мобилизующих дендритные клетки (DC) или их клетки-предшественники, и/или с увеличением количества дендритных клеток и их клеток-предшественников, и/или с повышением продукции и/или клеточного содержания интерферона или IL-12. Примером клеток-предшественников DC, которые индуцируются вирусом по настоящему изобретению, в частности, MVA, являются плазматические предшественники DC, которые имеют очень большое значение для защиты против вирусных инфекций и которые, как полагают, продуцируют IFN-α/β. Конкретнее, усиление созревания иммунной системы предпочтительно определяется по меньшей мере 2-кратным увеличением поверхностных маркеров, обнаруживаемых на DC, таких как MHC-II, CD40 и/или CD80/86. Предпочтительно подобное увеличение можно определить в крови. Дополнительными маркерами, свидетельствующими об ускорении созревания иммунной системы, являются Flt3-L, IL-12, IFN-альфа, MHC-II и CD8a (см. ниже). Кроме того, ускоренное созревание иммунной системы предпочтительно коррелирует по меньшей мере с 1,5-кратным увеличением, предпочтительно по меньшей мере с 2,0-кратным увеличением числа CD11c-положительных клеток в крови и/или селезенке через 7 суток после введения MVA-BN новорожденным животным по сравнению с контрольными животными, которые не получали MVA-BN. Кроме того, усиление созревания иммунной системы может предпочтительно коррелировать по меньшей мере с 1,5-кратным увеличением, более предпочтительно по меньшей мере с 2,0-кратным увеличением концентрации Flt3-L через 2 суток после вакцинации новорожденных вирусами по настоящему изобретению по сравнению с контрольными животными аналогичного возраста. В данном контексте следует отметить, что имеется связь между фенотипом и функцией мышиных и человеческих популяций DC, которые можно охарактеризовать их поверхностным фенотипом (Hochrein et al., 2002. Hum. Immunol. 63: 1103). DC можно детектировать в крови с использованием проточной цитометрии при применении ряда поверхностных маркеров (MacDonald et al., 2002. Blood. 100: 4512), что также позволяет идентифицировать специфические популяции DC, такие как плазматические DC (Dzionek et al., 2002. Hum. Immunol. 63: 1133; Dzionek et al., 2000. J. Immunol. 165: 6037). С использованием аналогичных методов можно детектировать DC в других человеческих тканях (Summers et al., 2001. Am. J. Pathol. 159: 285). По настоящему изобретению вирусы, определенные выше, можно также использовать для лечения животных в неонатальном или пренатальном периоде для увеличения концентрации факторов, активирующих или мобилизующих дендритные клетки (DC) или их клетки-предшественники, и/или увеличения количества дендритных клеток и их клеток-предшественников, и/или повышения продукции и/или клеточного содержания интерферона или IL-12. Было показано, что после вакцинации MVA-BN плазматические дендритные клетки продуцируют значительно больше IL-12, и имеет место повышенная продукция IFN-альфа и положительная регуляция синтеза MHC-II и CD8a. Увеличение концентрации IL-12 после введения вирусов, используемых по настоящему изобретению, предпочтительно составляет 2 раза, более предпочтительно 100 раз, 500 раз, 1000 раз, 2500 раз или 5000 раз. Через 2 суток после вакцинации новорожденных вирусами по настоящему изобретению, наиболее предпочтительно MVA-BN или его производными, имеет место предпочтительно 1,5-кратное, более предпочтительно 2,0-кратное увеличение концентрации Flt3-L по сравнению с контрольными животными аналогичного возраста. -9- 011233 Термин "активация дендритных клеток или их предшественников" относится к созреванию и превращению DC в антиген-представляющие клетки через определяемые заболеванием клеточные стадии, регулируемые гормонами и стимулами. Промежуточные стадии DC называются предшественниками. Данные незрелые DC достигают периферической крови. Различные (антигенные) стимулы активируют DC. Маркерами активации, которые положительно регулируются в активированных дендритных клетках, являются Flt3-L, IL-12, IFN-альфа, MHC-II и CD8a (см. ниже). Было отмечено, что гормоны, такие как GM-CSF, приводят к наличию более незрелых клеток в периферической крови. Поскольку GM-CSF приводит к появлению большого числа предшественников DC в костном мозге, крови и периферических органах (и клетки должны туда передвигаться), данное явление назвали "мобилизацией дендритных клеток или их предшественников". Данное определение также используется в настоящем описании. Следовательно, вакцинация животных, включая человека, особенно пригодна, если предполагается повысить концентрацию факторов, активирующих дендритные клетки (DC) или их клеткипредшественники и/или увеличить количество дендритных клеток или их клеток-предшественников, и/или усилить продукцию и/или клеточное содержание интерферона или IL-12. Факторы, которые активируют дендритные клетки, кроме того, включают Flt3-L (Lyman et al., Cell 1993, 75: 1157-1167) и GM-CSF. Типичными интерферонами по настоящему изобретению являются IFNальфа и IFN-бета. Вирусы, используемые по настоящему изобретению, стимулируют выработку Flt3-L и полагают, что некоторые наблюдаемые положительные эффекты проявляются за счет указанной стимуляции. В контексте настоящей заявки новорожденное животное или человек определяется как животное или человек, еще не имеющие зрелой иммунной системы. В данном описании термины "новорожденное животное" и "животное в неонатальном периоде" используют в качестве синонимов. Зрелая иммунная система характеризуется способностью полностью активировать интактную иммунную систему и тем обстоятельством, что все известные функции и продукты Т- и В-клеток находятся на месте, в частности, изотипы иммуноглобулинов, такие как IgA и IgE. Таким образом, незрелая иммунная система характеризуется низким количеством Т-клеток, В-клеток и дендритных клеток по сравнению со взрослыми, продукцией IFN, которая является более низкой по сравнению со взрослыми особями, и тем обстоятельством, что вторичные лимфоидные органы не являются полностью зрелыми. Конкретнее, "животное в неонатальном периоде" или "новорожденное" в контексте настоящего изобретения можно определить как новорожденное животное, имеющее количество спленоцитов CD4+ предпочтительно по меньшей мере в 2 раза, более предпочтительно по меньшей мере в 20 раз, более предпочтительно по меньшей мере в 200 раз, более предпочтительно по меньшей мере в 2000 раз, наиболее предпочтительно по меньшей мере в 20000 раз ниже, чем среднее число спленоцитов CD4 + у взрослых. У мышей иммунная система становится зрелой в возрасте 4 недель. У людей зрелость иммунной системы наступает в возрасте от 6 месяцев до 1 года. У кошек и собак иммунная система созревает, как правило, в возрасте 6 месяцев, у телят, ягнят и поросят - в возрасте 4-12 недель. Вакцинацию вирусом по настоящему изобретению, в частности, MVA, предпочтительно проводят перед тем, как иммунная система становится зрелой. Однако, поскольку созревание после рождения происходит почти экспоненциально, то более предпочтительно вакцинировать вирусом по настоящему изобретению, в частности, MVA, как можно раньше после рождения. Поскольку у всех относящихся к данному вопросу домашних животных и у людей иммунная система становится зрелой не ранее чем через 4 недели после рождения, то, как правило, предпочтительно проводить вакцинацию вирусом по настоящему изобретению, в частности, MVA, в течение 4 недель после рождения, более предпочтительно в течение 2 недель после рождения, еще более предпочтительно в течение 1 недели после рождения, наиболее предпочтительно в течение 3 дней после рождения. Данные общие термины применимы ко всем экономически важным домашним животным, в частности, ко всем важным домашним животным-млекопитающим, включая людей. Специалист в данной области, очевидно, понимает, что даже более старшие животные могут рассматриваться в качестве новорожденных/находящихся в неонатальном периоде в контексте настоящего изобретения и что, таким образом, вакцинацию можно успешно проводить у более взрослых животных, когда иммунная система еще не является зрелой, т.е. через 4 недели после рождения. Таким образом, у людей вакцинацию можно проводить в течение 6 месяцев после рождения, более предпочтительно в течение 3 месяцев после рождения, более предпочтительно в течение 2 месяцев после рождения, более предпочтительно в течение 4 недель после рождения, более предпочтительно в течение 2 недель после рождения, еще более предпочтительно в течение 1 недели после рождения, наиболее предпочтительно в течение 3 дней после рождения. Поскольку наилучший эффект вируса по настоящему изобретению, в частности, MVA, в качестве общей вакцины, наблюдают, если вирус вводят особи с незрелой иммунной системой, то может быть предпочтительным вакцинировать животных, находящихся в пренатальном периоде, включая людей. Пренатальная вакцинация может быть желательной у экономически важных животных, таких как крупный рогатый скот или свиньи. Если вирус проходит через плаценту, то плод можно просто вакцинировать вакцинацией матери. Так, вакцинация матери с целью вакцинации плода является особенно обе- 10 - 011233 щающей у животных, имеющих эндотелиохориальную плаценту, таких как собаки, кошки, крысы и мыши, или имеющих гемохориальную плаценту, таких как приматы, включая людей. У животных, имеющих хорионепителиальную плаценту, таких как крупный рогатый скот и овцы, или имеющих синдесмохориальную плаценту, таких как свиньи и лошади, вакцинацию плодов предпочтительно проводить внутриматочным введением. Конечно, данный способ введения можно также применить для животного, имеющего эндотелиохориальную или гемохориальную плаценту. Поскольку вирусы по настоящему изобретению, в частности MVA, приводят к ускоренному созреванию иммунной системы и поскольку вирусы по настоящему изобретению, в частности MVA, пригодны в качестве общей вакцины, то вакцинированные животные защищены против различных заболеваний. Конкретнее, вирусы по настоящему изобретению, в частности MVA, можно использовать для вакцинации кошек для улучшения общего статуса и против кошачьего герпеса или инфекционного перитонита кошек. Вирусы по настоящему изобретению, в частности MVA, можно использовать для собак для улучшения общего статуса и против ассоциированных (вирусных) заболеваний дыхательного тракта. Вирусы по настоящему изобретению, в частности MVA, можно использовать у поросят для улучшения общего статуса и против инфекций, вызываемых Hemophilus или Mycoplasma, особенно у откормочных свиней. Как указывалось, предпочтительным воплощением является применение вирусов по настоящему изобретению, в частности MVA, у животных в неонатальном или пренатальном периоде для защиты указанных животных против чужеродного антигена и/или опухолевого антигена, где опухолевый антиген отличается от антигенов, связанных с вирусом, используемым для вакцинации. Однако, данное воплощение не ограничивается животными в неонатальном или пренатальном периоде. Вместо альтернативного воплощения изобретение можно осуществлять для животных всех возрастов, поскольку положительное действие можно наблюдать также и у взрослых животных. Таким образом, по данному воплощению вирусы, определенные выше, в частности MVA-BN и его производные, пригодны для защиты животного, включая человека, против антигена, выбранного из опухолевого антигена и чужеродного антигена, где опухолевый антиген и/или чужеродный антиген отличаются от антигенов, связанных с вирусом. Как указывалось выше, вирусы, используемые по настоящему изобретению, способны инфицировать клетки животного, но не способны реплицироваться в инфекционное потомство вируса в указанных клетках. Вся информация, определения, включая определение продолжительности защитного действия, примеры, а также предпочтительные, более предпочтительные и наиболее предпочтительные воплощения, представленные выше для новорожденных, также применимы для настоящего воплощения, согласно которому вирус можно также вводить взрослым. В противоположность новорожденным иммунная система взрослых животных уже находится в зрелом состоянии. Независимо от этого могут возникнуть ситуации, когда иммунная система ослабляется за счет определенных заболеваний или просто возраста животного. У людей с иммунной недостаточностью или у пожилых людей введение вирусов по настоящему изобретению, в частности MVA, может быть особенно полезным увеличением концентрации факторов, активирующих и/или мобилизующих дендритные клетки (DC) или их клетки-предшественники, и/или увеличением количества дендритных клеток или их клеток-предшественников, и/или повышением продукции и/или клеточного содержания интерферона или IL-12. Таким образом, даже у взрослых животных введение вирусов по настоящему изобретению, в частности MVA, может привести к повышению компетентности иммунной системы для того, чтобы справиться с чужеродными антигенами и/или опухолевыми антигенами. Другими словами, вирусы, используемые по настоящему изобретению пригодны для активации иммунной системы в целом. Изобретение дополнительно относится к вирусам по настоящему изобретению, в частности MVA, для получения лекарственного препарата для введения животному, включая человека, где указанный лекарственный препарат увеличивает концентрацию факторов, которые активируют дендритные клетки и/или увеличивает количество дендритных клеток, и/или повышает продукцию и/или клеточное содержание интерферона (IFN) или IL-12. Все определения, представленные выше для других воплощений, также применимы для настоящего воплощения. Согласно данному воплощению изобретение не направлено главным образом на стимуляцию защиты против чужеродных антигенов и/или опухолевых антигенов. Вместо этого, данное воплощение направлено на лечение состояний и заболеваний, характеризующихся низким уровнем факторов, которые активируют дендритные клетки, и/или недостаточным или слишком низким количеством дендритных клеток и/или низкой продукцией, и/или клеточным содержанием интерферона (IFN) или IL-12. Таким образом, по данному воплощению лечение вирусами по настоящему изобретению, в частности MVA, может защитить от аллергии или аутоиммунных заболеваний. Также данное лечение является особенно обещающим, если вирусы по настоящему изобретению, в частности MVA, вводят новорожденным животным. Кроме того, по дополнительному воплощению вирус по настоящему изобретению, такой как MVA, в частности MVA-BN и его производные, особенно полезны для стимуляции иммунных ответов у животных с иммунной недостаточностью, например обезьян (CD4 <400/мкл крови), зараженных SIV, или у людей с иммунной недостаточностью. Термин "иммунная недостаточность" определяет статус иммунной системы индивидуума, при котором имеются только неполные иммунные ответы, или у него имеется - 11 - 011233 пониженная эффективность в защите от инфекционных агентов. Изобретение дополнительно касается способа защиты животного, включая человека, против антигена, выбранного из опухолевого антигена и чужеродного антигена, введением вируса по настоящему изобретению, в частности модифицированного осповакцинного вируса Анкара (MVA), где опухолевый антиген и/или чужеродный антиген отличаются от антигенов, связанных с вирусом. В дополнительном воплощении изобретение относится к способу лечения животного, включая человека, для увеличения концентрации факторов, которые активируют дендритные клетки, и/или увеличения количества дендритных клеток, и/или повышения продукции и/или клеточного содержания интерферона (IFN) или IL-12, включающему введение модифицированного осповакцинного вируса Анкара (MVA). Краткое описание изобретения Применение вируса для получения лекарственного препарата для вакцинации или лечения животного в неонатальном или пренатальном периоде, включая человека, где вирус способен инфицировать клетки животного в неонатальном или пренатальном периоде, включая человека, но не способен к репликации в инфекционное потомство вируса у животного в неонатальном или пренатальном периоде, включая человека. Способ лечения или вакцинации животного в неонатальном или пренатальном периоде, включая человека, включающий введение вируса, где вирус способен инфицировать клетки животного в неонатальном или пренатальном периоде, включая человека, но не способен к репликации в инфекционное потомство вируса у животного в неонатальном или пренатальном периоде, включая человека. Вирус для вакцинации или лечения животного в неонатальном или пренатальном периоде, включая человека, где вирус способен инфицировать клетки животного в неонатальном или пренатальном периоде, включая человека, но не способен к репликации в инфекционное потомство вируса у животного в неонатальном или пренатальном периоде, включая человека. Применение, способ или вирус, указанные выше, где вирус является ДНК-содержащим вирусом. Применение, способ или вирус, указанные выше, где вирус выбран из герпесвирусов DISC и модифицированного осповакцинного вируса Анкара (MVA). Применение, способ или вирус, указанные выше, где штамм MVA представляет MVA-BN, находящийся на хранении в Европейской коллекции культивируемых клеток животных (ЕСАСС) под депозитным номером V00083008, и его производные. Применение, способ или вирус, указанные выше, где MVA вводят пероральным, интраназальным, внутримышечным, внутривенным, внутрибрюшинным, внутрикожным, внутриматочным и/или подкожным путем. Применение, способ или вирус, указанные выше, где MVA вводят в терапевтически эффективном количестве при первой прививке ("примирование") и при второй прививке ("бустинг"). Применение, способ или вирус, указанные выше, где MVA вводят животному, включая человека, в количестве по меньшей мере 101 TCID50 (инфекционная доза для тканевой культуры). Применение, способ или вирус, указанные выше, где вакцинация направлена против инфекции, вызываемой поксвирусами. Применение, способ или вирус, указанные выше, где инфекция, вызываемая поксвирусами, является натуральной оспой. Применение, способ или вирус, указанные выше, где вирусный геном включает по меньшей мере одну гетерологичную нуклеиновую кислоту. Применение, способ или вирус, указанные выше, где гетерологичная нуклеиновая кислота выбрана из последовательности, кодирующей по меньшей мере один антиген, антигенный эпитоп и/или терапевтическое соединение. Применение, способ или вирус, указанные выше, где вакцинация направлена против агента, из которого получена гетерологичная последовательность, или против агента, включающего по меньшей мере один антиген или антигенный эпитоп. Применение, способ или вирус, указанные выше, где вакцинация направлена на защиту животного, включая человека, против антигена, выбранного из опухолевого антигена и чужеродного антигена, где опухолевый антиген и/или чужеродный антиген отличаются от антигенов, связанных с вирусом. Применение, способ или вирус, указанные выше, где чужеродный антиген выбран из инфекционных агентов и токсинов. Применение, способ или вирус, указанные выше, где инфекционный агент выбран из вирусов, бактерий, прионов и грибов. Применение, способ или вирус, указанные выше, где вакцинацию или лечение используют для индукции или усиления созревания и/или активации иммунной системы. Применение, способ или вирус, указанные выше, где лечение используют i) для увеличения концентрации факторов, которые активируют и/или мобилизуют дендритные клетки или их клеткипредшественники, ii) для увеличения количества дендритных клеток или их клеток-предшественников или iii) повышения продукции и/или клеточного содержания интерферона (IFN) или IL-12. - 12 - 011233 Применение, способ или вирус, указанные выше, где фактором, активирующим дендритные клетки, является Flt3-L и/или GM-CSF. Применение, способ или вирус, указанные выше, где интерферон представляет IFN-α и/или IFN-β. Фармацевтическая композиция, содержащая вирус, указанный выше. Вакцина, содержащая вирус, определенный выше. Краткое описание фигур Фиг. 1А: новорожденным мышам в течение 24-48 ч после рождения вводили 106 БОЕ MVA или DISC HSV-1 или физиологический раствор (NaCl) в качестве контроля. В возрасте 7 суток CD11c, универсальный маркер DC, использовали для определения данных клеток в периферической крови проточной цитометрией. Представлены средние значения и стандартные отклонения по 3-5 опытам. Фиг. 1В: опыт, представленный на фиг. 1А. Однако клетки CD11c определяли в селезенке проточной цитометрией. Фиг. 1С: опыт, представленный на фиг. 1А. Однако клетки CD11c определяли в перитонеальной жидкости проточной цитометрией. Фиг. 2: мышей вакцинировали MVA-BN, как указано в левой колонке. Через две недели процент единичных CD11c+- и двойных CD11c+/CD8-положительных клеток в селезенке и крови определяли проточной цитометрией. Фиг. 3: новорожденным мышам вводили MVA или NaCl в качестве контроля в возрасте 1 и 5 суток. На 8 сутки в сыворотке данных мышей определяли ELISA мышиные Flt3-L и значения выражали в пкг/мл. Фиг. 4: новорожденным мышам вводили однократно в течение 24-48 ч после рождения 106 БОЕ MVA или обрабатывали NaCl в качестве контроля. В возрасте 7 суток всех мышей заражали 100×LD50 HSV-1 штамма F. В течение 21 суток регистрировали число выживших животных. Фиг. 5: мышей обрабатывали, как указано для фиг. 4. Все данные представляют результаты 9 различных опытов по заражению 100 LD50 HSV-1. Ни одно контрольное животное не выжило после заражения. Фиг. 6: выживание взрослых мышей, вакцинированных на первые сутки жизни MVA-BN после летального заражения вакциной. Три помета из 6 однодневных мышей (18 мышей) вакцинировали MVABN (2,5×107 TCID50) и через 4 недели (взрослых мышей) заражали летальной дозой вакцины. Было четко показано, что вакцинация MVA-BN стимулировала выработку защитного иммунитета у новорожденных мышей, который продолжался до взрослого состояния. Примеры Настоящее изобретение будет дополнительно проиллюстрировано последующими примерами. Специалисту в данной области, очевидно, понятно, что приведенные примеры ни коем образом не следует рассматривать в качестве сведения применимости технологии, обеспеченной в настоящем изобретении, к данным примерам. Пример 1. (i) MVA-BN и DISC-HSV индуцируют DC фенотипа CD11c+ и CD8+ у новорожденных животных Первая серия опытов: новорожденные мыши от природы имеют иммунодефицит, поскольку система IFN является незрелой. Количество и состояние активации DC, наилучших известных продуцентов IFN, не анализировали. DC можно индуцировать in vitro, а также in vivo различными стимулами. В данных опытах оценивалось, насколько контролируемая репликация MVA-BN может индуцировать DC, и анализировали их фенотип. Группам мышей вводили 106 бляшкообразующих единиц (БОЕ) MVA-BN или физиологический раствор в течение 1-2 суток после рождения и в некоторых случаях в течение 5 суток после рождения. Клетки крови и селезенки отдельных мышей обеих групп анализировали FACS и данные сравнивали. Данные, полученные от 7-8 отдельных мышей, указывали, что в результате обработки MVA-BN число клеток CD11c+ возрастало в 2-3 раза с одновременным повышением экспрессии МНС II и повышенным присутствием Т-клеток типа CD4 или CD8. Интересно, что уровень CD19/54, маркера зрелых Вклеток, снижался, указывая на то, что данные клетки мигрировали в другие органы, а не селезенку, или что предшественники В-клеток развивались в другие популяции, а именно DC плазматического фенотипа, которые несут ранние маркеры В-клеток (В220). Данные трех различных опытов были воспроизводимыми и статистически достоверными. В опытах с DISC-HSV-1, другой вирусной вакциной с контролируемой репликацией вируса, были обнаружены аналогичные количества клеток CD11c+ после примирования новорожденных. Результаты обобщены в фиг. 1А-С. Для последующего исследования субпопуляций DC в крови и селезенке и анализа длительного действия обработки MVA-BN клетки крови и селезенки анализировали у животных в возрасте 2 недель. В данный период времени у обработанных животных число клеток CD11c+ в селезенке было в два раза выше, чем в возрасте 1 недели, но однократная обработка вирусом при рождении приводила к 3кратному повышенному количеству данных клеток в селезенке через 2 недели (фиг. 2). Аналогичные - 13 - 011233 эффекты наблюдали в крови, за исключением того, что число клеток CD11c+/CD8a+ было в 4 раза выше. Однократная обработка MVA-BN через 7 суток после рождения приводила к увеличению клеток CD11c+/CD8a+ в 13-40 раз с менее выраженным эффектом в отношении клеток CD11c+. Как и предполагалось, две вакцинации при рождении и на 7 сутки оказывали достоверное действие на клетки CD11c+. Различные эффекты представлены на фиг. 2. Вторая серия опытов: у мышей в возрасте одной недели, которых вакцинировали при рождении 2,5×107 TCID50 MVA-BN, обнаруживали иной состав популяций иммунологически компетентных клеток в селезенке и крови по сравнению с контрольными мышами (табл. 1). В крови отмечали увеличение популяции CD8-положительных лимфоцитов, а также возрастание числа киллерных клеток. Число CD11cположительных клеток было примерно в 3 раза выше по сравнению с контролем, и процент В-клеток (В220 и двойных CD19-положительных клеток) был достоверно ниже. В селезенке общее число клеток не различалось у иммунизированных и контрольных животных. В противоположность данным по крови в селезенке вакцинированных животных было больше CD4-положительных Т-лимфоцитов по сравнению с контролем, а число киллерных клеток не увеличивалось. Аналогично данным по крови относительное количество CD8-положительных лимфоцитов было выше, а число В-клеток - ниже. Процент CD11cположительных клеток было примерно в 3 раза выше по сравнению с контролем. Заявители впервые установили различие в проценте дендритных клеток на 5 сутки после вакцинации MVA-BN, когда число CD11c-положительных клеток в селезенке 4 необработанных контрольных мышей составляло 3,6% по сравнению с 4,8% у 4 вакцинированных MVA-BN мышей. Та же доза инактивированного УФ MVA-BN не вызывала какого-либо достоверного изменения клеточных популяций после вакцинации новорожденных мышей по сравнению с контрольными (данные не представлены). Первоначальная доза вакцинации была выбрана произвольно. После титрования инокулята заявители выбирали стандартную для вакцинации дозу, равную 2,5×106 TCID50 (в 10 раз меньше, чем в первоначальном опыте). При данной дозе было индуцировано максимальное количество DC (табл. 2). Таблица 1. Изменения клеток крови и селезенки у новорожденных мышей через 1 неделю после иммунизации 2,5×107 TCID50 MVA-BN *U-тест Манн-Витни Таблица 2. Индукция CD11c-положительных клеток в селезенке однодневных мышей и мышей с разрывами генов в течение 7 суток после обработки MVA а Wt = мыши С57Bl/6 или 129Sv/Ev Мыши RAG, полученные делецией, в рекомбинантном активирующем гене (т.е. без функциональных Т- и В-клеток) с Мыши AG129, полученные ген-направленным разрывом IFN-рецептора типа I (IFN-α и -β) и типа II (IFN-γ) (ii) MVA-BN индуцирует предпочтительно плазматические дендритные клетки (pDC) b - 14 - 011233 Согласно данным других авторов CD11c-положительные клетки, которые также экспрессировали CD45RA или CD45R, рассматривались как pDC (Asselin-Paturel et al., 2001, Nat. Immunol., 12: 1144). Возникает вопрос, насколько MVA-BN может вызывать увеличение количества pDC. Проводили дополнительное исследование, в котором также анализировали CD45RA или CD45R в CD11c-положительных клетках. Процент двойных CD11c- и CD45R-положительных клеток был достоверно выше у обработанных MVA-BN мышей (5,6±0,7%) по сравнению с обеими контрольными группами (необработанные 3,0±0,3%, р=0,01; инактивированный УФ MVA-BN 3,0±0,2%, р=0,006. U-тест Манн-Витни). (iii) Новорожденные мыши, обработанные MVA-BN, имеют повышенные концентрации сывороточного Flt3-L Flt3-L представляет собой гемопоэтический фактор, который приводит к повышенным количествам DC у взрослых животных. У человека и, возможно, мышей наиболее богатым источником данного фактора являются активированные Т-клетки. Для исследования того, насколько повышенные количества DC могут быть результатом индукции Flt3-L, сыворотку от обработанных MVA-BN мышей сравнивали с контрольными мышами на присутствие данного фактора. У животных, обработанных на 2 и 5 сутки, концентрация Flt3-L в сыворотке была в 2 раза выше по сравнению с сывороткой контрольных животных. Следовательно, Flt3-L является одним из факторов, который может быть ответственен за повышенные уровни DC (фиг. 3). Продолжительность индукции Flt3-L у новорожденных мышей оценивали после введения MVABN. У новорожденных вакцинация MVA-BN индуцировала повышение концентрации Flt3-L в течение 24 ч. Индукция достигала максимума через 48 ч и по-прежнему сохранялась на 7 сутки, период времени, когда обычно анализировали клетки селезенки и устойчивость к HSV-1 (см. ниже). У вакцинированных мышей концентрация Flt3-L в сыворотке была в 2 раза выше через 24 ч и 48 ч после вакцинации по сравнению с контрольными животными аналогичного возраста. Пример 2. (i) Обработанные MVA-BN новорожденные мыши выдерживают заражение 100-500 LD50 HSV-1 Группы мышей обрабатывали стандартной дозой MVA-BN на 1 или 2 сутки после рождения и заражали в возрасте 7-8 суток 100-500 LD50 герпесвируса (фиг. 4). Обработанные MVA-BN мыши выживали после заражения HSV-1, в то время как контрольные мыши погибали в течение 5-6 суток после введения вируса для заражения. Для дополнительного подтверждения данных результатов проводили 9 опытов по заражению 40 обработанных MVA-BN мышей и 45 контрольных мышей. После заражения более 80% обработанных вирусом мышей выживало, в то время как все контрольные мыши пали (фиг. 5). В отдельной серии опытов мышей при рождении обрабатывали MVA-BN (2,5×106 TCID50/мышь). На 8 сутки проводили заражение либо 103 (1 LD50) или 105 (100 LD50) БОЕ HSV-1. После вакцинации MVA-BN 65% мышей выживало после заражения дозой вируса, которая приводила к гибели 100% контрольных мышей (100 LD50), и 90% выживало после заражения дозой, которая приводила к гибели 45,5% контрольных животных (1 LD50). В дополнительных опытах группу из 7 мышей, вакцинированных инактивированным УФ MVA-BN, заражали HSV-1. Пять из них пало в течение 7 суток. У оставшихся 2 животных прекращался рост, и они пали на 22 и 29 сутки. Следовательно, у мышей, обработанных MVABN, развивалась повышенная резистентность к HSV-1, которая была связана с живым MVA-BN, но не с инактивированным MVA-BN. В контрольных опытах, проведенных на мышах, не имеющих функциональных Т-клеток, было установлено, что защита против HSV-1 после вакцинации MVA-BN возникала не за счет перекрестного взаимодействия цитотоксических Т-лимфоцитов, индуцированных MVA-BN. Было исследовано, насколько клетки DC ответственны за развитие защиты у мышей против HSV-1 после вакцинации MVA-BN. В данном случае новорожденных 8-дневных мышей заражали 5×104 БОЕ HSV-1 через 4 ч после переноса клеток от обработанных MVA мышей. В первом опыте спленоциты от 8дневных мышей, обработанных в 1 сутки жизни MVA-BN, разделяли на богатую DC (низкая плотность) и бедную DC (высокая плотность) фракции. Мыши, получившие 5×106 клеток из богатой DC фракции, выживали после заражения на 50%, в то время как мыши, получившие суспензию, в 10 раз менее богатую DC, или необработанные мыши, погибали в течение 5 суток. Во втором опыте проводили перенос положительно выделенных CD11c-положительных клеток от 8-дневных мышей, обработанных в 1 сутки жизни MVA-BN, контрольным мышам того же возраста. Суспензия из 2×106 спленоцитов, содержащая более чем 80% CD11c-положительных клеток от обработанных MVA-BN мышей, защищала интактных мышей от заражения HSV-1. В противоположность 4 необработанных помета, а также 8 дополнительных животных пали после заражения. Кроме того, у мышей, получивших то же самое количество спленоцитов, или у мышей, получивших эквивалентное количество спленоцитов (50×106 клеток) из отрицательной фракции, не было отмечено повышенной устойчивости против HSV-1. Таким образом, CD11cположительные клетки способны защищать мышей от HSV-1. В данной области предшествующего уровня описаны кратковременные защитные эффекты после введения MVA в течение примерно 24 ч (Vilsmeier В., Berl. Munch. Tierarztl. Wschr. 112 (1999), 329-333). - 15 - 011233 Несмотря на то, что вирусы, использованные в указанной публикации, не являются вирусами, которые не способны к репликации в инфекционное потомство вируса у используемых животных в неонатальном или пренатальном периоде, исследовали, насколько механизм действия, раскрытый Vilsmeier, аналогичен механизму действия, описанному в настоящей заявке. Конкретнее, Vilsmeier раскрывает, что MVA, в частности инактивированный MVA, индуцирует параиммунитет в течение примерно 24 ч. Для проверки того, насколько параиммунитет ответственен также за защитные эффекты, раскрытые в настоящей заявке, мышей через 24 ч после рождения вакцинировали либо MVA-BN, либо инактивированным MVA-BN. В возрасте 7 суток мышей заражали летальной дозой HSV-1 (105 БОЕ HSV-1f). Невакцинированные контрольные мыши погибали через 6 суток после заражения. Также мыши, вакцинированные инактивированным MVA-BN, не были защищены против заражения HSV-1. Число клеток DC у данных мышей не было высоким. В противоположность мыши, вакцинированные неинактивированным MVA-BN, были в значительной мере защищены против заражения HSV-1. Через 30 суток после заражения более чем 80% мышей оставалось живыми. Через 2 суток после вакцинации в сыворотке крови обнаруживали повышенную концентрацию Flt3-L. Высокие уровни DC обнаруживали в селезенке. Повышенная концентрация Flt3-L была связана с повышенным числом DC. Данное обстоятельство подтверждает, что эффект параиммунитета не является ответственным за наблюдаемую защиту. (ii) MVA-BN индуцирует специфический иммунитет у новорожденных, который продолжается до взрослого состояния мышей С57В1/6 в возрасте 1 суток (группа из 18 животных) вакцинировали (внутрибрюшинно) MVA-BN (2,5×l07 TCID50). Через 4 недели после вакцинации, когда мыши уже считались взрослыми, их заражали летальной дозой (l×104 TCID50) вакцины Western Reserve (VV-WR). За исключением одного животного все другие вакцинированные MVA-BN животные выживали. В противоположность все вакцинированные плацебо животные погибали в течение 7 суток, и у них развивались тяжелые клинические симптомы, такие как взъерошенный шерстный покров, потеря массы и сниженная активность. Это является прямым доказательством того, что вакцинация MVA-BN является безопасной не только у новорожденных животных, но также способна индуцировать защитную иммунную реакцию против летальной дозы вакцины (на основе вируса, близкого к MVA-BN). ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ 1. Применение модифицированного вируса осповакцины Анкара (MVA) для получения лекарственного препарата для индукции или усиления созревания иммунной системы у животного, включая человека, в неонатальном периоде. 2. Применение по п.1, где MVA представляет собой штамм MVA-BN, депонированный в ЕСАСС под номером V00083008, и его производные, которые характеризуются (i) способностью к репродуктивной репликации в фибробластах куриных эмбрионов (CEF) или в клетках линии BHK, но отсутствием способности к репродуктивной репликации в линии клеток человека HaCat и (ii) отсутствием репликации у мышей, не способных продуцировать зрелые В- и Т-клетки и в результате имеющих высокий иммунодефицит и высокую чувствительность к реплицирующемуся вирусу. 3. Применение по любому из пп.1, 2, где усиление созревания иммунной системы связано с увеличением количества дендритных клеток и их клеток-предшественников. 4. Применение по п.3, где клетки-предшественники дендритных клеток представляют собой плазмацитоидные предшественники дендритных клеток. 5. Применение по любому из пп.1-4, где усиление созревания иммунной системы связано по меньшей мере с 1,5-кратным увеличением концентрации Flt3-L через двое суток после введения MVA. 6. Применение по любому из пп.1-5, где лекарственный препарат вводят пероральным, интраназальным, внутримышечным, внутривенным, внутрибрюшинным, внутрикожным, внутриматочным и/или подкожным путем. 7. Применение по любому из пп.1-6, где лекарственный препарат, содержащий терапевтически эффективное количество модифицированного осповакцинного вируса Анкара (MVA), вводят при первичной иммунизации ("примирование") и при повторной иммунизации ("бустинг"). 8. Применение по любому из пп.1-7, где лекарственный препарат вводят в количестве по меньшей мере 101 TCID50 (инфекционная доза для тканевой культуры) MVA. 9. Применение по любому из пп.1-8, где вирусный геном содержит по меньшей мере одну гетерологичную последовательность нуклеиновой кислоты. 10. Применение по п.9, где гетерологичная последовательность нуклеиновой кислоты выбрана из последовательности, кодирующей по меньшей мере один антиген, антигенный эпитоп, и/или последовательности, кодирующей терапевтически активное соединение. 11. Применение по п.9, где гетерологичная последовательность нуклеиновой кислоты кодирует белок, выбранный из интерферона, IL-12, Flt3-L и GM-CSF. 12. Применение штамма MVA-BN модифицированного вируса осповакцины Анкара (MVA), депонированного в ЕСАСС под номером V00083008, и его производных для получения лекарственного препарата для вакцинации или лечения животного, включая человека, в неонатальном периоде против чуже- 16 - 011233 родных антигенов или антигенов, которые связаны с заболеваниями у людей или животных, которые характеризуются (i) способностью к репродуктивной репликации в фибробластах куриных эмбрионов (CEF) или в клетках линии BHK, но отсутствием способности к репродуктивной репликации в линии клеток человека HaCat и (ii) отсутствием репликации у мышей, не способных продуцировать зрелые В- и Т-клетки и в результате имеющих высокий иммунодефицит и высокую чувствительность к реплицирующемуся вирусу. 13. Применение по п.12, где лекарственный препарат вводят пероральным, интраназальным, внутримышечным, внутривенным, внутрибрюшинным, внутрикожным, внутриматочным и/или подкожным путем. 14. Применение по любому из пп.12, 13, где лекарственный препарат, содержащий терапевтически эффективное количество модифицированного осповакцинного вируса Анкара (MVA), вводят при первичной иммунизации ("примирование") и при повторной иммунизации ("бустинг"). 15. Применение по любому из пп.12-14, где лекарственный препарат вводят в количестве по меньшей мере 101 TCID50 (инфекционная доза для тканевой культуры) MVA. 16. Применение по любому из пп.12-15, где вирусный геном содержит по меньшей мере одну гетерологичную последовательность нуклеиновой кислоты. 17. Применение по п.16, где гетерологичная последовательность нуклеиновой кислоты выбрана из последовательности, кодирующей по меньшей мере один антиген, антигенный эпитоп, и/или последовательности, кодирующей терапевтически активное соединение. 18. Применение по п.16, где гетерологичная последовательность нуклеиновой кислоты кодирует белок, выбранный из интерферона, IL-12, Flt3-L и GM-CSF. 19. Применение по любому из пп.12-18, где лечение или вакцинация осуществляется для защиты от антигена, выбранного из опухолевого антигена и чужеродного антигена, где антиген отличается от эпитопов и антигенов вирусной частицы MVA-BN и антигенов и эпитопов на поверхности клетки животного, инфицированной вирусом, которые экспрессированы вирусным геномом. 20. Применение по п.19, где чужеродный антиген выбран из антигенов инфекционных агентов или токсинов. 21. Применение по п.20, где инфекционный агент выбран из вирусов, бактерий, прионов и грибов. 22. Применение по п.21, где вирус выбран из герпесвируса, ретровируса, рабдовируса, в том числе вируса бешенства, и аденовируса. 23. Применение по любому из пп.19-22, где защитное действие проявляется по меньшей мере в течение 14 суток. 24. Применение по любому из пп.12-18, где лечение или вакцинацию осуществляют для индукции специфического иммунного ответа против вируса, используемого для вакцинации. 25. Применение по п.24, где лечение или вакцинацию проводят против инфекции, вызываемой поксвирусами. 26. Применение по п.25, где инфекция, вызываемая поксвирусом, является натуральной оспой. 27. Применение по любому из пп.16, 17, где вакцинацию осуществляют для индукции иммунного ответа против агента, из которого получена гетерологичная последовательность нуклеиновой кислоты, или против агента, который содержит по меньшей мере один антиген или антигенный эпитоп. 28. Применение по п.27, где гетерологичная нуклеиновая кислота кодирует антигены опухолей, бактерий, грибов или вирусов, отличных от MVA. 29. Применение по любому из пп.17, 21 и 27, 28, где вирус, из которого происходит гетерологичная нуклеиновая кислота, выбран из ВИЧ-1, ВИЧ-2, вируса тропической лихорадки, вируса лихорадки Западного Нила, вируса японского энцефалита и вируса кори. 30. Применение по п.29, где гетерологичная нуклеиновая кислота кодирует ВИЧ-антиген и где лекарственный препарат, охарактеризованный в п.12, предназначен для индукции иммунного ответа против ВИЧ. - 17 - 011233 Фиг. 1А Фиг. 1В Фиг. 1С Фиг. 2 - 18 - 011233 Фиг. 3 Фиг. 4 Фиг. 5 Фиг. 6 Евразийская патентная организация, ЕАПВ Россия, 109012, Москва, Малый Черкасский пер., 2 - 19 -
