ПЦР диагностика

ПЦР диагностика
ПЦР - диагностика является самым современным, быстрым и точным методом
исследования в микробиологии для выявления многих заболеваний. ПЦР диагностика обнаруживает наличие инфекционных возбудителей в тех случаях,
когда другими методами (иммунологическими, бактериологическими,
микроскопическими) это сделать невозможно.
Большая точность метода достигается за счет высокой специфичности ПЦР диагностики
,
так как в исследуемом материале выявляется уникальный фрагмент ДНК или РНК,
характерный только для данного возбудителя, что прямо говорит о его присутствии в
организме.
ПЦР - диагностика состоит из 3 основных процедур: подготовки исследуемой пробы
материала, которая сводится к выделению ДНК или РНК, собственно полимеразной
цепной реакции и детекции продукта ПЦР.
При этом чужеродный генетический материал многократно копируется в пробирке при
помощи ДНК-полимеразы, а затем миллионные количества копий специфических
фрагментов ДНК регистрируются визуально.
1/4
ПЦР диагностика
Это позволяет при ПЦР - диагностике обнаруживать даже единичные клетки бактерий
или вирусов. Или в такой сложной ситуации, когда нужно обнаружить возбудителей с
высокой антигенной изменчивостью или паразитирующих внутри клетки - их очень
трудно обнаружить другими методами.
А быстрота исследования определяется тем, что не требуется долго выделять и
выращивать возбудителя, чтобы найти его - процесс стандартизирован и
автоматизирован вплоть до подготовки пробы для выделения нуклеиновой кислоты из
бактерии или вируса, что одновременно сводит к минимуму вероятность ошибок,
связанных с ручной подготовкой и тестированием проб. Результат может быть получен в
течение нескольких часов, и при положительном ответе ПЦР - диагностики обычно
выражается по четырехбальной шкале от одного до четырех плюсов.
ПЦР - диагностика универсальна и тем, что позволяет обнаружить чужеродное ДНК в
самых различных биологических тканях - слизи, моче, крови, мокроте, соскобе
эпителиальных клеток. И будут определены все возбудители, ДНК которых
присутствовали в исследуемом материале. Особенную популярность ПЦР - диагностика
приобрела для выявления инфекций, передаваемых половым путем, особенно скрытых
или хронических - хламидиоза, уреаплазмоза, гонореи, гарднереллеза, микоплазменной
инфекции. Их возбудителей как раз труднее всего выявить классическим путем
выращивания клеток в лабораторных условиях, да и антитела в серологических
реакциях могут мало определяться.
А исследовав соскоб эпителия уретры или канала шейки матки, (в случае необходимости
берется и другой материал (секрет простаты, моча и т. д.), можно получить точные
признаки наличия именно той или иной инфекции, так как размножению подвергается
только ДНК бактерии, а не сама бактерия.
2/4
ПЦР диагностика
Также с помощью ПЦР - диагностики исследуются вирусы - такие, как вирус папилломы
человека, для чего берется соскоб папилломатозных элементов, а для ПЦР диагностики вирусных гепатитов производится забор крови из вены. Здесь же нужно не
забыть о ПЦР - диагностике ВИЧ, особенно врожденной ВИЧ- инфекции.
Реже ПЦР - диагностика применяется для дифференциальной диагностики вирусных и
бактериальных пневмоний, туберкулеза, дифтерии, для выявления геликобактериоза в
гастроэнтерологии, для определения цитомегаловирусной инфекции и онковирусов.
Но выявление инфекционных заболеваний, оценка их вирулентности и устойчивости к
антибиотикам - только одна из возможностей ПЦР - диагностики. Она позволяет также
проводить генетическую дактилоскопию, пренатальную диагностику и многое другое.
Точечные мутации генного материала ведут к возникновению различных болезней,
которые передаются по поколениям (например, наследственная предрасположенность к
некоторым видам рака), или являются причиной детской смертности и инвалидности.
Современные методы пренатальной диагностики или скрининга носительства призваны
помочь решить проблему путем своевременного выявления поврежденной ДНК. ПЦР диагностика и в этом случае доказывает свою ценность. Несмотря на то, что ПЦРдиагностика
является высокоспецифичным методом, при ней также возможны
ложно-положительные результаты, связанные с попаданием в материал исследования
чужой ДНК и ее копий через предметы и реагенты. Предупреждается это правильной
организацией исследования, с соблюдением ряда правил.
Например, учет продуктов ПЦР- диагностики должен проводиться в изолированной
комнате сотрудником, не производящим обработку образцов и не готовящим реактивы
для ПЦР - диагностики. Приготовление основных растворов также должно
производится в отдельной чистой комнате. Все растворы должны храниться и
3/4
ПЦР диагностика
использоваться в небольших порциях. Необходимо постоянно использовать
лабораторные контроли и периодически применять зашифрованные отрицательные и
положительные контрольные образцы для оценки специфичности и чувствительности
ПЦР - диагностики. Также в настоящее время хорошо апробированы и применяются в
ПЦР- диагностике методы ферментативного и химического предупреждения
ложно-положительных результатов, когда амплификоны разрушаются определенными
ферментами или повреждаются ультрафиолетовыми лучами, к которым становятся
чувствительны под действием химических соединений.
4/4