ЖИДКОСТНЫЙ ХРОМАТОГРАФ ЛЮМАХРОМ® ОПРЕДЕЛЕНИЕ АНТИБИОТИКОВ ТЕТРАЦИКЛИНОВОЙ ГРУППЫ В ПРОДУКТАХ ЖИВОТНОГО ПРОИСХОЖДЕНИЯ Методика М 04-76-2012 ВВЕДЕНИЕ Тетрациклины представляют собой группу антибиотиков широкого спектра антибактериального действия. Их часто используются в животноводстве для лечения различных заболеваний животных, кроме того, тетрациклины являются стимуляторами роста. При нарушении режима профилактики и лечения животных, а также в результате несоблюдения времени выдержки перед забоем, остатки препаратов тетрациклиновой группы могут попадать в пищевые продукты животного происхождения. Потребление человеком таких продуктов может спровоцировать у него дисбактериоз, вторичные грибковые инфекции, проявления аллергического характера, снижает сопротивляемость организма и повышает устойчивость патогенных микроорганизмов к антибиотикам. Выраженные побочные явления, характерные для препаратов тетрациклиновой группы, привели к необходимости контроля их остаточного количества в продовольственном сырье и пищевых продуктах. Для решения этой задачи Группа компаний «ЛЮМЭКС» разработала методику «Продукты животного происхождения. Методика измерений содержания антибиотиков тетрациклиновой группы методом ВЭЖХ со спектрофотометрическим детектированием с использованием жидкостного хроматографа “ЛЮМАХРОМ®”». МЕТОД ИЗМЕРЕНИЙ Сущность метода заключается в экстракции тетрациклиновых антибиотиков (окситетрациклина, тетрациклина, хлортетрациклина, доксициклина) из образца экстракционным буферным раствором; очистке и концентрировании полученного экстракта с использованием картриджа для твердофазной экстракции и последующей идентификации и определении содержания этих антибиотиков методом обращенно-фазовой ВЭЖХ с использованием жидкостного хроматографа «ЛЮМАХРОМ®» со спектрофотометрическим детектором при длине волны детектирования 350 нм. Ориентировочное время подготовки пробы – 2 часа. Время хроматографического анализа – 30 минут. ДИАПАЗОН ИЗМЕРЕНИЙ Диапазон измеряемых массовых долей окситетрациклина, тетрациклина, хлортетрациклина при массе анализируемой навески пробы 10 г составляет 0,01–5 мг/кг, а доксициклина – 0,02–10 мг/кг. Согласно CанПиН 2.3.2.1078-01 с учетом СанПиН 2.3.2.2804-10, содержание окситетрациклина, тетрациклина, хлортетрациклина в продуктах животного происхождения не допускается (менее 0,01 мг/кг). Допустимый уровень содержания доксициклина варьируется от 0,1 до 0,6 в зависимости от наименования продукта. ОБОРУДОВАНИЕ И РЕАКТИВЫ ДЛЯ АНАЛИЗА При выполнении измерений применяются следующие оборудование и реактивы: • жидкостный хроматограф «ЛЮМАХРОМ®» со спектрофотометрическим детектором; • хроматографическая колонка с предколонкой, заполненные обращенно-фазовым сорбентом, например, «Кромасил® С18»; • картриджи для твердофазной экстракции «Oasis® HLB 6cc (500 mg) LP», производства компании «Waters»; • устройство для перемешивания проб; • лабораторная центрифуга (не менее 4000 об/мин); • лабораторный вакуумный насос (мембранный или водоструйный); • устройство для удаления растворителя; • устройство для измельчения пробы; ЖИДКОСТНЫЙ ХРОМАТОГРАФ ЛЮМАХРОМ® • тетрациклина гидрохлорид, содержание основного вещества не менее 95%; • окситетрациклина гидрохлорид, содержание основного вещества не менее 95%; • хлортетрациклина гидрохлорид, содержание основного вещества не менее 95%; • доксициклина гиклат, содержание основного вещества не менее 95%; • аммоний щавелевокислый 1-водный, х.ч.; • Трилон Б, х.ч.; • кислота трифторуксусная, имп; • кислота лимонная, 1-водная, ос.ч. (х.ч.); • натрий фосфорнокислый двузамещенный, 2-водный, ч.д.а.; • ацетонитрил для жидкостной хроматографии, ос.ч.; • метиловый спирт, или карбинол, х.ч. Сбор, обработку и вывод данных осуществляют с помощью персонального компьютера с ОС не ниже «Windows® 2000/XP», на котором установлена соответствующая программа сбора и обработки данных. ПРИМЕРЫ АНАЛИЗА 1.5 mAU Проба: яйцо с добавкой доксициклина 1 Найдено: 1 – доксициклин (0,034 мг/кг) Элюент: смесь ацетонитрил – раствор оксалата аммония (20:80) 0 2 4 6 10 12 14 16 18 20 22 24 26 мин 8 7 mAU 1 Проба: мясо курицы Найдено: 1 – окситетрациклин (0,011 мг/кг) Элюент: смесь ацетонитрил – раствор оксалата аммония (15:85) 0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 мин УСЛОВИЯ ХРОМАТОГРАФИЧЕСКОГО АНАЛИЗА Колонка: «Кромасил® С18» (150х2,1 мм, 5 мкм) Элюент: состав зависит от определяемого компонента, 200 мкл/мин Объем дозируемой пробы: 50 мкл Детектирование: спектрофотометрическое (350 нм) Вся информация в данной листовке является справочной. По вопросу получения более подробной информации следует обращаться к разработчику методики – Группе компаний «ЛЮМЭКС». Центральный офис «ЛЮМЭКС»: 192029, г. Санкт-Петербург, пр. Обуховской обороны, д. 70, корп. 2. Тел. (812) 718-53-90 Факс: (812) 718-68-65 E-mail: methodists@lumex.ru Почтовый адрес: 190000, г. Санкт-Петербург, BOX 1234