УДК 579.678 ДЕТЕКЦИЯ БАКТЕРИЙ РОДА PROTEUS В МЯСЕ МЕТОДОМ РЕАКЦИИ

УДК 579.678
ДЕТЕКЦИЯ БАКТЕРИЙ РОДА PROTEUS В МЯСЕ МЕТОДОМ
РЕАКЦИИ НАРАСТАНИЯ ТИТРА ФАГА
Шабулкина Е.Ю., Шкаликова М.В., Феоктистова Н.А., Васильев Д.А.
ФГБОУ ВПО «Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия
им. П.А. Столыпина»
DETECTION OF BACTERIA OF THE GENUS PROTEUS IN MEAT
METHOD REACTION GROWTH TITER PHAGE
Shabulkina E.Yu., Shkalikova M.V., Feoktistova N.A., Vasilev D.A.
FSBEI HPE "Ulyanovsk state state agricultural Academy named after P.A.
Stolypin"
Согласно литературным данным, заражение людей бактериями рода
Proteus происходит при употреблении воды и пищевых продуктов, в том
числе мясных [2]. Причем, значение и роль этих микроорганизмов в развитии
заболеваний не дооценивается, поэтому разработка методов идентификации
протеев в мясе и в других продуктах питания имеет актуальное значение
[1].Сведений о применении реакции нарастания титра фага (РНФ) для
обнаружения бактерий рода Proteus в объектах внешней среды и санитарного
надзора мы не встречали. Поэтому изучение возможности использования
РНФ для обнаружения данных микроорганизмов в объектах ветеринарносанитарного надзора на примере мясного сырья мы посчитали актуальным.
Методика исследования. Кусочки свинины (говядины) массой 5-10 г.
растирали в фарфоровой ступке и вносили в колбы объемом 100 мл, заливали
стерильным МПБ из расчета 10 мл бульона на 1 г. В опытные колбы вносили
индикаторные культуры P. vulgaris3 и P. vulgaris261 в концентрации 105;104;
103; 102; 101 м.к./мл. Отдельно ставили контроль – брали колбу с пробой мяса,
которую не контаминировали бактериями рода Proteus. Рабочее разведение
фага должно содержать 1х104 корпускул в 1мл. При титре фага, равном 108
частиц в 1мл, фаг разводили 1:10000.В пробирки № 2 и 2к вносили по 1 мл
стерильного МПБ (контроль на присутствие свободного фага). Пробирки № 1
и 1к, в которых находились взвеси мяса и индикаторный фаг, являлись
опытными. Пробирки № 2 и 2к - без фага - были контрольными, то есть
служили для выявления в пробах мяса свободного фага. Пробирки № 3 и 3к –
контроль на титр индикаторного фага. После культивирования в термостате
при температуре 37 0С в течение 5 часовсодержимое каждой пробирки
разводили МПБ (рН 7,4-7,6) так, чтобы при высеве 1 мл содержимого из
пробирки № 3 и 3к (контроль на титр фага) на чашках образовалось
несколько десятков негативных колоний (зон лизиса) фага. В пробирке № 3 и
3к индикаторный фаг находился в концентрации нескольких тысяч
корпускул в 1 мл, и для того, чтобы получить в конечном разведении
несколько десятков корпускул в 1 мл, содержимое пробирки № 3 разводили в
20 раз, т.е. 0,25 мл исследуемой смеси вносили в 4,5 мл МПБ. Содержимое
опытных пробирок № 1, 1к и № 2, 2к разводили аналогично. Ввиду того, что
используемые
фаги
являются
термостабильными,
то
инактивацию
микрофлоры разведенных смесей пробирок № 1 и 1к, № 2 и 2к, № 3 и3к
проводили путем прогревания в водяной бане при температуре 58-60 0С в
течение 30 минут. После этого содержимое пробирок исследовали на
определение количества корпускул бактериофага методом агаровых слоев по
Грациа.
Анализ полученных результатов показал, что увеличение титра фагов
Pr-1 УГСХА и Pr-2 УГСХА более чем в 5 раз произошло при концентрации
103 микробных клеток бактерий в 1 г мяса.Таким образом, в мясе,
обсемененном бактериями рода Proteus, с помощью РНФ, данные бактерии
обнаруживались в концентрации 103 м.к./г без выделения чистой культуры,
при наличии посторонней микрофлоры за 18 часов. Опираясь на полученные
данные, можно отметить, что РНФ является высокочувствительным методом,
позволяющим обнаружить бактерии рода Proteus даже в тех случаях, когда
выделение культуры в чистом виде, практически, невозможно из-за наличия
большого количества посторонней микрофлоры, маскировавшей рост
протеев.
Библиографический список:
1.
Бакулов И.А., Смирнов А.М., Васильев Д.А. Токсикоинфекции и
токсикозы. Вопросы профилактики. – Ульяновск,2003. – С.26-28.
2.
Urbanova E., Manova K., Pacova Z. Bacteria of the tribe proteeae -
occurrence in raw materials and food, and resistance to antibiotics // Vet. med. –
2000. – №6. – Р. 171-176.