Роль молекулярных методов в диагностике бактериальных инфекций новорожденных Шипулина Ольга Юрьевна ФГУН «ЦНИИЭ» Роспотребнадзора, Москва Бактериальные инфекции новорожденных Внутриутробные (врожденные) Антенатальное инфицирование Листериоз (L.monocytogenes) Интранатальное инфицирование Хламидиоз (C.trachomatis) SGB (S.agalactiae) Микоплазмы Постнатальные (преобретенные) Нозокомиальные Стафилококк (MRSA) клебсиеллы синегнойная палочка и др. Внебольничные Профилактика ВУИ плода (акушерыгинекологи) Профилактика ВУИ и ВБИ у новорожденных (неонатологи) В соответствии с МКБ-10, врожденные инфекции представлены в классе XVI «Отдельные состояния, возникающие в перинатальном периоде» в блоках P35-P39 «Инфекционные болезни, специфичные для перинатального периода». -Р36 (Бактериальный сепсис новорожденного), -P38 (Омфалит новорожденного с небольшим кровотечением или без него), -Р39 (Другие инфекционные болезни, специфичные для перинатального периода), Врожденной инфекцию считают в тех случаях, если заболевание манифестирует в течение первых 3 суток жизни. P36 Бактериальный сепсис новорожденного. - P36.0 Сепсис новорожденного, обусловленный стрептококком группы В. - P36.1 Сепсис новорожденного, обусловленный другими и неуточненными стрептококками. - P36.2 Сепсис новорожденного, обусловленный золотистым стафилококком [Staphylococcus aureus]. - P36.3 Сепсис новорожденного, обусловленный другими и неуточненными стафилококками. - P36.4 Сепсис новорожденного, обусловленный кишечной палочкой [Escherichia coli]. - P36.5 Сепсис новорожденного, обусловленный анаэробными микроорганизмами. - P36.8 Сепсис новорожденного, обусловленный другими бактериальными агентами. - P36.9 Бактериальный сепсис новорожденного неуточненный. Необходимость лабораторной диагностики обусловлена • Отсутствием специфических клинических симптомов для разных бактериальных агентов • Разной чувствительностью к антибактериальным препаратам Нужно знать чем лечить, а это зависит от рода, вида, штамма микроорганизма Возбудителями инфекций плода и новорожденного могут являться более 27 видов бактерий (Mims C.A., Playfair J.H., Roitt I.M. et al., 1993; Шабалов Н. П., 2004). По данным бактериологических исследований: ---80-е годы преобладали Еntегоbасtеriасеае, главным образом клебсиеллы и эшерихии (Кира Е.Ф., 1988; Анкирская А.С., 1989; Гуртовой Б.Л., 1994; Айламазян Э.К, 1995; Башмакова М.А., 1995; Цвелев Ю.В., 1998), ---в 90-е годы на фоне применения полисинтетических пенициллинов и цефалоспоринов 2-го и 3-го поколений тенденция к росту роли генитальных микоплазм (Анкирская А.С., 1989; Айламазян Э.К., 1995; Сидельникова В.М., 1996; Сидорова И.С., 1999), SGВ, энтерококков, хламидий и листерий (Цвелев Ю.В., 1992; Сидельникова В.М., 1996; Ярославский В.К, 1996; Серов В.И., 1997). Методы лабораторной диагностики бактериальных инфекций Метод Достоинства Недостатки Микроскопия Быстрый скрининговый Нельзя определить вид микроорганизма Бактерио- Можно определить логия вид и чувствительность к а/б Долго, сложно, дорого, проблема трудно-культивируемых и некультивируемых бактерий, точность определения количества, а/б резистентности ПЦР Не на все виды и роды бактерий пока существуют тесты, Быстрый, чувствительный и специфичный, количественный Сложная схема определения вида бактериологическим методом ПЦР – пара праймеров, специфичных для L.monocytogenes Проблема хранения и транспортировки образцов для культуральной диагностики. Задачи молекулярной диагностики (ПЦР) • Разработка тестов, позволяющих быстро, точно и с наименьшими затратами определить - какой микроорганизм вызвал заболевание и как его лечить. • Клиническая валидация новых тестов и внедрение в практическое здравоохранение Наиболее часто рассматриваемые микроорганизмы Внутриутробные • C.trachomatis (пневмония) • SGB (пневмония, менингит, сепсис) • Ureaplasma spp.? Внутрибольничные (сепсис) • S.aureus • Pseudomonas aeruginosa • E.coli • Klebsiella spp. • Acinetobacter spp. Выявление инфекций у новорожденных • Опытная группа – новорожденные отделения реанимации Тушинской больницы Москвы (внутриутробные пневмонии) • Контрольная группа - здоровые доношенные новорожденные (роддома Москвы и Волгограда) Результаты Инфекция Ureaplasma spp. SGB C.trachomatis Опытная группа 15/113 (13%) Контрольная группа 5/27 (19%) (500 – 10^7) (500 – 10^5) 9/88 (10%) 3/27 (11%) (10^3 – 10^7) (100-10^3) 0/113 1/27 10^5 Staphilococcus 14/17 (82%) (MRCoN) 18/26 (69%) Концентрация метициллин -резистентных стафилококков в опытной и контрольной группе Вы явление MRCoNS в мазках из ротоглотки у новорожденны х 9.0 8.0 7.0 lg копий/мл 6.0 5.0 4.0 3.0 2.0 1.0 0.0 опытная группа контрольная группа Заключение • Бактериальные инфекции с одинаковой частотой определяются у здоровых новорожденных и новорожденных с внутриутробной патологией, но степень обсемененности (количество бактерий) во второй группе выше. • Определение высоких концентраций бактерий у новорожденных может быть прогностическим маркером развития инфекционного процесса, но это необходимо доказать на большом массиве пациентов. • Все это говорит о необходимости использовать количественные тесты для определения бактерий, в том числе патогенных. Благодарю за внимание! Благодарности: Кафедра педиатрии РМАПО Заплатников Андрей Леонидович Садова Наталья Владимировна ФГУН «ЦНИИ Эпидемиологии» Скачкова Татьяна Сергеевна Сафонова Анна Петровна Домонова Эльвира Алексеевна Сильвейстрова Ольга Юрьевна Романюк Татьяна Николаевна